CN1636014A - 用高活性低副作用重组促红细胞生成素治疗患者的治疗方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了使用重组促红细胞生成素进行治疗的几种新治疗特性和方法，其中所述促红细胞生成素按照Powell的美国专利第5,688,697号由转化入幼龄仓鼠肾细胞(BHK)的人基因组促红细胞生成素DNA的ApaI限制性片段表达制备。本文命名为EpoetinΩ的这种重组促红细胞生成素显示出具有几种优于其它重组促红细胞生成素(例如称为Epoetin α和β的促红细胞生成素)的意料之外的优良特性，其中所述Epoetinα和β按照Lin的美国专利第4,703,008，和5,955,422号由在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达的基因组或cDNA制备。EpoetinΩ的优良特性包括但不限于效力高得多、反应快得多(即没有潜伏期)、有效血清水平更长、对人类患者的抗原性低得多、对其它Epoetin无反应患者有治疗活性、发生血栓形成之类的副作用较少、恶心减轻、注射部位疼痛减轻、机体疼痛减轻，而最显著的是没有或降低了血压增加或高血压的风险。这些新特性提供了新的治疗方法，包括：治疗贫血和治疗非贫血病症(例如疲劳和血管性疼痛)、治疗受高血压有害作用的患者(例如心脏病患者和血栓形成高风险患者)、治疗开始/没有开始化疗或放疗的癌症患者，以及新给药方案治疗，所述方案包括低得多的剂量和较低的给药频率(低至每周1次或更低)。

Description

用高活性低副作用重组促红细胞生成素治疗患者的治疗方法

技术领域

本发明涉及促红细胞生成素治疗应用领域，更具体地说，涉及用制备自Apa I人基因组DNA片段的重组促红细胞生成素治疗患者，所述重组促红细胞生成素包括在转化幼龄仓鼠肾细胞中表达的重组促红细胞生成素，其副作用小于其它重组人促红细胞生成素，包括制备自中国仓鼠卵巢细胞的重组促红细胞生成素。

促红细胞生成素(EPO)是一种用于各种需要刺激红细胞(RBC)增殖的治疗的重要药物。过去，重组EPO(rHu EPO)的应用拓展被严格视为是一种抗贫血因子，人们认为抗贫血因子是一种刺激骨髓干细胞分化以刺激网织红细胞产生(即年轻的后期干细胞增殖)的生长因子。通常，为了治疗贫血，一开始希望EPO用于任何存在体内激素缺乏、失血或患者具有贫血症状或骨髓对体内激素反应低的贫血病症。人们潜在认为可首先用EPO治疗的典型病症包括恶性病(即任何类型的实体癌或血癌，例如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤)贫血、恶性病化疗/放疗导致的贫血、慢性病(例如类风湿性关节炎之类的自身免疫疾病和肝炎)贫血、AIDS患者(特别是AZT治疗患者)贫血、早产贫血、肾衰竭相关贫血、地中海贫血、自身免疫溶血性贫血、再生障碍性贫血以及与外科手术相关的贫血(例如改进用于自身输血的手术前献血，以刺激血红蛋白水平增加来对抗大量失血，或者增加骨髓移植患者的红细胞生成)。

用于所述治疗的促红细胞生成素是通过在哺乳动物细胞系中表达重组人促红细胞生成素基因组DNA或cDNA序列而制备的糖基化蛋白。如下文更详细地描述，本领域通常使用的重组人促红细胞生成素至少有三种形式：Epoetinα、Epoetinβ和EpoetinΩ。

最近已经确证，根据表达使用的精确DNA序列或使用的宿主细胞系和/或由此生成的促红细胞生成素的结构和生物特性，重组EPO制品有显著不同。不同的结构和生物特性包括诸如以下的特征：不同的糖基化模式、不同的异构体(isoform)(经等电聚焦(IEF)和RP HPLC进行分析)、不同的分子大小/分子量、不同的抗原性、不同的药物动力学特性、不同的剂量反应速率、不同的生物效应、不同的受体结合等。

通常用于治疗的一类EPO如Lin的美国专利第4,703,008，和5,955,422号所述用人促红细胞生成素基因的大片段基因组克隆在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达产生。该类促红细胞生成素包括命名为Epoetinα(基因组DNA)或β(cDNA)的epoetin。Epoetinα可按商标名EPREX、PROCRIT或EPOGEN商购。EPOGEN经RP HPLC跑出一个单峰，通过IEF异构体分析几乎没有异构体。多种技术都揭示Epoetinα和β平均分子量估计在30.4-41kD的范围内。这种测定有所不同，取决于用于分析的报告或技术(参见基于EPOGEN的USPDI；J.Chromatog.B.687：189，1996；J.Am.Soc.Nephrol.10：2392，1989)。本文显示了一个使用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析与标准分子量的并排对比，估计Epoetinα和β的平均分子量约41kD，而EpoetinΩ约为39kD。Epoetinβ可按商品名RECORMON获得，几乎和Epoetinα相同，但除了包含与Epoetinα相似的主要异构体之外还包含另外的次要异构体。

Epoetinα和β制品最重大的一种生物副作用是血压例行性增加，可在初次给药时迅速导致高血压，并可在长期的维持疗程中延续为持续不断的并发症/副作用事件。其它的副作用包括抽搐、头痛、血栓形成、功效延迟、流感样症状，许多患者自诉和报告注射部位(包括静脉或皮下给药)疼痛和与Epoetinα治疗相关的机体疼痛增大到有害和不良的水平。BMJ303：288，1991；Am.J.Nephrol.12：68，1992；Pharm.Week B1 13：55，1992；Nephrol.Dial.Transplant 13：817，1998；Clin.Nephrol.49：41，1998。另外，在使用Epoetinα和β时血小板形成增加也是常规事件，在常规治疗方面需要血液稀释剂，这很可能促使凝血或血栓形成风险增加，特别是对于血管受损患者。而且，如下文更详细显示，某些患者出现了其它副作用，例如顽固性疼痛或疲劳。此外，一些人对Epoetinα或β治疗无反应，例如对于某些化疗剂、放疗引起的病症或其它抑制细胞增殖的疾病，反应实际上不存在(无反应)或反应有限。使用rHu EPOα和β产生的副作用有许多是剂量依赖性的，据报道，剂量越高，副反应发作得越频繁或者越严重，其中之一是高血压或血压增加。

不幸的是，Epoetinα或β的某些副作用意味着患例如先前存在的高血压病或血管受损的患者禁忌用Epoetinα或β治疗，并且必须小心监视。高血压可能伴有其它病症，例如心脏病、癌症、肝功能障碍或自身免疫疾病(例如类风湿性关节炎)，增加了用Epoetinα或β治疗患这些病的患者的风险。即使在患者不知道患显见病症(例如血管受限或血管疾病如动脉狭窄)的情况下，职业医师也应当寻求避免血压增加或其它副作用，即便是完全“正常”或接近“正常”的患者。而且，患者可能在未患高血压(例如血压不超过90)时是正常的，但在给予rHu促红细胞生成素后可能“成为”高血压。例如，血压增加20点可使“正常”患者进入“高血压”状态。需要更大剂量的rHu EPO的患者承受着更高的副作用事件风险，某些透析患者或某些肿瘤相关贫血患者必须根据需要使用大得多的剂量，以使RBC增殖、血细胞比容(hematocirti)或血红蛋白计数获得希望的增加。另外，一般来说，潜在的副作用排除了为了更和缓或治表目的(例如减轻疲劳、减轻血管性疼痛、合理增加体能(例如士兵)，或改善其它方面健康患者的认知功能(例如老年人))，对于上述情况促红细胞生成素可能在其它方面有疗效但副作用风险可能超过疗效。其它epoetin的这些问题至少部分与达到疗效或实现生理利益通常需要的epoetinα和β的频率和高剂量有关。通常，Epoetinα或β的给药频率为每周3次或3次以上，典型剂量是200或200以上IU/Kg/周(参见Epoetinα，Drugs38：863，1989；Drugs 49：232，1985；Drugs 51：289，1996；J.Bone JointSurg.78：-A：62，1996；Lancet 344：367，1994；Transfusion 36：822，1996；Nephrol.Dial.Transplant 2：85，1999；Neth.J.Med.54：10，1999；关于和Epoetinβ的对比，参见Clin.Pharmacol.Ther.50：702，1991)。

因此，本领域需要使用促红细胞生成素的治疗方法，这种促红细胞生成素没有或减少了CHO细胞所生产促红细胞生成素的一种或多种副作用的发生，并有效用于对患可能禁忌用Epoetinα或β治疗的疾病的患者的治疗方法。另外，对用Epoetinα或β治疗无反应或起反作用的患者存在需要治疗。而且，需要一种可有效获得患者反应的促红细胞生成素，其中所述患者用例如化疗和放疗抑制病状或者对其它epoetin无反应或没有足够的反应。

发明概述

本公开发明通过提供美国专利第5,688,697号和美国专利申请序号08/238,255和08/466,412(通过引用结合到本文中)描述的EpoetinΩ治疗患者满足了这种需要。EpoetinΩ可按商标名Elanex促红细胞生成素、EPOMEGA、EPOMAX、HEMAX、REPOTIN或Hi Potency EPO细胞因子相关性因子(HP-EPO-CRT)由Elanex Pharmaceuticals，BothellWashington处获得。这种已获得批准并容易获得的EpoetinΩ通过在幼龄仓鼠肾细胞(例如BHK-21细胞)中表达人促红细胞生成素基因的Apa1限制性片段产生。本文表明，EpoetinΩ明显更有效、在清除时间内血清浓度较高(是EPOα的2.5倍)、生物利用度更高，开始治疗(约75-120IU/Kg/周)和维持(约20-75IU/Kg/周)需要的剂量都较低，对用其它epoetin治疗无反应患者也有效。还公开了EpoetinΩ对与缺氧或贫血或红细胞或血红蛋白增加无关的患者有效。换句话说，EpoetinΩ由于尚未完全了解的原因但以临床观察鉴定的方式直接作用于机体其它机制，所述临床观测结果例如机体疼痛减轻或消除、恶心减轻、精力或“能量”增强、健康感增加和/或“心情”较好、在涉及肝损伤或损害的疾病的肝功能增强以及各种其它显著疗效。

本文提供的发现是，在Epoetinα或β引起的副作用的类型和严重性方面，EpoetinΩ与Epoetinα和β令人惊奇地不同，这使得EpoetinΩ对某些疾病(例如癌症)的治疗特别有效，尤其是化疗或放疗治疗时。EpoetinΩ没有但其它epoetin有的一个最重要的副作用是增加血压和相伴的高血压风险。这使得EpoetinΩ对治疗患高血压(或有成为高血压或高血压临界状态的风险)、心脏病、血管损伤或血栓形成事件风险增加的患者特别有用。另外，本文公开了EpoetinΩ比其它epoetin更有效，即产生疗效需要的剂量更少。还公开了EpoetinΩ的作用没有潜伏期，即立即产生疗效而没有时滞，相反，其它epoetin通常需要至少两周才对普通贫血(例如肾透析患者贫血)表现出可检测的反应，在可预期任何临床显著反应(如果即将出现)之前需要使用至少4周或更长时间。本文进一步显示EpoetinΩ比其它epoetin的生物利用度更高，即以相同剂量epoetin为标准，EpoetinΩ停留在血浆中的浓度水平较高，并对患者保持长期有效。而且，本文还公开了EpoetinΩ治疗的患者没有形成EPO抗体。这些新特性单独或组合在一起允许EpoetiΩ以减少的剂量和频率使用，允许用EpoetinΩ治疗使用epoetinα或β起反作用的患者和/或对其它促红细胞生成素无反应的患者。

一方面，提供治疗或预防患者贫血的方法，包括给予治疗剂量的EpoetinΩ，其中选择的量在疗程内产生疗效，而没有产生或加剧血压增加或高血压之类的副作用。在一个实施方案中，血压包括舒张压或收缩压检测，它们在疗程中增加不超过10mmHg。在另一个实施方案中，舒张压或收缩压检测增加不超过1mmHg/单位血红蛋白计数升高(g/dl)。在再另一个实施方案中，在EpoetinΩ治疗患者群中出现高血压的风险比安慰剂治疗的患者群低15％。

贫血病可以是任何类型的贫血病，包括但不限于肾贫血、恶性病贫血、化疗相关贫血、慢性病贫血、AIDS贫血、早产贫血、地中海贫血、自身免疫溶血病贫血或再生障碍性贫血。另外，该方法对治疗或预防与手术步骤相关的贫血也有用。在一个实施方案中，该方法包括给予EpoetinΩ，然后取血用于自体输血(也称做自身输血)。在另一个实施方案中，该方法包括在手术前步骤给予EpoetinΩ，而在再另一个实施方案中，在手术后步骤给予EpoetinΩ。在再另一个实施方案中，手术步骤为骨髓移植。

在另一方面，提供治疗或预防用治疗剂量Epoetinα或β治疗无反应或起反作用的患者贫血的方法。该方法同样包括给予EpoetinΩ，其中选择量的EpoetinΩ在疗程内产生疗效。通常，可以每周1-3次的频率给予50-150IU/kg的剂量。

在任一方面，疗程需要的时间根据贫血类型和严重性而有所变化，或者按照目标疗效变化，所述疗效包括但不限于红细胞计数(RBC)增加、血细胞比容计数(HCT)增加、血红蛋白计数增加。典型的治疗包括EpoetinΩ剂量显著降低和/或给药频率减少，以获得(例如在癌症患者的放疗/化疗中)使用Epoetinα或β可获得的治疗反应或在其它epoetin的任何报道剂量下根本不可能获得的治疗反应。还具有反应快速可检测且没有潜伏期的特征，使得主治医师可期待在一周或更短时间内获得血液实验室的检测结果反馈，相比之下其它epoetin长达2-5周。这又使得可以迅速增加给药剂量以达到患者所需要的治疗效果，并能够快速确定患者对EpoetinΩ的反应性，可能表示敏捷或快速的逆转反应。快速反应对需要迅速反应的化疗或放疗患者特别有用，以便继续延长生命的治疗而不退出治疗，因此具有不需要承担输血风险的优势。这就允许用化疗剂和/或放疗长期治疗，以破坏或抑制癌症，否则中断治疗可能会因为撤回或降低治疗剂量或频率而使癌症复发或变得对化疗抵抗性更强。而且，这使得可以相对立即改善贫血患者的生活质量，以便机体具有健康血液状态抵抗疾病如癌症，使机体更好地利用其天然系统同时对抗治疗和癌症。

在相关方面，描述了受治疗患者(包括给予EpoetinΩ的化疗患者)大体上健康感更强，这种态度上的改善有减轻患者所感觉到的化疗/放疗严重性和不利作用的趋势。这提升了患者忍受化疗/放疗的精神承受力，自愿在任何癌症复发时再进行化疗/放疗。实际上健康感或态度的立即改善至少使一名患者即便在化疗同时也可追求正常的生活方式，而不管血红蛋白或RBC反应的改变如何。在另一个相关方面，EpoetinΩ治疗还减轻或消除了化疗/放疗患者的恶心，甚至达到减少通常为化疗患者开出的标准恶心药物处方的程度。

在其它方面，提供治疗或预防伴有若干病症的贫血的方法，所述病症包括心脏病或血管受损患者、肝功能障碍、肝炎、自身免疫病或恶性病(即癌症)。这些方法包括治疗患者而不增加副作用(包括但不限于血压增加或高血压)的风险或程度。这些方法还包括治疗Epoetinα或β治疗无反应或起反作用的患者。在治疗癌症相关病症方面，所述方法有效治疗完全或部分由癌症治疗引起的贫血病。这些实施方案包括化疗或放疗引起或归因于化疗或放疗的贫血。这些实施方案包括在癌症治疗结束之前、过程中或之后给予EpoetinΩ。在另一方面，提供用降低剂量的EpoetinΩ(例如12,000IU/周或更低)和/或每周仅给予1次的剂量(相对于100,000IU至200,000IU/周的Epoetinα，通常Epoetinα每周给予2次或2次以上)治疗患者的方法。高剂量的epoetin一般还存在着极大的发生副作用的风险，因为许多副作用可能和典型治疗方案中给予的Epoetin IU绝对剂量存在剂量相关。

在另一方面，提供治疗患者的制剂或药盒，它包括配制用于治疗患者而不产生或加剧高血压或血压增加之类的副作用的治疗剂量的EpoetinΩ。这方面包括治疗Epoetinα或β治疗无反应或起反作用的患者的制剂或药盒。所述制剂或药盒可选地包括给予治疗剂量EpoetinΩ以获得疗效的说明书。说明书可包括通过参比其它治疗使用的Epoetinα或β量调整EpoetinΩ的治疗剂量。

此外，本文公开了EpoetinΩ令人惊奇的效果，即直接、似乎立即且持续地减轻与各种病症相关的机体疼痛，这些病症包括癌症、纤维肌痛、慢性疲劳综合症、RA、肝炎，包括肝损伤/病变以及进行化疗的癌症患者。甚至更令人惊奇的是，机体疼痛减轻的发生与显著的红细胞生成刺激反应(例如RBC计数、血细胞比容或血红蛋白水平增加)无关。疼痛减轻出现在给药的几分钟内，并可持续几天。

本文还公开了给予1名肝损伤患者(患晚期肝炎，临近死亡)EpoetinΩ，不到一周或在1-2周之内，该患者的生活质量、精力和健康感都得到改善。这些可检测改善的发生与血红蛋白或RBC计数增加无关；另外，通过典型实验室测试(包括sgot和其它测试)检测，肝功能的各项参数均得到改善。健康感的改善使卧床的晚期肝炎患者可在接近两年的时间内能够恢复正常生活方式。

根据以下的详述，本文提供的使用EpoetinΩ的治疗方法的这些方面和其它方面的优势对本领域普通技术人员而言显而易见。

附图简述

图1图示了一幅考马斯染色等电聚焦凝胶，图解了部分由不同糖取代基产生的epoetinα、β和Ω样品制备物中包含的不同异构体。

图2图示了一幅银染等电聚焦凝胶，图解了Epoetinα和Epoetinβ样品制备物对比所包含的不同异构体，以及与EpoetinΩ如何不同。

图3图示了一幅SDS聚丙烯酰胺凝胶，图解了Epoetinα、β和Ω样品制备物的不同分子量。

图4图解了临床实验数据，显示了EpoetinΩ和Epoetinα相比所治疗患者出现的几种副作用。

图5图解了EpoetinΩ与Epoetinα在皮下注射给予后比基线增加的平均收缩压的对比(每组30名患者)。

图6图解了EpoetinΩ对血压的影响。图6A显示EpoetinΩ与Epoetinα在平均收缩压(A)和舒张压(B)相对于血红蛋白增加作用的对比。图6C显示舒张和收缩压随疗程进行都轻微但线性地下降。图6D显示血红蛋白随疗程增加，EpoetinΩ剂量随疗程下降，在同一疗程动脉血压下降。

图7显示EpoetinΩ治疗患者血小板没有显著增加。

图8图解了EpoetinΩ和Epoetinα相比治疗患者所需的维持剂量的差异。

图9图示了与Epoetinα相比，18名患者皮下注射给予50IU/kg单剂EpoetinΩ的平均血浆促红细胞生成素浓度-时间。图9A显示了rHu EPO血清浓度对比，对比EpoetinΩ(上线)和Epoetinα(下线)说明，在时间范围内，根据EpoetinΩ相对于Epoetinα的面积，患者体内的EpoetinΩ血清浓度是Epoetinα的2.5倍。图9B显示rHu EPOα和β的血清浓度对比，图解说明α和β的血清水平几乎相同。

图10图解了EpoetinΩ(A)或Epoetinα(B)治疗患者的绝对周剂量和平均血浆促红细胞生成素浓度。

图11图解了皮下注射EpoetinΩ或Epoetinα治疗患者经受疼痛的比较。疼痛以注射部位疼痛的平均周视觉类似物规模得分表示(每组30名患者)。

图12图解了在获得血红蛋白水平增加方面的快速反应，以静脉注射给予EpoetinΩ的379名患者的平均值表示，或者以皮下注射给药的450名患者的平均值表示。误差条线表示平均标准误。

图13图解了静脉注射(A)或皮下注射(B)给予EpoetinΩ的患者的平均周增加剂量和维持剂量。

图14显示了临床实验结果，说明在EpoetinΩ治疗的11周内平均血红蛋白值持续增加。

图15图解了使用单一周剂量Epoetin在获得血红蛋白水平增加方面的快速反应(A)和在时间范围内达到目标血红蛋白水平的患者百分率(B)。图15C图解了在24周疗程的前7周给予平均剂量约3×25至约3×33IU/kg/周平均剂量的患者群血红蛋白快速线性增加，并显示整个疗程需要的总平均周剂量逐渐下降。

图16图解了皮下注射EpoetinΩ或Epoetinα治疗患者的血红蛋白反应水平(每组30名患者)的对比，显示了维持所需要的平均血红蛋白值(A)和平均绝对周剂量(B)。

图17图解了随血红蛋白基线而变化的EpoetinΩ或Epoetinα治疗患者的血红蛋白反应水平(A)的对比以及平均血红蛋白增加/平均周剂量的比率(B)。

图18图示了三重交叉实验的结果，显示Epoetinα无反应患者对EpoetinΩ高度反应。18A显示第一阶段每周给予两次EpoetinΩ的初步正反应；18B显示第二阶段每周给予两次Epoetinα无反应；18C显示第三阶段每周给予一次EpoetinΩ的反应。顶图显示每周总剂量，中图显示血红蛋白计数，下图显示对血压的影响。

图19图示在手术前步骤使用EpoetinΩ防止献血性贫血。A和B分别显示治疗和对照组的个体血红蛋白水平。C和D分别显示血红蛋白下降的平均线速度，直至最后出院和到手术时为止。

图20A和B分别图示了在手术前步骤献血的EpoetinΩ治疗患者和对照患者的平均RBC和网织红细胞计数。图20C显示治疗和对照患者的平均总血清铁水平(TSI)，直至最后出院为止。

图21图示使用EpoetinΩ治疗化疗相关贫血。21A显示整个化疗疗程的血红蛋白水平变化。21B显示给予EpoetinΩ和产生21A所示的血红蛋白水平的化疗治疗的日程。

图22图示治疗化疗相关贫血患者需要的剂量范围对比，这些对比得自EpoetinΩ治疗和对比的Epoetinα相似治疗的最初8周研究。

图23图示EpoetinΩ治疗的化疗患者和Epoetinα相似治疗的血红蛋白增加的对比，这些对比得自EpoetinΩ治疗和对比的Epoetinα相似治疗的最初8周研究。

图24图示在23名婴儿研究中EpoetinΩ治疗早产贫血(即早产婴儿贫血)的有效性。24A显示EpoetinΩ治疗婴儿组需要的输血少于未治疗的对照组。24B-D分别显示了Epoetin治疗组相比于对照组的(B)RBC计数、(C)血细胞比容计数和(D)血红蛋白水平的增加。

图25图示EpoetinΩ和Epoetinα在12周疗程中治疗肾透析患者需要的有效剂量对比。

图26图示Epoetinα治疗的肾透析患者群需要的维持剂量分布。

本发明详述

在开始本发明详述之前，提供以下的定义以帮助理解本发明。

疾病“相关症状”是与疾病同时存在的症状或由于疾病治疗产生的症状。疾病与其相关症状的关系可有或没有因果关系。更具体地说，所述症状可以与疾病无关，或者可以和疾病有关，因为症状可由疾病直接引起，或者可由疾病作用间接引起，或者由疾病主要治疗引起。

“反作用”或“副作用”是不需要的生物反应、生理状态、生物学检测或其风险增加，“反作用”或“副作用”可在药物给予后发生，尤其是在给予患者rHu EPO后发生。

“禁忌症”是指以下的第一种症状：使用一种疗法治疗与第一种病症伴有的第二种病症，相比于如果第一种病症不伴有第二种病症，将产生较大风险或增加副作用的严重程度。

“治疗或预防贫血”是指给予有效预防、减轻、改善或消除贫血病的治疗。一方面，治疗应用于通过例如RBC、血红蛋白、血细胞比容或其它指标的贫血检测确定的预先存在的贫血病。另一方面，预防贫血病是指以治疗来减轻或预防由于药物治疗或通常伴有贫血的医学病症而在统计上预期存在的个体贫血。

“心脏病”是指心脏病理状况，包括但不限于充血性心脏病、慢性心力衰竭、心肌缺血或心肌梗塞。

“疗效”是指治疗症状的阳性结果，可包括例如红细胞计数(RBC)、血小板计数、血细胞比容(HCT)、血红蛋白水平(血红蛋白)之类的临床指标以及疼痛减轻、疲劳减轻、精力提高或健康感改善之类的主观指标的有益变化。

“疗程”最低限度是指首次给予治疗到检测出治疗疗效之间的时间。疗程可延长至超出所述最短时间的有限期或无限期的时间。

“不产生或加剧副作用”是不引起副作用、不使已存在的副作用加重或不将发生副作用的风险增至超出未治疗患者出现风险的15％。可对比EpoetinΩ治疗患者群和安慰剂治疗的相同患者群的发病率测定风险。高血压方面，“正常水平”血压患者出现血压检测约140/80-85mm Hg或更高的风险低于约15％。血压方面，相对于治疗前舒张压或收缩压检测增加小于10mm Hg为不显著。

“正常水平”是指临床医师认为属于健康个体群中统计学正常的生物或临床检测值范围内的值。正常水平表可见于众多参考文献，例如Harrison’s Principcls of Internal Medicine。本领域一般技术人员应理解所谓的“正常水平”将随年龄、体重、性别之类的因素而改变，并可随本领域的新认识而改变。

“IU”或“国际单位”是药物或天然存在物质的特定生物作用的标准化检测量。具体地说，促红细胞生成素IU是指由体内非缺氧性(ex-hypoxic)红血球增多小鼠测定的检测单位，该单位用促红细胞生成素的WHO国际标准品标准化。对于给定物质提供1IU需要的物质量将随物质的来源、条件、质量、纯度和/或类型而变化。参考Storring等，Brit.J.Haematol.100：79，1998(通过引用结合到本文中)，可进一步理解IU和其它单位(例如放免测定定义的单位)之间的关系。

Epoetin的结构特性

如上所述，不同DNA(基因组或cDNA)和/或不同细胞系制备的促红细胞生成素具有不同的糖基化模式和其它产生具有不同生物活性糖蛋白的特性。对于选自最终等电聚焦纯化步骤的宽峰组分EpoetinΩ，使用红细胞增多小鼠测定的体内测定结果通常约40,000至约65,000IU/mg的范围内。更窄选择的峰组分体内活性范围为90,000IU/mg至120,000IU/mg。对于Epoetinα，药品体内活性通常在约110,000IU/mg的范围内。使用红细胞增多小鼠测定按照QA/QC程序测试药品，然后放行用于人体。191：1069-1087)，观测到变化的EpoetinΩ值。放免测定结果表明，EpoetinΩ的体外生物活性在约200,000至约240,000U/mg的范围内。已经报道，纯化的尿EPO体内活性为约45,000IU/mg至约75,000IU/mg或更高。另外，即使重组促红细胞生成素的一级蛋白序列相同，但其二级或三级结构(即蛋白质结构/折叠)也可能存在着相应的差异，而糖组成及其结合力以及各种糖蛋白的稳定性也可能存在着既定的差异。每种已知形式的重组促红细胞生成素都是具有无数复杂糖链的糖蛋白，所述糖链包括N-联至氨基残基和/或O-联至羟基残基的糖。但是，糖键的含量、数量、位置、键能、结构和组成在不同的重组促红细胞生成素之间以及在尿中的人促红细胞生成素之间有差异。EpoetinΩ糖残基的结构和组成描述于例如Nimtz等，Eur.J.Biochem.213：39，(1993)；Tsuda等，Eur.J.Biochem 188：405，(1990)；和Sytkowski等，Biochem.Biophys.Res.Comm.176：698，(1988)，其中每个文献都通过引用整体结合到本文中。

Sytkowski等报道了EpoetinΩ的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的结果，估计糖蛋白的平均分子量(大约35kDa)与由尿中的人促红细胞生成素糖蛋白观测的结果(34-39kDa；参见例如Miyake，T.等，载于J.Biol.Chem.(1977)252：5558-5564)相当。基于等电聚焦条件的其它研究显示，EpoetinΩ含有多种异构体(即通过IEF分析，宽馏分中约6-8种异构体，峰组分中约6种异构体)，这表明糖蛋白的类型和量不同，特别是唾液酸化的量不同。对于α和β这二者，根据对比IEF检测，异构体总数似乎为2-4。

Nimtz等发现EpoetinΩ的O-联寡糖含量低于1mol/mol糖蛋白。实际上，EpoetinΩ的O-联寡糖含量明显低于1mol/mol糖蛋白，而O-糖基化的程度批与批之间可能有变化，一般约0.6-0.7mol/mol糖蛋白。对EpoetinΩ物化特性的再进一步研究显示，磷酸化寡甘露糖苷化部分位于Asn-24N-糖基化位点。(参见Nimtz等，载于FEBS Letters(1995)365：203-208，也通过引用结合到本文中)。据信，EpoetinΩ在氨基酸残基Asn-24、Asn-38和Asn-83处具有3个N-糖基化位点，还相信其在氨基酸残基Ser-126处具有O-糖基化位点。而且，与尿中的人促红细胞生成素或Epoetinα或β不同，由转化入BHK宿主细胞的人基因组促红细胞生成素DNA的Apa I片段表达的EpoetinΩ基本上保留了其所有体内生物活性，甚至在经受导致即使不是全部也是大部分N-糖基化的条件后也是如此。(参见Sytkowski，A.J.等，载于Biochem.Biophys.Res.Commun.(1991)176(2)：698-704，也通过引用结合到本文中)。在这方面EpoetinΩ是独一无二的，因为报道了其它Epoetin在同样的N-糖基化时失去体内活性。因此，本文公开的方法可用具有EpoetinΩ的这些特性和其它结构和/或功能特性的任何重组促红细胞生成素实现。

图1-3图示了直观说明Epoetinα、β和Ω之间结构差异的凝胶电泳分析。图1图示了考马斯染色的等电聚焦凝胶，显示Epoetinα、β和Ω样品制备物中包含不同的异构体。这些结构差异部分缘于不同的糖取代基。Epoetinα和β具有相似的组成，都是pI为3.7、3.8、3.9和4.1的四种容易检测的异构体。这其中，Epoetinα和β的主要组成异构体都是pI为3.8和3.9的异构体。EpoetinΩ的异构体pI为3.8、3.9和4.1，但EpoetinΩ还含有少量的pI4.3、4.5和4.6的酸性异构体。另外，EpoetinΩ的主要异构体组分pI为3.9、4.1、4.3和4.5。

图2显示更敏感的银染等电聚焦凝胶，进一步揭示Epoetinβ的次要异构体pI为4.2和4.6。图3显示一幅银染SDS聚丙烯酰胺凝胶，图示了一个对Epoetinα、β和Ω样品制备物不同分子量的一个代表评价。在该分析中，估计EpoetinΩ异构体收集物的平均分子量为39kD，与该制品是否稀释无关，例如治疗应用配制(泳道4和5)或由原液浓缩物配制(泳道8、11和12)。相反，对于Epoetinα和β，估测收集的异构体的分子量为41kD(稀释制品，泳道6和7)或者42kD(浓缩制品，泳道9和10)。这些估测基于一个分析，但其它分析对分子量或异构体显示出其它的评价。评价方法影响分析，但任何精密的分析都显示出EpoetinΩ和Epoetinα或β之间的分子量差异。尽管希望不受理论的束缚，但相信对于稀释和浓缩形式的Epoetinα和β的分子量差异的一个解释是这些促红细胞生成素比EpoetinΩ更易蛋白水解或糖水解。

抗原反应

除了易于蛋白水解或水解之外，促红细胞生成素之类的重组药物的抗原性可影响其有效性、剂量反应性和/或随时间变化的生物利用度。已经报道，某些对Epoetinα或β治疗无反应的血液透析贫血患者存在中和IgG抗-EPO抗体。参见例如New Englang J.Med.，1996，335：523；和Pharmacol.Res.41：313，2000，这些文献通过引用结合到本文中。相反，EpoetinΩ似乎抗原性较低，因为至少3个临床实验(本文称为欧洲人、巴西人和阿根廷人实验，下文将更详细描述)显示尽管对所有患者都筛选过中和抗体，但未发现一例。尽管还是希望不受理论的束缚，但相信EpoetinΩ的糖基化模式可能产生更类似于天然存在的人促红细胞生成素的分子或结构上与人血清中存在的内源性EPO不同但仅降低了抗原性的分子。另外，三级蛋白结构差异有可能引起抗原性差异。无论如何，抗原性证据都表明，与其它rHu EPO相比，EpoetinΩ不大可能被人免疫监视系统识别。最近公开的研究报道了Epoetinα使用者具有抗rHu EPO抗体，出现在约66％的治疗患者中。相反，经过几个研究，EpoetinΩ治疗患者中显示存在抗rHu EPO抗体的人少于约1％。尽管还是希望不受理论的束缚，但Epoetinα的抗原性较高可能至少是报道的剂量增加(蠕升的剂量需要)和/或经受长期Epoetinα治疗患者中可利用的rHu EPO曲线下面积(AUC)检测较小的部分原因。意大利最近公开的报告指出，超过60％的Epoetinα或β治疗患者出现重组EPO抗体。(Castelli G.，等，检测重组人促红细胞生成素治疗的血液透析患者中的抗促红细胞生成素抗体，Pharmacol Res.2000年3月，41(3)：313-8，通过引用结合到本文中)。

此外要指出的是，在培养细胞(BHK和COS)中由Apa 1片段表达EPO每升培养基可生产数百万单位，表明翻译后糖基化之前的翻译速率非常快。相反，Epoetinα和β表达系统的生产速率通常在1400IU/升培养液的范围内。对于EpoetinΩ，相信使用Apa 1基因组片段生产的mRNA在细胞中更有效翻译，这可能影响糖基化前蛋白的三维结构，产生与其他rHu EPO或尿EPO不同的蛋白，尽管它们具有相同的氨基酸序列。现在已确认，各种细胞因子受体对能够激活所述受体的信号转导因子/细胞因子的较高级蛋白结构高度敏感。因此，EpoetinΩ的临床或药物作用差异可能不仅仅与糖结构差异有关，而且可能与其它结构因子(如蛋白质的二级或三级结构)有关。

一般副作用

不同Epoetin的结构差异产生不同的治疗特性和引起不同的副作用风险和大小。如上所述，本文提供使用EpoetinΩ治疗或预防贫血病而不明显增加副作用(尤其是血压增加或高血压)风险的方法。这些方法对治疗或预防预先存在高血压的患者和/或治疗相关病症(例如癌症、心脏病、自身免疫疾病、肝功能障碍、肝硬化、肝炎或肾功能障碍)患者有效，而不明显产生或加剧副作用。其它副作用可包括由治疗引起的血栓形成、血小板增加、恶心或注射部位疼痛。

图4表明，最常报道的EpoetinΩ治疗患者的副作用发生百分率显著低于Epoetinα治疗患者。对本发明特别重要的是发生高血压。血压增加加剧了高血压，这是与所有促红细胞生成素治疗相关的一种风险。疲劳经常与贫血相关或与肝功能障碍或癌症之类的病症相关，或者与这些疾病的主要治疗有关。恶心是某些主要治疗(如化疗和放疗)的常见症状。

高血压和血压

高血压可表现为预先存在病症和/或新确认的高血压的恶化，是Epoetinα治疗的贫血性血液透析患者最常见的副作用，分别有25-35％和40-60的患者发生。通常预计Epoetinα治疗的大部分案例血压都稳定增加20点。一般来说，用任何促红细胞生成素治疗都倾向于产生某些促高血压作用。按照当前技术，Epoetinα和β刺激内皮素1分泌，内皮素1是一种最重要的血管内皮细胞内源性血管收缩剂，它抑制血管内皮产生和释放NO，NO是一种重要的血管舒张介导物。Epoetinα/β影响高血压蛋白原酶-血管紧缩素-醛固酮系统，该系统是一种通过血管内容积(醛固酮)和血管紧张度(血管紧缩素II)调节血压的激素系统。该系统还增加血管的交感紧张和反应性。该系统改善血红蛋白水平，导致以血红蛋白降低的局部适应机制存在的外周组织血管舒张逆转。所有这些作用在肾功能减弱或已经比“正常”血压高的高血压患者中都更明显，更频繁，或者二者都有。相反，根据本文的公开内容(与给予途径无关)，如下文更详细描述的临床实验所示，用EpoetinΩ治疗的患者仅有12.7％出现高血压。而且，似乎用EpoetinΩ出现的高血压或血压增加与安慰剂(基本未发生)基本相似，提示没有预测的起因于EpoetinΩ的病因性增加。

因此，本文提供的方法包括用EpoetinΩ治疗，其中出现高血压的风险小于约15％。根据所治疗病症的严重性以及治疗剂量和持续时间，所述风险低于约10％或低于约5％。在另一个实施方案中，EpoetinΩ治疗增加的舒张压整个疗程小于约5-10mm Hg，通常小于约7mm Hg。在另一个实施方案中，预计EpoetinΩ治疗患者群舒张压平均增加低于约5mm Hg。另一方面，每增加1单位血红蛋白计数(g/dL)，舒张或收缩压增加小于1.0mmHg，更通常小于0.8mmHg。在相似方面，每增加1单位血红蛋白计数，舒张压增加小于0.5mmHg。如下文更详细的描述，通过给予治疗剂量的EpoetinΩ提供这些优势，给予剂量约5-150IU/kg，或者更通常25-75IU/kg，一周给予1-3次。

一个实验对比了EpoetinΩ和Epoetinα对血压(BP)超过基线值增加的作用，实验结果显示Epoetinα患者的血压增加更显著。收缩压比基线增加的平均值持续高于EpoetinΩ患者。另外，尽管存在波动，实验过程中Epoetinα患者收缩压比基线增加的平均值线性升高，但EpoetinΩ患者没有。图5显示，Epoetinα患者的平均增加相对于基线/时间曲线下的面积是EpoetinΩ患者的2倍。在舒张压平均增加方面也记录到相似的差异，但没那么显著。

图6A和B显示，当与同时发生且明显更显著的EpoetinΩ对血红蛋白水平的作用一起考虑时，该特征变得更重要。更具体地说，就血压不利增加/血红蛋白有利增加的比率来说，EpoetinΩ明显比Epoetinα更令人满意。在实验的前4周(固定剂量)，Epoetinα患者的平均收缩压增加/平均血红蛋白增加比率为2.5-6.5，平均舒张压增加/平均血红蛋白增加比率为1-2.75。这表明，对于每单位血红蛋白增加/基线，Epoetinα平均诱导血压增加1-6.5单位(mm Hg)。对于每单位血红蛋白增加，平均来说EpoetinΩ治疗患者的收缩压显示0.2-0.8mmHg增加，而舒张压显示低于0.5mm Hg的增加。在实验的这前几周，Epoetinα患者的该比率是EpoetinΩ患者该比率的4-12倍。因此，相对于对血红蛋白的作用，EpoetinΩ对血压的影响明显比Epoetinα低。

Epoetinα和EpoetinΩ对收缩压和舒张压的作用相对于血红蛋白的差异在实验的前8周血红蛋白增加最明显的阶段最显著。以下事实也阐释了两种药物之间的大体差异：比率/时间曲线下的面积Epoetinα患者是EpoetinΩ患者的4.5倍和2.3倍(分别对收缩压和舒张压来说)。而且，如图6C所示，在长期小心监视和EpoetinΩ剂量调节下，舒张压和收缩压实际上可随时间表现出轻微但线性下降。图6D进一步显示尽管在整个疗程中平均血红蛋白增加，但在同一阶段平均动脉血压下降，与此同时获得疗效需要的EpoetinΩ平均剂量也下降。

因为据报道Epoetinα或β治疗患者高血压的发生率至少是EpoetinΩ患者观察到的2倍高，所以肯定EpoetinΩ患者发生高血压的风险低于Epoetinα治疗患者。前述实验数据确证，根据整个疗程血压增加/基线的绝对值，Epoetinα对血压的作用比EpoetinΩ的作用更明显。而且，对于每g/dL血红蛋白增加来说，Epoetinα产生的血压增加(mm Hg)高达EpoetinΩ的12倍。因此，尽管任一单个患者血压升高风险的确切增加不确定，但显然EpoetinΩ的高血压风险和/或血压增加程度小于Epoetinα。

消除或降低高血压或血压增加风险对所有患者都很重要，但尤其对预期不能获得任何Epoetinα或β反应的患者更重要。例如，考虑用Epoetinα或β治疗的化疗/放疗患者在面对高剂量(伴随高成本)时呈现给保健专家的是几乎没有或没有疗效的可能性，而且可以预计在发现任何反应(即使是任何程度的即将出现)前至少要等待4周(有时6周以上)。这增加了副作用风险，几乎不能预测RBC、血细胞比容或血红蛋白的任何增加。另外，在可产生所述疗效的情况下，平均预期比基准水平增加约10％，例如血红蛋白计数由约8.0g/dL血红蛋白增加至约8.8g/dL血红蛋白，明显低于需要的目标值12g/dL或以上。

高血压或血压增加风险增加是促红细胞生成素治疗心脏病(例如慢性心脏病)患者的显著副作用。当患者遭遇血管问题(例如动脉硬化)时高血压的发生也确实促使严重副作用(例如中风、CVA、心肌梗塞或死亡)的风险增加。由于其它与凝固/抗凝过程有关的风险因素(例如血小板计数、血小板凝集、凝血酶原时间、凝血酶时间、血纤蛋白/血纤蛋白原水平、血纤蛋白原降解水平、抗凝血酶3水平等)，患者甚至进一步并发血栓形成的风险增加。这些因素共同起作用，形成调节血液凝固和血管阻塞/受限现象的复杂系统。促红细胞生成素具有刺激红细胞形成的重要治疗作用，这种作用促使血液粘度增加，并因此可导致凝结机会增加，因为红细胞往往占据血流中央部分，并因此趋向于将血小板“推”到旁边，因此潜在地导致在“湍流”中接触内皮细胞的可能性较高，由此触发血小板凝集和血管内血凝固。

例如按照EPOGEN(载于Physicians Desk Reference，53版(1999))讨论的用Epoetinα的在先技术治疗显示，用足以获得42％的较高血细胞比容的Epoetinα剂量治疗患者观测到的死亡率高于足以获得30％的较低血细胞比容的Epoetinα剂量。另外，心肌梗塞、中风、血管发生(access)栓塞和其他血栓形成事件的发生率也增加。在相关研究中，进行冠状动脉旁路手术并用Epoetinα治疗的患者的死亡发生率为每126个患者7人死亡，接受安慰剂的56名患者没有死亡。7例死亡中有4例发生在用Epoetinα治疗后，4例死亡中的每一例都与血栓形成事件相关。

另外，对使用Epoetinα以使其血细胞比容计数达到42％或以上的血管损伤患者(临床上明显的心脏病患者，即慢性心力衰竭或缺血性心脏病患者)进行了研究。仅大约6周后研究者就终止了该实验，因为结果显示目标血细胞比容为42％的患者有35％死亡，而目标血细胞比容为30％的患者有29％死亡。因此，在1265名患者中，42％血细胞比容目标组的634名患者有221例死亡，而30％血细胞比容目标组的631名患者有185例死亡。另外，据报道高目标组和低目标组血管通路(scribner透析短路性通路)血管栓塞分别为39％和29％。而且，其它血栓形成事件发生的个案分别为22％和18％。最后，在没有致命性心脏病发作的患者中，分别有3.1％和2.3％患非致命性心肌梗塞(心脏病发作)。Epoetinα的这些结果概述于下表：

             Epoetinα治疗心脏病患者的副作用^*

副作用事件            42％血细胞比容组        30％血细胞比容组

死亡                  35％                    29％

非致命性心肌梗塞：    3.1％                   2.3％

发生血栓形成          39％                    29％

其它血栓形成          22％                    18％

^*参见Amgen web站点 www.amgen.com，详尽医师处方信息和1996年6月25日发布的Source Breaking新闻。

尽管还没有用EpoetinΩ对心脏病患者进行达到特定血细胞比容计数的类似临床实验，但迄今有数以千计的患者进行了几种临床研究，其中一些患者血管受损或患心脏病，他们获得了高血细胞比容读数，没有报道任何一例心脏病发作或血栓形成事件。在相关方面，EpoetinΩ一致的报道是血小板计数没有显著增加。实际上，有无数个案(包括以后实施例2和4描述的患者)患慢性心力衰竭并良好耐受EpoetinΩ，没有血栓形成或心脏病发作或死亡的副作用事件。

对接受促红细胞生成素治疗的血液透析(HD)患者进行了研究，由该研究可部分地理解血栓形成事件与促红细胞生成素治疗之间的关系。因为使用了动静脉吻合流术，这些患者一般接受肝素或其它药物，甚至包括阿司匹林，以便保持长凝血酶原时间，预防动静脉短路血栓和在透析仪中凝血。即使血栓形成的趋势增加可能引起动静脉短路血栓风险相应增加，动静脉短路血栓和透析仪凝血(或在其它HD设备中凝血)在HD患者中也并不少见，这主要是由于监测差和肝素剂量调节不精确。

动静脉短路血栓发生的这些一般特征似乎也适用于EpoetinΩ。在一个多中心性实验(379名静脉注射治疗患者和450名皮下注射治疗患者)中，10.3％的静脉注射治疗患者和7.8％的皮下注射治疗患者发生动静脉短路血栓，与其它epoetin的报道相当。在两个其它实验中没有报道血栓形成或透析器凝血。与Epoetinα的对比实验报道了一个透析器凝血的案例。如果将这些实验的所有皮下注射治疗患者合并在一起，那么这些患者有36/530或6.8％发生动静脉短路和/或透析器凝血(在11-16-26周内)。

血栓形成事件在Epoetinα或β治疗的贫血HD患者中是第二最频繁的副作用，据报道在Epoetinα或β治疗的患者中有7％-18％发生血栓形成。据报道，一定百分比的患者实验室测试显著改善，表明凝血趋势增加(血小板数和/或粘附、凝血酶原时间等)。经对重组epoetin(α和β)治疗的动物模型、健康志愿者、HD患者或其它患肾贫血的患者以及“非肾”患者进行的体外研究鉴定，用这些促红细胞生成素治疗可能对凝血参数产生各种各样的作用，例如血小板形成或凝集、出血时间、抗凝血酶水平、血纤蛋白原水平等，尽管每种作用的发生都是不一致的和罕见的。

但是，图7显示，EpoetinΩ治疗患者的血小板计数水平未表现出任何明显的增加。血小板计数在整个代表性治疗方案中保持在正常范围。尽管希望不受理论的束缚，但相信血小板计数没有产生增加可能使EpoetinΩ治疗患者出现血栓形成事件的风险比Epoetinα或β全面降低。这允许EpoetinΩ用于治疗与心脏病相关的贫血病，而没有明显增加不利的血栓形成事件的风险。这是EpoetinΩ用于有发生与短路性通路无关的血栓形成风险的患者而不引起不利的血栓形成事件的重要标志。在这样的案例中，职业医师认为重要之处是获得适用的EPO，其不增加血小板，并因此未使EPO目标患者的血栓形成或血管受限风险(而不是红细胞过多以及因此血液粘度增加的天然和可预见风险)产生有意义的增加。

治疗癌症患者

用EpoetinΩ治疗恶性病患者有助于各种原因疾病的总体预后。首先，可能有与恶性病有关的疲劳、恶心、机体疼痛和贫血。这种联系或者是无关或继发性疾病、癌症引起的疾病，或者是由癌症主要治疗(例如化疗或放疗)引起的疾病。治疗和改善癌症相关贫血一般可加强机体的天然防御机制，加强机体以“正常”水平对抗疾病和给组织供氧的能力，增加允许扩展和完全应用指明的主要治疗和/或较高剂量的主要治疗(放疗/化疗和相关药物)耐受能力，并降低治疗副作用的风险和发生。其次，用EpoetinΩ治疗能够减轻疲劳、减轻/消除恶心和/或减轻疼痛。第三，前述疗效又提供给患者更“正常”的生活，并改善心情和健康感(即治疗与癌症/治疗相关的沮丧、绝望/没有希望或心情不佳)，这是一个积极的前景，又有助于预测治疗结果。

另外，如果癌症复发和建议开始另一个疗程，良好耐受的治疗方案以及较少经受治疗痛苦将对患者决定接受其它的化疗或放疗治疗方案或决定接受更多轮治疗起积极作用。进展顺利或癌症治疗“痛苦”较少的患者更倾向于接受再治疗或替代治疗，而不是在癌症复发时宁可拒绝治疗也不愿再接受原治疗。有人指出以下数据为没有EpoetinΩ的癌症治疗：76％疲劳、54％恶心、23％沮丧、20％疼痛。因此，由于EpoetinΩ对癌症贫血有效，并独立于血红蛋白增加而有效减轻疼痛和恶心，所以EpoetinΩ为癌症添加了有价值和更需要的治疗。

恶性病相关贫血非常类似于慢性病贫血。有时叫做恶性病非复杂性低增生贫血，通常为慢性、中等、正常慢性、mormocytic贫血，具有正常的MCV、MCH和MCHC水平，血红蛋白水平为8-10g/dl，网织红细胞过多，血清铁和TSI降低，铁蛋白正常或升高。在骨髓中发现正常前体和正常或增加的铁蓄积。这可能是多种因素支配的，但主要是低增生性贫血。如果肾脏没有受身体影响，促红细胞生成素就缺乏，促红细胞生成素水平比血红蛋白低，即血红蛋白与促红细胞生成素没有线性反比关系。癌症患者需要更显著的低氧，以诱导内源促红细胞生成素产生。因此强烈需要替代和补充内源促红细胞生成素。

尽管希望不受理论的束缚，但相信对恶性病相关性慢性贫血的部分解释包括产生或没有产生各种细胞因子，以及在癌症主要治疗中使用细胞毒性剂，例如顺铂或其它化疗剂。另外，铁代谢可能改变，即不能以最有效的方式利用铁蓄积。如果骨髓没有受到癌症侵袭，而是受到各种细胞因子/细胞毒性剂/辐射的作用，则骨髓对促红细胞生成素的反应性经常被钝化。即使在没有引起RBC损耗的溶血或其它方式的情况下，由于细胞因子激活巨噬细胞的作用，RBC的寿命也略短。在任何时候，几种因素都可以使慢性恶性贫血恶化。这些因素包括(a)感染和/或其它炎性疾病；(b)由某些肿瘤和某些细胞抑制剂/细胞毒性剂(例如化疗通常使用的氨甲蝶呤)诱发的自身免疫溶血性贫血；(c)可由某些肿瘤诱导的微血管溶血；(d)出血和(e)实体瘤非常频繁发生的脾机能亢进，以及(f)细胞抑制剂/辐射或肿瘤组织的骨髓抑制。

如图4所示，EpoetinΩ产生的副作用事件一般显著低于Epoetinα，即使在约150IU/kg/周的剂量范围也是如此。降低剂量和减轻副作用的有效性还根据需要提供了更频密的剂量，例如达一周7次或更多。用Epoetinα或β治疗癌症相关贫血通常需要约450-3500或更高IU/Kg/周的剂量。相反，使用EpoetinΩ治疗在按照国际单位显著降低的剂量下也有效。用EpoetinΩ治疗可在用癌症疗法(例如化疗或放疗)主要治疗之前、之后或过程中开始。图22和23显示的数据得自在已经达到6.5的贫血血红蛋白计数之后开始EpoetinΩ治疗的患者，他们的血红蛋白计数在8周内增加到正常血红蛋白水平(12或以上)。医生可以治疗严重贫血患者，并预计在一周内对EpoetinΩ起反应，而不是在期待Epoetinα的任何反应之前等待4-6周。在最好的情况下，EpoetinΩ治疗是在癌症治疗开始之前或同时(3周内)开始，效果良好时可在癌症治疗过程中和之后继续。下文描述EpoetinΩ治疗的典型剂量范围。

剂量

按照本发明使用EpoetinΩ的每种治疗使用的剂量都比使用Epoetinα或β需要的剂量低。较低剂量在增加血红蛋白的起始剂量对个体最优的初始逐渐增加剂量阶段(匀变)和在调节剂量以延长和持续治疗的维持阶段都是有效的。在广义实施方案中，所述治疗使用以约5-150IU/Kg每周1-3次的剂量或以约25-150IU/Kg/周的剂量给予的EpoetinΩ。在一个实例中，EpoetinΩ以约10-100IU/Kg/周或约10-75IU/Kg每周1-2次的剂量给予。在另一个实例中，EpoetinΩ以约25-60IU/Kg或25-35IU/Kg每周2次的剂量给予。在再另一个实例中，EpoetinΩ以约50-150IU/Kg或约75-100IU/Kg每周1次的剂量给予。

这些EpoetinΩ剂量都低于使用Epoetinα和β的典型治疗，无论是剂量还是频率。更具体地说，Epoetinα和β通常1周给予3-7次，剂量由150-450IU/Kg/剂开始，或由450-3,000IU/Kg/周(增加剂量到多达6剂，或几乎每天给予)开始。相反，本文提供较低剂量的EpoetinΩ和1-3次/周的较低频率，每周给予1次EpoetinΩ成功的长期探寻证实有效。典型的治疗疗程包括逐渐增加剂量阶段，在该阶段以约50-150IU/Kg/周的初始剂量给予EpoetinΩ，并在逐渐增加剂量阶段调节EpoetinΩ剂量，以达到目标疗效。在此情况下，患者血红蛋白水平达到15或达19以上而没有副作用并不罕见。逐渐增加剂量阶段的一个典型目标疗效是获得约10-12或更高g/dl血红蛋白的血红蛋白计数。典型的治疗还接着有维持阶段，在该阶段增加以稳定目标血红蛋白值。在一个典型实例中，维持阶段EpoetinΩ以约20-60IU/Kg/周的剂量给予。

使用Epoetinα/β和EpoetinΩ治疗肾透析患者贫血需要的剂量的实例对比如下：

                      Ω                     α/β

起始剂量/Kg/周        75-120      150-＞900

维持剂量/Kg/周        25-75       100-＞900

为了对比，图26显示了Epoetinα治疗的肾透析患者群需要的维持剂量的分布实例。

在治疗癌症相关贫血(即与化疗或放疗相关的贫血)时，在防止需要输血的尝试中用rHu EPO治疗患者，需要剂量的对比如下：

                      Ω                     α/β

起始剂量/Kg/周        75-150      500-3,500

维持剂量/Kg/周        20-150      500-＞3500

在该对比中，应当指出的是，Epoetinα治疗在不到40％的患者中可将血红蛋白有效提升至足够避免输血的水平，而所有接受EpoetinΩ的患者都获得了提升至足以避免输血水平的血红蛋白水平。

图22直观显示了治疗化疗患者贫血时需要的EpoetinΩ和α的高低剂量对比，所述化疗患者在8周时间内用EpoetinΩ治疗，并与Epoetinα治疗化疗患者的相似研究对比。根据平均患者体重70kg调节所示的给药剂量。以2剂/周的频率给予Epoetin。EpoetinΩ治疗患者需要的总周剂量为约4000-12,000IU，相比之下Epoetinα治疗患者需要的总周剂量为40,000-100,000IU或更高。在该实施例中值得注意的是，EpoetinΩ达到或维持了目标血红蛋白，而在该实施例中α/β在实际的任何剂量都有60％的无反应者。当按照70kg平均患者体重调节时，每次给予的EpoetinΩ剂量为约28-86IU/kg，相比之下每次给予的Epoetinα剂量为约285-571IU/kg。因此，在治疗化疗相关贫血时，EpoetinΩ在剂量方案中的效力以单位对单位为基准是Epoetinα的约6.6-10倍。另外，图23显示EpoetinΩ在提升血红蛋白水平方面明显比Epoetinα更有效，因为EpoetinΩ对贫血有效。在8周结束后，EpoetinΩ治疗患者血红蛋白计数由约6.5g/dl的平均起始值增加到12g/dl的目标值。相反，Epoetinα治疗患者在相同阶段仅适中地平均由9.0增加到9.5g/dl。因为促红细胞生成素之类的生物药品通常以单位为基准销售，所以EpoetinΩ的较高功效实际上转化为促红细胞生成素治疗的实质性成本节约。例如，在本申请进行时，以每1,000IU 10美元计算，每周100,000IU Epoetinα相当于1,000美元，相当于4,000IU-12,000 EpoetinΩ，如果定价竞争，每周为40-120美元。在8周的治疗中，每周8,000IU的EpoetinΩ约为80美元/周×8周或640美元；相当于8周内使用100,000或更高IU(例如每周25瓶4,000)或1,000IU/周或8,000美元的Epoetinα。

给药剂量可以按照要治疗的病症和患者的反应调整。在治疗疲劳或疼痛时，给予较低的初始剂量5-50IU/Kg/周或更通常的20-60IU/kg，初始逐渐增加剂量阶段的1-4周每周给予1-2次。在逐渐增加剂量阶段，评价患者的疼痛或疲劳减轻情况。如果患者主诉症状持续，那么向上调节剂量，增量通常增加1/2初始剂量。或者，一周给予两次初始剂量。相反，如果患者报告疼痛或疲劳减轻，则可向下调整剂量约10IU/kg，以获得对维持阶段有效而不必增加副作用风险的最小剂量。

为治疗普通透析贫血，Epoetinα的平均增加剂量通常在约150-450IU/kg/周的范围内，每周分为3剂，每剂平均约200IU/kg或更高。同样，Epoetinα的典型维持剂量为225IU/Kg/周，分为2剂或3剂，25％的患者每周需要600IU/Kg以上。相比之下，本发明EpoetinΩ的平均增加剂量约为32IU/kg，每周2-3次，平均维持剂量为23IU/kg，每周2-3次，或者为40-100IU/kg，每周分为1、2或3次；而平均EpoetinΩ维持透析剂量为20-70IU/kg/周，每周分为1、2或3剂。这由例如图8图示，图8显示了在透析患者维持阶段治疗贫血所需的Epoetinα和EpoetinΩ的高、低和平均剂量对比。在达到目标血红蛋白值之后应用的典型EpoetinΩ维持剂量约为逐渐增加剂量阶段使用量的约1/2-1/3。剂量可以 降低至比Epoetinα或β更少的剂量 频 率，这部分是由于EpoetinΩ的生物利用度更高，效力增加。在维持阶段EpoetinΩ剂量很少需要增加。剂量应当小量调节，通常约为5-25IU/kg/周。对于60-70％的血液透析患者来说，通常的周EpoetinΩ剂量约为40-60IU/Kg/周。大约45％的患者可以保持目标血红蛋白水平，而在1或2甚至3周内根本不需要任何药物。因此， 每周注射 一次约50-150或40-100IU/kg的EpoetinΩ还可用于大量患者。因为透析或慢性病患者厌恶注射/打针是一种正常情况，所以实际给予频率较低对获得再低一些的总周剂量是一个很大优势，尤其是在必须皮下途径给药时(因为打针和皮肤上的神经而更疼痛)。这与任何已知的Epoetinα或β治疗明显不同，在Epoetinα或β治疗中每周1次的剂量频率无效，以至于甚至在高达200IU/kg的剂量也不足以将血红蛋白水平维持在目标范围。使用低得多剂量的EpoetinΩ和较少的注射/给予频率具有几种伴生优势，与Epoetinα或β治疗患者表现出的情况相比，这些优势包括治疗总成本较低，EPO给药相关的副作用风险降低，以及剂量需求“蠕升”的可能性很小或没有。

本文提供的EpoetinΩ治疗的另一个重要特征是与使用其它Epoetin相比，获得反应时没有滞后时间，实际上意味着立即反应或没有潜伏期。例如，图15C、16和17图示了给予EpoetinΩ第1周后血红蛋白水平增加。这与Epoetinα形成对比，Epoetinα通常不显示血红蛋白增加，直至治疗透析贫血的至少第二周之后才增加，对于Epoetinα/β尝试治疗癌症贫血的情况，到第4周或更长时间才增加。因此，可以确认，EpoetinΩ的增加和维持剂量比Epoetinα或β更快速和更确定。

EpoetinΩ需要的频率剂量更低和更少与其它Epoetin相比还有助于降低副作用的发生或风险或程度，所述副作用例如血压增加、高血压、血小板刺激/增加、机体疼痛、注射部位疼痛或血栓形成。另外，较低的剂量和较高的生物利用度与基本没有任何副作用风险或副作用风险降低结合在一起，允许给予EpoetinΩ治疗中等症状病症，例如疲劳或机体疼痛。可以治疗这些病症，无论它们是否与贫血有关，或者无论它们是否与充血性心力衰竭、癌症、自身免疫疾病或肝功能障碍或其它慢性疾病相关。

治疗疾病相关贫血的临床实验

传统上，晚期肾病贫血是使用重组人促红细胞生成素的主要适应症。这主要是因为内源EPO由肾脏产生。在肾病情况(前ESRD或ESRD)下，肾脏减慢或停止其EPO生产，使激素(促红细胞生成素)替换治疗成为处理贫血需要的一种治疗方法。已经用几个包括成年血液透析(HD)患者的实验研究了EpoetinΩ在该适应症中的的效力和安全性。尽管本文描述的结果得自肾病相关贫血，但低剂量、快速反应和低频率副作用表明，EpoetinΩ可用于治疗与其它病症相关的贫血，尤其是可能由于高剂量、较慢的反应和更严重的副作用而禁忌用Epoetinα和β治疗的病症。

对比皮下注射EpoetinΩ和Epoetinα的单剂、单盲、交叉实验测试了18名定期透析的贫血患者(13男/5女，33-75岁，51.8±10.8岁)，结果显示EpoetinΩ的相对生物利用度高于Epoetinα。患者随机分配接受皮下注射50IU/kg Epoetinα(n＝9)或EpoetinΩ(n＝9)。7天的清除期之后，Epoetinα患者转换为相同剂量的EpoetinΩ，反之亦然。在测定基线促红细胞生成素值之后立即给予每种药物。用商售EPO-ELISA试剂盒(Boehringer Mannheim，目录号1693417，单克隆抗EPO抗体，按照WHO IRP标准校准的“CHO Epoetin”)检测血浆促红细胞生成素。

注射EpoetinΩ后的平均C_max和平均浓度曲线下面积(AUC_0-120)明显比注射Epoetinα后高。如表I所示以及图9图示，促红细胞生成素的平均血浆水平比Epoetinα高，并且比Epoetinα的维持时间长。更具体地说，EpoetinΩ注射后t_1/2β较长。对于18名患者中的16名的各个患者数据来说，EpoetinΩ注射后的C_max和AUC都比Epoetinα注射后高。此外，在EpoetinΩ治疗后18名患者有12名t_1/2β延长。

表I

单剂皮下注射(50IU/kg)后EpoetinΩ和Epoetinα的药代动力学数据。

以对基线值校正的血浆浓度计算AUC和清除半衰期。数值为X±SID。

              t_max(h)    C_max(IU/L)   AUC_1-120(IU×h/L)  t_1/2β(h)

EpoetinΩ           25.1±9.8   57.4±25.2    1933.9±943.6      23.4±9.6

Epoetinα            23.±7.6    35.1±15.1    981±614.6         17.8±5.3

EpoetinΩ/    --          1.72±0.72    2.43±1.81         1.41±0.68

Epoetinα

上述数据表明，皮下注射后EpoetinΩ的相对生物利用度更高(基于AUC比较)。C_max数据和血浆浓度-时间曲线以及对两种药物清除期的观察具有非常引人注目的差异，提示这种差异是由于两种类型促红细胞生成素的吸收不同。基于此以及可获得的数据，估计EpoetinΩ的半吸收时间(t_1/2α)(拟合一级动力学评估)约为5小时，平均Epoetinαt_1/2α大约长60％。这些数据显示，对于单剂等量(IU/kg)的EpoetinΩ和Epoetinα，使用EpoetinΩ产生的促红细胞生成素血浆水平约为1.72倍高。而且，EpoetinΩ的血浆清除更慢，其例证是平均1.41倍的末期清除半衰期。这归因于EpoetinΩ生物利用度明显更高，由EpoetinΩ的AUC值是Epoetinα的2.43倍可见。

图10显示，当皮下注射前4周固定的2×50IU/kg/周初始剂量后将两种促红细胞生成素剂量调节至保持12周维持阶段的治疗反应时，EpoetinΩ(图10A)的平均血浆浓度保持得比Epoetinα(图10B)高，导致维持阶段需要的EpoetinΩ剂量较低。更具体地说，图10显示，尽管促红细胞生成素血浆浓度升高，但EpoetinΩ(平均)剂量在实验过程中持续降低。相反，在第一阶段固定给药后，Epoetinα剂量需要增加，而促红细胞生成素血浆浓度几乎没有增加。原因是EpoetinΩ剂量始终低于Epoetinα剂量，而EpoetinΩ患者的血浆促红细胞生成素浓度始终较高。

治疗前4周对EpoetinΩ和Epoetinα剂量对血浆浓度作用的差异观察得最清楚。尽管应用相同的剂量(即2×50IU/kg)，但Epoetinα患者的促红细胞生成素血浆浓度没有升高，而EpoetinΩ患者的促红细胞生成素血浆浓度显著升高几乎2倍。尽管EpoetinΩ剂量减少但血浆浓度持续增加，这一事实表明在治疗过程中EpoetinΩ的累积比Epoetinα好。通常优选皮下注射给药，而不是静脉注射给药，因为皮下给予通常延长了促红细胞生成素保留在基线以上的时间，但是，相信静脉注射也可以观察到EpoetinΩ和Epoetinα之间在累积和利用度方面的差异。

前述数据(和本文未提供的其它数据)显示，EpoetinΩ的吸收比Epoetinα好，因为获得的C_max明显较高(表I)，吸收半衰期似乎明显较短。该数据与Epoetin β研究数据(例如公开于Drugs，1995；49：232，通过引用结合到本文中)的对比显示，EpoetinΩ半衰期也比报道的Epoetinβ半衰期低1-2倍。

EpoetinΩ的清除时间也与其它Epoetin明显不同，例如EpoetinΩ的清除时间比Epoetinα长。更具体地说，观察到EpoetinΩ的清除速率大约为0.26±0.12mU/分钟/mL，相比之下，Storring等报道的Epoetinα清除速率为0.68±0.31mU/分钟/mL。清除时间同吸收一样似乎也是剂量依赖性的。

在最初的实验中，静脉注射EpoetinΩ。但是，如上所述，现在优选通过皮下途径给予促红细胞生成素。然而，如表II所总结，开放、非对照静脉实验评价了超过100名患者，清晰显示EpoetinΩ有效刺激末期肾病相关贫血患者的红细胞生成。给予非常低剂量EpoetinΩ对血红蛋白和HCT都有显著作用，它们都处于低基线水平，即使铁代谢参数可能不理想。两个实验(巴西和阿根廷实验)的个体数据揭示，没有参与患者接受的剂量超过230IU/kg/周。除了对血液参数的作用以外，阿根廷实验和第三组的印度实验还显示，4周EpoetinΩ治疗有效增加患者的工作绩效和耐力，以显著增加的工作能力和氧消耗为证。

图11显示，对于使用直观模拟标尺(VAS)衡量的发生在注射部位的疼痛，EpoetinΩ治疗患者显著低于Epoetinα治疗患者。在实验的1-14周，Epoetinα组的平均周VAS得分明显高于EpoetinΩ组。平均周VAS得分/时间曲线下的面积Epoetinα组比EpoetinΩ组大0.7倍，这一事实也表明了两种药物之间的差异。这些数据提示，就皮下注射后的局部疼痛而言，EpoetinΩ比Epoetinα更好耐受。

第四个开放非对照欧洲实验包括1000名以上的HD患者。总共对829名患者评价了26周。在这些患者中，379名通过静脉注射给予EpoetinΩ，450名通过皮下注射给予EpoetinΩ。

在使用3×40IU/kg/周初始剂量(或静脉或皮下)的中试研究中，血红蛋白和HCT都快速升高，导致大部分患者早在治疗2周后剂量就减少。因此，对于实验的主要部分，使用静脉或皮下3×30IU/kg/周的初始剂量。包括的患者血红蛋白≤9.0g/dL，HCT≤7％，并具有rHu EPO有效性/安全性实验的所有纳入标准/排除标准。

                              表II.静脉注射EpoetinΩ对改善HD患者肾贫血的功效。6个开放非对照实验结果的总结。

实验(对照)	疗程	患者数目和给药(IU/kg)	铁	基线Hb(g/dL)和/或HCT(％)	实验过程中的剂量改变	终点Hb和/或HCT	其它注意事项
								印度1)	12周	20，3×25静脉注射，8周，然后3×36	400mg/天口服+叶酸5mg/天	Hb 6.0±1.0HCT 18.3±3	-	Hb 9.9±1.4HCT 29.9±4.7	9/20达到10.0g/dL Hb，Hb和HCT持续增加
印度2)	12周	13，同上	由第2周开始静脉注射右旋糖酐铁	Hb 6.1(平均)HCT 18(平均)	-	Hb 8.0(平均)HCT 26(平均)	Hb和HCT持续升高
								印度3)	12周	15，同上	未说明	Hb 5.6±1.1HCT 16.5±3.3	-	Hb 7.9±1.4HCT 23.5±4.6	Hb和HCT持续升高
印度4)	12周	22，同上	150-300mg/天口服+200-300mg/周静脉注射	Hb 5.9±1.1HCT 18.2±3.4	-	Hb 8.4±1.9HCT 26±6	3/22达到10.0g/dL Hb，Hb和HCT持续升高
								巴西	16周	15，3×50静脉注射(高剂量，HD)15，3×25静脉注射(低剂量，LD)4周后如果Hb上升≤1.0g/dL和在实验过程中按照反应单剂增加25IU。当Hb为10.0g/dL时，剂	按照铁蛋白，静脉注射或口服或没有(铁蛋白＞500mg/mL)	HD：Hb 6.4(平均)HCT 20(平均)LD：Hb 7.0(平均)HCT 22.5	HD组(IU/kg/周)1-6周：145-1557-12周：100-11012-16周：70-100	HD：Hb 10.4(平均)HCT 32.2(平均)LD：Hb 10.2(平均)HCT 32.1(平均)	两个给药组的Hb和HCT持续升高，但高剂量组更快速和更显著。HD组患者全部达到10.0g/dL Hb。时间达到目标的7.4±2.7周

		量降低1/3，静脉或皮下给予(50％)
								阿根廷	16周	9，3×25静脉注射9，3×50静脉注射按照Hb反应，以2周间隔单剂增加25IU	按照铁蛋白160mg/天口服	Hb 5.7±1.0HCT 17.0±3.2	总平均值1-3周：X＝100-115SD＝30-364-9周：X＝80-95SD＝20-4510-13周：X＝100-120SD＝50-6014-16周：X＝120-145SD＝55-60	Hb 8.9±1.1HCT 26.7±3.2	Hb和HCT持续升高，与初始剂量无关

实验的主要目标是增加和保持血红蛋白至10.0-12.0g/dL，或在实验的前12周内至少使血红蛋白的升高≥2.0g/dL，使HCT升高＞6％。给药分为两个阶段：逐渐增加剂量阶段(需要达到目标)和维持阶段(需要保持血红蛋白和HCT在目标值内，变化尽可能小)。按照血红蛋白反应和耐受性每两周进行一次剂量调整(单剂上升或下降5-20IU/kg)。根据铁的状况口服或静脉注射补充铁，以便保持铁蛋白＞150μg/L和转铁蛋白饱和度＞20％。该研究值得注意之处是，筛选患者是否存在EPO抗体，1000名患者中仅有2名显示存在抗体。因此，EpoetinΩ形成抗体的几率似乎小于0.2％。

图12和13显示了作为该实验结果的血红蛋白改变。HCT改变遵循相同的模式，即实验过程中的动力学和(相对)增加相同。两个实验组都观察到血红蛋白快速升高，但皮下注射组的反应一般来说更好。与已知的Epoetinα和β治疗反应相反，EpoetinΩ反应没有潜伏期。皮下注射组首周后血红蛋白明显升高，而静脉注射组治疗2周后血红蛋白明显升高。两个组在整个实验过程中平均血红蛋白值都持续增加。皮下注射组增加更大(根据斜率和达到的最大平均值)。详细地说，在实验的前4周，静脉注射组的平均血红蛋白2周内平均升高0.4g/dL(R＝0.98)，而皮下注射组的斜率表明2周内增加0.8g/dL(R＝0.98)。随后由于剂量下降平均血红蛋白缓慢增加。在前11周中，静脉注射组的平均血红蛋白每2周平均升高0.3g/dL(R＝0.97)，而皮下注射组的平均血红蛋白增加斜率表明每2周增加0.4g/dL。如图13所示，静脉注射和皮下注射的差异较小是由于皮下注射组的剂量降低较大。

两个组的“增加”剂量一般都较低。但是，皮下注射组的剂量始终比静脉注射组低。静脉注射组的最大周“增加”剂量为106±15IU/kg(第26周)，总平均周“增加”剂量为96±4IU/kg。皮下注射组的最大平均周“增加”剂量为95±2IU/kg。皮下注射组的总平均周“增加”剂量为78±3IU/kg。

就剂量调节而言，实验过程中的剂量更改趋势反映出治疗反应。在治疗的前7-10周，静脉照射组的平均周“增加”剂量持续下降，表明血红蛋白快速且明显升高(需要减少剂量)。但是，由第10周开始，静脉注射组的“增加”剂量逐步升高。这种趋势表明，某些患者反应差，需要更多的时间和更多的EpoetinΩ达到目标。在第26周仍处于“增加”方案中的患者群约为10％。相反，皮下注射组在整个实验过程中平均周“增加”剂量持续下降(第7-14周有些波动)，表明该组的反应较好，在第26周处于“增加”方案中的患者群＜5％。

周剂量的改变(图13)表明，某些患者达到了目标血红蛋白，因此静脉注射组在第2周和皮下注射组在第3周(可能是由于皮下注射组的基线血红蛋白稍低)开始了维持给药。一般来说，在实验过程中的任意给定时间，“维持”给药的皮下注射治疗患者群都比静脉注射治疗患者群大。

两个组的“维持”剂量都比初始增加剂量低。静脉注射组的平均周“维持”剂量在＜40IU/kg至大约70IU/kg之间变化，总平均“维持”剂量为70±4IU/kg/周。皮下注射组的平均“维持”周剂量为30-50IU/kg。总平均“维持”剂量为49±3IU/kg/周(图13)。因此，一般有人说EpoetinΩ的维持剂量通常为约30-70IU/kg/周，平均在约45-70IU/kg/周的范围内。相反，Epoetinα的典型维持剂量约为150-600IU/kg/周，报道的平均USA剂量约为200-250IU/kg/周。因此，可以说EpoetinΩ的“平均”剂量约为55IU/kg/周，相比之下，Epoetinα的“平均”维持剂量为225IU/kg/周。因此，在肾透析患者中维持相同的血红蛋白/血细胞比容，EpoetinΩ的效力大约是Epoetinα的400％。一般从药物上讲，这种急剧升高的效力非常意外，一类药物的效力有10-25％的差异就足以认为不同，足以产生新的化合物“差异”和“优势”。

三种其它的开放实验证实了皮下注射EpoetinΩ对HD患者贫血的功效。第一个是斯洛文尼亚实验，包括27名在11周内血红蛋白≤8.5g/dL和HCT≤27％的成年患者。第二个实验是马其顿实验，包括22名血红蛋白＜8.5g/dL和HCT＜27％的成年患者。这两个实验都评测了16周。其它的纳入/排除标准都是rHu-EPO实验的标准。根据血浆铁蛋白和转铁蛋白饱和度补充铁。在两个实验中，初始剂量为3×30IU/kg/周，皮下注射。剂量按照血红蛋白反应以2周间隔逐步调节(单剂上升或下降5-20IU/kg)。目标是达到和保持血红蛋白为10.0-12.0g/dL以及HCT为30-35％。图14和15概述了主要结果。尽管仅显示了血红蛋白变化，但HCT变化遵循相同模式。

图14显示了斯洛文尼亚实验的结果，表明在11周内平均血红蛋白值持续增加。斜率(R＝0.98)表明平均血红蛋白每2周增加0.52g/dL。在该阶段，平均剂量没有明显改变。首先有3名患者(11.1％)在第3周末达到目标。到第6周末，54％的患者达到目标。10周后，仅有3名患者仍在目标之下。这其中有2名患者血红蛋白增加相比于基线≥2.0g/dL，仅有1名患者“反应差”(该患者也不对先前的Epoetinα治疗起反应)。另4名Epoetinα“反应差者”对EpoetinΩ的反应非常好(与组内的其他人没有差异)。

图15显示了马其顿实验的结果，表明在实验的前10周平均血红蛋白也快速线性升高(R＝0.98)。斜率表明，在这段时间每2周增加1.05g/dL。在前8周剂量非常相似，然后下降。首先有3名患者(13.6％)在第3周末达到目标血红蛋白。半数患者在第7周末“处于”目标血红蛋白范围，仅有5名患者(22.7％)在治疗8周后位于目标值以下。仅有1名患者在10周后位于目标值以下。全部5名需要8周以上时间达到目标的患者TSI始终小于20％。最后一名达到目标患者(到第15周末)仅在其TSI升高至超过20％后才达到目标。

第3个实验是波兰开放实验，包括29名用EpoetinΩ治疗24周的患者。图15B图示了该实验的结果，显示平均血红蛋白快速升高，没有潜伏期(上图)。这种升高在前7周尤其快而且呈线性(中图)，在该疗程需要的EpoetinΩ平均周剂量同时下降(下图)。初始增加剂量为3×25IU/kg/周，剂量表示为总周用量。在该实验中，使用的最大平均剂量约为6900IU/周，相当于约100IU/kg/周或3×33IU/kg/周的剂量。

进行了再另一个实验，该实验是单盲随机交叉实验，以两个16周平行疗程(其间有一个8周“清除”期)对比EpoetinΩ和Epoetinα。该实验包括血红蛋白＜8.5g/dL和HCT＜27％的成年HD患者(年龄18-80岁)。其它纳入/排除标准为rHu-EPO临床实验的标准。分配患者接受EpoetinΩ或Epoetinα达16周(每组30名患者)(第1阶段)。“清除”后，EpoetinΩ患者转用Epoetinα进行另一个16周疗程(第2阶段)，反之亦然。实验的两个阶段都已完成，但本文仅讨论第1阶段。两种药物的初始剂量都设定为2×50IU/kg/周，皮下注射。治疗前4周剂量固定。此后，按照血红蛋白反应和耐受性调整剂量(单剂上升或下降25IU/kg)。为保持TSI＞30％和血清铁蛋白＞500ng/L，静脉注射补充铁。目的是使血红蛋白水平达到和保持在10.0-12.0g/dL的范围内。

图16和17图示了EpoetinΩ相比于Epoetinα在随时间变化的血红蛋白反应/剂量方面的对比优势。两种药物都使血红蛋白增加，但正如所示，它们之间的差异明显。图16显示，EpoetinΩ患者的血红蛋白水平始终较高(除基线以外)。血红蛋白的变化更快速显著。平均血红蛋白在最初1周就升高，而Epoetinα在该阶段没有作用。在前4周(固定剂量2×50IU/kg/周)，EpoetinΩ患者的平均血红蛋白增加0.47g/dL/周(平均)，Epoetinα患者增加0.2g/dL/周。此后，Epoetinα患者的平均血红蛋白持续快速增加(在前11周平均每周增加0.32g/dL，尽管平均剂量线性下降)，Epoetinα患者的血红蛋白也增加，但较慢(前11周平均血红蛋白平均每周增加0.25g/dL)。但是，在此时间Epoetinα剂量明显较高-第5-12周Epoetinα平均周剂量是EpoetinΩ的1.2-1.8倍。

EpoetinΩ组达到显著较高的平均血红蛋白水平，达到目标水平明显较快(第7周末，Epoetinα组为第12周末)。EpoetinΩ患者在整个实验中平均血红蛋白成功保持在较低的目标界限之上。由第13周开始，平均周剂量回升至初始值，反映出对治疗不反应的少数患者的增加和另一组一样显著。但是，EpoetinΩ组的最大平均周剂量没有超出Epoetinα组的最小平均周剂量。使用的EpoetinΩ的总累积剂量约比Epoetinα组低1/3，即用Epoetinα治疗2名患者的总IU量等于EpoetinΩ治疗3名患者需要的IU量。

当以血红蛋白对基线的增加表示时，尤其是如图17所示以血红蛋白增加/周剂量比率表示时，两种药物之间剂量-作用关系之间的差异甚至更明显。在第4周末(固定剂量间隔)，EpoetinΩ患者的该比率是Epoetinα患者的4倍高，并且持续明显较高(大约1.5-3.5倍)。EpoetinΩ患者的比率/时间曲线下面积比Epoetinα组大2.3倍。

该阶段实验证实EpoetinΩ相比于Epoetinα剂量和作用优势较大。在实验的转换阶段观察到EpoetinΩ具有同样优势，转换阶段即先前用Epoetinα治疗的患者转换为EpoetinΩ，反之亦然。

早产贫血

以一个随机、开放标记、对照实验研究EpoetinΩ对早产贫血的效力和安全性。主要目的是测定给予EpoetinΩ是否能降低对包装性红细胞输血的需要。出生时年龄小于31周和体重小于1500g的婴儿适于吸纳入本实验。排除较严重先天畸形、颅内出血、溶血、出血性红细胞增多(静脉Hct≥0.6)和动脉高血压婴儿。随机分配50名早产新生儿或接受或不接受EpoetinΩ。每组有2名婴儿由于复发感染而中途退出。

如果出生体重大于1000g，治疗在生后年龄大于1周时开始，否则治疗在孕龄30周时开始，并持续4周，即直至34周孕龄。治疗包括皮下注射3×100IU/kg/周EpoetinΩ以及食物中三价铁离子初始为3.0mg/kg/天，随后按照血清铁和铁蛋白改变(避免铁中毒)，口服维生素E0.5mg/天，能量吸收460-505kJ/kg/天。如果需要(Hct＜35％或30％或20％，取决于呼吸支持和临床贫血症状，给予包装性红细胞输血。除EpoetinΩ不同外对照组接受相同治疗。治疗后密切观察患者4周，然后跟踪至足龄1岁。在随后的较长时期评价患者的精神运动、神经和躯体发育。

图24图示了该研究的结果。所有的受治疗患者都反应良好，不需要增加给药剂量。组与组之间在铁、能量和维生素E摄取方面没有差异。在预治疗阶段婴儿同样输血。但是，在治疗阶段EpoetinΩ组仅有1名婴儿(4.3％)需要PRC输血(1单位)，而对照组有8名(34.8％)(图24A)。EpoetinΩ治疗患者在随后的1个月无人需要输血，而对照组有5名婴儿(21.7％)需要输血。总体来说，在这8周中，EpoetinΩ组仅有1名婴儿接受1PRC单位，对照组有13名婴儿(56.5％)(图III-12)。EpoetinΩ治疗组网织红细胞水平始终明显较高(图24B)。EpoetinΩ治疗患者的网织红细胞/时间曲线下面积是对照患者的1.45倍，如果扣除基线(治疗开始时)网织红细胞计数则高出7.3倍。而且，对照组的血红蛋白和Hct下降明显比EpoetinΩ患者更显著。EpoetinΩ组的平均血红蛋白和Hct值明显较高，并在治疗阶段始终保持在比对照组低的目标水平之上(图24C和D)。EpoetinΩ治疗患者的血清促红细胞生成素水平在疗程末期明显高于对照患者。两组中血清铁蛋白都下降，但EpoetinΩ治疗婴儿组的下降更显著，可能是更显著刺激红细胞生成的结果。

除了EpoetinΩ对红细胞生成的作用之外，两个治疗组的婴儿之间没有其它的临床或实验室测试差异。直到1岁足龄，在躯体、神经和精神运动发育方面没有观察到差异。早产贫血由于绝对或相对的促红细胞生成素缺陷和对(低)内源促红细胞生成素的低反应性而是一种瞬时、铁和/或维生素抗性、多因素但主要是低增殖性贫血。

与包含数千早产婴儿的实验相比，Epoetinα和Epoetinβ也都可以有效治疗早产贫血，但需要的剂量显著高于EpoetinΩ。表III描述了在该适应症中使用Epoetinα或β应用于实验的基于有效剂量的剂量范围。EpoetinΩ使用剂量比列于表III的Epoetinα或Epoetinβ剂量都低，据报道其比安慰剂更有效。图24图示了和EpoetinΩ相比等效所需要的Epoetinα高和低剂量。在4周内300IU/kg/周的EpoetinΩ剂量(观察8周)几乎完全消除了输血需要(仅1名婴儿接受1单位)。由网织红细胞、血红蛋白和Hct检测显示，EpoetinΩ无庸置疑地刺激红细胞生成。数据强有力地提示治疗早产贫血EpoetinΩ比其它Epoetin更有效。

                            表III

          对早产贫血有效的Epoetinα和β剂量(皮下注射)

参考文献                                   报道好于安慰剂或对照的剂量

Pediatrics 1995；95：1                     5×100IU/kg/周，α

J Pediatrics 1992；120：586                5×100IU/kg/周，α

Pediatrics 1994；93：918                   3×200IU/kg/周，α

Pediatrics Res 1993；34：675               3×150IU/kg/周，α

J Pediatrics 1991；119：781                每隔1天200IU/kg/20天，α

Ped Hematol & Oncol 1998；15：415          3×300IU/kg/周，α

J Pediatrics 1997；131：661                200IU/kg/天，14天，α

NEJM 1994；330：1173                       3×250IU/kg/周，β

Pediatrics 1993；95：512                   3×200≈3×300IU/kg/周，β

J Pediatrics 1998；132：866                3×250IU/kg/周≈3×500IU/kg/周，β

J Perinatal & Neonat Nursing 1997；11：57  3×200或5×200IU/kg/周(推荐)

临床实验数据总结

以上论述的对比性临床实验数据显示，皮下注射EpoetinΩ相比于Epoetinα有几个优势。一般来说，EpoetinΩ对治疗贫血更有效(效力更强)。更具体地说，EpoetinΩ明显更快速地增加血红蛋白，而且在治疗第1周就开始，即治疗开始和发生反应之间没有“时滞”。达到目标血红蛋白值需要的时间较短。另外，如果按照其治疗反应和耐受性给药，那么EpoetinΩ获得的最大血红蛋白水平比Epoetinα高。而且，用低单位剂量EpoetinΩ获得的对血红蛋白、动力学和血红蛋白绝对增加量的作用明显好于Epoetinα或β。总之，按照对贫血的改善，患者需要减少约1/3的量(IU/kg)就能达到较好的结果。而且，EpoetinΩ对血压或高血压的影响比Epoetinα或β小。

因此，EpoetinΩ在其药理学特性上与其它Epoetin明显不同。另外，Epoetin之类的药物疗效特征不仅在于所给予积极作用的类型(即增加RBC、血细胞比容、血红蛋白或铁吸收)，而且在于其导致患者机体承受生物负载较低和/或相应地没有或降低副作用的固有效力，而这些副作用可能危及患者生命或使其不可能使用所述药物。这在高血压情况下特别明显，高血压对严重事件(例如心肌梗塞或中风)风险有不利作用。

提供以下实施例以进一步阐述本方法的各个方面、使用EpoetinΩ治疗患者症状的作用和优势。

                      实施例1

        EpoetinΩ治疗疾病相关贫血的给药程序

以下方案提供了给予治疗剂量EpoetinΩ的典型逐步增加剂量和维持程序，所述治疗剂量EpoetinΩ可有效治疗疾病相关贫血症状，而不明显产生或加剧副作用。

通常用药学上可接受的载体或稀释剂将EpoetinΩ配制成2000或4000IU/ml剂量，皮下(s.c)或静脉(i.v)注射。1ml体积中载体或稀释剂实例可包括：氯化钠(NaCl)8.18mg、磷酸二氢钠(NaH₂PO₄×H₂O)1.56mg、氢氧化钠(NaOH)至pH7.2，以及人血清白蛋白1.0。

开始为50-100IU/kg/周(例如2×30IU/kg/周)的初始增加剂量，然后按照血红蛋白反应和耐受能力以2周间隔逐步调整。例如，在2周内血红蛋白没有升高或稍微下降，就需要增加剂量(单剂最多升高约20-25IU/kg)。稍微增加(＜0.5g/dL/2周)也需要增加剂量(但量较小)。中等增加(0.5-1.5g/dL/2周)不需要剂量调整，而异常血红蛋白增加(＞1.5g/dL/2周)可能需要降低剂量(单剂最多减少约20-25IU/kg)。

维持剂量程序以比最终增加剂量低约1/4-1/3的剂量开始。在血红蛋白水平长期稳定后，或者如果观察到明显向目标上限的趋势(增加＞0.5g/dL/2周)，则可另外降低剂量(单剂最多下降20IU/kg)。如果血红蛋白降低到目标下限以下(至先前水平)，或者如果观察到明显下降趋势但仍在目标范围内(血红蛋白下降＞0.5g/dL/2周)，则应增加剂量，单剂最多增加20IU/kg/周。

如果血红蛋白增加太快(≥4.0g/dL/2周)或者超出了目标上限，则应短暂终止EpoetinΩ治疗。此后，应当以最大降低50％的剂量恢复EpoetinΩ治疗。

当用其它促红细胞生成素治疗后转换到EpoetinΩ时，应考虑作用更强的EpoetinΩ。如果EpoetinΩ在Epoetinα或β之后立即开始，那么剂量应当相应向下调整。例如，如果在3×150IU/kg/周Epoetinα增加剂量后的维持过程中引入EpoetinΩ，则EpoetinΩ应当以最大60-100IU/kg/周皮下注射开始，每周注射分为2次。含EpoetinΩ的制剂可包含在含此方面说明书的药盒。说明书可包括例如Epoetinα和EpoetinΩ对特定病症的剂量对比的参考表。

                     实施例2

         治疗高血压、心脏病和癌症相关贫血

1名128磅的71岁男性患充血性心力衰竭、冠状动脉疾病和全身性动脉硬化。另外，该患者还患有与缺铁性贫血并存的肺和结肠腺癌以及患慢性疲劳等症状。该患者具有糖尿病和心肌梗塞史。肺癌和结肠癌的主要治疗都包括切除。患者患高血压，并已经用LASIX和LISINOPRIL治疗来控制其血压。开始时，患者血红蛋白计数为12.9，HCT计数为39.6％，血小板计数为213K。

在癌症治疗过程中，给予该患者约3×2000IU/周剂量的EpoetinΩ，相当于约100IU/kg/周，每次给予33IU/kg。患者血压没有显著增加，没有血栓形成作用，并且没有恶化心脏功能。该患者的反应表明，即使在患者患有Epoetinα治疗不适用的癌症相关病症(即高血压、慢性心力衰竭和冠状动脉疾病)时，使用EpoetinΩ也不会恶化先有高血压，也没有产生任何血栓形成事件。

                      实施例3

                治疗癌症相关贫血患者

1.乳癌和骨癌疲劳

1名自诉患慢性疲劳的125磅、85岁妇女具有长期转移性乳癌史，已转移至骨和右肋部位，通过化疗药物AREDIA和ARIMEDEX治疗控制癌症。进一步的OXYCONTIN治疗导致疲劳和梦游。另外，该患者以MATASTRON(锶-89)注射的形式接受全身低水平放疗。在这些治疗之前，该患者接受的主要乳癌治疗是外部定向辐射连同化疗剂CYTOXAN、ADRIAMYCIN和MEGACE。该患者遭受由上述治疗加剧的气短、疼痛、虚弱和疲劳。她还具有可能由化疗引起和/或主要病因产生的呼吸困难和贫血症状。

血液学结果显示，其中RBC 3.68、血红蛋白10.6、HCT 31.9％和血小板279K/ul。患者约在1992年开始EpoetinΩ治疗。给予该患者4000IU EpoetinΩ(80IU/kg)，一周2-3次，外加旨在控制癌症扩散和去除胸膜腔积液的其它治疗。几个月后，患者获得正常RBC 5.3M/ul(女性正常为4.04-5.48)、血红蛋白14.1g/dl(女性正常为12.2-16.2)、HCT 46.37％(女性正常为37.7-47.9％)以及血小板计数228K/ul(正常为142-424)。在开始治疗后的2周内，患者显然更活跃，不在主诉慢性疲劳，并且呼吸困难减轻。另外，她不断宣称EpoetinΩ治疗开始后其疼痛减轻。她以1-3瓶EpoetinΩ的剂量靠EpoetinΩ维持，直至开始EpoetinΩ治疗后约7年由于癌症死亡。

2.乳癌贫血

1名164磅的40岁妇女，先前没有严重疾病史，右乳出现炎性癌。主要治疗包括经手提式导管静脉注射给予氨甲喋呤、VINCRISTINE、ADRIAMYCIN和5-FU化疗，是一种非常积极的化疗程序，包括给予最大协同化疗。治疗开始后10天，患者血红蛋白低至11.4，HCT低至33.7，血小板计数为239K。这之后发生贫血，患者开始每周150IU/kg EpoetinΩ治疗。继续使用Marty Abeloff化疗方案的其它治疗，该化疗方案包括额外的5-FU，然后是LECOVRIN和CYTOTAXAN，随后是氨甲喋呤。她还用集落刺激因子GM CSF治疗，以增加白细胞计数，但产生其它的与GM-CSF和化疗组合治疗相关的副作用。

上述治疗1个月后，患者RBC为3.2，血红蛋白为11.6，血细胞比容为35.0，血小板计数为152K。在大约3个月的疗程中，患者未出现高血压，而是血压稳定保持在约110-115/70-75mmHg。在3个月的疗程中，患者显示HCT由36.5％增加至40％或更高，血红蛋白由11.4增加至12.1，并在连续几个月内最终达到17-19的常规血红蛋白水平。继续治疗后，将EpoetinΩ剂量降低至仅4,000IU/3周，该患者恢复至正常的4.62M/ul RBC、13.4g/dl血红蛋白、41.4％HCT。

尽管前述患者属于部分由于积极/协同化疗出现恶性病贫血的最佳候选人，但EpoetinΩ同时治疗防止患者出现预期的贫血，实际上将患者保持在17-19的正常血红蛋白水平以上。该患者还在整个疗程中经常表现出正常HCT、RBC和血红蛋白水平。另外，该患者还显示没有预期的疲劳，并且大体上表现出比对接受该治疗患者的预期更好的健康感。

实际上，患者报告食欲没有减退而是正常；报告没有明显恶心并减少了处方中的常规恶心药。患者还报告与EpoetinΩ注射相关的机体疼痛消失或减轻。该患者在初次给药后打电话给申请人，报告说她害怕提供给她代替EPO的止痛药(实际上给予患者的是EpoetinΩ)。患者报告注射后半小时机体疼痛消失。患者还患自身免疫病狼疮、关节炎、纤维肌痛伴随慢性疲劳综合症，该患者报告EpoetinΩ注射使这些病症在症状上减轻或消失。实际上，尽管发生了侵袭性癌症并且她开始以及持续积极性化疗，但患者报告开始EpoetinΩ治疗后她比前几年的任何时候都感到好，更有精神，心情和健康感更佳。尽管在进行积极化疗和放疗，但她日常仍有精力，想要徒步旅行、河中泛舟、修整庭院、负责整个家庭的家务，包括准备膳食。给予该患者的EpoetinΩ剂量为4,000-8,000IU/周，完全处于任何可能适于治疗化疗相关贫血的Epoetinα剂量之下。同时和该患者在诊所由同一医生治疗的1名患者给予Epoetinα，每天6剂4,000IU，一周6天，或者每周36剂4,000IU；该同伴患者报告血红蛋白为10-11。所述患者的治疗程序在16名患者中是唯一的，她不必终止化疗。此时，患者经医学测试没有出现活动性癌症。

3.间皮瘤癌症相关贫血

1名170磅的63岁男性诊断为右侧胸膜(pleurae lateris dextri)间皮瘤。该患者有以下病史：动脉高血压、牛皮癣和II型糖尿病。开始时患者具有正常RBC 4.93、正常HCT 41％、正常血红蛋白14.2和正常血小板计数348K以及血压150/85。癌症主要治疗包括顺铂化疗。化疗结果是RBC降至4.46、血红蛋白降至11.0、HCT降至36％、血小板降至296。在2周时间内给予剂量约50IU/kg的EpoetinΩ，1周2次。该患者还在EpoetinΩ治疗过程中口服接受约300/mg/天剂量的铁。

在相伴化疗过程中，纵使发生预期的顺铂化疗相关性贫血，患者血红蛋白计数仍保持在约12-14g/dl的正常范围内。EpoetinΩ剂量降低至2×25IU/kg，每周2次。他的血压保持在150/90左右，甚至在短暂时间内降低至140/80。在后期，化疗剂量加倍，导致血红蛋白计数稍微降低至11.8g/dl，随后将EpoetinΩ剂量再提升至2×50IU/kg，1周2次。图21A显示化疗过程中血红蛋白计数水平，图21B显示与顺铂化疗相关的EpoetinΩ给予程序。这些结果表明，低频率低剂量的EpoetinΩ有效预防了预期通常由残酷化疗(例如顺铂)引起的贫血，而已知化疗的一部分副作用就是抑制红细胞谱系。

4.化疗/单一周剂量EpoetinΩ治疗癌症贫血

3名印度患者患实体瘤癌，至少部分由于顺铂化疗而使其血红蛋白计数降至约6.5-8g/dl。在应用 每周1剂12,000IU EpoetinΩ后，每名患者的血红蛋白计数在5-6周的时间内都升高至约12g/dl或更高的目标血红蛋白水平值。因此，每周给予1次EpoetinΩ显示对治疗癌症贫血有效，特别是化疗相关贫血，更特别是顺铂型化疗相关贫血。另外，低剂量给药程序在长期维持阶段有效，而不是仅仅“降低”输血需要，EpoetinΩ治疗足以将血红蛋白计数升高至正常水平，并在整个化疗过程中保持在该水平。

                    实施例4

          治疗肝功能障碍/丙型肝炎患者

1名61岁200磅女患者具有15年日益恶化的慢性丙型肝炎感染史。她卧床不起，呆在氧气帐篷中，末期肝衰竭，主诉恶心、头晕、体液潴留、腹痛、腹泻和慢性疲劳。她已经几周不能摄取营养或耐受食物。她还有高血压。她的药物包括SALSALATE、NADOLOL、PREMARIN、ALDACTONE、ENTEX和PRILOSEC。患者开始EpoetinΩ疗程，每4天给予1次2000IU(约22IU/kg)。还口服补充提供约300mg/天的铁，血压用LASIX和/或PRMARIN控制。患者接近死亡，卧床不起、处于氧环境中，其主治医师认为其存活期少于7-21天，肝损伤/衰竭估计90％以上。该患者还患有慢性心力衰竭。

开始EpoetinΩ治疗后，2天内她就能再讲话，而在几天前她还不能如此。开始治疗的3-4天内她不再需要氧气。4-7天内她起了床，恢复到更正常的生活。患者不断报告在注射EpoetinΩ的半小时内，慢性的强烈疼痛在其体内消失。实际上，疼痛消失持续约2-4天，注射EpoetinΩ时疼痛又消失。

在约7个月的EpoetinΩ疗程中，患者没有表现出预期由其病症引起的贫血类型，即慢性炎症疾病性贫血。相反，患者显现出正常RBC4.11、正常血红蛋白计数13.4、正常HCT 38.2％和低血小板计数112。在EpoetinΩ治疗过程中，患者预先存在的高血压保持在相对稳定的水平。在治疗的前2周至1个月，患者报告精力明显增加，恢复到大致正常的活力，机体疼痛明显减轻，并声称没有疼痛。在开始EpoetinΩ治疗的7-14天内，有疑问的是血红蛋白没有明显增加，该患者进一步降低了氧气治疗，并不再卧床。在21-30天内该患者恢复到正常生活方式，终于能够招待一个200人的婚宴，恢复她定期修整花园的爱好，实际上重新开始了在患者这个年龄完全正常和活跃的生活。而且，实验室测试证实，该患者改善了肝功能，不依赖于其血红蛋白或RBC计数的升高。另外，她能够乘旅行房车在美国旅行观光和探亲，能够和为其丈夫在赛车队工作的汽修厂人员去汽车跑道。

持续EpoetinΩ治疗约22个月后，患者出现由肝功能进一步恶化引起的肝硬化相关症状而入院。肝炎之类的病症实际上是病毒性的，继续对患者产生副作用。在入院时，她仍然表现出最后一次测定以来的正常RBC、血红蛋白和HCT水平以及基本没有变化的血小板计数。该患者在住院期间停用EpoetinΩ，而是给予用于肝脏衰退疾病的其它治疗。在短时间内，RBC计数降至2.99，血红蛋白降至10.3，HCT降至29.9，而血小板计数由109降至93。患者还自诉更疲劳和虚弱，然后在那次住院时病程终结。

                    实施例5

     治疗受与Epoetinα和β相关但与EpoetinΩ

        无关的血管性疼痛有害作用的患者

1名55岁女性患由慢性肾盂肾炎引起的末期肾机能不全，她患有慢性贫血，血红蛋白值约7g/dl。患者先前接受了不成功的肾移植。此后用4000IU标准剂量的Epoetinβ以每周3次治疗该患者。尽管该患者的血红蛋白在3个月的疗程中升高至接近正常值10g/dl，但患者开始出现各种各样的脉管炎症状(肿胀、发红、瘙痒、小腿和大腿和肘自发痛和压痛)。停止Epoetinβ治疗，此后14天这些症状得到改善。当重新用Epoetinβ治疗时，患者自诉又出现完全相同的症状，需要停用Epoetinβ。再次停用Epoetinβ后这些症状缓解，但该患者的血红蛋白下降到正常水平以下。

停用Epoetinβ大约1个月后，给予该患者3×4000IU/周相同剂量的Epoetinα。患者显示血红蛋白改善至10g％，但在16天内再次出现同样疼痛的脉管炎症状，需要停用Epoetinα。

停用Epoetinα大约两个半月后，给予该患者3×4000IU/周相同剂量的EpoetinΩ。4周内，患者血红蛋白提升至14.7％的正常值，并且没有出现任何血管性疼痛的副作用。在第二次又不成功的肾移植后，患者以3×2000IU剂量的EpoetinΩ维持几年，以保持其血红蛋白计数稳定在10-10.6％的范围内而没有任何副作用。因此，该患者使用与Epoetinα或β使用剂量相同的EpoetinΩ没有出现副作用。另外，EpoetinΩ剂量能够减少至获得与使用其它Epoetin制品获得的血红蛋白结果同样有益的血红蛋白结果所需量的一半。

                     实施例6

      用EpoetinΩ治疗对Epoetinα无反应的患者

1名男性46岁患者患常见的肾小球肾炎和膝盖发育异常(不完全指甲膝盖综合症)。由13岁开始的肾病史显示肾小球高度蜂窝化、底膜变厚、间质(interitial)纤维化、部分肾小管萎缩和10-20％的肾小球透明化。诊断为肾衰竭，于1993年进行第一次透析。患者患有高脂蛋白血症IIB、动脉高血压、左心室肥大、舒张松弛降低、心包纤维化、贫血和Lopomata皮。该患者还发生过1次轻微的心力衰竭。

上述患者参与了对比EpoetinΩ和Epoetinα治疗与肾衰竭和血液透析相关的慢性贫血的“清除”交叉实验。患者在16-20周的第一阶段随机接受EpoetinΩ或Epoetinα，接着是一段时间未给予药物的清除阶段，直至血红蛋白水平恢复到测试前(贫血)状态，此时为第二阶段，患者接受EpoetinΩ或Epoetinα中的另一种，无论哪一种在第一阶段都没有给予。这之后是第二个清除阶段。在第三阶段，患者恢复到与第一阶段使用药物不同或相似的药物剂量。因此，每名患者用作他自己的内部对照。两种Epoetin的初始剂量都是2×50IU/kg/周。在逐渐增加剂量阶段的前4周剂量固定，然后增加25IU/kg、降低25IU/kg或不改变，这取决于是否需要调节以将血红蛋白计数保持在10-12g/dl的目标范围。

前述患者在第一阶段开始用EpoetinΩ治疗。如图18A所示，对EpoetinΩ的反应非常好，血红蛋白由7.4的低基线升高并在4周内达到目标水平(18A，中图)。剂量在此后的6周降低至2×25IU/kg/周，然后在最后4周时间再将EpoetinΩ调节至零(18A，顶图，该80kg个体的值表示为总IU/周)。但是，尽管在第一阶段的最后1个月将EpoetinΩ降低至零，该患者在测试阶段中仍将血红蛋白水平保持在目标范围。如图18A的底图所示，患者处于高血压临界点(即140-160mm Hg)的收缩压在EpoetinΩ疗程中没有改变或实际上降低。

在几个月的第一清除阶段之后，患者的血红蛋白回到7.4g/dl，使用相同剂量的Epoetinα开始第二阶段，如图18B(顶图)所示。该患者对Epoetinα无反应，以在整个实验过程中不能达到目标血红蛋白水平(18B，中图)为证，包括Epoetinα剂量5周内反复增加至2×75IU/kg，接着再增加至2×100IU/kg，然后在实验的最后2周最终达到2×125IU/kg/周。该患者不仅没有反应，而且与EpoetinΩ治疗完全相反，患者的收缩压在疗程中比正常显著高出30mmHg，这使患者在治疗过程中的几个阶段都处于高血压状态之中。

在第二个清除阶段之后，再用EpoetinΩ以1×100IU/kg、每周1次的固定剂量治疗该患者，如图18C所示(顶图)。血红蛋白水平即刻并稳定升高，在12周疗程中呈线性增加，达到约10g/dl的接近正常水平，如图18C中图所示。再者，与Epoetinα作用明显相反的是，患者的收缩压实际上下降，而不是增加，如图18C底图所示。该数据表明，某些Epoetinα无反应患者实际上对EpoetinΩ的反应可能格外好。该数据还显示，即便对血红蛋白水平增加几乎没有或没有反应，Epoetinα也可显著促使血压增加。而且，该数据还清晰表明，EpoetinΩ具有即时疗效，甚至在以Epoetinα无用的剂量水平每周注射一次给予时也是如此。

                     实施例7

    手术步骤使用EpoetinΩ预防贫血和提供自体输血

在一个随机、开放标记的对照实验中使用EpoetinΩ治疗进行选择性矫形外科手术的非贫血患者。在手术之前用EpoetinΩ以2×50IU/kg/周皮下注射4周治疗患者，并静脉注射补充2×100mg铁/周。对照患者仅用铁治疗相同的时间。目标是在外科手术前步骤提供3单位(3×500ml)血液捐献，并预防患者在手术前变成贫血(即防止血红蛋白＜10g/dl)。献血只有在血红蛋白＞/＝11.0g/dl时才有可能。手术安排在第4周实验结束时。周一献血，血液学参数的检测点是手术前的周一和周二、手术后的2-3天以及手术后的14天(出院时)。所献的血用于手术过程中自体输血。

图19A和B分别显示了实验过程中治疗组和对照组的个体血红蛋白值。几名对照患者获得的血红蛋白低于11.0g/dl，因此不能捐献计划量的血。相反，全部EpoetinΩ治疗患者都能够献出计划的所有血。而且，手术前有几名对照患者贫血，而EpoetinΩ治疗患者无一名是贫血，一些患者成为输血依赖性患者，即获得的血红蛋白＜/＝9.0g/dl。另外，对照患者与治疗患者相比，血红蛋白下降速率明显更快。图19C和D显示，尽管整个实验过程中两个组的血红蛋白都呈线性下降，但对照组的血红蛋白下降速率在手术前阶段(图19D)和包括手术后的整个阶段(图19C)都明显更陡。图20C和D分别显示了治疗患者与对照组相比的平均RBC和网织红细胞计数，表明治疗组显著优于对照组。图20D显示所有治疗患者或对照组患者的平均值，治疗患者的总血清铁水平(TSI)明显低于对照组，表明即使在通常预期使用其它Epoetin不能实现的基本状况(即TSI水平较高)下红细胞生成也明显增加。观察到这些作用所使用的EpoetinΩ剂量显著低于用其它Epoetin治疗需要的量。

提供以上说明和实施例是为了阐述本发明，而无意限制本发明的范围。本领域的普通技术人员很容易理解，可以不同于本发明公开内容但不背离仅由以下权利要求限定的本发明的方式实施本发明。

                      实施例8

使用EpoetinΩ治疗Epoetinα不能起作用的化疗/放疗贫血

1名女患者患恶性乳癌，已转移至淋巴结，对其用CMF、5FU和NAVALBINE化疗以及每日1剂NEUPOGEN和每周3剂Epoetinα治疗。NEUPOGEN成功将白细胞计数维持在低至正常水平，但Epoetinα不能维持足够的RBC计数，RBC计数降至2.06的“恐慌”范围，需要输血。将患者改为皮下注射EpoetinΩ，1周2-3次，每次给予剂量约60IU/kg。1个月后，患者有足够力量经受9周的肺部外部定向辐射。在放疗过程中和之后以及随后的MUTAMYCIN治疗过程中患者继续接受EpoetinΩ。在放疗时和之后，患者的RBC、HCT和血红蛋白水平保持在低至正常范围。患者报告由于在放疗前使用EpoetinΩ治疗感到精力正常和面貌更好，据反映态度改善是她决定继续放疗和随后化疗的原因。实际上，患者重新开始打网球，并能够在1天内上两组网球训练课。在开始放疗和随后化疗之后6个月，患者RBC计数正常，CAT扫描未证实有肿瘤标记或肿瘤组织。患者在CAT扫描后至少3个月继续每周2次的化疗，继续以约60IU/kg、1周3-5次的剂量接受EpoetinΩ，她保持正常的RBC计数，并在长期癌症治疗过程中不断报告精神面貌积极、心情良好，她认为这些要归因于使用了EpoetinΩ。

                    实施例9

             EpoetinΩ在正常人的应用

1名51岁男性是医药公司经理，患CFS(慢性纤维肌痛)和肌痛超过10年，包括血管性疼痛，一般臀部和小腿以及上臂最严重，尤其是前臂。患者血红蛋白和RBC总是正常。至少有一次使用公司生产的药物反映出公司职员的日本价值观，患者自己按KG体重(40IU/Kg)皮下注射给予EpoetinΩ。在给予后至少5个月，患者肌肉和组织(包括腿和胳膊)的全身性疼痛完全消失。这种事件是自发和即时的，因此与任何血红蛋白或红细胞计数增加无关。这种疼痛消失据报告持续了4-6天，并在4天后逐渐减弱，直至第8天又开始疼痛。在第12天或以后，该患者自己给予单剂4,000IU的EpoetinΩ，重现了显著消除机体/肌肉/组织疼痛的良好效果。另外，该患者报告“心情”或“健康感”同样改善。而且，患者已处于高血压临界状态20年，收缩压下限在95-105的范围内。在给予EpoetinΩ后，每日监测血压没有增加。该报告与实施例3患者一致，该患者在初次使用时报告，由于在给予EpoetinΩ的几分钟内由慢性病和癌症造成的机体疼痛减退，所以她误认为给予了“快速止痛”剂。在该案例下，她继续用EpoetinΩ治疗了几个月，并例行报告在给予EpoetinΩ时机体疼痛减轻或消失。

令人惊奇的是，还发现上述和以下权利要求书要求保护的促红细胞生成素(特别是EpoetinΩ及其相关形式)还适于治疗和/或预防典型时差反应，例如横跨大西洋或太平洋飞行后发生的时差反应。时差反应症状或疲劳、体倦、无法集中注意力以及其它自主神经系统疾病与时差反应(节律障碍)有关。一般来说，在生物适应其面临的不同时区之前时差反应会持续3-7天。

在发生时差反应症状之前或之后通常按每kg体重给予25-30IU促红细胞生成素抑制或很大程度上消除这些症状。在到达目的地之后48小时内给予最好。一般来说，以24-72小时的间隔给予1-3次足矣。当然，促红细胞生成素对其它形式的节律障碍也有效。

促红细胞生成素(特别是EpoetinΩ及其相关形式)的再其他活性领域为治疗慢性心脏病，例如慢性心力衰竭或心脏机能不全。令人惊奇的是，EpoetinΩ表现出比Epoetinα高得多的活性以及低得多的副作用。

促红细胞生成素已广泛用于治疗肾衰竭患者。肾衰竭经常伴发心脏衰竭，是引起这类患者死亡的原因之一。促红细胞生成素同样适用于非透析性糖尿病患者。看来似乎某种类型的高血压起核心作用。

已知Epoetinα由于其增加血压的趋势而禁用于高血压患者。现在发现给予10-200IU/kg体重剂量范围的EpoetinΩ极大减轻了慢性心力衰竭患者的症状，例如疲劳、dispnoe、水潴留，使他们中的很多人回到正常或接近正常的生活。所有受治疗患者都证实他们的状态和健康感有极大改善。所有病例的运动能力都有相当大至非常大的增加。

EpoetinΩ对慢性心力衰竭的作用不限于患者经受肾衰竭、糖尿病和/或贫血的病例。似乎该药对许多不同形式的慢性心力衰竭都有效，包括全部类型。已经表明，长期治疗是可行的，并且没有用Epoetinα所发现的副作用。

可用EpoetinΩ治疗的慢性心力衰竭形式例如为复发急性心机能不全、缺血性心机能不全、潜伏性心机能不全、原发性心机能不全和相对心机能不全，以及与其它疾病和/或疾病疗法有关的心机能不全形式。

                   实施例10

     EpoetinΩ在治疗慢性心力衰竭方面的用途

1名82岁女患者因患与4+二尖瓣回流瓣膜心肌病有关的IV度充血性心力衰竭而住院。对她用全套药物治疗程序治疗，预期存活期非常有限。此时，她的血红蛋白在10-11的范围内。

半年后，该患者的血红蛋白显著降低至8.3-8.7的血红蛋白范围，这恶化和破坏了她的心肺状况。

在用4000IU EpoetinΩ每周给予3次治疗后，她的血红蛋白响应至13.8的顶峰。为了对该患者保持药物治疗，将剂量减少至2000IU每周3次，她的血红蛋白降为11。

与血红蛋白升高至正常范围同步，该患者的怨言基本消失，她的运动能力极大增强，她在定期的EpoetinΩ药疗下能够重新开始正常的生活。该患者的情况证实了EpoetinΩ比充血性心力衰竭常规药物有改进且更稳定。

提供以上的实施例仅为了阐述本发明，并不限制本发明的范围，本发明的范围仅由以下的权利要求书限定。

Claims (47)

1.重组促红细胞生成素用于生产药物的用途，其中所述药物用于预防或治疗疲劳、疼痛、慢性心力衰竭、节律障碍或痴呆。

2.权利要求1的用途，其中所述重组促红细胞生成素选自：EpoetinΩ，其为幼龄仓鼠肾细胞产生的促红细胞生成素；人基因组促红细胞生成素DNA的ApaI限制性片段表达的促红细胞生成素；其糖基化模式特征为在至少3个天冬酰胺残基上存在N-联糖基化残基的促红细胞生成素；O-联寡糖含量低于1mol/mol糖蛋白的促红细胞生成素；具有一种或多种pI为4.3或4.5或4.6的异构体的促红细胞生成素以及在N-去糖基化后基本保留了其全部体外生物活性的重组促红细胞生成素。

3.权利要求1或2的用途，其中所述重组促红细胞生成素为EpoetinΩ。

4.权利要求1-3任一项的用途，其中所述疲劳与癌症有关。

5.权利要求1-3任一项的用途，其中所述疲劳与肝功能障碍有关。

6.权利要求1-3任一项的用途，其中所述疲劳与肝炎性感染有关。

7.权利要求1-3任一项的用途，其中所述疲劳与心脏病有关。

8.权利要求1-3任一项的用途，其中所述疲劳与自身免疫疾病有关。

9.权利要求8的用途，其中所述自身免疫疾病为关节炎。

10.权利要求1-3任一项的用途，其中所述疲劳与慢性疲劳综合症有关。

11.权利要求1-3任一项的用途，其中所述疲劳与癌症治疗有关。

12.权利要求11的用途，其中所述癌症治疗为化疗。

13.权利要求12的用途，其中所述化疗为顺铂治疗。

14.权利要求11的用途，其中所述促红细胞生成素在所述癌症治疗之前、当中或之后给予。

15.权利要求11的用途，其中所述癌症治疗为放疗。

16.权利要求1-3任一项的用途，其中所述血管性疼痛与癌症有关。

17.权利要求1-3的用途，其中所述血管性疼痛与肝功能障碍有关。

18.权利要求1-3的用途，其中所述血管性疼痛与肝炎性感染有关。

19.权利要求1-3的用途，其中所述血管性疼痛与心脏病有关。

20.权利要求1-3的用途，其中所述血管性疼痛与自身免疫疾病有关。

21.权利要求20的用途，其中所述自身免疫疾病为关节炎。

22.权利要求1-3的用途，其中所述血管性疼痛与癌症治疗有关。

23.权利要求22的用途，其中癌症治疗为化疗。

24.权利要求22的用途，其中所述化疗为顺铂治疗。

25.权利要求22的用途，其中所述促红细胞生成素在所述癌症治疗之前、当中或之后给予。

26.权利要求22的用途，其中所述癌症治疗为放疗。

27.权利要求2或3的用途，其中治疗剂量为约55-150IU/kg。

28.权利要求27的用途，其中所述治疗剂量的重组促红细胞生成素在4-16周的疗程中不激发产生抗促红细胞生成素IgG抗体。

29.重组促红细胞生成素用于生产药物的用途，其中所述重组促红细胞生成素选自：EpoetinΩ，其为幼龄仓鼠肾细胞产生的促红细胞生成素；人基因组促红细胞生成素DNA的ApaI限制性片段表达的促红细胞生成素；其糖基化模式特征为在至少3个天冬酰胺残基上存在N-联糖基化残基的促红细胞生成素；O-联寡糖含量低于1mol/mol糖蛋白的促红细胞生成素；具有一种或多种pI为4.3或4.5或4.6的异构体的促红细胞生成素以及在N-去糖基化后基本保留了其全部体外生物活性的重组促红细胞生成素，其中所述药物用于治疗患者症状，该患者患有受到促红细胞生成素治疗副作用的不利影响的疾病，所述药物含有治疗剂量的选定重组促红细胞生成素，以在疗程中提供疗效而不产生或加剧与治疗剂量Epoetinα或β治疗有关的副作用。

30.权利要求29的用途，其中所述重组促红细胞生成素为EpoetinΩ。

31.权利要求29或30的用途，其中所述症状选自贫血、疲劳和血管性疼痛。

32.权利要求29或30的用途，其中所述副作用选自血压升高、高血压、血栓形成和血小板数增加。

33.权利要求29或30的用途，其中所述疾病选自高血压、血栓形成、心脏病、癌症、自身免疫疾病、肝功能障碍、肝炎和化疗或放疗性治疗。

34.权利要求29或30的用途，其中所述疗效选自RBC增加、HCT增加、血红蛋白增加、精力增强、智力灵敏度增加或疼痛减轻。

35.权利要求29或30的用途，其中所述重组促红细胞生成素以5-150IU/Kg的剂量给予，每周1-3次。

36.权利要求35的用途，其中所述重组促红细胞生成素以75-200IU/Kg的剂量给予，每周1次。

37.权利要求29或30的用途，其中所述症状与癌症治疗有关。

38.权利要求37的用途，其中所述癌症治疗为化疗。

39.权利要求38的用途，其中所述化疗为顺铂治疗。

40.权利要求38的用途，其中所述促红细胞生成素在所述癌症治疗之前、当中或之后给予。

41.权利要求37的用途，其中所述癌症治疗为放疗。

42.权利要求1的用途，其中所述慢性心力衰竭与患者肾衰竭和/或糖尿病有关。

43.权利要求1的用途，其中所述慢性心力衰竭与癌症和/或癌症治疗有关。

44.权利要求43或44的用途，其中所述重组促红细胞生成素以10-200IU/Kg的剂量给予，每周1-3次。

45.权利要求1的用途，其中所述节律障碍为时差反应，并且其中所述重组促红细胞生成素的用法是25-50IU/Kg剂量，1-3次。

46.权利要求43-46任一项的用途，其中所述重组促红细胞生成素为EpoietinΩ。

48.权利要求1-47任一项的用途，其中所述药物用于皮下注射。

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