CN1650734A - 富酶活性酵母饲料的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种富酶活性酵母饲料的制备方法。将米根霉菌制成米根霉种曲，白地霉制成白地霉种曲，产朊假丝酵母、树状假丝酵母和酿酒酵母制成酵母种子液，分别接种于经α－淀粉酶、糖化酶和纤维素酶进行预处理的固态发酵培养基中，按固态发酵培养基干物质计，接种量为米根霉种曲0.5～2％，酵母种子液12％，白地霉种曲0.4～0.8％，在33－35℃发酵培养28－30小时，经晒干或38～45℃干燥。本发明制备出的富酶活性酵母饲料，不仅是一种蛋白质饲料，而且活酵母细胞总数≥6×108个/克，糖化酶活力≥200U/g，蛋白酶活力≥200U/g，具有酒香味，动物喜食，在配合饲料的添加量为0.1～5％，可明显提高动物生产性能。
Description
技术领域
本发明涉及一种富酶活性酵母饲料的制备方法。
背景技术
饲料酵母的生产在我国已有几十年的历史了，以其丰富的B族维生素、较合理的氨基酸组成、富含活性消化及未知生长因子而在饲料行业中占有较重要的地位，更以其较低的价格及可以部分代替鱼粉而受到饲料生产厂家及广大养殖户的青睐。
在动物日粮中添加酵母，随着酵母菌摄人量的增加，酵母菌的绝对量和相对量增加，能促进肠道乳酸菌、纤维分解菌等有益菌群繁殖及活力提高、促进胃肠对饲料营养物的分解、合成、消化、吸收和利用，增加采食量。同时，酵母菌能有效抑制病源性微生物的繁殖，参与病原微生物菌群生存性竞争，排斥病原菌在胃肠粘膜表面的附着，协助机体消除毒素及其代谢产物，防止毒素和废物的吸收，增强机体免疫和抗病能力，刺激幼畜胃肠发育，对防治家畜消化系统疾病起到益生素的作用。
然而，目前的饲料酵母产品还存在着许多不足：如活酵母菌数量少，酵母细胞在消化道内的代谢活性很低；饲料酵母中酶活性低、适口性差等不足。
为更好地发挥酵母饲料的作用，本发明从酵母菌的筛选和提高产糖化酶、蛋白酶等多种酶能力的措施入手，研究多菌种共同培养条件，研究出的复合酶活性饲料酵母不仅是一种新的蛋白饲料资源、具有酒香味改善适口性，更是一种具有调控肠道微生物区系和提高饲料消化率的活性物质。
发明内容
本发明的目的是提供一种富酶活性酵母饲料的制备方法。
它将米根霉菌制成米根霉种曲，白地霉制成白地霉种曲，产朊假丝酵母、树状假丝酵母和酿酒酵母制成酵母种子液，分别接种于经α-淀粉酶、糖化酶和纤维素酶进行预处理的固态发酵培养基中，按固态发酵培养基干物质计，接种量为米根霉种曲0.5～2％，酵母种子液12％，白地霉种曲0.4～0.8％，在33-35℃发酵培养28-30小时，经晒干或38～45℃干燥。其中酵母种子液中，产朊假丝酵母种子液、树状假丝酵母种子液、酿酒酵母种子液比例为20-10∶20-10∶1。
固态发酵培养基为：麸皮40-60％，谷粉3-10％，酒糟15-20％，豆粕粉20-25％，尿素2-5％组成的混合物。
以固态发酵培养基经α-淀粉酶、糖化酶和纤维素酶进行预处理方法为：将固态发酵培养基与水以1∶0.6-0.7比例混合均匀，在0.1-0.15Mpa压力下蒸煮30-40分钟灭菌，再在固态发酵培养基中添加按固态发酵培养基干物质计0.01％-0.02％α-淀粉酶、0.005％-0.01％糖化酶和0.005％-0.01％纤维素酶，进行预处理1-2小时。
本发明制备出的富酶活性酵母饲料，不仅是一种微生物蛋白质饲料，而且活酵母细胞总数≥6×108个/克，糖化酶活力≥200U/g，蛋白酶活力≥200U/g，具有酒香味，动物喜食，用于畜禽、水产养殖，折合配合饲料的添加量为0.1～5％，可明显提高动物生产性能。
具体实施方式
以麸皮、谷粉、酒糟、豆粕和尿素为原料，经加水、蒸煮灭菌，添加α-淀粉酶、糖化酶和纤维素酶预处理后接种米根霉(Rhizopus oryzae AS 3.866)、白地霉(Geotrichum candidum AS 2.361)、产朊假丝酵母(Candida utilis ACCC2102)、树状假丝酵母(Candida arborea AS 2.566)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae ACCC 2042)等微生物益生菌，糖化发酵培养成复合酶高活性酵母饲料。
1.种曲和种子液制备
米根霉种曲培养
米根霉(Rhizopus oryzae AS 3.866)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：麸皮试管(原种)→三角瓶种子→曲盒种曲(麸皮)→米根霉种曲
麸皮加水70-75％，0.1-0.15Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接种经三角瓶培养的米根霉，接种量0.3％，保温30℃培菌，经12h菌种发芽升温，上曲盒培养，总培养时间30-36h，即可出房干燥，烘干温度前期不超38℃，后期不超45℃，水分10％即为米根霉曲种。
白地霉种曲培养
白地霉(Geotrichum candidum AS 2.361)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：斜面试管(原种)→斜面试管→三角瓶种子(麦芽汁)→种曲
麸皮加水60-70％，蒸煮0.1-0.15Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接三角瓶白地霉种子，接种量0.5％，保温33-35℃培菌，总培养时间24h，即可出房烘干至水分10％即为白地霉种曲。
酵母种子液培养
产朊假丝酵母(Candida utilis ACCC 2102)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心；树状假丝酵母(Candida arborea AS 2.566)：购自中科院微生物所菌种保藏中心；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae ACCC 2042)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。
扩大培养流程(三菌种流程一致，单独培养)：原菌试管→小三角瓶种子(糖液100ml，糖度7-8°Be)30℃保温培养10-12h→转入大三角瓶(糖液600ml，糖度7-8°Be)，30℃保温培养10-12h→转入卡氏罐内(糖水12-13kg，糖度7-8°Be扩大培养)30℃培养10～12h→将卡氏罐酵母种子在酒母缸扩培(培养基为每缸放清水200-300kg，谷粉30kg，麸皮10kg)总培养时间18-20h，即为酵母种子液。
2.固态发酵培养基预处理
将麸皮40-60％，谷粉3-10％，酒糟15-20％，豆粕粉20-25％，尿素2-5％组成固态发酵培养基与水以1∶0.6-0.7比例混合均匀，在0.1-0.15Mpa压力下蒸煮30-40分钟进行灭菌，灭菌后关闭进汽阀，闷料30-40分钟出料，用风机吹冷料至40～45℃，调PH5.5～6，再在固态发酵培养基中添加按固态发酵培养基干物质计0.01％-0.02％α-淀粉酶(酶活以5000U/μg酶计，酶活测定方法参考GB8275-87)、0.005％-0.01％糖化酶(酶活以50000U/g计，酶活测定方法参考GB8276-87)和0.005％-0.01％纤维素酶(酶活以20000U/g计，酶活测定方法参考NY/T 912-2004 GB 8276-87)，用扬麸机打匀，进行预处理1-2小时。
3.接种
经预处理的固态发酵培养基，通风吹冷至33-35℃，分别接种(按培养基干物质计)米根霉种曲0.5～2％，酵母种子液(产朊假丝酵母种子液、树状假丝酵母种子液、酿酒酵母种子液20-10∶20-10∶1)12％，白地霉种曲0.4～0.8％，扬麸机二次打拌均匀，抹平料面，保温培养，发酵温度控制在30℃左右，自行发酵培养。
4.发酵管理
发酵主要管理好发酵温度。开启温度自控仪，接上风机电源，温度控制上限为35℃，下限为33℃。勤观察，勤测试。温控仪探头落点要正确，深度要达到10cm(可边上插温度计做对比)，主要防止探头，温控仪及连接仪表故障，一般6小时后开始升温，前期可用室内风巡回，当天气气温较高或料温升温过猛，可开启室外风门，达到调节生长温度之目的。一般28-30小时发酵完毕，可加大风门，开启门户，不使料温超过38℃，等待出房干燥。
5.干燥
物料培养成熟后，即可出房干燥，当天气晴朗，尽可能在场地上晒干，一可节省能源，二使微生物保持更多的活力。
天雨时，只能烘干，前期料温控制在38℃内，后期料温控制在45℃内，水分小于10％即可出房。
料干燥后即为半成品，经验理化指标和微生物指标检测，达到酵母细胞总数≥8×108个/克，活酵母细胞总数≥6×108个/克，糖化酶活力≥200U/g，蛋白酶活力≥200U/g即为富酶活性酵母饲料。
富酶活性酵母饲料的色泽为淡黄色至棕黄色，具有酒香味。富酶活性酵母可应用于配合饲料、浓缩饲料、预混料或添加剂，其添加量折合配合饲料中的含量为：0.1～5％。
实施例1：
1.种曲和种子液制备
米根霉种曲培养
米根霉(Rhizopus oryzae AS 3.866)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：麸皮试管(原种)→三角瓶种子→曲盒种曲(麸皮)→米根霉种曲
麸皮加水70％，0.1Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接种经三角瓶培养的米根霉，接种量0.3％，保温30℃培菌，经12h菌种发芽升温，上曲盒培养，总培养时间30h，即可出房干燥，烘干温度前期不超38℃，后期不超45℃，水分10％即为米根霉曲种。
白地霉种曲培养
白地霉(Geotrichum candidum AS 2.361)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：斜面试管(原种)→斜面试管→三角瓶种子(麦芽汁)→种曲
麸皮加水60％，蒸煮0.1Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接三角瓶白地霉种子，接种量0.5％，保温33℃培菌，总培养时间24h，即可出房烘干至水分10％即为白地霉种曲。
酵母种子液培养
产朊假丝酵母(Candida utilis ACCC 2102)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心；树状假丝酵母(Candida arborea AS 2.566)：购自中科院微生物所菌种保藏中心；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae ACCC 2042)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。
扩大培养流程(三菌种流程一致，单独培养)：原菌试管→小三角瓶种子(糖液100ml，糖度7°Be)30℃保温培养10h→转入大三角瓶(糖液600ml，糖度7°Be)，30℃保温培养10h→转入卡氏罐内(糖水12kg，糖度7°Be扩大培养)30℃培养10h→将卡氏罐酵母种子在酒母缸扩培(培养基为每缸放清水200kg，谷粉30kg，麸皮10kg)总培养时间18h，即为酵母种子液。
2.固态发酵培养基预处理
将麸皮40％，谷粉10％，酒糟20％，豆粕粉25％，尿素5％组成固态发酵培养基与水以1∶0.6比例混合均匀，在0.1Mpa压力下蒸煮30分钟进行灭菌，灭菌后关闭进汽阀，闷料30分钟出料，用风机吹冷料至40℃，调PH5.5，再在固态发酵培养基中添加按固态发酵培养基干物质计0.01％α-淀粉酶(酶活以5000U/μg酶计，酶活测定方法参考GB 8275-87)、0.005％糖化酶(酶活以50000U/g计，酶活测定方法参考GB 8276-87)和0.005％纤维素酶(酶活以20000U/g计，酶活测定方法参考NY/T 912-2004 GB 8276-87)，用扬麸机打匀，进行预处理1小时。
3.接种
经预处理的固态发酵培养基，通风吹冷至33℃，分别接种(按培养基干物质计)米根霉种曲0.5％，酵母种子液(产朊假丝酵母种子液、树状假丝酵母种子液、酿酒酵母种子液10∶10∶1)12％，白地霉种曲0.4％，扬麸机二次打拌均匀，抹平料面，保温培养，发酵温度控制在30℃左右，自行发酵培养。
4.发酵管理
发酵主要管理好发酵温度。开启温度自控仪，接上风机电源，温度控制上限为35℃，下限为33℃。勤观察，勤测试。温控仪探头落点要正确，深度要达到10cm(可边上插温度计做对比)，主要防止探头，温控仪及连接仪表故障，一般6小时后开始升温，前期可用室内风巡回，当天气气温较高或料温升温过猛，可开启室外风门，达到调节生长温度之目的。经28小时发酵完毕，可加大风门，开启门户，不使料温超过38℃，等待出房干燥。
5.干燥
物料培养成熟后，即可出房干燥，当天气晴朗，尽可能在场地上晒干，一可节省能源，二使微生物保持更多的活力。
天雨时，只能烘干，前期料温控制在38℃内，后期料温控制在45℃内，水分小于10％即可出房。
料干燥后即为半成品，经验理化指标和微生物指标检测，达到酵母细胞总数≥8×108个/克，活酵母细胞总数≥6×108个/克，糖化酶活力≥200U/g，蛋白酶活力≥200U/g即为富酶活性酵母饲料。
实施例2：
1.种曲和种子液制备
米根霉种曲培养
米根霉(Rhizopus oryzae AS 3.866)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：麸皮试管(原种)→三角瓶种子→曲盒种曲(麸皮)→米根霉种曲
麸皮加水75％，0.15Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接种经三角瓶培养的米根霉，接种量0.3％，保温30℃培菌，经12h菌种发芽升温，上曲盒培养，总培养时间36h，即可出房干燥，烘干温度前期不超38℃，后期不超45℃，水分10％即为米根霉曲种。
白地霉种曲培养
白地霉(Geotrichum candidum AS 2.361)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：斜面试管(原种)→斜面试管→三角瓶种子(麦芽汁)→种曲
麸皮加水70％，蒸煮0.15Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接三角瓶白地霉种子，接种量0.5％，保温35℃培菌，总培养时间24h，即可出房烘干至水分10％即为白地霉种曲。
酵母种子液培养
产朊假丝酵母(Candida utilis ACCC 2102)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心；树状假丝酵母(Candida arborea AS 2.566)：购自中科院微生物所菌种保藏中心；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae ACCC 2042)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。
扩大培养流程(三菌种流程一致，单独培养)：原菌试管→小三角瓶种子(糖液100ml，糖度8°Be)30℃保温培养12h→转入大三角瓶(糖液600ml，糖度8°Be)，30℃保温培养12h→转入卡氏罐内(糖水12-13kg，糖度8°Be扩大培养)30℃培养12h→将卡氏罐酵母种子在酒母缸扩培(培养基为每缸放清水300kg，谷粉30kg，麸皮10kg)总培养时间20h，即为酵母种子液。
2.固态发酵培养基预处理
将麸皮60％，谷粉3％，酒糟15％，豆粕粉20％，尿素2％组成固态发酵培养基与水以1∶0.7比例混合均匀，在0.15Mpa压力下蒸煮40分钟进行灭菌，灭菌后关闭进汽阀，闷料40分钟出料，用风机吹冷料至45℃，调PH至6，再在固态发酵培养基中添加按固态发酵培养基干物质计0.02％α-淀粉酶（酶活以5000U/μg酶计，酶活测定方法参考GB 8275-87)、0.01％糖化酶(酶活以50000U/g计，酶活测定方法参考GB 8276-87)和0.01％纤维素酶(酶活以20000U/g计，酶活测定方法参考NY/T 912-2004 GB 8276-87)，用扬麸机打匀，进行预处理2小时。
3.接种
经预处理的固态发酵培养基，通风吹冷至35℃，分别接种(按培养基干物质计)米根霉种曲2％，酵母种子液(产朊假丝酵母种子液、树状假丝酵母种子液、酿酒酵母种子液20∶20∶1)12％，白地霉种曲0.8％，扬麸机二次打拌均匀，抹平料面，保温培养，发酵温度控制在30℃左右，自行发酵培养。
4.发酵管理
发酵主要管理好发酵温度。开启温度自控仪，接上风机电源，温度控制上限为35℃，下限为33℃。勤观察，勤测试。温控仪探头落点要正确，深度要达到10cm(可边上插温度计做对比)，主要防止探头，温控仪及连接仪表故障，一般6小时后开始升温，前期可用室内风巡回，当天气气温较高或料温升温过猛，可开启室外风门，达到调节生长温度之目的。一般30小时发酵完毕，可加大风门，开启门户，不使料温超过38℃，等待出房干燥。
5.干燥
物料培养成熟后，即可出房干燥，当天气晴朗，尽可能在场地上晒干，一可节省能源，二使微生物保持更多的活力。
天雨时，只能烘干，前期料温控制在38℃内，后期料温控制在45℃内，水分小于10％即可出房。
料干燥后即为半成品，经验理化指标和微生物指标检测，达到酵母细胞总数≥8×108个/克，活酵母细胞总数≥6×108个/克，糖化酶活力≥200U/g，蛋白酶活力≥200U/g即为富酶活性酵母饲料。
实施例3：
1.种曲和种子液制备
米根霉种曲培养
米根霉(Rhizopus oryzae AS 3.866)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：麸皮试管(原种)→三角瓶种子→曲盒种曲(麸皮)→米根霉种曲
麸皮加水72.5％，0.12Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接种经三角瓶培养的米根霉，接种量0.3％，保温30℃培菌，经12h菌种发芽升温，上曲盒培养，总培养时间33h，即可出房干燥，烘干温度前期不超38℃，后期不超45℃，水分10％即为米根霉曲种。
白地霉种曲培养
白地霉(Geotrichum candidum AS 2.361)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：斜面试管(原种)→斜面试管→三角瓶种子(麦芽汁)→种曲
麸皮加水65％，蒸煮0.12Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接三角瓶白地霉种子，接种量0.5％，保温34℃培菌，总培养时间24h，即可出房烘干至水分10％即为白地霉种曲。
酵母种子液培养
产朊假丝酵母(Candida utilis ACCC 2102)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心；树状假丝酵母(Candida arborea AS 2.566)：购自中科院微生物所菌种保藏中心；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae ACCC 2042)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。
扩大培养流程(三菌种流程一致，单独培养)：原菌试管→小三角瓶种子(糖液100ml，糖度7.5°Be)30℃保温培养11h→转入大三角瓶(糖液600ml，糖度7.5°Be)，30℃保温培养11h→转入卡氏罐内(糖水12.5kg，糖度7.5°Be扩大培养)30℃培养11h→将卡氏罐酵母种子在酒母缸扩培(培养基为每缸放清水250kg，谷粉30kg，麸皮10kg)总培养时间19h，即为酵母种子液。
2.固态发酵培养基预处理
将麸皮50％，谷粉6.5％，酒糟17.5％，豆粕粉22.5％，尿素3.5％组成固态发酵培养基与水以1∶0.65比例混合均匀，在0.12Mpa压力下蒸煮35分钟进行灭菌，灭菌后关闭进汽阀，闷料35分钟出料，用风机吹冷料至42.5℃，调PH5.7，再在固态发酵培养基中添加按固态发酵培养基干物质计0.015％α-淀粉酶(酶活以5000U/μg酶计，酶活测定方法参考GB 8275-87)、0.008％糖化酶(酶活以50000U/g计，酶活测定方法参考GB 8276-87)和0.008％纤维素酶(酶活以20000U/g计，酶活测定方法参考NY/T 912-2004 GB 8276-87)，用扬麸机打匀，进行预处理1.5小时。
3.接种
经预处理的固态发酵培养基，通风吹冷至34℃，分别接种(按培养基干物质计)米根霉种曲1.25％，酵母种子液(产朊假丝酵母种子液、树状假丝酵母种子液、酿酒酵母种子液15∶15∶1)12％，白地霉种曲0.6％，扬麸机二次打拌均匀，抹平料面，保温培养，发酵温度控制在30℃左右，自行发酵培养。
4.发酵管理
发酵主要管理好发酵温度。开启温度自控仪，接上风机电源，温度控制上限为35℃，下限为33℃。勤观察，勤测试。温控仪探头落点要正确，深度要达到10cm(可边上插温度计做对比)，主要防止探头，温控仪及连接仪表故障，一般6小时后开始升温，前期可用室内风巡回，当天气气温较高或料温升温过猛，可开启室外风门，达到调节生长温度之目的。经29小时发酵完毕，可加大风门，开启门户，不使料温超过38℃，等待出房干燥。
5.干燥
物料培养成熟后，即可出房干燥，当天气晴朗，尽可能在场地上晒干，一可节省能源，二使微生物保持更多的活力。
天雨时，只能烘干，前期料温控制在38℃内，后期料温控制在45℃内，水分小于10％即可出房。
料干燥后即为半成品，经验理化指标和微生物指标检测，达到酵母细胞总数≥8×108个/克，活酵母细胞总数≥6×108个/克，糖化酶活力≥200U/g，蛋白酶活力≥200U/g即为富酶活性酵母饲料。
实施例4：
1.种曲和种子液制备
米根霉种曲培养
米根霉(Rhizopus oryzae AS 3.866)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：麸皮试管(原种)→三角瓶种子→曲盒种曲(麸皮)→米根霉种曲
麸皮加水72.5％，0.12Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接种经三角瓶培养的米根霉，接种量0.3％，保温30℃培菌，经12h菌种发芽升温，上曲盒培养，总培养时间33h，即可出房干燥，烘干温度前期不超38℃，后期不超45℃，水分10％即为米根霉曲种。
白地霉种曲培养
白地霉(Geotrichum candidum AS 2.361)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：斜面试管(原种)→斜面试管→三角瓶种子(麦芽汁)→种曲
麸皮加水65％，蒸煮0.12Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接三角瓶白地霉种子，接种量0.5％，保温34℃培菌，总培养时间24h，即可出房烘干至水分10％即为白地霉种曲。
酵母种子液培养
产朊假丝酵母(Candida utilis ACCC 2102)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心；树状假丝酵母(Candida arborea AS 2.566)：购自中科院微生物所菌种保藏中心；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae ACCC 2042)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。
扩大培养流程(三菌种流程一致，单独培养)：原菌试管→小三角瓶种子(糖液100ml，糖度7.5°Be)30℃保温培养11h→转入大三角瓶(糖液600ml，糖度7.5°Be)，30℃保温培养11h→转入卡氏罐内(糖水12.5kg，糖度7.5°Be扩大培养)30℃培养11h→将卡氏罐酵母种子在酒母缸扩培(培养基为每缸放清水250kg，谷粉30kg，麸皮10kg)总培养时间19h，即为酵母种子液。
2.固态发酵培养基预处理
将麸皮50％，谷粉6.5％，酒糟17.5％，豆粕粉22.5％，尿素3.5％组成固态发酵培养基与水以1∶0.65比例混合均匀，在0.12Mpa压力下蒸煮35分钟进行灭菌，灭菌后关闭进汽阀，闷料35分钟出料，用风机吹冷料至42.5℃，调PH5.7，再在固态发酵培养基中添加按固态发酵培养基干物质计0.015％α-淀粉酶(酶活以5000U/μg酶计，酶活测定方法参考GB 8275-87)、0.008％糖化酶(酶活以50000U/g计，酶活测定方法参考GB 8276-87)和0.008％纤维素酶(酶活以20000U/g计，酶活测定方法参考NY/T 912-2004 GB 8276-87)，用扬麸机打匀，进行预处理1.5小时。
3.接种
经预处理的固态发酵培养基，通风吹冷至34℃，分别接种(按培养基干物质计)米根霉种曲0.5％，酵母种子液(产朊假丝酵母种子液、树状假丝酵母种子液、酿酒酵母种子液20∶20∶1)12％，白地霉种曲0.8％，扬麸机二次打拌均匀，抹平料面，保温培养，发酵温度控制在30℃左右，自行发酵培养。
4.发酵管理
发酵主要管理好发酵温度。开启温度自控仪，接上风机电源，温度控制上限为35℃，下限为33℃。勤观察，勤测试。温控仪探头落点要正确，深度要达到10cm(可边上插温度计做对比)，主要防止探头，温控仪及连接仪表故障，一般6小时后开始升温，前期可用室内风巡回，当天气气温较高或料温升温过猛，可开启室外风门，达到调节生长温度之目的。经29小时发酵完毕，可加大风门，开启门户，不使料温超过38℃，等待出房干燥。
5.干燥
物料培养成熟后，即可出房干燥，当天气晴朗，尽可能在场地上晒干，一可节省能源，二使微生物保持更多的活力。
天雨时，只能烘干，前期料温控制在38℃内，后期料温控制在45℃内，水分小于10％即可出房。
料干燥后即为半成品，经验理化指标和微生物指标检测，达到酵母细胞总数≥8×108个/克，活酵母细胞总数≥6×108个/克，糖化酶活力≥200U/g，蛋白酶活力≥200U/g即为富酶活性酵母饲料。
实施例5：
1.种曲和种子液制备
米根霉种曲培养
米根霉(Rhizopus oryzae AS 3.866)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：麸皮试管(原种)→三角瓶种子→曲盒种曲(麸皮)→米根霉种曲
麸皮加水72.5％，0.12Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接种经三角瓶培养的米根霉，接种量0.3％，保温30℃培菌，经12h菌种发芽升温，上曲盒培养，总培养时间33h，即可出房干燥，烘干温度前期不超38℃，后期不超45℃，水分10％即为米根霉曲种。
白地霉种曲培养
白地霉(Geotrichum candidum AS 2.361)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：斜面试管(原种)→斜面试管→三角瓶种子(麦芽汁)→种曲
麸皮加水65％，蒸煮0.12Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接三角瓶白地霉种子，接种量0.5％，保温34℃培菌，总培养时间24h，即可出房烘干至水分10％即为白地霉种曲。
酵母种子液培养
产朊假丝酵母(Candida utilis ACCC 2102)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心；树状假丝酵母(Candida arborea AS 2.566)：购自中科院微生物所菌种保藏中心；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae ACCC 2042)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。
扩大培养流程(三菌种流程一致，单独培养)：原菌试管→小三角瓶种子(糖液100ml，糖度7.5°Be)30℃保温培养11h→转入大三角瓶(糖液600ml，糖度7.5°Be)，30℃保温培养11h→转入卡氏罐内(糖水12.5kg，糖度7.5°Be扩大培养)30℃培养11h→将卡氏罐酵母种子在酒母缸扩培(培养基为每缸放清水250kg，谷粉30kg，麸皮10kg)总培养时间19h，即为酵母种子液。
2.固态发酵培养基预处理
将麸皮50％，谷粉6.5％，酒糟17.5％，豆粕粉22.5％，尿素3.5％组成固态发酵培养基与水以1∶0.65比例混合均匀，在0.12Mpa压力下蒸煮35分钟进行灭菌，灭菌后关闭进汽阀，闷料35分钟出料，用风机吹冷料至42.5℃，调PH5.7，再在固态发酵培养基中添加按固态发酵培养基干物质计0.015％α-淀粉酶(酶活以5000U/μg酶计，酶活测定方法参考GB 8275-87)、0.008％糖化酶(酶活以50000U/g计，酶活测定方法参考GB 8276-87)和0.008％纤维素酶(酶活以20000U/g计，酶活测定方法参考NY/T 912-2004 GB 8276-87)，用扬麸机打匀，进行预处理1.5小时。
3.接种
经预处理的固态发酵培养基，通风吹冷至34℃，分别接种(按培养基干物质计)米根霉种曲2％，酵母种子液(产朊假丝酵母种子液、树状假丝酵母种子液、酿酒酵母种子液10∶10∶1)12％，白地霉种曲0.8％，扬麸机二次打拌均匀，抹平料面，保温培养，发酵温度控制在30℃左右，自行发酵培养。
4.发酵管理
发酵主要管理好发酵温度。开启温度自控仪，接上风机电源，温度控制上限为35℃，下限为33℃。勤观察，勤测试。温控仪探头落点要正确，深度要达到10cm(可边上插温度计做对比)，主要防止探头，温控仪及连接仪表故障，一般6小时后开始升温，前期可用室内风巡回，当天气气温较高或料温升温过猛，可开启室外风门，达到调节生长温度之目的。经29小时发酵完毕，可加大风门，开启门户，不使料温超过38℃，等待出房干燥。
5.干燥
物料培养成熟后，即可出房干燥，当天气晴朗，尽可能在场地上晒干，一可节省能源，二使微生物保持更多的活力。
天雨时，只能烘干，前期料温控制在38℃内，后期料温控制在45℃内，水分小于10％即可出房。
料干燥后即为半成品，经验理化指标和微生物指标检测，达到酵母细胞总数≥8×108个/克，活酵母细胞总数≥6×108个/克，糖化酶活力≥200U/g，蛋白酶活力≥200U/g即为富酶活性酵母饲料。
实施例6：
1.种曲和种子液制备
米根霉种曲培养
米根霉(Rhizopus oryzae AS 3.866)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：麸皮试管(原种)→三角瓶种子→曲盒种曲(麸皮)→米根霉种曲
麸皮加水72.5％，0.12Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接种经三角瓶培养的米根霉，接种量0.3％，保温30℃培菌，经12h菌种发芽升温，上曲盒培养，总培养时间33h，即可出房干燥，烘干温度前期不超38℃，后期不超45℃，水分10％即为米根霉曲种。
白地霉种曲培养
白地霉(Geotrichum candidum AS 2.361)：购自中科院微生物所菌种保藏中心。
扩大培养流程：斜面试管(原种)→斜面试管→三角瓶种子(麦芽汁)→种曲
麸皮加水65％，蒸煮0.12Mpa条件下蒸煮30分钟，冷却到35℃接三角瓶白地霉种子，接种量0.5％，保温34℃培菌，总培养时间24h，即可出房烘干至水分10％即为白地霉种曲。
酵母种子液培养
产朊假丝酵母(Candida utilis ACCC 2102)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心；树状假丝酵母(Candida arborea AS 2.566)：购自中科院微生物所菌种保藏中心；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae ACCC 2042)：购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。
扩大培养流程(三菌种流程一致，单独培养)：原菌试管→小三角瓶种子(糖液100ml，糖度7.5°Be)30℃保温培养11h→转入大三角瓶(糖液600ml，糖度7.5°Be)，30℃保温培养11h→转入卡氏罐内(糖水12.5kg，糖度7.5°Be扩大培养)30℃培养11h→将卡氏罐酵母种子在酒母缸扩培(培养基为每缸放清水250kg，谷粉30kg，麸皮10kg)总培养时间19h，即为酵母种子液。
2.固态发酵培养基预处理
将麸皮50％，谷粉6.5％，酒糟17.5％，豆粕粉22.5％，尿素3.5％组成固态发酵培养基与水以1∶0.65比例混合均匀，在0.12Mpa压力下蒸煮35分钟进行灭菌，灭菌后关闭进汽阀，闷料35分钟出料，用风机吹冷料至42.5℃，调PH5.7，再在固态发酵培养基中添加按固态发酵培养基干物质计0.015％α-淀粉酶(酶活以5000U/μg酶计，酶活测定方法参考GB 8275-87)、0.008％糖化酶(酶活以50000U/g计，酶活测定方法参考GB 8276-87)和0.008％纤维素酶(酶活以20000U/g计，酶活测定方法参考NY/T 912-2004 GB 8276-87)，用扬麸机打匀，进行预处理1.5小时。
3.接种
经预处理的固态发酵培养基，通风吹冷至34℃，分别接种(按培养基干物质计)米根霉种曲2％，酵母种子液(产朊假丝酵母种子液、树状假丝酵母种子液、酿酒酵母种子液20∶20∶1)12％，白地霉种曲0.4％，扬麸机二次打拌均匀，抹平料面，保温培养，发酵温度控制在30℃左右，自行发酵培养。
4.发酵管理
发酵主要管理好发酵温度。开启温度自控仪，接上风机电源，温度控制上限为35℃，下限为33℃。勤观察，勤测试。温控仪探头落点要正确，深度要达到10cm(可边上插温度计做对比)，主要防止探头，温控仪及连接仪表故障，一般6小时后开始升温，前期可用室内风巡回，当天气气温较高或料温升温过猛，可开启室外风门，达到调节生长温度之目的。经29小时发酵完毕，可加大风门，开启门户，不使料温超过38℃，等待出房干燥。
5.干燥
物料培养成熟后，即可出房干燥，当天气晴朗，尽可能在场地上晒干，一可节省能源，二使微生物保持更多的活力。
天雨时，只能烘干，前期料温控制在38℃内，后期料温控制在45℃内，水分小于10％即可出房。
料干燥后即为半成品，经验理化指标和微生物指标检测，达到酵母细胞总数≥8×108个/克，活酵母细胞总数≥6×108个/克，糖化酶活力≥200U/g，蛋白酶活力≥200U/g即为富酶活性酵母饲料。
应用实例
截止2004年10月底的三年时间内，本课题组在先后浙江杭州、宁波、金华等10余家养殖场，用本发明的富酶活性酵母进行对比试验，理化指标的实验室分析及生产性应用表明：
应用实例1：富酶活性酵母对0-28日龄肉鸡生产性能的影响
| 组别 | 对照组 | 试验组 |
| 鸡数 | 150 | 150 |
| 平均始重(g) | 39.83±0.64a | 40.87±1.8a |
| 平均末重(g) | 586.5±105.6a | 622.7±80.6a |
| 平均日增重(g) | 19.40±3.77a | 20.75±2.88a |
| 料重比 | 2.15±0.01a | 2.03±0.06b |
| 成活率(％) | 92.0±2.00a | 95.3±3.06a |
结果表明：0-28日龄，试验组日粮以3％的高活性酵母替代3％豆粕，试验组平均末重、平均日增重、成活率分别比对照组提高6.17％(P＞0.05)、6.96％(P＞0.05)和3.59％(P＞0.05)。试验组料重比比对照组下降5.58％(P＜0.05)。
应用实例2：富酶活性酵母对0-49日龄肉鸡生产性能的影响
| 组别 | 对照组 | 试验组 |
| 鸡数 | 150 | 150 |
| 平均始重(g) | 39.83±0.64a | 40.87±1.8a |
| 平均末重(g) | 1497.0±202.6a | 1627.8±182.3b |
| 平均日增重(g) | 29.74±3.77a | 32.39±2.88b |
| 料重比 | 2.46±0.08a | 2.34±0.09a |
| 成活率 | 92.0±2.00a | 95.3±3.06a |
结果表明，0-49日龄，试验组日粮以3％的高活性酵母替代3％豆粕，试验组平均末重、平均日增重、成活率分别比对照组提高8.74％(P＜0.05)、8.91％(P＜0.05)和3.59％(P＞0.05)。试验组料重比比对照组下降4.88％(P＞0.05)。
应用实例3：复合酶活性酵母对母猪繁殖性能的影响
| 产活仔头数 | 初生窝重(Kg) | 初生重(Kg) | |
| 对照组 | 10.0±1.4 | 12.56±1.32 | 1.26±0.10 |
| 试验组 | 10.7±1.0 | 14.71±1.58 | 1.38±0.15 |
由表可见，复合酶活性酵母对母猪繁殖性能有一定影响。产活仔头数、初生仔猪窝重和仔猪初生重试验组比对照组分别提高7.0％(P＞0.05)、17.12％(P＞0.05)和9.52％(P＞0.05)。
复合酶活性酵母对乳猪生产性能的影响
应用实例4：复合酶活性酵母对乳猪生产性能的影响
| 断奶均重(Kg) | 日增重(g) | 成活率(％) | |
| 对照组 | 8.02±0.24 | 242±16 | 92.37±0.07 |
| 试验组 | 8.58±0.17 | 257±21 | 95.48±0.05 |
由表可见表：复合酶活性酵母对乳猪生产性能有一定影响。断奶均重、日增重和成活率试验组比对照组分别提高6.98％(P＞0.05)、6.20％(P＞0.05)和3.37％(P＞0.05)。
应用实例5：富酶活性酵母对日粮总能和粗蛋白表观消化率的影响
| 组别 | 对照组 | 试验组I | 试验组II |
| 总能表观消化率 | 77.17±1.05a | 81.79±1.56b | 76.95±0.94 |
| 粗蛋白质表观消化率(％) | 72.98±1.63a | 77.25±1.02b | 72.67±1.23a |
由表可见，应用富酶活性酵母对试验猪日粮总能和粗蛋白的表观消化率有显著影响。与对照组和普通酵母组相比，日粮总能的表观消化率分别提高6.0％(P＜0.05)和6.3％(P＜0.05)，粗蛋白的表观消化率分别提高5.9％(P＜0.05)和6.3％(P＜0.05)。对照组和普通酵母组无明显差异。
应用实例6：富酶活性酵母对试验猪生产性能的影响
| 组别 | 对照组 | 试验组I | 试验组II |
| 始重(Kg) | 21.12±0.23a | 21.08±0.18a | 20.97±0.31a |
| 末重(Kg) | 38.43±0.81a | 39.77±0.58a | 38.44±0.73a |
| 平均日增重(g) | 540±29a | 586±37b | 546±41a |
| 平均日采食量(g) | 1402±39a | 1454±43a | 1426±33a |
| 料重比 | 2.59±0.19a | 2.37±0.14a | 2.61±0.23a |
| 腹泻率(％) | 6.61±1.21a | 3.70±0.92b | 6.08±0.92a |
由表2-2可见：应用富酶活性酵母比对照组和普通酵母组的平均末重提高3.5％(P＞0.05)和3.5％(P＞0.05)；平均日增重提高8.5％(P＜0.05)和7.3％(P＜0.05)；料重比下降了8.5％(P＜0.05)(P＞0.05)和9.2％(P＜0.05)；试验猪腹泻频率分别下降44.0％(P＜0.05)和39.1％(P＜0.05)。对照组和普通酵母组间生产性能无明显差异。
Claims (3)
1.一种富酶活性酵母饲料的制备方法，其特征在于将米根霉菌制成米根霉种曲，白地霉制成白地霉种曲，产朊假丝酵母、树状假丝酵母和酿酒酵母制成酵母种子液，接种于经α-淀粉酶、糖化酶和纤维素酶进行预处理的固态发酵培养基中，接种量为米根霉种曲0.5～2％，酵母种子液12％，白地霉种曲0.4～0.8％，在33-35℃发酵培养28-30小时后，经晒干或38～45℃干燥，其中酵母种子液中，产朊假丝酵母种子液、树状假丝酵母种子液、酿酒酵母种子液比例为20-10∶20-10∶1。
2.根据权利要求1所述的一种富酶活性酵母饲料的制备方法，其特征在于所述的固态发酵培养基为：麸皮40-60％，谷粉3-10％，酒糟15-20％，豆粕粉20-25％，尿素2-5％组成的混合物。
3.根据权利要求1所述的一种富酶活性酵母饲料的制备方法，其特征在于所述以固态发酵培养基经α-淀粉酶、糖化酶和纤维素酶进行预处理方法为：将固态发酵培养基与水以1∶0.6-0.7比例混合均匀，在0.1-0.15Mpa压力下蒸煮30-40分钟灭菌，再在固态发酵培养基中添加按固态发酵培养基干物质计0.01％-0.02％α-淀粉酶、0.005％-0.01％糖化酶和0.005％-0.01％纤维素酶，进行预处理1-2小时。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Assignee: Jiangmen Huihai Feed Factory Co., Ltd. Assignor: Zhejiang University Contract fulfillment period: 2008.3.1 to 2015.2.28 contract change Contract record no.: 2009330001203 Denomination of invention: Preparation method of enzyme enriched active yeast feed Granted publication date: 20070124 License type: Exclusive license Record date: 2009.5.25 |
|
| LIC | Patent licence contract for exploitation submitted for record |
Free format text: EXCLUSIVE LICENSE; TIME LIMIT OF IMPLEMENTING CONTACT: 2008.3.1 TO 2015.2.28; CHANGE OF CONTRACT Name of requester: JIANGMEN HUIHAI FEED CO., LTD., FACTORY Effective date: 20090525 |
|
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20070124 Termination date: 20130311 |