CN1674888A

CN1674888A - 用于治疗癌症的化合物、其组合物和它们的使用方法

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Publication number: CN1674888A
Application number: CNA038193191A
Authority: CN
Inventors: J·麦肯纳; F·默库里奥; V·普兰特文; W·谢
Original assignee: Signal Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Signal Pharmaceuticals LLC
Priority date: 2002-06-17
Filing date: 2003-06-17
Publication date: 2005-09-28
Also published as: MXPA04012675A; EP1551388A2; NZ537653A; CA2488891A1; AU2003243587B2; US7037936B2; US20060030617A1; US20060142352A1; AU2003243587A1; JP2006515560A; WO2003105774A2; IL165839A0; WO2003105774A3; EP1551388A4

Abstract

本发明主要涉及用于连接酶活性调节的化合物和组合物。本发明还涉及治疗或预防癌症、肿瘤疾病、急性或慢性肾衰竭、炎性疾病、免疫疾病、心血管疾病、老化效应或感染性疾病的本发明化合物、其组合物和方法，该方法包括给予有效量的本发明化合物。本发明还涉及本发明化合物作为细胞、血液、组织或器官的防腐剂或作为干细胞调节剂的用途。

Description

用于治疗癌症的化合物、其组合物和它们的使用方法

本申请要求2002年6月17日提交的美国专利60/389,461号的优先权，其通过引用全文结合到本文中。

1.发明领域

本发明主要涉及用于调节连接酶活性的新化合物和药用组合物。本发明还涉及治疗或预防癌症、肿瘤疾病、急性或慢性肾衰竭、炎性疾病、免疫疾病、心血管疾病、老化效应或感染性疾病的方法，它包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的本发明化合物。本发明还涉及本发明化合物作为细胞、血液、组织或器官的防腐剂或作为干细胞调节剂的用途。

2.发明背景

泛素诱发的蛋白水解是控制许多细胞调节蛋白的破坏的非溶酶体蛋白降解的重要途径，所述细胞调节蛋白包括p27、p53、p300、细胞周期蛋白、E2F、STAT-1、c-Myc、c-Jun、EGF受体、IkBa、NfkB和b-catenin(Pagano(1997)FASEB J.11：1067)。泛素是存在于真核细胞的高度保守的76-氨基酸多肽。该泛素途径引起多泛素链与其后被多催化蛋白酶体复合物(complex)降解的靶作用物的共价连接(Goldberg等.(1995)Science 269：682-685)。已知调节蛋白的泛素化的许多步骤。最初，泛素活化酶(E1)催化生成连接泛素的高能量硫代酸酯，它再转化为许多泛素缀合酶之一的反应性半胱氨酸残基。在靶蛋白中的泛素最终转化为e-氨基或反应性赖氨酸残基发生于无需泛素连接酶(E3)蛋白的反应中。

P27/Kipl是细胞周期蛋白依赖的激酶(CDK)抑制剂，它主要通过泛素介导的蛋白水解途径来调节。该调节蛋白p27/Kipl的降解表明需要G₁至S期的转变(Sheaff等，(1997)Genes Dev.11：1464-1478)。在与蛋白2(SKP2)有关的S期激酶和细胞周期蛋白-依赖的激酶亚单位1(CKSl)两者均被剔除的小鼠中，p27/Kipl被积聚至高水平而增殖细胞被抑止于G₁向S期的过渡。而且，p27/Kipl在海拉细胞中的过度表达导致与细胞周期G₁抑制有关的生长抑制(Tang和Nordin(1997)Bioch.and Biophys.Res.Comm.238：534-538)。p27/Kipl的过度表达也诱发细胞周期抑制于G₁期和HCC-9204细胞系(人体肝细胞癌)和肺癌中的随后的细胞凋亡(Yu等.(1998)PNAS95：11324-11329)。而且，p27/Kipl的过度表达有抗血管生成作用(Goukassian等.(2001)FASEBJ.15：1877-1885)。

p27/Kipl在Thr¹⁸⁷位被CDK2的磷酸化建立了对含称为skpl-cull-f-box(“SCF”)的蛋白E3泛素-蛋白连接酶的SKP2的结合位点。p27/Kipl被SCF的后续泛素化导致p27/Kipl被蛋白酶体复合物降解(Alessandrini等.(1997)Leukemia 11：342-345)。而且，仅在p27/Kip的Thr¹⁸⁷被磷酸化时，SKP2(其作为SCFl泛素连接酶复合物的受体组件起作用)结合于与CKSl联合的p27/Kipl。该临界连接和相互作用对p27/Kipl的泛素化和降解似乎是必要的。因此，E3泛素-蛋白连接酶调节p27/Kipl的泛素化，随后导致p27/Kipl的降解，为癌症、肿瘤和其它增殖性疾病的治疗和预防提供了机会。

除此之外，具有将细胞延缓于细胞周期某一时点(point)而对细胞长期生存力无不利影响的能力的化合物可用作需要此类保护的细胞、血液、组织或器官的防腐剂。多达60％的贮存人血和血液制品可能由于有限的“存放期”而丢弃。生物制品例如全部细胞的降解是细胞水平的分解代谢过程的结果，它与贮存温度对反比。在G1期能抑止细胞的化合物可增加生物制品的“存放期”或允许所述生物制品可于升高的温度下贮存或运输而不增加分解代谢的速度。因此，仍需要有能力保护生物制品的化合物。

2.1癌症和肿瘤疾病

在全世界范围，癌症影响约2千万成人和儿童，今年，将诊断出超过9百万的新病例(国际癌症研究机构；www.iarc.fr)。根据美国癌症协会的预测，今年约563,100名美国人，每天超过1500人死于癌症。1990年始，仅美国就有近5百万条生命丧失于癌症，并诊断出约1千2百万新病例。

目前，癌症的治疗包括手术、化疗和/或放疗以根除患者的肿瘤细胞(参见，例如，Stockdale，1998， Scientific American：Medicine第三卷中Rubenstein和Federman编辑的“Principles of Cancer PatientManagement”，第12章第IV部分)。所有这些方法对患者都有严重的伤害。手术，例如，可能由于患者的健康状况而受抵触或不为患者接受。另外，手术也许不能完全除去肿瘤组织。只有在放射过的肿瘤组织表现出比正常组织对放射线更高的敏感性时，放疗才是有效的，而且放疗也常会引起严重的副作用。(同上)关于化疗，可获得大量的治疗肿瘤的化疗药物。然而，虽然可得到各种化疗剂，化疗仍有许多缺陷(参见，例如，Stockdale，1998， Scientific American Medicine第三卷中Rubenstein和Federman编辑的“Principles of Cancer PatientManagement”，第12章第10部分)。几乎所有的化疗剂都是有毒的，化疗造成明显的，往往是危险的副作用，包括剧烈的恶心、腹泻、骨髓抑制、免疫抑制等。而且，许多肿瘤细胞可通过对多种药物的耐药性对抗化学药物或产生对它们的耐药性。

所以，本领域非常需要有降低的或没有前述副作用的用于治疗或预防癌症或肿瘤病的新的化合物、组合物和方法。而且，有必要为癌症治疗提供增加特异性并降低毒性的癌细胞特异性疗法。

本申请第2部分中任何参考文献的引文或标识并非认可这些参考文献可作为本发明的现有技术而得到。

3.发明概要

本发明涉及本发明的化合物，例如式(I)化合物，包括其前药、包合物、水合物、溶剂合物、多晶型物和药学上可接受的盐：

其中的变量如下定义。

本发明也涉及包含有效量的本发明化合物的药用组合物。

本发明的化合物及其组合物用于调节连接酶的活性；治疗或预防对调节连接酶活性有反应的疾病；治疗或预防对连接酶活性抑制有反应的疾病；治疗或预防对连接酶活性的激活有反应的疾病；调节E3泛素-蛋白连接酶活性；调节E3泛素-蛋白连接酶介导的p27/Kipl的泛素化；调节细胞的p27/Kipl；抑制细胞生长；治疗或预防与化疗或放疗有关的副作用；增加低温保存的细胞、血液、组织、器官或有机体的寿命；调节和控制哺乳动物尤其是人的干细胞以及特异性细胞和组织系的分化和成熟，特别是源于产后胎盘的胚胎类干细胞的分化或分离自例如脐带血来源的干细胞的分化；治疗或预防需要这种治疗或预防的患者的癌症或肿瘤疾病；或抑制癌细胞或肿瘤细胞的生长。

本发明还涉及治疗和预防癌症、肿瘤疾病、急性或慢性肾衰竭、炎性疾病、免疫疾病、心血管疾病、老化效应或感染性疾病的方法，它包括向有需要的患者给予有效量的本发明化合物。本发明还涉及本发明化合物作为细胞、血液、组织或器官的防腐剂或作为干细胞调节剂的用途。

4.发明详述

4.1定义

本文所用的术语“患者”指动物，优选哺乳动物例如非灵长目动物(例如，牛、马、羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、小鼠、大鼠、兔或豚鼠)或灵长目动物(例如，猴子和人)，最优选人。

“烷基”指具有1-10个碳原子的饱和直链(无支链)或支链非环状烃。“低级烷基”指具有1-4个碳原子的如上定义的烷基。代表性饱和直链(无支链)烷基包括甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基；而饱和支链烷基包括异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2，3-二甲基丁基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、2，3-二甲基己基、2，4-二甲基己基、2，5-二甲基己基、2，2-二甲基戊基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基戊基、3，3-二甲基己基、4，4-二甲基己基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、2-甲基-4-乙基戊基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2-甲基-4-乙基己基、2，2-二乙基戊基、3，3-二乙基己基、2，2-二乙基己基、3，3-二乙基己基等。

“链烯基”指具有2-10个碳原子并包括至少一个碳-碳双键的直链或支链非环状烃。代表性的直链和支链(C₂-C₁₀)链烯基包括乙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2，3-二甲基-2-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、1-辛烯基、2-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、2-癸烯基、3-癸烯基等。链烯基可未取代或被取代。“环亚烷基”是具有3-8个碳原子并包括至少一个碳-碳双键的环，其中所述环可具有1-3个杂原子。

“炔基”指具有2-10个碳原子并包括至少一个碳-碳三键的直链或支链的非环状烃。代表性的直链和支链-(C₂-C₁₀)炔基包括己炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、5-己炔基、1-庚炔基、2-庚炔基、6-庚炔基、1-辛炔基、2-辛炔基、7-辛炔基、1-壬炔基、2-壬炔基、8-壬炔基、1-癸炔基、2-癸炔基、9-癸炔基等。炔基可未取代或被取代。

术语“卤素”和“卤代基”指氟、氯、溴或碘。

“卤代烷基”指被一个或多个卤原子取代的烷基，其中烷基定义如上，包括-CH₂F、-CH₂Cl、CH₂Br、-CH₂I、-(CH₂)₂F、-(CH₂)₂Cl、-(CH₂)₂Br、-(CH₂)₂I、-CF₃、-CH₂CF₃、-(CH₂)₂CF₃等。

“乙氧基”指-OC(O)烷基，其中烷基定义如上，包括-OC(O)CH₃、-OC(O)CH₂CH₃、-OC(O)(CH₂)₂CH₃、-OC(O)(CH₂)₃CH₃、-OC(O)(CH₂)₄CH₃、-OC(O)(CH₂)₅CH₃等。

“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基定义如上，包括-OCH₃、-OCH₂CH₃、-O(CH₂)₂CH₃、-O(CH₂)₃CH₃、-O(CH₂)₄CH₃、-O(CH₂)₅CH₃等。

“低级烷氧基”指-O-(低级烷基)，其中的低级烷基如上所述。

“芳基”指含5-10个环原子的碳环芳香族基团。代表性的实例包括，但不限于，苯基、甲苯基、蒽基、芴基、茚基、甘菊环基、吡啶基和萘基，和包括5，6，7，8-四氢萘基的苯并稠合碳环基团。碳环芳族基团可未取代或被取代。在一实施方案中，所述碳环芳族基团为苯基。

“环烷基”指具有碳和氢原子且无碳-碳多键的单环或多环饱和环。环烷基的实例包括，但不限于，(C₃-C₇)环烷基，包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基，和饱和环萜和双环萜。环烷基可未取代或被取代。在一个实施方案中，环烷基是单环或双环。

“单-烷基氨基”指-NH(烷基)，其中烷基定义如上，例如-NHCH₃、-NHCH₂CH₃、-NH(CH₂)₂CH₃、-NH(CH₂)₃CH₃、-NH(CH₂)₄CH₃、-NH(CH₂)₅CH₃等。

“二烷基氨基”指-N(烷基)(烷基)，其中各烷基独立为如上定义的烷基，包括-N(CH₃)₂、-N(CH₂CH₃)₂、-N((CH₂)₂CH₃)₂、-N(CH₃)(CH₂CH₃)等。

“烷基氨基”指如上定义的单烷基氨基或双烷基氨基，例如NH(烷基)，其中各烷基独立为如上定义的烷基，包括-NHCH₃、-NHCH₂CH₃、-NH(CH₂)₂CH₃、-NH(CH₂)₃CH₃、-NH(CH₂)₄CH₃、-NH(CH₂)₅CH₃和-N(烷基)(烷基)，其中各烷基独立为如上定义的烷基，包括-N(CH₃)₂、-N(CH₂CH₃)₂、-N((CH₂)₂CH₃)₂、-N(CH₃)(CH₂CH₃)等。

“羧基”指-COOH。

“氨基烷基”指-(烷基)-NH₂，其中烷基定义如上，包括-CH₂-NH₂、-(CH₂)₂-NH₂、-(CH₂)₃-NH₂、-(CH₂)₄-NH₂、-(CH₂)₅-NH₂等。

“单烷基氨基烷基”指-(烷基)-NH(烷基)，其中各烷基独立为如上定义的烷基，包括-CH₂-NH-CH₃、-CH₂-NHCH₂CH₃、-CH₂-NH(CH₂)₂CH₃、-CH₂-NH(CH₂)₃CH₃、-CH₂-NH(CH₂)₄CH₃、-CH₂-NH(CH₂)₅CH₃、-(CH₂)₂-NH-CH₃等。

“二烷基氨基烷基”指-(烷基)-N(烷基)(烷基)，其中各烷基独立为如上定义的烷基，包括-CH₂-N(CH₃)₂、-CH₂-N(CH₂CH₃)₂、-CH₂-N((CH₂)₂CH₃)₂、-CH₂-N(CH₃)(CH₂CH₃)、-(CH₂)-N(CH₃)₂等。

“杂芳基”指5-10元的芳族杂环，它具有至少一个选自氮、氧和硫的杂原子并含至少一个碳原子，包括单和双环系统。代表性的杂芳基有三唑基、四唑基、噁二唑基、吡啶基、呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、喹啉基、吡咯基、吲哚基、噁唑基、苯并噁唑基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、异噁唑基、吡唑基、异噻唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、噌啉基、2，3-二氮杂萘基、喹唑啉基、嘧啶基、氧杂环丁烷基、氮杂基、哌嗪基、吗啉基、二噁烷基、硫杂环丁烷基(thietanyl)和噁唑基。

“杂环基”指饱和或不饱和的5-7元单环或7-10元双环杂环，且其含1-4个独立选自氮、氧和硫的杂原子，且其中的氮和硫杂原子可任选被氧化，所述氮杂原子可任选被季化，包括其中与苯环稠合的任一上述杂环的双环。所述杂环可经任何杂原子或碳原子连接。杂环包括如上定义的杂芳基。代表性的杂环包括吗啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、乙内酰脲基、戊内酰胺基、环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基(primidinyl)、四氢噻吩基、四氢噻喃基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、四氢噻喃基等。

“稠合苯基的杂环”指在苯环的两个相邻碳原子上连接于苯环的杂环，其中的杂环如上定义。

“卤代烷基”指具有一个或多个氢原子被如上定义的卤素取代的烷基，其中的烷基如上定义，包括-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CBr₃、-CHBr₂、-CH₂Br、-CCl₃、-CHCl₂、-CH₂Cl、-CI₃、-CHI₂、-CH₂I、-CH₂-CF₃、-CH₂-CHF₂、-CH₂-CH₂F、-CH₂-CBr₃、-CH₂-CHBr₂、-CH₂-CH₂Br、-CH₂-CCl₃、-CH₂-CHCl₂、-CH₂-CH₂Cl、-CH₂-CI₃、-CH₂-CHI₂、-CH₂-CH₂I等。

“羟基烷基”指具有一个或多个氢原子被羟基取代的烷基，其中的烷基如上定义，它包括-CH₂OH、-CH₂CH₂OH、-(CH₂)₂CH₂OH、-(CH₂)₃CH₂OH、-(CH₂)₄CH₂OH、-(CH₂)₅CH₂OH、-CH(OH)-CH₃、-CH₂CH(OH)CH₃等。

“羟基”指-OH。

“磺酰基”指-SO₃H。

“磺酰基烷基”指-SO₂-(烷基)，其中烷基如上定义，包括-SO₂-CH₃、-SO₂-CH₂CH₃、-SO₂-(CH₂)₂CH₃、-SO₂-(CH₂)₃CH₃、-SO₂-(CH₂)₄CH₃、-SO₂-(CH₂)₅CH₃等。

“亚磺酰基烷基”指-SO-(烷基)，其中烷基如上定义，包括-SO-CH₃、-SO-CH₂CH₃、-SO-(CH₂)₂CH₃、-SO-(CH₂)₃CH₃、-SO-(CH₂)₄CH₃、-SO-(CH₂)₅CH₃等。

“硫代烷基”指-S-(烷基)，其中烷基如上，它包括-S-CH₃、-S-CH₂CH₃、-S-(CH₂)₂CH₃、-S-(CH₂)₃CH₃、-S-(CH₂)₄CH₃、-S-(CH₂)₅CH₃等。

用于本文的术语“取代的”指其中至少一个氢原子被取代基所取代的上述任何基团(即，芳基、杂芳基、杂环基或环烷基)。在一个实施方案中，被取代的基团的各个碳原子被不多于两个的取代基所取代。在另一实施方案中，被取代的基团的各个碳原子被不多于一个的取代基所取代。在酮取代基的情况下，两个氢原子被经双键连接于碳原子的氧取代。取代基包括卤素、羟基、烷基、卤代烷基、单或双取代的烷基氨基、芳基、杂环、-NR_aR_b、-NR_aC(＝O)R_b、-NR_aC(＝O)NR_aR_b、-NR_aC(＝O)ORb-NR_aSO₂R_b、-OR_a、-C(＝O)R_aC(＝O)OR_a-C(＝O)NR_aR_b、-OC(＝O)R_a、-OC(＝O)OR_a、-OC(＝O)NR_aR_b、-NR_aSO₂R_b，其中R_a和R_b相同或不同，且独立为氢、氨基、烷基、卤代烷基、芳基或杂环，或其中R_a和R_b与其相连的氮原子一起形成杂环。

本文所用的“有效量”包括足以破坏、修饰、控制或去除原发性的、局部的或转移的癌细胞或组织；延缓或最大限度地减少癌症的扩散；或在癌症、肿瘤疾病、急性或慢性肾衰竭、炎性疾病、免疫疾病、心血管疾病、老化效应或感染性疾病的治疗或处理中足以提供治疗益处的本发明化合物的量。“有效量”也包括足以导致癌症或肿瘤细胞死亡的本发明化合物的量。“有效量”还包括足以在体外或体内调节(例如活化或抑制，优选抑制)连接酶活性的本发明化合物的量。

本文所用的“连接酶活性的调节”指具有连接酶活性的一种或多种蛋白的活性速度的抑制、活化或延缓，优选抑制，或活性速度的增加。在一个实施方案中，“连接酶活性的调节”指具有连接酶活性的一种或多种蛋白的活性速度的抑制。在另一实施方案中，“连接酶活性的调节”指连接酶复合物(例如，p27/Kipl复合物)的调节。在又一实施方案中，“连接酶活性的调节”指所述连接酶复合物中的一种或多种蛋白的调节。在又一实施方案中，“连接酶活性的调节”指具有连接酶活性的一种或多种蛋白的活化。在又一实施方案中，“连接酶活性的调节”指具有连接酶活性的一种或多种蛋白的活性速度的延缓。在又一实施方案中，“连接酶活性的调节”指具有连接酶活性的一种或多种蛋白的活性速度的增加。连接酶活性的调节可在mRNA水平、蛋白表达水平和激酶活性水平上完成。

本文所周的“对连接酶活性调节的响应”指具有连接酶活性的一种或多种蛋白的活性被本发明化合物抑制或活化，优选被抑制。

本文所用的“E3泛素-蛋白连接酶活性的调节”指E3泛素-蛋白连接酶活性被本发明化合物抑制或活化，优选被抑制。

本文所用的“p27/Kipl水平的调节”指相对于没有接触过本发明化合物的细胞，接触过本发明化合物的细胞中的p27/Kipl的量增加或降低，优选增加。

本文所用的“预防有效量”指足以预防癌症复发或扩散的本发明化合物的量。预防有效量可以指足以预防患者包括但不限于易患癌症或先前暴露于致癌物的那些患者的癌症复发或扩散或癌症发生的本发明化合物的量。预防有效量也可以指本发明化合物的量，它在癌症的预防方面提供预防作用。而且，涉及另一预防药物的预防有效量指与在癌症预防中提供预防益处的本发明化合物联合的那种预防药物的量。关于本发明化合物的用量，术语“预防有效量”可包括改进整个预防或增强预防效果或提供与另一种预防药物一起的协同作用的量。

用于本文的术语“肿瘤”指细胞或组织(例如，瘤)的非正常生长，它可以是良性或恶性肿瘤。

用于本文的术语“控制”在一个实施方案中，包括提供给患者一种或多种来自本发明化合物的有益作用，但并未治愈所述疾病。

在某些实施方案中，向患者提供本发明化合物以“控制”疾病，以预防所述疾病的发展或恶化。

用于本文的术语“预防”包括预防患者癌症的复发、扩散或发生。

用于本文的术语“治疗”包括根除、去除、缓和，或控制原发性的、局部的，或转移癌组织；和最大限度地降低或延缓癌症的扩散。

用于本文的短语“本发明化合物”包括式(I)、式(II)、式(III)(包括式(I)-(III)的化合物的各个具体实施方案)的任何化合物及其包合物、水合物、溶剂合物、多晶型物或药学上可接受的盐。在一个实施方案中，本发明化合物包括立体化学纯化合物，例如，基本无其它立体异构体的那些(例如，大于85％ee，大于90％ee，大于95％ee，大于97％ee，或大于99％ee)。

本文所用的术语“药学上可接受的盐”指由药学上可接受的无毒酸或碱包括无机酸和碱和有机酸和碱制备的盐。本发明化合物的适用的药学上可接受的碱加成盐包括，但不限于由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制备的金属盐或由赖氨酸、N，N’-二苄基乙二胺、氯代普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、1，2-乙二胺、麦格鲁明(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制备的有机盐。适用的无毒酸包括，但不限于，无机和有机酸，例如乙酸，藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、氢氯酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、硫酸、酒石酸和对甲苯磺酸。优选的无毒酸包括氢氯酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和甲磺酸。因而优选盐的实例包括盐酸盐和甲磺酰盐。其它一些为本领域所熟知，参见例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing，Easton PA(1990)or Remington：The Scienceand Practice of Pharmacy，第19版，Mack Publishing，Easton PA(1995)。

除非另有说明，用于本文的术语“多晶型”指本发明化合物或其复合物的固体结晶形式。同一化合物的不同多晶型会表现出不同的物理、化学和/或光谱性质。不同的物理性质包括，但不限于，稳定性(例如，对热和光的稳定性)、压缩性和密度(在配制和产品制备中很重要)和溶解速度(它可影响生物利用率)。稳定性的不同来自于化学活性的变化(例如，不同的氧化，例如包含一种多晶型比包含另一种多晶型的剂型褪色更快)或机械性质的变化(例如，当动力学倾向的多晶型转化为热力学上更稳定的多晶型时，片剂在贮存时碎裂)或两者(例如，一种多晶型的片剂在高湿度下更易于破碎)。多晶型的不同物理性质会影响其加工。例如，与另一多晶型阶段比，由于例如其颗粒的形状或大小分布，此多晶型也许更可能形成溶剂合物或可能更难于过滤或洗出杂质。

用于本文的术语“溶剂合物”指本发明的化合物或其盐，它还包括化学计算或非化学计算量的通过非共价的分子间力结合的溶剂。优选的溶剂是挥发性的、无毒的和/或以痕量提供给人是可接受的。

用于本文的术语“水合物”指本发明的化合物或其盐，它还包括化学计算或非化学计算量的通过非共价的分子间力结合的水。

用于本文的术语“包合物”指呈晶格形式的含有空间(例如，通道)的本发明化合物或其盐，它内含被截留的客体(guest)分子(例如，溶剂或水)。

除非另有说明，用于本文的术语“前药”指在生物条件下(体外或体内)可水解、氧化或发生其它反应以提供活性化合物，具体为本发明化合物的本发明化合物。前药的实例包括，但不限于，本发明化合物的代谢物，它包括可生物水解的部分，例如，可生物水解的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酰脲和可生物水解的磷酸酯类似物。优选地，带羧酸官能团的化合物的前药是羧酸的低级烷基酯。通过所述分子上的任何羧酸部分的酯化可方便地形成羧酸酯。一般可用熟知的方法，例如Burger’s Medicinal Chemistry and Drug Discovery第六版(Donald J.Abraham编辑，2001，Wiley)和Design and Application ofProdrugs(H.Bundgaard编辑，1985，Harwood Academic PublishersGmfh)所述的那些方法制备前药。

在一个实施方案中，向患者例如兽用的哺乳动物或临床病人给药时，本发明的化合物以分离的形式给药。本文所用的“分离的”指本发明化合物从或者(a)天然来源例如，植物、细胞或细菌培养物，或者(b)合成的有机化学反应混合物的其它成分中分离出来。优选地，经常规技术纯化本发明化合物。本文所用的“纯化”指分离时，所述分离物纯度大于90％，在一实施方案中，纯度大于95％，在又一实施方案中，纯度大于99％，在另一实施方案中，纯度大于99.9％。

4.2本发明化合物

如上所述，本发明涉及本发明的化合物，例如式(I)化合物及其前药、包合物、水合物、溶剂合物、多晶型和药学上可接受的盐：

其中：

X、W和U在每次出现时独立为H、卤素、羟基、羧基、烷氧基、烷基氨基、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基、C₂-C₁₀链烯基、C₂-C₁₀炔基、卤代烷基、酰氧基、硫代烷基、磺酰基、亚磺酰基烷基、磺酰基烷基、羟基烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的环烷基、-C(＝O)OR₁、-OC(＝O)R₁、-C(＝O)NR₁R₂、-C(＝O)NR₁OR₂、-SO₂NR₁R₂、-NR₁SO₂R₂、-CN、-NO₂、-NR₁R₂、-NR₁C(＝O)R₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qOR₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qR₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qNR₁R₂、-O(CH₂)_qNR₁R₂；

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Y在每次出现时独立为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基，或当o为1时，Y可为(＝O)；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

m为0-5；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5，和

r为0-5。

在一个实施方案中，式(I)化合物不包括(4-{[3-(2，2-二甲基-四氢-吡喃-4-基)-4-苯基-丁基氨基]-甲基}-苯基)-二甲基-胺)。

在另一实施方案中，式(I)化合物是其中Z为O的那些化合物。

在又一实施方案中，式(I)化合物是其中Q为H的那些化合物。

在又一实施方案中，p为1或2。在另一实施方案中，p为2。

在另一实施方案中，式(I)化合物是其中相对Z的两个α碳未被取代的那些化合物。在另一实施方案中，式(I)化合物是其中相对Z的两个α碳被取代的那些化合物。在又一实施方案中，式(I)化合物是其中相对Z的两个α碳被双取代的那些化合物。在又一实施方案中，式(I)化合物是其中相对Z的两个α碳被单取代的那些化合物。在又一实施方案中，式(I)化合物是其中相对Z的一个α碳被双取代而相对于Z的其它α碳被单取代的那些化合物。

在又一实施方案中，W为H、卤素、羟基、羧基、烷氧基、烷基氨基、C₂-C₁₀链烯基、C₂-C₁₀炔基、卤代烷基、酰氧基、硫代烷基、磺酰基、亚磺酰基烷基、磺酰基烷基、羟基烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的环烷基、-C(＝O)OR₁、-OC(＝O)R₁、-C(＝O)NR₁R₂、-C(＝O)NR₁OR₂、-SO₂NR₁R₂、-NR₁SO₂R₂、-CN、-NO₂、-NR₁R₂、-NR₁C(＝O)R₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qOR₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qR₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qNR₁R₂或-O(CH₂)_qNR₁R₂。

在另一实施方案中，U和X为H、卤素、羟基、羧基、烷基氨基、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基、C₂-C₁₀链烯基、C₂-C₁₀炔基、卤代烷基、酰氧基、硫代烷基、磺酰基、亚磺酰基烷基、磺酰基烷基、羟基烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的环烷基、-C(＝O)OR₁、-OC(＝O)R₁、-C(＝O)NR₁R₂、-C(＝O)NR₁OR₂、-SO₂NR₁R₂、-NR₁SO₂R₂、-CN、-NO₂、-NR₁R₂、-NR₁C(＝O)R₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qOR₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qR₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qNR₁R₂或-O(CH₂)_qNR₁R₂。

在另一实施方案中，本发明涉及本发明的化合物，例如式(II)化合物及其前药、包合物、水合物、溶剂合物、多晶型和药学上可接受的盐：

其中：

X’为H、羟基、羧基、烷氧基、烷基氨基、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基、C₂-C₁₀链烯基、C₂-C₁₀炔基、卤代烷基、酰氧基、硫代烷基、磺酰基、亚磺酰基烷基、磺酰基烷基、羟基烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的环烷基、-C(＝O)OR₁、-OC(＝O)R₁、-C(＝O)NR₁R₂、-C(＝O)NR₁OR₂、-SO₂NR₁R₂、-NR₁SO₂R₂、-CN、-NO₂、-NR₁R₂、-NR₁C(＝O)R₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qOR₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qR₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qNR₁ _R2、-O(CH₂)_qNR₁R₂；

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5，和

r为0-5。

在一个实施方案中，式(II)化合物不包括(4-{[3-(2，2-二甲基-四氢-吡喃-4-基)-4-苯基-丁基氨基]-甲基}-苯基)-二甲基-胺。

在另一实施方案中，式(II)化合物是其中Z为O的那些化合物。

在又一实施方案中，式(II)化合物是其中Q为H的那些化合物。

在又一实施方案中，式(II)化合物是其中X、X’、U或W之一不为H的那些化合物。

在另一实施方案中，式(II)化合物是其中相对Z的两个α碳未被取代的那些化合物。在另一实施方案中，式(II)化合物是其中相对Z的两个α碳被取代的那些化合物。在又一实施方案中，式(II)化合物是其中相对Z的两个α碳被双取代的那些化合物。在又一实施方案中，式(II)化合物是其中相对Z的两个α碳被单取代的那些化合物。在又一实施方案中，式(II)化合物是其中相对Z的一个α碳被双取代而相对于Z的其它α碳被单取代的那些化合物。

在又一实施方案中，本发明涉及本发明的化合物，例如式(III)化合物及其前药、包合物、水合物、溶剂合物、多晶型和药学上可接受的盐。

X、W和U在每次出现时独立为H、卤素、羟基、羧基、烷氧基、烷基氨基、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基、C₂-C₁₀链烯基、C₂-C₁₀炔基、卤代烷基、酰氧基、硫代烷基、磺酰基、亚磺酰基烷基、磺酰基烷基、羟基烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的环烷基、-C(＝O)OR₁、-OC(＝O)R₁、-C(＝O)NR₁R₂ ₂、-C(＝O)NR₁OR₂、-SO₂NR₁R₂、-NR₁SO₂R₂、-CN、-NO₂、-NR₁R₂、-NR₁C(＝O)R₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qOR₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qR₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qNR₁R₂、-O(CH₂)_qNR₁R₂；

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

o为0-2；

p为0-2；和

q为0-5。

在一个实施方案中，式(III)化合物不包括(4-{[3-(2，2-二甲基-四氢-吡喃-4-基)-4-苯基-丁基氨基]-甲基}-苯基)-二甲基-胺)。

在另一实施方案中，式(III)化合物是其中Z为O的那些化合物。

在又一实施方案中，式(III)化合物是其中Q为H的那些化合物。

在另一实施方案中，式(III)化合物是其中相对Z的两个α碳未被取代的那些化合物。在另一实施方案中，式(III)化合物是其中相对Z的两个α碳被取代的那些化合物。在又一实施方案中，式(III)化合物是其中相对Z的两个α碳被双取代的那些化合物。在又一实施方案中，式(III)化合物是其中相对Z的两个α碳被单取代的那些化合物。在又一实施方案中，式(III)化合物是其中相对Z的一个α碳被双取代而相对于Z的其它α碳被单取代的那些化合物。

本发明还涉及药用组合物，它包含有效量的本发明化合物和药学上可接受的载体。在一个实施方案中，所述药用组合物适用于治疗与连接酶调节相关的疾病。在另一实施方案中，所述药用组合物适用于治疗与连接酶抑制相关的疾病。

本发明化合物及其药用组合物用于调节连接酶活性；治疗或预防对连接酶活性调节有反应的疾病；治疗或预防对连接酶活性抑制有反应的疾病；治疗或预防对连接酶活性活化有反应的疾病；调节E3-泛素-蛋白连接酶活性；调节E3泛素-蛋白连接酶介导的p27/Kipl泛素化；调节细胞的p27/Kipl；抑制细胞生长；治疗或预防与化疗或放疗有关的副作用；增加低温保存的细胞、血液、组织、器官或有机体的寿命；调节和控制哺乳动物尤其是人干细胞以及特异性细胞和组织系的分化和成熟，具体说来，指发源于产后胎盘的胚胎类干细胞的分化或分离自来源例如脐带血的干细胞的分化；治疗或预防需要这种治疗或预防的患者的癌症或肿瘤疾病；或抑制癌细胞或肿瘤细胞生长。

在另一实施方案中，本发明涉及在患者中治疗或预防对连接酶活性调节有反应的疾病的方法，它包括向需要这种治疗或预防的患者给予有效量的本发明化合物。患者的对连接酶活性调节有反应的疾病包括癌症、肿瘤疾病、炎性疾病、感染性疾病、心血管疾病和免疫性疾病。

在另一实施方案中，本发明涉及在患者中治疗或预防对p27/Kipl的细胞水平的调节有反应的疾病的方法，它包括向需要这种治疗或预防的患者给予有效量的本发明化合物。患者的对p27/Kipl的细胞水平的调节有反应的疾病包括癌症、肿瘤疾病、炎性疾病、感染性疾病、心血管疾病和免疫性疾病。

在另一实施方案中，本发明涉及抑制细胞生长的方法，它包括使需要生长抑制的细胞与有效量的本发明化合物接触。

在另一实施方案中，本发明涉及使癌症或肿瘤细胞死亡的方法，它包括使癌症或肿瘤细胞与有效量的本发明化合物接触。

在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防与化疗或放疗相关的副作用的方法，它包括向需要这种治疗或预防的患者给予有效量的本发明化合物。与化疗或放疗有关的副作用包括低血细胞计数、恶心、腹泻、口腔损害和秃发(掉发)。

在另一实施方案中，本发明涉及细胞、血液、组织、器官或有机体的保存方法，它包括使细胞、血液、组织、器官或有机体与有效量的本发明化合物接触。

在另一实施方案中，本发明涉及调节或控制哺乳动物干细胞的分化或成熟的方法，它包括使所述细胞与有效量的本发明化合物接触。

在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防患者的癌症或肿瘤疾病的方法，它包括向需要这种治疗或预防的患者给予有效量的本发明化合物。

在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防患者的癌症或肿瘤疾病的方法，它包括使癌症或肿瘤细胞与有效量的本发明化合物接触。

在另一实施方案中，本发明涉及抑制癌细胞或肿瘤细胞生长的方法，它包括使癌细胞或肿瘤细胞与有效量的本发明化合物接触。

在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防患者的急性或慢性肾衰竭的方法，它包括向需要这种治疗的患者给予有效量的本发明化合物。

在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防患者炎性疾病的方法，它包括向需要这种治疗或预防的患者给予有效量的本发明化合物。

在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防患者老化效应的方法，它包括向需要这种治疗或预防的患者提供有效量的本发明的化合物。老化效应包括sarcopenia(肌肉质量丧失)和失忆。

在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防患者感染性疾病的方法，它包括向需要这种治疗或预防的患者给予有效量的本发明化合物。

在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防患者免疫性疾病的方法，它包括向需要这种治疗或预防的患者给予有效量的本发明化合物。

在又一实施方案中，本发明涉及患者心血管疾病的治疗或预防方法，它包括向需要这种治疗或预防的患者给予有效量的本发明化合物。

4.3本发明化合物的制备

用市售得到的起始原料和常规有机反应和试剂可制备本发明化物。

流程I

其中变量Z表示碳或氧，变量R₁表示烷基，在一具体实施方案中为低级烷基(例如甲基)，变量X和R在每次出现时独立表示一个或多个任选的取代基(例如卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、氨基、烷基氨基或本领域技术人员所知的任何其它适用的取代基，包括在上面4.1节提到的那些)，变量n表示0-2的整数。本领域的技术人员会理解，根据所用具体的起始原料和试剂对流程I进行些许修改也许是必要的。

流程II

其中的变量Z表示碳或氧，变量R’表示取代或未取代的苯基。

本发明化合物的说明实例的实施例1的化合物((4-{[3-(2，2-二甲基-四氢-吡喃-4-基)-4-苯基-丁基氨基]-甲基}-苯基)-二甲基-胺)可按照下面流程III所示制备：

流程III

实施例1化合物也可从ChemBridge Corporation(16981 Via Tazon，suite G，San Diego，CA 92127；分类号5936317)购得。市售得到的实施例1化合物经HPLC(20-100％梯度：丙腈/水/1％三氟乙酸)显示有一个峰。

4.4示例性化合物

本发明化合物的说明性实例包括：

及其前药、包合物、水合物、溶剂合物、多晶型和药学上可接受的盐

4.5治疗/预防给药及组合物

本发明化合物有利地用于兽用和人用药物。例如，本发明化合物用于癌症、肿瘤疾病、急性或慢性肾衰竭、炎性疾病、免疫性疾病、心血管疾病、化疗或放疗的副作用、老化效应或传染性疾病的治疗或预防。本发明化合物还用于抑制癌细胞或肿瘤细胞的生长。

包括有效量的本发明化合物的本发明药用组合物可经任何方便途径例如通过输液或大剂量注射、通过上皮或皮肤粘膜衬里(例如口腔粘膜、直肠粘膜和肠粘膜等)吸收给药，且可与另一种治疗剂一起给药。可以全身或局部给药。已知各种传递系统例如用脂质体包囊化、微粒、微胶囊或胶囊且可用于本发明化合物的给药。在某些实施方案中，向患者给予不止一种本发明的化合物。给药方法包括但不限于真皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、口腔、舌下、鼻内、脑内、阴道内、经皮、直肠、经吸入或对耳、鼻、眼或皮肤的局部给药。优选的给药方式由医生判断，并将部分地取决于医学疾病的部位(例如癌症的部位)。

在具体实施方案中，可能需要向需要治疗的部位局部施加一种或多种本发明化合物。这可以例如，但不限于，经手术期间的局部输液、局部施加例如与手术后的伤口敷料结合、经注射、通过插管、通过栓剂或通过植入物(所述植入物是多孔的、非多孔的或明胶材料，包括膜例如sialastic膜或纤维)来实现。在一个实施方案中，可通过在癌、瘤或肿瘤或肿瘤发生前组织的部位(或前部位)的直接注射给药。

在某些实施方案中，也希望用任何适用的途径包括心室内的和鞘内注射给予一种或多种本发明化合物。通过例如连着贮器例如奥马耶贮器的心室内的导管实现心室内注射。

也可用吸入器或雾化吸入器和带气雾化剂的制剂，或通过碳氟化合物中的灌注或合成的肺表面活性剂进行肺部给药。在某些实施方案中，本发明化合物可与常规粘合剂和载体例如甘油三酯一起配制成栓剂。

在另一实施方案中，本发明化合物可用囊泡，特别是脂质体传递(参见Langer，Science 249：1527-1533(1990)；Treat等，Liposomes inthe Therapy of Infectious Disease and Cancer中，Lopez-Berestein andFidler(编辑)，Liss，New York，第353-365页(1989)；Lopez-Berestein，出处同上，第317-327页；全部参见出处同上)。

在又一实施方案中，可用控释系统传递本发明化合物。在一实施方案中，可用泵(参见Langer，supra；Sefton，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：201(1987)；Buchwald等，Surgery 88：507(1980)；Saudek等，N.Engl.J.Med.321：574(1989))。在另一实施方案中，可用高分子材料(参见Medical Applications of Controlled Release，Langer和Wise(编辑)，CRC Pres.，Boca Raton，Florida(1974)；Controlled DrugBioavailability，Drug Product Design and Performance，Smolen和Ball(编辑)，Wiley，New York(1984)；Ranger和Peppas，J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23：61(1983)；也参见Levy等，Science228：190(1985)；During等，Ann.Neurol.25：351(1989)；Howard等，J.Neurosurg.71：105(1989))。在又一实施方案中，控释系统可放置在本发明化合物的靶附近，因此只需要该系统剂量的一部分(参见，例如，Goodson，Medical Applications of Controlled Release，supra，第2卷，笫115-138页(1984))。可用Langer在综述中讨论的其它控释系统(Science 249：1527-1533(1990))。

本发明的药用组合物含有与适用量的药学上可接受的载体一起的有效量的本发明化合物(优选纯化的形式)，以便向患者提供适当的给药形式。

在一实施方案中，术语“药学上可接受的”指用于动物，更具体地用于人时联邦或州政府的管理局所允许的或美国药典或其它公认的药典中所列出的。术语“载体”指与本发明化合物一起给予的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。这类药用载体可以是液体例如水和油，包括石油、动物油、植物油或合成油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。所述药用载体可为盐水、阿拉伯树胶、明胶、淀粉糊、滑石、角蛋白、胶态硅、尿素等。另外，还可用辅剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。向患者给药时，本发明化合物优选无菌的。当本发明化合物静脉内给药时，水是优选的载体。盐水溶液和右旋糖水溶液和甘油溶液也可用作液体载体，尤其是注射液。适用的药用载体还包括赋形剂例如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸、滑石、氯化钠、干脱脂奶、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。如需要，本发明组合物也可含少量湿润剂或乳化剂，或pH缓冲剂。

本发明的组合物可采用溶液、悬液、乳液、片剂、丸剂、微型药片、胶囊、含液体胶囊、粉剂、缓释制剂、栓剂、乳液、气雾剂、喷雾剂、悬液或任何其它适用的形式。在一个实施方案中，所述药学上可接受的载体是胶囊(参见，例如，美国专利第5,698,155)。适用的药用载体的其它实例描述于E.W.Martin的“Remington’sPharmaceutical Sciences”中。

在一个优选实施方案中，根据按照人体静脉内给药采用的药用组合物的常规方法配制本发明化合物。一般说来，静脉内给予的本发明化合物是无菌等渗缓冲溶液。如需要，所述组合物也可包括增溶剂。静脉内给予的组合物可任选包括局部麻醉剂例如利多卡因以缓解注射部位的疼痛。一般说来，所述成分既可分开也可混合在单位剂型中使用，例如，作为干燥的冻干粉剂或密封在密封容器例如指明活性剂的量的安瓿或小药囊中的无水浓缩液。当本发明化合物要输液给药时，它可以用例如含无菌药用级的水或盐水输液瓶配制。在本发明化合物注射给药时，可提供注射用的无菌水和盐水的安瓿，以便所述成分可在给药前混合。

经口传递的组合物可为例如片剂、锭剂、水性或油性悬液、颗粒剂、粉剂、乳化剂、胶囊、糖浆或酏剂。经口给予的组合物可包含一种或多种任选的辅剂，例如，甜味剂例如果糖、阿司帕坦或糖精；调味剂例如薄荷、冬青油或樱桃；着色剂；和防腐剂，以提供药学上适口的制剂。而且，呈片剂或丸剂形式时，所述组合物可以被包衣以延缓在胃肠道的崩解和吸收，从而在整个延长期内提供持续作用。包着渗透活性推动化合物的选择渗透膜也适用于经口给予的本发明化合物。在这些较后的平台期内，所述胶囊的周围环境中的流体被所述推动化合物吸收，胶囊膨胀通过孔径传递药物或药物组合物。相对于即时释放制剂的峰曲线，这些传递平台可提供基本的零级释放曲线。也可用例如甘油单硬脂酸或甘油硬脂酸作为延时材料。口服组合物可包括常用载体例如甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。这类载体优选药用级的。

在具体疾病或病症的治疗中有效的本发明化合物的量将取决于所述疾病或病症的性质，并通过常规临床技术确定。此外，可任选采用体外或体内测定法以帮助确定最佳剂量范围。精确的剂量还取决于给药途径和所述疾病或病症的严重程度，并根据医生的判断和各个患者的情况而定。然而，适用的剂量范围(特别是静脉内给药)一般约每公斤体重20-500微克本发明化合物。在本发明的特别优选的实施方案中，静脉注射剂量约为每公斤体重10-40、30-60、60-100或100-200微克。在其它实施方案中，所述静脉注射剂量约为每公斤体重75-150、150-250、250-375或375-500微克。经鼻给药的适用剂量范围一般为每公斤体重约0.01pg-1mg。栓剂一般含约0.5％-10％(重量)的本发明化合物。口服组合物优选含约10％-95％(重量)的本发明化合物。在本发明的特别优选的实施方案中，口服给药的适用的剂量范围一般为每公斤体重约1-500微克本发明化合物。在特别优选的实施方案中，口服剂量为每公斤体重约1-10、10-30、30-90或90-150微克。在其它实施方案中，口服剂量为每公斤体重约150-250、250-325、325-450或450-1000微克。可从得自体外或动物模型试验系统的剂量响应曲线推断有效剂量。这类动物模型和系统为本领域所熟知。

本发明也提供药剂盒，它包括装有本发明化合物的容器。任选与这类容器有关的可以是一个用药须知，它按管理药物或生物制品的制造、使用或销售的政府机构的规定的形式撰写，用药须知反映了人体用药的制备、使用或销售的管理机构的许可；或用药说明。所述药剂盒也可包括含有用于治疗癌症或肿瘤疾病的化疗剂的容器。

本发明化合物在用于人体前，优选体外再体内测试所需的治疗或预防活性。例如，体外试验可用来确定一种或多种本发明化合物的给药是否优选。

在一实施方案中，患者的组织样品生长于培养基中，并接触或施加本发明化合物，观察并与未接触过的组织比较本发明的该化合物对所述组织样品的效果。在其它实施方案中，采用细胞培养模型，其中的细胞培养物的细胞接触或被给予本发明化合物，观察并与未接触过的细胞培养物比较本发明的该化合物对所述细胞培养物的效果。一般说来，与未接触过的细胞比，接触过的细胞的较低水平的增殖或存活表明本发明化合物治疗所述患者是有效的。也用动物模型系统表明本发明的这类化合物的有效性和安全性。

本领域技术人员知道其它方法，这些方法也包括在本发明的范围内。

4.6癌症和肿瘤细胞和疾病的抑制

用各种本领域已知或本文所述的测定法可证实本发明化合物体外或体内抑制肿瘤细胞增殖、细胞转化和肿瘤发生。这类测定法可使用癌细胞系细胞或患者的细胞。本领域许多熟知的测定法可用来测定这类存活和/生长；例如，可通过测量(³H)-胸苷结合，通过直接细胞计数，通过测定转录、转译或已知基因例如原致癌基团(例如，原癌基因fos、原癌基因myc)的活性或细胞周期标记物(Rb、cdc2、细胞周期蛋白A、D1、D2、D3或E)的变化测定细胞增殖。可通过本领域熟知的任何方法确定这类蛋白、mRNA和活性的水平。例如，可通过已知的免疫诊断方法例如用市售得到的抗体(例如，许多细胞周期标记物抗体来自Santa Cruz公司)的蛋白印迹法或免疫沉淀法可对蛋白定量。可通过本领域熟知的常规的方法例如通过RNA印迹分析、核糖核酸酶保护、与逆转录有关的聚合酶链反应等对mRNA定量。可用锥虫蓝染色或本领域已知的其它细胞死亡或生存能力的标记物评价细胞活力。可基于形态学上的变化等用视觉判断分化等。

通过本领域已知的各种技术，包括但不限于下述的技术，本发明提供细胞周期和细胞增殖分析：

作为一个实例，溴脱氧尿苷(“BRDU”)结合可用作确定增殖细胞的试验。通过将BRDU结合进新合成的DNA，BRDU试验确定进行DNA合成的细胞数。再用抗-BRDU抗体测定新合成的DNA(参见Hoshino等，1986，Iht.J.Cancer 38，369；Campana等，1988，J.Immunol.Meth.107，79)。

也可用(3H)-胸苷结合测定细胞增殖(参见例如，Chen，J.，1996，Oncogene 13：1395-403；Jeoung，J.，1995，J.Biol.Chem.270：18367-73)。该实验用于S-期DNA合成的定量表征。该实验中，细胞合成DNA会将(3H)-胸苷结合进新合成的DNA中。然后，通过本领域的标准技术例如通过闪烁计数器(例如，Beckman LS 3800液体闪烁计数器)的放射性同位素计数可以测定结合。

也可用对增殖细胞核抗原(PCNA)的测定来检测细胞增殖。PCNA是36千道尔顿蛋白，在增殖中的细胞尤其在细胞周期的早期G1和S期中提高了其表达，因此可作为增殖细胞的标记。经采用抗-PCNA抗体的免疫染色确定阳性细胞(参见Li等，1996，Curr.Biol.6：189-199；Vassilev等，1995，J.Cell Sci.108：1205-15)。

可通过规定时间外的细胞群体的计数(例如，每日的细胞计数)测定细胞增殖。可用血细胞计数器和光学显微镜(例如HyLite血细胞计数器、Hausser Scientific)对细胞计数。可以以细胞数相对时间绘图，以得到重量的细胞群体的生长曲线。在一优选实施方案中，用此法计数的细胞首先与锥虫蓝染料混合(Sigma)，这样活细胞把所述染料排除在外，被作为所述细胞群体的生存细胞成员计数。

例如，基于细胞的DNA倍性值，可确定细胞的DNA含量和/或有丝分裂指标。例如，细胞周期的G1期的细胞一般含有2N DNA倍性值。其中DNA已被复制但未发展到有丝分裂的细胞(例如S期中的细胞)会表现出倍性值高于2N并高达4N DNA含量。用碘化丙锭(propidum iodide)试验还可测定倍性值和细胞周期动力学(参见例如，Turner，T等，1998，Prostate 34：175-81)。或者，也可经计算机化的微型光密度计染色系统的DNA的Feulgen染色法(它以化学计量方式结合DNA)量化确定所述DNA倍性(参见例如，Bacus，S.，1989，Am.J.Pathol.135：783-92)。在另一实施方案中，可经染色体展开的制备分析DNA含量(Zabalou.S.，1994，Hereditas.120：127-40；Pardue，1994，Meth.Cell Biol.44：333-351)。

细胞周期蛋白的表达(例如，CycA、CycB、CycE、CycD、cdc2、Cdk4/6、Rb、p21或p27)提供与细胞或细胞群体的增殖状态相关的重要信息。例如，可通过诱导p21 cipl表明抗增殖信号通道的确定。细胞中p21表达提高的水平导致延缓进入所述细胞周期的G1期(Harper等，1993，Cell 75：805-816；Li等，1996，Curr.Biol.6：189-199)。可经采用市售得到的特异性抗p-21抗体(例如，得自Santa Cruz公司)的免疫染色法确定p21的诱导。同样地，可经采用市售得到的抗体的蛋白印迹分析可确定细胞周期蛋白。在另一实施方案中，在检测细胞周期蛋白前同步进行细胞群体计数。也可通过采用所涉及蛋白的抗体的FACS(荧光活化的细胞分类仪)测定细胞周期蛋白。

也可用细胞周期长度或细胞周期速度的变化的测定来确定本发明化合物对细胞增殖的抑制。在一个实施方案中，通过细胞群体的双倍时间确定所述细胞周期的长度(例如，用细胞接触或不接触一种或多种本发明化合物)。在另一实施方案中，用FACS分析法分析细胞周期进展的阶段，或纯化G1、S和G2/M片断(参见，例如，Delia，D.等，1997，Oncogene 14：2137-47)。

可通过本文所述的方法或本领域已知的任何方法检测细胞周期关卡的失效(lapse)和/或细胞周期关卡的诱导。不加限制，细胞周期关卡是一种确保某些细胞活动按特定顺序发生的机制。关卡基因由前一活动没有先结束而允许后一活动发生的突变来确定(Weinert，T.和Hartwell，L.，1993，Genetics，134：63-80)。例如可经蛋白印迹分析或经免疫染色法等测定细胞周期关卡基因的诱导或抑制。可经细胞特殊活动没有预先发生下经过关卡的细胞发展进一步确定细胞周期关卡的失效(例如，染色体组DNA未结束复制下发展到有丝分裂)。

除了特殊的细胞周期蛋白表达作用外，参与细胞周期的蛋白活性和转译后修饰可在细胞的调节和增殖状态起到固有的作用。通过任何本领域已知的方法，本发明提供涉及检测转译后修饰(例如磷酸化作用)的实验。例如，可市售得到的测定磷酸化酪氨酸残基的抗体可用于蛋白印迹分析以检测经此类修饰的蛋白。在另一实施例中，可用薄层层析法或反相HPLC法测定例如肉豆蔻化修饰(参见，Glover，C.，1988，Biochem.J.250：485-91；Paige，L.1988，Biochem J.；250：485-91)。

信号和细胞周期蛋白和/或蛋白复合物的活性往往经激酶活性调节。本发明提供测定法例如组蛋白H1测定法分析激酶活性(参见例如，Delia，D.等，1997，Oncogene 14：2137-47)。

用本领域熟知的方法，也可证明本发明化合物改变体外培养的细胞的细胞增殖。细胞培养模型的具体实例包括，但不限于，对肺癌，原发性大鼠肺肿瘤细胞(Swafford等，1997，Mol.Cell.Biol.，17：1366-1374)和未分化的大细胞癌细胞系(Mabry等，1991，Cancer Cells，3：53-58)；结肠癌的结肠直肠细胞系(Park和Gazdar，1996，J.CellBiochem.Suppl.24：131-141)；乳腺癌的多重确立的细胞系(Hambly等，1997，Breast Cancer Res.Treat.43：247-258；Gierthy等，1997，Chemosphere 34：1495-1505；Prasad和Church，1997，Biochem.Biophys.Res.Commun.232：14-19)；大量的前列腺癌的成熟的细胞模型(Webber等，1996，Prostate，Part 1，29：386-394；Part 2，30：58-64；和Part 3，30：136-142；Boulikas，1997，Anticancer Res.17：1471-1505)；生殖泌尿道癌，连续的人体膀胱癌细胞系(Ribeiro等，1997，Int.J.Radiat.Biol.72：11-20)；转移细胞癌的器官培养(Booth等，1997，Lab Invest.76：843-857)和大鼠发育模型(Vet等，1997，Biochim.Biophys Acta 1360：39-44)；以及已建立的白血病和淋巴瘤细胞系(Drexler，1994，Leuk.Res.18：919-927，Tohyama，1997，Int.J.Hematol.65：309-317)。

也表明本发明化合物可体外抑制细胞转化(或发展成恶性表型)。在该实施方案中，具有转化细胞表型的细胞与一种或多种本发明化合物接触，并测定与转化的表型有关的性质(与体内致瘤的能力相关的一整套体外特征)的变化，例如，但不限于，在软琼脂里的菌落形成、更圆的细胞形态学、疏松的酶解物附着、接触抑制的丧失、贴壁依赖的丧失、蛋白酶例如血纤溶酶原激活物的释放、糖转运的增加、血清需求的下降或胎儿抗原的表达等(参见Luria等，1978，GeneralVirology，第三版，John Wiley & Sons，New York，第436-446页)。

丧失侵入或减少附着可用来证实本发明化合物的抗癌效果。例如，转移性癌的形成的关键因素在于前癌或癌细胞从疾病的原发部位脱离并在第二个部位建立新的生长集落的能力。细胞侵入外周部位的能力是癌症状态的潜力强的体现。可通过本领域已知的大量技术包括，例如，E-钙粘着蛋白介导的细胞对细胞的附着的诱导测定侵入性的丧失。这类E-钙粘着蛋白介导的附着可导致表型回复和侵入的丧失(Hordijk等，1997，Science 278：1464-66)。

还可以通过对细胞迁移的抑制测定侵入性的丧失。可市售得到大量2-维和3-维细胞基质(Calbiochem-Novabiochem Corp.San Diego，CA)。可用显微镜、间歇(time-lapse)摄影法或录相法，或本领域任何可测定细胞迁移的方法测定细胞迁移越过或进入基质。在相关实施方案中，通过对肝细胞生长因子(HGF)的响应测定侵入性丧失。HGF-诱发的细胞扩散与细胞例如Madin-Darby犬的肾(MDCK)细胞的入侵相关。该分析确定了对HGF响应已经丧失细胞扩散活性的细胞群体(Hordijk等，1997，Science 278：1464-66)。

或者，经趋化室的细胞迁移可测定侵入性丧失(Neuroprobe/Precision Biochemicals Inc.Vancouver，BC)。该实验中，化学诱引剂培养于所述室的一侧(如室底)，而细胞平铺在分隔对侧(如室顶)的滤膜上。为使细胞通过室顶到室底，所述细胞必须主动地经所述滤膜的小孔迁移。对已经迁移的细胞的数量的检查板分析则与侵入性相关(参见例如，Ohnishi，T.，1993，Biochem.Biophys.Res.Commun.193：518-25)。

还证明本发明化合物体内抑制肿瘤的形成。本领域已知大量的高增生疾病，包括肿瘤发生和转移性扩散的动物模型(参见，表317-1，第317章，“Principals of Neoplasia，”in Harrison’s Principals of InternalMedicine，第13版，Isselbacher等编辑，McGraw-Hill，New York，第1814页，和Lovejoy等，1997，J.Pathol.181：130-135)。具体实例包括肺癌，肿瘤节结移植到大鼠(Wang等，1997，Ann.Thorac.Surg.64：216-219)或耗尽NK细胞的SCID小鼠的肺癌转移的确立(Yono和Sone，1997，Gan To Kagaku Ryoho 24：489-494)；对结肠癌，人结肠癌细胞的结肠癌移植到裸鼠(Gutman和Fidler，1995，World J.Surg.19：226-234)，人体溃疡性结肠炎的棉冠绒猴(cotton top tamarin)模型(Warren，1996，Aliment.Pharmacol.Ther.10 Supp 12：45-47)和具有腺瘤息肉病肿瘤抑制基因突变的小鼠模型(Polakis，1997，Biochim.Biophys.Acta1332：F127-F147)；对乳腺癌，乳腺癌的转基因模型(Dankort和Muller，1996，Cancer Treat.Res.83：71-88；Amundadittir等，1996，BreastCancer Res.Treat.39：119-135)和大鼠肿瘤的化学诱发(Russo和Russo，1996，Breast Cancer Res.Treat.39：7-20)；对前列腺癌，化学诱发和转基因啮齿动物模型，以及人异种皮移植模型(Royai等，1996，Semin.Oncol.23：35-40)；对泌尿生殖道癌症，诱发的大鼠和小鼠膀胱瘤(Oyasu，1995，Food Chem.Toxicol 33：747-755)和人过渡型单核白细胞癌的异种移植到裸鼠(Jarrett等，1995，J.Endourol.9：1-7)；和造血癌，动物的移植的同种异体的骨髓(Appelbaum，1997，Leukemia 11(Suppl.4)：S15-S17)。而且，已经描述了可适用于许多类型的癌症的一般动物模型，包括但不限于，缺乏p53的小鼠模型(Donehower，1996，Semin.Cancer Biol.7：269-278)、Min鼠(Shoemaker等，1997，Biochem.Biophys.Acta，1332：F25-F48)和大鼠对肿瘤的免疫响应(Frey，1997，Methods，12：173-188)。

例如，本发明化合物可向测试动物给药，在一个实施方案中，测试动物易患某种肿瘤，与没有给予本发明化合物的动物比较，其后检测的所述测试动物的肿瘤生成的发生率下降。或者，本发明化合物可向患有肿瘤的测试动物(例如其肿瘤已被引入的恶性的、肿瘤的或转化细胞或因给予致癌物诱发的动物)给药，再对照未给予本发明化合物的动物检查测试动物的肿瘤的肿瘤衰退。

4.7p27的泛素化体外抑制

用本领域已知或本文所述的试验可证明本发明化合物对p27泛素化的体外抑制。Alessandrini等描述了示例性体外实验((1997)Leukemia 11：342-345)，其中经纯化的重组体六组胺酸(hexahistidine)标记过的p27(p27-his₆)用作泛素化基质，兔网织红细胞溶胞产物(RRL)用作泛素化酶和蛋白酶体复合物的来源。可比较有或无抑制剂的泛素化程度确定抑制能力。

体外泛素化试验的其它实例描述于Chiaur等PCT国际申请号WO 00/12679中，其通过引用全文结合到本文中。以6×10⁵个细胞/ml的密度收集对数生长的KeLa-S3细胞。用70mM洛伐他汀处理48小时抑制Gl期的细胞。于30℃下，在10ml含40mM Tris pH7.6、5mM MgCl₂、1mM DTT、10％甘油、1mM泛素醛、1mg/ml甲基泛素、10mM磷酸肌酸、0.1mg/ml肌酸磷酸激酶、0.5mM ATP、1mM冈田酸(okadaic acid)、20-30mg HeLa细胞提取物的泛素化混合物中体外培养1ml转译[³⁵S]p27不同时间(0-75分钟)。可将泛素醛加入到泛素化反应中，以抑制异肽酶(isopeptidases)，该酶将从p27除去泛素链。加入的甲基泛素与所述细胞提取物中存在的泛素相竞争，并中断p27泛素链。此类链似乎为不连续的连结而不是高分子片断(smear)。这些更短的多泛素链对蛋白酶体有更低的亲和力，从而更稳定。用含b-巯基乙醇的Laemmli样品缓冲液终止反应，在变性条件下用蛋白胶可分析所述产物。用放射自显影法确定多泛素化的p27形式。

4.8与化疗或放疗联合治疗或预防癌症或肿瘤疾病

给予有效量的本发明化合物可治疗或预防癌症或肿瘤疾病，包括但不限于肿瘤、瘤、转移或以失控的细胞生长为特征的任何疾病或症状。在一个实施方案中，给予包括有效量的一种或多种本发明化合物，或其药学上可接受的盐的组合物。

在某些实施方案中，本发明包括治疗或预防癌症或肿瘤疾病的方法，它包括向需要这种治疗的患者给予有效量的本发明化合物和其它治疗剂。在一个实施方案中，治疗剂是化疗剂，包括但不限于密都锭、泰素、巯嘌呤、硫鸟嘌呤、羟基脲、阿糖胞苷、环磷酰胺、异环磷酰胺、亚硝基脲、顺铂、卡铂、丝裂霉素、达卡巴嗪、丙卡巴肼(procarbizine)、依托泊苷、campathecins、博来霉素、多柔比星、伊达比星、柔红霉素、放线菌素、普卡霉素、米托蒽醌、天冬酰胺酶、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇和多西他赛。在一个实施方案中，本发明化合物与其它治疗剂发挥作用的同时发挥其活性。其它治疗剂列于表1中。

表1

化疗药和其它抗癌药

放射： ν射线

烷基化药物

氮芥：环磷酰胺

异环磷酰胺

曲磷胺

苯丁酸氮芥

亚硝基脲：卡莫司汀(BCNU)

洛莫司汀(CCNU)

烷基磺酸酯白消安

曲奥舒凡

三氮烯：达卡巴嗪

含铂化合物：顺铂

卡铂

植物生物碱

长春花属生物碱：长春新碱

长春碱

长春地辛

长春瑞滨

Taxoids：紫杉醇

多西他赛

DNA拓朴异构酶抑制剂

Epipodophyllins：依托泊苷

替尼泊苷

托泊替康

9-氨基喜树碱

伊立替康(Campto)

克立那托

丝裂霉素：

丝裂霉素C 丝裂霉素C

抗代谢药

抗叶酸剂：

DHFR抑制剂密都锭

三甲曲沙

IMP脱氢酶抑制剂：麦考酚酸

噻唑呋林

利巴韦林

EICAR

核苷酸还原酶抑制剂：羟基脲

去铁胺

嘧啶类似物：

尿嘧啶类似物 5-氟尿嘧啶

氟尿苷

去氧氟尿苷

Ratitrexed

胞嘧啶类似物阿糖胞苷(araC)

阿糖胞苷

氟达拉滨

嘌呤类似物：巯嘌呤

硫鸟嘌呤

激素治疗

受体拮抗药：

抗雌激素药他莫昔芬

雷洛昔芬

甲地孕酮

LHRH激动剂： goscrclin

醋酸亮丙立德

抗雄激素：氟他胺

比卡鲁胺

视黄醛衍生物/Deltoids

维生素D3类似物： EB1089

CB1093

KH1060

光动力疗法： vertoporfin(BPD-MA)

酞菁染料

光敏性药物Pc4

去甲氧基-hypocrellin A

(2BA-2-DMHA)

细胞因子： α-干扰素

γ-干扰素

肿瘤坏死因子

其它：

异戊二烯化抑制剂：洛伐他汀

多巴胺能神经毒素： 1-甲基-4-苯基吡啶鎓离子

细胞周期抑制剂：星孢素

放线菌素：放线菌素D

放线菌素

博来霉素：博来霉素A2

博来霉素B2

培洛霉素

蒽环霉素：柔红霉素

多柔比星

伊达比星

表柔比星

吡柔比星

佐柔比星

米托蒽醌

MDR抑制剂：维拉帕米

Ca²⁺ATP酶抑制剂： thapsigargin

TNF-抑制剂/血管生成抑制剂沙利度胺

3-(3，4-二甲氧基-苯基)-3-

(1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-

2-基)-丙酰胺(SelCIDs^TM)

ImiDs^TM

Revimid^TM

Actimid^TM

在其它实施方案中，治疗或预防癌症的本发明方法还包括进行放疗。所述癌症可以是难医治的或不难医治的。本发明化合物可向经过手术治疗癌症的患者给药。

在一个具体实施方案中，本发明化合物可向已经过手术治疗同时伴有化疗或放疗的癌症患者给药。在另一具体实施方案中，在给予本发明化合物之前或之后，给予化疗剂或放疗，优选在之前或之后至少1小时、5小时、12小时、1天、1周、1个月，更优选几个月(例如最多3个月)。

可用本领域任何已知的方法，在给予本发明化合物的同时，或之前或之后给予化疗剂或放疗。优选在一系列期间给予化疗剂，可给予上文所列化疗剂的任何一种或组合。对放疗，根据要治疗的癌症类型可用任何放疗方案。例如，但不限于，可用x射线；具体说来，对深层肿瘤可用高能兆伏(大于1MeV能量的射线)，电子束和中电压(orthovoltage)x射线可用于皮肤癌。ν射线放射性同位素，例如镭、钴和其它元素的放射性同位素也可应用于照射的组织。

此外，本发明提供癌症或肿瘤疾病的治疗方法，当化疗或放疗已证明或可能证明对被治疗的患者毒性太大，例如导致不可接受或无法忍受的副作用时，采用本发明化合物作为化学或放疗的一种可替代选择。被治疗的患者可任选采用其它癌症治疗方法例如手术、放疗或化疗治疗，这取决于该治疗被认为是可接受或可容忍的。

4.9可治疗或可预防的癌症和肿瘤疾病

通过给予本发明化合物可治疗或可预防的癌症或肿瘤和相关疾病包括，但不限于，头、颈、眼、皮肤、口、喉、食道、胸、骨、肺、结肠、乙状结肠、直肠、胃、前列腺、乳房、卵巢、睾丸、肾、肝、胰腺、脑、肠、心或肾上腺癌和列于下表2中的那些癌症(对这类疾病的评述，参见Fishman等，1985，Medicine，第二版，J.B.LippincottCo.，Philadelphia)：

表2

癌症和肿瘤疾病

白血病

急性白血病

急性淋巴细胞白血病

急性髓细胞白血病

原粒细胞

早幼粒细胞

骨髓单核细胞

单核细胞

红白血病

慢性白血病

慢性髓细胞(粒细胞)白血病

慢性淋巴细胞白血病

红细胞增多症

胃癌

淋巴瘤(恶性和非恶性)

何杰金氏病

非何杰金氏病

多发性骨髓瘤

瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症

重链病

实体瘤

肉瘤和癌

纤维瘤

粘液肉瘤

脂肪瘤

软骨肉瘤

骨瘤

脊索瘤

血管瘤

内皮瘤

淋巴血管瘤

淋巴管内皮瘤

滑膜瘤

间皮瘤

尤因瘤

平滑肌肉瘤

横纹肌肉瘤

结肠瘤

胰腺癌

乳腺癌

卵巢癌

前列腺导管癌

鳞状细胞癌

口鳞状细胞癌

肝细胞癌

基底细胞癌

腺样癌

汗腺癌

皮脂腺癌

乳头状癌

乳头状腺样癌

囊腺癌

髓样癌

支气管癌

肾细胞癌

肝癌

胆管癌

绒毛膜癌

精原细胞瘤

胚胎性癌

维尔姆斯瘤

颈癌

颈腺瘤

子宫癌

睾丸瘤

肺癌

小细胞肺癌

非小细胞肺腺瘤

膀胱癌

上皮癌

神经胶质瘤

恶性神经胶质瘤

多形性成胶质细胞瘤

星形细胞胶质瘤

恶性成神经管细胞瘤

颅咽管瘤

室管膜瘤

松果体瘤

成血管细胞瘤

听神经瘤

少突神经胶质细胞瘤

脑膜瘤

黑素瘤

神经母细胞瘤

视网膜母细胞瘤

在具体实施方案中，卵巢、乳房、结肠、肺、皮肤、胰、前列腺、膀胱或子宫的癌症、恶性的或不良增殖变化(例如组织变形和发育不良)或高增殖性疾病是可治疗或可预防的。在其它实施方案中，通过给予有效量的本发明化合物的给药可治疗或可预防的癌症是肉瘤、黑素瘤或白血病。在其它具体实施方案中，通过给予有效量的本发明化合物可治疗或可预防的癌症是多发性骨髓瘤、白血病、骨髓增生异常综合征或骨髓增生性疾病。在另一具体实施方案中，通过给予有效量的本发明化合物可治疗或可预防的癌症是神经胶质瘤。

在优选实施方案中，本发明化合物用于治疗或预防癌症，包括前列腺癌(更优选激素-不敏感的)、神经母细胞瘤、淋巴瘤(优选滤泡的或扩散大的B淋巴细胞)、乳腺癌(优选雌激素受体阳性)、结肠直肠瘤、子宫内膜癌、卵巢癌、淋巴瘤(优选非何杰金氏病)、肺癌(优选小细胞)或睾丸癌(优选胚细胞)。

在另一实施方案中，本发明化合物用于抑制衍生自癌症或肿瘤例如前列腺癌(更优选激素-不敏感的)、神经母细胞瘤、淋巴瘤(优选滤泡的或扩散的大B淋巴细胞)、乳腺癌(优选雌激素受体阳性)、结肠直肠瘤、子宫内膜癌、卵巢癌、淋巴瘤(优选非何杰金氏病)、肺癌(优选小细胞)或睾丸癌(优选胚细胞)的细胞的生长。

在本发明的特别实施方案中，本发明化合物用于抑制细胞生长，所述细胞衍生自表2或本文中的癌症或肿瘤。

作为本发明化合物的说明性实例的实施例1的化合物((4-{[3-(2，2-二甲基-四氢-吡喃-4-基)-4-苯基-丁基氨基]-甲基}-苯基)-二甲基-胺)，已表明诱发下列细胞系中的细胞(程序性)死亡：Hela(宫颈腺瘤)、MDA-MB-435(乳腺癌)、MDA-MB-231(乳腺癌)、MCF-7(乳腺癌)、HL-60(白血病)、A172(恶性神经胶质瘤)、NCIH1703(非小细胞肺腺癌)、A357(肺癌)、DU145(前列腺癌)、MM1S(多发性骨髓瘤)、DF15(多发性骨髓瘤)、H929(多发性骨髓瘤)、U266(多发性骨髓瘤)、ANB6(多发性骨髓瘤)。

4.10.可治疗或可预防的感染性疾病

通过给予本发明化合物可治疗或可预防的感染性疾病和相关病症包括，但不限于列于表3的那些疾病：

表3

传染性疾病：

细菌性疾病：

白喉

百日咳

潜隐性菌血症

尿路感染

胃肠炎

蜂窝织炎

会厌炎

气管炎

腺样肥大

咽后脓肿

脓疱病

深脓疱病

肺炎

心内膜炎

脓毒性关节炎

肺炎球菌病

腹膜炎

Bactermia

脑膜炎

急性化脓性脑膜炎

尿道炎

宫颈炎

直肠炎

咽炎

输卵管炎

附睾炎

利斯特菌病

炭疽

诺卡菌病

沙门氏菌病

伤寒

痢疾

结膜炎

鼻窦炎

布氏菌病

土拉菌病

霍乱

腺鼠疫

破伤风

坏死性肠炎

放线菌病

混合型厌氧菌感染

梅毒

回归热

钩端螺旋体病

菜姆病

鼠咬热

结核病

淋巴结炎

麻风病

系统性真菌病：

组织胞浆菌病

球孢子菌病(Coccicidiodomycosis)

芽生菌病

孢子丝菌病

隐球菌病

念珠菌病

曲霉病

毛霉病

足菌肿

着色真菌病

立克次体病：

斑疹伤寒

落矶山斑疹热

埃利希菌病

立克次体病

立克次体痘

Q热

巴尔通体病

衣原体病：

衣原体

肺炎衣原体

沙眼衣原体

包涵体结膜炎

寄生虫病：

疟疾

巴贝虫病

非洲昏睡病

查加斯病

利什曼病

黑热病

弓形体病

脑膜脑炎

角膜炎

内阿米巴病

贾第虫病

隐孢子虫病

等孢子球虫病

环孢菌病

微孢子虫病

蛔虫病

鞭虫感染

钩虫感染

线虫感染

眼幼虫移行症

旋毛虫病

麦地那龙线虫病

淋巴丝虫病

罗阿丝虫病

河盲症

犬恶丝虫感染

血吸虫病

血吸虫皮炎

东方肺吸虫病

东方肝吸虫病

片吸虫病

姜片虫病

后睾吸虫病

绦虫感染

棘球蚴病

多房性棘球蚴病

病毒性疾病

麻疹

亚急性硬化性全脑炎

普通感冒

流行性腮腺炎

风疹

蔷薇疹

第五病

水痘

呼吸道合胞病毒感染

哮吼

细支气管炎

传染性单核细胞增多症

脊髓灰质炎

疱疹性咽峡炎

手足口病

波恩荷尔姆岛病

无菌性脑膜炎

心肌炎

心包炎

胃肠炎

获得性免疫缺陷综合征(AIDS)

雷氏综合征

不明原因的发热

川崎综合征

蛲虫侵染

流感

支气管炎

病毒性游走性肺炎

急性发热呼吸道病

急性咽结膜热

流行性角膜结膜炎

单纯性疱疹病毒1(HSV-1)

单纯性疱疹病毒2(HSV-2)

带状疱疹

巨细胞病毒疾病

狂犬病

进行性多灶性白质脑病

朊病毒性疾病

库鲁病

致死性家族失眠症

克-雅病

格-施-沙病

热带痉挛性轻截瘫

西方马脑炎

加利福尼亚脑炎

圣路易型脑炎’

黄热病

登革热

淋巴细胞性脉络丛脑膜炎

拉沙热

出血热

汉坦病毒性肺综合征

马尔堡病毒感染

埃博拉病毒感染

天花

性传播疾病：

淋病

梅毒

生殖器念珠菌病

软下疳

龟头包皮炎

生殖器疱疹

生殖器疣

性传播肠感染

与本发明化合物联合用药的用于治疗感染性疾病的治疗剂包括，但不限于青霉素、头孢菌素、万古霉素、氨基糖苷类、喹诺酮类、多粘菌素、红霉素、四环素、氯霉素、克林霉素、林可霉素、克拉霉素、阿奇霉素、磺胺类药、碘苷、阿糖腺苷、三氟胸苷、阿昔洛韦、喷昔洛韦和伐昔洛韦。

4.11.可治疗或可预防的炎性疾病

可通过给予本发明化合物治疗或预防的炎性疾病和相关疾病包括，但不限于，类风湿性关节炎、结缔组织病、炎性肠道疾病、Crohn’s病、溃疡性结肠炎和回肠炎。

与本发明化合物联合用药的用于治疗炎性疾病的治疗剂包括，但不限于，抗胆碱药、地芬诺酯、洛哌丁胺、除臭剂(deodorized)、阿片酊、可待因和亲水性mucilloids。

4.12.可治疗或可预防的心血管疾病

通过给予本发明化合物可治疗或可预防的心血管疾病和相关疾病包括，但不限于高胆固醇血症、高血压、动脉粥样硬化、冠状动脉病、心律失常、心瓣膜病、心内膜炎和心包炎。

可与本发明化合物联合用药的用于治疗心血管疾病的治疗剂包括，但不限于抗生素、叶酸和抗高血压药。

4.13.可治疗或可预防的免疫性疾病

通过给予本发明化合物可治疗或可预防的免疫性疾病包括，但不限于过敏症、哮喘、慢性肉芽肿病、自身免疫性疾病、韦格纳肉芽肿病、系统性红斑狼疮、多发性硬化、1型糖尿病、类风湿性关节炎、移植物抗宿主病、风湿性心脏病和DiGeorg异常。

可与本发明化合物联合用药的用于治疗免疫性疾病的治疗剂包括，但不限于ν-干扰素、糖皮质类固醇和环磷酰胺。

4.14.本发明化合物用作细胞、血液、组织、器官或有机体的防腐剂

本发明化合物作为细胞生长抑制剂的应用使之可在适用于患者的条件下用作保护血液、组织或器官的试剂。具体说来，本发明化合物用于延长低温保存例如以液态氮冷冻、干冰冷冻、冰水冷冻或冷却包装冷冻的细胞、血液、组织、器官或有机体的寿命。

实施例

举出下列实施例以帮助理解本发明，当然，这并不认为是对所述发明和本文权利要求的具体限制。在本领域技术人员的权限范围内的本发明的这类变化，包括所有目前已知的或日后的等价物替代，和配方的改变或实验设计中的不重要的改变，都应被认为落入体现于本文的本发明的范围内。

用下列条件得到与合成实施例1-24有关的HPLC保留时间：

柱：YMC Pack-Pro C18 250mm×4.6mm ID

共用20分钟，显示0-10分钟的梯度，在214nm、254nm和290nm处10-20分钟等度溶剂测定。

梯度：25-75％乙腈-水/0.1％TFA

25-95％乙腈-水/0.1％TFA

实施例1

5.1实施例1：(4-{[3-(2’，2’-二甲基四氢吡喃-4’-基)-4-苯基丁基氨基]-甲基}-苯基)-二甲胺二盐酸化物

1(A).2，2-二甲基-四氢吡喃-4-酮

混合基氧化物(11.6mmol)和甲醛(11.6mmol)水溶液，于165℃加热2小时。冷却反应混合物，分配于乙酸乙酯和盐水之间，经硫酸钠干燥并蒸成油。用以乙酸乙酯-己烷(1∶9)洗脱的快速柱层析法(硅胶)处理粗反应产物，得到油。所述油溶解于氯仿(250ml)中，加入大孔树脂15(11g)，搅拌所述混合物约16小时。过滤和蒸发所生成的粗产物经乙醚-己烷(1∶9)洗脱的快速柱层析法(硅胶)，得到所需产物。

1(B).(E)和(Z)(2，2-二甲基-四氢吡喃-4-亚基)乙酸甲酯

0℃下，向氢化钠(23.8mmol)的THF(80ml)溶液加入膦酰基乙酸三甲酯(22.86mmol)。搅拌所述反应物15分钟，加入实施例1(A)产物(20.6mmol)的THF(20ml)溶液。室温下20小时后加入氯化铵水溶液猝灭反应物。用乙酸乙酯萃取，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到粗产物。经用乙酸乙酯-己烷(1∶5)洗脱的快速柱层析法纯化，得到所需产物。

1(C).(2’，2’-二甲基四氢吡喃-4’-基)乙酸甲酯

向实施例(B)(17.9mmol)的乙酸乙酯(35ml)溶液中加入10％披钯碳(10mol％)再氢化。室温下3小时后，滤出催化剂，真空蒸发所述反应混合物，得到所需原料。

1(D).2-(2’，2’-二甲基四氢吡喃-4’-基)-3-苯基丙酸甲酯

于-78℃，向二异丙胺(22.5mmol)的THF(10ml)溶液中加入丁基锂(22.4mmol)，在再次冷却到-78℃前，加热反应物到0℃5分钟。将实施例1(C)(16.1mmol)的THF(25ml)溶液缓慢加入预制的LDA溶液中。于-78℃1小时后，加入苄基溴(17.6mmol)，用30分钟将反应混合物加热到室温。加入氯化铵溶液，用乙酸乙酯萃取，盐水洗涤和干燥(硫酸钠)，再蒸发，得到粗产物。经快速柱层析法(硅胶)纯化，用乙酸乙酯-己烷(1∶3)洗脱，得到所需产物。

1(E).2-(2’，2’-二甲基四氢吡喃-4’-基)-3-苯基丙-1-醇

于-78℃，向实施例1(D)(10.9mmol)的二氯甲烷(35ml)溶液中加入1.0M DIBAL(27.0mmol)。立即加热所述反应物到室温，于此温度下用1N HCl猝灭所述反应。用乙酸乙酯萃取，盐水洗涤和干燥(硫酸钠)，再蒸发，得到所述粗产物。经快速柱层析法(硅胶)纯化，用乙醚-己烷(1∶1)洗脱，得到所需产物。

1(F).2-(2’，2’-二甲基四氢吡喃-4’-基)-3-苯基丙-1-醇甲磺酸酯

向实施例1(E)(10.4mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中加入二异丙基胺(15.5mmol)，再加入甲磺酰氯(11.6mmol)。2小时后，使所述反应物分配至水和乙酸乙酯之间，用1N HCl、盐水洗涤和干燥(硫酸钠)并真空干燥，得到粗产物。经洗脱快速层析法(硅胶)纯化，用乙醚-己烷(1∶1)，得到所需产物。

1(G).3-(2’，2’-二甲基四氢吡喃-4’-基)-4-苯基丁腈

向实施例1(F)(9.90mmol)的DMF(20ml)溶液中加入氰化钠(10.6mmol)。于100℃，在所述反应物分配至水和乙酸乙酯之前搅拌6小时，用盐水洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到粗产物。经快速柱层析法纯化，用乙醚-己烷(1∶1)洗脱，得到所需产物。

1(H).3-(2’，2’-二甲基四氢吡喃-4’-基)-4-苯基丁胺

于0℃，向实施例1(G)(8.37mmol)的THF(40ml)溶液加入氢化铝锂(11.85mmol)。搅拌反应物16小时，在依次加入水(0.45ml)、3NNaOH(0.45ml)、水(1.3ml)猝灭前升温到室温。所述反应物经Celite过滤，蒸发成油。经快速层析法(硅胶)纯化，用乙酸乙酯∶甲醇∶氢氧化铵(90∶10∶1)洗脱，得到所需产物。

1(I).(4-{[3-(2’，2’-二甲基四氢吡喃-4’-基)-4-苯基丁基氨基]-甲基}-苯基)-二甲基胺二盐酸盐

向实施例1(H)(1.09mmol)的二氯甲烷溶液(5ml)中加入硫酸镁和4-二甲基氨基-苯甲醛(1.09mmol)，于室温下搅拌所述反应物16小时。过滤所述反应混合物以除去硫酸镁，蒸发得到粗制亚胺产物。使其快速溶解于甲醇(5ml)中并加入硼氢化钠(4.20mmol)。加入水猝灭所述反应，蒸发至小体积，用乙酸乙酯萃取。接着盐水洗涤，干燥(硫酸钠)，蒸发，得到粗产物。经快速层析法(硅胶)纯化，用乙酸乙酯∶甲醇∶氢氧化铵(90∶10∶1)洗脱，得到所需游离碱。使溶解于乙醚中，加入HCl(气体)的乙醚溶液生成沉淀。滤出沉淀，用丙酮研磨，再从沸腾的丙-2-醇中再结晶出固体，生成所需的二盐酸盐，为白色固体：熔点191-193℃；对C₂₆H₃₈N₂O.2HCl的计算值：C66.80；Hoo8.62；No5.99；Cl 15.17％，发现值C66.94；H8.45；N5.92；Cl 14.95％；HPLC：9.00分钟(25-75％)；MS(e/z)：395(M+1)。

本领域的技术人员，按照实施例1所述的方法，用包含中间体1(A)-1(H)在内的任何中间体、市售得到的取代乙酸、取代乙酸酯或环酮，用上述方案可以制备本发明化合物的下列示例性实施例。

实施例2

5.2实施例2：(4-{[3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-4-苯基-丁基]-(4-吡咯烷-1-基-苄基)-胺：HPLC：12.45分钟(25-75％)；MS(e/z)：421(M+1).

实施例3

5.3实施例3：(4-氯-苄基)-[3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-4-苯基-丁基]-胺：HPLC：10.37分钟(25-95％)；MS(e/z)：385(M+1).

实施例4

5.4实施例4：[3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-4-苯基-丁基]-(4-甲氧基-苄基)胺：HPLC：9.49分钟(25-95％)；MS(e/z)：382(M+1).

实施例5

5.5实施例5：(3，4-二氯-苄基-[3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-4-苯基-丁基]-胺：HPLC：11.21分钟(25-95％)；MS(e/z)：420(M+1).

实施例6

5.6实施例6：[3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-4-苯基-丁基]-(4-甲基-苄基)胺：HPLC：11.79分钟(25-75％)；MS(e/z)：366(M+1).

实施例7

5.7实施例7：[3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-4-苯基-丁基]-(4-氟-苄基)胺：HPLC：11.34分钟(25-75％)；MS(e/z)：370(M+1).

实施例8

5.8实施例8：(4-{[4-(3，4-二氯-苯基)-3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-4-苯基-丁基氨基]-甲基}-苯基)-二甲胺：HPLC：10.75分钟(25-75％)；MS(e/z)：463(M+1).

实施例9

5.9实施例9：4-二甲基氨基-N-[3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-4-苯基-丁基]-苯甲酰胺：HPLC：14.27分钟(25-75％)；MS(e/z)：409(M+1).

实施例10

5.10实施例10：N-[3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-4-苯基-丁基]-4-氟-苯甲酰胺：HPLC：16.80分钟(25-75％)；MS(e/z)：384(M+1).

实施例11

5.11实施例11：N-[3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-4-苯基-丁基]-4-甲基-苯甲酰胺：HPLC：17.42分钟(25-75％)；MS(e/z)：380(M+1).

实施例12

5.12实施例12：二甲基-(4-{[4-苯基-3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-丁基氨基]-甲基}-苯基)-胺：HPLC：8.13分钟(25-75％)；MS(e/z)：367(M+1).

实施例13

5.13实施例13：[3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-4-苯基-丁基]-(4-异丙基-苄基-胺：HPLC：14.32分钟(25-75％)；MS(e/z)：394(M+1).

实施例14

5.14实施例14：(4-氯-苄基)-[4-苯基-3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-丁基]-胺：HPLC：11.14分钟(25-75％)；MS(e/z)：358(M+1).

实施例15

5.15实施例15：(4-甲氧基-苄基)-[4-苯基-3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-丁基]-胺：HPLC：10.54分钟(25-75％)；MS(e/z)：354(M+1).

实施例16

5.16实施例16：(4-甲基-苄基)-[4-苯基-3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-丁基]-胺：HPLC：11.03分钟(25-75％)；MS(e/z)：338(M+1).

实施例17

5.17实施例17：苄基-[4-苯基-3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-丁基]-胺：HPLC：10.45分钟(25-75％)；MS(e/z)：324(M+1).

实施例18

5.18实施例18：(4-氟-苄基)-[4-苯基-3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-丁基]-胺：HPLC：10.84分钟(25-75％)；MS(e/z)：342(M+1).

实施例19

5.19实施例19：{4-[(3-环己基-4-苯基-丁基氨基)-甲基]-苯基}-二甲基-胺：HPLC：11.60分钟(25-75％)；MS(e/z)：365(M+1).

实施例20

5.20实施例20：(3-环己基-4-苯基-丁基)-(4-甲氧基-苄基)-胺：HPLC：13.63分钟(25-75％)；MS(e/z)：352(M+1).

实施例21

5.21实施例21：(3-环己基-4-苯基-丁基)-(4-氟-苄基)-胺：HPLC：13.65分钟(25-75％)；MS(e/z)：340(M+1).

实施例22

5.22实施例22：(4-{[3-环己基-4-(3，4-二氯代苯基)-丁基氨基]-甲基}-苯基)-二甲基-胺：HPLC：12.94分钟(25-75％)；MS(e/z)：435(M+1).

实施例23

5.23实施例23：[3-环己基-4-(3，4-二氯代苯基)-丁基]-(4-氟-苄基)-胺：HPLC：14.73分钟(25-75％)；MS(e/z)：408(M+1).

实施例24

5.24实施例24：二甲基-(4-{[3-苯基-3-(2，2-二甲基四氢吡喃-4-基)-丙基氨基]-甲基}苯基)-胺：HPLC：7.90分钟(25-75％)；MS(e/z)：353(M+1).

5.25 实施例25

表明实施例1化合物诱发MDA-435细胞中的G1抑制的体外实验

方法

用体外细胞周期试验表明，本发明化合物诱发MDA-435人乳腺癌细胞中细胞周期抑制。同时使肿瘤细胞剥夺血清24小时，再加入10％血清和实施例1的化合物((4-{[3-(2，2-二甲基-四氢-吡喃-4-基)-4-苯基-丁基氨基]-甲基}-苯基)-二甲基-胺)(得自ChemBridge Corporation；经HPLC：20-100％梯度：乙腈/水/1％三氟乙酸测出单峰)或媒介物(二甲亚砜)到细胞培养物中释放。收获细胞并用含50mg/ml碘化丙锭的0.04％毛地黄皂苷工作液染色。经流式细胞计数仪(Flow Cytometry)(Coulter)分析DNA含量。用Coulter EPICS XL^TM Cytometers(细胞计数仪)的Expo32-ADC软件，1.1B(2001)版，确定各期的细胞群体。

结果

用实施例1的化合物处理的MDA-435人乳腺癌细胞的G0/G1向S期的过渡阻断比媒介物(用实施例1的化合物处理细胞的38％期过渡阻断与用媒介物处理细胞的28％期过渡阻断相比)更有效。因此，本发明化合物的示例性实例，即实施例1的化合物明显地抑制细胞周期，并因而可用于治疗或预防人乳腺癌。

5.26 实施例26

证实实施例1的化合物诱发MDA-435肿瘤细胞的细胞凋亡的体外实验

方法

用媒介物或不同剂量的实施例1的化合物处理MDA-435人乳腺癌细胞。收获细胞并用Annexin V-FITC和经使用ApoAlert AnnexinV-FITC细胞凋亡试剂盒(Clonetech，BD)的流式细胞计数仪(FlowCytometry)的PI染色。用EPICS XL^TM和XL-MCL，系统II^TM软件，1.0版(1996)确定凋亡细胞的百分比。

结果

实施例1的化合物相关剂量地增加了Annexin V-FITC染色的密度高达细胞群体的30％。Annexin V是具有对磷酯酰丝氨酸(PS)有强亲和力的36kD Ca²⁺蛋白。在非凋亡细胞中，大部分PS分子定位于血浆膜的内层。在凋亡过程中，PS再分布到所述膜的外层。可通过荧光染料共轭的Annexin V检测PS的外表化。这表明本发明化合物的示例性实例，即实施例1的化合物诱发凋亡，并因此可用于治疗或预防癌症，特别是人的乳腺癌。

PI是一种使DNA染色的荧光染料。PI不穿过存活细胞的浆膜。对比之下，凋亡后期的细胞失去其完整性，并因而可渗进PI。用实施例1的化合物处理的细胞的PI染色的增加是其能诱发细胞凋亡的能力和治疗或预防癌症的用途的又一证据。

本发明不限于用作说明本发明几个方面的实施例所公开的具体实施方案的范围，功能等同的任何实施方案均在本发明的范围内。事实上，除本文表明和所述的那些外，对本发明的各种修饰对本领域的技术人员将是显而易见的，且落入所附权利要求书的范围内。

已引用大量参考文献，它们的全部公开通过引用将全文结合到本文中。

Claims

1.一种治疗或预防癌症或肿瘤疾病的方法，它包括给予需要这种治疗的患者有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

m为0-5；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5，和

r为0-5。

2.权利要求1的方法，其中所述癌症是乳腺癌、卵巢癌、睾丸癌、前列腺癌、头癌、颈癌、眼癌、皮肤癌、口腔癌、喉癌、食道癌、胸癌、骨癌、肺癌、结肠癌、乙状结肠癌、直肠癌、胃癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、肠癌、心癌或肾上腺癌。

3.一种抑制癌细胞或肿瘤细胞生长的方法，它包括使癌细胞或肿瘤细胞与有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触：

其中：

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

m为0-5；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5，和

r为0-5。

4.一种治疗或预防急性或慢性肾衰竭、炎性疾病、老化效应、感染性疾病、免疫疾病或心血管疾病的方法，它包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

m为0-5；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5，和

r为0-5。

5.一种治疗或预防对连接酶活性的调节有反应的疾病的方法，它包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

m为0-5；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5，和

r为0-5。

6.权利要求5的方法，其中所述连接酶活性被抑制。

7.权利要求5的方法，其中所述连接酶活性被活化。

8.权利要求5的方法，其中所述连接酶是E3泛素-蛋白连接酶。

9.权利要求8的方法，其中所述连接酶活性被抑制。

10.一种治疗或预防对细胞p27/Kipl水平的调节有反应的疾病的方法，它包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

m为0-5；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5，和

r为0-5。

11.一种调节细胞生长的方法，它包括给予有此需要的患者有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

m为0-5；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5，和

r为0-5。

12.权利要求11的方法，其中所述细胞生长被抑制。

13.权利要求11的方法，其中所述细胞是非癌细胞。

14.一种保存细胞、血液、组织、器官或有机体的方法，它包括使所述血液、组织或器官与有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触：

其中：

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

m为0-5；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5，和

r为0-5。

15.权利要求14的方法，其中所述细胞、血液、组织或器官被冷冻保存。

16.一种治疗或预防化疗或放疗的副作用的方法，它包括给予需要这种治疗的患者有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

m为0-5；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5，和

r为0-5。

17.权利要求16的方法，其中所述副作用是脱发。

18.权利要求16的方法，其中所述副作用是低血细胞计数。

19.权利要求16的方法，其中所述副作用是恶心。

20.权利要求16的方法，其中所述副作用是腹泻。

21.权利要求16的方法，其中所述副作用是口腔损害。

22.一种调节或控制哺乳动物干细胞的分化或成熟的方法，它包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

m为0-5；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5，和

r为0-5。

23.一种适用于治疗与连接酶的调节有关的疾病的药用组合物，它包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体：

其中：

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

m为0-5；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5，和

r为0-5。

24.一种适用于治疗与连接酶的调节有关的疾病的药用组合物，它包含式(II)化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体：

其中：

X’为H、羟基、羧基、烷氧基、烷基氨基、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基、C₂-C₁₀链烯基、C₂-C₁₀炔基、卤代烷基、酰氧基、硫代烷基、磺酰基、亚磺酰基烷基、磺酰基烷基、羟基烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的环烷基、-C(＝O)OR₁、-OC(＝O)R₁、-C(＝O)NR₁R₂、-C(＝O)NR₁OR₂、-SO₂NR₁R₂、-NR₁SO₂R₂、-CN、-NO₂、-NR₁R₂、-NR₁C(＝O)R₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qOR₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qR₂、-NR₁C(＝O)(CH₂)_qNR₁R₂、-O(CH₂)_qNR₁R₂；

R₁和R₂独立为H或分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

Z为C或O；

Q为H、分支或不分支的C₁-C₁₀烷基；

n为0-8；

o为0-2；

p为0-2；

q为0-5；

r为0-5；和

其中X、X’、U或W之一不是H。