CN116941551B - 一种诱导黄河鲤雌鱼一年性成熟的温度处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种诱导黄河鲤雌鱼一年性成熟的温度处理方法，包括以下步骤：(1)进行290天28℃水体恒温饲养，促进黄河鲤个体生长及营养积累，使其在10个月时间内卵巢从I期发育到III期；(2)设置38天的变温处理，依次为23℃、18℃水温条件下各饲养7天，13℃水温条件下饲养14天，18℃水温条件下饲养10天，利用温度升降促进黄河鲤性腺发育，卵巢迅速发育至IV期。本发明温度处理方法可以使黄河鲤雌鱼的性腺在一年达到性成熟并正常产卵受精，从而极大地缩短鲤繁殖周期，节省鲤家系构建、传代及实验材料获取时间。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖技术领域，特别涉及一种诱导黄河鲤雌鱼一年性成熟的温度处理方法。
背景技术
黄河鲤，属硬骨鱼纲、鲤形目、鲤科、鲤鱼属的鱼类。黄河鲤适应性强、养殖费用低，其卵膜透明，便于观察胚胎发育过程；单次产卵量大；体外受精，便于进行各种显微操作，是非常理想的鲤科鱼类模式鱼。自然状态下，黄河鲤雌鱼需要养殖两年才能达到性成熟。若在人工养殖的条件下诱导黄河鲤雌鱼一年性成熟，就能缩短实验周期，节省宝贵的时间。
发明内容
本发明的目的在于提供一种诱导黄河鲤雌鱼一年性成熟的温度处理方法，使黄河鲤雌鱼在特定温度处理条件下，其性腺能够一年达到性成熟并正常产卵受精，从而极大地缩短鲤繁殖周期，节省鲤家系构建、传代及实验材料获取时间。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种诱导黄河鲤雌鱼一年性成熟的温度处理方法，包括以下步骤：
(1)进行290天28℃水体恒温饲养，促进黄河鲤个体生长及营养积累，使其在10个月时间内卵巢从I期发育到III期；
(2)设置38天的变温处理，依次为23℃、18℃水温条件下各饲养7天，13℃水温条件下饲养14天，18℃水温条件下饲养10天，利用温度升降促进黄河鲤性腺发育，卵巢迅速发育至IV期。
在以上技术方案中，步骤(1)中的290天28℃水体恒温饲养从黄河鲤雌鱼的幼苗期开始。
在以上技术方案中，在步骤(1)的28℃恒温阶段，投喂配合饲料一天4次，每日投喂饲料的重量为鱼体重的1-4％；
在步骤(2)的变温处理阶段，每日投喂配合饲料2次，冰冻赤虫1次。
在以上技术方案中，配合饲料的营养成分为：粗蛋白≥38.0，粗脂肪≥5.0，粗纤维≤5.0，粗灰分≤15.0，水分≤12.0，总磷≥1.0，赖氨酸≥2.1。
在以上技术方案中，在步骤(1)和(2)中，配置25W三色全光谱水族箱专用照明灯，每天设定光照10小时。
本发明的有益效果在于：本发明温度处理方法可以使黄河鲤雌鱼的性腺在一年达到性成熟并正常产卵受精，从而极大地缩短鲤繁殖周期，节省鲤家系构建、传代及实验材料获取时间。
附图说明
图1是控温6个月后常温对照组、变温对照组和恒温实验组的性腺外观和切片对比；
图2是控温9个月后常温对照组、变温对照组和恒温实验组的性腺切片对比；
图3是不同时间点实验组和对照组血清激素含量比较；
图4是一龄雌鱼卵与二龄对照雌鱼卵授精后的的胚胎发育比较。
具体实施方式
为了更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明做进一步描述。本发明可以以许多不同的形式实施，而不应该被理解为限于在此阐述的实施例。相反，提供这些实施例，使得本公开将是彻底和完整的，并且将把本发明的构思充分传达给本领域技术人员，本发明将仅由权利要求来限定。
本发明提供了一种诱导黄河鲤雌鱼一年性成熟的温度处理方法，包括以下步骤：
(1)进行290天28℃水体恒温饲养，促进黄河鲤个体生长及营养积累，使其在10个月时间内卵巢从I期发育到III期。
(2)设置30多天的变温处理，依次为23℃、18℃水温条件下各饲养7天，13℃水温条件下饲养14天，18℃水温条件下饲养10天。利用温度升降促进黄河鲤性腺发育，卵巢迅速发育至IV期。
在已公开的技术方案中，催熟的鱼为达到性成熟年龄的亲鱼，变温幅度为13-18℃，而本发明中，在雌鱼幼苗期(一月龄)开始，进行290天28℃水体恒温饲养，雌鱼个体快速生长且营养快速积累，促使其卵巢从I期快速发育到III期，从而使黄河鲤雌鱼的成熟期从常温条件下的600天缩短至300天。
实验例
一、实验鱼
实验用全雌黄河鲤鱼苗于2022年4月13生产，为野生型黄河鲤母本与通过性逆转获得的遗传雌性而生理雄性“父本”经人工授精孵化所得。
二、培育方法及水温设置
出膜后3天用丰年虫开口，7日龄转入0.5亩小塘培育，2022年5月16日转入室内养殖缸饲养，养殖缸直径1.2米，容积为1000L。
1、实验设置
设置1个恒温实验组、1个常温对照组和1个变温对照组，各200尾鱼。
恒温实验组按照设置的温度处理方案进行养殖，首先于28℃恒温条件下养殖290天(2022年5月16日-2023年3月3日)，然后设置1个月的短期变温处理(2023年3月4日-2023年4月11日)，使较大水温变化对鱼内分泌系统形成刺激(表1)。
常温对照组进行常温养殖。
变温对照组温度处理方案为，自水温28℃开始，以5℃为一个梯度，依次下降，直至13℃，然后再同样的梯度上升至28℃。以此两个重复，每个水温梯度维持15天(表2)。
表1恒温实验组温度设置
表2变温对照组温度设置
2、营养配套
饱食投喂，28℃恒温阶段，投喂配合饲料一天4次，每日投喂饲料的重量为鱼体重的1-4％，10分钟以内吃完为标准，投喂量具体根据实验鱼摄食情况酌情增减，变温处理阶段每日投喂配合饲料2次，冰冻赤虫1次。配合饲料的营养成分为：粗蛋白≥38.0，粗脂肪≥5.0，粗纤维≤5.0，粗灰分≤15.0，水分≤12.0，总磷≥1.0，赖氨酸≥2.1。
3、补充光照
配置25W三色全光谱水族箱专用照明灯，每天设定光照10小时。
三、实验结果
1、性腺发育检测：控温6个月后，取恒温实验组、常温对照组、变温对照组各3尾鱼的性腺，并进行称重、拍照和切片。
计算性腺指数(GSI)并统计分析，结果显示，恒温实验组GSI值极显著地高于常温对照组和变温对照组(P<0.01)。外观拍照结果显示，常温对照组为透明带状卵巢，变温对照组为带状卵巢，恒温实验组则为浅绿色或浅黄色膨大卵巢，性腺占比增加，卵母细胞颗粒分明；性腺组织切片结果显示恒温实验组卵巢内充满处于卵黄生成期的各类卵母细胞(如EV/MV/FG期等)，而常温对照组和变温对照组卵细胞仍处于初级生长期，尚未进入卵黄生成期，同时恒温组卵细胞直径显著增加，卵黄颗粒大量累积，具备趋近性成熟期的卵巢发育特征(图1)。
控温后9个月，再次取恒温实验组、常温对照组和变温对照组各3尾鱼的性腺称重并进行切片。GSI统计分析结果显示与对照组相比，恒温实验组性腺指数(GSI)同样极显著地高于常温对照组和变温对照组(P<0.01)，性腺组织切片结果显示恒温实验组卵巢内充满处于接近成熟的各类卵细胞，卵细胞排列更加饱满丰盈，同时卵黄颗粒显著累积，而常温对照组和变温对照组卵细胞仍处于初级生长期，尚未进入卵黄生成期。恒温实验组已接近性成熟期的卵巢发育特征(图2)。
2、血清激素检测：控温6个月后，取恒温实验组、常温对照组和变温对照组各18尾鱼的血清样本。从江苏酶免实业有限公司购买鱼雌二醇(E2)ELISA科研试剂盒(货号：MM-0608O1)，应用双抗体夹心法测定样本中鱼雌二醇(E2)水平。按照试剂盒说明书操作，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中鱼雌二醇(E2)浓度。控温后9个月，再次取恒温实验组6尾鱼，常温对照组和变温对照组各12尾鱼的血清样本，同样方法测定其血清雌激素含量(表3)。雌二醇含量统计分析结果显示，控温9个月的恒温实验组与相同时间点的两个对照组，以及与控温6个月的3个组相比，血清雌激素含量均显著性地升高了(P<0.05)(图3)。
表3不同组血清雌二醇激素含量
3、激素催熟：变温至13℃水温条件下饲养14天后，水温升至18℃，注射LHRH-A2进行催熟，1周后再注射一次。每次注射LHRH-A2剂量为0.3ug/Kg体重，利用促黄体素释放激素类似物诱导黄河鲤自身产生内源促性腺激素。
4、人工催产：将实验组、常温对照组和常规变温组经过2次催熟之后，注射催产素进行人工催产，同时催产二龄黄河鲤雌鱼。催产水温为18℃，催产素为DOM+LHRH-A2+HCG混合激素，剂量为DOM 1mg+LHRH-A2 5ug+HCG 500IU/Kg体重，效应时间约14小时。经人工繁殖结果观察，实验组和二龄对照黄河鲤雌鱼均能正常产卵受精，且受精卵能正常发育，正常出苗，与二龄对照性成熟黄河鲤所产的卵相比，胚胎发育、受精率未见显著差异(表4,图4)，常温对照组和常规变温组则未能产卵。结果表明本发明通过温度控制缩短黄河鲤性成熟的方法是可行的。
表4受精率出苗率统计
| 1龄-1 | 1龄-2 | 1龄-3 | 2龄-1 | 2龄-2 | 2龄-3 | |
| 受精率 | 83％ | 79％ | 87％ | 90％ | 84％ | 82％ |
| 出苗率 | 75％ | 72％ | 78％ | 85％ | 77％ | 74％ |
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (5)
1.一种诱导黄河鲤雌鱼一年性成熟的温度处理方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)进行290天28℃水体恒温饲养，促进黄河鲤个体生长及营养积累，使其卵巢从I期发育到III期；
(2)设置38天的变温处理，依次为23℃、18℃水温条件下各饲养7天，13℃水温条件下饲养14天，18℃水温条件下饲养10天，利用温度升降促进黄河鲤性腺发育，卵巢发育至IV期。
2.根据权利要求1所述温度处理方法，其特征在于：步骤(1)中的290天28℃水体恒温饲养从黄河鲤雌鱼的幼苗期开始。
3.根据权利要求1所述温度处理方法，其特征在于：在步骤(1)的28℃恒温阶段，投喂配合饲料一天4次，每日投喂饲料的重量为鱼体重的1-4％；
在步骤(2)的变温处理阶段，每日投喂配合饲料2次，冰冻赤虫1次。
4.根据权利要求3所述温度处理方法，其特征在于：配合饲料的营养成分为：粗蛋白≥38.0，粗脂肪≥5.0，粗纤维≤5.0，粗灰分≤15.0，水分≤12.0，总磷≥1.0，赖氨酸≥2.1。
5.根据权利要求1所述温度处理方法，其特征在于：在步骤(1)和(2)中，配置25W三色全光谱照明灯，每天设定光照10小时。
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