CN101919359B - 综合调控波纹唇鱼性腺成熟排卵方法 - Google Patents

Abstract

一种综合调控波纹唇鱼性腺成熟排卵方法，包括亲鱼优选、培育和饲料投喂；水温、光照和水流调控亲鱼发育、营养强化促进性腺成熟排卵。通过以上技术方法，筛选到人工催熟有效温度、光照度以及水流速因子数据；筛选到人工催熟有效营养强化剂种类和剂量；筛选到适合波纹唇鱼配子受精的时间；建立了波纹唇鱼优质受精卵获取的方法。本方法获得波纹唇鱼卵的受精率为20-86％，孵化率为30-78％；本发明具有先进、高效、实用、可靠的特点，在波纹唇鱼苗种繁育上提供了一种温度、光照、水流和营养强化综合调控波纹唇鱼性腺成熟排卵技术方法；在濒危物种保护上具有重大应用价值和广阔的推广应用前景。

Description

综合调控波纹唇鱼性腺成熟排卵方法

技术领域：

本发明属于波纹唇鱼生殖调控产卵技术，是一种在室内水泥池中，人工控制光照、水温和水流，并综合利用营养强化措施，促进波纹唇鱼亲鱼性腺成熟排卵的方法。 

背景技术：

波纹唇鱼(俗称苏眉)(Cheilinus undulates)为大型隆头鱼科鱼类，体重可达209kg，主要分布于印度洋和太平洋，世界上最名贵的两种海水鱼之一(Cheilinus undulatus.In：IUCN 2008.2008 IUCN Red List of Threatened Species)。2004年世界自然与自然资源保护基金会(IUCN)在日内瓦将其列为包括老虎、亚洲象在内的10种濒临灭绝的生物之一，同年《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)将波纹唇鱼列为禁止贸易和限制贸易的水生物种(Sadovy，Y.，M，2003.Rev.Fish Biol.Fish.)。波纹唇鱼其口味与品质已成为社会地位的象征标志，近年盛行用此鱼烹制成佳肴以取代鲍鱼、燕窝和鱼翅招待顶级宾客。其市场价值极高，养殖前景非常广阔。 

鉴于波纹唇鱼的养殖潜力和潜在的经济、社会和生态效益，多年来，科技工作者对波纹唇鱼在基础生理学和生态学方面进行了大量研究工作，主要有：波纹唇鱼摄食习性的研究(Randall JE，Environ Biol Fish，1978)，波纹唇鱼自然群体年龄组成及生长特性研究(J.H.Choat，2006，Mar Ecol Prog Ser)，波纹唇鱼染色体制备及核型的初步研究(中国水产科学研究院黄海水产研究所，周丽青，渔业科学进展，2010年)，波纹唇鱼不同组织5种同工酶表达的差异(中国水产科学研究院南海水产研究所，区又君，南方水产，2009年)，波纹唇鱼消化系统的形态解剖与肠道上皮的扫描电镜观察(海南大学，王永波，海洋通报，2010年)。至今国际上没有进行波纹唇鱼人工养殖(例如人工孵化生产)以减少渔业捕捞的压力的报道(IUCN 2008Red List)。因此进行波纹唇鱼人工繁殖与种质资源保护的研究工作，既是满足市场的需求也是减缓或避免此物种消亡的手段。2009年，波纹唇鱼亲鱼人工调控催熟技术获得突破，为波纹唇鱼养殖的开发和物种保护工作开展奠定了良好的基础。

波纹唇鱼的繁殖主要有海上网箱自然产卵技术和室内水泥池人工诱导产卵技术。采用海上网箱自然产卵技术可获得波纹唇鱼的受精卵，但是存在自然产卵的亲鱼数量少、产卵期短、诱导产卵条件复杂获得受精卵的数量少、收集受精卵困难等问题，同时受台风、赤潮、潮汐、海流、海水温度的影响，在规模化苗种生产过程中尚不能普及推广应用；采用激素诱导方法同样可以获得受精卵，但是单纯使用激素诱导获得优质受精卵的技术不稳定，同样存在亲鱼性腺对激素效应时间各异，各批次卵子受精率和孵化率差异较大的问题，不能满足批量化苗种的生产需要。通常在人工温度、光照和水流调控条件下，亲鱼性腺成熟排卵，但是卵母细胞常常因营养物质的缺乏不能达到最终成熟,或者质量低下，影响优质受精卵的获得。营养强化是针对亲鱼卵母细胞发育所需营养物质进行专门的营养物质调控，可促进亲鱼卵母细胞发育成熟，大大提高卵子质量。因此，利用温度、光照、水流和营养综合调控波纹唇鱼性腺最终发育成熟顺利排卵，从而获取优质受精卵。目前尚未见有相关报道。 

发明内容：

本发明的目的：提供一种温度、光照、水流和营养强化综合调控波纹唇鱼性腺成熟排卵技术方法。 

本发明技术方案主要内容包括亲鱼优选、培育及饲料饲喂，水温、光照和水流调控亲鱼发育，营养强化促进性腺成熟排卵三方面： 

一、亲鱼的优选和培育： 

1、亲鱼优选： 

选择形态、体色正常、个体大、健康无伤的5龄以上雌性亲鱼，全长达45-85厘米，体重2800-10000克；雄鱼达10龄以上，全长75-100厘米，体重达8000-18000克。 

2、亲鱼培育及饲料饲喂： 

亲鱼置于专用温光调控培育池（80m³）内进行强化培育，亲鱼入池的性比为♀：♂=3：1，饲养密度1.2-1.8kg/m²。培育水温20～30℃，连续充气、流水培育，换水率300%，定时清池换水。水质条件：溶解氧>6.0mg/L，PH7.6-8.2，盐度29-33。亲鱼的饵料以小黄花鱼、鱿鱼、杂虾蟹为主。日投喂2次,日投喂量为鱼体体重的2%-3%，及时清除残饵、排污。 

二、水温、光照、水流调控 

1、水温调控： 

在温度、光照调控前，将波纹唇鱼的培育水温控制在23-25℃，光照强度为300Lux左右；繁殖期到来前4个月，开始调控水温。控温方式：每5天水温缓慢降低1℃，直至降至20℃后维持不变并停留10天。然后水温从20℃开始回升，每5天水温缓慢升高1℃，直至升值至28℃，开始产卵时降低1℃后维持不变，定期观察亲鱼性腺发育情况，日换水率300％。每天12次监测水温的变化，精确调控每天温度变化在±0.3℃范围内。 

2、光照的调控： 

在光照调控过程中，当水温降至到20℃时开始进行光照调控。将亲鱼培育池完全遮住自然光，在培育池水面1米高度处悬挂白炽灯，调节光照强度为300Lux。当水温为20℃时控制光照时间为10小时，以后每6天增加光照时间1小时，直至光照时间达到15小时并维持不变，以定时器精确管理每天的光照时间。 

3、水流的调控 

模拟大潮汛海流调节法(升降水位加大流速)。检查雌鱼的卵径大于0.4mm、雄鱼成熟精子的数量足够时，亲鱼准备交配。准备工作主要是对亲鱼养殖池的水文条件加以控制，其方法为：早上8时降低水位至水深50cm，维持4个小时后将水温升高1～3℃，中午12时开始注入新鲜海水至水深2米，保持池水整晚不断循环流动，直至亲鱼成熟排卵。 

三、营养强化调控亲鱼性腺成熟排卵 

在亲鱼性腺发育开始启动后，在饵料中添加卵磷脂(每公斤鱼饵料按照3g卵磷脂添加)，促进亲鱼性腺进一步成熟。在亲鱼性腺发育至III期后，增加投喂沙蚕、活海蟹，沙蚕和活海蟹交替隔天投喂一次，每次按照体重的2％投喂，强化亲鱼磷脂、卵黄蛋白、DHA及EPA营养物质的摄入。待亲鱼性腺完全成熟后，人工挤压亲鱼腹部获得成熟的卵子，人工采卵受精获得受精卵。 

本发明与已有技术对比其特点： 

本发明综合利用水温、光照、水流、营养强化措施调控诱导波纹唇鱼亲鱼性腺发育成熟排卵，是一种连续完整的成套技术。亲鱼经营养强化后，卵子可达到最后成熟并排卵，人工采卵获得的卵子质量高，以人工采卵受精技术获得批量优质受精卵，可保证苗种生产的顺利进行。 

本发明根据波纹唇鱼性腺发育的生理生态规律，采用温度(降温-再升温)、光照调控法(逐渐延长光照时间)、模拟大潮汛海流调节法(升降水位加大流速)，调控亲鱼性腺同步发育至四期，性腺发育成熟的亲鱼比率高达68％。 

本发明采用的专门的营养强化措施，包括沙蚕、海蟹和添加剂的使用。添加剂主要成分为卵磷脂、复合维生素，沙蚕、活海蟹为高蛋白和高不饱和脂肪酸(DHA和EPA)的来源，这些营养物质可充分促进卵母细胞发育所需卵黄蛋白和其它营养物质的获取，有效促进亲鱼卵母细胞的最终成熟和提升卵子质量。 

附图说明：

图1：温光、营养综合诱导波纹唇鱼产卵期内产卵量； 

图2：温光、营养综合诱导波纹唇鱼产卵期内上浮卵率； 

图3：温光、营养综合诱导波纹唇鱼产卵期内受精率； 

图4：温光、营养综合诱导波纹唇鱼产卵期内孵化率。 

具体实施方式：

下面通过具体实施例结合附图详细叙述本发明的技术内容： 

为了获得波纹唇鱼优质受精卵，于2008-2009年在烟台基地，采取温度、光照和营养综合调控措施，诱导波纹唇鱼亲鱼性腺发育成熟，人工采卵受精获得批量优质受精卵，具体实施过程如下： 

实验方法：包括亲鱼优选和培育；水温、水流、光照调控亲鱼发育；营养强化促进亲鱼成熟排卵；人工采卵受精获取受精卵；实验结果。 

1、亲鱼优选及培育： 

实验选择波纹唇鱼5-14龄亲鱼16尾(12♀：4♂)，雌鱼平均体重5260克，雄鱼平均体重11050克。亲鱼体形、体色正常，健康无损伤。亲鱼放入培育池(40m²，水深2米)进行培育。培育用水为砂滤自然海水，水质条件为：D0＞6.0mg/L，pH＝7.6-8.2，盐度29-33。 

亲鱼的饲料饵料以冰鲜小黄花鱼、杂虾和活海蟹为主。日投喂2次，日投喂量为鱼体体重的2％-3％，在繁殖季节饵料中添加卵磷脂和复合维生素(每公斤鱼饵料按照3g卵磷脂添加)，并保持较高换水率300％)，促进亲鱼性腺的发育，整个繁殖季节保持相同的投喂率。投喂过程中及时清除残饵、排污。 

2.水温、光照、水流调控措施： 

在温度、光照调控前，波纹唇鱼的培育水温控制在23-25℃，光照强度为300Lux左右；繁殖期到来前4个月，开始调控水温。控温方式：每5天水温缓慢降低1℃，降至20℃后维持不变并停留10天。然后水温从20℃开始回升，每5天水温缓慢升高1℃，直至升值至28℃，开始产卵时降低1℃后维持不变，定期观察亲鱼性腺发育情况。水温靠热电厂余温热水和自然海水混合调节控制，日换水率300％。每天12次监测水温的变化，精确调控每天温度变化在±0.3℃范围内。 

在光照调控过程中，水温降至到20℃时开始进行光照调控。将亲鱼培育池完全遮住自然光，在培育池水面1米高度处悬挂白炽灯，调节光照强度为300Lux。当水温为20℃时控制光照时间为10小时，以后每6天增加光照时间1小时，直至光照时间达到15小时并维持不变，以定时器精确管理每天的光照时间。 

模拟大潮汛海流调节法(升降水位加大流速)。亲鱼准备排卵季节，对亲鱼养殖池的水文条件加以控制，其方法为：早上8时降低水位至水深50cm，维持4个小时后将水温升高1～3℃，中午12时开始注入新鲜海水至水深2米，并保持池水整晚不断循环流动，直至亲鱼成熟排卵。 

3.营养强化促进最终成熟和排卵： 

在亲鱼性腺发育启动后，开始在饵料中添加卵磷脂和复合维生素(每公斤鱼饵料按照3g卵磷脂添加)。在亲鱼性腺发育达到III期后，每天增加投喂沙蚕、活海蟹，沙蚕和活海蟹交替隔天投喂一次，每次按照体重的2％投喂，强化亲鱼的蛋白、DHA及EPA等营养物质的摄入。观察到亲鱼性腺松生殖孔充血变紫红色时，人工挤压亲鱼腹部获得成熟的卵子，人工采卵受精获得受精卵。 

4.人工采卵受精获取受精卵： 

性腺成熟的亲鱼排卵后并吸水膨胀，性腺明显隆起，及时进行人工挤卵采集卵子。将雌鱼从生殖腺后端沿生殖腺向前端进行挤压，获得卵子置于干燥洁净的器皿内，然后挤取成熟精子，以羽毛或玻璃棒搅拌均匀后加入海水，静置10-15min，将沉卵和浮卵分离后，上浮卵移入专用孵化设施进行孵化。 

5.实验结果： 

本实验中，波纹唇鱼亲鱼性腺成熟后人工采卵，获得的卵子质量好，受 精率高。亲鱼性腺发育成熟率68％以上。本实验共采得卵子2.72公斤，其中上浮卵1.38公斤(见图1)，可采得卵子的期间长达83天，获得优质受精卵数量多，上浮卵率48.4％(见图2)，卵子受精率达到43.5％(见图3)，孵化率达到53.5％(见图4)。 

本发明提供的温度、光照、水流和营养强化措施综合调控产卵技术对波纹唇鱼亲鱼的产卵调控效果优良，可用于获得批量优质受精卵，保障批量化苗种繁育的顺利进行。 

Claims (1)

1.一种综合调控波纹唇鱼性腺成熟排卵方法，其特征在于它的方法包括亲鱼优选、培育及饲料饲喂，水温、光照和水流调控亲鱼发育，营养强化促进性腺成熟排卵三方面：

（1）、亲鱼的优选和培育：

A、亲鱼优选：

选择形态、体色正常、个体大、健康无伤的5龄以上雌性亲鱼，全长达45-85厘米，体重2800-10000克；雄鱼达10龄以上，全长75-100厘米，体重达8000-18000克；

B、亲鱼培育及饲料饲喂：

亲鱼置于80m³温光调控培育池内进行强化培育，亲鱼入池的性比为♀：♂=3：1，饲养密度1.2-2.0kg/m²；培育水温20～30℃，连续充气、流水培育，换水率300%，定时清池换水；水质条件：溶解氧>6.0mg/L，PH 7.6-8.2，盐度29-33；亲鱼的饵料以小黄花鱼、鱿鱼、杂虾蟹为主；日投喂2次,日投喂量为鱼体体重的2%-3%，及时清除残饵、排污；

（2）、水温、光照、水流调控：

A、水温调控:

在温度、光照调控前，将波纹唇鱼的培育水温控制在23-25℃，光照强度为300Lux；繁殖期到来前4个月,开始调控水温，控温方式：每5天水温缓慢降低1℃，直至降至20℃后维持不变并停留10天；然后水温从20℃开始回升，每5天水温缓慢升高1℃，直至升值至28℃，开始产卵时降低1℃后维持不变，定期观察亲鱼性腺发育情况，日换水率300%；每天12次监测水温的变化，精确调控每天温度变化在±0.3℃范围内；

B、光照的调控:

在光照调控过程中，当水温降至到20℃时开始进行光照调控；将亲鱼培育池完全遮住自然光，在培育池水面1米高度处悬挂白炽灯，调节光照强度为300Lux；当水温为20℃时控制光照时间为10小时，以后每6天增加光照时间1小时，直至光照时间达到15小时并维持不变,以定时器精确管理每天的光照时间；

C、水流的调控：

模拟大潮汛海流调节法；亲鱼准备排卵季节对亲鱼养殖池的水文条件加以控制，其方法为：早上8时降低水位至水深50cm，维持4个小时后将水温升高1～3℃，中午12时开始注入新鲜海水至水深2米，保持池水整晚不断循环流动，直至亲鱼成熟排卵；

（3）、营养强化调控亲鱼性腺成熟排卵：

在亲鱼性腺发育开始启动后，在饵料中添加卵磷脂每公斤鱼饵料按照3g卵磷脂添加，促进亲鱼性腺进一步成熟；在亲鱼性腺发育至Ⅲ期后，增加投喂沙蚕、活海蟹，沙蚕和活海蟹交替隔天投喂一次，每次按照体重的2%投喂；待亲鱼性腺完全成熟后，人工挤压亲鱼腹部获得成熟的卵子，人工采卵受精获得受精卵。

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