CN115003676A - 制备具有cdk抑制活性的嘌呤衍生物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及制备式[I]化合物或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括以下步骤：(i)形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物；(ii)加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；(iii)从所述混合物分离所述式[I]化合物且任选回收未反应的式[III]化合物；和(iv)任选将所述式[I]化合物转化为盐形式；其中：R¹和R²各自独立地为H、烷基或卤代烷基；R³和R⁴各自独立地为H、烷基、卤代烷基或芳基；R⁵为烷基、烯基、环烷基或环烷基‑烷基，其各自可任选取代有一个或多个OH基团；R⁶选自环丙基氨基、环丙基甲基氨基、环丁基氨基、环丁基甲基氨基和

其中X、Y和Z之一为N，其余为CR⁹；R⁷、R⁸和每个R⁹独立地为H、烷基或卤代烷基，其中R⁷、R⁸和R⁹至少之一不为H。本发明其它方面涉及制备式[II]的中间体和其它可用于合成式[I]化合物的中间体的方法。

Description

制备具有CDK抑制活性的嘌呤衍生物的方法

本发明涉及制备嘌呤衍生物的方法。

背景技术

在WO 2008/122767(Cyclacel Limited；Cancer Research Technology Limited)中披露了具有CDK抑制活性的嘌呤衍生物。举例来说，研究证明化学名为(2R,3S)-3-(6-((4,6-二甲基吡啶-3-基甲基氨基)-9-异丙基-9H-嘌呤-2-基氨基)戊-2-醇的化合物[1]显示强CDK抑制活性，因此在增殖性疾病、免疫介导疾病和炎性疾病、自体免疫疾病和自体免疫介导的疾病、肾病、心血管疾病、眼科疾病、神经变性疾病、精神病、病毒性疾病、代谢病和呼吸道疾病的治疗中具有潜在的治疗用途。

有利地，化合物[1]在多种不同细胞系的细胞毒性研究中显示了出人意料的高效力。

在WO 2008/122767中首次描述了化合物[1]的合成制备。反应流程如图1所示。制备涉及合成氟-取代的嘌呤衍生物[2]以及与(2R,3S)-3-氨基戊-2-醇[3]偶联。偶联反应在ⁿBuOH中在DMSO和DIEA存在下进行。该反应需要在140℃的温度下加热72小时，并且仅获得12％的所需产物。中间体化合物[3]经由(S)-2-(三苯甲基-氨基)-丁-1-醇的Swern氧化和随后用MeLi和CuBr.SMe₂还原来制成。随后将所得的中间体用三氟乙酸(TFA)处理，得到化合物[3]。然而，MeLi/CuBr.SMe₂还原步骤导致立体选择性差，得到仅具有75％非对映体过量(d.e.)的产品。

在WO 2011/089401(Cyclacel Limited)中公开了偶联步骤的替代性条件，如图2中所示。这些替代性条件涉及将化合物[2]与化合物[3]在DIEA和乙二醇中在125℃的温度反应48小时。这引起了粗化合物产率的显著提高(59％，相比于WO 2008/122767中的12％)，随后将其从MTBE结晶，得到49.4％的总产率。随后通过从乙醇/水混合物中重结晶将结晶的游离碱物质转化为L-酒石酸盐晶体(II型；也称为E型)，产率72％。

WO 2018/138500(Cyclacel Limited)中公开了制备化合物[1]的进一步改进条件，如图3所示。这些条件包括使化合物[2]与化合物[3]在1,2-丙二醇或聚乙二醇中反应，并将反应混合物加热至至少约150℃的温度。有利的是，这些替代的偶联条件导致产率显著提高。例如，使用1,2-丙二醇作为溶剂，化合物[1]的结晶游离碱的总收率显示为约79％(相比于使用WO 2011/089401中所述条件时的59％)。WO 2018/138500还描述了化合物[2]的氨基前体。

WO 2018/138500进一步描述了制备化合物[1]的结晶L-酒石酸盐的优化条件，包括使化合物[1]在乙醇中的溶液回流并向其中滴加L-酒石酸在水和乙醇的混合物中的溶液，其中在加入L-酒石酸溶液后最终混合物中乙醇:水的比例为至少约15:1。有利地，在结晶步骤中增加乙醇相对于水的比例导致化合物[1]的结晶酒石酸盐的收率相对于本领域公开的收率有显著提高(约87％，而WO 2011/089401的实施例5.5中为72％)。

最后，WO 2018/138500描述了用于制备氨基醇[3]的高度非对映选择性还原条件，其导致在所得中间体中非常高的非对映异构体过量(约99％)。这种非对映异构体过量远远超过根据现有技术方法制备这类中间体所观察到的水平；参见例如WO 2003/002565(Cyclacel Limited)或WO 2008/122767(Cyclacel Limited；Cancer ResearchTechnology Limited)。

本发明旨在提供诸如化合物[1]的CDK抑制剂的替代性合成制备。更具体地，但非排他地，本发明旨在提供一种适合放大和/或引起以下效果中的一项或多项的合成路径：改进的易制备性，更少的合成步骤，更少量/较少的副产品，和/或减少的试剂量(特别是有害的和高腐蚀性的试剂)，同时保持可接受的产率、纯度和立体选择性。

发明内容

本发明第一方面涉及制备式[I]化合物或其药学上可接受的盐的方法,

其中：

R¹和R²各自独立地为H、烷基或卤代烷基；

R³和R⁴各自独立地为H、烷基、卤代烷基或芳基；

R⁵为烷基、烯基、环烷基或环烷基-烷基，其各自可任选取代有一个或多个OH基团；

R⁶选自环丙基氨基、环丙基甲基氨基、环丁基氨基、环丁基甲基氨基和

其中X、Y和Z之一为N，其余为CR⁹；

R⁷、R⁸和每个R⁹独立地为H、烷基或卤代烷基，其中R⁷、R⁸和R⁹至少之一不为H；

所述方法包括以下步骤：

(i)形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物；

(ii)加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；

(iii)任选地从所述混合物分离所述式[I]化合物且任选回收未反应的式[III]化合物；和

(iv)任选将所述式[I]化合物转化为盐形式。

有利地，上述方法包括将2-氯嘌呤中间体[II]与氨基醇[III]偶联。这与通过相应的2-氟嘌呤中间体进行的现有技术方法形成对比，在现有技术方法中，2-氟嘌呤中间体本身是通过使用极其危险的试剂氟化氢的氟化步骤制备的。因此，在开发适用于放大的合成工艺的背景下，使用2-氯嘌呤中间体特别有益；首先，它不需要额外的合成步骤，其次，它完全避免使用氟化氢。

本发明第二方面涉及制备式[I]化合物或其药学上可接受的盐的方法,

其中R¹和R²各自独立地为H、烷基或卤代烷基；

R³和R⁴各自独立地为H、烷基、卤代烷基或芳基；

R⁵为烷基、烯基、环烷基或环烷基-烷基，其各自可任选取代有一个或多个OH基团；

R⁶选自环丙基氨基、环丙基甲基氨基、环丁基氨基、环丁基甲基氨基和

其中X、Y和Z之一为N，其余为CR⁹；

R⁷、R⁸和每个R⁹独立地为H、烷基或卤代烷基，其中R⁷、R⁸和R⁹至少之一不为H；

所述方法包括以下步骤：

(a)用R⁶-NH₂或其盐处理式[VI]化合物以形成式[VII]化合物；

(b)用R⁵Br处理所述式[VII]化合物以形成式[II]化合物；

(c)形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物和加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；

(d)任选地从所述混合物分离所述式[I]化合物且任选回收未反应的式[III]化合物；和

(e)任选将所述式[I]化合物转化为盐形式。

本发明第三方面涉及制备式[1]化合物或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)用式[9]化合物或其盐处理式[6]化合物，以形成式[7]化合物；

(b)用异丙基溴处理所述式[7]化合物以形成式[2]化合物；

(c)形成包含式[2]化合物和式[3]化合物的反应混合物和加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[1]化合物；

(d)任选地从所述混合物分离所述式[1]化合物且任选回收未反应的式[3]化合物；和

(e)任选地将所述式[1]化合物转化为盐形式。

本发明第四方面涉及式[2]化合物:

或其盐。化合物[2]是合成化合物[1]的有用中间体。

发明详述

制备式[I]化合物的方法

本发明提供了合成通式[I]化合物及其盐，特别是特定化合物[1]的新方法。有利的是，本申请要求保护的方法避免使用极其危险的试剂氟化氢，这在开发适于放大的合成方法的背景下是特别有利的。此外，本申请要求保护的方法比现有技术描述的现有技术方法涉及更少的合成步骤。

如上所述，本发明的第一方面涉及制备式[I]化合物或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物；

(ii)加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；

(iii)任选地从所述混合物分离所述式[I]化合物且任选回收未反应的式[III]化合物；和

(iv)任选将所述式[I]化合物转化为盐形式。

有利的是，化合物[II]和化合物[III]之间的反应不需要碱的存在。该反应也不需要单独溶剂的存在；相反，反应可以在纯氨基醇[III](形成浆料的[II]和[III]的混合物)中进行。这将所需额外试剂的量降至最低，这同样有利于放大目的。

因此，在一个优选实施方案中，化合物[II]和化合物[III]之间的反应在不存在溶剂的情况下进行，即化合物[III]与化合物[II]形成溶液且不需要额外溶剂。

如本文所用，术语“烷基”包括饱和直链和支链烷基。优选地，烷基是C_1-20烷基，更优选C_1-15烷基，更优选C_1-12烷基，更优选C_1-6烷基，更优选C_1-3烷基。特别优选的烷基包括例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基。

如本文所用，术语“环烷基”是指环状烷基。优选地，环烷基是C_3-12环烷基。

如本文所用，术语“环烷基-烷基”是指同时具有环烷基和烷基官能团的基团。

如本文所用，术语“烯基”包括直链和支链烯基。优选地，烯基是C_2-20烷基，更优选C_2-15烷基，更优选C_2-12烷基，更优选C_2-6烷基，更优选C_2-3烷基。

“卤素”在本文中定义为氯、氟、溴或碘。

如本文所用，术语“芳基”是指C_6-12芳族基团，其可以是苯并稠合的，例如苯基或萘基。优选地，芳基是苯基。

在一个优选的实施方案中，该方法包括回收未反应的式[III]化合物。优选地，未反应的式[III]化合物通过蒸馏回收，更优选通过粗反应混合物的分馏回收。优选地，在30至50毫巴和约80至约170℃的温度下真空分馏粗反应混合物。在一个高度优选的实施方案中，在后处理程序中回收未反应的氨基醇[III]，该程序包括向反应混合物中加入合适的溶剂(例如聚乙二醇，优选PEG300或PEG400，更优选PEG400)，然后加入碱(优选含水NaOH)。然后可以通过真空蒸馏回收未反应的氨基醇。

在另一个优选的实施方案中，该方法在没有回收未反应的式[III]化合物的步骤的情况下进行。

在本发明一个优选实施方案中，所述方法包括以下步骤:

(i)形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物；

(ii)加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；

(iii)从所述混合物分离所述式[I]化合物且任选回收未反应的式[III]化合物；和

(iv)任选将所述式[I]化合物转化为盐形式。

在本发明一个优选实施方案中，所述方法包括以下步骤:

(i)形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物；

(ii)加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；

(iii)从未反应的式[III]化合物分离所述式[I]化合物；和

(iv)任选将所述式[I]化合物转化为盐形式。

在一个优选的实施方案中，通过用含水酸酸化任何未反应的式[III]化合物并提取到合适的有机溶剂(优选乙酸乙酯或乙酸丁酯，更优选乙酸乙酯)中，从反应混合物中分离式[I]化合物。在更优选的实施方案中，步骤(iii)包括将来自步骤(ii)的反应混合物萃取到含水HCl和有机溶剂中，分离有机相并浓缩滤液。在一个优选的实施方案中，然后将式[I]化合物转化成盐形式，即不进一步纯化或结晶游离的碱物质。

在另一个优选的实施方案中，通过结晶进一步纯化式[I]化合物。在本发明的一个优选实施方案中，步骤(iii)还包括从合适的溶剂中结晶化合物[I]的步骤。然后可将结晶化合物[I]转化为如下所述的盐形式。在一个优选的实施方案中，化合物[I]从选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯、乙酸异丁酯和甲基异丁基酮(MIBK)或其两种或多种的混合物的溶剂中结晶。优选溶剂是无水的。优选地，将溶剂(或溶剂混合物)加热到至少50℃的温度。

在一个优选实施方案中，化合物[I]从乙酸正丁酯结晶。

在一个优选实施方案中，化合物[I]从乙酸乙酯结晶。

在一个优选实施方案中，化合物[I]从乙酸异丙酯结晶。

在一个优选的实施方案中，将一种或多种烷烃(例如己烷、庚烷等)作为反溶剂加入结晶溶剂中，以提高结晶化合物[I]的产率。在一个优选的实施方案中，溶剂是乙酸乙酯和庚烷的混合物。

在另一优选实施方案中，所述溶剂为乙酸异丙酯和庚烷的混合物。

在一个特别优选的实施方案中，所述溶剂为乙酸正丁酯和庚烷的混合物。

在另一优选实施方案中，所述方法包括以下步骤:

·形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物；

·加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；和

·任选将所述式[I]化合物转化为盐形式。

在另一优选实施方案中，所述方法包括以下步骤:

·形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物；

·加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；和

·将所述式[I]化合物转化为盐形式。

在一个优选的实施方案中，在将反应混合物加热至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物之后，将混合物冷却(优选至约60℃的温度)，并用合适的酸(例如1摩尔当量的HCl)酸化剩余的化合物[III]。然后将化合物[I]提取到合适的有机溶剂(优选乙酸乙酯)中，并用水洗涤。在一个优选的实施方案中，然后通过蒸馏浓缩有机相并加入乙醇。然后继续蒸馏，直至除去有机溶剂(如乙酸乙酯)，即“溶剂交换”为乙醇。然后，化合物[I]的乙醇溶液可如下所述转化为盐形式。

在本发明一个优选实施方案中，所述方法包括将所述式[I]化合物转化为相应的L-酒石酸盐。

在一个优选实施方案中，R¹和R²之一为H且另一个为烷基。

更优选地，R¹和R²之一为H且另一个为甲基、乙基或异丙基。

还更优选地，R¹为烷基，更优选乙基，且R²为H。

在一个优选实施方案中，R³和R⁴各自独立地为H、烷基、卤代烷基或芳基，且其中R³和R⁴至少之一不为H。

在一个优选实施方案中，R³和R⁴之一为H且另一个为烷基或卤代烷基。

在一个优选实施方案中，R³为H且R⁴为烷基或卤代烷基。

在一个优选实施方案中，R³为H且R⁴为甲基。

在一个优选实施方案中，R¹和R⁴各自独立地为烷基，且R²和R³都为H。优选地，R²和R³都为H，R¹为乙基且R⁴为Me。

在一个优选实施方案中，R⁶为：

在一个优选实施方案中，Y为N且X和Z都为CR⁹。

在一个优选实施方案中，Y为N；优选对于该实施方案:

X为CH，Z为C-Me且R⁷为H且R⁸为Me；或

X为CH，Z为C-Me且R⁷和R⁸都为H；或

X为CH，Z为C-CF₃且R⁷和R⁸都为H。

更优选地，Y为N，X为CH，Z为C-Me，R⁷为H且R⁸为Me。

在另一优选实施方案中，X为N。优选对于该实施方案:

Y为C-Me，Z为CH且R⁷和R⁸都为H；或

Y和Z为CH，R⁷为H且R⁸为Me。

在另一优选实施方案中，Z为N。优选地，对于该实施方案，X为CH，Y为C-Me，R⁷为Me且R⁸为H。

在另一优选实施方案中，R⁶为环丙基氨基、环丙基甲基氨基、环丁基氨基或环丁基甲基氨基。

在一个优选实施方案中，R⁵为异丙基或异丙烯基，更优选地，异丙基。

在一个高度优选实施方案中，式[I]化合物选自以下:

在一个优选实施方案中：

通式[I]的化合物为化合物[1]；

通式[II]的化合物为化合物[2]；且

通式[III]的化合物为化合物[3]；

即本发明涉及方法，其包括以下步骤：

(i)形成包含式[2]化合物和式[3]化合物的反应混合物；

(ii)加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[1]化合物；

(iii)任选地从所述混合物分离所述式[1]化合物且任选回收未反应的式[3]化合物；和

(iv)任选地将所述式[1]化合物转化为盐形式。

在一个优选实施方案中，步骤(ii)中的反应混合物加热至温度约135℃至约220℃，更优选约135℃至约200℃。当反应混合物加热至更高温度，例如，超过180℃时，反应优选在密封系统，例如，高压灭菌器中进行。在一个优选实施方案中，步骤(ii)中的反应混合物加热至约135℃至约175℃的温度。在一个优选实施方案中，反应混合物加热至温度约135℃至约160℃，更优选约135℃至约155℃，更优选约135℃至约150℃，还更优选约135℃至约140℃。在另一优选实施方案中，反应混合物加热至温度约150℃至约175℃，更优选地，约150℃至约170℃，或约150℃至约160℃或约155℃至约160℃。在一个优选实施方案中，步骤(ii)中的反应混合物加热至温度为至少140℃。在另一优选实施方案中，步骤(ii)中的反应混合物加热至温度约140℃至约160℃，更优选地，约140℃至约155℃或约140℃至约150℃。

在另一优选实施方案中，步骤(ii)中的反应混合物加热至温度约140℃至约220℃，更优选约140℃至约200℃，更优选约160℃至约200℃或还更优选约180℃至约200℃。

在一个特别优选的实施方案中，反应混合物加热至温度约150℃。

在一个优选实施方案中，步骤(ii)中的反应混合物加热至少12小时的时间段。在更优选实施方案中，步骤(ii)中的反应混合物加热至少24小时的时间段。在另一优选实施方案中，反应混合物加热至少48小时的时间段。在另一优选实施方案中，反应混合物加热至少72小时的时间段。在一个高度优选实施方案中，反应混合物加热约24小时的时间段。在另一高度优选实施方案中，反应混合物加热约48小时的时间段。在另一高度优选实施方案中，反应混合物加热约72小时的时间段。

在另一优选实施方案中，步骤(ii)中的反应混合物加热约24至约96小时，更优选地，约24至约72小时，或约24至约48小时的时间段。在另一优选实施方案中，反应混合物加热约48至约96小时，更优选地，约48至约72小时的时间段。

在一个优选的实施方案中，化合物[II]和化合物[III]之间的反应在没有溶剂的情况下进行，即化合物[III]与化合物[II]形成溶液，并且不需要额外的溶剂。

在一个优选实施方案中，步骤(ii)中的反应混合物包含相对于化合物[II]约4至约7摩尔当量的化合物[III]。在更优选实施方案中，反应混合物包含相对于化合物[II]约5至约7摩尔当量的化合物[III]。更优选地，反应混合物包含相对于化合物[II]约5至约6或约5至约5.5摩尔当量的化合物[III]。还更优选地，反应混合物包含相对于化合物[II]约5摩尔当量的化合物[III]。

在一个优选的实施方案中，化合物[1]和化合物[3]之间的反应在没有溶剂的情况下进行，即化合物[3]与化合物[2]形成溶液，并且不需要额外的溶剂。

在一个特别优选的实施方案中，在制备式[1]化合物的情况下，相对于化合物[2]，反应混合物包含约4至约7摩尔当量的化合物[3]。在更优选的实施方案中，相对于化合物[2]，反应混合物包含约5至约7摩尔当量的化合物[3]。更优选地，相对于化合物[2]，反应混合物包含约5至约6或约5至约5.5摩尔当量的化合物[3]。甚至更优选地，相对于化合物[2]，反应混合物包含约5摩尔当量的化合物[3]。

在一个优选实施方案中，所述方法包括以下步骤:

(i)形成包含式[2]化合物和式[3]化合物的反应混合物；

(ii)加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[1]化合物；

(iii)从所述混合物分离所述式[1]化合物且任选回收未反应的式[3]化合物；和

(iv)任选地将所述式[1]化合物转化为盐形式。

在本发明一个优选实施方案中，所述方法包括以下步骤:

(i)形成包含式[2]化合物和式[3]化合物的反应混合物；

(ii)加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[1]化合物；

(iii)将所述式[1]化合物与未反应的式[3]化合物分离；和

(iv)任选地将所述式[1]化合物转化为盐形式。

在一个优选的实施方案中，步骤(iii)包括将来自步骤(ii)的反应混合物萃取到含水HCl(以中和任何剩余的未反应氨基醇并允许将HCl盐萃取到水相)和乙酸正丁酯中，分离乙酸正丁酯相并用干燥剂干燥，过滤并浓缩滤液以减小其体积。合适的干燥剂(例如硫酸镁)是本领域技术人员熟悉的。然后将体积减少的有机相在氮气下加热，用产物(例如化合物[1])种晶，并在加入庚烷之前逐渐冷却。然后过滤产物，洗涤(例如用2:1乙酸正丁酯/庚烷的混合物)并真空干燥。优选地，使用结晶游离碱形式的化合物[1]进行种晶，该结晶游离碱形式的化合物[1]指定为形式A，并描述于WO 2011/089401(Cyclacel Limited；特别参见实施例1)，其内容通过引用结合于此。

在一个高度优选的实施方案中，未反应的氨基醇[III]或[3]通过后处理程序回收，该程序包括向反应混合物中加入合适的溶剂(例如聚乙二醇，优选PEG300或PEG400，更优选PEG400)，然后加入碱(优选含水NaOH)。然后通过真空蒸馏回收任何未反应的氨基醇。然后向剩余的反应混合物中加入乙酸正丁酯和盐水，并用干燥剂(如硫酸镁)干燥有机相。然后在氮气下加热体积减少的有机相，用产物(如化合物[1])种晶并逐渐冷却，然后加入庚烷。然后过滤产物，洗涤(例如用2:1乙酸正丁酯/庚烷的混合物)并真空干燥。有利的是，该方法允许回收最多4当量的氨基醇。

在另一个优选的实施方案中，该方法不包括回收未反应的式[III]或[3]化合物的步骤。

在一个优选的实施方案中，本发明的方法包括通过以下步骤制备式[II]化合物的进一步步骤:

(i)用R⁶-NH₂，或其盐处理式[VI]化合物，以形成式[VII]化合物；和

(ii)用R⁵Br处理所述式[VII]化合物以形成式[II]化合物；

其中R⁵和R⁶如上定义。

如本文所用，术语“处理”是指使两种或多种组分在适当的环境(例如反应容器)和适当的条件(例如温度、浓度、压力)下接触，以允许组分之间发生反应。

在一个优选的实施方案中，在步骤(ii)之前分离在步骤(i)中形成的式[VII]化合物。在进一步优选的实施方案中，在步骤(ii)之前分离和纯化在步骤(i)中形成的式[VII]化合物。

在一个优选的实施方案中，在步骤(ii)中形成的式[II]化合物在与氨基醇[III]反应之前被分离。在进一步优选的实施方案中，在步骤(i)中形成的式[II]化合物在与氨基醇[III]反应之前被分离和纯化。

在另一个优选的实施方案中，本发明的方法包括通过以下制备式[II]化合物的进一步步骤:

(i)用R⁵Br处理式[VI]化合物以形成式[VIII]化合物；和

(ii)用R⁶-NH₂或其盐处理所述式[VIII]化合物，以形成式[II]化合物；

其中R⁵和R⁶如上定义。

在一个优选的实施方案中，在步骤(ii)之前分离在步骤(i)中形成的式[VIII]化合物。在进一步优选的实施方案中，在步骤(ii)之前分离和纯化在步骤(i)中形成的式[VIII]化合物。

在一个优选的实施方案中，在步骤(ii)中形成的式[II]化合物在与氨基醇[III]反应之前被分离。在进一步优选的实施方案中，在步骤(i)中形成的式[II]化合物在与氨基醇[III]反应之前被分离和纯化。

在一个优选的实施方案中，胺R⁶-NH₂是盐的形式，优选盐酸盐，甚至更优选二盐酸盐，R⁶-NH₂.2HCl。

在一个优选的实施方案中，与R6-NH₂或其盐的反应在至少100℃，更优选至少110℃，甚至更优选至少115℃的温度下进行。优选反应混合物在该温度下保持至少12小时，更优选至少18小时，甚至更优选至少24小时。优选地，反应在氮气或其它惰性气体下进行。优选地，反应在溶剂中进行，更优选nBuOH中进行。优选地，反应在碱的存在下进行。优选地，碱是脂族叔胺碱。更优选地，碱选自N,N-二异丙基乙胺(DIEA)、三正丙胺和三正丁胺。更优选地，碱是N,N-二异丙基乙胺(DIEA)。优选地，相对于式[VI](或式[VIII])化合物，碱的存在量为3-5摩尔当量，更优选为3-4摩尔当量，甚至更优选为约3.5摩尔当量。优选地，化合物R⁶-NH₂或其盐以相对于式[VI](或式[VIII])化合物约1摩尔当量的量存在。将反应温度保持上述时间后，然后使反应混合物冷却至室温，过滤，所得固体用例如叔丁基甲基醚(TBME)洗涤，并真空干燥。

在一个优选的实施方案中，与R⁵-Br的反应在至少55℃，更优选至少60℃，甚至更优选至少65℃的温度下进行。优选反应混合物在该温度下保持至少30分钟，更优选至少45分钟，甚至更优选至少60分钟。优选地，反应在氮气或其它惰性气体下进行。优选地，反应在溶剂中进行，更优选在DMSO中进行。优选地，反应在碱，更优选K₂CO₃存在下进行。优选地，化合物R⁵-Br的存在量相对于式[VI](或式[VII])化合物为至少3摩尔当量。优选地，相对于式[VI](或式[VII])化合物，化合物R⁵-Br的存在量为3至5摩尔当量，更优选3至4摩尔当量，甚至更优选约3摩尔当量。在将反应温度保持上述时间后，然后使反应混合物冷却至室温，并用例如水/乙酸乙酯萃取。然后浓缩并纯化有机相，例如使用SiO₂填料或硅胶色谱法。

在本发明的一个优选实施方案中，该方法包括通过以下步骤制备式[2]化合物的进一步步骤:

(i)用式[9]化合物或其盐处理式[6]化合物，以形成式[7]化合物；和

(ii)用异丙基溴处理所述式[7]化合物以形成式化合物[2]化合物。

在一个优选的实施方案中，在步骤(ii)之前分离在步骤(i)中形成的式[7]化合物。在进一步优选的实施方案中，在步骤(ii)之前分离和纯化在步骤(i)中形成的式[7]化合物。

在一个优选的实施方案中，在步骤(ii)中形成的式[2]化合物在与氨基醇[3]反应之前被分离。在进一步优选的实施方案中，在步骤(i)中形成的式[2]化合物在与氨基醇[3]反应之前被分离和纯化。

在本发明的另一个优选实施方案中，该方法包括通过以下步骤制备式[2]化合物的进一步步骤:

(i)用异丙基溴处理式[6]化合物以形成式[8]化合物；和

(ii)用式[9]化合物或其盐处理所述式[8]化合物，以形成式[2]化合物。

在一个优选的实施方案中，在步骤(ii)之前分离在步骤(i)中形成的式[8]化合物。在一个更优选的实施方案中，在步骤(ii)之前分离和纯化在步骤(i)中形成的式[8]化合物。

在一个优选的实施方案中，在步骤(ii)中形成的式[2]化合物在与氨基醇[3]反应之前被分离。在更优选的实施方案中，在步骤(ii)中形成的式[2]化合物在与氨基醇[3]反应之前被分离和纯化。

在一个优选的实施方案中，化合物[9]是盐的形式，更优选盐酸盐，甚至更优选二盐酸盐。

在一个优选的实施方案中，与化合物[9]或其盐的反应在至少100℃，更优选至少110℃，甚至更优选至少115℃的温度下进行。优选反应混合物在该温度下保持至少12小时，更优选至少18小时，甚至更优选至少24小时。优选地，反应在氮气或其它惰性气体下进行。优选地，反应在溶剂中进行，更优选nBuOH中进行。优选地，反应在碱的存在下进行。优选地，碱是脂族叔胺碱。更优选地，碱选自N,N-二异丙基乙胺(DIEA)、三正丙胺和三正丁胺。更优选地，碱是N,N-二异丙基乙胺(DIEA)。优选地，相对于式[6](或式[8])化合物，碱的存在量为3-5摩尔当量，更优选为3-4摩尔当量，甚至更优选为约3.5摩尔当量。优选地，化合物[9]或其盐以相对于式[6](或式[8])化合物约1摩尔当量的量存在。将反应温度保持上述时间后，然后使反应混合物冷却至室温，过滤，所得固体用例如叔丁基甲基醚(TBME)洗涤，并真空干燥。

在一个优选的实施方案中，与异丙基溴(2-溴丙烷)的反应在至少55℃，更优选至少60℃，甚至更优选至少65℃的温度下进行。优选反应混合物在该温度下保持至少30分钟，更优选至少45分钟，甚至更优选至少60分钟。优选地，反应在氮气或其它惰性气体下进行。优选地，反应在溶剂中进行，更优选在DMSO中进行。优选地，反应在碱，更优选K₂CO₃存在下进行。优选地，异丙基溴的存在量相对于式[6](或式[7])化合物为至少3摩尔当量。优选地，异丙基溴的存在量相对于式[6]化合物(或式[7])为3至5摩尔当量，更优选为3至4摩尔当量，甚至更优选为约3摩尔当量。将反应温度保持上述时间后，使反应混合物冷却至室温，并用水/乙酸乙酯萃取。然后浓缩并纯化有机相，例如使用SiO₂填料或硅胶色谱法。

在一个优选的实施方案中，通过用含水酸酸化任何未反应的式[3]化合物并提取到合适的有机溶剂(优选乙酸乙酯或乙酸丁酯，更优选乙酸乙酯)中，从反应混合物中分离式[1]化合物。在更优选的实施方案中，步骤(iii)包括将来自步骤(ii)的反应混合物萃取到含水HCl和有机溶剂中，分离有机相并浓缩滤液。在一个优选的实施方案中，式[1]的化合物然后转化成盐形式，即不进一步纯化或结晶游离的碱物质。

在另一个优选的实施方案中，通过结晶进一步纯化式[1]化合物。因此，在一个优选的实施方案中，在制备化合物[1]的情况下，步骤(iii)进一步包括从合适的溶剂中结晶化合物[1]的步骤。结晶化合物[1]可如下所述转化为盐形式。在一个优选的实施方案中，化合物[1]从选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯、乙酸异丁酯和甲基异丁基酮(MIBK)或其两种或多种的混合物的溶剂中结晶。优选溶剂是无水的。优选地，将溶剂(或溶剂混合物)加热至至少50℃的温度。在一个优选的实施方案中，将一种或多种烷烃(例如己烷、庚烷等)作为反溶剂加入结晶溶剂中以提高产率。

在一个优选实施方案中，化合物[1]从乙酸正丁酯结晶。

在一个特别优选的实施方案中，化合物[1]从乙酸正丁酯和庚烷的混合物结晶。

在一个非常优选的实施方案中，该步骤包括将化合物[1]在乙酸正丁酯中的浓溶液加热至约70℃的温度，用化合物[1]的晶体接种，将接种的混合物冷却至室温，向反应混合物中加入庚烷，然后将接种的混合物冷却至约0℃。

优选地，混合物在该温度下搅拌约30分钟，然后冷却至室温。化合物[1]的晶种可以根据WO 2011/089401(特别参见实施例1)或WO 2018/138500的方法制备，其内容通过引用结合于此。然后过滤所得产物，例如用2:1乙酸正丁酯/庚烷(优选冷)洗涤，并真空干燥。

在另一优选实施方案中，所述方法包括以下步骤:

·形成包含式[2]化合物和式[3]化合物的反应混合物；

·加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[1]化合物；和

·任选地将所述式[1]化合物转化为盐形式。

在一个优选的实施方案中，该方法包括将所述式[1]化合物转化成盐形式的步骤，即该方法包括以下步骤:

·形成包含式[2]化合物和式[3]化合物的反应混合物；

·加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[1]化合物；和

·将所述式[1]化合物转化成盐形式。

在一个优选的实施方案中，在将反应混合物加热至至少约130℃的温度以形成式[1]的化合物之后，将混合物冷却(优选至约60℃的温度)并用合适的酸(例如1摩尔当量的HCl)酸化剩余的化合物[3]。然后将化合物[1]提取到合适的有机溶剂(优选乙酸乙酯)中，并用水洗涤。在一个优选的实施方案中，然后通过蒸馏浓缩有机相并加入乙醇。然后继续蒸馏，直至除去有机溶剂(如乙酸乙酯)，即“溶剂交换”为乙醇。然后，化合物[1]的乙醇溶液可以如下所述转化为盐形式。

成盐

在一个实施方案中，该方法包括将式[I]或[1]化合物转化为药学上可接受的盐形式的步骤，即存在步骤(iv)。

药物可接受的盐包括其合适的酸加成盐或碱盐。在Berge等人，J Pharm Sci，66，119(1977)中对合适的药用盐进行了综述。盐用以下形成，例如强无机酸如矿物酸，如硫酸、磷酸或氢卤酸；用强有机羧酸，如未取代或取代(如被卤素取代)的1-4个碳原子的链烷羧酸，如乙酸；用饱和或不饱和二羧酸，例如草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸或对苯二甲酸；羟基羧酸，例如抗坏血酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸或柠檬酸；用氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；用苯甲酸；或者用有机磺酸，如(C₁-C₄)-烷基-或芳基-磺酸，它们是未取代的或被取代的(例如，被卤素)，如甲烷-或对甲苯磺酸。

在本发明的一个高度优选的实施方案中，该方法包括将式[I]或[1]化合物转化成相应的酒石酸盐。

在一个特别优选的实施方案中，所述方法包括将所述式[I]或[1]化合物转化为L-酒石酸盐，更优选结晶形式的L-酒石酸盐的步骤。甚至更优选地，L-酒石酸盐是晶型II(对应于WO 2011/089401中所述的形式E)，并且可以通过其中所述的方法制备(参见实施例5，特别是实施例5.5)。

因此，在一个优选的实施方案中，该方法包括将步骤(iii)中分离的产物(即式[I]或[1]的化合物)在乙醇中回流，并向其中滴加L-酒石酸在水和乙醇的混合物中的溶液。在一个优选的实施方案中，该步骤在粗化合物[I]或[1]上进行，而不用通过结晶进一步纯化游离的碱材料。

在一个特别优选的实施方式中，在添加L-酒石酸溶液之后的最终混合物中乙醇:水之比为至少15:1，更优选地，为至少20:1，更优选为至少25:1，甚至更优选为至少30:1。有利地，提高结晶步骤中乙醇相对于水的比率导致化合物[1]的结晶酒石酸盐的产率相对于现有技术中所公开的产率有显著提高(约87％，相比于WO 2011/089401的实施例5.5中的72％)。

在一个特别优选的实施方式中，在添加L-酒石酸溶液之后的最终混合物中乙醇:水之比为约37.5:1。

在一个优选实施方式中，所述方法包括在添加L-酒石酸溶液的过程中将温度保持在75-78℃。

在一个优选实施方式中，结晶步骤进一步包括精密过滤(polish filter)混合物，将滤液加热至约60至约65℃的温度，并用[1]-L-酒石酸盐II型晶体接种。[1]-L-酒石酸盐II型晶体(也称为E型)可根据WO 2011/089401的教导制备，该文献(Cyclacel Limited)的内容在此通过引用并入本申请；具体参见实施例5。

在一个优选实施方式中，将经接种晶体的滤液在约60至约65℃的温度搅拌至少1小时。

在一个优选实施方式中，所述方法进一步包括以下步骤：将混合物冷却至约15至约20℃的温度，并于该温度搅拌至少1小时以诱导化合物[1]-L-酒石酸盐的结晶。优选地，冷却速率为约5℃/小时至约10℃/小时，更优选为约10℃/小时。

在一个优选实施方式中，将化合物[1]-L-酒石酸盐过滤、用乙醇洗涤，并真空干燥。

有利地，在偶联反应的背景下，为获得足够纯度的游离碱形式的式[I]的化合物从而得到目标规格的化合物[I]-L-酒石酸盐，重要的是使用高纯度的式[II]的中间体。

在一个优选实施方式中，在步骤(i)之前，将式[II]的化合物(例如，化合物[2])通过硅胶垫，在二乙醚中浆化，过滤，并干燥。

在一个优选实施方式中，通过HPLC测量，式[II]的化合物(例如，化合物[2])具有至少97％的纯度，更优选地，具有至少97.5％的纯度，甚至更优选地，具有至少98％的纯度。

为在与式[II]的偶联反应中获得良好产率，使用具有高非对映体纯度(即，高d.e.)的式[III]的化合物也是重要的。特别是，在偶联步骤中使用具有高非对映体纯度的通式[III]的化合物能够以高产率制备式[I]的化合物而不需要从其立体异构体中通过色谱分离将其分离出来。相反，可通过如上所述结晶而简单地分离和纯化粗产品，这在放大规模的效率方面有显著优点。

在一个优选实施方式中，式[III]的化合物(例如，化合物[3])具有至少85％的非对映体过量，更优选地，具有至少90％的非对映体过量，甚至更优选地，具有至少95％的非对映体过量。

在一个非常优选的实施方式中，式[III]的化合物(例如，化合物[3])具有至少96％、97％、98％或99％的非对映体过量。

在一个优选实施方案中，如上定义的式[III]化合物，其中R₂为H，通过以下步骤制备:

其中：

R¹是烷基或卤代烷基；

R³是烷基、卤代烷基或芳基；和

PG是保护基团；

所述方法包括：

(a)将式[V]的化合物用(S)-2-Me-CBS-氧氮硼杂环戊烷和硼烷-N,N-二乙基苯胺复合物在包含THF的溶剂中处理以形成式[IV]的化合物；和

(b)从所述化合物[IV]去除保护基团PG，得到式[III]的化合物，

其中PG为保护基，优选Boc，R₁为烷基或卤代烷基，且R₃为H、烷基、卤代烷基或芳基。

在另一优选实施方案中，式[III]化合物为式[IIIa]化合物，且通过以下步骤制备:

其中:

R¹为烷基或卤代烷基，更优选烷基；

R⁴为烷基、卤代烷基或芳基，更优选烷基；且

PG为保护基，优选BOC；

所述方法包括:

(a)在包含THF的溶剂中用(S)-2-Me-CBS-氧氮硼杂环戊烷和硼烷-N,N-二乙基苯胺复合物处理式[Va]化合物以形成式[IVa]化合物；和

(b)从所述化合物[IVa]去除保护基PG以得到式[IIIa]化合物。

有利的是，这些条件导致高度非对映选择性还原，产生在所得中间体中非常高的非对映异构体过量(约99％)。

在一个优选实施方式中，步骤(b)包括将所述化合物[IV]在甲醇中用气态HCl处理，真空浓缩，溶解在乙酸乙酯中，随后用NH₃鼓泡。

在一个非常优选的实施方式中，式[III]的化合物是式[3]化合物，其通过以下步骤制备：

(a)将式[5]化合物用(S)-2-Me-CBS-氧氮硼杂环戊烷和硼烷-N,N-二乙基苯胺复合物在包含THF的溶剂中处理以形成式[4]化合物；和

(b)从所述式[4]化合物去除保护基团PG，得到式[3]化合物。

本领域技术人员将熟悉合适的胺保护基团；参见，例如，Protective Groups inOrganic Synthesis by Theodora W.Greene and Peter G.M.Wuts。优选地，保护基团PG是叔丁氧羰基(Boc)基团。

参考流程1中所阐述的反应流程，在下文中描述了本发明的合成方法的更多细节：

流程1：化合物[1]-L-酒石酸盐的制备

本发明第二方面涉及制备式[I]化合物或其药学上可接受的盐的方法,

其中R¹和R²各自独立地为H、烷基或卤代烷基；

R³和R⁴各自独立地为H、烷基、卤代烷基或芳基；

R⁵为烷基、烯基、环烷基或环烷基-烷基，其各自可任选取代有一个或多个OH基团；

R⁶选自环丙基氨基、环丙基甲基氨基、环丁基氨基、环丁基甲基氨基和

其中X、Y和Z之一为N，其余为CR⁹；

R⁷、R⁸和每个R⁹独立地为H、烷基或卤代烷基，其中R⁷、R⁸和R⁹至少之一不为H；

所述方法包括以下步骤：

(a)用R⁶-NH₂或其盐处理式[VI]化合物以形成式[VII]化合物；

(b)用R⁵Br处理所述式[VII]化合物以形成式[II]化合物；

(c)形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物和加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；

(d)从所述混合物分离所述式[I]化合物且任选回收未反应的式[III]化合物；和

(e)任选将所述式[I]化合物转化为盐形式。

在本发明一个优选实施方案中，所述方法包括以下步骤:

(a)用R⁶-NH₂或其盐处理式[VI]化合物以形成式[VII]化合物；

(b)用R⁵Br处理所述式[VII]化合物以形成式[II]化合物；

(c)形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物和加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；

(d)从未反应的式[III]化合物分离所述式[I]化合物；和

(e)任选将所述式[I]化合物转化为盐形式。

本发明第三方面涉及制备式[1]化合物或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)用式[9]化合物或其盐处理式[6]化合物，以形成式[7]化合物；

(b)用异丙基溴处理所述式[7]化合物以形成式[2]化合物；

(c)形成包含式[2]化合物和式[3]化合物的反应混合物和加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[1]化合物；

(d)从所述混合物分离所述式[1]化合物且任选回收未反应的式[3]化合物；和

(e)任选地将所述式[1]化合物转化为盐形式。

在本发明一个优选实施方案中，所述方法包括以下步骤:

(a)用式[9]化合物或其盐处理式[6]化合物，以形成式[7]化合物；

(b)用异丙基溴处理所述式[7]化合物以形成式[2]化合物；

(c)形成包含式[2]化合物和式[3]化合物的反应混合物和加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[1]化合物；

(d)从未反应的式[3]化合物分离所述式[1]化合物；和

(e)将所述式[1]化合物转化为盐形式。

本发明第四方面涉及式[2]化合物:

化合物[2]是合成化合物[1]的有用中间体。因此，本发明的其它方面涉及化合物[2]作为中间体在如本文所述的化合物[1]的合成中的用途。

如上针对第一方面所述的优选实施方案同样适用于第二、第三和第四方面。

参考以下附图进一步描述本发明，其中：

图1示出了如WO 2008/122767中所公开的制备化合物[1]的反应流程。

图2示出了如WO 2011/089401中所公开的制备化合物[1]-L-酒石酸盐的反应流程。

图3显示了在WO 2018/138500中公开的用于制备化合物[1]-L-酒石酸盐的反应流程。

参考以下非限制性实施例进一步描述本发明。

实施例

缩写

THF 四氢呋喃

EtOAc 乙酸乙酯

PMA 磷钼酸

MeOH 甲醇

DCM 二氯甲烷

TBME(MTBE) 叔丁基甲醚

DCM 二氯甲烷

DIEA N,N-二异丙基乙胺

DMSO 二甲基亚砜

¹H NMR：使用配有自动进样器的JEOL ECX 400MHz分光仪收集¹H NMR谱。将样品溶解在D₆-DMSO进行分析，使用标准质子试验于环境温度获得光谱，使用Delta NMRProcessing and Control Software 4.3版本获得16次扫描。随后使用ACD labs 1D NMRprocessor 12.0版本处理数据。

DSC：在配有45位样品架的PerkinElmer Pyris 6000DSC上收集DSC数据。使用经认证的铟对仪器进行能量和温度校正。将预定量的样品0.5-3.0mg置于带针孔的铝锅，并以20℃.min^-1从30℃加热到350℃，或随着试验不同而变化。在样品上方以20ml.min^-1进行干燥氮气的吹扫。用Pyris Software v11.1.1Revision H进行仪器控制、数据获取和分析。

XRPD：在PANalytical衍射仪上收集X-射线粉末衍射图谱，使用Cu Kα辐射(45kV,40mA)，θ-θ量角器，聚焦镜，发散狭缝(1/2”)，在入射和发散光束(4mm)处的索勒狭缝和PIXcel检测器。用于数据收集的软件是X’Pert Data Collector,2.2f版本，使用X’PertData Viewer,1.2d版本呈现数据。

XRPD图谱在环境条件下经由透射箔样品台(聚酰亚胺-Kapton,12.7μm厚度的膜)在环境条件下使用PANalytical X’Pert PRO获得。数据收集范围是2.994-35°2θ，连续扫描速度为0.202004°s^-1。

HPLC：方法A

样品溶液制备：

准确称量50mg样品并置于100ml容量烧瓶中。向烧瓶中添加50ml甲醇，如果必要经由超声处理溶解，用纯净水稀释定容，并彻底混合所得溶液。

HPLC：方法B

样品溶液制备：

准确称量50mg样品并置于100ml容量烧瓶中。向烧瓶中添加50ml乙腈，如果必要经由超声处理溶解，用纯净水稀释定容，并充分混合所得溶液。

手性HPLC

HRGC：

样品溶液制备

准确称量50mg样品并置于10ml容量烧瓶中。溶解在5ml二氯甲烷中，如需要使用超声处理，用二氯甲烷稀释定容，并充分混合所得溶液。

通过HRGC测量的对映体过量：

标准溶液制备

准确称量10mg每种对映异构体[(2R,3S)；(2S,3R)；(2R,3R)；(2S,3S)]并置于合适容器中。溶解在约1ml HPLC级二氯甲烷中，如需要进行超声处理。添加500μl三氟乙酸酐和500μl三氟乙酸，并于室温衍生化15-30分钟。进样该溶液。

样品溶液制备

一式两份准确称量10mg样品并置于合适容器中。溶解在约1mlHPLC级二氯甲烷中，如必要进行超声处理。添加500μl三氟乙酸酐和500μl三氟乙酸，并于室温衍生化15-30分钟。进样该溶液。

实施例A

(2R,3S)-3-氨基戊-2-醇的合成

化合物[4]的制备

在干燥的、氮气吹扫的容器中用THF(171mL)稀释(S)-2-甲基-CBS-氧氮硼杂环戊烷(在甲苯中的1M溶液，59.6mL，0.06mol)。于室温逐滴添加硼烷N,N-二乙基苯胺复合物(102mL,0.57mol)，并将溶液搅拌15分钟。将化合物[5](115.0g,0.57mol)溶解在THF(345mL)中，并经4.5小时逐滴添加。在添加完成后，将反应于室温在氮气氛下搅拌过夜。薄层色谱(20％EtOAc在庚烷中，通过PMA可视化)显示起始物料完全耗尽。通过经1小时逐滴添加甲醇(174mL)小心地淬灭反应。在整个淬灭过程中保持温度<20℃。溶液真空浓缩，随后添加额外的甲醇(174mL)。溶液减压浓缩，得到白色蜡状固体。粗产品从庚烷(202mL)中重结晶。将重结晶产品过滤并用庚烷漂洗(2x 156mL)，得到白色固体。将其在真空烘箱中于40℃干燥过夜，得到作为白色固体的化合物[4](99.2g,85％)。通过如上所述的HRGC和手性HRGC进行分析。

实施例B

化合物[4]的脱保护

于<20℃在20L烧瓶中在N₂下向MeOH(645mL)中通入1小时的HCl气。经滴定，溶液为3.85M。将烧瓶冷却至<15℃。于<15℃分批加入化合物[4](101.1g,0.50mol)。将溶液搅拌过夜。TLC确认反应完全(5％MeOH/DCM，用PMA可视化)。溶液于35-40℃真空浓缩。将油状物与EtOAc共沸(4x 75mL)并磨碎，得到白色固体。将固体溶于EtOAc(588mL)中。反应混合物冷却至0-5℃，并于0-5℃在N₂下用NH₃(气体)鼓泡1小时。在添加结束时，pH为8。将混合物过滤，滤饼用EtOAc(147mL)洗涤。将滤液于35-40℃真空浓缩，得到所需产物[3]，其是浅黄色油状物(50.7g)。¹H NMR证实得到了产品，显示存在～4％的残余EtOAc，得到活性物的产率为48.7g，95％。

实施例C

化合物[7]的合成

将化合物[6](90g，0.48mol)和化合物[9](100g，0.48mol)与正丁醇(1.98L)和DIEA(295mL，1.68mol)一起加入容器中。将反应混合物在N₂条件下加热至110℃，持续22小时。通过¹H核磁共振(NMR)对反应进行监测，以确认原料已被消耗。将反应冷却至室温，并在15-25℃下搅拌30分钟。过滤反应混合物，并用TBME(3x 125mL)洗涤3次。将该产物在40℃真空干燥68小时，得到化合物[7](124g，89％)。¹H核磁共振(NMR)证实了该产品的身份，HPLC(方法A)显示纯度为99.2％。

实施例D

化合物[2]的合成

将化合物[7](120g，0.416mol)、碳酸钾(115g，0.832mol)和DMSO(1.2L)装入容器中。在2分钟内分批加入2-溴丙烷(117ml，1.248mol)。将反应混合物加热至60℃，并搅拌50分钟。通过HPLC(方法A)监测反应，以确认原料已被消耗。冷却该反应，加入水(1.2L)，并将该混合物用乙酸乙酯(3x 0.9L)萃取3次。用水(6x 1.1L)洗涤合并的有机相6次，并用硫酸镁干燥。过滤掉硫酸镁，在旋转蒸发器上将有机相蒸发至干。使用乙酸乙酯中的15％甲醇作为洗脱剂，通过硅胶填料纯化该粗产物。将含有产物的级分在旋转蒸发器上蒸发至干，得到化合物[2](130g，93％)。¹H核磁共振(NMR)证实了该产品的身份，HPLC(方法A)显示纯度为99.2％。

在另一个实施方案中，化合物[2]是通过用2-溴丙烷处理化合物[6]以形成化合物[8]来制备的，所用条件和试剂与上述类似。然后在正丁醇和DIEA存在下，使用与上述类似的条件，使化合物[8]与化合物[9]反应，形成化合物[2]。

实施例E

化合物[1]的合成(粗品)

将化合物[2](25g，0.0768mol)和化合物[3](39.6g，0.384mol)装入容器中，并在氮气下加热至170℃(加热块温度)达48小时。通过HPLC(方法B)监测反应，观察化合物[2]的消失情况。

通过蒸馏回收化合物[3]

将反应冷却至60℃，并加入PEG400(80mL)和8M氢氧化钠溶液(9.4mL)。在30至50毫巴和80至170℃的温度下真空分馏该反应混合物。在88℃的塔顶温度下收集了一份含有化合物[3]的馏分(25g，71％回收率)。通过¹H NMR分析了该馏分，表明纯度>95％。还通过KarlFischer滴定法分析了馏分的含水量，该方法表明馏分中含有12％的水。

向蒸馏釜残留物中加入乙酸正丁酯(330mL)和盐水(650mL)，并搅拌。分离有机相，水相用乙酸正丁酯(170mL)重新萃取。合并的有机层用水(4×250ml)洗涤4次，用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂，得到粗化合物[1](29g，86％产率)。通过¹H NMR(表明其含有11％乙酸正丁酯)和HPLC(方法B)(表明纯度为95.5％)对产物进行了分析。

实施例F

粗化合物[1]的结晶

实施例F.1

将粗化合物[1](28g)溶于乙酸正丁酯(130ml)中，加热至70℃，然后冷却至66℃，加入化合物[1]的晶种并搅拌1h。化合物[1]的晶种命名为形式A，如WO 2011/089401中所述(Cyclacel Limited；特别参见实施例1-如下重述)，其内容通过引用结合于此。在14小时内将该混合物冷却至25℃，随后形成浆料。将浆料搅拌6小时，然后在1小时20分钟内加入庚烷(60ml)，然后搅拌1小时。庚烷起到反溶剂的作用，以提高产率。然后在1小时内将浆料冷却至0℃，并搅拌1小时。真空过滤产物，用2:1乙酸正丁酯:庚烷(2x 20ml)洗涤2次，然后在45℃真空干燥18小时，得到化合物[1](20.8g，总收率69％(结晶收率83％)。通过HPLC(方法B)分析产物，表明纯度为98.3％，还通过XRPD分析，表明产物为形式A的晶体(根据WO 2011/089401的实施例1)。化合物[1]的结晶游离碱(形式A)的XRPD峰见表1。

实施例F.2

如WO 2011/089401的实施例1所述的化合物[1](形式A)的晶种的制备

通过以下方法从MTBE中结晶出化合物[1]。向化合物[1]中加入MTBE(2体积)，并加热至回流。将混合物保持回流30-60分钟，然后将温度降至50℃(保持2小时)。将悬浮液缓慢冷却至室温，然后过滤并用MTBE(3x 1体积)冲洗。固体在40℃真空烘箱中干燥8小时，得到所需的结晶游离碱(质量回收率84.5％，LC纯度97.4％)。

实施例F.3

粗化合物[1]的替代结晶条件

乙酸异丙酯，5体积，85℃，6g规模

将粗化合物[1](6.09g)悬浮在N₂条件下的合适玻璃容器中的乙酸异丙酯(30ml，5体积)中，该玻璃容器配有回流冷凝器和搅拌珠，转速为420RPM。将该米色悬浮液加热至85℃(目标温度为80-85℃)，然后该温度下约15分钟后完全溶解为深棕色溶液。通过加热的大型尼龙注射器过滤器(0.44微米)将热混合物过滤到Mya4 100ml工艺容器中，其具有200RPM的塔顶U形搅拌，预热至95℃(目标内部温度＝80-85℃)。在15分钟内将深棕色溶液冷却至74.5℃，并用化合物[1]的晶体(形式A)(约6mg 0.1％重量)接种。继续冷却至70.1℃，并重复接种，观察到其在此温度下15分钟后仍保持在溶液中。测量T＝0的溶解度(189.83mg/ml)，然后将该混合物以5℃/小时的速度冷却至0℃(14小时，840分钟)。在约61-62℃观察到明显量的灰白色沉淀。冷却后，将该混合物在0℃保持约三小时。通过过滤分离该固体，没有容器或搅拌器结垢的迹象。用分离的滤液洗涤容器和滤饼，并在收集灰白色固体和深棕色液体之前风干15分钟。收集该固体并在45℃真空干燥约4小时得到标题化合物。将4.88g结晶化合物[1]以80.1％的产率成功分离。基于在0℃下测量的预分离溶解度(solubilitypre-isolation)的最大理论回收率为94.2％。

实施例F.4

乙酸乙酯，5体积，75℃，6g规模

将粗化合物[1](6.00g)悬浮在N₂条件下的合适玻璃容器中的乙酸乙酯(30ml，5体积)中，该玻璃容器配有回流冷凝器和搅拌珠，转速为420RPM。将该米色悬浮液加热至75℃(目标温度为70-75℃)，然后在约68℃加热期间完全溶解为深棕色溶液。通过加热的大型尼龙注射器过滤器(0.44微米)将热混合物澄清至Mya4 100ml工艺容器中，其具有200RPM的塔顶U形搅拌，预热至85℃(目标内部温度＝70-75℃)。在15分钟内将深棕色溶液冷却至65.2℃(目标温度为62.5-67.5℃)，并接种化合物[1]的晶体(形式A)(约6mg0.1％重量)。继续冷却至59.8℃(目标值57.5-62.5℃)，并重复接种，观察到其在此温度下约20分钟后仍保持在溶液中。测量T＝0的溶解度(184.35mg/ml)，然后将混合物以5℃/小时的速度冷却至0℃(12小时，720分钟)。在约52-53℃观察到明显量的灰白色沉淀。冷却后，将混合物在0℃保持约5小时，然后测量溶解度，指示90.06％发展(18.84mg/ml)。通过过滤分离固体。用分离的滤液洗涤容器和滤饼，并在收集灰白色固体和深棕色液体之前风干12分钟。收集固体并在45℃真空干燥约4小时得到标题化合物。以76.4％的产率成功分离出4.59g结晶化合物[1]。基于在0℃下测量的预分离溶解度(solubility pre-isolation)的最大理论回收率为90.6％。

实施例F.5

乙酸正丁酯，5体积，85℃，6g规模

将粗化合物[1](5.96g)悬浮在N₂条件下的合适玻璃容器中的乙酸正丁酯(30ml，5体积)中，该玻璃容器配有回流冷凝器和搅拌珠，转速为420RPM。将米色悬浮液加热至85℃(目标温度为80-85℃)，然后在约82℃加热期间完全溶解为深棕色溶液。通过加热的大型尼龙注射器过滤器(0.44微米)将热混合物澄清至Mya4 100ml工艺容器中，其具有200RPM的塔顶U形搅拌，预热至95℃(目标内部温度＝80-85℃)。在15分钟内将深棕色溶液冷却至74.6℃(目标温度为72.5-77.5℃)，并接种化合物[1]的晶体(形式A)(约6mg0.1％重量)。继续冷却至69.5℃(目标值67.5-72.5℃)，并重复接种，观察到其在此温度下约45分钟后仍保持在溶液中。测量T＝0的溶解度(175.84mg/ml)，然后将混合物以5℃/小时的速度冷却至0℃(14小时，840分钟)。在约60-62℃观察到少量大颗粒的发展。冷却后，将混合物在0℃下保持约3小时，然后测量溶解度，指示91.7％发展(16.61mg/ml)。通过过滤分离固体。用分离的滤液洗涤容器和滤饼，并在收集灰色固体和深棕色液体之前风干10分钟。收集固体并在45℃真空干燥约4小时得到标题化合物。以77.9％的产率成功分离出4.64g结晶化合物[1]。基于在0℃下测量的预分离溶解度(solubility pre-isolation)的最大理论回收率为91.7％。

实施例F.6

使用庚烷反溶剂添加在乙酸正丁酯(5体积，85℃)中结晶粗化合物[1]

遵循实施例F.5中概述的结晶程序，但做了以下修改:

·在5℃/小时受控冷却后，在25℃下以1体积/小时的速率加入庚烷(2.5体积)反溶剂；

·在70℃下以1体积/小时的速率加入庚烷(2.5体积)反溶剂，然后以5℃/小时的受控速度冷却至25℃。

由于结晶的最终组合物包含混合溶剂系统，因此评估了使用最终溶剂组合物乙酸正丁酯/庚烷[2:1]的标准2x 2体积容器和滤饼冲洗的影响。

乙酸正丁酯，5体积，85℃，6g规模结晶，且在5℃/小时受控冷却后，在25℃下以1体积/小时的速率加入庚烷(2.5体积)反溶剂

4.73g结晶化合物[1]以78.5％的产率成功分离。基于25℃下测量的预分离溶解度的最大理论回收率为92.4％。

乙酸正丁酯，5体积，85℃，6g规模结晶，在70℃下以1体积/小时的速率加入庚烷(2.5体积)反溶剂，然后以5℃/小时的受控速度冷却至25℃。

以76.0％的产率成功分离出4.73g结晶化合物[1]。基于25℃下测量的预分离溶解度的最大理论回收率为92.4％。

实施例G

化合物[1]-L-酒石酸盐的合成

将结晶的化合物[1]游离碱(29.9g,75.22mmol)溶解在乙醇(420mL)中，将所得溶液加热回流。逐滴加入L-酒石酸(11.29g,75.22mmol)在水(12mL)/乙醇(30mL)中的溶液，保持批料温度在75-78℃之间。将溶液精密过滤(在过滤过程中冷却至57℃，没有结晶迹象)。将过滤出的溶液加热到60-65℃，并用根据WO 2011/089401(在以下再制备；CyclacelLimited)的实施例5制成的化合物[1]-L-酒石酸盐II型(形式E)(0.003g)接种晶种。将混合物于60-65℃搅拌1小时，在此期间开始结晶。随后将悬浮液以10℃/h冷却至15-20℃。于15-20℃搅拌1小时，过滤固体，用乙醇洗涤(3x 60mL)，并抽干。在真空烘箱中进一步干燥得到[1]-L-酒石酸盐，其是白色固体(36.0g，从游离碱计算为87％)。¹H NMR证实为所需产品，HPLC(方法B)显示纯度98.80％。还通过手性HPLC分析产品。DSC分析(峰182.73℃，起始点179.61℃)和XRPD证实符合WO 2011/089401的形式E。化合物[1]的L-酒石酸盐(形式E)的XRPD峰示于表2。

根据WO 2011/089401的实施例4和5制备化合物[1]的L-酒石酸盐(形式E)的晶种

实施例4：化合物[1]的L-酒石酸盐(形式D)的制备

将化合物[1](500mg，1.26mmol，1当量)、L-酒石酸(193mg，1.28mmol，1.02当量)和乙酸乙酯(5ml，10vol)加入到烧瓶中，并在环境条件下搅拌2小时，1小时内发生沉淀。通过真空过滤分离白色沉淀，用EtOAc(3x 0.5ml，2x 1ml)洗涤，并在40℃的真空烘箱中干燥16小时，得到白色固体形式的L-酒石酸盐(565mg，82％产率；形式D)。

实施例5.1

将如上述WO 2011/089401的实施例4中制备的化合物[1]的形式D的L-酒石酸盐(1.0g)在乙醇(12ml)中的悬浮液在回流下加热。在30分钟内分批加入乙腈(3ml)。加入后，未得到溶液。再加入部分乙醇(4.5ml)和乙腈(1ml)，直至得到溶液。将溶液精密过滤(热)，然后以10℃/小时的速度冷却至室温(结晶在～65℃下开始)。在室温下搅拌过夜后，过滤所得固体，用冷乙醇(5ml)洗涤，并晾干。在50℃真空烘箱中进一步干燥，得到白色结晶固体形式的所需产物(0.725g，73％)。¹H NMR分析证实了1:1的盐，XRPD证实了形式E。

实施例5.2

将如上述WO 2011/089401的实施例4中制备的化合物[1]的形式D的L-酒石酸盐(10.2克)在乙醇(120毫升)中的悬浮液加热至65℃。加入乙腈(20毫升)，并将悬浮液回流加热10分钟，之后获得溶液。在2-3小时内将溶液冷却至室温，在～50℃下开始结晶。所得悬浮液在室温下搅拌过夜。过滤得到的固体，用乙醇(10ml)洗涤并干燥。在50℃真空烘箱中进一步干燥，得到白色结晶固体形式的所需产物(8.76g，88％)。¹H NMR分析证实了1:1的盐，XRPD证实为形式E。

实施例5.3-浆料转化

化合物[1]的L-酒石酸盐的形式E也是通过从四种不同溶剂(乙酸乙酯、IPA、IMS或乙腈)进行淤浆转化制备的。在过滤和分析之前，在45℃下，将D:E型L-酒石酸盐(总计200mg)的1:1混合物(按形式重量计)在2ml溶剂中加热48小时。每种浆料中均生成形式E(纯度≥98％)。

实施例5.4–种晶

将上述WO 2011/089401的实施例4中制备的形式D的L-酒石酸盐化合物[1]在乙醇(120ml)中的悬浮液(10.2g)加热至65℃。加入乙腈(20ml)，并将悬浮液回流加热10分钟。将混合物通过HPLC过滤玻璃器进行精密过滤。过程中未观察到沉淀。然后将材料从回流中冷却，并在70℃下接种形式E L-酒石酸盐(如上制备)，以每1.5小时10℃的速度冷却。第一粒晶种完全溶解，在60℃下重复接种。晶种仍然存在，溶液发生变化，显示非常微弱的不透明相。结晶在约50℃下开始。获得80％的分离产率。

实施例5.5-从化合物[1]的游离碱形成

将化合物[1]游离碱形式A(0.2g)溶于乙醇(9体积，1.8mL)中并加热回流。滴加酒石酸(1eq，0.076g)在水(1.7vol，0.34mL)/乙醇(1vol，0.2mL)中的溶液，保持温度回流。冷却至70℃前，将所得溶液精密过滤。加入形式E晶种，得到浑浊溶液。将批料在70℃下搅拌1小时，然后冷却至室温。在室温下搅拌2小时后，过滤固体，用乙醇(2x 0.5mL)洗涤，并晾干。在50℃真空烘箱中进一步干燥，得到白色固体形式的化合物[1]-L-酒石酸盐形式E(0.2g，72％)。¹H NMR证实了1:1的盐，HPLC显示纯度为97.97％。XRPD和DSC确认了形式E。

实施例H

以L-酒石酸盐形式直接分离制备化合物[1]

将化合物[2](25g，0.0768mol)和化合物[3](39.6g，0.384mol，5mol当量)装入容器中，并在氮气下加热至170℃(加热块温度)48小时。通过HPLC(方法B)监测反应，观察化合物[2]的消失情况。

将反应混合物冷却至60℃。剩余化合物[3]的含量通过¹H NMR测定，并加入相对于剩余化合物[3]量为1mol当量的HCl(为4M HCl)。加入乙酸乙酯(10体积)，搅拌，将化合物[1]萃取到有机相中。分离水相，并用另外10体积％的乙酸乙酯重新萃取。合并有机相，用水(10体积)洗涤。

通过蒸馏将有机相浓缩至约5体积。加入乙醇(10体积)，继续蒸馏以除去乙酸乙酯。加入另外部分乙醇，继续蒸馏，直至除去乙酸乙酯。

加入足够的乙醇，使得化合物[1]的浓度为14体积。将混合物加热至75-78℃。将L-酒石酸(1mol eq)溶于纯化水:乙醇(1:2.5比例，1.4vol，相对于化合物[1])中。在75-78℃下，将L-酒石酸溶液滴加到化合物[1]的乙醇溶液中。将混合物冷却至60-65℃，并接种化合物[1]的酒石酸盐(形式E)。将混合物在60-65℃下搅拌1小时，直至结晶开始。将悬浮液以10℃/H的速度冷却至15-25℃。将悬浮液在15-25℃下搅拌1h，然后真空过滤，用乙醇(3x2vol)洗涤，并在50℃下真空干燥。预期收率为65-70％(29.4g@70％收率)。

在不背离本发明范围和精神的情况下，对本发明所述方面的各种修改和变化对于本领域技术人员来说是显而易见的。尽管已结合具体的优选实施方式描述了本发明，应理解所要求的发明不应被不适当地限制为这些具体实施方式。实际上，对于相关领域的技术人员来说显而易见的是，对所描述的实施本发明的方式进行的各种修改预期落入所附权利要求的范围内。

表1：化合物[1]的结晶游离碱(形式A)的XRPD峰

表2：化合物[1]的L-酒石酸盐(形式E)的XRPD峰

Claims (35)

1.制备式[I]化合物或其药学上可接受的盐的方法,

其中：

R¹和R²各自独立地为H、烷基或卤代烷基；

R³和R⁴各自独立地为H、烷基、卤代烷基或芳基；

R⁵为烷基、烯基、环烷基或环烷基-烷基，其各自可任选取代有一个或多个OH基团；

R⁶选自环丙基氨基、环丙基甲基氨基、环丁基氨基、环丁基甲基氨基和

其中X、Y和Z之一为N，其余为CR⁹；

R⁷、R⁸和每个R⁹独立地为H、烷基或卤代烷基，其中R⁷、R⁸和R⁹至少之一不为H；

所述方法包括以下步骤：

(i)形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物；

(ii)加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；

(iii)从所述混合物分离所述式[I]化合物且任选回收未反应的式[III]化合物；和

(iv)任选将所述式[I]化合物转化为盐形式。

2.根据权利要求1的方法，其中所述反应在不存在溶剂的情况下发生。

3.根据前述权利要求任一项的方法，其中步骤(i)中的反应混合物加热至约135℃至约175℃的温度，更优选约150℃至约175℃。

4.根据前述权利要求任一项的方法，其中步骤(i)中的反应混合物加热至少24小时的时间段。

5.根据前述权利要求任一项的方法，其中步骤(ii)中的反应混合物包含相对于化合物[II]约4至约7摩尔当量的化合物[III]，更优选相对于化合物[II]约5摩尔当量的化合物[III]。

6.根据前述权利要求任一项的方法，其中步骤(iii)包括将步骤(ii)的反应混合物萃取至HCl水溶液和有机溶剂中，分离有机相和浓缩滤液。

7.根据前述权利要求任一项的方法，其包括通过以下步骤制备式[II]化合物:

(i)用R⁶-NH₂或其盐处理式[VI]化合物，以形成式[VII]化合物；和

(ii)用R⁵Br处理所述式[VII]化合物以形成式[II]化合物；

其中R⁵和R⁶如权利要求1定义。

8.根据权利要求1至6任一项的方法，其包括通过以下步骤制备式[II]化合物：

(i)用R⁵Br处理式[VI]化合物以形成式[VIII]化合物；和

(ii)用R⁶-NH₂或其盐处理所述式[VIII]化合物，以形成式[II]化合物；

其中R⁵和R⁶如权利要求1定义。

9.根据权利要求7或权利要求8的方法，其中权利要求7的步骤(ii)或权利要求8的步骤(i)在存在DMSO和K₂CO₃的情况下进行。

10.根据权利要求7或权利要求8的方法，其中权利要求7的步骤(i)或权利要求8的步骤(ii)在存在nBuOH和碱，优选DIPEA的情况下进行。

11.根据前述权利要求任一项的方法，其中权利要求1的步骤(iii)进一步包括结晶化合物[I]的步骤，优选从乙酸正丁酯和庚烷的混合物结晶。

12.根据权利要求任一项的1至10的方法，其包括将所述式[I]化合物转化为盐形式。

13.根据前述权利要求任一项的方法，其包括将所述式[I]化合物转化为L-酒石酸盐。

14.根据权利要求13的方法，其中所述L-酒石酸盐为结晶形式，优选形式E。

15.根据权利要求14的方法，其包括在乙醇中回流所述式[I]化合物且向其中滴加L-酒石酸在水和乙醇的混合物中的溶液。

16.根据权利要求15的方法，其中添加L-酒石酸溶液后最终混合物中乙醇:水的比例为至少约15:1，更优选约37.5:1。

17.根据权利要求15或权利要求16的方法，其包括在添加L-酒石酸溶液的过程中将温度维持在75至78℃。

18.根据权利要求1至17任一项的方法，其进一步包括制备化合物[III]的步骤，其中R₂为H，其通过:

(a)在包含THF的溶剂中用(S)-2-Me-CBS-氧氮硼杂环戊烷和硼烷-N,N-二乙基苯胺复合物处理化合物[V]以形成化合物[IV]；和

(b)从所述化合物[IV]去除保护基PG以得到化合物[III],

其中PG为保护基，优选Boc，R¹为烷基或卤代烷基，且R³为烷基、卤代烷基或芳基。

19.根据权利要求18的方法，其中步骤(b)包括用甲醇中的气态HCl处理所述化合物[IV]，真空浓缩，溶于乙酸乙酯，然后用NH₃鼓泡。

20.根据前述权利要求任一项的方法，其用于制备式[1]化合物，或其药学上可接受的盐:

所述方法包括以下步骤：

(i)形成包含式[2]化合物和式[3]化合物的反应混合物；

(ii)加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[1]化合物；

(iii)从所述混合物分离所述式[1]化合物且任选回收未反应的式[3]化合物；和

(iv)任选地将所述式[1]化合物转化为盐形式。

21.根据权利要求20的方法，其进一步包括制备式[2]化合物的步骤，其通过:

(i)用式[9]化合物或其盐处理式[6]化合物，以形成式[7]化合物；和

(ii)用异丙基溴处理所述式[7]化合物以形成式[2]化合物。

22.根据权利要求20的方法，其进一步包括通过以下制备式[2]化合物的步骤:

(i)用异丙基溴处理式[6]化合物以形成式[8]化合物；和

(ii)用式[9]化合物或其盐处理所述式[8]化合物，以形成式[2]化合物。

23.根据权利要求21或权利要求22的方法，其中权利要求21的步骤(ii)或权利要求22的步骤(i)在DMSO中在K₂CO₃的存在下进行。

24.根据权利要求21或权利要求22的方法，其中权利要求21的步骤(i)或权利要求22的步骤(ii)在nBuOH中在碱优选DIPEA的存在下进行。

25.根据权利要求20至22任一项的方法，其中化合物[3]具有至少85％，更优选地，至少90％，还更优选地，至少95％的非对映体过量。

26.根据权利要求20至25任一项的方法，其进一步包括制备式[3]化合物的步骤，其通过:

(a)在包含THF的溶剂中用(S)-2-Me-CBS-氧氮硼杂环戊烷和硼烷-N,N-二乙基苯胺复合物处理式[5]化合物以形成式[4]化合物；和

(b)从所述式[4]化合物去除保护基PG以得到式[3]化合物,

其中PG为保护基，优选Boc。

27.根据权利要求20至26任一项的方法，其包括在乙醇中回流权利要求20的步骤(iii)中分离的产物且向其中滴加L-酒石酸在水和乙醇的混合物中的溶液。

28.根据权利要求27的方法，其进一步包括精密过滤该混合物的步骤，将滤液温热至约60至约65℃的温度且用晶体[1]-L-酒石酸盐形式E种晶。

29.根据权利要求28的方法，其包括在约60至约65℃的温度搅拌所述经种晶的滤液至少1小时。

30.根据权利要求29的方法，其进一步包括以下步骤：冷却该混合物至约15至约20℃的温度且在该温度搅拌至少1小时以诱导化合物[1]-L-酒石酸盐的结晶。

31.根据权利要求30的方法，其中冷却速率为约5至约10℃/小时。

32.根据权利要求30或31任一项的方法，其中将化合物[1]-L-酒石酸盐过滤，用乙醇洗涤且真空干燥。

33.制备式[I]化合物或其药学上可接受的盐的方法,

其中R¹和R²各自独立地为H、烷基或卤代烷基；

R³和R⁴各自独立地为H、烷基、卤代烷基或芳基；

R⁵为烷基、烯基、环烷基或环烷基-烷基，其各自可任选取代有一个或多个OH基团；

R⁶选自环丙基氨基、环丙基甲基氨基、环丁基氨基、环丁基甲基氨基和

其中X、Y和Z之一为N，其余为CR⁹；

R⁷、R⁸和每个R⁹独立地为H、烷基或卤代烷基，其中R⁷、R⁸和R⁹至少之一不为H；

所述方法包括以下步骤：

(a)用R⁶-NH₂或其盐处理式[VI]化合物以形成式[VII]化合物；

(b)用R⁵Br处理所述式[VII]化合物以形成式[II]化合物；

(c)形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物和加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；

(d)从所述混合物分离所述式[I]化合物且任选回收未反应的式[III]化合物；和

(e)任选将所述式[I]化合物转化为盐形式。

34.制备式[1]化合物或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)用式[9]化合物或其盐处理式[6]化合物，以形成式[7]化合物；

(b)用异丙基溴处理所述式[7]化合物以形成式[2]化合物；

(c)形成包含式[2]化合物和式[3]化合物的反应混合物和加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[1]化合物；

(d)从所述混合物分离所述式[1]化合物且任选回收未反应的式[3]化合物；和

(e)任选地将所述式[1]化合物转化为盐形式。

35.制备式[I]化合物或其药学上可接受的盐的方法,

其中：

R¹和R²各自独立地为H、烷基或卤代烷基；

R³和R⁴各自独立地为H、烷基、卤代烷基或芳基；

R⁵为烷基、烯基、环烷基或环烷基-烷基，其各自可任选取代有一个或多个OH基团；

R⁶选自环丙基氨基、环丙基甲基氨基、环丁基氨基、环丁基甲基氨基和

其中X、Y和Z之一为N，其余为CR⁹；

R⁷、R⁸和每个R⁹独立地为H、烷基或卤代烷基，其中R⁷、R⁸和R⁹至少之一不为H；

所述方法包括以下步骤：

(i)形成包含式[II]化合物和式[III]化合物的反应混合物；

(ii)加热所述反应混合物至至少约130℃的温度以形成式[I]化合物；

(iii)任选地从所述混合物分离所述式[I]化合物且任选回收未反应的式[III]化合物；和

(iv)任选将所述式[I]化合物转化为盐形式。

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