CN1675211A - 新的嘌呤衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(1)的化合物或其可药用盐，其中R1和R2中的一个是甲基、乙基或异丙基，并且另一个是H；R3和R4各自独立地是H、支链或直链C1－C6烷基、或芳基，并且其中R3和R4中的至少一个不是H；R5是支链或直链C1－C5烷基或C1－C6环烷基，其中的每个可任选被一个或多个OH基团所取代；R6、R7、R8和R9各自独立地是H、卤素、NO2、OH、OMe、CN、NH2、COOH、CONH2、或SO2NH2。本发明另一方面涉及含有式(1)化合物的药物组合物，以及所述化合物在治疗增殖性疾病、病毒性疾病、中风、脱发症、CNS疾病、神经变性疾病或糖尿病中的用途。

Description

新的嘌呤衍生物
技术领域
本发明涉及一类新的2，6，9-取代的嘌呤衍生物及其生物学应用。具体地说，本发明涉及具有抗增殖特性的嘌呤衍生物，它在例如癌症、白血病、牛皮癣等增殖性疾病的治疗中有用。
背景技术
哺乳动物细胞周期的启动、进行和完成是通过各种依赖细胞周期蛋白的激酶(CDK)复合物来调节的，它们对于细胞的生长具有重要作用。这些复合物至少含有催化活性(CDK自身)和调节活性(细胞周期蛋白)亚单元。对于细胞周期调节显得尤其重要的某些复合物包括细胞周期蛋白A(CDK1-也被称作cdc2和CDK2)、细胞周期蛋白B1-B3(CDK1)、细胞周期蛋白D1-D3(CDK2、CDK4、CDK5、CDK6)、细胞周期蛋白E(CDK2)。上述的每一种复合物均与细胞周期中的某一特定期相关。然而，并非CDK家族的所有成员均专一地与细胞周期的控制相关。因此，CDK7、8、和9与转录调节有关，而CDK5在神经元和分泌细胞功能中具有重要作用。
CDK通过短暂结合其它蛋白、同时改变其在细胞内的分布水平而调节CDK活性向后平移。肿瘤恶化与基因变异和CDK及其调节剂的失调有密切关系，这说明CDK抑制剂在抗癌治疗中有用。实际上早期研究结果表明，变形细胞和正常细胞的区别就在于两者对例如细胞周期蛋白A/CDK2的要求不一样，因此完全有可能开发出一类新的不具有传统细胞毒素和细胞生长抑制药所观察到的一般宿主毒性的抗肿瘤药物。尽管与细胞周期相关的CDK的抑制作用明显地与例如肿瘤学应用有关，但是这并非是抑制RNA聚合酶-调节CDK的情形。另一方面，最近发现抑制CDK9/细胞周期T功能与防止HIV的复制有关，该CDK生物学新发现从此揭开了CDK抑制剂新治疗应用的序幕(Sausville，E.A.Trends Molec.Med.2002，8，S32-S37)。
CDK的功能是使某些蛋白质磷酸化从而将其活化或钝化，这些蛋白质包括例如眼癌蛋白、核纤层蛋白、组蛋白H1、以及有丝分裂纺锤体的各种成分。通过CDK调节的催化步骤包括从ATP到大分子酶底物的磷转移反应。已经发现化合物的某些基团(参见综述例如Fischer，P.M.Curr.Opin.DrugDiscovery Dev.2001，4，623-634)通过借助于CDK-特定ATP拮抗作用而具有抗增殖活性。
WO 98/05335(CV Therapeutics Inc)公开了一类2，6，9-三取代的嘌呤衍生物，它是细胞周期激酶的选择性抑制剂。这类化合物可用于治疗自身免疫疾病，例如类风湿性关节炎、狼疮、I型糖尿病、多发性硬发症；治疗癌症、心血管疾病例如再狭窄、宿主v移植疾病、痛风、多囊肾性疾病以及其它发病机理与细胞增殖异常相关的增殖性疾病。
WO 99/07705(The Regents of the University of California)公开了一类抑制包括蛋白激酶、G-蛋白和聚合酶在内的嘌呤类似物。更具体地说，该发明涉及使用这类嘌呤类似物治疗细胞内增殖疾病和神经变性疾病的方法。
WO 97/20842(CNRS)也公开了一类显示出抗增殖活性的嘌呤衍生物，其可用于治疗癌症、牛皮癣、和神经变性疾病。
本发明着眼于提供一类新的特别是具有抗增殖特性的2，6，9-取代的嘌呤衍生物。
发明概述
本发明第一方面涉及式1的化合物或其可药用盐，
Figure A0381942500101
其中
R1和R2中的一个是甲基、乙基或异丙基，另一个是H；
R3和R4各自独立地是H、支链或直链C1-C6烷基、或芳基，并且其中R3和R4中的至少一个不是H；
R5是支链或直链C1-C5烷基或C1-C6环烷基，其中的每个可以任选被一个或多个OH基团取代；
R6、R7、R8和R9各自独立地是H、卤素、NO2、OH、OMe、CN、NH2、COOH、CONH2或者SO2NH2。
本发明第二方面涉及一种药物组合物，它含有式1化合物以及可药用载体、稀释剂或赋形剂。
本发明第三方面涉及式1化合物在制备用于治疗一种或多种下述疾病的药物中的用途：
增殖性疾病；
病毒性疾病；
中风；
脱发症；
CNS疾病；
神经变性疾病；以及
糖尿病。
本发明第四方面涉及式1化合物作为抗有丝分裂药物的用途。
本发明第五方面涉及式1化合物用于抑制蛋白激酶的用途。
本发明第六方面涉及一种治疗增殖性疾病的方法，所述方法包括向哺乳动物施用治疗有效量的式1化合物。
本发明第七方面涉及本发明的化合物在用于识别可影响一种或多种CDK酶活性的其它候选化合物的测定方法中的用途。
详细描述
如上所述，本发明第一方面涉及上文中所定义的式1化合物。
本领域已知，试验抗增殖CDK抑制药物roscovitine(PCT国际专利申请公开WO 97/20842；Wang，S.，McClue，S.J.，Ferguson，J.R.，Hull，J.D.，Stokes，S.，Parsons，S.，Westwood，R.，以及Fischer，P.M.Tetrahedron：Asymmetry 2001，12，2891-2894)的主要体外代谢失活途径包括将甲醇基团氧化为羧基，然后再排泄出该代谢产物[Nutley，B.P.，Raynaud，F.I.，Wilson，S.C.，Fischer，P.，McClue，S.，Goddard，P.M.，Jarman，M.，Lane，D.，以及Workman，P.Clin.Cancer Res.2000，6 Suppl.(Proc.11th AACR-NCI-EORTC Intl.Conf.#318)]。与该代谢产物完全相同的真正的合成原料在体内显示出降低了的生物活性。因此，roscovitine和该羧基衍生物抑制CDK2/细胞周期蛋白E活性所具有的IC50值分别为0.08和0.24μM。类似地，在人类转移肿瘤细胞系的典型仪器盘(panel)中，roscovitine和该羧基衍生物的平均抗增殖IC50值分别为大约10和＞50uM。
Roscovitine                               羧基代谢产物
因此，在一个优选实施方案中，本发明着眼于提供一类新的嘌呤衍生物，其具有改善了的耐代谢失活特性。
在本发明一优选的实施方案中，R1和R2中的一个是乙基或异丙基，另一个是H。
在本发明另一优选的实施方案中，R5是异丙基或环戊基。
在一优选的实施方案中，R6、R7、R8和R9都是H。
在一优选的实施方案中，R1或R2是乙基，另一个是H。
在一优选的实施方案中，R3和R4各自独立地是H、甲基、乙基、丙基、丁基或者苯基。
因此，在一优选的实施方案中，R3和R4各自独立地是H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基或者苯基。
在更优选的实施方案中，R3和R4各自独立地是H、甲基、乙基、丙基或者丁基。
因此，在一优选的实施方案中，R3和R4各自独立地是H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基或者叔丁基。
在进一步更优选的实施方案中，R3和R4各自独立地是H、甲基、乙基、异丙基或者叔丁基。
在一特别优选的实施方案中，所述式1化合物选自下面的化合物：
(2S3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；
(2R3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇；
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇；
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇；
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇；
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇；
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇；
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；和
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇。
甚至更优选地，所述式1化合物选自下面的化合物：
(2S3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；
(2R3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇；
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇；
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇；
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；和
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-3-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇。
还更优选地，所述式1化合物选自下面的化合物：
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；
(2S3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；
(2R3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；和
3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇的任何光学异构体。
药物组合物
本发明第二方面涉及一种药物组合物，它含有与可药用稀释剂、赋形剂或载体、或者它们的混合物相混合的式1化合物。虽然本发明的化合物(包括其可药用盐类、酯类以及可药用溶剂化物)可以单独施用，但是通常特别是在用于人的治疗时，它们是与药物载体、赋形剂或稀释剂混合施用的。该药物组合物可以以人药或兽药的形式用于人或动物。
这类适合用于本文所描述的各种不同形式的药物组合物的赋形剂实例可以参见由A Wade和PJ Weller编著的“Handbook of PharmaceuticalExcipients”，第二版，(1994)。
适合于医疗应用的可接受载体或稀释剂是药物领域众所周知的，其描述在例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack出版公司(A.R.Gennaro编著.1985)。
适宜载体的实例包括乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露醇、山梨醇等。适宜稀释剂的实例包括乙醇、甘油和水。
对药物载体、赋形剂或稀释剂的选择可以根据所希望的给药方式和常规药物操作经验来选择。药物组合物除了可以含有载体、赋形剂或稀释剂之外，还可以含有任意适宜的粘合剂、润滑剂、助悬剂、包衣剂、助溶剂。
适宜粘合剂的实例包括淀粉、明胶、天然糖类例如葡萄糖、无水乳糖、自由流动的乳糖、β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶例如阿拉伯树胶、西黄芪胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素和聚乙二醇。
适宜润滑剂的实例包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。
药物组合物中可以含有防腐剂、稳定剂、染料甚至调味剂。防腐剂的实例包括苯甲酸钠、山梨酸以及对-羟基苯甲酸酯。还可以使用抗氧化剂和助悬剂。
盐/酯类
本发明化合物可以以盐或酯，特别是可药用盐或酯的形式存在。
本发明化合物的可药用盐包括其适宜的酸加成盐或碱盐。有关适宜的可药用盐的综述可以参见Berge等人，J Pharm Sci， 66，1-19(1977)。可以与例如下面的物质形成盐：强的无机酸，例如无机酸如硫酸、磷酸或盐酸；强的有机羧酸，例如未被取代或被取代(例如被卤素取代)的具有1-4个碳原子的烷基羧酸如乙酸；饱和或不饱和二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、马来酸、反丁烯二酸、邻苯二甲酸或四酞酸(tetraphthalic)；羟基羧酸，例如抗坏血酸、羟基乙酸、乳酸、苹果酸、酒石酸或柠檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或者有机磺酸，例如未被取代或被取代(例如被卤素取代)的(C1-C4)-烷基-或芳基-磺酸如甲磺酸或对甲苯磺酸。
使用有机酸或醇/氢氧化物可以形成酯，这取决于被酯化的官能团。有机酸包括羧酸，例如未被取代或被取代(例如被卤素取代)的具有1-12个碳原子的烷基羧酸如乙酸；饱和或不饱和二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、马来酸、反丁烯二酸、邻苯二甲酸或四酞酸；羟基羧酸，例如抗坏血酸、羟基乙酸、乳酸、苹果酸、酒石酸或柠檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或者有机磺酸，例如未被取代或被取代(例如被卤素取代)的(C1-C4)-烷基-或芳基-磺酸如甲磺酸或对甲苯磺酸。适宜的氢氧化物包括无机氢氧化物，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝。醇包括未被取代或被取代(例如被卤素取代)的具有1-12个碳原子的烷醇。
对映异构体/互变异构体
在前面所讨论的本发明各个方面中，本发明包括式1化合物所有适宜的对映异构体和互变异构体。本领域技术人员可以识别出那些具有光学特性(一个或多个手性碳原子)或互变异构特性的化合物。相应的对映异构体和/或互变异构体可以按照本领域已知的方法分离/制备。
立体和几何异构体
某些本发明化合物可能存在立体异构体和/或几何异构体-例如它们可能具有一个或多个不对称和/或几何中心，因而可能存在两种或更多种立体异构和/或几何异构形式。本发明对那些抑止剂的所有单独立体异构体和几何异构体、以及它们的混合物的应用进行了预期。在权利要求书中所使用的术语均包括上述这些形式，只要所述形式仍然具有适宜的功能活性(虽然不必达到相同的程度)。
本发明还包括这些化合物或其可药用盐的所有适宜的同位素变化。将本发明化合物或其可药用盐的同位素变化定义为其中至少一个原子被具有相同原子序数但是原子质量不同于自然界通常发现的原子质量的原子所取代。可并入本发明化合物或其可药用盐的同位素实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟以及氯的同位素，分别如2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。本发明化合物或其可药用盐的某些同位素变化，例如那些合并有具有放射活性的同位素如3H或14C的同位素变化，可用于药物和/或底物组织分布研究。含氚即3H、和碳-14即14C的同位素由于易于制备和检测因而尤其优选。另外，被同位素例如氘即2H取代，由于更高的代谢稳定性从而可以提供某些治疗优势，例如延长体内半衰期或降低所需剂量，因此在某些情形下可能优选这种情况。本发明所述的本发明化合物及其可药用盐的各种同位素变化通常可以按照常规方法使用适宜试剂的适宜同位素变化制备得到。
溶剂化物
本发明还包括本发明化合物的溶剂化物形式。权利要求书中所使用的术语包括这些形式在内。
多晶型物
此外，本发明还涉及本发明化合物的各种晶型、多晶型以及无水/含水形式。在制药工业领域应该很容易理解，那就是这类化合物通过稍微改变纯化方法和/或这些化合物的合成制备过程中所使用的分离溶剂，就可以分离得到其任意一种上述形式。
前药
本发明另外还包括本发明化合物的前药形式。前药通常是指其中一个或多个适宜基团被结构修饰过的式1化合物，这种结构修饰在被给药至人或哺乳动物客体之后可以发生逆转。这种逆转通常是通过天然存在于这类客体中的酶来完成，当然为了在体内完成这种逆转也可以与前药一起服用第二药物。这种结构修饰的实例包括酯化(例如上文所述的任意一种情形)，其中逆转可以通过酯酶等来完成。其它的此类体系对于本领域技术人员而言也是众所周知的。
给药方案
本发明的药物组合物适合口服给药、直肠给药、阴道给药、肠胃外给药、肌肉内给药、腹膜内给药、动脉内给药、膜内给药、支气管内给药、皮下给药、皮内给药、静脉内给药、鼻腔给药、口腔给药或者舌下给药。
对于口服给药，优选使用的是制成压制片剂、丸剂、片剂、胶凝剂(gellules)、滴剂、以及胶囊剂。这些组合物每个剂量优选含有1-250mg、更优选含有10-100mg活性成分。
其它的给药形式包括溶液剂或乳剂，它们可以通过静脉内、动脉内、鞘内、皮下、皮内、腹膜内或者肌肉内注射给药，并且可以由无菌或灭菌溶液制备得到。本发明的药物组合物还可以是栓剂、阴道栓剂、混悬剂、乳剂、洗剂、软膏剂、乳膏、凝胶剂、喷雾剂、溶液剂或者扑粉的形式。
经皮给药的替代方式就是使用皮肤贴片(skin patch)。例如，可以将活性成分合并入由聚乙二醇的含水乳液或者液体石蜡组成的乳膏中。还可以将活性成分按照1-10重量％的浓度合并入软膏中，该软膏由白蜡或者混合有所需稳定剂和防腐剂的白色软石蜡基质组成。
可注射制剂每个剂量可含有10-1000mg、优选含有10-250mg活性成分。
可以将组合物制成单位剂量形式，也就是含有单位剂量的单个部分或者是单位剂量的多单元或亚单元形式。
剂量
本领域普通技术人员未经过度试验完全可以很容易确定施用给客体的任意一种即时组合物的适宜剂量。典型的是，医生可以确定最适合用于个体患者的实际剂量，其取决于各种因素包括所使用具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间长短、年龄、体重、身体概况、性别、饮食、给药方式和时间、排泄速度、联合用药情况、具体症状的严重程度、以及该个体正在接受的治疗情况。本文所述的剂量可被解释成一般情形下使用的剂量。当然出现某些更高或者更低剂量范围的个别情形也是应该的，其也落入本发明的范围之内。
根据需要，本发明药物可以按照0.01-30mg/kg体重，例如0.1-10mg/kg，更优选0.1-1mg/kg体重的剂量给药。
在示例性实施方案中，为了治疗恶性肿瘤向患者施用一个或多个10-150mg/天的剂量。
医疗用途
已经发现本发明的化合物具有抗增殖活性，因而据信它们可用于治疗增殖性疾病例如癌症、白血病或者其它与细胞任意增殖相关的疾病例如牛皮癣和再狭窄。
在本发明范围内所定义的抗增殖活性可以通过例如使用A549、HeLa、HT-29、MCF7、Saos-2、CCRF-CEM、HL-60以及K-562中的任意一种细胞系在体外全细胞测定法中抑制细胞增殖的能力得到证明，或者通过在适宜的测定法中显示出激酶抑制活性而证实。这些测定方法包括评价其效能的方法，其在后面的实施例中有更详细的描述。利用这些测定方法可以确定化合物是否具有本发明意义上的抗增殖活性。
因此，本发明一优选的实施方案涉及一种或多种本发明化合物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途。
本文所使用的短语“药物制备”除了包括本发明化合物在其它治疗药物的筛选程序中或者在制造这类药物的任意步骤中的用途之外，还包括其直接作为药物的用途。
本文所使用的术语“增殖性疾病”广义上包括任意一种需要控制细胞周期的疾病，例如心血管疾病如再狭窄和心肌症、自身免疫疾病如肾小球肾炎和类风湿性关节炎、皮肤学疾病例如牛皮癣、抗炎、抗真菌、抗寄生物疾病例如疟疾、肺气肿和脱发症。在这些疾病中，本发明化合物在目标细胞中可以如所希望的那样诱导细胞凋亡或者维持停滞(stasis)。该增殖性疾病优选为癌症或白血病。
在另一优选的实施方案中，该增殖性疾病是牛皮癣。
本发明的化合物可以抑制细胞周期中的任意一个步骤或阶段，例如核被膜的形成、从细胞周期的静止期(G0)退出、进入G1、染色体的脱缩合、核被膜破裂、START、启动DNA复制、进行DNA复制、终止DNA复制、中心体复制、进入G2、激活有丝分裂或减数分裂功能、染色体缩合、中心体分离、微管成核、纺锤体生成和作用、与微管启动蛋白的相互作用、染色单体分离(separation)和隔离(segregation)、有丝分裂功能的失活、收缩环的形成、以及胞质分裂作用。具体地说，本发明的化合物可以影响某些基因功能，例如染色质结合、复制复合体的形成、复制许可、磷酸化或者其它的二次修饰活性、蛋白水解性降解、微管结合、肌动蛋白结合、隔蛋白结合、微管组织中心成核活性以及与细胞周期信号途径组分的结合。
本发明另一方面涉及一种治疗增殖性疾病的方法，所述方法包括向哺乳动物施用治疗有效量的式1化合物。
在该方面的优选实施方案中，该增殖性疾病是癌症或白血病。
在该方面更优选的实施方案中，所述化合物按照足以抑制至少一种CDK酶的用量施用。
优选地，本发明化合物按照足以抑制至少一种CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8和/或CDK9的用量施用。
更优选地，本发明化合物按照足以抑制至少一种CDK2和/或CDK4的用量施用。
进一步更优选地，该CDK酶是CDK2。
在该方面一优选的实施方案中，该化合物是口服给药。
本发明又一方面涉及式1化合物作为抗有丝分裂药物的用途。
本发明再一方面涉及式1化合物用于治疗神经变性疾病的用途。
优选地，该神经变性疾病是神经元细胞凋亡。
本发明又一方面涉及式1化合物作为抗病毒药物的用途。
因此，本发明又一方面涉及本发明化合物在制备用于治疗病毒性疾病例如人类巨细胞病毒(HCMV)、1-型单纯疱疹病毒(HSV-1)、1-型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)、以及水痘带状疱疹病毒(VZV)的药物中的用途。
在本发明更优选的实施方案中，本发明化合物按照足以抑制一种或多种与病毒复制有关的宿主细胞CDK，即CDK2、CDK7、CDK8以及CDK9的用量施用[Wang D，De la Fuente C，Deng L，Wang L，Zilberman I，Eadie C，Healey M，Stein D，Denny T，Harrison LE，Meijer L，Kashanchi F.Inhibition ofhuman immunodeficiency virus type 1 transcription by chemicalcyclin-dependent kinase inhibitors.J.Virol.2001；75：7266-7279]。
如本文所定义的那样，可以通过抑制CDK2、CDK7、CDK8或CDK9的能力来证实本发明所指的抗病毒效果。
在特别优选的实施方案中，本发明涉及一种或多种本发明化合物在治疗CDK依赖性或敏感性病毒性疾病中的用途。CDK依赖性疾病与一种或多种CDK酶的活性高于正常水平有关。这类疾病优选与CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9活性的异常水平有关。CDK敏感性疾病是这样一种疾病，其中CDK水平的异常不是主要原因，而是在主要代谢异常的下游。在这样的假设条件下，CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9可以被认为是敏感性代谢途径的一部分，因而CDK抑制剂可有效地用于治疗这类疾病。
本发明另一方面涉及本发明化合物或其可药用盐在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。
在特别优选的实施方案中，该糖尿病为II型糖尿病。
GSK3是几种使糖原合成酶(GS)磷酸化的蛋白激酶中的一种。骨骼肌中的胰岛素由于使GS脱磷酸并活化，从而刺激糖原的合成。因此，GSK3对GS的作用导致后者失活，进而抑制肌肉中葡萄糖向糖原的转化。
II型糖尿病(非胰岛素依赖性糖尿病)是由多种病因引起的疾病。血糖过高是由胰岛素在肝脏、肌肉、以及其它组织中的耐药性，外加胰岛素的分泌水平受损引起的。骨骼肌是摄取刺激葡萄糖的胰岛素的主要位点，在那里或者从循环中排出或者转化为糖原。在葡萄糖调节平衡作用中肌糖原沉积是主要决定因素，因此II型糖尿病具有受损的肌糖原贮存能力。其证据是GSK3活性增加在II型糖尿病中显得很重要[Chen，Y.H.；Hansen，L.；Chen，M.X.；Bjorbaek，C.；Vestergaard，H.；Hansen，T.；Cohen，P.T.；Pedersen，O.Diabetes，1994，43，1234]。此外，已经证实GSK3在II型糖尿病的肌细胞中被过度表达，并且在骨骼肌GSK3活性和胰岛素作用之间存在可逆的相互关系[Nikoulina，S.E.；Ciaraldi，T.P.；Mudaliar，S.；Mohideen，P.；Carter，L.；Henry，R.R.Diabetes，2000，49，263]。
因此，GSK3抑制剂在糖尿病尤其是II型糖尿病、和糖尿病性神经病的治疗方面具有治疗学意义。
需要说明的是，已知GSK3磷酸化多种底物而不是GS，因此它涉及对多种生化途径进行调节。例如，GSK高度表达于中枢和外周神经系统中。
因此，本发明另一方面涉及本发明化合物或其可药用盐在制备用于治疗CNS疾病例如神经变性疾病的药物中的用途。
优选地，该CNS疾病是阿耳茨海默氏病。
Tau是与阿耳茨海默氏病病因相关的GSK-3底物。在健康的神经细胞中，Tau与微管蛋白结合形成微管。然而在阿耳茨海默氏病中，tau形成破坏神经细胞中的微管结构的大团纤丝(large tangles of filaments)，从而削弱养分的运输以及神经元信息的传输。
不希望局限于任何理论，据信GSK3抑制剂能够防止和/或逆转微管相关蛋白tau的异常的高度磷酸化，其为阿耳茨海默氏病以及诸多其它神经变性疾病例如进行性核上麻痹、皮质基底核变性症(corticobasal degeneration)和皮克氏病所具有的不变特征。Tau基因突变导致出现遗传形式的额颞叶失智症(fronto-temporal dementia)，这进一步强调了tau蛋白功能异常对于神经变性过程的相关性[Goedert，M.Curr.Opin.Gen.Dev.，2001，11，343]。
本发明另一方面涉及本发明化合物或其可药用盐在制备用于治疗双相性精神障碍的药物中的用途。
本发明又一方面涉及本发明化合物或其可药用盐在制备用于治疗中风的药物中的用途。
在头部创伤、中风、癫痫、以及运动神经元疾病领域，减少神经元细胞凋亡是很重要的治疗目标[Mattson，M.P.Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.，2000，1，120]。因此，对于设计用于治疗上述疾病的抑制药物而言，GSK3作为神经元细胞中的促凋亡因子使得这种蛋白激酶成为一个相当吸引人的治疗靶。
本发明又一方面涉及本发明化合物或其可药用盐在制备用于治疗脱发症的药物中的用途。
毛发的生长受Wnt信号传导途径特别是Wnt-3控制。在皮肤的组织培养模型体系中，β-联蛋白的非降解突变体的表达导致具有更高增殖潜能的推定的干细胞的群体(population)猛增[Zhu，A.J.；Watt，F.M.Development，1999，126，2285]。这个干细胞群体表示更高水平的非钙粘着蛋白相关的β-联蛋白[DasGupta，R.；Fuchs，E.Development，1999，126，4557]，这可能就是它们具有高增殖潜能的原因。此外，在皮肤中过度表达截短的(truncated)β-联蛋白的转基因小鼠重新经历毛囊形态发生，而毛囊形态发生通常只是在胚胎形成过程中建立。因此，GSK3抑制剂的这种异位应用在治疗脱发以及在因化疗引起脱发症之后恢复毛发生长方面具有治疗上的用途。
本发明再一方面涉及一种治疗GSK3依赖性疾病的方法，所述方法包括向需要接受该治疗的患者按照如上所定义的足以抑制GSK3的用量施用本发明的化合物或其可药用盐。
优选地，本发明的化合物或其可药用盐按照足以抑制GSK3β的用量施用。
在本发明一实施方案中，本发明的化合物按照足以抑制至少一种PLK酶的用量施用。
Polo样激酶(PLK)组成了丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族。有丝分裂的黑腹果蝇在polo部位的突变体显示纺锤体异常[Sunkel等人，J.Cell Sci.，1988，89，25]，并且还发现polo编码有丝分裂激酶[Llamazares等人，Genes Dev.，1991，5，2153]。人类存在三种密切相关的PLK[Glover等人，Genes Dev.，1998，12，3777]。它们含有高度同源的氨基末端催化激酶域，并且它们的羧基末端含有两个或三个保守区即polo盒(polo boxes)。对于polo盒的功能目前尚未完全理解，但是发现它们与PLK对亚细胞间隔的靶向作用[Lee等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1998，95，9301；Leung等人，Nat.Struct.Biol.，2002，9，719]、调节与其它蛋白的相互作用[Kauselmann等人，EMBO J.，1999，18，5528]有关、或者它们还可以构成部分自调节区[Nigg，Curr.Opin.Cell Biol.，1998，10，776]。此外，polo盒依赖性PLKl活性对于适当的中期/后期转换和胞质分裂也是必需的[Yuan等人，Cancer Res.，2002，62，4186；Seong等人，J.Biol.Chem.，2002，277，32282]。
已有研究表明，人类PLK调节有丝分裂的某些基本方面[Lane等人，J.Cell.Biol.，1996，135，1701；Cogswell等人，Cell Growth Differ.，2000，11，615]。具体地说，据认为PLK1活性对于处于G2晚期/早前期(early prophase)的中心体功能成熟以及随后两极纺锤体的建立是必需的。通过这种小干扰RNA(siRNA)技术消耗细胞PLK1已经证实了这种蛋白对于多重有丝分裂过程以及胞质分裂的完成是必需的[Liu等人，Proc.Naal.Acad.Sci.USA，2002，99，8672]。
在本发明更优选的实施方案中，本发明化合物按照足以抑制PLK1的用量施用。
在三种人类PLK中，PLK1是最具特点的；它调节大量细胞分裂周期效应，包括有丝分裂的启动[Toyoshima-Morimoto等人，Nature，2001，410，215；Roshak等人，Cell.Signalling，2000，12，405]、DNA损伤检测点活化[Smits等人，Nat.Cell Biol.，2000，2，672；van Vugt等人，J.Biol.Chem.，2001，276，41656]、促后期复合体的调节[Sumara等人，Mol.Cell，2002，9，515；Golan等人，J.Biol.Chem.，2002，277，15552；Kotani等人，Mol.Cell，1998，1，371]、蛋白酶体的磷酸化[Feng等人，Cell Growth Differ.，2001，12，29]、以及中心体复制和成熟[Dai等人，Oncogene，2002，21，6195]。
具体地说，有丝分裂的启动需要对细胞成熟促进因子(MPF)、依赖周期蛋白的激酶CDK1与B型细胞周期蛋白之间的复合物进行活化[Nurse，Nature，1990，344，503]。后者在细胞周期的S和G2期产生积累，通过WEE1、MIK1和MYT1激酶增强对MPF复合物磷酸化的抑制。在G2期末期，通过与双特异性磷酸酶CDC25C相对应的脱磷酸化引发MPF的活化[Nigg，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.，2001，2，21]。在分裂间期，细胞周期蛋白B定位于(localizes)细胞质[Hagting等人，EMBO J.，1998，17，4127]，然后使其在前期被磷酸化，这一活动导致核转位[Hagting等人，Curr.Biol.，1999，9，680；Yang等人，J.Biol.Chem.，2001，276，3604]。活性MPF在前期产生核积累被认为对于启动M期活动是重要的[Takizawa等人，Curr.Opin.Cell Biol.，2000，12，658]。然而，除非受CDC25C阻碍，核MPF可以保持不被WEE1活化。在分裂间期使定位于细胞质的磷酸酶CDC25C自身在分裂前期堆积于细胞核中[Seki等人，Mol.Biol.Cell，1992，3，1373；Heald等人，Cell，1993，74，463；Dalal等人，Mol.Cell.Biol.，1999，19，4465]。细胞周期B[Toyoshima-Morimoto等人，Nature，2001，410，215]以及CDC25C[Toyoshima-Morimoto等人，EMBO Rep.，2002，3，341]进入细胞核均通过PLK1磷酸化得到加强[Roshak等人，Cell.Signalling，2000，12，405]。这种激酶是启动M期的重要调节剂。
在一特别优选的实施方案中，本发明化合物是PLK1的ATP拮抗性抑制剂。
在本文上下文中，ATP拮抗作用是指抑制剂化合物降低或者抑止PLK催化活性的能力，也就是以修补或消除ATP结合的方式通过可逆或不可逆结合于酶活性位点而将磷酸从ATP转移至大分子PLK底物上的能力。
在另一优选的实施方案中，本发明化合物按照足以抑制PLK2和/或PLK3的用量施用。
哺乳动物PLK2(又被称作SNK)和PLK3(又被称作PRK和FNK)最初被认为是直接的早期基因产物。PLK3激酶活性似乎在S和G2晚期达到最大。它在DNA损伤检测点活化期间也具有活性以及显著的氧化应激。PLK3在调节微管动力学和细胞中心体功能方面也具有重要作用，而PLK3表达异常会导致细胞周期休止和细胞凋亡[Wang等人，Mol.Cell.Biol.，2002，22，3450]。PLK2是三种PLKs中最没有得到清楚认识的同族体。PLK2和PLK3都还具有其它重要的有丝分裂后功能[Kauselmann等人，EMBO J.，1999，18，5528]。
本发明另一方面涉及式1化合物用于抑制蛋白激酶的用途。
在该方面优选的实施方案中，该蛋白激酶是细胞周期依赖性激酶。优选地，该蛋白激酶是CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8或CDK9，更优选是CDK2。
本发明又一方面涉及一种抑制蛋白激酶的方法，所述方法包括使用式1化合物接触所述蛋白激酶。
在该方面优选的实施方案中，该蛋白激酶是细胞周期依赖性激酶，更优选是CDK2。
测定方法
本发明另一方面涉及上述的化合物在用于识别可影响一种或多种CDK酶的其它候选化合物的测定方法中的用途。
优选地，该测定方法能够识别出可抑制一种或多种CDK酶的候选化合物。
更优选的是，该测定方法是竞争性结合测定方法。
优选地，该候选化合物是通过对本发明化合物进行常规SAR修饰得到的。
本文所使用的术语“常规SAR修饰”是指本领域已知的通过化学衍化手段对特定化合物进行变型的常规方法。
因此，一方面该被识别的化合物可以作为改良其它化合物的模型(例如模板)。在这类测试中所使用的化合物可以游离在溶液中、粘附于固体载体上、荷载于细胞表面上、或者定位于细胞内。可以对活性消除或者该化合物与被测试物质之间结合复合物的形成进行测试。
本发明的测定方法可以用于筛选测试许多的化合物。一方面，本发明的测定方法属于高通量筛选。
本发明还预期了竞争性药物筛选测定方法在中和能够结合某化合物，特别是能够与测试化合物竞争结合某化合物的抗体中的用途。
另一筛选技术提供了对底物具有合适的结合亲和力的化合物的高通量筛选(HTS)，该技术基于WO 84/03564中所具体描述的方法。
据期望，本发明的测定方法可适合于小规模和大规模筛选测试化合物以及定量分析。
优选地，该竞争性结合测定方法包括在所述CDK酶的已知底物存在下，使式1化合物与CDK酶接触，并检测所述CDK酶和所述已知底物之间的相互作用中所出现的任何变化。
本发明第六方面提供了一种检测配体对CDK酶结合力的方法，所述方法包括下述步骤：
(i)在所述CDK酶的已知底物存在下，使配体与CDK酶接触；
(ii)检测所述CDK酶与所述已知底物之间的相互作用中所出现的任何变化；
并且其中所述配体是式1的化合物。
本发明一方面涉及一种包括下述步骤的方法：
(a)完成上面所述的测定方法；
(b)识别出能够结合配体结合区域的一种或多种配体；和
(c)制备一定量的所述一种或多种配体。
本发明另一方面提供了一种包括下述步骤的方法：
(a)完成上文所述的测定方法；
(b)识别出能够结合配体结合区域的一种或多种配体；和
(c)制备含有所述一种或多种配体的药物组合物。
本发明另一方面提供了一种包括下述步骤的方法：
(a)完成上文所述的测定方法；
(b)识别出能够结合配体结合区域的一种或多种配体；
(c)对所述一种或多种能够结合配体结合区域的配体进行修饰；
(d)完成上文所述的测定方法；
(e)任选制备含有所述一种或多种配体的药物组合物。
本发明还涉及通过上文所述方法识别出来的配体。
本发明再一方面涉及含有通过上文所述方法识别出来的配体的药物组合物。
本发明另一方面涉及通过上文所述方法识别出来的配体在制备用于治疗增殖性疾病的药物组合物中的用途。
上述方法可用于筛选用作一种或多种CDK酶抑制剂的配体。
方法
本发明另一方面涉及制备上述式I化合物的方法，所述方法包括将式V化合物与式VI化合物反应
其中R1-9如权利要求1所定义，X是Cl或F。
优选地，所述式V化合物通过下述步骤制备：
Figure A0381942500271
(i)将式II化合物与式III化合物反应，形成式IV化合物；
(ii)所述式IV化合物用烷基卤化物R5-X’烷基化，形成式V化合物。
优选地，所述式VI化合物通过下述步骤制备：
Figure A0381942500272
(i)将式VIII化合物氧化形成式IX化合物，其中PG是保护基团；
(ii)烷基化所述式IX化合物，形成式X化合物；
(iii)除去所述式X化合物上的保护基团PG，形成式IX化合物，其相当于式VI(其中R3或R4中的一个是H)。
或者，所述式VI化合物也可以通过下述步骤制备：
(i)将式VIII化合物氧化形成式IX化合物，其中PG是保护基团；
(ii)烷基化所述式IX化合物，形成式X化合物；
(iii)氧化所述式X化合物，形成式XI化合物；
(iv)烷基化所述式XI化合物，形成式XII化合物；
(v)除去所述式XIII化合物上的保护基团PG，形成式VI化合物。
更优选的是，在上述方法步骤(i)和(iii)中的氧化是通过Swern氧化的方式完成的。
优选地，上述方法的步骤(ii)和(iv)的烷基化反应是通过将该化合物使用烷基锂试剂在溴化铜/二甲基硫化物络合催化剂存在下进行处理而实现的。
在一个替换的优选实施方案中，R3＝R4并且所述的式VI化合物是由下面的方法制备得到的，其包括下面的步骤：
Figure A0381942500281
(i)将式XVI化合物转化为式XVII化合物，其中PG’为保护基并且R为烷基基团；
(ii)除去所述式XVII化合物上的保护基PG’，形成式VI化合物。
优选地，将所述式XVI化合物通过双Grignard反应转化为式XVII化合物。
更优选地，对于此实施方案，所述式VI化合物是由下面的步骤制备得到的：
(i)使式XIV化合物与SOCl2和MeOH反应，形成式XV化合物；
(ii)保护所述式XV化合物的氨基以形成式XVIa化合物；
(iii)使所述式XVIa化合物与格氏试剂R3X”反应，形成式XVII化合物，其中R3如权利要求1所定义，并且X”为卤素；
(iv)除去所述式XVII化合物上的保护基PG’，形成所述式VI化合物。
适宜的保护基团PG和PG’对于相关领域的技术人员而言是熟悉的。通过示例的方式，优选地，保护基团PG’是苄基、Bn，保护基团PG是三苯甲基。
关于制备本发明化合物更具体的细节概述在标题为“合成”的实施例中。
通过下面的实施例对本发明进行进一步描述。
实施例
与roscovitine相反，本发明化合物含有修饰的嘌呤C-2取代基。特别地，本发明化合物所含有的C-2取代基具有仲醇或叔醇基团而不是伯醇基团。不希望局限于任何理论，据认为该修饰的C-2取代基的存在使得醇-羧基代谢转化率降低。
为了弥补因为在C-2取代基位置上引入另外的烷基取代基而可能引起其水溶性降低，将roscovitine的C-6苄基氨基替换为(吡啶-3-基)-甲基氨基。后面的实施例证明这样的结构修饰在生物活性方面是可以接受的(CDK2/细胞周期蛋白E或A、CDK1/细胞周期蛋白B抑制作用以及对人类肿瘤细胞系的抗增殖活性)。
因此，本发明证实对roscovitine的嘌呤C-2和C-6取代基进行修饰可以得到治疗活性增加的新化合物。实际上已经表明，在存在于roscovitine中的嘌呤C-2取代基中的甲醇C上使用一个或两个低级烷基取代基进行取代不仅在保留所希望的生物活性方面(蛋白激酶抑制作用的效能和选择性；细胞毒性)是可以接受的，而且在某些情形下还提供了更有效的化合物。另外，用来替代苄基氨基的(吡啶-3-基)-甲基氨基的引入还保证了本发明化合物相对于roscovitine而言，其亲水性和水溶性曲线得到了改善(计算出的正辛醇/水分布系数：2.5＜ClogP＜3.8，相比之下roscovitine的ClogP＝3.7)。此外，利用适宜的体外模型系统，本文所例举的所选化合物还显示出具有更高的耐代谢性降解。
合成
可以通过本领域已知的方法制备通式结构1的化合物(参见综述Fischer，P.M.和Lane，D.P.Curr.Med.Chem.2001，7，1213-1245)。常规合成路线如下面的流程图1所示，它由可商购得到的2，6-二氯嘌呤(2，X＝Cl)或2-氨基-6-氯嘌呤(2，X＝NH2)开始。在后一种情形中，将氨基转化得到特别适宜的6-氯-2-氟-嘌呤起始原料(2，X＝F；Gray，N.S.，Kwon，S.，以及Schultz，P.G.Tetrahedron Lett.1997，38，1161-1164.)。然后在更具反应活性的C-6位置上使用适宜的吡啶基甲基胺3进行选择性氨化得到中间体4。例如通过使用适宜的烷基卤化物R5-X进行亲核取代，将其在N-9位置上烷基化。产物5最后在升高的温度下使用羟乙胺6氨化。
Figure A0381942500301
流程图1
取代的氨基醇6(R1或R2＜＞H)可以由α-氨基醇7(R1或R2＜＞H)按照下面流程图2所示的方法合成。许多α-氨基醇7可以商购得到；或者它们也可以很方便地通过还原相应的α-氨基酸而制备得到。所采用合成方法的起始反应是将氨基官能团用三苯甲基保护得到中间体8(R1或R2＜＞H；Evans，P.A.，Holmes，A.B.，以及Russell，K.J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1，1994，3397-3409)。将其经Swern氧化得到相应的醛9(R1或R2＜＞H；Takayama，H.，Ichikawa，T.，Kuwajima，T.，Kitajima，M.，Seki，H.，Aimi，N.，以及Nonato，M.G.J.Am.Chem.Soc.2000，122，8635-8639)。使用适宜的烷基锂试剂和溴化铜/二甲基硫化物络合物催化剂在二乙基醚中通过螯合控制烷基化反应(Reetz，M.T.，Roelfing，K.，以及Griebenow，N.Tetrahedron Lett.1994，35，1969-1972)完成取代基R3(如果R2＜＞H)或者R4(如果R1＜＞H)的引入。根据所引入的取代基，上述步骤得到非对映体过量50-80％的中间体10。或者也可以使用手性方法，然后任选将光学异构体进行分离/拆分。为了制备R3和R4均不是H的氨基醇，中间体10再经Swern氧化反应得到相应的酮12，随后通过烷基化反应引入第二个取代基。对于所有的氨基醇而言，其合成方法中的最后一步是使用三氟乙酸除去三苯甲基得到6或者11。
流程图2
在其中氨基醇的甲醇C上含有两个相同取代基的情形中(6，R1或R2＜＞H；R3＝R4，不是H)，它们可以直接由适宜的相应α-氨基酸例如通过双Grignard烷基化制备得到(Guenther，B.R.，和Kirmse，W.Liebigs Ann.Chem.1980，518-532)。
激酶测定
测试了来自下面实施例中的化合物对于CDK2/细胞周期蛋白E、CDK1/细胞周期蛋白B、CDK4/细胞周期蛋白D1和CDK7/细胞周期蛋白H、ERK-2、以及PKA的抑制活性。使用杆状病毒表达系统将His6-标记的重组人类依赖细胞周期蛋白的激酶CDK1/细胞周期蛋白B1、CDK2/细胞周期蛋白E、CDK4以及CDK7/细胞周期蛋白H表达于sf9细胞中。将重组细胞周期蛋白D1表达于E.coli中。这些蛋白通过金属螯合物亲和色谱法纯化至同质性高于90％。使用重组CDK/细胞周期蛋白、重组活性ERK-2(UpstateBiotechnology)、或者环AMP依赖性激酶(PKA)催化亚单元(Calbiochem Cat.539487)在96孔板中完成激酶测定。测定是在测定缓冲液(25mMβ-甘油磷酸酯，20mM MOPS，5mM EGTA，1mM DTT，1mM Na3VO3，pH7.4)中完成的，向其中加入具有适宜底物的2-4μg活性酶(CDK2使用纯化组蛋白H1、CDK4使用重组GST-成视网膜细胞瘤蛋白(残留物773-928)、CDK7使用生物素基-Ahx-(Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser)4肽、ERK-2使用髓鞘碱性蛋白、PKA使用肽肯普肽(Kemptide)(Fluka Biochemika Cat.60645))。通过加入Mg/ATP混合组分(具有每孔30-50kBq的[γ-32P]-ATP的15mM MgCl2+100μM ATP)启动反应，混合物视需要在30℃下孵育10分钟(CDK2/细胞周期蛋白E，ERK-2，PKA)或45分钟(CDK4/细胞周期蛋白D1，CDK7/细胞周期蛋白H)。除CDK7的情形以外，其余情形均在冰上终止反应，接着通过p81滤板或GF/C滤板(对于CDK4)(Whatman Polyfiltronics，Kent，UK)过滤，而对于CDK7的情形，在冰上终止反应之后，向每个孔中加入10μL的10mg/mL抗生物素蛋白，继续孵育10分钟，接着如每个CDK2测定方法那样过滤。用75mM正磷酸水溶液洗涤3次后，将平板干燥，加入闪烁剂，在闪烁计数器(TopCount，PackardInstruments，Pangboume，Berks，UK)中测量结合的放射性。用于激酶测定方法的化合物被制备成10mM的DMSO储备液，然后稀释成10％的DMSO测定缓冲液。数据用曲线拟合软件(GraphPad Prism version 3.00 for Windows，GraphPad Software，San Diego California USA)分析测得IC50值(抑制激酶活性达到50％的测试化合物的浓度)。本发明化合物的这些值如表1所示。
MTT细胞毒性测定
使用下述人类肿瘤细胞系：A549、HeLa、HT-29、MCF7、Saos-2、CCRF-CEM、HL-60、以及K-562对来自下面的实施例中的化合物进行标准细胞增殖测定。这些细胞系由ATCC(American Type Culture Collection，10801University Boulevard，Manessas，VA 20110-2209，USA)获得。完成标准的72-hMTT(噻唑基蓝；3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑鎓溴化物)测定(Haselsberger，K.；Peterson，D.C.；Thomas，D.G.；Darling，J.L.Anti CancerDrugs 1996，7，331-8；Loveland，B.E.；Johns，T.G.；Mackay，I.R.；Vaillant，F.；Wang，Z.X.；Hertzog，P.J.Biochemistry International 1992，27，501-10)。简而言之：按照倍增时间将细胞接种于96孔板中，并在37℃下培养过夜。测试化合物被制备成DMSO溶液，然后在100μL细胞介质中制备得到1/3连续稀释液，将其加入至细胞(分成三份)中在37℃下培养72小时。将MTT在细胞介质中被制备成5mg/mL的储备液，并过滤灭菌。从细胞中除去介质，然后用200μLPBS洗涤。然后按照20μL每孔加入MTT溶液，在37℃下置于暗处培养4小时。除去MTT溶液，细胞再次用200μLPBS洗涤。将MTT染料用200μL每孔的DMSO搅拌溶解。在540nm处读取吸光率，数据用曲线拟合软件(GraphPad Prism version 3.00 for Windows，GraphPad Software，San Diego California USA)分析测得IC50值(抑制细胞生长达到50％的测试化合物的浓度)。本发明化合物的这些值如表2所示。
选择性的细胞毒性
检测本发明的代表性化合物它们抗人肿瘤细胞系和无限增殖化非转化性人细胞系(“正常”细胞系)的抗增殖的效果。结果归纳于表3中。可以看出与roscovitine相比，所检测的化合物为具有高几倍的有效的抗增殖的药物。此外，抗转化性与非转化性细胞系相比，它们的细胞毒性效应明显得多。
比较体内代谢测定
微粒体培养以及分析样本的制备
微粒体由Totem Biologicals，Northampton，England获得。将微粒体蛋白(0.2mg)和roscovitine或者本发明的测试化合物(最终浓度为10μM)混合于含有NADPH(20mM)、MgCl2(10mM)和EDTA(1.5mM)的磷酸盐缓冲溶液(100μL)中。按照内部标准，样本孵育30分钟，加入含有抑止酶素(Vesely，J.，Havlicek，L.，Strnad，M.，Blow，J.J.，Donella-Deana，A.，Pinna，L.，Letham，D.S.，Kato，J.，Detivaud，L.，Leclerc，S.，Meijer，L.Eur.J.Biochem.1994，224，771-786)的冰冷甲醇(300μL)以终止反应。利用预先孵育30分钟的0、1、和10μM微粒体(它们也用含抑止酶素的甲醇处理)得到标准曲线。然后全部样本经离心分离，上清液通过液相色谱-质谱分析。
液相色谱-质谱
色谱柱为Supelco LC-ABZ，50×4.6mm，5μm两性离子柱(Supelco Inc.，Supelco Park，Bellefonte，PA，USA)。梯度洗脱液由甲醇(A)和0.1％甲酸的水溶液(B)组成。梯度由10∶90(A∶Bv/v)开始，均匀保持0.5分钟，接着在6分钟内线性升至90∶10(A∶Bv/v)，然后在上述条件下继续保持4分钟。流速始终为1mL/分钟。使用负载于Thermoseparations P4000四溶媒泵(quaternarypump)上的Gilson 215自动取样器(Anachem Ltd.，Bedfordshire，UK)引入LC-UV-MS样本，将柱(如上所述)和Thermoseparations UV1000检测器调至254nm(Thermoquest Ltd.，Hemel Hempstead，Hertfordshire，UK)。将来自检测器的未经分离的洗脱液通入装备有以阳极模式操作的电喷射源的Thermoquest LCQ离子阱质谱中。质谱条件为sheath gas 80、辅助气(auxiliarygas)20(都为任意单位)、毛细管电压4-4.5kV、加热后毛细管温度250-280℃。质量范围为50-750。扫描时间由离子阱控制，离子阱被设定为最大离子注入时间为200ms或者注入2×108离子所需要的时间；对于每次扫描，自动操作系统的时间都是最先达到的。
数据分析
为了对结果进行分析，采用了选择离子痕量的测试化合物和内部标准的MH+离子，并得到了相关峰的面积。然后将测试孵育物的峰面积比(测试化合物/内部标准)与由测试化合物的标准曲线得到的峰面积比进行对比。根据这些数值测得在微粒体蛋白培养30分钟之后所残留的测试化合物的浓度。对于本发明的代表性化合物其结果汇总在表3中，这些化合物的代谢稳定性还与roscovitine就下述项目进行了对比：代谢作用(A栏)、体外CDK2抑制作用(B栏)、以及对肿瘤细胞系的体外细胞毒性(C栏)。另外还示出了比较体外效能(A×C栏)和细胞接触时间(cellular exposure)(A×C栏)。上述结果表明，相对于roscovitine而言本发明的化合物具有提高了的体内活性。表3中还包括计算出来的正辛醇/水分布系数(ClogP)。可以看出，这些具有改良细胞活性和代谢稳定性的化合物同时还具有比roscovitine更低的ClogP，这表明它们的水溶性得到提高，因而更容易制成供体内服用的药物制剂。
(2R)-2-(6-苄基氨基-9-异丙基-9H-嘌呤-2-基氨基)-丁酸
Figure A0381942500341
将苄基-(2-氟-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-胺(151mg，0.5mmol)溶于NMP(5mL)和DBU(1.5mL，10mmol)中。然后加入(R)-(-)-2-氨基丁酸(99％ee/GLC；1.03g，10mmol)，并将混合物在N2下于160℃搅拌1小时。冷却后，将混合物用柠檬酸(10％水溶液)和CH2Cl2(每个25mL)稀释。分离两相，并将有机部分用盐水(2×10mL)萃取，经MgSO4干燥，过滤并蒸发。将残余物再溶于MeCN中，并用制备型RP-HPLC(Vydac 218TP1022，9mL/分钟，22.5-32.5％MeCN的含有0.1％CF3COOH的H2O溶液，经40分钟)进行分离。混合合适的部分并冷冻干燥，得到无定形的灰白色固体的纯的标题化合物(137mg，74.4％)。分析型RP-HPLC(Vydac 218TP54，1mL/分钟)：tR＝16.04分钟(0-60％MeCN)，15.95分钟(22.5-32.5％MeCN的含有0.1％CF3COOH的H2O溶液，经20分钟)，纯度：＞98％(λ＝214nm)。1H-NMR(d6-DMSO，300MHz)δ：0.95(t，J＝7.3Hz，3H，CH2CH3)；1.51(d，J＝6.7Hz，6H，CH(CH3)2)；1.78(m，J＝7.3Hz，2H，CH2CH3)；4.27(m，1H，CHCH2)；4.64(七重峰，J＝6.7Hz，1H，CH(CH3)2)；4.69(m，2H，CH2Ph)；7.25-7.41(m，6H，ArH)。DE-MALDI-TOF MS(α-氰基-4-羟基肉桂酸基质)：[M+H]+＝369.41。FAB-MS：[M+H]+＝369.2033(C19H25N6O2要求369.2039)。
(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁-1-醇
Figure A0381942500351
在氩气下、于室温向搅拌的(R)-(-)-2-氨基丁-1-醇(10g，1当量，112.18mmol)的DCM(500mL)溶液中先后加入DIEA(30mL，1.54当量，172.22mmol)和三苯甲基氯(35.4mL，1.13当量，126.98mmol)。将反应混合物于室温搅拌48小时，此时TLC(己烷∶乙醚∶MeOH；55∶40∶5)显示反应已经进行完全。真空蒸发除去溶剂，并使用己烷(900mL)在搅拌下使残余物从丙酮(50mL)中沉淀析出，过滤除去沉淀，并真空蒸发滤液。将残余物溶于己烷(1L)中，过滤并真空蒸发滤液，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：32g(86％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.56(t，3H，J＝7.41Hz，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，1.10(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，2.22(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，2.38(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，2.72+3.00(2×m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，4.28(t，1H，J＝5.26Hz，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，7.14-7.49(m，15H，3×Ph)。
(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁-1-醇
在氩气下、于室温向搅拌的(S)-(+)-2-氨基丁-1-醇(10g，1当量，112.18mmol)的DCM(500mL)溶液中先后加入DIEA(30mL，1.54当量，172.22mmol)和三苯甲基氯(35.4mL，1.13当量，126.98mmol)。将反应混合物在此温度下搅拌48小时，此时TLC(己烷∶乙醚∶MeOH；55∶40∶5)显示反应已经进行完全。真空蒸发除去溶剂，并使用己烷(900mL)在搅拌下使残余物从丙酮(50mL)中沉淀析出，过滤除去沉淀，并真空蒸发滤液。将残余物溶于己烷(1L)中，过滤并真空蒸发滤液，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：33g(89％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.58(t，3H，J＝7.26Hz，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，1.10(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，2.24(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，2.39(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，2.76&3.03(2×m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，4.32(t，1H，J＝4.97Hz，-NHCH(CH2CH3)CH2OH)，7.15-7.52(m，15H，3×Ph)。
(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛
Figure A0381942500362
在氩气下于-45℃，向搅拌的DMSO(3.0mL，2.8当量，42.28mmol)的DCM(30mL)溶液中滴加草酰氯(2M的DCM溶液，10.56mL，1.40当量，21.12mmol)。将反应混合物于-45℃搅拌1小时，随后在搅拌下滴加(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁-1-醇(5g，1当量，15.08mmol)的DCM(30mL)溶液。将反应混合物在此温度下搅拌3小时，此时TLC(己烷∶乙醚；80∶20)显示反应已经进行完全。向反应混合物中加入TEA(10.5mL，5当量，75.33mmol)的DCM(30mL)溶液，并将所得到的溶液在16小时内温热至室温。将反应混合物用更多的DCM(200mL)稀释，并用水(250mL)洗。水相用DCM(3×50mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。将残余物溶于乙醚(30mL)中，过滤除去固体沉淀物，并真空蒸发滤液。将残余物溶于己烷(50mL)中，过滤除去固体沉淀物，并真空蒸发滤液，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：2.59g(52％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.77(t，3H，J＝7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)CHO)，1.34-1.61(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CHO)，2.92(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CHO)，3.62(d，1H，J＝8.21Hz，-NHCH(CH2CH3)CHO)，7.16-7.46(m，15H，3×Ph)，8.77(d，1H，J＝3.00Hz，-NHCH(CH2CH3)CHO)。
(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛
在氩气下于-45℃，向搅拌的DMSO(2.4mL，2.8当量，33.82mmol)的DCM(30mL)的溶液中滴加草酰氯(2M的DCM溶液，8.45mL，1.40当量，16.9mmol)。将反应混合物于-45℃搅拌1小时，随后在搅拌下滴加(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁-1-醇(4g，1当量，12.07mmol)的DCM(30mL)溶液。将反应混合物在此温度下搅拌3小时，此时TLC(己烷∶乙醚；80∶20)显示反应已经进行完全。向反应混合物中加入TEA(8.4mL，5当量，60.27mmol)的DCM(30mL)溶液，并将所得到的溶液在16小时内温热至室温。将反应混合物用更多的DCM(100mL)稀释，并用水(250mL)洗。水相用DCM(3×50mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。将残余物溶于乙醚(30mL)中，过滤除去固体沉淀物，并真空蒸发滤液。将残余物溶于己烷(50mL)中，过滤除去固体沉淀物，并真空蒸发滤液，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：3.64g(91％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.77(t，3H，J＝7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)CHO)，1.37-1.59(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CHO)，2.93(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CHO)，3.62(d，1H，J＝5.84Hz，-NHCH(CH2CH3)CHO)，7.16-7.46(m，15H，3×Ph)，8.77(d，1H，J＝3.00Hz，-NHCH(CH2CH3)CHO)。
(2S，3R)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇
Figure A0381942500381
在氩气下于-70℃，向搅拌的CuBr.SMe2(2.74g，2.2当量，13.33mmol)的Et2O(100mL)悬浮液中滴加甲基锂(1.6M的Et2O溶液，16.6mL，4.4当量，26.56mmol)，并将溶液温热至室温。将混合物再冷却至-70℃，在搅拌下向其中滴加(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(2g，1当量，6.05mmol)的Et2O(25mL)溶液。将反应混合物在此温度下搅拌2小时，此时TLC(己烷∶乙醚；80∶20)显示反应已经进行完全。向反应混合物中加入饱和的NH4Cl(100mL)水溶液，并用16小时温热至室温。将反应混合物用乙醚(2×200mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶柱色谱法纯化，用己烷∶乙醚(80∶20)洗脱，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：1.91g(91％)。(80％de 2S，3R：20％de 2R，3R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.47&0.55(2×t，J＝7.43&7.27Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，0.99-1.12(m，5H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，2.03(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，3.32-3.51(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，4.40(d，1H，J＝3.79Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，7.14-7.51(m，15H，3×Ph)。
(2R，3S)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇
在氩气下于-70℃，向搅拌的CuBr.SMe2(2.74g，2.2当量，13.33mmol)的乙醚(100mL)悬浮液中滴加甲基锂(1.6M的乙醚溶液，15.13mL，4.0当量，24.21mmol)，并将溶液温热至室温。将混合物再冷却至-70℃，在搅拌下向其中滴加(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(2g，1当量，6.05mmol)的Et2O(25mL)溶液。将反应混合物在此温度下搅拌2小时，并然后于-55℃搅拌4小时，此时TLC(己烷∶Et2O；80∶20)显示反应已经进行完全。向反应混合物中加入饱和的NH4Cl(100mL)水溶液，并用16小时温热至室温。反应混合物用Et2O(2×200mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶柱色谱法纯化，用己烷∶Et2O(80∶20)洗脱，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：1.37g(66％)。(80％ de 2R，3S：20％ de 2S，3S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.0.47&0.55(2×t，J＝7.50&7.26Hz-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，0.99-1.12(m，5H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，2.01(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，3.22-3.43(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，4.41(d，1H，J＝3.31Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，7.14-7.56(m，15H，3×Ph)。
(3RS，4R)-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇
Figure A0381942500391
在氩气下于-78℃，向搅拌的(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(1.5g，1当量，4.53mmol)的Et2O(150mL)溶液中滴加乙基溴化镁(3M的Et2O溶液，1.51mL，1当量，4.53mmol)。将该溶液于-78℃搅拌2小时，然后用16小时温热至室温。将混合物再冷却至0℃，加入H2O(150mL)，并分离有机层。水相用更多的Et2O(2×50mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶柱色谱法纯化，用己烷∶乙醚(90∶10)洗脱，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：1.13g(69％)。(57％ de 3S，4R：43％ de3R，4R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.45&0.69(t&m，6H，J＝7.43Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，1.12-1.29(m，4H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.16(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.54(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.21-3.40(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，4.29+4.39(2×d，1H，J＝4.42&5.37Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，7.15-7.52(m，15H，3×Ph)。
(3RS，4S)-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇
Figure A0381942500401
在氩气下于-78℃，向搅拌的(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(1.5g，1当量，4.53mmol)的Et2O(150mL)溶液中滴加乙基溴化镁(3M的Et2O溶液，1.51mL，1当量，4.53mmol)。将该溶液于-78℃搅拌2小时，然后用16小时温热至室温。将混合物再冷却至0℃，加入H2O(150mL)，并分离有机层。水相用更多的Et2O(2×50mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶柱色谱法纯化，用己烷∶乙醚(90∶10)洗脱，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：1.19g(73％)。(65％de 3R，4S：35％de3S，4S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.46+0.69(t&m，6H，J＝7.34Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，1.13-1.29(m，4H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.17(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.55(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.20-3.39(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CHCH2CH3)OH)，4.29&4.39(2×d，1H，J＝4.74&5.53Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，7.15-7.52(m，15H，3×Ph)。
(3RS，4R)-2-甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇
在氩气下于-78℃，向搅拌的CuBr.SMe2(1.37g，2.2当量，6.66mmol)的Et2O(100mL)悬浮液中滴加异丙基锂(0.7M的戊烷溶液，17.29mL，4当量，12.1mmol)，并将溶液温热至室温。将混合物再冷却至-70℃，在搅拌下向其中滴加(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(1g，1当量，3.03mmol)的Et2O(25mL)溶液。将反应混合物在此温度下搅拌1小时，然后温热至-55℃，并在此温度下搅拌3小时。向反应混合物中加入饱和的NH4Cl(100mL)水溶液，并用16小时温热至室温。将反应混合物用Et2O(2×200mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用己烷∶乙醚(100∶0→90∶10)洗脱，得到无色油状物的标题化合物。产率：0.53g(47％)。(50％de 3S，4R：50％de 3R，4R)1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.44(t，3H，J＝7.03Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，0.52&0.77(2×d，6H，J＝6.48Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，0.79-1.13(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，1.72(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.11(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.77(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.99(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，4.55(d，1H，J＝5.21Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，7.15-7.46(m，15H，3×Ph)。
(3RS，4S)-2-甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇
在氩气下于-78℃，向搅拌的CuBr.SMe2(1.37g，2.2当量，6.66mmol)的Et2O(100mL)悬浮液中滴加异丙基锂(0.7M的戊烷溶液，17.29mL，4当量，12.1mmol)，并将溶液温热至室温。将混合物再冷却至-70℃，在搅拌下向其中滴加(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(1g，1当量，3.03mmol)的Et2O(25mL)溶液。将反应混合物在此温度下搅拌1小时，然后温热至-55℃并在此温度下搅拌3小时。向反应混合物中加入饱和的NH4Cl(100mL)水溶液，并用16小时温热至室温。反应混合物用Et2O(2×200mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶柱色谱法纯化，用己烷∶乙醚(100∶0→90∶10)洗脱，得到无色油状物的标题化合物；产率：0.36g(32％)。(50％de 3R，4S：50％de 3S，4S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.44(t，3H，J＝6.79Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，0.52&0.76(2×d，6H，J＝6.63Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，0.80-1.15(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，1.70(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.10(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.76(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.99(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，4.55(d，1H，J＝5.84Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，7.17-7.46(m，15H，3×Ph)。
(3RS，4R)-2，2-二甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇
Figure A0381942500421
在氩气下于-78℃，向搅拌的CuBr.SMe2(1.37g，2.2当量，6.66mmol)的Et2O(100mL)悬浮液中滴加叔丁基锂(1.5M的戊烷溶液，8.0mL，4当量，12.0mmol)，并将溶液温热至室温。将混合物再冷却至-55℃，在搅拌下向其中滴加(R)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(1g，1当量，3.03mmol)的Et2O(25mL)溶液，并在此温度下搅拌3小时。向反应混合物中加入饱和的NH4Cl(100mL)水溶液，并用16小时温热至室温。反应混合物用Et2O(2×200mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用己烷∶乙醚(100∶0→90∶10)洗脱，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：0.57g(49％)。(55％de 3S，4R：45％de 3R，4R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.36&0.86(2×t，3H，J＝7.42Hz，-NHCH(CH2CH2)CH(C(CH3)3)OH)，0.57&0.71(2×s，9H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.38-1.52(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.99(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，2.27(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，2.95(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，4.22&4.77(2×d，1H，J＝4.42 5.21Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，7.14-7.52(m，15H，3×Ph)。
(3RS，4S)-2，2-二甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇
在氩气下于-78℃，向搅拌的CuBr.SMe2(1.37g，2.2当量，6.66mmol)的Et2O(100mL)悬浮液中滴加叔丁基锂(1.5M的戊烷溶液，8.0mL，4当量，12.0mmol)，并将溶液温热至室温。将混合物再冷却至-55℃，在搅拌下向其中滴加(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁醛(1g，1当量，3.03mmol)的Et2O(25mL)溶液，并在此温度下搅拌3小时。向反应混合物中加入饱和的NH4Cl(100mL)水溶液，并用16小时温热至室温。反应混合物用Et2O(2×200mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。将残余物经硅胶柱色谱法纯化，用己烷∶Et2O(100∶0→90∶10)洗脱，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：0.47g(40％)。(53％de 3R，4S：47％de 3S，4S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.37&0.87(2×t，3H，J＝7.46Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，0.58&0.71(2×s，9H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.38-1.52(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，2.00(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，2.28(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，2.95(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，4.24&4.79(2×d，1H，J＝5.21&6.16Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，7.15-7.53(m，15H，3×Ph)。
(3R)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-酮
Figure A0381942500432
在氩气下于-45℃，向搅拌的DMSO(2.19mL，2.8当量，30.86mmol)的DCM(30mL)溶液中滴加草酰氯(2M的DCM溶液，7.69mL，1.4当量，15.38mmol)。将反应混合物于-45℃搅拌1小时，随后在搅拌下滴加(2S，3R)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇(3.81g，1当量，11.04mmol)的DCM(20mL)溶液。将反应混合物在此温度下搅拌4小时，此时TLC(己烷∶乙醚；80∶20)显示反应已经进行完全。向反应混合物中加入N-乙基哌啶(7.54mL，5当量，54.88mmol)，并将所得到的溶液在16小时内温热至室温。将反应混合物用更多的DCM(50mL)稀释，并用水(200mL)洗。水相用DCM(2×50mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。将残余物溶于Et2O(100mL)中，过滤除去固体沉淀物，并真空蒸发滤液。将残余物溶于己烷(50mL)中，过滤除去固体沉淀物，并真空蒸发滤液，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：3.78g(100％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.73(t，3H，J＝7.35Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，1.47-1.60(m，5H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，3.12(d，1H，J＝8.38Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，3.32(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，7.16-7.49(m，15H，3×Ph)。
(3S)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-酮
Figure A0381942500441
在氩气下于-45℃，向搅拌的DMSO(1.95mL，2.8当量，27.48mmol)的DCM(30mL)溶液中滴加草酰氯(2M的DCM溶液，6.85mL，1.4当量，13.70mmol)。将反应混合物于-45℃搅拌1小时，随后在搅拌下滴加(2R，3S)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇(3.39g，1当量，9.83mmol)的DCM(20mL)溶液。将反应混合物在此温度下搅拌4小时，此时TLC(己烷∶乙醚；80∶20)显示反应已经进行完全。向反应混合物中加入N-乙基哌啶(6.71mL，5当量，48.84mmol)，并将所得到的溶液在16小时内温热至室温。将反应混合物用更多的DCM(50mL)稀释，并用水(200mL)洗。水相用DCM(2×50mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。将残余物溶于Et2O(100mL)中，过滤除去固体沉淀物，并真空蒸发滤液。将残余物溶于己烷(50mL)中，过滤除去固体沉淀物，并真空蒸发滤液，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：3.15g(93％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.73(t，3H，J＝7.50Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，1.45-1.62(m，5H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，3.12(d，1H，J＝8.53Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，3.31(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)O)，7.13-7.45(m，15H，3×Ph)。
(3R)-2-甲基-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇
在氩气下、于室温向搅拌的(3R)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-酮(0.87g，1当量，2.54mmol)的Et2O(100mL)溶液中滴加甲基碘化镁(3M的乙醚溶液，2.54mL，3当量，7.62mmol)。将该溶液置于45℃的预热油浴中，并在该温度下回流16小时。将混合物再冷却至0℃，加入H2O(100mL)，并将溶液通过西莱特(celite)过滤，并将该西莱特用更多的Et2O(50mL)洗。分离合并的有机相，水相用Et2O(2×50mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶柱色谱法纯化，用己烷∶乙醚(100∶0→90∶10)洗脱，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：0.21g(23％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.26(t，J＝7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.00&1.25(2×s，6H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，0.72-1.43(m，2H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.84(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，2.90(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，4.32(s，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，7.17-7.46(m，15H，3×Ph)。
(3S)-2-甲基-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇
Figure A0381942500452
在氩气下、于室温，向搅拌的(3S)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-酮(0.59g，1当量，1.72mmol)的Et2O(100mL)溶液中滴加甲基碘化镁(3M的Et2O溶液，1.72mL，3当量，5.16mmol)。将该溶液置于45℃的预热油浴中，并在该温度下回流16小时。将混合物再冷却至0℃，加入H2O(100mL)，并将溶液通过西莱特过滤，并将该西莱特用更多的Et2O(50mL)洗。分离合并的有机相，水相用Et2O(2×50mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶柱色谱法纯化，用己烷∶Et2O(100∶0→90∶10)洗脱，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：0.10g(16％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.27(t，J＝7.10Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，0.99&1.25(2×s，6H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，0.75-1.42(m，2H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.88(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，2.92(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，4.32(s，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，7.18-7.46(m，15H，3×Ph)。
(2S，3R)-3-氨基-戊-2-醇
在氩气下、于室温，向搅拌的(2S，3R)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇(1.32g，1当量，3.83mmol)的DCM(50mL)溶液中滴加CF3COOH(10mL)，并将该溶液在此温度下搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂，使用己烷(300mL)在搅拌下使残余物从Et2O(15mL)中沉淀析出，得到黄色油状物。从该油状物中轻轻倾出溶剂，并将所得到的油状物用己烷(30mL)洗涤并真空干燥，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：0.30g(99％)。(80％de 2S，3R：20％de 2R，3R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.915&0.924(2×t，3H，J＝7.50&7.58Hz，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.06&1.13(2×d，J＝6.48&6.32Hz)，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.41-1.59(m，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，2.77&2.93(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，3.62-3.72&3.80-3.90(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，7.75(bs，2H，NH2)。
(2R，3S)-3-氨基-戊-2-醇
Figure A0381942500462
在氩气下、于室温，向搅拌的(2R，3S)-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇(1.64g，1当量，4.75mmol)的DCM(50mL)溶液中滴加CF3COOH(10mL)，并将该溶液在此温度下搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂，并用己烷(300mL)在搅拌下使残余物从Et2O(15mL)中沉淀析出，得到黄色油状物。从该油状物中轻轻倾出溶剂，并将所得到的油状物用己烷(30mL)洗涤并真空干燥，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：0.30g(98％)。(80％de 2R，3S：20％de 2S，3S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.913&0.923(2×t，3H，J＝7.50&7.50Hz，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.11&1.18(2×d，J＝6.48&6.48Hz)，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.41-1.65(m，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，2.76+2.93(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，3.61-3.69&3.80-3.90(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，7.73(bs，2H，NH2)。
(3RS，4R)-4-氨基-己-3-醇
在氩气下、于室温，向搅拌的(3RS，4R)-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇(1.13g，1当量，3.14mmol)的DCM(15mL)溶液中滴加CF3COOH(7mL)，并将该溶液在此温度下搅拌4小时。真空蒸发除去溶剂，加入EtOH(20mL)并真空除去，并将此过程重复两次。用己烷(40mL)在搅拌下使残余物从Et2O(5mL)中沉淀析出，得到黄色油状物。从该油状物中轻轻倾出溶剂，并将所得到的油状物用己烷(30mL)洗涤并真空干燥，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：0.37g(100％)。(57％de 3S，4R：43％de 3R，4R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.79&0.92(t&m，6H，J＝7.42Hz，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，1.30-1.67(m，4H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.70(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.84&2.96(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.41&3.56(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，7.71(bs，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)。
(3RS，4S)-4-氨基-己-3-醇
在氩气下、于室温，向搅拌的(3RS，4S)-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇(1.19g，1当量，3.31mmol)的DCM(15mL)溶液中滴加CF3COOH(7mL)，并将该溶液在此温度下搅拌4小时。真空蒸发除去溶剂，加入EtOH(20mL)并真空除去，并将此过程重复两次。用己烷(40mL)在搅拌下使残余物从Et2O(5mL)中沉淀析出，得到黄色油状物。从该油状物中轻轻倾出溶剂，并将所得到的油状物用己烷(30mL)洗涤并真空干燥，得到标题化合物。产率：0.39g(99％)。(65％de 3R，4S：35％de 3S，4S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.79&0.92(t&m，6H，J＝7.50Hz，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，1.22-1.68(m，4H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.71(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，2.83&2.95(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.39&3.54(2×m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，7.77(bs，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)。
(3RS，4R)-4-氨基-2-甲基-己-3-醇
在氩气下、于室温，向搅拌的(3RS，4R)-2-甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇(0.53g，1当量，1.41mmol)的DCM(20mL)溶液中滴加CF3COOH(5mL)，并将该溶液在此温度下搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂，用己烷(90mL)在搅拌下使残余物从Et2O(10mL)中沉淀析出，得到黄色油状物。从该油状物中轻轻倾出溶剂，并将该油状物用己烷(20mL)洗并真空干燥，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：0.18g(100％)。(50％de 3S，4R：50％de 3R，4R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.85-0.99(m，9H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，1.42-1.79(m，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.95(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.18(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.37(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，7.58(bs，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)。
(3RS，4S)-4-氨基-2-甲基-己-3-醇
Figure A0381942500491
在氩气下、于室温，向搅拌的(3RS，4S)-2-甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇(0.36g，1当量，0.97mmol)的DCM(20mL)溶液中滴加CF3COOH(5mL)，并将该溶液在此温度下搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂，用己烷(90mL)在搅拌下使残余物从Et2O(10mL)中沉淀析出，得到黄色油状物。从该油状物中轻轻倾出溶剂，并将该油状物用己烷(20mL)洗并真空干燥，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：0.13g(100％)。(50％de 3R，4S：50％de 3S，4S)1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.85-1.01(m，9H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，1.44-1.76(m，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，2.94(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.17(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.40(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，7.54(bs，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)。
(3RS，4R)-4-氨基-2，2-二甲基-己-3-醇
Figure A0381942500492
在氩气下、于室温，向搅拌的(3RS，4R)-2，2-二甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇(0.57g，1当量，1.47mmol)的DCM(10mL)溶液中滴加CF3COOH(5mL)，并将该溶液在此温度下搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂，用己烷(20mL)在搅拌下使残余物从Et2O(3mL)中沉淀析出，得到黄色油状物。从该油状物中轻轻倾出溶剂，并将该油状物用己烷(20mL)洗并真空干燥，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：0.21g(100％)。(55％de 3S，4R：45％de3R，4R)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.84-0.99(m，3H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.25-1.29(m，9H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.20-1.72(m，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.14(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.39(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH))，3.65(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，7.43，7.77&8.54(3×bs，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)。
(3RS，4S)-4-氨基-2，2-二甲基-己-3-醇
Figure A0381942500501
在氩气下、于室温，向搅拌的(3RS，4S)-2，2-二甲基-4-(三苯甲基-氨基)-己-3-醇(0.47g，1当量，1.21mmol)的  DCM(10mL)溶液中滴加CF3COOH(5mL)，并将该溶液在此温度下搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂，用己烷(20mL)在搅拌下使残余物从Et2O(3mL)中沉淀析出，得到黄色油状物。从该油状物中轻轻倾出溶剂，并将该油状物用己烷(20mL)洗并真空干燥，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：0.18g(99％)。(53％de 3R，4S：47％de3S，4S)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.86-0.99(m，3H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.25-1.30(m，9H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.20-1.67(m，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.14(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.38(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.64(m，1H，NH2CH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，7.41，7.73&8.44(3×bs，2H，NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)。
(3R)-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇
Figure A0381942500502
在氩气下、于室温，向搅拌的(3R)-2-甲基-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇(0.21g，1当量，0.60mmol)的DCM(5mL)溶液中滴加CF3COOH(2.5mL)，并将该溶液在此温度下搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂，并用己烷(300mL)在搅拌下使残余物从Et2O(15mL)中沉淀析出，得到黄色油状物。从该油状物中轻轻倾出溶剂，并将所得到的油状物用己烷(30mL)洗涤并真空干燥，得到淡黄色油状物的标题化合物；产率：0.07g(100％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.97(t，3H，J＝7.42Hz，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.06&1.19(2×s，6H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.28-1.71(m，2H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，2.72(m，1H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，5.21(s，1H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，7.63(bs，2H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)。
(3S)-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇
在氩气下、于室温，向搅拌的(3S)-2-甲基-3-(三苯甲基-氨基)-戊-2-醇(0.38g，1当量，1.06mmol)的DCM(5mL)溶液中滴加CF3COOH(2.5mL)，并将该溶液在此温度下搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂，并用己烷(300mL)在搅拌下使残余物从Et2O(15mL)中沉淀析出，得到黄色油状物。从该油状物中轻轻倾出溶剂，并将所得到的油状物用己烷(30mL)洗涤并真空干燥，得到淡黄色油状物的标题化合物。产率：0.12g(99％)。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ0.97(t，3H，J＝7.42Hz，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.07&1.19(2×s，6H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.28-1.61(m，2H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，2.72(m，1H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，5.21(s，1H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，7.63(bs，2H，NH2CH(CH2CH3)C(CH3)2OH)。
6-氯-2-氟-9H-嘌呤
该化合物通过对现有文献所记载的方法进行变型而制备得到(Gray，N.S.；Kwon，S.；Schultz，P.G.Tetrahedron Lett.1997，38(7)，1161-1164.)。
Figure A0381942500512
将6-氯-9H-嘌呤-2-基胺(75.0g，0.44mol)悬浮于HBF4水溶液(1.5L的48％w/w的H2O溶液)中。将此混合物冷却至-15℃并剧烈搅拌。然后用75分钟在搅拌下慢慢加入NaNO2(2.5L的0.3M水溶液)，并小心地控制温度(＜10℃)。加入完成后，将淡黄色溶液于室温下进一步搅拌30分钟。然后将其再次冷却至-15℃，并用NaOH(50％w/v水溶液)小心地中和至pH＝6.2。将该溶液旋转蒸发至半干。将所得到的饼状物用刮刀分开并在高真空下干燥过夜。将所得到的黄色粉末干法装填在快速色谱柱(24×15cm的SiO2床)上，其用CH2Cl2/MeOH，9∶1洗脱。收集适当馏分，合并，然后蒸发。真空干燥之后，得到为无色粉末的标题化合物(34.8g，48％)。TLC：Rf＝0.25(CH2Cl2/MeOH，9∶1)，起始物Rf＝0.16.m/z 173(MH+，100)，175(MH+2，33)。
(2-氟-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺
在氩气下，向冷却至-20℃的搅拌的6-氯-2-氟嘌呤(0.9g，1当量，5.22mmol)的正丁醇(60mL)溶液中先后加入DIEA(2.5mL，2.75当量，14.35mmol)和C-吡啶-3-基-甲胺(0.58mL，1.1当量，5.69mmol)。反应混合物于-20℃搅拌3小时，并然后用2小时恢复至室温，此时TLC(CHCl3∶MeOH；90∶10)显示反应已经进行完全。真空蒸发除去溶剂，并将残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用CHCl3∶MeOH(97∶3→90∶10)洗脱，得到白色固体的标题化合物。产率：1.08g(85％)。Mp 218-220℃.1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ4.65(d，2H，J＝5.37Hz，-HNCH2-Pyr)，7.34，8.43，8.57(3×m，4H，Pyr)，8.10(s，1H，-N＝CH-NH-)，8.83(bs，1H，-HNCH2-Pyr)，13.07(bs，1H，-N＝CH-NH-)。FABMS m/z(相对强度)：245([M+H]1，40)，176(27)，154(100)，136(74)。精确质量(M+H)：实际值：245.0951，测量值：245.0942。微量分析(期望值：测量值)C11H9N6F.0.2H2O：C；53.31：54.03，H；3.82：3.83，N；33.91：32.74。
(2-氟-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺
在氩气下于室温，向搅拌的(2-氟-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(1.00g，1当量，4.10mmol)的DMA(12mL)溶液中先后加入K2CO3(粉末状，无水，2.75g，4.85当量，19.90mmol)和2-溴丙烷(3.75mL，9.75当量，39.93mmol)。将反应混合物于室温搅拌48小时，此时TLC(CHCl3∶MeOH；90∶10)显示反应已经进行完全。真空蒸发除去溶剂，并将残余物在水(200mL)和EtOAc(100mL)之间分配，分离出水相，并用更多的EtOAc(2×50mL)萃取。所得到的大体积有机相用盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发，并将残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→95∶5)洗脱，得到白色固体的标题化合物。产率：0.73g(62％)。Mp 131-133℃。1H-NMR(d6-DMSO，250MHz)：δ1.49(2×s，6H，-CH(CH3)2)，4.63(m，3H，-CH(CH3)2&-HNCH2-Pyr)，7.34，7.24，8.44，8.58(4×m，4H，Pyr)，8.26(s，1H，-N＝CH-N-)，8.95(bs，1H，-HNCH2-Pyr)。FABMS m/z(相对强度)：287([M+H]+，100)，245(8)，154(23)，136(18)。精确质量(M+H)：实际值：287.1420，测量值：287.1412.微量分析(期望值：测量值)C14H15N6F：C；58.73：58.57，H；5.28：5.21，N；29.35：29.27。
(2S3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇
在氩气下于室温，向搅拌的(2-氟-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(30mg，1当量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(2.5mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.2mL，10.96当量，1.14mmol)和(2S，3R)-3-氨基-戊-2-醇(60mg，5.5当量，0.58mmol)。将反应混合物置于160℃的预热油浴中，并在此温度下搅拌72小时。反应混合物冷却至室温，并真空蒸发除去溶剂。将残余物在EtOAc(50mL)和水(50mL)之间分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脱，得到白色固体的标题化合物。产率：22mg(57％)。(80％de 3R，2S：20％de 3R，2R)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)：δ0.90，1.05(2×t，3H，J＝6.95&7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.17&1.25(2×d，3H，J＝6.32&6.16Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)1.57(d，6H，J＝6.79Hz，-CH(CH3)2)，1.77-2.09(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，3.91-4.03(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，4.58-4.69(m，1H，-CH(CH3)2)，4.83-5.00(m，3H，-HNCH2-Pyr&OH)，6.16(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，7.24-7.33(m，3H，2×Pyr-H&-N＝CH-N-)，7.55(m，1H，Pyr-H)，7.74(d，1H，J＝7.42Hz，Pyr-H)，8.67(m，1H，HNCH2-Pyr)。FABMS m/z(相对强度)：370([M+H]+，100)，324(35)，289(37)，243(65)，199(85)。精确质量(M+H)：实际值：370.2355，测量值：370.2347。
(2R3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇
Figure A0381942500541
在氩气下于室温，向搅拌的(2-氟-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(30mg，1当量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(2.5mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.2mL，10.96当量，1.14mmol)和(2R，3S)-3-氨基-戊-2-醇(60mg，5.5当量，0.58mmol)。将反应混合物置于160℃的预热油浴中，并在此温度下搅拌72小时。反应混合物冷却至室温并真空蒸发除去溶剂。将残余物在EtOAc(50mL)和水(50mL)之间分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脱，得到白色固体的标题化合物。产率：25mg(65％)。(80％de 3S，2R：20％de 3S，2S)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)：δ0.90&1.05(2×t，3H，J＝6.48&7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，1.16&1.24(2×d，3H，J＝6.31&6.16Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)1.57(d，6H，J＝6.79Hz，-CH(CH3)2)，1.77-2.09(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，3.91-4.04(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，4.58-4.69(m，1H，-CH(CH3)2)，4.83(m，3H，-HNCH2-Pyr&OH)，6.11-6.23(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH)，7.24-7.32(m，3H，2×Pyr-H+-N＝CH-N-)，7.53-7.57(m，1H，Pyr-H)，7.74(d，1H，J＝7.58Hz，Pyr-H)，8.67(m，1H，HNCH2-Pyr)。FABMS m/z(相对强度)：370([M+H]+，100)，324(40)，289(15)，243(10)，233(13)，199(10)。精确质量(M+H)：实际值：370.2355，测量值：370.2347。
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇
Figure A0381942500551
在氩气下于室温，向搅拌的(2-氟-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(20mg，1当量，0.07mmol)的正丁醇/DMSO(3.75mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.18mL，15当量，1.03mmol)和(3RS，4R)-4-氨基-己-3-醇(110mg，13当量，0.94mmol)。将反应混合物置于140℃的预热油浴中，并在此温度下搅拌72小时。反应混合物冷却至室温，并真空蒸发除去溶剂。将残余物在EtOAc(50mL)和盐水/水(1∶1，100mL)之间分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脱，得到白色固体的标题化合物。产率：23mg(75％)。(57％de 4R，3S：43％de 4R，3R)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)：δ0.87-1.07(m，6H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，1.56(d，6H，J＝6.63Hz，&-CH(CH3)2)，1.43-1.63(m，4H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.44(d，1H，J＝6.31Hz，OH)，3.58-3.71(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.89-4.01(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，4.56-4.70(m，1H，-CH(CH3)2)，4.76-4.95(m，2H，-HNCH2-Pyr)，5.20-5.29&6.17-6.34(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，7.19-7.38(m，3H，2×Pyr-H &-N＝CH-N-)，7.48-7.60(m，1H，Pyr-H)，7.72(d，1H，J＝7.74Hz，Pyr-H)，8.67(m，1H，HNCH2-Pyr)。FABMS m/z(相对强度)：384([M+H]+，100)，324(50)，297(30)。精确质量(M+H)：实际值：384.2512，测量值：384.2500。
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇
Figure A0381942500561
在氩气下于室温，向搅拌的(2-氟-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(20mg，1当量，0.07mmol)的正丁醇/DMSO(3.75mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.18mL，15当量，1.03mmol)和(3RS，4S)-4-氨基-己-3-醇(110mg，13当量，0.94mmol)。将反应混合物置于140℃的预热油浴中，并在此温度下搅拌72小时。反应混合物冷却至室温，并真空蒸发除去溶剂。将残余物在EtOAc(50mL)和盐水/水(1∶1，100mL)之间分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脱，得到白色固体的标题化合物。产率：15.5mg(58％)。(57％de 4S，3R：43％de 4S，3S)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)：δ0.84-1.09(m，6H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，1.57(d，6H，J＝6.48Hz，&-CH(CH3)2)，1.42-1.64(m，4H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.45(d，1H，J＝6.31Hz，OH)，3.55-3.71(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，3.88-4.03(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，4.56-4.74(m，1H，-CH(CH3)2)，4.78-4.99(m，2H，-HNCH2-Pyr)，5.20-5.29&6.20-6.39(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，7.20-7.36(m，3H，2×Pyr-H+-N＝CH-N-)，7.49-7.60(m，1H，Pyr-H)，7.72(d，1H，J＝7.82Hz，Pyr-H)，8.71(m，1H，HNCH2-Pyr)。FABMS m/z(相对强度)：384([M+H]+，100)，324(35)，297(15)。精确质量(M+H)：实际值：384.2512，测量值：384.2500。
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇
Figure A0381942500571
在氩气下于室温，向搅拌的(2-氟-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(30mg，1当量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(2.5mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.10mL，5.5当量，0.57mmol)和(3RS，4R)-4-氨基-2-甲基-己-3-醇(42mg，3.0当量，0.32mmol)。将反应混合物置于140℃的预热油浴中，并在此温度下搅拌72小时。反应混合物冷却至室温，并真空蒸发除去溶剂。将残余物在EtOAc(50mL)和盐水/水(1∶1，100mL)之间分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脱，得到白色固体的标题化合物。产率：6.3mg(15％)。50％de 4R，3S：50％de 4R，3R)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)：δ0.93-1.04(m，9H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，1.57(d，6H，J＝6.95Hz，-CH(CH3)2)，1.65-1.89(m，4H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.22-3.32(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.82-3.97(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH，4.54-4.70(m，1H，-CH(CH3)2)，4.78-4.88(m，2H，-HNCH2-Pyr)，5.03-5.14&6.08-6.20(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，7.22-7.36(m，3H，2×Pyr-H &-N＝CH-N-)，7.49-7.58(m，1H，Pyr-H)，7.71(d，1H，J＝7.90Hz，Pyr-H)，8.47-8.73(m，1H，HNCH2-Pyr)。FABMS m/z(相对强度)：398([M+H]+，100)，324(50)。精确质量(M+H)：实际值：398.2668，测量值：398.2654。
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇
Figure A0381942500581
在氩气下于室温，向搅拌的(2-氟-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(30mg，1当量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(2.5mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.20mL，11当量，1.14mmol)和(3RS，4S)-4-氨基-2-甲基-己-3-醇(28mg，2.0当量，0.21mmol)。将反应混合物置于160℃的预热油浴中，并在此温度下搅拌72小时。反应混合物冷却至室温，并真空蒸发除去溶剂。将残余物在EtOAc(50mL)和盐水/水(1∶1，100mL)之间分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脱，得到白色固体的标题化合物。产率：4.3mg(10％)。50％de 4S，3R：50％de 4S，3S)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)：δ0.91-1.05(m，9H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，1.57(d，6H，J＝6.95Hz，-CH(CH3)2)，1.60-1.95(m，4H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.23-3.33(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，3.84-4.04(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH)，4.56-4.70(m，1H，-CH(CH3)2)，4.77-4.95(m，2H，-HNCH2-Pyr)，5.26-5.43+6.27-6.50(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH)，7.23-7.37(m，3H，2×Pyr-H &-N＝CH-N-)，7.51-7.63(m，1H，Pyr-H)，7.73(d，1H，J＝7.74Hz，Pyr-H)，8.48-8.76(m，1H，HNCH2-Pyr)。FABMS m/z(相对强度)：398([M+H]+，100)，324(60)。精确质量(M+H)：实际值：398.2668，测量值：398.2654。
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇
在氩气下于室温，向搅拌的(2-氟-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(30mg，1当量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(5mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.10mL，5.5当量，0.57mmol)和(3RS，4R)-4-氨基-2，2-二甲基-己-3-醇(52mg，3.41当量，0.36mmol)。将反应混合物置于140℃的预热油浴中，并在此温度下搅拌72小时。反应混合物冷却至室温，并真空蒸发除去溶剂。将残余物在EtOAc(50mL)和盐水/水(1∶1，100mL)之间分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脱，得到白色固体的标题化合物。产率：7.3mg(17％)。(55％de 4R，3S：45％de 4R，3R)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)：δ0.99-1.03(m，12H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.56&1.58(2×d，6H，J＝6.63&6.79Hz，-CH(CH3)2)，1.69-1.91(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.55(d，1H，J＝1.74Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.76-3.87(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，4.57-4.70(m，1H，-CH(CH3)2)，4.80-4.89(m，2H，-HNCH2-Pyr)，5.22-5.35&6.07-6.23(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，7.24-7.36(m，3H，2×Pyr-H &-N＝CH-N-)，7.55(s，1H，Pyr-H)，7.74(d，1H，J＝7.58Hz，Pyr-H)，8.50-8.74(m，1H，HNCH2-Pyr)。FABMS m/z(相对强度)：412([M+H]+，100)，324(80)。精确质量(M+H)：实际值：412.2825，测量值：412.2835。
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇
Figure A0381942500601
在氩气下于室温，向搅拌的(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇(30mg，1当量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(5mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.10mL，5.5当量，0.57mmol)和(3RS，4S)-4-氨基-2，2-二甲基-己-3-醇(43mg，2.81当量，0.29mmol)。将反应混合物置于140℃的预热油浴中，并在此温度下搅拌72小时。反应混合物冷却至室温，并真空蒸发除去溶剂。将残余物在EtOAc(50mL)和盐水/水(1∶1，100mL)之间分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脱，得到白色固体的标题化合物。产率：5.4mg(13％)。(53％de 4S，3R：47％de 4S，3S)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)：δ0.99-1.03(m，12H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，1.57&1.59(2×d，6H，J＝6.79&6.79Hz，-CH(CH3)2)，1.70-1.93(m，2H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.55(d，1H，J＝2.05Hz，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，3.77-3.90(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，4.58-4.70(m，1H，-CH(CH3)2)，4.82-4.94(m，2H，-HNCH2-Pyr)，5.31-5.45&6.12-6.34(m，1H，-NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH)，7.26-7.40(m，3H，2×Pyr-H &-N＝CH-N-)，7.55(s，1H，Pyr-H)，7.75(d，1H，J＝7.42Hz，Pyr-H)，8.46-8.81(m，1H，HNCH2-Pyr)。FABMS m/z(相对强度)：412([M+H]+，100)，324(70)。精确质量(M+H)：实际值：412.2825，测量值：412.2835。
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇
Figure A0381942500611
在氩气下于室温，向搅拌的(2-氟-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(20mg，1当量，0.07mmol)的正丁醇/DMSO(1.25mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.25mL，20.5当量，1.44mmol)和(3R)-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇(22mg，2.7当量，0.19mmol)。将反应混合物置于140℃的预热油浴中，并在此温度下搅拌72小时。反应混合物冷却至室温，并真空蒸发除去溶剂。将残余物在EtOAc(50mL)和盐水/水(1∶1，100mL)之间分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脱，得到白色固体的标题化合物。产率：3.7mg(14％)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)：δ1.00(t，3H，J＝7.27Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.21&1.31(2×s，6H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.57(d，6H，J＝6.63Hz，-CH(CH3)2)，1.69-1.89(m，2H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，3.66-3.83(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，4.59-4.73(m，1H，-CH(CH3)2)，4.77-5.00(m，2H，-HNCH2-Pyr)，7.26-7.46(m，3H，2×Pyr-H &-N＝CH-N-)，7.49-7.69(m，1H，Pyr-H)，7.78(d，1H，J＝7.10Hz，Pyr-H)。FABMS m/z(相对强度)：384([M+H]+，65)，366(23)，324(100)，217(35)，192(55)。精确质量(M+H)：实际值：384.2512，测量值：384.2494。
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-3-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇
Figure A0381942500621
在氩气下于室温，向搅拌的(2-氟-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(30mg，1当量，0.10mmol)的正丁醇/DMSO(1.25mL，4∶1)溶液中先后加入DIEA(0.25mL，14.4当量，1.44mmol)和(3S)-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇(40mg，3.2当量，34mmol)。将反应混合物置于140℃的预热油浴中，并在此温度下搅拌72小时。反应混合物冷却至室温，并真空蒸发除去溶剂。将残余物在EtOAc(50mL)和盐水/水(1∶1，100mL)之间分配，水相用更多的EtOAc(2×25mL)萃取，并将合并的有机相用盐水(50mL)洗，干燥(MgSO4)并真空蒸发。残余物经硅胶梯度柱色谱法纯化，用CHCl3∶MeOH(100∶0→98∶2)洗脱，得到白色固体的标题化合物。产率：6.5mg(16％)。1H-NMR(d-CDCl3，250MHz)：δ1.00(t，3H，J＝7.42Hz，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.22&1.31(2×s，6H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，1.57(d，6H，J＝6.79Hz，-CH(CH3)2)，1.70-1.90(m，2H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，3.66-3.81(m，1H，-NHCH(CH2CH3)C(CH3)2OH)，4.56-4.73(m，1H，-CH(CH3)2)，4.78-5.01(m，2H，-HNCH2-Pyr)，7.20-7.45(m，3H，2×Pyr-H &-N＝CH-N-)，7.48-7.69(m，1H，Pyr-H)，7.77(d，1H，J＝7.74Hz，Pyr-H)。FABMS m/z(相对强度)：384([M+H]+，100)，366(30)，324(85)，286(40)，242(65)，192(63)，176(70)。精确质量(M+H)：实际值：384.2512，测量值：384.2494。
为了大规模的制备3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇24的单个对映异构体(如下流程图3)，采用不同的过程。用吡啶基甲胺15将二氯嘌呤14的C-6位胺化，得到中间体16，然后用2-溴丙烷17将其的N-9位烷基化。用3-氨基-2-甲基-戊-2-醇23的适当的对映异构体将生成的氯代嘌呤18的C-2位胺化。
流程图3
先前已经证实了光学纯的R-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇23可以通过将R-2-氨基-丁酸19转化为甲酯20，随后通过双Grignard甲基化作用(Guenther，B.R.；Kirmse，W.Liebigs Ann.Chem.，1980，518)直接制备得到。考虑到产率和产物纯度，此方法并不适于大规模的生产。因此采用将氨基保护为二苄基衍生物(21，Bn＝苄基)。甲基化氨基酯21得到高产率和纯度的醇22。然后氢化(hydrogenolytically)除去苄基基团，得到纯的3-氨基-2-甲基-戊-2-醇23的对映异构体。
(2-氯-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺
Figure A0381942500641
将2，6-二氯-9H-嘌呤(157.2g，0.83mol)、丁-1-醇(1.2L)和Et3N(290mL，2.08mol)搅拌并加热至50℃。加入3-C-吡啶-3-基-甲胺(94mL，0.76mol)，并将反应于120℃加热1小时。停止加热并将烧瓶冷却至环境温度，然后使用冰-水浴冷却至0℃。过滤收集粉红色沉淀物，用H2O(1L)、己烷(2×0.5L)洗并干燥，得到粉红色固体。通过蒸发合并的滤液和洗涤液，制备得到第二批产物，用H2O(100mL)和CHCl3(100ml)研磨，过滤，用己烷洗并干燥。将两批产物合并得到标题化合物(196g，91％)。1H-NMR(DMSO-d6)：δ4.67-4.69(2H，d，-CH2-NH-)，5.20(1H，br.s，NH)，7.34-7.39(dd，ArH)，7.76-7.79(1H，d，ArH)，8.17(1H，s，ArH-N＝CH-N-)，8.46-8.48(1H，d，ArH)，8.61(1H，s，ArH)，8.80(1H，br.s，NH)。
(2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺
将(2-氯-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(110.3g，0.37mol)溶于干燥的DMF(1.5L)中，并在搅拌下将其温热至70℃。加入K2CO3(230g，1.67mol)和2-溴丙烷(300mL，3.20mol)，并将反应于70℃搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，并通过过滤除去K2CO3，并用EtOAc洗。将合并的滤液和洗涤液在旋转蒸发仪上浓缩，并然后在高真空下除去大部分的DMF。将生成的残余物在H2O(1L)和CH2Cl2(1L)中剧烈搅拌直到完全溶解。将水层用更多的CH2Cl2(2×200mL)萃取，合并有机萃取液，经MgSO4干燥并蒸发，得到浅褐色粉末状的标题化合物(87.2g，78％)。1H-NMR(DMSO-d6)：δ1.50-1.53(6H，d，-CH(CH3)2)，4.67-4.72(3H，m，-CH2-NH-&-CH(CH3)2)，5.20(1H，br.s，NH)，7.34-7.39(dd，ArH)，7.76-7.79(1H，d，ArH)，8.33(1H，s，ArH，-N＝CH-N-)，8.46-8.48(1H，d，ArH)，8.61(1H，s，ArH)，8.92(1H，br.s，NH)。
R-2-氨基-丁酸甲酯盐酸盐
在N2下，在搅拌下将(D)-(-)-2-氨基丁酸(50.0g，0.48mol)悬浮于MeOH(270mL)中，并冷却至-10℃(冰-盐浴)。用90分钟的时间滴加SOCl2(64mL，0.864mol)。烧瓶上装有回流冷凝器并于70℃加热1小时，然后冷却并蒸发(与MeOH共蒸发)。将残余物打碎并高真空干燥，得到白色粉末状的标题化合物(75g，100％)。1H-NMR(CDCl3)：δ0.88-0.95(3H，t，CH3CH2-)，1.48(2H，br.s，NH2)，1.50-1.80(2H，m，CH3CH2-)，3.35-3.40(1H，t，CHNH2)，3.69(3H，s，OCH3)。
R-2-二苄基氨基-丁酸甲酯
在N2下于室温，向R-2-氨基-丁酸甲酯盐酸盐(74.5g，0.485mol)的干燥的DMF(500mL)溶液中加入K2CO3(147g，1.065mol)，随后滴加苄基溴(127mL，1.065mol.)。在搅拌2小时后，过滤除去K2CO3并洗涤(EtOAc，200mL)。真空蒸发合并的滤液和洗涤液。将油状的残余物在EtOAc(1.5L)和H2O(1.5L)之间分配。分离有机层，并将水层用更多的EtOAc(1L)萃取。浓缩合并的有机部分。残余物经干燥硅胶快速色谱法(3∶7的CH2Cl2/己烷)纯化。合并纯的部分，真空浓缩并干燥，得到标题化合物(136.1g，94％)。1H-NMR(CDCl3)：δ0.90-0.96(3H，t，CH3CH2-)，1.75-1.81(2H，m，CH3-CH2-)，3.23-3.29(1H，t，-CH2-CH-)，3.50-3.57(2H，d，-NCH2Ph)，3.77(3H，s，-OCH3)，3.93-3.99(2H，d，-NCH2Ph)，7.22-7.41(10H，m，ArH)。
R-3-二苄基氨基-2-甲基-戊-2-醇
向干燥的装配有冷凝器和N2起泡器的5-L的3-颈烧瓶中装填Mg屑(53.7g，2.22mol)和干燥的Et2O(2L)。搅拌混合物并使用冰浴冷却至0℃。然后用1小时滴加MeI(138.2mL，2.22mol)。然后慢慢加入R-2-二苄基氨基-丁酸甲酯的干燥Et2O(1L)溶液(用10分钟)，并将反应温热至室温，变得非常浓稠。将反应在搅拌下放置72小时，冷却至0℃，并通过慢慢加入饱和的NH4Cl水溶液(350g的1L溶液)来终止反应。搅拌30分钟后，通过西莱特衬垫过滤反应混合物，并用Et2O(3×0.5L)洗。分离醚层并将水层用更多的Et2O(1L)萃取。合并有机部分，经MgSO4干燥并浓缩，残余物经硅胶快速色谱法(2％的EtOAc的己烷溶液)纯化，得到无色油状物的标题化合物(88.4g，82％)。1H-NMR(CDCl3)：δ1.06(3H，s，-CCH3)，1.15-1.26(6H，m(3Hs&3Hm，-CCH3 &-CH2CH3)，1.50-1.70(1H，m，-CHHCH3)，1.70-1.90(1H，m，-CHHCH3)，2.59-2.64(1H，dd，-CHN-)，3.61-3.67(2H，d，-NCH2Ph)，3.97-4.02(2H，d，-NCH2Ph)，4.25(1H，br.s，-OH)，7.24-7.37(10H，m，ArH)。
R-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇
Figure A0381942500662
将R-3-二苄基氨基-2-甲基-戊-2-醇(21.0g，70.9mmol)和Pd(C)(2.1g，20％Pd按干重计，50％H2O)的MeOH(100mL)溶液在Parr氢化器中于65psi振荡过夜。通过西莱特的衬垫过滤除去催化剂，浓缩滤液并在高真空下干燥，得到澄清的黄色油状物的标题化合物(7.585g，91％)。1H-NMR(CDCl3)：δ0.90-1.05(6H，m(3Hs&3Hm)，-CCH3 &-CH2CH3)，1.18(3H，s，-CCH3)，1.55-1.62(2H，m，-CH2CH3)，1.88-2.25(2H，br.s，-NH2)，2.35-2.40(1H，dd，-CHN-)。
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇
Figure A0381942500671
在N2下，将(2-氯-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)-吡啶-3-基甲基-胺(24.4g，82.4mmol)、R-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇(24.4g，209mmol)和K2CO3(24.4g，177mmol)于150℃加热72小时。冷却混合物，用CH2Cl2稀释，并通过过滤除去K2CO3。蒸发滤液，然后在高真空下蒸馏(Kugelrohr)以除去未反应的R-3-氨基-2-甲基-戊-2-醇。将残余物用两个圆形的硅胶快速色谱法(用5-10％线性梯度MeOH的CH2Cl2溶液洗脱的第一柱；用2.5％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱的第二柱)处理。将残余物溶于热的EtOAc(150mL)中，将溶液的体积浓缩至约100mL并使其冷却。加入Et2O(10mL)以产生结晶，并将溶液冷却至0℃。过滤收集结晶，用一点Et2O洗并干燥，得到纯的灰白色固体的标题化合物(5.70g，18％)。浓缩合并的滤液和洗涤液，将残余物再溶于最少体积的热的Me2CO中，并使其冷却。过滤该固体产物，并再溶于最少体积的热的EtOAc中，并使其冷却。将形成的固体过滤除去，并将滤液再次浓缩至干，再溶于热的Me2CO和EtOAc的混合物中，冷却，过滤并干燥，得到第二批纯的灰白色固体的标题化合物(2.15g，5.6mmol，7％)。M.p.138-145℃。[α]D 20+32.54(c0.48，MeOH)。LC-MS：97.86％纯的，m/z 384[M+H]+，406[M+Na]+，C20H29N7O＝383.49。微量分析(％实测值(found)(理论值))：C，62.41(62.64)；H，7.56(7.62)；N，25.76(25.57)。1H-NMR(CDCl3)：δ0.93-0.99(3H，t，-CH2CH3)，1.17&1.27(6H，2s，-C(CH3)2OH)，1.51-1.54(6H，d，-NCH(CH3)2)，1.65-1.80(2H，m，-CH2CH3)，2.15(1H，br.s，NH或OH)，3.60-3.67(m，1H，-NHCH(CH2CH3)-)，4.57-4.62(1H，m，-NCH(CH3)2)，4.77-4.80(2H，m，-HNCH2-Pyr)，5.15(br.s，1H，NH或OH)，6.14(1H，br.s，NH或OH)，7.21-7.26(1H，m，Pry-H)，7.48(1H，s，-N＝CH-N-)，7.68-7.71(app.d，1H，Pyr-H)，8.51-8.52(app.d，1H，Pyr-H)，8.64(1H，app.s，Pyr-H)。13C-NMR(CDCl3)：与含有20个C原子的结构一致；10个脂肪族C在δ10.21，20.88，20.92，21.90，23.09，26.64，40.29(弱)，44.72，61.70&72.45ppm；和10个芳香族C在δ112.96，121.73，132.97，133.07，133.65，146.98，147.67，148.89(弱)，152.97&158.77ppm。
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇
Figure A0381942500681
此化合物是使用如上所述的(R)对映异构物的那些类似的过程但起始物为(L)-(+)-2-氨基丁酸制备得到的。M.p.140.5-146℃。[α]D 20-29.00(c 0.46，MeOH)。LC-MS：97.85％纯的，m/z 384[M+H]+，C20H29N7O＝383.49。微量分析(％实测值(理论值))：C，62.51(62.64)；H，7.61(7.62)；N，25.70(25.57)。1H-NMR：δ0.93-0.99(3H，t，-CH2CH3)，1.17&1.27(6H，2s，-C(CH3)2OH)，1.51-1.54(6H，d，-NCH(CH3)2)，1.65-1.80(2H，m，-CH2CH3)，2.15(1H，br.s，NH或OH)，3.60-3.67(m，1H，-NHCH(CH2CH3)-)，4.57-4.62(1H，m，-NCH(CH3)2)，4.77-4.80(2H，m，-HNCH2-Pyr)，5.15(br.s，1H，NH或OH)，6.14(1H，br.s，NH或OH)，7.21-7.26(1H，m，Pry-H)，7.48(1H，s，-N＝CH-N-)，7.68-7.71(app.d，1H，Pyr-H)，8.51-8.52(app.d，1H，Pyr-H)，8.64(1H，app.s，Pyr-H)。13C-NMR(CDCl3)：与含有20个C原子的结构一致；10个脂肪族C在δ10.21，20.88，20.92，21.90，23.09，26.64，40.27(弱)，44.71，61.70&72.45ppm；和10个芳香族C在δ112.95，121.72，132.96，133.07，133.65，146.85，146.98，148.86(弱)，152.97&158.77ppm。
对本发明进行各种修饰和变型对于本领域技术人员而言是显而易见的，只要其没有偏离本发明范围和主旨。尽管结合具体优选的实施方案对本发明进行了描述，但是应该理解的是，本发明并不仅仅限于这些具体的实施方案。实际上，为了完成本发明而对所述方案进行了对于相关领域技术人员而言显而易见的各种变型也是被包括在本发明范围之内的。
                                                                           表1
名称                                                 激酶抑制作用(μM)
       CDK2/细胞周期蛋白E       CDK1/细胞周期蛋白B       CDK4/细胞周期蛋白D1         CDK7/细胞周期蛋白H   PKA         ERK2
IC50  SD   IC50  SD   IC50   SD    IC50   SD   IC50     IC50    SD
Roscovitine 0.10  0.10   2.7  2.5   14   4    0.49   0.26   ＞50     1.2    1.3
(2S3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇 0.09  0.02   4.9  0.3   14   4    0.50   0.40   ＞200     23    12
(2R3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇 0.03  0.01   2.2  1.2   6.8   3.2    1.3   1.0   ＞200     20    6
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇 0.22  0.10   12  1   25   0    1.1   0.3   ＞200     37    6
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇 0.11  0.04   13  4   11   1    1.5   0.6   ＞200     17    8
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇 0.69  0.30   20  8   21   15    2.2   1.4   200     111    11
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇 1.1  0.6   22  12   31   9    3.5   0.4   ＞200     67    6
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇 1.0  0.0   23  8   24   3    1.6   0.1   ＞200     51    8
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇 0.39  0.27   21  2   13   0    3.5   0.6   ＞200     23    4
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇 0.20  0.08   6.2  1.1   7.5   5    3.1   0.4   ＞200     91    21
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇 0.07  0.01   4.4  1.9   12   1    2.5   1.5   ＞200     35    10
                                               表2
名称          体外抗增殖活性(72-h MTT IC50，μM)
   IC50 a  标准方差(Stand.Dev.)
Roscovitine     12           3
(2S3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇     1.5           0.4
(2R3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇     0.8           0.3
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇     10           1
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇     5.5           2.8
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇     28           10
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇     19           2
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇     19           2
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇     15           14
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇     5.6           2.1
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-3-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇     4.0           0.5
a人类肿瘤细胞系：A549，HT29，Saos-2
                                                     表3
                 细胞系                                  72-h MTT IC50(μM)
符号 类型 来源 Roscovitine (2S3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇 (2R3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇 (3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-3-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇
A549 贴壁(Adherent) 肺癌 9.7±1.1 2.1±0.4 0.9±0.1 3.6±0.2
HeLa 贴壁 宫颈腺癌 16.5±1.8 2.9±0.2 1.4±0.2 4.7±0.5
HT-29 贴壁 结肠直肠腺癌 10.2±2.7 2.3±0.6 1.1±0.2 2.3±0.9
MCF7 贴壁 乳腺癌 8.7±0.5 1.6±0.2 0.7±0.1 2.3±0.3
Saos-2 贴壁 骨肉瘤 15.3±4.2 2.8±0.1 1.2±0.2 3.9±0.8
CCRF-CEM 悬浮液(Suspension) 急性淋巴细胞性白血病 16.4±0.8 n.d. n.d. 3.7±0.3
HL-60 悬浮液 急性前髓细胞性白血病 13.3±1.1 n.d. n.d. 3.0±0.2
K-562 悬浮液 慢性髓细胞性白血病 40.4±4.4 n.d. n.d. 8.4±1.2
平均值(癌细胞系) 16.3±10.2 2.3±0.5 1.1±0.3 4.0±2.0
Hs27 正常 包皮成纤维细胞 ＞20 10.2±0.6 5.9±0.3 11.3±0.7
IMR90 正常 胚胎性肺成纤维细胞 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
WI38 正常 胚肺纤维母细胞(Foetal lungfibroblast) ＞20 11.2±1.2 6.1±0.3 ＞20
平均值(正常细胞系) ＞20 ＞10 ＞10 ＞10
                                                       表4
             名称    ClogP  微粒体培育30分钟之后的药物％  A：％残留化合物/％残留roscovitine   B：roscovitine的IC50CDK2/化合物的IC50CDK2   C：roscovitine的IC50细胞毒素/化合物的IC50细胞毒素    A×B    A×C
Roscovitine     3.7     33     1.0        1.0         1.0    1.0    1.0
(2S3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇     2.5     90     2.7        1.1         8.0    3.1    22
(2R3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇     2.5     67     2.0        3.7         14    7.5    29
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇     3.0     70     2.1        0.5         1.1    1.0    2.4
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇     3.0     73     2.2        1.0         2.1    2.1    4.7
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇     3.8     50     1.5        0.3         0.8    0.4    1.2
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇     2.9     84     2.6        0.5         2.1    1.3    5.3
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-3-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇     2.9    78    2.4    1.4     2.9    3.2    6.9

Claims (49)

1.式1的化合物或其可药用盐
其中
R1和R2中的一个是甲基、乙基或异丙基，并且另一个是H；
R3和R4各自独立地是H、支链或直链C1-C6烷基、或芳基，并且其中R3和R4中的至少一个不是H；
R5是支链或直链C1-C5烷基或C1-C6环烷基，其中的每个可以任选被一个或多个OH基团取代；
R6、R7、R8和R9各自独立地是H、卤素、NO2、OH、OMe、CN、NH2、COOH、CONH2或者SO2NH2。
2.根据权利要求1的化合物，其中R1和R2中的一个是乙基或异丙基，并且另一个是H。
3.根据权利要求1或2的化合物，其中R5是异丙基或环戊基。
4.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其中R6、R7、R8和R9都是H。
5.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其中R1和R2中的一个是乙基，另一个是H。
6.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其中R3和R4各自独立地是H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基或者苯基。
7.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其中R3和R4各自独立地是H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基或者叔丁基。
8.根据权利要求7的化合物，其中R3和R4各自独立地是H、甲基、乙基、异丙基或者叔丁基。
9.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其选自：
(2S3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；
(2R3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇；
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇；
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇；
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-己-3-醇；
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇；
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇；
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；和
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇。
10.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其选自：
(2S3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；
(2R3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；
(3RS，4R)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇；
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-己-3-醇；
(3RS，4S)-4-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2，2-二甲基-己-3-醇；
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；和
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-3-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇。
11.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其选自：
(3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；
(3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-2-甲基-戊-2-醇；
(2S3R)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；
(2R3S)-3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇；和
3-{9-异丙基-6-[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-9H-嘌呤-2-基氨基}-戊-2-醇的任何光学异构体。
12.一种药物组合物，它含有与可药用稀释剂、赋形剂或载体、或者它们的混合物相混合的根据权利要求1-11中任意一项的化合物。
13.根据权利要求1-11中任意一项的化合物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途。
14.根据权利要求13的用途，其中所述增殖性疾病是癌症或白血病。
15.根据权利要求13的用途，其中该增殖性疾病是肾小球肾炎、类风湿性关节炎、牛皮癣或者慢性梗阻性肺病。
16.根据权利要求1-11中任意一项的化合物在制备用于治疗病毒性疾病的药物中的用途。
17.根据权利要求16的用途，其中该病毒性疾病选自人类巨细胞病毒(HCMV)、1-型单纯疱疹病毒(HSV-1)、1-型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)、以及水痘带状疱疹病毒(VZV)。
18.根据权利要求1-11中任意一项的化合物在制备用于治疗CNS疾病的药物中的用途。
19.根据权利要求18的用途，其中该CNS疾病是阿耳茨海默氏病或双相性精神障碍。
20.根据权利要求1-11中任意一项的化合物在制备用于治疗脱发症的药物中的用途。
21.根据权利要求1-11中任意一项的化合物在制备用于治疗中风的药物中的用途。
22.根据权利要求13-21中任意一项的用途，其中该化合物按照足以抑制至少一种PLK酶的用量施用。
23.根据权利要求22的用途，其中该PLK酶是PLK1。
24.根据权利要求13-21中任意一项的用途，其中该化合物按照足以抑制至少一种CDK酶的用量施用。
25.根据权利要求24的用途，其中该CDK酶是CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8和/或CDK9。
26.根据权利要求13-21中任意一项的用途，其中该化合物按照足以抑制aurora激酶的用量施用。
27.根据权利要求1-11中任意一项的化合物在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。
28.根据权利要求27的用途，其中该糖尿病是II型糖尿病。
29.根据权利要求27或28中任意一项的用途，其中该化合物按照足以抑制GSK的用量施用。
30.根据权利要求29的用途，其中该化合物按照足以抑制GSK3β的用量施用。
31.根据权利要求1-11中任意一项的化合物作为抗有丝分裂剂的用途。
32.根据权利要求1-11中任意一项的化合物在治疗神经变性疾病中的用途。
33.根据权利要求32的用途，其是用于治疗神经元细胞凋亡。
34.根据权利要求1-11中任意一项的化合物在抑制蛋白激酶中的用途。
35.根据权利要求34的用途，其中所述蛋白激酶是依赖细胞周期蛋白的激酶。
36.根据权利要求35的用途，其中所述依赖细胞周期蛋白的激酶是CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8和/或CDK9。
37.一种治疗增殖性疾病的方法，所述方法包括向哺乳动物施用治疗有效量的权利要求1-11中任意一项的化合物。
38.根据权利要求37的方法，其中所述增殖性疾病是癌症或白血病。
39.根据权利要求37或权利要求38的方法，其中所述化合物按照足以抑制至少一种CDK酶的用量施用。
40.根据权利要求39的方法，其中该CDK酶是CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8和/或CDK9。
41.根据权利要求37-40中任意一项的方法，其中所述化合物是口服给药的。
42.根据权利要求1-11中任意一项的化合物在用于识别可以抑制一种或多种依赖细胞周期蛋白的激酶、GSK和PLK酶的其它候选化合物的测定方法中的用途。
43.根据权利要求42的用途，其中所述测定方法是竞争性结合测定方法。
44.制备权利要求1所定义的式I化合物的方法，所述方法包括将式V化合物与式VI化合物反应
Figure A038194250006C1
其中R1-9如权利要求1的定义，X是Cl或F。
45.根据权利要求44的方法，其中所述式V化合物按照下述步骤制备：
Figure A038194250007C1
(i)将式II化合物与式III化合物反应，形成式IV化合物；
(ii)将所述式IV化合物用烷基卤化物R5-X’烷基化，形成式V化合物。
46.根据权利要求44的方法，其中所述式VI化合物按照下述步骤制备：
Figure A038194250007C2
(i)将式VIII化合物氧化形成式IX化合物，其中PG是保护基团；
(ii)烷基化所述式IX化合物，形成式X化合物；
(iii)除去所述式X化合物上的保护基团PG；
或者
(i)将式VIII化合物氧化形成式IX化合物，其中PG是保护基团；
(ii)烷基化所述式IX化合物，形成式X化合物；
(iii)氧化所述式X化合物，形成式XII化合物；
(iv)烷基化所述式XII化合物，形成式XIII化合物；
(v)除去所述式XIII化合物上的保护基团PG。
47.根据权利要求44的方法，其中R3＝R4，并且所述的式VI化合物是由下面的方法制备得到的，其包括下面的步骤：
Figure A038194250008C1
(i)将式XVI化合物转化为式XVII化合物，其中PG’为保护基并且R为烷基基团；
(ii)除去所述式XVII化合物上的保护基PG’，形成式VI化合物。
48.根据权利要求47的方法，其中将所述式XVI化合物通过双Grignard反应转化为式XVII化合物。
49.根据权利要求47或48的方法，其中所述式VI化合物是由下面的步骤制备得到的：
(i)使式XIV化合物与SOCl2和MeOH反应，形成式XV化合物；
(ii)保护所述式XV化合物的氨基以形成式XVIa化合物；
(iii)使所述式XVIa化合物与格氏试剂R3X”反应，形成式XVII化合物，其中R3如权利要求1所定义，并且X”为卤素；
(iv)除去所述式XVII化合物上的保护基PG’，形成所述式VI化合物。
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