CN1647622A - 获得大菱鲆优质受精卵的方法 - Google Patents
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Abstract
一种获得大菱鲆优质受精卵的方法,包括亲鱼培育和人工采卵授精两方面。亲鱼的培育:包括亲鱼的优选及培育条件、亲鱼的饲料及饲喂、亲鱼的水温、光照调控;人工采卵授精:包括人工采卵和人工授精操作。本发明从大菱鲆亲鱼的培育到人工采卵授精,是一套完整的综合控制技术方法,通过关键环节技术措施的掌握,可提高卵子的活卵率和受精成功率,获得优质的受精卵。240尾亲鱼,整个繁殖群体,每天进行1次对排卵亲鱼的挤卵,经镜检每批卵的平均活卵率在87.8%。获得受精卵的∑n-3HUFA占脂肪酸含量的20.38%,平均受精成功率为89.6%,孵化率为50.8%。
Description
技术领域:
本发明属于大菱鲆养殖繁育技术,是一种在亲鱼培育和采卵授精中获得大菱鲆优质受精卵的方法。
背景技术:
大菱鲆自1992年引入中国以来,获得了苗种繁育和养殖的成功,已在我国北方沿海形成了大菱鲆的养殖产业,但大菱鲆产卵质量的不稳定,卵子质量差,已严重制约了大菱鲆产业的发展。如何获得优质受精卵是亟待解决的问题。在本发明做出之前,对于获得大菱鲆优质受精卵的综合技术还没有相关报道。国际上关于捕获大菱鲆受精卵的胚胎发育有研究报道,但在如何获得优质受精卵并没有提供相关技术,法国布雷斯特渔业研究中心的N.Devauchelle(1988)研究了捕获大菱鲆的产卵,在文中仅对大菱鲆受精卵进行了生化分析,并探讨了受精卵的初步发育。黄海水产研究所雷霁霖、马爱军等(2003)详细研究了大菱鲆的胚胎及仔稚幼鱼发育。英国康威渔业研究所的Howell,B.R.1989.发现大菱鲆卵子存在过熟现象。过熟的受精卵将导致卵质和受精卵质量下降。上述研究,他们都是集中在卵子的生化组成和胚胎发育等方面的研究,而并没有提出如何获得优质受精卵的综合技术。
发明内容:
本发明的目的是提供一种获得大菱鲆优质受精卵的技术,是在亲鱼培育和人工授精技术的过程中,通过关键环节技术措施的掌握,获得大菱鲆优质受精卵。
本发明是按以下技术方案实现的:它的技术内容包括亲鱼培育和人工采卵授精两方面:
一、亲鱼的培育:包括亲鱼的优选及培育条件、亲鱼的饲料及饲喂、亲鱼的水温、光照调控:
1、亲鱼的优选及培育条件:优选体色为正常体色的大菱鲆。大菱鲆雌鱼3-6龄,体重3000-6000克,全长达40-60厘米;雄鱼达2-6龄以上,体重达2000-5000克以上,全长30-50厘米;海水流水充气养殖,全周年水质条件变化情况为:溶解氧为>6.0mg/L,PH范围为:7.8-8.,盐度为25-35‰,水温为8-20℃。
2、亲鱼的饲料及饲喂:
亲鱼的饲料:为配制的人工配合饲料,蛋白质的适宜含量为≥45%;脂类的适宜含量为≥10%,其中∑n-3HUFA的适宜比例≥20%。
饲料的配制:在100公斤配料物质中,按饲料原料及用量配制成半湿颗粒饲料:其配料和用量是:新鲜的脱脂鱼粉60公斤、豆粕10公斤、花生粕10公斤、饲料酵母4公斤、复合多维2公斤、复合矿物质2公斤、鱼油12公斤。
亲鱼的饲喂:日投喂2次,日投喂量为鱼体体重的2%-5%,应在繁殖季节前五个月就开始进行,整个繁殖季节保持投喂。
3、亲鱼的水温、光照调控:在繁殖期到来的前五个月,将大菱鲆的水温控制在8-10℃左右,光照时间为8小时,光照强度为100-500Lx左右。先是经过两个月的低温的积累发育,再将光照时间由每天8小时逐渐增至每天16小时,水温由8℃逐步增至14℃,然后再经过连续2-3个月的人工调控,使亲鱼充分成熟,获得优质卵子。产卵期温度控制在13-14℃,光照时间16小时,光照强度在100-500Lx左右。
二、人工采卵授精:
1、人工采卵:大菱鲆雌鱼的排卵间隔,多数在80-90h之间。在12-14℃时,人工采卵必需在大菱鲆雌鱼排卵后10小时之内挤卵。整个繁殖群体,每天进行1次对排卵亲鱼的挤卵。
2、人工授精操作:先从两尾雄鱼挤精液放入烧杯中,然后挑选成熟的雌鱼挤卵,挤卵时擦干鱼体和器皿,防止水及排泄物的混入。然后按1×105粒卵加入1ml~2ml精液,快速搅拌均匀使精卵充分接触,再加入少量经沉淀沙滤的海水,使精液、卵子、水的体积比约为精液、卵子、水的适宜体积比为1∶200∶200,继续搅拌1分钟,然后静置5分钟,再加入海水,静置10~15分钟,待受精卵吸水膨胀后,清水冲洗1次~2次,放入2000ml量筒中,用海水使上浮卵和沉淀卵分离,记录上浮卵数,上浮卵经冲洗后放入孵化器中孵化。
本发明与已有技术对比其特点:
本发明是一种获得大菱鲆优质受精卵的综合技术方法。从大菱鲆亲鱼的培育到人工采卵授精,进行了全过程关键环节的综合控制。通过综合措施的采取,提高了卵子和受精卵的质量,经镜检每批卵的平均活卵率在87.8%,受精成功率为89.6%,。
实施方式:
大菱鲆是新引进的优良海水养殖品种,发展迅速,但技术尚不完善。大菱鲆在苗种生产过程中,卵子的质量和受精率极不稳定,受精率较低时不到10%,严重影响了大菱鲆苗种生产的进行。通过综合措施的采取,提高大菱鲆卵子和受精卵质量,受精成功率为89.6%。
下面通过实施例详细叙述本发明的技术内容:
本研究在山东蓬莱市海水鱼类养殖试验场进行,并实施了综合技术措施,具体过程如下:
首先进行大菱鲆亲鱼的培育和人工采卵授精方法的确定,然后进行亲鱼培育和人工授精的规模化繁育试验。
实施例一、大菱鲆亲鱼的培育和采卵授精方法的确定:
1、亲鱼培育方法的确定:
实验选用大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)亲鱼共40尾,分4个不同的试验组,每组4尾雌鱼,6尾雄鱼。每组有3个平行。亲鱼为优选的正常体色的健康大菱鲆,正常体色大菱鲆背面呈青褐色有骨质突起,腹面光滑呈白色。亲鱼的年龄:雌鱼和雄鱼均为3龄。平均规格为体重2650±12.0g,全长45±4cm。置于12个20m3水泥池中进行流水充气养殖,养殖用水为地下海水与自然海水,经砂滤后混合使用,全周年水质条件变化情况为:DO>6.0mg/L,pH=7.8-8.2,S=30-32,T=8-18℃。
亲鱼的水温光照调控:挑选好的亲鱼,先在10℃的水温及8小时的光照条件下培育2个月。之后培育水温由8℃以每天0.5℃的速度逐渐增至14℃,光照时间也由每天0.5h的速度渐增至16个小时,光照强度为400LUX。
亲鱼的饲料及饲喂:亲鱼饲料为配制的人工配合饲料,蛋白质的适宜含量为≥45%;脂类的适宜含量为≥10%,其中∑n-3HUFA的适宜比例≥20%。
实验配制配合饲料:实验设计了4组实验饲料,分别投喂4组亲鱼,每日投喂1~2次。
1)、实验组1:饲料的配方是新鲜的脱脂鱼粉35公斤、豆粕18公斤、花生粕10公斤、面粉15,麦麸6,饲料酵母4公斤、复合多维2公斤、复合矿物质2公斤、鱼油8公斤。
2)、实验组2:饲料的配方是新鲜的脱脂鱼粉40公斤、豆粕20公斤、花生粕10公斤、面粉10,麦麸3,饲料酵母4公斤、复合多维2公斤、复合矿物质2公斤、鱼油9公斤。
3)、实验组3:饲料的配方是新鲜的脱脂鱼粉50公斤、豆粕10公斤、花生粕10公斤、面粉10,麦麸2,饲料酵母4公斤、复合多维2公斤、复合矿物质2公斤、鱼油10公斤。
4)、实验组4:饲料的配方是新鲜的脱脂鱼粉60公斤、豆粕10公斤、花生粕10公斤、饲料酵母4公斤、复合多维2公斤、复合矿物质2公斤、鱼油12公斤
配制的人工配合饲料经生化分析,结果见表1和表2.
表1 大菱鲆亲鱼4组试验饲料的蛋白、脂肪、能量组成
项目 试验组 试验组 试验组 试验组
1 2 3 4
蛋白质(%) 40.6 45.5 47.9 49.3
脂肪(%) 9.9 10.2 12.4 14.6
能量(kJ/100g) 113 119 115 108
表2 大菱鲆亲鱼4组试验饲料脂类脂肪酸组成
饲料组
脂肪酸(%) 1 2 3 4
C14:0 5.8 4.3 2.9 1.6
C16:0 23.3 21.5 17.4 10.7
C16:1 5.8 6.0 2.0 2.8
C18:0 4.9 3.8 7.8 6.5
C18:1 19.9 14.1 15.1 10.4
C18:2(n-6) 10.0 8.9 7.2 5.9
C18:3(n-3) 0.6 0.8 0.9 1.3
C18:4(n-3) 0.2 0.1 0.2 0.2
C20:1 11.6 12.3 4.5 5.7
C20:3(n-6) 1.3 1.0 0.6 0.9
C20:4(n-6) 0.5 0.3 0.2 0.9
C20:5(n-3) 6.4 8.7 10.9 10.8
C22:4(n-6) 2.8 1.8 4.7 5.6
C22:5(n-3) 2.0 1.8 2.2 2.4
C22:6(n-3) 10.3 11.0 13.0 16.1
∑n-3HUFA 18.7 21.5 26.1 29.3
试验结果:经过5个月的投喂,不同试验组雌鱼产卵的结果见表3和表4:
表3各组亲鱼的产卵的主要指标
项目 实验组
1 2 3 4
平均每尾产卵量 0.68×106 1.21×106 1.36×106 1.45×106
卵径(mm) 0.999 1.023 1.036 1.053
平均活卵率(% ) 60 78 80 92.2
表4 各亲鱼组所产卵子脂类主要脂肪酸的组成百分比(%)
脂肪酸 亲鱼组
1 2 3 4
14:0 3.55 3.55 3.35 3.49
16:0 14.93 14.93 15.51 15.69
16:1 10.38 10.38 11.76 10.01
18:0 10.56 7.56 7.65 5.55
18:1 36.23 37.00 30.00 25.38
18:2(n-6) 6.02 6.02 4.80 5.90
18:3(n-3) 3.97 3.8 1.38 1.06
18:4(n-3) 2.37 2.01 1.97 2.20
20:1 1.09 1.12 1.58 1.15
20:3(n-6) 0.26 0.45 1.39 1.67
20:4(n-6) 0.41 0.80 1.10 1.53
20:5(n-3) 0.41 0.51 4.24 4.98
22:4(n-6) 3.75 2.98 2.44 2.04
22:5(n-3) 1.24 1.20 2.09 2.50
22:6(n-3) - 2.14 5.39 12.90
∑n-3HUFA 1.65 3.85 11.72 20.38
从试验结果中筛选出试验组4的人工配合饲料投喂亲鱼,可获得优质卵子。试验组4亲鱼培育人工饲料的的配制如下:
在100公斤配料物质中,其饲料配料及用量为:新鲜的脱脂鱼粉60公斤、豆粕10公斤、花生粕10公斤、饲料酵母4公斤、复合多维2公斤、复合矿物质2公斤、鱼油12公斤,配制成的饲料为半湿颗粒。
2、人工采卵授精方法的确定
A、人工采卵:试验组亲鱼10尾,通过光温调控和营养调控发育成熟,通过不同的采卵方式比较活卵率。
结果如下:
挤卵天数/次 | 每天挤卵一次 | 每两天挤卵一次 | 每三天挤卵一次 | 每四天挤卵一次 |
平均活卵率 | 90.2% | 50.8% | 30.2% | 20.8% |
试验结果表明:大菱鲆在人工养殖条件下,很难自然产卵受精,且特殊的产卵方式使卵子极易过熟。大菱鲆特殊的排卵节律为:大菱鲆雌鱼的排卵间隔,多数在80-90h之间。在12-14℃时,人工采卵必需在大菱鲆雌鱼排卵后10小时之内挤卵(在人工养殖条件下,大菱鲆雌鱼不能自然产卵,而是卵子成熟后先排到排卵腔中,然后再由人工将其卵子挤出),才能保证优质卵子的获得。整个繁殖群体,经试验证明:每天进行1次对排卵亲鱼的挤卵,效果好,平均活卵率为90.2%。活卵指卵子是圆的,透明的,缺少卵周系,活卵率为活卵/总卵数。
B、试验人工授精操作方法:
精液、卵子、水的体积比的试验:采卵,每100ml卵子为1组,共16个试验组,每组有三个平行。每个试验组加入精液(为了保证人工授精的质量,大菱鲆精液是从两尾雄鱼中采得。)不同的精液、卵子、水的体积比,及不同的受精时间,快速搅拌均匀使精卵充分接触,再加入少量经沉淀沙滤的海水,使不同试验组精液、卵子、水的体积比分别为1∶200∶200;1∶200∶100;0.5∶200∶200;0.5∶200∶100,使不同试验组配子接触时间分别为1~15分钟再加入海水,静置10分钟,待吸水膨胀后,清水冲洗2次,记录不同试验组受精率。
试验结果如下:
试验结果表明:精液、卵子、水的最佳体积比为1∶200∶200,配子接触时间以5分钟为宜。
实施例二、进行亲鱼培育和人工授精的规模化繁育试验。
大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)亲鱼240尾,亲鱼为优选的正常体色的健康大菱鲆。亲鱼的年龄:雌鱼和雄鱼均为3龄。平均规格为体重2700±15.0g,全长46±4cm。置于8个20m3水泥池中进行流水充气养殖,养殖用水为地下海水与自然海水,经砂滤后混合使用,全周年水质条件变化情况为:DO>6.0mg/L,pH=7.8-8.2,S=30-32,T=8-18℃。
亲鱼的饲料及饲喂:亲鱼的饲料为配制的人工配合饲料,由如下饲料原料及用量(在100公斤配料物质中)配制而成的半湿颗粒饲料:新鲜的脱脂鱼粉60公斤、豆粕10公斤、花生粕10公斤、饲料酵母4公斤、复合多维2公斤、复合矿物质2公斤、鱼油12公斤。亲鱼人工配合饲料的投喂时间是在2004年1月份开始进行的。整个繁殖季节保持投喂,日投喂2次。日投喂量为鱼体体重的2%-5%。
亲鱼的水温、光照调控:2004年1-3月水温控制在8-10℃,目光照时间为8小时,光照强度为400LUX,自此时期起亲鱼进入强化培育阶段,开始投喂人工配合饲料。2004年3-5月份开始,水温由8-10℃逐步增至14℃。光照时间由每天8小时逐渐增至每天16小时,如此在温光调控和营养强化培育条件下,亲鱼性腺发育加快,2个月后,亲鱼性腺发育完全成熟,到5月出现排卵。
人工采卵:经温光调控的亲鱼自5月初开始成熟、排卵,于5月中旬进入产卵高峰期,一直持续到6月底。整个繁殖群体,每天进行1次对排卵亲鱼的挤卵,以保证每次可采出优质的卵子。经镜检每批卵的平均活卵率在87.8%。
人工授精,大菱鲆精液从从两尾雄鱼中采得,精液、卵子、水的体积比为1∶200∶200。配子接触时间为5分钟,再加入海水,静置10~15分钟,待吸水膨胀后,清水冲洗1次~2次,放入2000ml量筒中,用海水使上浮卵和沉淀卵分离,记录上浮卵数,上浮卵经冲洗后放入孵化器中孵化。
在繁殖期内共获得1520万粒上浮卵,将获得的上浮卵进行脂肪酸含量的分析,其中∑n-3HUFA占脂肪酸含量的20.38%,平均受精成功率(4细胞数/活卵数)为89.6%,孵化率为50.8%。获得初孵仔鱼770万尾。
Claims (1)
1、一种获得大菱鲆优质受精卵的方法,它的技术内容包括亲鱼培育和人工采卵授精两方面:亲鱼的培育:包括亲鱼的优选及培育条件、亲鱼的饲料及饲喂、亲鱼的水温、光照调控;人工采卵授精:包括人工采卵和人工授精操作,其特征在于它的:
亲鱼的培育方面:
1)、亲鱼的优选及培育条件:优选体色为正常体色的大菱鲆。大菱鲆雌鱼3-6龄,体重3000-6000克,全长达40-60厘米;雄鱼达2-6龄以上,体重达2000-5000克以上,全长30-50厘米;海水流水充气养殖,全周年水质条件变化情况为:溶解氧为>6.0mg/L,PH范围为:7.8-8.,盐度为25-35‰,水温为8-20℃。
2)、亲鱼的饲料及饲喂:
亲鱼的饲料:为配制的人工配合饲料,蛋白质的适宜含量为≥45%;脂类的适宜含量为≥10%,其中∑n-3HUFA的适宜比例≥20%。
饲料的配制:在100公斤配料物质中,按饲料原料及用量配制成半湿颗粒饲料:其配料和用量是:新鲜的脱脂鱼粉60公斤、豆粕10公斤、花生粕10公斤、饲料酵母4公斤、复合多维2公斤、复合矿物质2公斤、鱼油12公斤。
亲鱼的饲喂:日投喂2次,日投喂量为鱼体体重的2%-5%,应在繁殖季节前五个月就开始进行,整个繁殖季节保持投喂。
3)、亲鱼的水温、光照调控:在繁殖期到来的前五个月,将大菱鲆的水温控制在8-10℃左右,光照时间为8小时,光照强度为100-500Lx左右。先是经过两个月的低温的积累发育,再将光照时间由每天8小时逐渐增至每天16小时,水温由8℃逐步增至14℃,然后再经过连续2-3个月的人工调控,使亲鱼充分成熟,获得优质卵子。产卵期温度控制在13-14℃,光照时间16小时,光照强度在100-500Lx左右。
人工采卵授精方面:
1)、人工采卵:大菱鲆雌鱼的排卵间隔,多数在80-90h之间。在12-14℃时,人工采卵必需在大菱鲆雌鱼排卵后10小时之内挤卵。整个繁殖群体,每天进行1次对排卵亲鱼的挤卵。
2)、人工授精操作:先从两尾雄鱼挤精液放入烧杯中,然后挑选成熟的雌鱼挤卵,挤卵时擦干鱼体和器皿,防止水及排泄物的混入。然后按1×105粒卵加入1ml~2ml精液,快速搅拌均匀使精卵充分接触,再加入少量经沉淀沙滤的海水,使精液、卵子、水的体积比约为精液、卵子、水的适宜体积比为1∶200∶200,继续搅拌1分钟,然后静置5分钟,再加入海水,静置10~15分钟,待受精卵吸水膨胀后,清水冲洗1次~2次,放入2000ml量筒中,用海水使上浮卵和沉淀卵分离,记录上浮卵数,上浮卵经冲洗后放入孵化器中孵化。
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