CN103461224B - 刺参杂交育种中种参的选择方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了刺参杂交育种中种参的选择方法，包括如下步骤：（1）采捕并筛选优良种参；（2）筛选出的种参放入蓄养池蓄养后，通过控制种参密度、水温和水质进行种参的促熟培育；（3）对开始进入繁殖期的种参进行小产实验，刺激种参排精、排卵，鉴别雌雄，并同时抑制其大量排放，将雌雄个体置于不同的培育池中分别培育；（4）重新培养种参两天，于第三天根据需要定量选择雌雄个体，分别置于容器中使其大量排放，获得独立的精液及卵子；（5）杂交育种或家系培育。本发明所述方法既提高了卵的受精率，减少了大规模育苗生产中种参的浪费，又提高了受精率的杂交率，避免了同一品系刺参精子、卵子的结合，为刺参杂交选育提供了技术支持。
Description
技术领域
本发明涉及一种刺参杂交育种中种参的选择方法。
背景技术
刺参因其营养价值高而名列“海产八珍”之首，随着育苗技术的突破，刺参养殖业迅猛发展，现已发展成为山东省海水养殖单品种产值最高的种类。由于对其不同性状的需求，各大科研院校及生产单位利用生物技术手段，培养出具有“多刺”、“耐高温”等优良性状的刺参，但在选育过程中也遇到了一些问题。
刺参因外观大致相同，肉眼难以分辨雌雄，而在进行杂交育种、建立家系培育时又需要单个雌雄个体，且精液与卵子不能无计划混合，这就导致在进行试验时，需要准备几倍乃至十几倍的种参，进行蓄养、促熟，排放时，每个容器放置一头种参，以大量人员观察种参的排放情况，以鉴别雌雄，同时进行实验。此举的弊端在于因事先无法判断雌雄，从而造成大量种参的浪费，消耗了大量人力物力。并且由于工作量大、人员多，常常忙中出错，而种参排放精卵的不同步性，又常常导致实验无法顺利进行。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种刺参杂交育种中种参的选择方法，所述方法旨在通过采取预先使种参小产的方法，有效地挑选种参的雌雄个体，再采用物理方法抑制精、卵排放；待进行实验时，已分开的雌雄个体分别单独排放精、卵，此时可有针对性地进行杂交或家系培育，从而解决传统育种方式存在的弊端。
一种刺参杂交育种中种参的选择方法，包括如下步骤：
（1）采捕并筛选优良种参；
（2）筛选出的种参放入蓄养池蓄养一段时间后，通过控制种参密度、水温和水质进行种参的促熟培育；
（3）对开始进入繁殖期的种参进行小产实验，刺激种参排精、排卵，鉴别雌雄，并同时抑制其大量排放，将雌雄个体置于不同的培育池中分别培育；
（4）重新培育种参两天，于第三天根据需要定量选择雌雄个体，分别置于容器中使其大量排放，获得独立的精液及卵子；
（5）杂交育种或家系培育。
本发明所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其中步骤（1）具体为：
采捕：于每年的阳历11月份，当自然海区的海水水温达到10-12℃时，在野生刺参的优良栖息环境中进行采捕；所述优良栖息环境海区的水深在5-10m，底质为沙泥和砾石底，海藻资源丰富；
筛选：对种参进行种质质量检测，筛选出身体健壮、活力好、无疾病、无损伤，体型呈圆筒形、黄瓜状、背面稍隆起，腹面平坦、管足密集，参龄3年以上、体重250g以上的种参。
本发明所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其中步骤（2）中的蓄养和促熟培育过程具体为：
蓄养：将筛选出的优良种参置于蓄养池中蓄养，密度为15-20头/m3，蓄养池内的溶氧浓度为5-8mg/ml；
促熟培育：采捕的种参转移至培育池，以自然水温蓄养，阴历1月中旬水温一般在2-3℃，保持2-3d，此后以1℃/d的速率开始升温，上升至6℃，恒温培育6-8d，再以0.5℃/d的速率上升至10℃，恒温培育6-8d，继续以0.5℃/d的速率上升至15℃后恒温待产。
本发明所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其中所述促熟培育过程中每日换水1-3次，每次换水量为池水的40-60%，所换的水是涨潮期间的优质海水，并经过滤砂处理；
促熟过程中，投喂粉状饲料及海泥的混合物，重量比为饲料：海泥=1：6-8，其中所述饲料投喂量占池中种参重量的3-5%。
本发明所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其中所述步骤（3）具体为：当种参出现产卵征兆时，进行小产实验：
A.将培育池内的海水放空，对种参进行阴干刺激1-2h；
B.将种参集中到几个网箱内，种参铺满网箱底部即可，网箱放置在空池中，然后向培育池内注入新鲜海水，使网箱中的种参感受到水流的刺激，水流速度控制在1-1.5米/秒，流水刺激0.5-1小时；
C.将培育池内的水温控制在21-22℃，待产；
小产实验刺激种参排精、产卵，当发现有排放现象，迅速鉴别雌雄，并将雌雄个体的种参分别拣入两个不同的培育池中，并在当晚在所述两个培育池上方以200W灯泡照射，同时将池水温度降至15-17℃，抑制种参继续排放排精卵。
本发明所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其中所述产卵征兆为：多头种参集中在池角；部分种参快速向池壁水表层处移动；躯体上半部离开池壁，不停地摇摆；生殖孔封闭，颜色加深。
本发明所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其中步骤（4）具体为：小产实验鉴别雌雄后重新培育，在两天内将两个培育池的温度逐渐升至18℃待产；第三天根据需要定量选择雌雄个体，于18:00-20:00再次通过阴干、升温、加快水流流速方式进行刺激，然后分别置于单独容器中使其排放，获得独立的精液及卵子。
本发明所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其中所述阴干、升温、加快水流流速刺激方法与小产实验中的刺激方法相同。
本发明所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其中步骤（5）中杂交育种或家系培育过程中，根据实验要求有计划地进行受精，种参产卵受精后，受精卵密度控制在1个/ml，池水温度控制在21-22℃。
本发明刺参杂交育种中种参的选择方法与现有技术不同之处在于：
本发明所述方法通过采取预先使种参小产的方法，有效地挑选种参的雌雄个体，再采用物理方法抑制精、卵排放；待进行实验时，已分开的雌雄个体分别单独排放精、卵，此时可有针对性地进行杂交或家系培育，从而解决传统育种方式存在的大量种参浪费，消耗大量人力物力、常常忙中出错，种参排放精卵的不同步等弊端，且不影响规模化生产，同时可避免因精子过多造成多精受精的现象。在正式杂交育苗生产中，可以有针对性地选择不同品系不同数量的雌雄种参进行配套杂交育种。这样既提高了卵的受精率，减少了大规模育苗生产中种参的浪费，又提高了受精率的杂交率，避免了同一品系刺参精子、卵子的结合，为刺参杂交选育提供了技术支持。
具体实施方式
实施例1
1、采捕与筛选
（1）采捕：每年的阳历11月份，当自然海区的海水水温达到10-12℃时，在野生刺参的栖息优良环境中进行采捕，采捕海区的水深在5-10m，底质为沙泥和砾石底，大叶藻、鼠尾藻、马尾藻等海藻资源丰富；
潜水员潜水采捕时，需要注意以下事项：
①一次采捕的数量不能过多，尽可能减少刺激，避免刺参受积压导致机械损伤；
②潜水员、操作人员手上或船只、工具等不能接触油渍；
③保持船上暂养槽内水质清新，及时换水；
④采捕的刺参避免强光照射。
（2）筛选：种参采捕后，进行种质质量检测，主要包括外观指标（体形、肉刺、步足等），筛选出身体健壮、活力好、无疾病、无损伤，体型呈圆筒形、黄瓜状、背面稍隆起，腹面平坦、管足密集，参龄3年以上、体重250g以上的优良种参；
解剖观察检测种参性腺发育是否成熟，如果种参未充分成熟，即便通过阴干、流水、升温等方法刺激种参也不可能产卵。如达到以下条件，则表明性腺发育已经成熟，可以进行种参的培养：解剖观察性腺饱满膨胀，生殖腺各分枝随发育成熟而逐渐变粗，主分枝直径成熟时可达1.5-3.0mm，个别的可达3.0mm以上。雌性生殖腺呈桔红色，卵粒肉眼可见，刺破后可自由散开；雄性生殖腺呈乳黄色或乳白色，刺破后可流出乳白色精浆。显微镜下卵黄及细胞质透明，卵粒形状整齐；个体平均怀卵量达到300～500万粒，少数个体超过800万粒。
2、蓄养及促熟培育
（1）蓄养：将采捕的种参置于蓄养池中进行蓄养，蓄养期间种参在蓄养池内的密度控制在15头/m3，蓄养池内的溶氧浓度控制在5mg/ml。
（2）促熟培育：于翌年阴历一月中旬将蓄养的种参放入培育池中，有计划性地使培育水逐渐升温，以促进种参的性腺发育，具体为：种参入培育池后水温控制在2℃，保持2d，此后以1℃/d的速率上升至6℃，恒温培育6d后，以0.5℃/d的速率上升至10℃，恒温培育6d，继续以0.5℃/d的速率上升至15℃时恒温待产。
促熟过程中每日换水3次，每次换水量为池水的60%，所换的水是海水涨潮期间的优质海水，并且经过滤砂处理。
促熟过程中，投喂粉状配合饲料及海泥的混合物，饲料投喂量占池中种参重量的3%，其中配合饲料与海泥按重量比为1：6混合。所述配合饲料的成分以海菜为主，辅以扇贝边和酵母，所述海菜包括鼠尾藻、马尾藻和海带。
3、对种参进行小产实验
（1）产卵征兆
根据种参促熟的生物学积温，采用解剖的方法观察种参性腺发育情况，当种参的活动出现下述行为时，标志刺参即将产卵：多头种参集中在池角；部分种参快速向池壁水表层处移动；躯体上半部离开池壁，不停地摇摆；生殖孔封闭，颜色加深。
（2）小产实验
对开始进入繁殖期的种参进行小产实验，具体操作步骤如下：
①将培育池内海水放空，种参进行阴干刺激1h；
②将培育池（此时也称作产卵池）内注入新鲜海水，加大海水流动速度，增强水流刺激，水流流速为1.5米/秒，流水刺激1小时；
③将培育池（产卵池）内的水温逐步升高至21.5℃，恒温待产；
以上述方式刺激种参排精、产卵，当发现有排放现象，迅速鉴别雌雄，将雌雄个体的种参分别拣入不同的两个培育池中，当晚池子上方以200W灯泡照射，池水温度降至16℃，以此抑制种参继续排放排精卵。
（3）将两个培育池中的池水温度在两天内逐渐升温至18℃待产，不需投饵；在第三天根据需要定量选择雌雄个体，于18:00-20:00再次通过阴干、升温、加快水流流速方式进行刺激，然后分别置于单独容器中使其排放，一般情况21:00左右种参便会出现大量排放，获得独立的精液及卵子。
所述阴干、升温、加快水流流速刺激方法与小产实验中的刺激方法相同。
4、根据需要进行杂交育种或家系培育试验。
根据实验要求有计划地进行受精，种参产卵受精后，受精卵密度控制在1个/ml，池水温度控制在21.5℃。
实施例2
蓄养密度为20头/m3，蓄养池内的溶氧浓度为8mg/ml；
促熟培育过程的升温方式具体为：种参入培育池后水温控制在3℃，保持3d，此后以1℃/d的速率上升至6℃，恒温培育8d后，以0.5℃/d的速率上升至10℃，恒温培育8d，继续以0.5℃/d的速率上升至15℃时恒温待产。促熟过程中每日换水1次，每次换水量为池水的50%，所换的水是海水涨潮期间的优质海水，并且经过滤砂处理。促熟过程中，投喂粉状饲料及海泥的混合物，饲料投喂量占池中种参重量的5%，其中配合饲料与海泥按重量比为1：8混合。
小产实验具体为：①将培育池内海水放空，种参进行阴干刺激2h；②将种参集中到几个网箱内，种参铺满网箱底部即可，网箱放置在空池中，然后向培育池内注入新鲜海水，使网箱中的种参感受到水流的刺激，水流速度控制在1米/秒，流水刺激0.8小时；③将产卵池内的水温逐步升高至21℃，待产。
抑制种参继续排放排精卵时池水温度为15℃，杂交育种或家系培育中种参产卵受精后，池水温度控制在22.5℃。
其他同实施例1。
实施例3
蓄养密度为18头/m3，蓄养池内的溶氧浓度为7mg/ml；
促熟培育过程的升温方式具体为：种参入培育池后水温控制在2℃，保持3d，此后以1℃/d的速率开始升温，上升至6℃，恒温培育7d后，以0.5℃/d的速率上升至10℃，恒温培育7d，继续以0.5℃/d的速率上升至15℃时恒温待产。促熟过程中每日换水2次，每次换水量为池水的40%，所换的水是海水涨潮期间的优质海水，并且经过滤砂处理。促熟过程中，投喂粉状饲料及海泥的混合物，饲料投喂量占池中种参重量的4%，其中饲料与海泥按重量比为1：7混合。
小产实验具体为：①将培育池内海水放空，种参进行阴干刺激1.5h；②将种参集中到几个网箱内，种参铺满网箱底部即可，网箱放置在空池中，然后向培育池内注入新鲜海水，使网箱中的种参感受到水流的刺激，水流速度控制在1.2米/秒，流水刺激0.5小时；
③将培育池内的水温逐步升高至22℃，恒温待产。
抑制种参继续排放排精卵时池水温度为17℃，杂交育种或家系培育中种参产卵受精后，池水温度控制在22℃。
其他同实施例1。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (6)
1.刺参杂交育种中种参的选择方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)采捕并筛选优良种参；
(2)筛选出的种参放入蓄养池蓄养后，通过控制种参密度、水温和水质进行种参的促熟培育；
(3)对开始进入繁殖期的种参进行小产实验，刺激种参排精、排卵，鉴别雌雄，并同时抑制其大量排放，将雌雄个体置于不同的培育池中分别培育；
(4)重新培育种参两天，于第三天根据需要定量选择雌雄个体，分别置于容器中使其大量排放，获得独立的精液及卵子；
(5)杂交育种或家系培育；
步骤(1)中所述筛选优良种参的具体方法为：对种参进行种质质量检测，筛选出身体健壮、活力好、无疾病、无损伤，体型呈圆筒形、黄瓜状、背面稍隆起，腹面平坦、管足密集，参龄3年以上、体重250g以上的种参；步骤(2)中所述促熟培育的具体方法为：采捕的种参转移至蓄养池，以自然水温蓄养，阴历1月中旬水温在2-3℃，保持2-3d，此后以1℃/d的速率开始升温，上升至6℃，恒温培育6-8d，再以0.5℃/d的速率上升至10℃，恒温培育6-8d，继续以0.5℃/d的速率上升至15℃后恒温待产；
步骤(3)中所述进行小产实验以及抑制精卵大量排放的具体操作方法为：
当种参出现产卵征兆时，进行小产实验：
A.将培育池内的海水放空，对种参进行阴干刺激1-2h；
B.将种参集中到多个网箱内，种参铺满网箱底部即可，网箱放置在空池中，然后向培育池内注入新鲜海水，使网箱中的种参感受到水流的刺激，水流速度控制在1-1.5米/秒，流水刺激0.5-1小时；
C.将培育池内的水温控制在21-22℃，待产；
小产实验刺激种参排精、产卵，当发现有排放现象，迅速鉴别雌雄，并将雌雄个体的种参分别拣入两个不同的培育池中，并在当晚在所述两个培育池上方以200W灯泡照射，同时将池水温度降至15-17℃，抑制种参继续排放排精卵；
步骤(4)中使种参大量排放精卵的具体方法为：小产实验鉴别雌雄后重新培育，在两天内将两个培育池的温度逐渐升至18℃待产；第三天根据需要定量选择雌雄个体，于18:00-20:00再次通过阴干、升温、流水方式进行刺激，然后分别置于单独容器中使其排放，获得独立的精液及卵子；所述阴干、升温、流水刺激方法与小产实验中的刺激方法相同。
2.根据权利要求1所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其特征在于：步骤(1)中的采捕方法具体为：
采捕：于每年的阳历11月份，当自然海区的海水水温达到10-12℃时，在野生刺参的优良栖息环境中进行采捕；所述优良栖息环境海区的水深在5-10m，底质为沙泥和砾石底，海藻资源丰富。
3.根据权利要求2所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其特征在于：步骤(2)中的蓄养过程具体为：
蓄养：将筛选出的优良种参置于蓄养池中蓄养，密度为15-20头/m3，蓄养池内的溶氧浓度为5-8mg/ml。
4.根据权利要求3所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其特征在于：所述促熟培育过程中每日换水1-3次，每次换水量为池水的40-60％，所换的水是涨潮期间的优质海水，并经过滤砂处理；
促熟过程中，投喂粉状配合饲料及海泥的混合物，重量比为饲料：海泥＝1：6-8，其中所述配合饲料投喂量占池中种参重量的3-5％；所述配合饲料的成分以海菜为主，辅以扇贝边和酵母，所述海菜包括鼠尾藻、马尾藻和海带。
5.根据权利要求4所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其特征在于：所述产卵征兆为：多头种参集中在池角；部分种参快速向池壁水表层处移动；躯体上半部离开池壁，不停地摇摆；生殖孔封闭，颜色加深。
6.根据权利要求1所述的刺参杂交育种中种参的选择方法，其特征在于：步骤(5)中杂交育种或家系培育过程中，根据实验要求有计划地进行受精，种参产卵受精后，受精卵密度控制在1个/ml，池水温度控制在21.5-22.5℃。
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