CN102719516A - 一种鉴别大菱鲆卵子质量的方法 - Google Patents
一种鉴别大菱鲆卵子质量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102719516A CN102719516A CN2012102321972A CN201210232197A CN102719516A CN 102719516 A CN102719516 A CN 102719516A CN 2012102321972 A CN2012102321972 A CN 2012102321972A CN 201210232197 A CN201210232197 A CN 201210232197A CN 102719516 A CN102719516 A CN 102719516A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ovum
- gprot
- rate
- eggs
- quality
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种鉴别大菱鲆卵子质量的方法，是用大菱鲆未受精卵和卵巢液的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶的活性作为评价的标准。当大菱鲆未受精卵的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性分别为2.18±0.48U/gprot、70.87±9.74U/gprot；卵巢液的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性分别为50.78±15.58U/gprot、24.53±7.47U/gprot时，卵子的质量符合生产要求。本发明针对不同产卵时期卵子和卵巢液中两种重要的参与能量代谢的酶的检测，结合受精率、孵化率和仔鱼畸形率的验证，减少了外界环境因子（因素）的影响，客观准确的反应了卵子的质量，所用设备简单，价格低廉，可节省时间和成本。
Description
技术领域
本发明属于水产动物卵子质量检测技术领域，具体涉及一种鉴别大菱鲆卵子质量的方法。
背景技术
大菱鲆（Scophthalmus maximus ）是当前欧洲的重要海水养殖鱼类之一，自1992年大菱鲆被引进中国以来，在水产科研工作者和养殖企业的共同努力下，大菱鲆在工业化养殖领域取得了重大成效，最高年产量达5万吨以上，年产值逾40亿元，从而成为我国水产养殖业一个新的经济增长点。
在大菱鲆等硬骨鱼类人工繁养殖过程中，卵子的质量是影响繁殖性能的一个关键因素，它直接关系到胚胎的发育以及仔、稚、幼鱼的成活和生长速率，因此，卵子质量的好坏与养殖效率密切相关。此外，卵子质量还可以反馈亲鱼培育、对指导苗种生产也具有重要意义；同时高质量卵子也为深入研究海水硬骨鱼类胚胎发育调控机制提供了有效的平台和保障。目前对大菱鲆卵子质量的评价通常是对其外观形态及生产性状检测，如色泽、沉浮性、受精率、孵化率和仔鱼畸形率等，对卵子和卵巢液的基础生化组成等方面的研究相对较少。从外观上对卵子进行检测虽然速度快，但准确率低；而通过受精率、孵化率和仔鱼畸形率等生产性状来评价卵子质量，涉及到后期养殖，试验周期长，易受外界环境因子（因素）的干扰，往往影响最后的统计结果，同时又不能在繁殖早期判断卵子质量，避免不必要损失。目前，国内外还没有使用多种方法对大菱鲆卵子进行筛选，对其卵子质量的评价方法单一，不能全面反映其卵子的特性，因此需要提供一种有效的大菱鲆卵子质量评价方法。
发明内容
本发明目的是提供一种评价大菱鲆卵子质量的方法，采用此方法可以弥补现有技术的不足，解决现有的鱼类卵子质量检测方法中缺少综合评价，导致评价方法存在偏差问题，进一步完善鱼类卵子质量评价体系。
本发明技术方案是在大菱鲆繁殖周期内，分别收集同一样品同一时期的未受精卵和卵巢液，再分别测定未受精卵和卵巢液的碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）和酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）的活性，同时结合相应的卵子受精率、孵化率和仔鱼畸形率的测定，建立一种综合评价大菱鲆卵子质量的新方法，为大菱鲆卵子质量评价提供可靠的技术手段。
本发明提供一种检测大菱鲆卵子质量的标准，当大菱鲆未受精卵的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性分别为2.18±0.48U/gprot，70.87±9.74U/gprot时，且卵巢液碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性在50.78±15.58U/gprot，24.53±7.47U/gprot时，受精率和孵化率最高，仔鱼畸形率最低，此时卵子质量符合生产的要求。当检测的未受精卵和卵巢液的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性不在上述范围内时，所检测的卵子并没有处于最佳的质量范围。在大菱鲆规模化种苗生产过程中，当卵子受精率低于50%时，养殖企业生产成本最高，养殖经济效益降低，获利最低，卵子质量不能满足实际生产需要。
本发明针对不同产卵时期卵子和卵巢液中两种重要的参与能量代谢的酶的检测，结合受精率、孵化率和仔鱼畸形率的验证，减少了外界环境因子（因素）的影响，客观准确的反应了卵子的质量，所用设备简单，价格低廉，可节省时间和成本。
具体实施方式
本发明的方法，包括有如下的步骤：
1)在大菱鲆繁殖季节，选取发育一致的雌性亲鱼若干尾，分别收集卵子和卵巢液，卵子用生理盐水研磨制备成10%组织匀浆，离心取上清，用试剂盒（南京建成生物工程研究所，酶标法JC-A0059）在酶标仪下测定碱性磷酸酶和酸性磷酸酶酶活性；卵巢液稀释5倍后，同上述方法检测碱性磷酸酶和酸性磷酸酶酶活性。每个样品重复三次，结果取平均值，所得实验数据采用SAS（9.0版本）软件中GLM过程进行方差分析和Duncan氏多重比较。
2)通过受精率和孵化率检测该方法的准确度
受精率统计：卵子受精2~4小时后，在倒置显微镜下观察受精卵发育情况（正常受精卵此时发育至四细胞期，未受精卵发育停止），计算得出卵子受精率；受精率=正常发育卵子数/总卵数
孵化率统计：卵子受精后，每间隔12小时，吸取沉于孵化网箱底部的死卵（发育正常的卵子浮于水层表面），计数发育失败的卵子数；待仔鱼孵化后，统计孵化仔鱼总数，计算得出孵化率；
孵化率=孵化仔鱼数/（沉卵总数+孵化仔鱼数）
仔鱼畸形率统计：仔鱼孵化后在倒置显微镜下观察仔鱼形态，计数畸形仔鱼数，统计孵化仔鱼总数，计算得出仔鱼畸形率。
畸形率=畸形仔鱼数/孵化仔鱼数）。
下面结合具体实施例对本发明的方法进行详细描述：
2011年在天源水产有限公司亲鱼车间内进行试验，取产卵期的雌性亲鱼12尾，分别挤卵后用吸管分别吸取两次各10ml的卵子和卵巢液，其中10ml的卵子用于进行受精率和孵化率的检测，10ml用于碱性磷酸酶和酸性磷酸酶检测。将20组的数据进行分析后，得到如下表数据，单位：U/gprot（国际单位/每克蛋白）。
表1：大菱鲆繁殖周期内卵子和卵巢液AKP、ACP活性变化及相对应受精率、孵化率和仔鱼畸形率
结果显示大菱鲆未受精的卵子碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性在2.18±0.48U/g prot 、70.87±9.74U/g prot时，且卵巢液碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性在50.78±15.58U/g prot、24.53±7.47U/gprot时，受精率、孵化率和仔鱼畸形率都符合生产的需求。
为了更好的验证本发明方法的准确性，2012年3月在天源水产有限公司亲鱼车间内实验。对养殖在同一个水池内，同样养殖方式的雌性大菱鲆进行卵子和卵巢液的AKP、ACP活性的检测。同时，用选用同一尾雄鱼的精液进行受精，统计受精率、孵化率和仔鱼畸形率。结果表明，受精率、孵化率和仔鱼畸形率都符合生产要求的雌鱼，其卵子、卵巢液的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性都在本发明的标准范围内。而一些繁殖性能差（受精率、孵化率低，仔鱼畸形率高）的雌鱼，卵子、卵巢液的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性都在标准范围之外。因此，本发明的方法可以快速有效的检测卵子的质量，为大菱鲆的养殖提供有效的检测手段。
Claims (3)
1.一种鉴别大菱鲆卵子质量的方法，其特征在于，是用大菱鲆未受精卵和卵巢液的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性作为评价的标准。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的标准如下：大菱鲆未受精卵的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性分别为2.18±0.48U/gprot、70.87±9.74U/gprot；卵巢液的碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性分别为50.78±15.58U/gprot、24.53±7.47U/gprot 。
3.如权利要求1所述的方法，其具体步骤如下：
分别收集大菱鲆的未受精卵和卵巢液，然后将未受精卵用生理盐水研磨制备成10%组织匀浆，离心取上清，在酶标仪下测定碱性磷酸酶和酸性磷酸酶酶活性；卵巢液稀释5倍后检测碱性磷酸酶和酸性磷酸酶酶活性，并将检测结果与权利要求2所述的标准进行比较，最终确定未受精卵的质量；当处于权利要求2所述的标准内，为符合生产要求的卵。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012102321972A CN102719516B (zh) | 2012-07-06 | 2012-07-06 | 一种鉴别大菱鲆卵子质量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012102321972A CN102719516B (zh) | 2012-07-06 | 2012-07-06 | 一种鉴别大菱鲆卵子质量的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102719516A true CN102719516A (zh) | 2012-10-10 |
| CN102719516B CN102719516B (zh) | 2013-11-20 |
Family
ID=46945382
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2012102321972A Active CN102719516B (zh) | 2012-07-06 | 2012-07-06 | 一种鉴别大菱鲆卵子质量的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102719516B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1647622A (zh) * | 2005-02-01 | 2005-08-03 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 获得大菱鲆优质受精卵的方法 |
| CN101845479A (zh) * | 2009-03-24 | 2010-09-29 | 中国水产科学研究院东海水产研究所 | 一种鉴别斑尾刺虾虎鱼卵子质量的方法 |
-
2012
- 2012-07-06 CN CN2012102321972A patent/CN102719516B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1647622A (zh) * | 2005-02-01 | 2005-08-03 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 获得大菱鲆优质受精卵的方法 |
| CN101845479A (zh) * | 2009-03-24 | 2010-09-29 | 中国水产科学研究院东海水产研究所 | 一种鉴别斑尾刺虾虎鱼卵子质量的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| FRANZ LAHNSTEINER ET.AL.: "Egg quality determination in the gilthead seabream，Sparus aurata, with biochemical parameters", 《AQUACULTURE》, vol. 237, no. 14, 2 August 2004 (2004-08-02) * |
| G.GIMENEZ ET.AL.: "Egg quality criteria in common dentex (Dentex dentex)", 《AQUACULTURE》, vol. 260, no. 14, 29 September 2006 (2006-09-29) * |
| 肖永双等: "基于能量代谢酶相对活力评价大菱鲆卵质", 《南方水产科学》, vol. 8, no. 2, 30 April 2012 (2012-04-30) * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102719516B (zh) | 2013-11-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gallego et al. | Sperm motility in fish: technical applications and perspectives through CASA-Mot systems | |
| CN106719114B (zh) | 暗纹东方鲀和红鳍东方鲀之间的杂交种及生产方法 | |
| Camacho-Mondragón et al. | Particular features of gonadal maturation and size at first maturity in Atrina maura (Bivalvia: Pinnidae) | |
| CN100425129C (zh) | 中国对虾多性状育种制定选择指数方法 | |
| CN110358819B (zh) | 一种全雄乌斑杂交鳢的培育方法 | |
| CN114793963B (zh) | 一种大数据控制的鱼快速脆化环境控制方法 | |
| CN105145481A (zh) | 一种参皇系优质鸡种选育模块 | |
| CN103891647B (zh) | 一种香港牡蛎耐高盐新品系的制种方法 | |
| CN108207712A (zh) | 一种耐盐碱罗非鱼的优良品系选育方法 | |
| CN102144592A (zh) | 一种快速高效的罗非鱼选育方法 | |
| CN103141411B (zh) | 一种灰海马亲海马配对方法 | |
| CN102719516B (zh) | 一种鉴别大菱鲆卵子质量的方法 | |
| CN102960272B (zh) | 一种合浦珠母贝数量性状基因聚合育种方法 | |
| CN102388825A (zh) | 一种脉红螺人工育苗中稚螺的培育方法 | |
| CN102090360B (zh) | 四倍体半滑舌鳎鱼苗高效诱导方法 | |
| CN102119674B (zh) | 半滑舌鳎三倍体鱼苗批量化诱导方法 | |
| CN104285852B (zh) | 一种鉴别长江水系中华绒螯蟹野生扣蟹和池塘养殖扣蟹的方法 | |
| CN113854202B (zh) | 一种卵形鲳鲹快速生长新品种的分子标记辅助育种方法 | |
| Che et al. | The growth and ovarian development pattern of pond-reared swimming crab Portunus trituberculatus | |
| Wang et al. | Seasonal changes of reproductive activity and biochemical composition of pen shell Atrina pectinata Linnaeus, 1767 in Bohai Sea, China | |
| CN102586392B (zh) | 一种大菱鲆未受精卵的质量检测方法 | |
| CN105112491A (zh) | 基于气相色谱-质谱联用技术和形态的山羊转基因克隆胚胎质量评估差异代谢物的筛选方法 | |
| CN102511415A (zh) | 一种大菱鲆耐高温个体的筛选方法 | |
| CN102177874B (zh) | 桑蚕卵胚胎发育进程检测方法 | |
| CN111626605A (zh) | 一种水产养殖容量的动态评估方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |