CN1668298A - 抗肿瘤化合物及其治疗用途 - Google Patents
抗肿瘤化合物及其治疗用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1668298A CN1668298A CNA038173352A CN03817335A CN1668298A CN 1668298 A CN1668298 A CN 1668298A CN A038173352 A CNA038173352 A CN A038173352A CN 03817335 A CN03817335 A CN 03817335A CN 1668298 A CN1668298 A CN 1668298A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tumor
- purposes described
- medicine
- ret
- treatment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
Abstract
本发明公开了亚芳基2-吲哚酮衍生物用于治疗涉及Met、PDGF-R、FGF-R1、FGF-R3和Kit酪氨酸激酶或Ret家族癌蛋白的肿瘤的用途。本发明还提供了包含亚芳基2-吲哚酮衍生物的药物组合物以及在分别的容器中含有所述衍生物和抗癌或抗肿瘤剂的药盒。
Description
本发明涉及化合物(E)-1,3-二氢-5,6-二甲氧基-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-2H-吲哚-2-酮在治疗涉及Met、PDGF-R、FGF-R1、FGF-R3和Kit酪氨酸激酶或Ret癌蛋白的肿瘤中的用途。
背景技术
RET/PTC癌基因涉及于人乳头状甲状腺肿瘤的转化过程中且产生于具有不同供体基因的原-RET的酪氨酸激酶域的重排。该基因重排的产物表现出独立于配体的赖氨酸激酶活性,并且集中在细胞质中。Ret/ptc1是RET/PTC1癌基因的产物,其产生于具有H4/D10S170基因的原-RET酪氨酸激酶域的重排。
Int.J.Cancer 85,384-390(2000)报道了亚芳基2-吲哚酮化合物对Ret/ptc1癌蛋白酪氨酸激酶活性的抑制。指出1,3-二氢-5,6-二甲氧基-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-2H-吲哚-2-酮衍生物(以下为“化合物1”)在回复RET/PTC1癌基因转化的NIH3T3细胞的形态学表型方面特别有效。在同一文献中,提议将亚芳基2-吲哚酮化合物对酪氨酸激酶的抑制作用用于研究Ret信号传导并用于在与Ret-和Ret/ptcs-相关的疾病中控制细胞增殖。
发明内容
已经发现化合物1能有效地抑制在肿瘤发生、发展和向远端器官扩散中起重要作用的酪氨酸激酶,而不是抑制Ret/ptc1。具体而言,已经显示化合物1可完全抑制Ret/MEN2A(突变C634R和C634W)、Ret/MEN2B(突变M918T)、Met、PDGF-R、FGF-R1、FGF-R3和Kit(c-Kit和突变A559)酪氨酸激酶的自磷酸化作用、降低它们的表达(下调)并回复由此转化的细胞表型。
因此,本发明的目的是化合物(E)-1,3-二氢-5,6-二甲氧基-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-2H-吲哚-2-酮或其与可药用碱的盐在细胞转化的初始阶段或肿瘤增殖和扩散的后续阶段中治疗肿瘤的用途,所述肿瘤涉及Met、PDGF-R、FGF-R1、FGF-R3和Kit酪氨酸激酶中至少之一或涉及Ret癌蛋白家族、包括载有与MEN2-相关突变的Ret受体中至少之一。
本发明还涉及化合物1的任何立体异构体或互变异构形式的用途。
抑制失调的组成型活性Ret受体可用于治疗散发性髓样甲状腺癌(MTC)和与MEN2相关的疾病,包括MTC、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生和肠神经节瘤。
抑制Met可用于对抗上皮源性肿瘤的浸润/转移性表型。对于Met-活化的改变,化合物1在治疗肾脏肿瘤中也具有明确的疗效。
抑制Kit可用于治疗胃肠间质肿瘤、小细胞肺癌、精原细胞瘤和血液恶性肿瘤如肥大细胞病和急性髓性白血病。
PDGF-R活化的失控以及其牵涉入自分泌环支持化合物1在对常规疗法不响应的肿瘤如神经胶质瘤和隆凸性皮肤纤维肉瘤中的治疗用途。另外,PDGF-R涉及肿瘤血管形成和血管发展,由此支持化合物1在控制实体瘤中新血管形成中的用途。
化合物1可用于治疗表达高水平的FGF-R1和最终涉及于自分泌环中的各个bFGF配体的黑素瘤和神经胶质瘤。由于该受体在血管形成过程中起重要作用,故通过化合物1抑制该受体可用于控制肿瘤血管形成。
抑制FGF-R3可用于治疗多发性骨髓瘤、膀胱癌和子宫颈癌。
对于治疗应用,RPI-1及其盐可用可药用的载体和赋形剂进行配制。化合物1的苯酚官能团可通过用适宜的有机或无机碱处理而成盐。药物组合物可通过口服、胃肠外、舌下或透皮途径、优选以片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉末剂、糖浆剂、溶液剂、混悬剂、栓剂、控释形式施用。
该组合物可采用常规技术、使用本领域已知的成分进行制备。活性成分的量可根据疾病的严重程度、患者年龄、施用类型和途径而改变,然而通常使用的量为0.1至1000mg/Kg、优选5至300mg/Kg、更优选20至200mg/Kg,单或多剂、每天一次或多次使用。
发明详述
载有可引起组成型酪氨酸激酶活性的氨基酸取代基的Ret癌蛋白涉及散发性MTC和遗传性2型多发性内分泌腺瘤形成综合征(MEN2A、MEN2B和家族性MTC),所有这些疾病均以存在MTC为特征(Jhiang S.M.等人,Oncogene 19,5590,2000)。然而在散发性MTC中,RET突变是体细胞性的,在MEN2患者中,RET突变存在于种系水平。这些突变引起受体的组成型活化,而没有改变其在细胞膜上的定位。在本研究中所用的Ret癌蛋白涉及Cys634(指Ret/MEN2AC634R和Ret/MEN2AC634W)或Met918(指Ret/MEN2BM918T),并且分别代表了在MEN2A和MNE2B中表达频率最高的Ret癌蛋白。已经在RET/MEN2A(C634R)基因转染的鼠细胞(NIH3T3MEN2A(C634R)细胞)和分别以表达Ret/MEN2A(C634W)和Ret/MEN2B(M918T)为特征的人髓样甲状腺癌细胞系TT和MZ-CRC-1中证明了化合物1的抑制效应(图1、2)。在这些细胞系中观察到癌蛋白酪氨酸磷酸化和表达减少(图1C和2A)。化合物1对Ret/MEN2A和Ret/MEN2B受体自磷酸化的抑制作用与抗增殖作用有关(图1B和2B)。NIH3T3MEN2A(C634R)转染子在暴露于化合物1后回复了它们的转化表型(图1A)。在异种移植了TT肿瘤的裸鼠中已经观察到显著的剂量依赖性抗肿瘤活性:口服施用每日剂量50-100mg/Kg(每日两次)后,化合物1的治疗达到80%肿瘤重量抑制(TWI),而没有产生毒性(图3)。考虑到MTC的攻击性和常规治疗对其无疗效,故所证实的化合物1在控制MTC细胞增殖中的药理学和生物化学效应尤其重要。
Met,即肝细胞生长因子受体是以肿瘤发展和转移性生长为特征的浸润过程中所涉及的蛋白酪氨酸激酶(Maulik G.等人,Cytok.Growth FactorRev.13,41,2000)。改变如突变、过度表达或牵涉入自分泌环是激酶组成型活化失控的原因。Met激酶活性失控涉及于多种上皮源性肿瘤的浸袭力。在乳头状甲状腺癌中,Met被频繁地过度表达。图4中所示结果表明在用化合物1处理的乳头状甲状腺癌细胞系TPC-1中,Met自磷酸化作用呈剂量依赖性抑制。在经处理的细胞中,Met蛋白质水平也有所降低。
其它涉及自分泌环或新血管形成过程的受体酪氨酸激酶如PDGF-R(Rosenkranz S.和Kazlauskas A.Growth Factors 16,201,1999)和FGF-R1(Powers C.J.等人,Endocr.Rel.Cancer 7,165,2000)在癌生长中起重要作用。在对常规疗法没有响应的肿瘤如神经胶质瘤和黑素瘤中,观察到这些受体的活化失调。图5和6中所示结果表明化合物1对由自分泌刺激(图5A)或由外源性配体(图5B和6A)诱导的受体自磷酸化作用的剂量依赖性抑制。这些效应与受体表达降低有关。化合物1的浓度高于15μM可完全抑制PDGF-R的磷酸化作用。
FGF-R3受体酪氨酸激酶的活化突变如染色体异位或点突变导致组成型活性FGF-R3受体失调,其已涉及多发性骨髓瘤和膀胱癌和子宫颈癌(Powers C.J.等人,Endocr.Rel.Cancer 7,165,2000)。化合物1下调在NIH3T3转染子中外源性表达的FGF-R3的酪氨酸自磷酸化作用和表达的能力在图6B中进行了图解。
由于突变或牵涉入不同肿瘤如小细胞肺癌、胃肠间质肿瘤、精原细胞瘤和白血病的自分泌环,Kit酪氨酸激酶被组成型活化(Heinrich M.C.等人,J.Clin.Oncol.20,1692,2002)。如图7所示,化合物1抑制在NIH3T3细胞中外源性表达的Kit(Δ559)突变体的组成型自磷酸化作用和表达(图7B)。该抑制作用与所转染细胞的转化的形态学表型的回复有关(图7A)。另外,图7C显示在小细胞肺癌细胞系N592中化合物1对通过自分泌环活化的c-Kit的剂量依赖性抑制。
如此处所用的术语“肿瘤”意欲包括但不限于各种组织和/或器官如肌肉、骨或结缔组织、皮肤、脑、肺、性器官、淋巴系统或肾脏系统、乳房或血细胞、肝、消化系统、胰和甲状腺或肾上腺的恶性或非恶性细胞的异常细胞增殖。异常细胞增殖可包括但不限于卵巢、乳房、脑、前列腺、结肠、肝、肺、卵巢、子宫、子宫颈、胰、胃肠道、头、颈、鼻咽、皮肤、膀胱、胃、肾脏或睾丸的肿瘤、卡波西肉瘤、胆管癌、绒毛膜癌、神经母细胞瘤、维尔姆斯瘤、霍奇金病、黑素瘤、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病以及急性或慢性粒细胞性淋巴瘤。
本发明的化合物可单独或者与其它抗肿瘤或抗癌剂组合施用,所述抗肿瘤或抗癌剂包括但不限于:阿霉素、柔红霉素、甲氨蝶呤、长春新碱、6-巯嘌呤、阿糖胞苷、环磷酰胺、5-FU、六甲密胺、卡铂、顺铂、伊达比星、紫杉醇、多西他赛、拓扑替康、伊立替康、吉西他滨、L-PAM、BCNU和VP-16。本发明的化合物还可包括在用于治疗肿瘤的药盒中。该药盒可包括其它的抗癌或抗肿瘤剂。
下述附图更详细地解释本发明。
附图说明
图1:化合物1对表达外源性RET/MEN2A(C634R)的NIH3T3MEN2A(C634R)转染子的效应。A)NIH3T3MEN2A(C634R)细胞的转化的形态学表型的回复。将细胞暴露于6μM化合物1达24小时,然后在相差显微镜下照相(原始放大率×100)。B)抗增殖效应。将NIH3T3MEN2A(C634R)细胞和亲本NIH3T3细胞用浓度递增的药物处理72小时,然后用库尔特计数仪计数。可从中计算出所报导的IC50值的剂量效应曲线表明:Ret癌蛋白阳性细胞系对药物的敏感性更高。C)Ret/MEN2A(C634R)自磷酸化作用和表达的抑制。将细胞用溶剂(-)或10μM化合物1(+)处理指定的时间。制备全细胞溶解产物并进行SDS-PAGE,并用抗-pTyr抗体进行免疫印迹分析。剥离探针后,将滤膜用抗-Ret抗体重新印迹。箭头指示Ret/MEN2A受体的部分和全部糖基化形式。在暴露于药物2小时后,受体显示被部分脱磷酸化。更长时间后,酪氨酸完全脱磷酸,这与受体的表达减少有关。
图2:化合物1对包含与MEN2相关的RET突变体的人MTC细胞系的效应。A)对Ret自磷酸化作用的抑制。将分别表达RET/MEN2A(C634W)和RET/MEN2B(M918T)的TT和MZ-CRC-1细胞用指定浓度的化合物1处理24小时。对照细胞(C)接受溶剂。制备全细胞提取物用于免疫印迹分析,用抗-pTyr和抗-Ret抗体探测。如抗-pTyr印迹所显示,将细胞用化合物处理导致两种细胞系中的Ret受体的酪氨酸磷酸化作用均呈剂量依赖性抑制。在用最高浓度的药物处理的细胞中观察到受体浓度的表达下降。B)抗增殖效应。将TT和MZ-CRC-1细胞用浓度递增的化合物1处理7天,然后用库尔特计数仪计数。剂量效应曲线证明了药物干扰两种MTC细胞系的增殖潜力的能力。
图3:化合物1在包含TT髓样甲状腺癌异种移植物的裸鼠中的抗肿瘤活性。在s.c.接种肿瘤细胞后25天开始药物治疗。化合物1以50或100mg/Kg每天两次(2qd)口服递送,连续10天(以箭头表示)。对照小鼠接受赋形剂。该处理诱导对肿瘤生长的显著的剂量依赖性抑制。对于50mg/Kg和100mg/Kg的剂量,TWI分别为60%(P<0.005)和80%(P<0.0005)。
图4:对用化合物1处理的人乳头状甲状腺癌细胞(TPC-1)中Met自磷酸化作用和表达的抑制。A):将TPC-1细胞暴露于溶剂(-)或指定浓度的化合物1达72小时。使用等量的蛋白质以用抗Met-抗体进行免疫沉淀(IP)或用于制备全细胞溶解产物(WCL)。通过SDS-PAGE分离免疫沉淀的蛋白质和WCL、转移至硝酸纤维素膜并用抗-pTyr或抗-Met抗体进行免疫印迹分析。B):细胞如A中处理。将细胞提取物用抗-pTyr抗体进行免疫沉淀并用抗-Met抗体探测。C):使细胞血清饥饿24小时,在后18小时暴露于溶剂或化合物1(60μM)。然后将其不经处理(-)或者用20ng/ml HGF刺激(+)达10分钟。将细胞溶解产物用抗-Met进行免疫沉淀并用抗-pTyr或抗-Met抗体探测。药物处理消除了组成型或HGF诱导的Met酪氨酸磷酸化作用,并引起Met表达下降。
图5:化合物1对全细胞中PDGF-R自磷酸化作用和表达的抑制。A):将2N5A细胞(通过产生PDGF-R自分泌刺激的COL1A1/PDGFB重排所转化的NIH3T3)用指定浓度的化合物1处理72个小时。将细胞提取物用抗-PDGF-R进行免疫沉淀并用抗-pTyr或抗-PDGF-R抗体进行免疫印迹分析。B):将Swiss 3T3细胞血清饥饿24小时,然后用指定浓度的化合物1处理18个小时。在用1nM PDGF刺激5分钟后,制备全细胞溶解产物并用抗-pTyr或抗-PDGF-R进行免疫印迹分析。显示了抗-肌动蛋白印迹的蛋白质负载量。在两种细胞体系中,均证明了药物诱导的对受体酪氨酸磷酸化作用和表达的剂量依赖性抑制。
图6:化合物1对全细胞中FGF-R1和FGF-R3受体的自磷酸化作用和表达的抑制。A):将Swiss 3T3细胞血清饥饿24小时,然后用指定浓度的化合物1处理18个小时。在用100ng/ml FGF刺激5分钟后,制备全细胞溶解产物,并用抗-pTyr或抗-FGF-R1进行免疫印迹分析。显示了抗-肌动蛋白印迹的蛋白质负载量。B):将经FGF-R3突变体Y373C转化的NIH3T3以指定浓度处理72个小时。将细胞提取物用抗-FGF-R3免疫沉淀,然后用抗p-Tyr或抗-FGF-R3进行免疫印迹分析。在两种细胞体系中,均证明了化合物1对受体酪氨酸磷酸化作用和表达的剂量依赖性抑制。
图7:化合物1对表达组成型活化形式的Kit的细胞系的效应。A):表达外源性突变KIT(Δ559)的NIH3T3转染子的转化的形态学表型的回复。将细胞用20μM化合物1处理,24小时后在相差显微镜下照相(原始放大率×100)。B):NIH3T3转染子中Kit(Δ559)自磷酸化作用和表达的抑制。将细胞用指定浓度的化合物1处理72个小时。将细胞溶解产物用抗-Kit抗体进行免疫沉淀并用抗-p-Tyr或抗-Kit抗体进行免疫印迹分析。C):SCLC细胞系N592中c-Kit的表达和自分泌环活化的自磷酸化作用的抑制。将细胞用指定浓度的化合物1处理24小时。将全细胞溶解产物用抗-Kit抗体或用特异性识别酪氨酸磷酸化的/活化的Kit(p-Kit)的抗体进行免疫印迹分析。在两种细胞体系中,均证明了药物诱导的对受体酪氨酸磷酸化作用和表达的剂量依赖性抑制。
材料和方法
细胞系和培养条件
在本研究中使用以下人髓样甲状腺癌(MTC)细胞系。TT细胞系来源于与MEN2A相关的MTC,以表达载有突变C634W的RET癌基因为特征。MZ-CRC-1细胞系来源于与MEN2B相关的MTC,以表达载有突变M918T的RET癌基因为特征。将TT细胞在添加有15%胎牛血清(FCS)(LifeTechnologies,Inc.,Gaithersburg,MD)的Ham′s F12培养基(Bio Whittaker,Verviers,比利时)中培养,而使MZ-CRC-1细胞在添加有10%FCS的Dulbecco改良Eagle’s培养基(DMEM)(Bio Whittaker)中生长。将用作Met过度表述模型的人乳头状甲状腺癌细胞系TPC-1在含10%FCS的DMEM中常规培养。来源于人SCLC的N592细胞的特征是通过SCF配体自分泌刺激Kit活化。将N592细胞在添加有10%FCS的RPMI 1640中培养。将鼠SWISS3T3和NIH3T3成纤维细胞在含10%小牛血清(Colorado SerumCompany,Denver,CO)的DMEM中培养。另外,使用不同癌基因转染的NIH3T3细胞。NIH3T3MEN2A转染子表达RET-MEN2A(C634R)癌基因的短同种型;NIH3T3KITΔ559细胞表达载有在GIST中发现的活化突变Δ559的KIT;NIH3T3FGFR3(Y373C)表达载有在人多发性骨髓瘤细胞系中发现的活化突变Y373C的FGF-R3。2N5A细胞是产生PDGF-R自分泌刺激的COL1A1/PDGFB重排所转化的NIH3T3细胞。将所有NIH3T3转染子于10%CO2气氛下保持在DMEM加5%小牛血清中。
抗增殖实验
将细胞在用化合物1处理3天(NIH3T3和NIH3T3MEN2A细胞)或7天(MTC细胞)后进行胰蛋白酶消化,用库尔特计数仪计数(CoulterElectronics,Luton U.K.)。由剂量效应曲线计算能够抑制细胞增殖50%的浓度(IC50)。每个实验一式两份进行。
抗体
使用以下多克隆抗体:识别两种Ret同种型共有的COOH-末端序列(aa1000-1014)的抗-Ret(Borrello M.G.等人,Mol.Cell Biol.16,2151,1996);来自于Santa Cruz Biotechnology(Santa Cruz,CA)的抗-cKit、抗-Met和抗-FGF-R3;来自于Sigma(St.Louis,MO)的抗-肌动蛋白;来自于UpstateBiotechnology(Lake Placid,NY)的抗-PDGF-R α/β;来自于Cell SignalingTechnology(Beverly,MA)的抗phospho-cKit(Tyr 719)。鼠单克隆抗-磷酸酪氨酸(抗-pTyr)4G10和抗-FGF-R1抗体来自于Upstate Biotechnology。
免疫沉淀和免疫印迹分析
在制备全细胞提取物时,将细胞溶解于含1mM PMSF、10μg/ml抑胃酶肽、12.5μg/ml亮抑酶肽、100KIU抑酶肽、1mM原钒酸钠、1mM钼酸钠的十二烷基硫酸钠(SDS)样品缓冲液(62.5mM Tris-HCl(pH6.8),2%SDS)中。在适当稀释的等分试样中通过bicinchionic acid(BCA)法(Pierce,Rockford,IL)测定蛋白质浓度,然后将样品调节至终浓度为10%甘油、5%β-巯基乙醇和0.001%溴酚蓝。
对于免疫沉淀实验,将细胞用化合物1或溶剂处理指定的时间。将单层细胞用冷磷酸缓冲盐水加0.1mM原钒酸钠冲洗两次,然后在溶解缓冲液(50mM HEPES pH7.6、150mM NaCl、10%甘油、1%Triton X-100、1.5mMMgCl2、1mM EGTA、100mM NaF、10mM焦磷酸钠、10μg/ml抗蛋白酶、20μg/ml胰凝乳蛋白酶抑制剂、10μg/ml E64、1mg/ml pefabloc SC)中于冰上放置20分钟。然后收集细胞、通过22-号针吸取,并以10000g于4℃离心20分钟。通过BCA试剂(Pierce)测定蛋白质浓度。将细胞提取物用蛋白质A-琼脂糖和指定的抗体于4℃旋转孵育2小时。用20mM HEPES pH7.6、150mM NaCl、10%甘油、0.1%Triton X-100洗涤3次后,将免疫沉淀物用完全样品缓冲液洗脱。
将标化的免疫沉淀物(0.5-4mg细胞提取物)或全细胞溶解物(30-60μg)在SDS-PAGE上拆分,并转移至硝基纤维素滤膜。将膜与一抗于4℃孵育过夜。使用来自于Amersham Biosciences(Little Chalfont,英国)或Pierce的增强型化学发光检测系统、通过辣根过氧化物酶-缀合的抗-鼠或抗-兔抗体显现各免疫反应带。
体内实验
所有试验均使用8-11周龄的雌性无胸腺CD-1裸鼠(Charles River,Calco,意大利)进行。将小鼠供养于恒温恒湿的层流室中。根据英国癌症研究指南协调委员会(the United Kingdom Coordinating Committee onCancer Research Guidelines),实验设计经Istituto Nazionale per lo Studio ela Cura dei Tumori的动物实验伦理委员会(米兰,意大利)批准(Workman P.等人,British Journal of Cancer,77,1,1998)。
将MTC细胞TT(1.6×107细胞)以得自体外细胞培养物的细胞悬液形式s.c.接种于小鼠中。每个对照或药物处理组包括8-10个肿瘤。于第0天注射肿瘤细胞,每两周用游标卡尺测定肿瘤直径以跟踪肿瘤的生长。根据下式计算肿瘤重量(TW):TW(mg)=肿瘤体积(mm3)=d2×D/2,其中d和D分别为最短和最长直径。当肿瘤刚刚能被测定(平均TW约50mg)时,即接种肿瘤细胞25天后,开始药物处理。将化合物1溶解于5%乙醇、5%Cremophor EL、90%盐水(0.9%NaCl)中,每日口服递送,每日两次(2qd),持续10天。对照小鼠接受溶剂溶液。
药物功效以TW抑制百分比(经药物处理小鼠相对对照小鼠的TWI%表示为:TWI%=100-(平均TW处理/平均TW对照×100)评价。为了进行统计分析,在评价TWI%的当天将对照和经处理小鼠的TW通过Student’s t检验(双尾)进行比较。P值小于0.05认为具有统计学的显著性。
(E)-1,3-二氢-4-羟基亚苄基-5,6-二甲氧基-(1H)-吲哚-2-酮(化合物1)的制备1)2-硝基-4,5-二甲氧基苯乙酸的合成
C10H11NO6,M.W.241.20
将45g(0.23mole,1eq.)3,4-二甲氧基苯乙酸于28℃-35℃、N2气氛和机械搅拌下溶于100mL(2.2体积)冰醋酸中。将该溶液冷却至15℃-20℃,并于45’内加入发烟硝酸(98%,33mL)在冰醋酸(25mL)中的混合物。一旦加入完成,即可观察到红色固态沉淀。将悬浮液倾倒入冰水(600mL)中,搅拌下放置2小时。滤出固体、用水洗涤并于60℃干燥8小时,得到44g终产物。
产率79.3%(mmol/mmol)
TLC(SiO2;乙酸乙酯10/AcOH 0.5)Rf酸=0.6;Rf产物=0.5。
m.p.199℃-202℃
1H-NMR,(DMSO):3.9ppm(s,6H);4.0ppm(s.,2H);7.12ppm(s.,1H);7.7ppm(s.,1H)。
2)1,3-二氢-5,6-二甲氧基-(1H)-吲哚-2-酮的合成
C10H11NO3,M.W.193.11
将9.2g(38.14mmole,1eq.)3,4-二甲氧基-2-硝基-苯乙酸于25℃、N2气氛和机械搅拌下悬浮于冰醋酸(92mL,10体积)中。向悬浮液中以两等份加入Fe粉,325筛目,97%(12.0g,214.86mmole,5.6eq.)。第一份于室温下加入;然后将混合物回流,30分钟后加入第二份Fe。30’后反应完成,TLC(SiO2;CHCl3 9/MeOH 1),Rf硝基=0.65,Rf吲哚酮=0.71。
将灰色悬浮液冷却至室温,将乙酸于低压下蒸发至固态粗品,将该固态粗品悬浮于氯仿(200mL)中。将盐滤出,有机相用NaCl饱和溶液(100mL)洗涤、经Na2SO4干燥并蒸发至干。将固体悬浮于乙醚(35mL)中达30’、过滤并于50℃干燥2小时。得到6.7g米色固体。
产率:90.9%(mmol/mmol)
m.p.199℃-201℃
TLC(SiO2;乙酸乙酯10/AcOH 0.5)Rf酸=0.6;Rf产物=0.5
1H-NMR,(DMSO):3.4ppm(s,2H);3.69ppm(s.,3H);3.72ppm(s.,3H);6.49ppm(s.,1H);6.92ppm(s.,1H);10.15(S.,1H)。
3)(E)-1,3-二氢-4-羟基亚苄基-5,6-二甲氧基-1H-吲哚-2-酮的合成
C17H15NO4,M.W.297.31
将6.7g(36.9mmole,1eq.)1,3-二氢-5,6-二甲氧基-(1H)-吲哚-2-酮于室温下溶于无水DMSO(50mL)中。向该溶液中加入4-羟基苯甲醛(5.41g,44.3mmole,1.2eq.)和哌啶(4.38g,44.3mmole,1.2eq.),然后搅拌16小时。将该混合物倾倒入H2O(250mL)和HCl 0.5N(150mL)中,观察到固态沉淀。将该溶液冷却至5℃-10℃达1小时、过滤并于真空中于80℃干燥2小时。得到13g湿固体,然后从无水乙醇中结晶,得到6.77g终产物。
产率61.6%(mmol/mmol)
m.p.238℃-240℃
Rf(二氧化硅;乙酸乙酯100%)=0.68。
1H-NMR,(DMSO):3.6ppm(s,3H);3.8ppm(s.,3H);6.5ppm(s.,1H);6.9ppm(d.,2H,J=8.6Hz);10ppm(宽峰s.);12.8ppm(s.)。
在2位的环内双键的E构型借助1D NOE NMR实验确定。
Claims (24)
1.化合物1,3-二氢-5,6-二甲氧基-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-2H-吲哚-2-酮或其无毒盐或异构体在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途,所述肿瘤涉及选自Met、PDGF-R、FGF-R1、FGF-R3、Kit的酪氨酸激酶或Ret家族癌蛋白。
2.根据权利要求1中所述的用途,其中的药物用于治疗表达载有活化的序列突变的RET癌蛋白的肿瘤。
3.根据权利要求2中所述的用途,其中RET癌蛋白包括与MEN2相关的突变。
4.根据权利要求3中所述的用途,其中活化的序列突变为RET/MEN2A(C634R)、RET/MEN2A(C634W)和RET/MEN2B(M918T)。
5.根据权利要求2-4中所述的用途,其中的药物用于治疗髓样甲状腺癌、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生和肠神经节瘤。
6.根据权利要求1中所述的用途,其中的药物用于治疗带有Met活化改变的肿瘤。
7.根据权利要求6中所述的用途,其中所述肿瘤源于上皮。
8.根据权利要求7中所述的用途,其中的药物用于治疗肾脏肿瘤。
9.根据权利要求1中所述的用途,其中的药物用于治疗表达组成型活化Kit的肿瘤。
10.根据权利要求9中所述的用途,其中Kit在序列突变或牵涉入自分泌环后被组成型活化。
11.根据权利要求9中所述的用途,其中的药物用于治疗胃肠间质肿瘤、小细胞肺癌、白血病或精原细胞瘤。
12.根据权利要求1中所述的用途,其中的药物用于治疗涉及PDGF-R的活化失控的肿瘤。
13.根据权利要求12中所述的用途,其中所述肿瘤为神经胶质瘤和隆凸性皮肤纤维肉瘤。
14.根据权利要求1中所述的用途,其中的药物用于治疗高度表达FGF-R1和/或其配体bFGF的肿瘤。
15.根据权利要求14中所述的用途,其中所述肿瘤为黑素瘤和神经胶质瘤。
16.根据权利要求1中所述的用途,其中的药物用于治疗表达组成型活化形式的FGF-R3的肿瘤。
17.根据权利要求16中所述的用途,其中所述肿瘤为多发性骨髓瘤、膀胱癌和子宫颈癌。
18.根据权利要求12和14中所述的用途,其中的药物用于抑制肿瘤血管形成。
19.含有作为活性成分的化合物1,3-二氢-5,6-二甲氧基-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-2H-吲哚-2-酮或其可药用盐以及可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。
20.根据权利要求19中所述的药物组合物,其中所述可药用载体或稀释剂适合于口服或胃肠外施用。
21.根据权利要求19中所述的药物组合物,其还包含不同于1,3-二氢-5,6-二甲氧基-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-2H-吲哚-2-酮的抗肿瘤或抗癌剂。
22.根据权利要求19中所述的药物组合物,其中所述抗肿瘤或抗癌剂选自阿霉素、柔红霉素、甲氨蝶呤、长春新碱、6-巯嘌呤、阿糖胞苷、环磷酰胺、5-FU、六甲密胺、卡铂、顺铂、伊达比星、紫杉醇、多西他赛、拓扑替康、伊立替康、吉西他滨、L-PAM、BCNU和VP-16。
23.在分别的容器中含有化合物1,3-二氢-5,6-二甲氧基-3-[(4-羟苯基)亚甲基]-2H-吲哚-2-酮或其可药用盐以及抗癌或抗肿瘤剂的药盒。
24.根据权利要求23中所述的药盒,其中所述抗肿瘤或抗癌剂选自阿霉素、柔红霉素、甲氨蝶呤、长春新碱、6-巯嘌呤、阿糖胞苷、环磷酰胺、5-FU、六甲密胺、卡铂、顺铂、伊达比星、紫杉醇、多西他赛、拓扑替康、伊立替康、吉西他滨、L-PAM、BCNU和VP-16。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ITMI02A001620 | 2002-07-23 | ||
IT2002MI001620A ITMI20021620A1 (it) | 2002-07-23 | 2002-07-23 | Composto ad ativita' antitumorale |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1668298A true CN1668298A (zh) | 2005-09-14 |
Family
ID=30130912
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNA038173352A Pending CN1668298A (zh) | 2002-07-23 | 2003-07-22 | 抗肿瘤化合物及其治疗用途 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20060258731A1 (zh) |
EP (1) | EP1534271B1 (zh) |
JP (1) | JP2005537277A (zh) |
CN (1) | CN1668298A (zh) |
AT (1) | ATE337001T1 (zh) |
AU (1) | AU2003251437A1 (zh) |
CA (1) | CA2493202A1 (zh) |
DE (1) | DE60307856T2 (zh) |
ES (1) | ES2271649T3 (zh) |
IT (1) | ITMI20021620A1 (zh) |
MX (1) | MXPA05000781A (zh) |
WO (1) | WO2004009083A1 (zh) |
Families Citing this family (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005068424A1 (en) * | 2004-01-20 | 2005-07-28 | Cell Therapeutics Europe S.R.L. | Indolinone derivatives as receptor tyrosine kinase ihibitors |
US7960548B2 (en) * | 2005-04-29 | 2011-06-14 | The Ohio State University Research Foundation | Keratinocyte growth factor receptor—tyrosine specific inhibitors for the prevention of cancer metastatis |
MX2009002471A (es) * | 2006-09-07 | 2009-03-20 | Astrazeneca Ab | Metodo para evaluar a pacientes para tratamiento con farmacos que detectan la transfeccion durante el redondeamiento (ret) de tirosina cinasa receptora. |
CA2738026C (en) | 2008-09-22 | 2017-01-24 | Array Biopharma Inc. | Substituted imidazo[1,2b]pyridazine compounds as trk kinase inhibitors |
AR077468A1 (es) | 2009-07-09 | 2011-08-31 | Array Biopharma Inc | Compuestos de pirazolo (1,5 -a) pirimidina sustituidos como inhibidores de trk- quinasa |
DK3699181T3 (da) | 2014-11-16 | 2023-03-20 | Array Biopharma Inc | Krystallinsk form af (s)-n-(5-((r)-2-(2,5-difluorphenyl)-pyrrolidin-1-yl)-pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)-3-hydroxypyrrolidin-1-carboxamidhydrogensulfat |
EP3322706B1 (en) | 2015-07-16 | 2020-11-11 | Array Biopharma, Inc. | Substituted pyrazolo[1,5-a]pyridine compounds as ret kinase inhibitors |
TN2018000138A1 (en) | 2015-10-26 | 2019-10-04 | Array Biopharma Inc | Point mutations in trk inhibitor-resistant cancer and methods relating to the same |
PE20181888A1 (es) | 2016-04-04 | 2018-12-11 | Loxo Oncology Inc | Formulaciones liquidas de (s)-n-(5-((r)-2-(2,5-difluorofenil)-pirrolidin-1-il)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroxipirrolidina-1-carboxamida |
MA44612A (fr) | 2016-04-04 | 2019-02-13 | Loxo Oncology Inc | Méthodes de traitement de cancers pédiatriques |
US10045991B2 (en) | 2016-04-04 | 2018-08-14 | Loxo Oncology, Inc. | Methods of treating pediatric cancers |
EP3800189B1 (en) | 2016-05-18 | 2023-06-28 | Loxo Oncology, Inc. | Preparation of (s)-n-(5-((r)-2-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)-3-hydroxypyrrolidine-1-carboxamide |
JOP20190077A1 (ar) | 2016-10-10 | 2019-04-09 | Array Biopharma Inc | مركبات بيرازولو [1، 5-a]بيريدين بها استبدال كمثبطات كيناز ret |
TWI704148B (zh) | 2016-10-10 | 2020-09-11 | 美商亞雷生物製藥股份有限公司 | 作為ret激酶抑制劑之經取代吡唑并[1,5-a]吡啶化合物 |
JOP20190092A1 (ar) | 2016-10-26 | 2019-04-25 | Array Biopharma Inc | عملية لتحضير مركبات بيرازولو[1، 5-a]بيريميدين وأملاح منها |
JP6888101B2 (ja) | 2017-01-18 | 2021-06-16 | アレイ バイオファーマ インコーポレイテッド | RETキナーゼ阻害剤としての置換ピラゾロ[1,5−a]ピラジン化合物 |
WO2018136663A1 (en) | 2017-01-18 | 2018-07-26 | Array Biopharma, Inc. | Ret inhibitors |
JOP20190213A1 (ar) | 2017-03-16 | 2019-09-16 | Array Biopharma Inc | مركبات حلقية ضخمة كمثبطات لكيناز ros1 |
TWI791053B (zh) | 2017-10-10 | 2023-02-01 | 美商亞雷生物製藥股份有限公司 | 6-(2-羥基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈之結晶形式及其醫藥組合物 |
TWI812649B (zh) | 2017-10-10 | 2023-08-21 | 美商絡速藥業公司 | 6-(2-羥基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈之調配物 |
WO2019143991A1 (en) | 2018-01-18 | 2019-07-25 | Array Biopharma Inc. | SUBSTITUTED PYRAZOLO[3,4-d]PYRIMIDINE COMPOUNDS AS RET KINASE INHIBITORS |
EP3740491A1 (en) | 2018-01-18 | 2020-11-25 | Array Biopharma, Inc. | Substituted pyrrolo[2,3-d]pyrimidines compounds as ret kinase inhibitors |
CA3087972C (en) | 2018-01-18 | 2023-01-10 | Array Biopharma Inc. | Substituted pyrazolyl[4,3-c]pyridinecompounds as ret kinase inhibitors |
US11964988B2 (en) | 2018-09-10 | 2024-04-23 | Array Biopharma Inc. | Fused heterocyclic compounds as RET kinase inhibitors |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5502072A (en) * | 1993-11-26 | 1996-03-26 | Pfizer Inc. | Substituted oxindoles |
US6147106A (en) * | 1997-08-20 | 2000-11-14 | Sugen, Inc. | Indolinone combinatorial libraries and related products and methods for the treatment of disease |
US6130238A (en) * | 1997-06-20 | 2000-10-10 | Sugen, Inc. | 3-(cyclohexanoheteroarylidenyl)-2-indolinone protein tyrosine kinase inhibitors |
GB9716557D0 (en) * | 1997-08-06 | 1997-10-08 | Glaxo Group Ltd | Benzylidene-1,3-dihydro-indol-2-one derivatives having anti-cancer activity |
US6133305A (en) * | 1997-09-26 | 2000-10-17 | Sugen, Inc. | 3-(substituted)-2-indolinones compounds and use thereof as inhibitors of protein kinase activity |
WO2001060814A2 (en) * | 2000-02-15 | 2001-08-23 | Sugen, Inc. | Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors |
-
2002
- 2002-07-23 IT IT2002MI001620A patent/ITMI20021620A1/it unknown
-
2003
- 2003-07-22 US US10/522,081 patent/US20060258731A1/en not_active Abandoned
- 2003-07-22 ES ES03765081T patent/ES2271649T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-22 EP EP03765081A patent/EP1534271B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-22 CA CA002493202A patent/CA2493202A1/en not_active Abandoned
- 2003-07-22 CN CNA038173352A patent/CN1668298A/zh active Pending
- 2003-07-22 WO PCT/EP2003/007963 patent/WO2004009083A1/en active IP Right Grant
- 2003-07-22 MX MXPA05000781A patent/MXPA05000781A/es active IP Right Grant
- 2003-07-22 JP JP2004522542A patent/JP2005537277A/ja active Pending
- 2003-07-22 AU AU2003251437A patent/AU2003251437A1/en not_active Abandoned
- 2003-07-22 AT AT03765081T patent/ATE337001T1/de not_active IP Right Cessation
- 2003-07-22 DE DE60307856T patent/DE60307856T2/de not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-11-13 US US12/313,033 patent/US20090130229A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1534271B1 (en) | 2006-08-23 |
WO2004009083A1 (en) | 2004-01-29 |
ES2271649T3 (es) | 2007-04-16 |
MXPA05000781A (es) | 2005-09-21 |
ITMI20021620A1 (it) | 2004-01-23 |
AU2003251437A8 (en) | 2004-02-09 |
EP1534271A1 (en) | 2005-06-01 |
WO2004009083A8 (en) | 2005-02-03 |
US20060258731A1 (en) | 2006-11-16 |
DE60307856D1 (de) | 2006-10-05 |
DE60307856T2 (de) | 2007-04-12 |
CA2493202A1 (en) | 2004-01-29 |
ATE337001T1 (de) | 2006-09-15 |
JP2005537277A (ja) | 2005-12-08 |
AU2003251437A1 (en) | 2004-02-09 |
US20090130229A1 (en) | 2009-05-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1668298A (zh) | 抗肿瘤化合物及其治疗用途 | |
CN104411701B (zh) | 作为Bub1抑制剂的用于治疗癌症的取代的环烯并吡唑 | |
CN105873440B (zh) | 抑制tie2激酶的组合物在制备治疗癌症的药物中的用途 | |
US11925638B2 (en) | Pharmaceutical composition comprising diamino heterocyclic carboxamide compound as active ingredient | |
KR102639585B1 (ko) | 엑손 20 삽입 변이형 egfr 선택적 저해제 | |
CN106459010A (zh) | 用作fgfr激酶调节剂的喹喔啉衍生物 | |
EP3677266A1 (en) | Exon 18 and/or exon 21 mutant egfr selective inhibitor | |
CN111372934A (zh) | Tg02的多晶型形式 | |
CN110891588A (zh) | 拟肽大环化合物及其用途 | |
US11219619B2 (en) | Therapeutic agent for hepatocellular carcinoma | |
WO2019242719A1 (zh) | 抑制cdk4/6活性化合物的晶型及其应用 | |
WO2015182628A1 (ja) | ピラジンカルボキサミド化合物を有効成分とする医薬組成物 | |
JP2018104290A (ja) | ピラジンカルボキサミド化合物を有効成分とする医薬組成物 | |
CN1240382C (zh) | 以吡啶并吲哚酮衍生物和抗癌剂为基的药物组合 | |
RU2777535C2 (ru) | Терапевтическое средство для лечения гепатоцеллюлярной карциномы | |
WO2024000615A1 (zh) | 一种酪氨酸蛋白激酶抑制剂及其用途 | |
TWI838345B (zh) | 外顯子18及/或外顯子21突變型egfr之選擇性抑制劑 | |
US10722528B2 (en) | Compositions and methods for inhibiting metastasis | |
WO2016052081A1 (ja) | 癌細胞増殖抑制剤、抗癌剤、及びこれらのスクリーニング方法、並びに新規化合物 | |
CN116249534A (zh) | 嘧啶化合物的结晶 | |
TW202038965A (zh) | L718及/或l792突變型治療抗性egfr抑制劑 | |
TW201143766A (en) | Antitumor agent containing indole compound |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |