CN1674890A - 用2′羟基黄酮类化合物治疗与苯二氮卓位点有关联的综合病症的方法 - Google Patents

用2′羟基黄酮类化合物治疗与苯二氮卓位点有关联的综合病症的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种预防和治疗与苯二氮卓位点(BZD－S)有关联的综合症的方法，此处包括给与有需要的病人服用有效剂量的2′羟基黄酮及黄酮衍生物，它们在化学结构的2′位置上含有一个羟基组。本发明还提供了一种从植物物质提取某些化合物的方法。

Description

用2′羟基黄酮类化合物治疗 与苯二氮卓位点有关联的综合病症的方法
技术领域
本发明涉及用2′羟基黄酮类化合物治疗与苯二氮卓位点有关联的综合病症的方法。
背景技术
连结到伽马氨基丁酸甲(GABAA)受体的苯二氮卓位点(BZD-S)的苯二氮卓(BZDs)类药物是非常有效的抗焦虑药，也是目前广泛应用于治疗精神疾患的处方药。然而，BZDs类药物显示有不希望有的副作用，包括镇静和肌肉松弛。BZDs类药物的效力亦随着时间的消逝而显著地降低(Woods等人.，1992，Pharmacol.Rev.，441：151-347)。
某些类黄酮化合物，例如5，7-二羟基黄酮(也叫做“柯因”)和一些柯因衍生物也连结到BZD-S且显示其对中枢神经系统的效应，包括抗惊厥和抗焦虑，亦不会引起镇静和肌肉松弛(美国专利5,756,538：1998年给与Cassels等人)。此外黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi或即日文的Ougon)是一种在传统中药中用于治疗焦虑症的主要中草药，它也含有柯因和其他自然产生的类黄酮化合物。
然而大多数类黄酮不具有如BZDs与BZD-S结合的亲和力。例如，比起苯甲二氮(又叫做“<安定>”)，柯因显示到BZD-S的连结就弱得多。另外，辨认和试验那些具有最佳结合性能的类黄酮化合物，则由于其中有些难于大量配制而遭遇挫折。许多自然地产生的类黄酮在植物中的含量很少。而且高度活跃的类黄酮化合物的合成，诸如那些具有众多羟基的组别，就显得特别困难，这是因为这些化合物在不大活跃的化合物的合成过程中，趋向于形成中间物质，而不是最终产物。
发明内容
本发明至少部分是基于识别类黄酮化合物，它们对BZD-S受体具有高亲和力。2′羟基黄酮和那些含有在黄酮2′位置羟基组的羟基黄酮衍生物的一般结构示于图1A，显示了它们对BZD-S受体的结合亲和力远超于大多数的类黄酮化合物的结合亲和力。与BZDs类药物的比较，其中有一些显示，比起其他类黄酮化合物，其结合亲和力高达100倍。这些化合物对BZDs受体的高亲和力使它们可用于预防和治疗中枢神经系统与GABAA受体的苯二氮卓位点(BZD-S)有关联的综合症。
另一方面，本发明指引出利用化学式I化合物去预防和治疗BZD-S有关联的综合症：
                            化学式I
这些化合物也可以是在生理上可接受的盐，其中R5，R6，R7，R8，R3′，R4′，R5′和R6′每一个独立地是H、OH、一个C1-C6烷基、一个C1-C6烯基或者是一个C1-C6烷氧基。R5和R6亦可与附着于它们的碳原子一起形成一个苯基环，它可以被取代或未被取代。
特别的实例，R5是OH，R6是OH或R7是OH。特别的实例，R5和R6同是OH，R6和R7同是OH或者R5和R7同是OH。特别的实例，R5，R6和R7都是OH。
特别的实例，R8是一个C1-C6烷氧基。特别的实例，R6和R8同是C1-C6烷氧基。特别的实例，R6和R8是甲氧基。
特别的实例，本发明指出一种预防或治疗与BZD-S有关联的综合症的方法，给有需要的病人服用有效而无毒性的化合物剂量，包括5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)或这些化合物在生理学上可接受的盐。
特别的实例，与BZD-S有关联的综合症是焦虑症。另一特别的实例，与BZD-S有关联的综合症是惊恐症。
在一些实例中，利用本发明的方法服用的化合物剂量可以是一等分剂量。在另一些实例中，可以是两个或更多的等分剂量。
另一方面，在本发明的方法中被利用的化合物可以制成预防或治疗焦虑症的药剂。特别的体现是，此药剂不产生镇静和/或肌肉松弛效应。另一特别的体现是，在本发明的方法中被利用的化合物可以制成预防或治疗惊恐症的药剂。含有一个或多个容器的药包可以充满本发明方法利用的化合物。此药包还可以装有预防或治疗焦虑症的药物说明书，亦可装有预防或治疗惊恐症的药物使用说明书。
另一方面，本发明还指引出一种配制具有化学式I的化合物的方法，包括用溶剂从已知含有该化合物的植物物质中析出之；过滤、浓缩、连续纯化析出物、识别和收集含有该化合物的部分以及从浓缩了的析出物中形成该化合物的结晶体。该结晶体的纯度可达90-99％。每公斤植物物质可获得该产品5-10毫克。
另一方面，本发明指出如何从该发明方法获得产品。该产品可包含在药学上可接受的配方中。含有一个或多个容器的药包可以充满本发明方法获得的产品。此药包还可装有预防或治疗焦虑症的药物说明书，亦可装有预防或治疗惊恐症的药物使用说明书。
再另一方面，本发明指引出一种识别一个或多个用于预防或治疗与BZD-S有关联的综合症的化合物的方法，包括分析各种化学结构的化合物的全体去确定由每一化合物对BZD-S显示的结合亲和力；对BZD-S有结合亲和力的化合物全体的每一成员进行结合亲和力的比较；和最少选择出一种化合物，其化学结构提供最强的BZD-S结合亲和力，该强亲和力对预防或治疗与BZD-S有关联的综合症有用。分析化合物全体的方法包括确定化合物全体成员的IC50和Ki值。分析化合物全体的方法可进一步包括确定化合物全体成员的GABA率。
附图说明
图1A表示黄酮及其衍生物的一般结构。
图1B表示12种类黄酮化合物，用它们作为应用的例子。其在图中的编码按表2。
图2A-2O表示在存在和没有GABA时，几种类黄酮化合物的剂量反应曲线。
图2A表示在存在/没有10μM GABA时，安定(Diazepam，DZ)的剂量反应曲线。
图2B表示在存在/没有10μM GABA时，氟硝安定(Flunitrazepam)的剂量反应曲线。
图2C表示在存在/没有10μM GABA时，beta-CCB的剂量反应曲线。
图2D表示在存在/没有10μM GABA时，beta-CCM的剂量反应曲线。
图2E表示在存在/没有10μM GABA时，R15-4513的剂量反应曲线。
图2F表示在存在/没有10μM GABA时，R15-1788的剂量反应曲线。
图2G表示在存在/没有10μM GABA时，FG-7142的剂量反应曲线。
图2H表示在存在/没有10μM GABA时，5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)的剂量反应曲线。
图2I表示在存在/没有10μM GABA时，6，2′-二羟基黄酮的剂量反应曲线。
图2J表示在存在/没有10μM GABA时，7，8，2′-三羟基黄酮的剂量反应曲线。
图2K表示在存在/没有10μM GABA时，5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮(K38)的剂量反应曲线。
图2L表示在存在/没有10μM GABA时，2′-羟基黄酮的剂量反应曲线。
图2M表示在存在/没有10μM GABA时，5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮(汉黄芩素，Wogonin)的剂量反应曲线。
图2N表示在存在/没有10μM GABA时，5，7-二羟基-6-甲氧基黄酮(K7)的剂量反应曲线。
图2O表示在存在/没有10μM GABA时，2′-羟基-β-黄酮的剂量反应曲线。
图3是条线图，显示小鼠服用5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)1.0mg/kg-8.0mg/kg后，在高架迷宫试验中，在20分钟和60分钟中进入开臂端次数的平均百分比。对照组是服用安定(DZ)和水的小鼠。
图4是条线图，显示小鼠服用5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)1.0mg/kg-8.0mg/kg后，在高架迷宫试验中，在20分钟和60分钟中停留在开臂端的总时间的平均百分比。对照组是服用安定(DZ)和水的小鼠。
图5是条线图，显示小鼠服用5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)1.0mg/kg-8.0mg/kg后，在四孔板试验中，在20分钟和60分钟中探头次数的平均百分比。对照组是服用安定(DZ)和水的小鼠。
图6是条线图，显示小鼠服用5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)1.0mg/kg-8.0mg/kg后，在四孔板试验中，在20分钟和60分钟中探头停留的时间平均百分比。对照组是服用安定(DZ)和水的小鼠。
图7是条线图，显示小鼠服用5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)1.0mg/kg-8.0mg/kg后，在四孔板试验中，在20分钟和60分钟中用后脚站起的次数的平均百分比。对照组是服用安定(DZ)和水的小鼠。
图8是条线图，显示小鼠服用5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)1.0mg/kg-8.0mg/kg后，在水平金属线试验中，在20分钟和60分钟中，在10次中成功抓住金属线的次数的平均总数。对照组是服用安定(DZ)和水的小鼠。
图9是示意图，描述从黄芩根配制5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)的方法。
具体实施方式
本发明上文中的以及其它目的、特性和优点将通过下面优选的实例说明。
本发明介绍的实例描述如下：
本发明至少部分是基于识别类黄酮化合物，它们对BZD-S受体具有高亲和力。2′羟基黄酮和那些含有在黄酮2′位置羟基组的羟基黄酮衍生物的一般结构示于图1A，显示了它们对BZD-S受体的结合亲和力远超于大多数的类黄酮化合物的结合亲和力。都与BZDs类药物的比较，其中有一些显示，比起其他类黄酮化合物，其结合亲和力高达100倍。这些化合物对BZDs受体的高亲和力使它们可用于预防和治疗中枢神经系统与GABAA受体的苯二氮卓位点(BZD-S)有关联的综合症，例如焦虑症和惊恐症。
例1获得的结果显示，在化学式I的黄酮化合物2′位置上放置一个羟基(OH)组，对BZD-S受体，引人注目地增加了黄酮化合物的结合亲和力。当一个羟基组取代一个氢及当它取代一个甲氧基组时，显示增加了结合亲和力。以2′OH取代的黄酮衍生物，比在2′位置上的含有其他取代物的黄酮衍生物，其结合亲和力增加260倍。例7比较在2′碳位置上不同的取代物对BZD-S的结合亲和力的效应。对于所研究的取代物，只有在2′位置上带有一个-NH2的取代基显示对BZD-S受体明显的结合亲和力。
在实例中，化学式I中的2′羟基黄酮化合物也可在另外的位置上含有羟基组。在特殊的实例中，在R5，R6和R7位置上可含有额外的羟基组。在实例中，多于一个位置上含有附加的羟基组。在特殊的实例中，R5和R6、R6和R7或R5和R7可同时含有额外的羟基组。在实例中，化学式I中的2′羟基黄酮化合物亦可含有烷氧基组。在特殊的实例中，R5或R8可含有C1-C6烷氧基组。在特殊的实例中，R6或R8可含有C1-C6烷氧基组。在特殊的实例中，R6或R8可含有甲氧基组。在特殊的实例中，R6和R8可同时含有C1-C6烷氧基组。在特殊的实例中，R6和R8可含有甲氧基组。
化学式I的类黄酮化合物可用于预防和治疗多种与BZD-S受体有关联的中枢神经系统综合症。此处“与BZD-S有关联的综合症”是指哺乳动物神经系统的作用受到调节GABAA受体的苯二氮卓位点(BZD-S的)结合状态的影响。这些综合症包括焦虑症和惊恐症。化学式I的类黄酮化合物可用于预防和治疗焦虑症。它们不仅可减轻与焦虑症有关的症状，而且其中许多还不产生不良的镇静作用或肌肉松弛效应。化学式I的类黄酮化合物可用于预防和治疗惊恐症。通常，这些化合物可给患有焦虑症或惊恐症的病人按有效无毒剂量服用。虽然服用这些化合物有多种方法，包括口服、灌肠、滴鼻、灌阴道和肠胃外注射，但建议采用口服。
此处“有效无毒剂量”是指化合物的量、或在生理学上或药学上含有的化合物成分，对提供其所欲达到的职能有效，例如能治疗焦虑症和惊恐症，而无毒性不良反应。其有效无毒剂量的变化取决于诸如身体尺码和年龄以至病情的严重程度。受过普通训练的人可研究上述因素去决定有效无毒剂量，而无需过度的实验。
此处研究的结果表明，这些化合物对治疗急性和慢性焦虑症均有效。当需要时，它们适合于大剂量服用，亦可长期小剂量服用。例如，当病人患有一种危急的焦虑症，“惊恐发作”时，可以一次过大剂量服用。亦可以较小剂量长期服用来控制焦虑。特殊的实例是，这些化合物可在手术前服用，藉以减少焦虑和缓和情绪。此种疗法不仅减轻病人的紧张情绪，而且能使在做手术时麻醉剂用量减到最少。
例4描述活体研究的结果，表示K36或其生物活性代谢物在被吸收后渗入到血脑屏障的能力。此外，在试验的剂量下，K36的抗焦虑作用比一般的苯二氮卓抗焦虑药安定更为有效。
在认知/镇静效应定量分析的试验中，安定和较高剂量的K36引起探头次数，探头停留的时间和用后腿站起(竖身)次数的显著增加。因此，安定和K36都没有使这些参数降低，试验中服用的剂量没有镇静效应。在水平钢线试验中，只有服用较高剂量安定的小鼠降低了抓线能力，其他包括服用K36的小鼠的抓线能力并没有改变。
因此，K36(本发明的其中一种化合物)显示了抗焦虑作用而没有镇静和肌肉松弛作用，而传统的苯二氮卓和其他非苯二氮卓的制剂在有效抗焦虑剂量范围内却有这些作用。
给予服用的化合物可不引致上瘾，又可与多种在药学上和在生理学上可接受的成分混合。此处“在药学上和在生理学上可接受”是指那些化合物、含有这些化合物的合成物、和/或配药形式，它们在合理的医学判断范畴下适合使用。
本发明的化合物可独立地，或者在适合时以盐的形式存在。当要增加溶解度时，就要以盐的形式制成。在药学上和在生理学上可接受的盐和它们的制剂是专业人员所熟知的。这些在药学上可接受的化合物的盐包括从无机或有机酸或硷的化合作用得来的由钠、钙和镁或季铵盐组成的传统无毒性盐。
本发明也叙述药学上和生理学上的合成物，它们包含有疗效的化合物剂量和药学上的载体或赋形剂。载体包括盐水、缓冲盐水、葡萄糖、水、甘油、乙醇和它们的组合。如有要求，其组成可以包含小量润湿剂或乳化剂、或pH缓冲剂。其组成可以是液体溶剂、悬浮液、乳剂、药片、药丸、胶囊、持续释放的配方设计或粉剂。其组成可以是具有传统粘合剂和诸如甘油三酸酯载体的栓剂。口服配方可包括诸如药级甘露醇、乳糖、淀粉、镁硬脂酸盐、钠糖精、纤维素、镁碳酸盐和其他业界已知的标准载体。药物载体可以是固体，也可以是液体。
作为例证的固体载体包括葡萄糖、白土、蔗糖、滑石、凝胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、镁硬脂酸盐、硬脂酸等。固体载体可包括一种或多种作为调味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、填料、助流劑、浓缩补助剂、黏合剂、药片崩解剂；也可以是胶囊物质。在粉剂中，载体是精致分割的固体，它是精致分割的活性成分的混合物。在片剂中，化合物与具有必要的浓缩特性的载体以适当的比例混合，压实至所要求的形状和尺寸。
作为例证的液体载体包括糖浆、花生油、橄榄油、水等。液体载体用于配制溶液、悬浮液、乳状液、糖浆和甘香酒剂。合成物可以溶解或悬浮在药学上可接受的液体载体，例如水、有机溶剂或混合两者，或药学上可接受的油或脂肪。液体载体可含有其他药学上合适的添加剂，例如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、悬浮剂、增稠剂、染色剂、粘度调节剂和稳定剂。
制药可以采用多种形式。若是固体载体，制剂可以做成药片、将粉剂装入硬明胶胶囊，丸剂、锭剂或药糖块。若是液体载体，制剂可以做成糖浆、乳剂或软明胶胶囊。
化合物可以用已为人们熟知的标准制药包装来供应。正确使用化合物作为预防和治疗焦虑症或惊恐症的药物说明书可以与包装一并提供。
提供了以高纯度从植物物质中有效地抽取类黄酮化合物的方法。特别地介绍了从黄芩草药的根部抽取在其中的多种化合物。例5描述用此法去配制5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)。像其他含有这些化合物的草药一样，在配制过程中，黄芩草药的其他成份亦可被利用。表1列出可能含有有用类黄酮的部分草药。
              表1
黄芩属类植物
黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)
S.amonea C.H.Wright
S.barbata D.Don(S.rivularis Wall)
S.hypericifolia Levl.
S.indica L.
S.likiangensis Diels
S.planipes
S.rehderiana Diels.
S.strigillosa Hemsl.
S.tenax W.W.Smith var.patentipilosa
S.viscidula Bunge
Sorbaria sorbifolia
Tetracera indica
在抽取化合物之前，通过碾碎、研磨、或其他方法将草药制成细致粉末。提取过程可利用氯化溶剂，，例如二氯甲烷、三氯甲烷，或醇，例如甲醇、乙醇、n-丁醇。乙醚、丙酮、乙酸乙酯以及其他常用溶剂亦可。可完成包括1、2、3、4、5、6或更多数目的抽取。抽取可以在标准温度和压力下进行，例如温度25℃和一个大气压。亦可在其他温度和压力下进行。在特殊的实例中，抽取可以在用于抽取的溶剂的沸点下进行。
抽取物可以用适当的方法过滤，包括用标准滤纸。抽取物亦可用任何合适的方法浓缩，包括用蒸发器。
化合物的结晶体可以通过在例如乙醇的溶剂中溶解抽取物而获得，并允许它在室温下停留一段合适的时间。这些结晶体可以用合适的溶剂，例如乙醇过滤和清洗。
其他用来生产化合物的可供选择的方法亦包括在本发明的范围内，例如用超临界的液体CO2。例6提供了一种配制5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)的可供选择的方法。
此处描述的方法制造高纯度的产品。虽然所制成的化合物总量通常很少，不像所期望的那样多，但这个有四个羟基组的化合物是十分活跃的。通常所制成的产品纯度在90-99％之间，平均纯度约95％。估计每公斤黄芩根可获得的抽取物是5-10mg。
通过熟知的技术，类黄酮化合物可化学合成。例如下列的文献描述了合成类黄酮化合物的方法：
Lim.S.S et al.，“Synthesis of flavonoids and their effects on aldose reductase andsorbitol accululation in streptozotocin-induced diabetic rat tissues”，Journal ofPharmacy & Pharmacology.53(5)：653-68，2001；
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Kim Dekermendjian，et al.，“Structure-Activity Relationships and MolecularModeling Analysis of Flavonoids Binding to the Benzodiazepine Site of the Rat BrainGABAA Receptor Complex”，Journal of medicinal Chemistry.42(21)：4343-4350，1999；
Jacobson，Kenneth A.，“Synthesis and Biological Activities of Flavonoid Derivativesas A3 Adenosine Receptor Antagonists”，Journal of Medicinal Chemistry.39(12)：2293-2301，1996；
另外，本发明的有些类黄酮化合物可作商业用途。例如，6，2′-二羟基黄酮(化合物3)，2′-羟基-β-黄酮(化合物4)，2′-羟基黄酮(化合物6)，黄酮(化合物9)，6-羟基-2′-甲氧基黄酮(化合物11)和2′-甲氧基黄酮(化合物12)是从美国新泽西州萨默维尔的Indofine Chemical company，Inc.购买。本申请所利用的化合物是在实验室中从黄芩纯化，包括5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)、5，7-二羟基-6-甲氧基黄酮(K7)、5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮(汉黄芩素，Wogonin)、5，6，7-三羟基黄酮(黄芩素)。这些及其它类黄酮可由黄芩纯化，也可从其他原料(包括表1所列)纯化。
对预防或治疗与BZD-S有关联的综合症有用的其他化合物，亦可用此处介绍的方法研究。可分析全体具各种化学结构的化合物各自对BZD-S的结合亲和力。这些化合物的化学结构可以有很大差异，亦可非常接近。典型的例子是同一族相关化合物的各成员。化合物可从任何源泉获得。化合物可以是自然产生的，亦可以是合成的。每一化合物对BZD-S的结合亲和力可通过现有已知的任一方法确定。这些方法可包括确定化合物各成员，或所分析的任何一个或多个组合的IC50和Ki以及GABA率。其他确定全体化合物成员各自的结合亲和力的方法亦包括在内。全体化合物成员各自的结合亲和力可与化合物的化学结构相比较。可确定最强结合亲和力的化学结构。共同的化学结构可以是化合物化学结构的任一部分。至少可选择一个化合物，它含有的化学结构具最强的结合亲和力。通常要对此化合物作进一步的试验。
本发明进一步描述下面非限定的例子。此处引用的全部专利、专利申请和参考资料清晰地与文章内容结合。
例1 挑选的类黄酮的结构—活动能力的评估
分析了十二种类黄酮，确定它们对BZD-S的结合亲和力。计算它们每一个的IC50和Ki值，然后与各自的化学结构相比较。为此实验挑选试验物件去描述2′OH组的作用(见图1A和表2)。许多化合物彼此不同仅是在分支上的取代基，也就是有无2′OH组。
放射性的[3H]-氟硝安定(N-甲基-[3H]，88.0 Ci/mmol)购于Amersham。[3H]-Ro15-1788(N-甲基-[3H]，88.0 Ci/mmol)购于Nen Life Science Products。安定购于Sigma Chemical。6，2′-二羟基黄酮(化合物3)，2′-羟基-β-黄酮(化合物4)，2′-羟基黄酮(化合物6)，黄酮(化合物9)，6-羟基-2′-甲氧基黄酮(化合物11)和2′-甲氧基黄酮(化合物12)购于Indofine Chemical。其他类黄酮在我们的实验室纯化。其他物料均属高等级，由外购得来。
                                    表2
                                挑选的类黄酮
 化合物                名称                    侧链
  2′  5     6   7     8
1 5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36) OH OH OCH3 OH OCH3
2 5，7，2′-三羟基-6-甲氧基黄酮(K38) OH OH OCH3 OH
    3     6，2′-二羟基黄酮   OH  OH
    4     2′-羟基-β-黄酮   OH  *C4H4
    5     2′-羟基黄酮   OH
    6     5，7-二羟基-6，8-二甲氧基黄酮 OH  OCH3  OH  OCH3
    7     5，7-二羟基-6-甲氧基黄酮(K7) OH  OCH3  OH
    8     5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮(Wogonin) OH  OH  OCH3
    9     黄酮
    10     5，6，7-三羟基黄酮(黄芩素) OH  OH  OH
    11     6-羟基-2′-甲氧基黄酮   OCH3  OH
    12     2′-甲氧基黄酮   OCH3
放射性配体受体结合程式
对这十二种化合物，像先前描述过的一样(见Schacht和Baecker，1982：Vogel，et al.，1997)完成了放射性配体受体的结合实验。对于分析程式，把45μl的薄膜悬浮液(0.8mg/ml)，连同标记了的或无标记的试验化合物，加到含有238μl0.05M Tris-HCL(pH7.4)的培育混合剂中。在4℃培育双重样本30分钟。用最终是1nM浓度的[3H]-氟硝安定作分析对照。
为了饱和分析，用十二种浓度的[3H]-氟硝安定和未指定的结合(通过加入10μM的安定来拼出指定的结合)来确定。培育后，通过Millipore多位置真空室的GF/B过滤器作真空过滤，反应就迅速停止。在真空下，过滤器用5.0ml的0.05M Tris-HCL缓冲剂冲洗两次，然后干燥之。在过滤器中的放射性配体量，在5.0ml闪烁混合物鸡尾酒中，由Wallac 1209 Rackbeta液体闪烁计数器确定(效率48％)。指定的结合是从总结合减去未指定的结合计算出来。
由比对％控制和半对数浓度(M)，通过非线性回归分析(∑形曲线拟合)确定结果。Ki值用公式Ki＝IC50/[1+([3H]/Kd)]计算出来。其数据示于表3。
                                 表3
                        挑选的类黄酮的IC50和Ki值
  化合物                   名称   [3H]-氟硝安定的抑制(μM)
    IC50     Ki
    1    5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)     0.0015     0.0011
    2     5，7，2′-三羟基-6-甲氧基黄酮(K38)     0.0096     0.0076
    3     6，2′-二羟基黄酮     0.017     0.013
    4     2′-羟基-β-黄酮     0.055     0.044
    5     2′-羟基黄酮     0.19     0.15
    6     5，7-二羟基-6，8-二甲氧基黄酮     0.36     0.29
    7     5，7-二羟基-6-甲氧基黄酮(K7)     1.61     1.28
    8     5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮(Wogonin)     2.76     2.19
    9     黄酮     6.86     5.44
    10     5，6，7-三羟基黄酮(黄芩素)     10.11     8.03
    11     6-羟基-2′-甲氧基黄酮     14.51     11.52
    12     2′-甲氧基黄酮     15.13     12.01
剂量-抑制曲线由九至十二种药剂浓度产生。各种化合物的IC50值由[3H]-氟硝安定置换来评估，此[3H]-氟硝安定结合到突触体薄膜蛋白质，它从Sprague-Dawley大鼠的整个脑抽取，约2.50g。Ki值由公式Ki＝IC50/[1+([3H]/Kd)]计算出来，此处[3H]是[3H]-氟硝安定的浓度(1nM)，Kd是从高亲和力结合位点(3.86nM)得到的[3H]-氟硝安定分解常数。
结果
对十二种黄酮衍生物的研究(见图1B、表2和3)显示，具有最强结合亲和力的首五种类黄酮均含有2′OH组(由比较Ki值确定)。结果表明此侧链对各种黄酮衍生物的结合亲和力的重要性。比较仅在2′碳组不同的类黄酮更显示此组的确实作用。
·比较化合物1和6
除化合物1在2′位置含有一个羟基组和化合物6在2′位置含有一个氢外，化合物1和6相同。
化合物1的Ki值是0.0011μM，而化合物6的Ki值是0.29μM。表明由于在2′位置上存在一个羟基组，前者比后者，其结合亲和力高260倍。
·比较化合物2和7：
除化合物2在2′位置含有一个羟基组和化合物7在2′位置含有一个氢外，化合物2和7相同。
化合物7的Ki值是1.28μM，而化合物2的Ki值是0.0076μM。表明由于在2′位置上存在一个羟基组，前者比后者，其结合亲和力低168倍。
·比较化合物3、11和12：
化合物3和11在6位置均含有一个羟基组，然而，化合物3在2′位置有一个羟基组，而化合物11在2′位置有一个甲氧基组。化合物12在6位置没有羟基组，但在2′位置有一个甲氧基组。
这样，在2′位置以羟基组(Ki值0.013μM)取代甲氧基组(Ki值12.01μM)，其结合亲和力超越900倍。而当附加一个羟基组到6位置(从化合物12到化合物11)，两者的Ki值差别很小。
·比较化合物5和12：
化合物5在2′位置含有一个羟基组，而化合物12在2′位置含有一个甲氧基组。
化合物12和化合物5之间的单一更改，在2′碳位置以羟基组替换，结果Ki值从12.01变至0.15μM，两者的结合亲和力差别80倍。
·比较化合物5和9：
化合物5在2′位置含有一个羟基组，而化合物9在2′位置含有一个氢。附加的2′羟基组使Ki值从5.44变至0.15μM，两者的结合亲和力差别36倍。
毫无例外，类黄酮分子在2′碳位置以羟基组替换，导致显著增加对BZD-S的结合亲和力。不希望受理论约束，这些结果强烈地建议，在类黄酮分子上的2′OH组是负责配体和受体亚组交互作用的其中一个残基。
例2 确定挑选的化合物的GABA率
由于各种苯二氮卓配体的不同内在活动能力和药学性质，广泛采用GABA法实验去相互关联活体外和活体内试验的化合物特性。基于观察，GABA增强苯二氮卓受体激动剂的结合亲和力(Tallman et al.，1978)。Braestrup和Nielsen发展了此规范。当存在GABA时，激动剂在苯二氮卓受体位置上增强了它们的结合亲和力，拮抗剂的增强可以忽略，而反激动剂的作用与激动剂相反。因此GABA率在预测潜在的苯二氮卓受体激动剂、反激动剂和拮抗剂有用，其比率分别是＜1、＞1和～1。
在本研究中，分析12种不同的类黄酮，考虑到它们各自的结构，找出它们与在GABAA受体上的苯二氮卓位点的结合亲和力，计算它们的IC50和Ki值。挑选此实验的物件时特别注意那些仅在一侧分支上不相同的2′-羟基组，也就是存在或不存在2′-羟基组。当作结构差异和各自亲和力相互关系的分析后，确定化合物的GABA率。
对GABA法实验，对比分析在最终浓度1nM[3H]-Ro15-1788时进行，而培育混合液与例1配制放射性配体受体结合的实验相同。GABA率是被试验的化合物在没有GABA时的IC50值除以当存在10μM GABA时获得的IC50值。
表4列出多种BZD-S化合物的GABA率作参考。
                       表4
         一些苯二氮卓位点参考化合物的GABA率
    化合物     无GABA的IC50 有GABA的IC50
    Aa     Bb     Cc
                          激动剂
    安定     2.9     2.3     2.0
    氟硝安定     3.3     2.5     1.9
    去甲羟基安定     2.7     2.4      -
                          拮抗剂
    Ro15-1788     1.1     1.2     0.9
    BCCP     1.0     1.1      -
                         反激动剂
    FG 7142     0.7     0.9     0.9
    DMCM     0.7     0.5      -
    BCCM     0.7     0.9     0.7
    BCCB      -      -     0.5
    Ro15-4513      -      -     0.9
a当存在具有大鼠大脑皮层膜的10-4M GABA时确定的GABA率(Mohler和Richards，1981)。
b当存在具有大鼠小脑膜的10-5M肌肉克分子时确定的GABA率(Braestrupet al.，1981)。
c当存在具有大鼠大脑皮层膜的10-5M GABA时确定的GABA率。
表5列出经挑选的8种类黄酮化合物的GABA法实验结果。
                      表5
               试验的类黄酮的GABA率
化合物                名称                        GABA率
1      5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)    1.20
2      5，7，2′-三羟基-6-甲氧基黄酮(K38)         1.27
3      6，2′-二羟基黄酮                          0.89
4      2′-羟基-β-黄酮                           1.06
5      2′-羟基黄酮                               1.17
6      5，7-二羟基-6，8-二甲氧基黄酮              N/A
7      5，7-二羟基-6-甲氧基黄酮(K7)                 1.09
8      5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮(Wogonin)            1.03
必须指出，在本分析的变动IC50值的结果中，用了不同的放射性配体，因此所得到的IC50值仅用于计算各自试验化合物的GABA率。
如表5所示，化合物的GABA率，除6，2′-二羟基黄酮(化合物3)外，范围在1.10-1.30之间。这些值显示此类化合物可能有部分激动剂特性。就化合物3而言，GABA率是1.02，其药学特征可能是在拮抗剂和部分激动剂之间。应注意，GABA率仅提供化合物内在活动能力的评估。由于缺乏对一类化合物的活体或电生理学资料，传统的苯二氮卓配体与显示BZD-R亲和力的非苯二氮卓化合物的比较，需要进一步的查证。
例3量度5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)的BZD-S结合亲和力
将5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)在二甲基亚砜(DMSO，AcrosOrganics，比利时)中溶解和在小于0.2％DMSO最终浓度下分析。  在小于0.5％DMSO浓度下，未显示对BZD-R分析有明显作用。进行放射性受体结合的分析如前述(Schacht和Baecker，1982和Vogel，et al.，1997)。
搅匀从剖开的头骨中取出的Sprague-Dawley大鼠的整个前脑(约200g)，然后取出微量天然突触体。在分析过程中，将45μl的微量天然突触体(0.8mg/ml)，连同标记了的和未标记的测试药，加到238μl 0.05 M Tris-HCL(pH 7.4)中。在4℃下培育样本30分钟。在对比分析中，应用1nM[3H]氟硝安定和通过加入300μM安定去确定未指定的结合。培育后，通过Millipore GF/B过滤器过滤使反应迅速停止，在干燥过滤器前，用5.0ml冰冻的0.05 M Tris-HCL缓冲液将之清洗两次。
在饱和分析中，分析十二种浓度(1.33-125.00nM)的[3H]氟硝安定去确定[3H]氟硝安定的Kd值。用作测试的药物分解常数(Ki)由下式确定：Ki＝IC50/[1+([3H]/Kd)]。其数据示于表6。
       表6
[3H]氟硝安定的抑制(μM)
    化合物     Ki
    安定     9.5nM
    K36     1.1nM
例4确定5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)对焦虑、镇静和肌肉松弛作用的活体研究
从香港科技大学动物饲养中心获得雄性ICR小鼠(18-20g)，随意将他们分成实验组。每组4-5只关在一起，自主摄食和饮水，12小时光和12小时黑循环。实验在08:30-12:00进行。
四孔板试验
孔板仪器是一有墙围绕的试室(60×60×30厘米)，室内地板上有四个直径3厘米相互等距离的孔。小鼠放在室的中央。在五分钟的时间间隔内记录向孔探头的次数和探头停留的时间，用后脚站起(竖身)的次数(File和Pellow，1985)。每次试验后，用纸巾擦净仪器，清除先前的脚印痕。探头次数和时间以及竖身次数的增加反映更多的探察活动。与对照组比较，此三个参数的减少量显示镇静行为(Nolan和Parkes.1973；File和Wardill，1975；File和Pello，1986)。
在表7中见到，服用较大剂量4mg/kg K36，二十分钟后测试，显示探头次数和时间以及竖身次数明显增加。服用大剂量8mg/kg K36时亦增加，而服用两种大剂量安定时均增加(见表7、图5、6和7)。
                           表7
服用不同剂量的5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)的小鼠的探察行为
药物      时间     探头次数    探头停留时间      竖身次数
安定(DZ)
1mg/kg           19.12±2.92*  22.75±2.59     25.13±2.85
5mg/kg           17.25±1.89*  19.50±2.33*   32.16±3.15
对照组           13.19±1.76    15.50±1.96      25.38±3.39
K36
1mg/kg    20     13.56±1.81    15.38±1.59      24.19±3.53
1mg/kg    60     15.75±2.53    16.75±3.78      23.94±2.34
2mg/kg    20     13.13±1.96    14.56±2.04      22.06±3.17
2mg/kg    60     14.50±2.73    15.13±2.20      22.13±2.46
4mg/kg    20     20.25±1.42*  23.35±1.28*   29.54±2.09*
4mg/kg    60     16.95±1.33    17.56±1.20      27.56±2.79
8mg/kg    20     18.46±3.65*  19.55±4.23*   25.26±2.74
8mg/kg    60     15.72±1.86    15.06±1.98      23.75±3.18
n＝每组16
*p＜0.1，**p＜0.05，***p＜0.01，****p＜0.001，单因素方差分析后，Dunnett的t-检验明显不同于对照组。
5-分钟试验、20分钟(仅K36)和1小时试验，小鼠服用安定、或5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)，每组n＝16，*p＜0.1，探头次数、探头停留时间和竖身次数的均值(±标准差)总数，在单因素方差分析后，Dunnett的t-检验明显不同于服用水(H2O，pH7)的对照组。
高架迷宫试验
高架迷宫是由木制成的水平十字架，有两条无栏栅的悬臂(25×5厘米)(简称开臂)和两条墙高20厘米的相对着的悬臂(25×5厘米)(简称闭臂)。悬臂从中央平台(5×5厘米)伸展出来。高架迷宫离地40厘米，放在30×30×50厘米的盒子内。小鼠在进行四孔板试验后，马上被放在中央平台上，面对着封闭的悬臂。在五分钟的时间间隔内记录进入悬臂的次数和在开臂和闭臂停留的时间。四只脚都在悬臂上才算进入。此方法允许把区域运动试验中的直接探查(探头)和竖身分开(File和Wardill，1975)，和增加在高架迷宫中的整体活动能力(Pellow et al.，1985；Lister 1987)。进入悬臂的总数是量度一般的活动行为。小鼠选择增加进入开臂的次数及停留时间则显示抗焦虑效应(Pellow et al.，1985；Lister 1987)。
在服用4.0和8.0mg/kg的K36二十分钟后，结果显示进入开臂的次数及停留时间均显著地增加。与对照组比较，其他剂量的参数则没有变化。服用DZ(1.0和5.0mg/kg)时则显示进入开臂的次数及停留时间取决于剂量。服用4.0mg/kg K36时，比起服用安定组，更能抗焦虑(见表8、图3和4)。
                                 表8
在高架迷宫中服用不同剂量的5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)的小鼠行为
药物    时间(分)  进入开臂次数的百分比(％)   进入开臂停留时间的百分比(％)
DZ
1mg/kg                26.48±2.83*                  28.71±2.27***
5mg/kg                29.85±1.29**                 32.24±1.56****
对照组                18.70±2.83                   16.28±1.96
K36
1mg/kg    20          18.39±3.14                   14.28±2.36
1mg/kg    60          18.51±3.34                   15.80±3.29
2mg/kg    20          18.30±2.78                   15.74±3.00
2mg/kg    60          16.91±2.49                   16.84±1.99
4mg/kg    20          32.28±2.91***                33.55±2.09****
4mg/kg    60          19.90±1.63                   15.69±2.09
8mg/kg    20          28.90±2.23**                 25.62±1.73*
8mg/kg    60          18.67±2.24                   16.76±2.19
n＝每组16
*p＜0.1，**p＜0.05，***p＜0.01，****p＜0.001，单因素方差分析后，Dunnett的t-检验明显不同于对照组。
水平金属线试验
握住小鼠的尾巴举起小鼠，让它用前脚抓住水平伸展的金属线(直径1毫米，15厘米长，离桌面25厘米)然后放开它(Bonetti et al.，1982)。用服药前能用后脚抓住金属线的小鼠试验。记下小鼠在十次中能抓住金属线的次数。令肌肉松弛的药会损害小鼠抓住金属线的能力，而此肌肉松弛与镇静有关联。
只有服用5.0mg/kg安定的小鼠才明显呈现肌肉松弛(图8)。
统计分析
每组数据是以均数标准差表示。对从每一反应量度得出的数据进行单参数方差分析和仅对那些有明显治疗效果的反应进行Dunnett的t-检验多重组间比较。
从上面的结果知道，K36有活体效应，显示在活体吸收后，它本身或其生物活性代谢物有能力渗入到血脑屏障中。然而，在所选择的服食剂量下，它的抗焦虑作用仅在服药20分钟后才明显。原因仍待解释。但是，在所试验的剂量下，K36的抗焦虑作用比一般的苯二氮卓抗焦虑制剂安定更为明显。
在分析认知/镇静作用的四孔板试验中，安定和较高剂量的K36使探头次数、探头停留时间和竖身次数显著增加。因此，不论安定或K36这些参数均不会明显减小，从而知道在所服食剂量下无镇静作用。
总的来说，K36已经显示具有抗焦虑作用，而不像传统苯二氮卓及其他非苯二氮卓制剂在服用剂量范围内有镇静和肌肉松弛作用。
例5配制5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(K36)
将黄岑(2.0mg)磨成粉和用5.0L的二氯甲烷(DCM)在室温下榨取三次。将榨出物用Whatman 1号过滤纸过滤，然后将剩余物用5.0L的甲醇(CH3OH)榨取三次。过滤了的剩余物于60℃在旋转的真空脱水器中浓缩。用洗提法(接连用1.5L 20∶1、10∶1、8∶1、5∶1、3∶1和1∶1的己烷丙酮混合物)对浓缩了的DCM剩余物进行硅胶(Merck，70-230网眼，800g)色层分析。由薄膜色谱法(Merck，硅胶60)剖面图引导，将收集的分馏物分别贮存成十五(15)小分，每一小分约100ml。当用苯二氮卓受体(BZD-R)分析时，小分10-12显示有结合活动能力。将小分10和小分11合在一起，再通过1.0L DCM和氯仿洗提，作硅胶(100g)色层分析。将流出物(每小分20ml)再分成五十小分。将小分36至38合放在一起，在甲醇中重新结晶，获得5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(5，7，2′-三羟基-6-8-二甲氧基黄酮)(10mg)。纯化后，5，7，2′-三羟基-6-8-二甲氧基黄酮的化学结构由EI-mass和1H-NMR(400MHZ)确定和描述如下：
其物理和化学属性如下：
5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮
物理外观：
从甲醇得来针状黄色结晶，溶点262-263℃，镁+盐酸：橙黄色光谱：
MS m/e 330(M+).Anal.Calcd.C17H14O7：C，61.82；H，4.27.Found：C，61.70；H，4.38.UVλmaxnm(log∈)：(MeOH)275(4.14)，336(4.18).IR(KBr)vmaxcm-1：3456(OH)，1658(conjugated CO)，1610，1578(arom.C＝C).
1H-NMR(DMSO-d6)：3.77(3H，s，6-OCH3)，3.84(3H，s，8-OCH3)，7.04(1H，br t，J＝8.0Hz，4′-H)，7.06(1H，s，3-H)，7.07(1H，br d，J＝8.0Hz，3′-H)，7.42(1H，dt，J＝1.5，8.0Hz，5′-H)，7.86(1H，dd，J＝1.5，8.0Hz，6′-H)，12.74(1H，s，5-OH).
13C-NMR(DMSO-d6)：161.2(C-2)，108.6(C-3)，182.4(C-4)，148.2(C-5)，131.4(C-6)，151.0(C-7)，127.9(C-8)，145.6(C-9)，103.0(C-10)，117.4(C-1′)，156.8(C-2′)，117.1(C-3′)，132.9(C-4′)，119.6(C-5′)，128.2(C-6)，61.2(C-6-OCH3)，60.2(C-8-OCH3).
例6配制5，7，2′-三羟基-6-8-二甲氧基黄酮-超临界的液体抽取物(SFE)的方法
将研磨成粉的样本(100g)放进容积1000ml的样本筒中。用甲醇或70％甲醇(分别加入100ml，200ml和300ml，和2000ml液体二氧化碳作为提取溶剂。提取温度分别是40、50、60和70℃。让高压下(200、300和400巴)的液体二氧化碳流入样本筒。当压力达200、300和400巴时，马上小心打开出口阀，通过管道收集溶液至装有1000ml甲醇的试管中。提取过程是10-15分钟，重复三次。通过减压蒸发得到未加工的提取物，然后在硅胶上作柱色谱分析，并用氯仿-甲醇洗提。
通过接连用1.5L 20∶1、10∶1、8∶1、5∶1、3∶1和1∶1的己烷丙酮混合物对浓缩了的提取物进行硅胶(Merck，70-230网眼，800g)色层分析。由薄膜色谱法(Merck，硅胶60)剖面图引导，将收集的分馏物分别贮存成十五(15)小分，每一小分约100ml。当用苯二氮卓受体(BZD-R)分析时，小分10-12显示有结合活动能力。将小分10和小分11合在一起，再通过1.0L DCM和氯仿洗提，作硅胶(100g)色层分析。将流出物(每小分20ml)再分成五十小分。将小分36至38合放在一起，在甲醇中重新结晶，获得5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮(5，7，2′-三羟基-6-8-二甲氧基黄酮)(10mg)。
例7在2′碳位置作不同的置换改变类黄酮衍生物的结合亲和力
                            表9
                   2′类黄酮衍生物的IC50值
                 [3H]氟硝安定的化合物抑制(μM)
                                                IC50
2′氯黄酮                                  ＜100μM
8-溴基，2′，6-二氯黄酮                    ＜100μM
2′，6-二氯，7-甲氧基黄酮                  ＜100μM
2′，6-甲氧基黄酮                          ＜100μM
6-溴基，2′-氯黄酮                         ＜100μM
2′，6-二氯黄酮                            ＜100μM
2′-硝基黄酮                               ＜100μM
2′-氨基，6-甲氧基黄酮                         2μM
2′-氯基，6-甲氧基黄酮                     ＜100μM
2′-氯基，6-羟基黄酮                       ＜100μM
从先前的实验得知在2′碳位置上具有一个羟基组的类黄酮显示，对苯二氮卓结合位点增强了的结合亲和力。因此，具有不同取代基的类黄酮，即在2′碳位置上的-Cl、-NO2和-NH2是有机地合成的，需要进一步研究。分析这些类黄酮，只有具有一个-NH2取代基的类黄酮对苯二氮卓结合位点有显著的亲和力。因为-OH和-NH2取代基的非键电子通过σ键奉献电子密度到它们各自的苯环，于是氢给予局部正电荷。不为理论所限，一种可能性的解释是，对有两个取代基的类黄酮，这一奉献回应了为何观察到增强了结合亲和力。然而，卤素取代基强烈地带负电，会通过σ键从碳原子取回电子密度(吸入性的取回)。这一差别可用来说明这两截然不同的取代基组的结合亲和力变化。
本发明已连同参考资料详细地说明和描述了所推荐的实例，其形式及细节可能会有所改变，但不会偏离是项发明的范畴(见所附权利要求)。

Claims (18)

1.一种为有要求的病人提供预防或治疗与BZD-S有关联的综合症的方法，它包括给病人服用有效的无毒剂量化合物，上述化合物包含：
                   化学式I
或其在生理上可接受的盐，其中R7是H或OH，和R5，R6，R8，R3′，R4′，R5′和R6′每一个独立地是H、OH、一个C1-C6烷基、一个C1-C6烯基或者是一个C1-C6烷氧基；此处综合症是指焦虑或惊厥
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述R5是OH。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述R6是OH。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述R7是OH。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述R5和R6均是OH。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述R6和R7均是OH。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述R5和R7均是OH。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述剂量是服用单一等分剂量。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述剂量是服用两等分或更多等分剂量。
10.一种为有需要的病人提供预防或治疗与BZD-S有关联的综合症的方法，它包括给病人服用有效的无毒剂量化合物5，7，2′-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮，或此化合物在生理上可接受的盐；此处综合症是指焦虑或惊厥。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述R5、R6和R7均是OH。
12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述R6是甲氧基。
13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，此处R8是甲氧基。
14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述R6和R8均是甲氧基。
15.一种为有要求的病人提供预防或治疗与BZD-S有关联的综合症的方法，它包括给病人服用有效的无毒剂量化合物，化合物包含：
                    化学式I
或其在生理学上可接受的盐，其中R7是H或OH，和R5，R6，R8，R3′和R4′每一个独立地是H、OH、一个C1-C6烷基、一个C1-C6烯基或者是一个C1-C6烷氧基；此处综合症是指焦虑或惊厥。
16.一种药包，它含有一个或多个充满化合物的容器，化合物包含：
                    化学式I
或其在生理上可接受的盐，其中R7是H或OH，和R5，R6，R8，R3′，R4′，R5′和R6′每一个独立地是H、OH、一个C1-C6烷基、一个C1-C6烯基或者是一个C1-C6烷氧基。
17.如权利要求16所述的药包，其特征在于，它还包含预防或治疗焦虑的化合物的使用说明书。
18.如权利要求16所述的药包，其特征在于，它还包含预防或治疗惊厥的化合物的使用说明书。
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