MXPA06011084A - Regimen de dosificacion en comunicacion para eritropoyetina. - Google Patents

Abstract

La presente invencion provee un regimen de dosificacion en combinacion para eritropoyetina (EPO); en particular, el regimen de dosificacion de la presente incluye la administracion de por lo menos un primer segmento de dosificacion que comprende una primera exposicion a EPO capaz de estimular la produccion de reticulocitos seguida por una segunda exposicion a EPO capaz de sostener la maduracion de los reticulocitos en neocitos, y finalmente, globulos rojos; ventajosamente, el segmento de dosificacion se puede ciclar o repetir, cualquier numero de veces y de acuerdo con cualquier esquema de tiempo deseado, con el fin de proveer o mantener cualquier conteo de globulos rojos y/o concentracion de hemoglobina total deseado; tambien se proveen metodos de tratamiento que emplean el regimen de dosificacion en combinacion asi como equipos.

Description

RÉGIMEN DE DOSIFICACIÓN EN COMBINACIÓN PARA ERITROPOYETINA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un régimen de dosificación en combinación para eritropoyetina efectivo para incrementar la producción y mantenimiento de glóbulos rojos maduros y con ello también típicamente incrementar la concentración de hemoglobulina. Convenientemente, el régimen de dosificación en combinación también puede ser en ciclos o repetido para mantener incrementos en la concentración de hemoglobina o para controlar la concentración de hemoglobina a los niveles deseados. Así, el régimen de dosificación puede adecuarse para cumplir con las necesidades particulares de una serie de pacientes en relación con esquemas de dosificación convencionales para EPO. Como tal, la invención también describe métodos de tratamiento así como equipos para llevar a cabo el régimen y métodos de dosificación en combinación.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La oxigenación de los tejidos y órganos del cuerpo es un proceso complejo y se basa en el desempeño eficiente de varias funciones, por ejemplo la captación de oxígeno, suministro de oxígeno a los tejidos vía sangre arterial oxigenada, contenido de oxígeno de sangre venosa, etc. El desempeño ineficiente de estas funciones como puede presentarse debido a cualquiera de una serie de causas, por ejemplo función puimonar anormal, obstrucción arteriolar o vasoconstricción, o menor concentración de hemoglobulina puede resultar en la oxigenación insuficiente del tejido o hipoxia del tejido. Debido a las numerosas y complejas funciones involucradas, la oxigenación de tejido se evalúa indirectamente en el mejor de los casos. Empero, el tratamiento de hipoxia de tejido es de la mayor importancia en el cuidado de cualquier paciente ya que la hipoxia de tejido a largo plazo, algunas veces llamadas anoxia, puede resultar en daño irreversible del tejido. Se han desarrollado una variedad de tratamientos para la hipoxia de tejido y aunque en términos generales, el tratamiento óptimo para la hipoxia de tejido se. basará por lo menos en parte en la causa subyacente, muchos pacientes con hipoxia de tejido obtendrán algún beneficio a partir del aumento en el conteo total de glóbulos rojos y el incremento típicamente concurrente en la hemoglobulina asociada con lo anterior. Sin embargo, la estimulación, producción y mantenimiento de un conteo deseable total de glóbulos rojos son tareas similarmente complejas. Es decir, cada tipo de célula que circula en el sistema sanguíneo se deriva de un depósito de células madre hematopoyéticas muy primitivas que se han desarrollado vía cualquiera de una serie de rutas de diferenciación. Así, un número limitado de células típicamente están comprometidas a cualquier trayectoria dada en cualquier momento. Una vez comprometidas a una trayectoria, la maduración y supervivencia de estos progenitores comprometidos en una célula en particular no está garantizada e incluso si se logra la maduración, las células maduras típicamente tienen una vida limitada. Incluso si se puede ocasionar que un mayor porcentaje de células madre se convierta en progenitores comprometidos a, por ejemplo, la trayectoria eritroide que lleva a la maduración de glóbulos rojos, solo un cierto número de estos progenitores comprometidos, o reticulocitos, alcanzará la etapa de glóbulo rojo infante, o convertirse en neocitos. De manera similar, sólo un cierto número de cualesquiera tales neocitos producidos sobrevivirá en realidad para convertirse en glóbulos rojos maduros. Los esquemas de dosificación convencionales para EPO ilustran la dificultad de estimular y mantener mayores conteos de glóbulos rojos. Es decir, aunque tales esquemas de dosificación son efectivos para incrementar la concentración de reticulocitos que circulan en el torrente sanguíneo, típicamente no resultan en incrementos sostenidos o incremento alguno, en el conteo total de glóbulos rojos y/o concentración de hemoglobina. Este resultado no es sorprendente cuando se considera a la luz de la comprensión actual de la farmacología de EPO; que EPO se une a receptores en progenitores comprometidos para prevenir la apoptosis y sustentar el desarrollo de progenitores en reticulocitos. Por ejemplo, un esquema de dosificación convencional para EPO, por ejemplo una sola inyección subcutánea de EPO, incrementa sin duda la concentración de reticulocitos en la sangre circulante tal y como se esperaría con base en el conocimiento convencional. Sin embargo, los datos de sujeto tratados con este esquema de dosificación demuestran que los incrementos en el conteo total de glóbulos rojos y/o concentración de hemoglobulina son ligeros, transitorios o ambos. Un segundo esquema de dosificación convencional de inyecciones subcutáneas semanales de la misma dosis de EPO puede incrementar el control total de glóbulos rojos y resultar en una mejor concentración de hemoglobulina; sin embargo, tal régimen de dosificación riguroso puede ser subóptimo en el sentido que puede desalentar el cumplimiento del paciente y/o ser costeablemente prohibitivo. Lo que es más, dicho régimen de dosificación no ofrece flexibilidad alguna para adecuar el tratamiento de conformidad con la etiología particular de un sujeto en lo personal o resultado de tratamiento deseado. Por ello, se proporcionaría un régimen de dosificación y/o método de tratamiento que utilice EPO que ocasionaría un incremento en la producción de reticulocitos y también incrementaría el número de reticulocitos, que maduran a neocitos, e incrementaría aún más el número de estos neocitos que sobreviven para convertirse en glóbulos rojos maduros. Dicho régimen de dosificación proporcionaría ventajas adicionales si fuera capaz de mantener cualquier incremento para cualquier duración deseada o requerida con un calendario de dosificación menos riguroso y más flexible que las dosificaciones semanales equivalentes.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un régimen de dosificación en combinación de EPO que proporciona tal eficacia mejorada, simultáneamente con mayor flexibilidad en dosificación que los esquemas de dosificación convencionales de EPO. Más en particular, el régimen de dosificación presente puede ser efectivo para incrementar la producción y mantenimiento de glóbulos rojos maduros y así incrementar la concentración de hemoglobulina. Convenientemente, el régimen de dosificación en combinación también puede ser hecho en ciclos o repetirse para mantener tales incrementos, o sin duda proporcionar un resultado de tratamiento deseado, para que el régimen de dosificación pueda ser adecuado para cumplir con las necesidades particulares de una amplia variedad de pacientes en relación con esquemas de dosificación convencionales para EPO. En un primer aspecto, la presente invención así proporciona un régimen de dosificación de EPO. El régimen de dosificación comprende la administración de por lo menos un primer segmento de dosificación que comprende una primera exposición a EPO efectiva para por lo menos incrementar marginalmente la producción de reticulocitos seguido por una segunda exposición a EPO por lo menos marginalmente efectiva para sustentar los recticulocitos conforme maduran en glóbulos rojos. Deseablemente, la administración de la segunda exposición inicia dentro de alrededor de tres días pero no más de alrededor de 10 días después de la primera exposición. Cada segmento de dosificación así tiene el efecto de incrementar el conteo total de glóbulos rojos y/o concentración de hemoglobina. Adicionalmente, el segmento de dosificación puede repetirse, o someterse a ciclos, cuantas veces sea deseado o requerido, para mantener, o ajustar, el conteo total de glóbulos rojos o nivel de hemoglobina. Aun más, la primera y segunda exposición pueden comprender cualquier forma de dosificación y cualquier cantidad de dosificación y puede ser igual o diferente. A diferencia de esquemas de dosificación convencionales, el presente esquema de dosificación inventivo puede no sólo proporcionar un incremento inicial significativo en conteos totales de glóbulos y/o concentración de hemoglobina, sino que también puede utilizarse para sustentar los mismos a cualquier nivel deseado. Convenientemente el régimen de dosificación presente hace esto simultáneamente con la flexibilidad que está ausente en la administración de EPO y sin duda puede adecuarse para cumplir con las necesidades particulares de cualquier sujeto dado. El régimen de dosifcación encuentra así aplicación en el tratamiento de cualquier sujeto que necesite o desee un incremento y mantenimiento en el control total de glóbulos rojos y/o concentración de hemoglobina. En un segundo aspecto entonces, la presente invención proporciona un método para mejorar la producción y manteniemiento de glóbulos rojos maduros y, como resultado típicamente también incrementar la concentración de hemoglobina. Más particularmente, el método comprende administrar por lo menos un primer segmento de dosificación que comprende una primera exposición a EPO efectiva para por lo menos incrementar marginalmente la producción de reticulocitos seguido por una segunda exposición a EPO efectiva para demostrar por lo menos un incremento en la capacidad de los reticulocitos para madurar en glóbulos rojos. La administración de la segunda exposición a EPO se inicia deseablemente dentro de alrededor de 3 días pero no más de alrededor de 10 días después de la primera exposición, para exponer a EPO a cualesquiera neocitos formados mediante la primera exposición al momento en que los neocitos se espera maduren en glóbulos rojos. En ciertas modalidades, puede ser deseable proporcionar neocitos recién desarrollados con una exposición sustentable a EPO por ejemplo, utilizando múltiples dosis diarias bajas, un implante EPO o parche, o un EPO de duración prolongada. El segmento de dosificación puede entonces ser repetido convenientemente en cualquier intervalo deseado para proporcionar cualquier resultado deseado, según lo determinen las necesidades particulares de un sujeto, por ejemplo en intervalos sincronizados para mantener, incrementar o disminuir sustancialmente los conteos de glóbulos rojos. Dicho manejo de conteo de glóbulos rojos y/o concentración de hemoglobina puede ser conveniente para una variedad de sujetos, incluyendo sin restricción, aquellos que sufren hipoxia de tejido proveniente de cualquier causa, por ejemplo anemia o anemia crónica, sujetos que reciben quimioterapia, y sujetos que han sufrido lesión traumática. Los métodos inventivos actuales pueden emplearse para tratar cualquiera de éstos.

Los componentes para llevar a cabo el presente régimen de dosificación y método, es decir formas de dosificación de EPO, están disponibles comercialmente. Sin embargo, para mejorar la conveniencia, la flexibilidad, disponibilidad y utilidad del régimen y método de dosificación, los componentes requeridos para poner en practica el régimen y métodos inventivos pueden proporcionarse en conjunción uno con otro en forma de un equipo, y tal equipo está contemplado dentro del alcance de la presente invención. El equipo inventivo deseablemente comprendería por lo menos un primer segmento de dosificación de EPO que comprende una primera unidad de dosificación de EPO capaz de proporcionar una exposición a EPO efectiva para por lo menos incrementar marginalmente la producción de reticulocitos. Una segunda unidad de dosificación de EPO, que comprende una diferente cantidad de dosificación o forma EPO que la de la primera y capaz de proporcionar una exposición a EPO por lo menos marginalmente efectiva para sustentar los reticulocitos conformen maduran en glóbulos rojos. El equipo puede además incluir instrucciones que indiquen que la administración de la segunda exposición debe iniciarse dentro de alrededor de tres días pero no más de alrededor de 10 días después de la primera exposición. En ciertas modalidades, las instrucciones pueden además indicar que el segmento de dosificación pueda repetirse, por ejemplo, por lo menos alrededor de dos semanas, o por lo menos alrededor de 4 semanas, o incluso por lo menos alrededor de 8 semanas después de la administración del segmento precedente. Las instrucciones en ciertas modalidades del equipo también pueden adecuarse a sujetos en particular, por ejemplo para sujetos que se someten a quimioterapia, las instrucciones pueden indicar que el segmento de dosificación puede deseablemente repetirse de acuerdo con tratamientos de quimioterapia.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Los dibujos adjuntos ¡lustran varios aspectos de la invención. Una breve descripción de las figuras es como sigue: La figura 1 es una ilustración gráfica de la farmacología comprendida convencionalmente de EPO, es decir que la administración de una dosis subcutánea individual de EPO en sujetos sanos produce un incremento medio en porcentaje de niveles de reticulocitos que puedan relacionarse directamente con el tamaño de la dosis de EPO administrada (en términos de área bajo la curva de concentración - tiempo de por ciento en reticulocitos); la figura 2 es ilustración gráfica de niveles medios de EPO en suero en sujetos sanos después de una dosificación convencional de EPO, por ejemplo una dosis subcutánea individual de 40,000 IU EPO, que muestra un pico al dosificar, y después regresando a niveles endógenos dentro de alrededor de 10 días; la figura 3 es una ilustración gráfica de niveles medios de reticulocitos en por ciento en individuos saludables después de la administración de la misma dosis convencional de EPO ilustrada en la figura 2, que muestra un pico en niveles de reticulocitos alrededor de 7 días después de una administración subcutánea individual de EPO, regresando después a niveles de pre-dosis dentro de alrededor de 15 días; la figura 4 es una ilustración gráfica de un conteo medio de glóbulos rojos en individuos sanos después de la administración de la misma dosis convencional de EPO ilustrada en la figura 2, que muestra que no se ve un incremento significativo en conteo de glóbulos rojos al o después de alterar la dosificación convencional con EPO; la figura 5 es una ilustración gráfica de niveles medios de hemoglobina en individuos sanos después de la administración de la misma dosis convencional de EPO ilustrada en la figura 2, que muestra que está dosifcación convencional con niveles EPO no produce un aumento significativo o sostenible en niveles de hemoglobina; la figura 6 es una ilustración gráfica que compara niveles de EPO en suero después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir, administración de una dosis subcutánea individual de 400 lU/kg de EPO, (ii) inyecciones diarias de bajo nivel de EPO de 25 lU/kg/día, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como lo contempla la presente invención, es decir una primera exposición a 400 lU/kg EPO seguido por una segunda exposición a 25 lU/kg/día EPO en los días 4- 16 después de la primera exposición, que muestra que todos los esquemas de dosificación produjeron un pico en EPO al dosificar, después de esto retornando a niveles endógenos dentro de alrededor de 5 días; la figura 7 es una ilustración gráfica que compara niveles de reticulocitos después de entre (i) dosificación convencional con EPO, es decir administración de una dosis subcutánea individual de 400 lU/kg de EPO, (ii) inyecciones diarias de nivel bajo de EPO de 25 lU/kg/día, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación según lo contempla la presente invención, es decir una primera exposición a 400 lU/kg EPO seguido por una segunda exposición a 25 lU/kg/día EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, que muestra que todos los esquemas de dosificación produjeron un pico en reticulocitos después de la dosificación, después de ello retornando a niveles endógenos dentro de alrededor de 30 días; la figura 8 es ilustración gráfica que muestra cambios en niveles de glóbulos rojos después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir administración de una dosis subcutánea individual de 400 lU/kg de EPO, (ii) inyecciones diarias de nivel bajo de 25 lU/kg/día EPO; y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como lo contempla la presente invención, es decir, una primera exposición a 400 lU/kg EPO seguida por una segunda exposición a 25 lU/kg/día EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, que muestra que la primera dosificación de conformidad con esta modalidad del segmento de dosificación produjo un incremento importante en el conteo de glóbulos rojos con relación a la dosificación convencional y a la dosificación diaria de bajo nivel con EPO; La figura 9 es una representación gráfica que compara el cambio en los niveles de hemoglobina después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir, administración de una sola dosis de 400 lU/kg subcutánea de EPO, (ii) inyecciones diarias de bajo nivel de 25 lU/kg/día de EPO, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como se contempla por la presente invención, es decir, una primera exposición a 400 lU/kg de EPO seguido por una segunda exposición a 25 lU/kg/día de EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, mostrando que la dosificación de conformidad con esta modalidad del segmento de dosificación produjo un incremento importante y sostenido en hemoglobina con relación a la dosificación convencional y a la dosificación diaria de bajo nivel con EPO; la figura 10 es una representación gráfica que compara los niveles de EPO en suero después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir, administración de una sola dosis de 400 lU/kg subcutánea de EPO, (ii) inyecciones de EPO diarias de bajo nivel de 50 lU/kg/día, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como se contempla por la presente invención, es decir, una primera exposición a 400 lU/kg de EPO seguido por una segunda exposición a 50 lU/kg/día de EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, mostrando que todos esquemas de dosificación produjeron un pico en EPO tras la dosificación regresando posteriormente a niveles endógenos en aproximadamente 5-7 días; la figura 11 es una representación gráfica que compara los niveles de reticulocito después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir, administración de una sola dosis de 400 lU/kg subcutánea de EPO, (ii) inyecciones de EPO diarias de bajo nivel de 50 lU/kg/día, y (¡ii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como se contempla por la presente invención, es decir, una primera exposición a 400 lU/kg de EPO seguido por una segunda exposición a 50 lU/kg/día de EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, mostrando que todos los esquemas de dosificación produjeron un pico en reticulocitos tras la dosificación regresando posteriormente a niveles endógenos en aproximadamente 30 días; la figura 12 es una representación gráfica que compara los cambios en los niveles de glóbulos rojos después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir administración de una sola dosis de 400 lU/kg subcutánea de EPO (ii) inyecciones de EPO diarias de bajo nivel de 50 lU/kg/día, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como se contempla por la presente invención, es decir, una primera exposición a 400 lU/kg de EPO seguido por una segunda exposición a 50 lU/kg/día de EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, mostrando que la dosificación de conformidad con esta modalidad del segmento de dosificación produjo un incremento importante en el conteo de glóbulos rojos con relación a la dosificación convencional y a la dosificación diaria de bajo nivel de EPO; la figura 13 es una representación gráfica que compara el cambio en niveles de hemoglobina después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir administración de una sola dosis de 400 lU/kg subcutánea de EPO (¡i) inyecciones de EPO diarias de bajo nivel de 50 lU/kg/día, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como se contempla por la presente invención, es decir, una primera exposición a 400 lU/kg de EPO seguido por una segunda exposición a 50 lU/kg/día de EPO, en los días 4-16 después de la primera exposición, mostrando que la dosificación de conformidad con esta modalidad del segmento de dosificación produjo un incremento importante en hemoglobina en relación con la dosificación convencional y la dosificación diaria de bajo nivel con EPO; la figura 14 es una representación gráfica que compara los niveles de EPO en suero después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir, administración de una sola dosis de 800 lU/kg subcutánea de EPO, (ii) inyecciones de EPO diarias de bajo nivel de 25 lU/kg/día, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosis como se contempla por la presente invención, es decir, una primera exposición a 800 lU/kg seguido por una segunda exposición a 25 lU/kg/día de EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, con todos los esquemas de dosificación produciendo un pico en EPO tras la dosificación regresando posteriormente a niveles endógenos en aproximadamente 5-7 días; la figura 15 es una representación gráfica que compara los niveles de reticulocito después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir, administración de una sola dosis de 800 lU/kg subcutánea de EPO, (ii) inyecciones de EPO diarias de bajo nivel de 25 lU/kg/día, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como se contempla por la presente invención, es decir, una primera exposición a 800 lU/kg seguido por una segunda exposición a 25 lU/kg/día de EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, con todos los esquemas de dosificación produciendo un pico en reticulocitos tras la dosificación regresando posteriormente a los niveles endógenos en aproximadamente 30 días; la figura 16 es una representación gráfica que compara los cambios en niveles de glóbulos rojos después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir, administración de una sola dosis 800 lU/kg subcutánea de EPO, (ii) inyecciones de EPO diarias de bajo nivel de 25 lU/kg/día, y (¡ii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como se contempla por la presente invención, es decir, una primera exposición a 800 lU/kg seguido por una segunda exposición a 25 lU/kg/día de EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, mostrando que la dosificación de conformidad con esta modalidad del segmento de dosificación produjo un incremento importante en el conteo de glóbulos rojos con relación a la dosificación convencional y a la dosificación diaria de bajo nivel de EPO; la figura 17 es una representación gráfica que compara los cambios en niveles de hemoglobina después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir administración de una sola dosis de 800 lU/kg subcutánea de EPO (ii) inyecciones de EPO diarias de bajo nivel de 25 lU/kg/día, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como se contempla por la presente invención, es decir una primera exposición a 800 lU/kg seguido por una segunda exposición a 25 lU/kg/día de EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, mostrando que la dosificación de conformidad con esta modalidad del segmento de dosificación produjo un incremento importante en la hemoglobina con relación a la dosificación convencional y dosificación diaria de bajo nivel con EPO; la figura 18 es una representación gráfica que compara los niveles de EPO en suero después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir, administración de una sola dosis de 800 lU/kg subcutánea de EPO, (ii) inyecciones de EPO diarias de bajo nivel de 50 lU/kg/día, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como se contempla por la presente invención, es decir, una primera exposición a 800 lU/kg seguido por una segunda exposición a 50 lU/kg/día de EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, mostrando que todos los esquemas de dosificación produjeron un pico en EPO tras la dosificación regresando posteriormente a niveles endógenos en aproximadamente 5-7 días; la figura 19 es una representación gráfica que compara los niveles de reticulocito después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir, administración de una sola dosis de 800 lU/kg subcutánea de EPO (ii) inyecciones de EPO diarias de bajo nivel de 50 lU/kg/día, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como se contempla por la presente invención, es decir, una primera exposición a 800 lU/kg seguido por una segunda exposición a 50 lU/kg/día de EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, mostrando que todos los esquemas de dosificación produjeron un pico en reticulocitos tras la dosificación, y además, que la dosificación de conformidad con esta modalidad del segmento de dosificación produjo un segundo pico en los niveles de reticulocito en aproximadamente 30 días; la figura 20 es una representación gráfica que compara los cambios en los niveles de glóbulos rojos después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir, administración de una sola dosis de 800 lU/kg subcutánea de EPO (ii) inyecciones de EPO diarias de bajo nivel de 50 lU/kg/día, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como se contempla por la presente invención, es decir, una primera exposición a 800 lU/kg seguido por una segunda exposición a 50 lU/kg/día de EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, mostrando que la dosificación de conformidad con esta modalidad del segmento de dosificación produjo un incremento importante en el conteo de glóbulos rojos con relación a la dosificación convencional y dosificación diaria de bajo nivel de EPO; la figura 21 es una representación gráfica que compara los cambios en niveles de hemoglobina después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir, administración de una sola dosis de 800 lU/kg subcutánea de EPO (ii) inyecciones de EPO diarias de bajo nivel de 50 iU/kg/día, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad de un segmento de dosificación como se contempla por la presente invención, es decir una primera exposición a 800 lU/kg seguido por una segunda exposición a 50 lU/kg/día de EPO en los días 4-16 después de la primera exposición, mostrando que la dosificación de conformidad con esta modalidad del segmento de dosificación produjo un incremento importante en hemoglobina con relación a la dosificación convencional y dosificación diaria de bajo nivel con EPO; y ia figura 22 es una representación gráfica que muestra el cambio en los niveles de hemoglobina después de (i) dosificación convencional con EPO, es decir, administración de dosis de 600 lU/kg subcutánea de EPO semanalmente durante 4 semanas, (ii) 1800 lU/kg de EPO en la semana 5 y de nueva cuenta en la semana 8, y (iii) dosificación de conformidad con una modalidad del régimen de dosificación en combinación de la invención, es decir, un segmento de dosificación de una primera exposición a 600 lU/kg de EPO en la semana 5 y una segunda exposición a 1200 lU/kg en la semana 6 repitiendo el segmento de dosificación en las semanas 8 (600 lU/kg de EPO) y 9 (1200 lU/kg), mostrando que mientras la hemoglobina iniciaba la declinación en la semana 6 para los dosificados convencionalmente, la hemoglobina se mantenía en un estado elevado para los dosificados de conformidad con el régimen de dosificación en combinación de la presente.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Las modalidades de la presente invención descritas a continuación no pretenden ser exhaustivas o limitar la invención a las modalidades particulares descritas en la siguiente descripción detallada.

Preferiblemente, las modalidades se describen de manera que otros expertos en la técnica puedan entender los principios y prácticas de la presente invención. La presente invención proporciona un régimen de dosificación en combinación para EPO que no sólo puede estimular la producción de reticulocitos, sino también puede sostener sorprendentemente los neocitos que se desarrollan de los mismos de manera que una porción sustancial de los neocitos maduren en los glóbulos rojos. Como tal, el régimen de dosificación de la presente puede proporcionar un incremento inicial en el conteo de glóbulos rojos total y la concentración de hemoglobina mayor al logrado por medio de la administración de una sola dosis convencional de EPO. Además, el régimen de dosificación en combinación de la presente puede someterse a ciclos, o repetirse, para mantener sustancialmente este incremento inicial sorprendentemente no por medio de un programa de dosificación más riguroso al convencional, dosificación una vez por semana, sino de hecho, con una mayor longitud de tiempo entre los segmentos de dosificación. De hecho, la funcionalidad farmacológica recientemente descubierta de EPO descrita en la presente puede tomar ventaja de una amplia variedad de formas, proporcionando así una gran cantidad de flexibilidad para que el médico adapte el tratamiento de conformidad con la combinación de dosificación de la presente para ajustarse a cualesquiera necesidades o deseos del sujeto particular. Más particularmente, los solicitantes han descubierto sorprendentemente en la actualidad que EPO parece al menos ayudar en algo al mantenimiento de neocitos mientras maduran en los glóbulos rojos. Aunque no se soportan mediante el entendimiento convencional de la actividad farmacológica de EPO, los solicitantes sin embargo han exigido datos que soporten esta actividad recientemente descubierta, algo de la cual se muestra en las figuras 6-22 de la solicitud de la presente. De hecho, el entendimiento farmacológico convencional no proporciona bases paras esta actividad recientemente descubierta debido a que en la actualidad no se ha comprendido que haya cualesquiera receptores de EPO en reticulocitos o neocitos, haciéndolo más sorprendente e inesperado. Tomando ventaja de esta actividad recientemente descubierta se proporciona muchas nuevas rutas para el uso terapéutico de EPO, y cualquiera de dicho uso, que se basa en la exposición episódica o continua de reticulocitos y neocitos a EPO para la mejora de su supervivencia y maduración en glóbulos rojos maduros, está considerado dentro del alcance de la presente invención. Una ventaja ejemplar que puede proporcionarse por medio de la dosificación de conformidad con este nuevo descubrimiento, es decir, en apoyo al mantenimiento y maduración de reticulocitos y neocitos, es que los incrementos en conteos de glóbulos rojos y/o concentración de hemoglobina totales que puede proporcionarse puede mantenerse, o de otra manera manejarse, por medio de esquemas de dosificación menos rigurosos y más flexibles que los esquemas de dosificación convencionales para EPO. Los esquemas de dosificación convencionales, que se basan en la farmacología convencional sugieren que EPO actúa para estimular la dedicación de progenitores al ciclo eritroide. Esta actividad recientemente descubierta de EPO, acoplada con el conocimiento de que los glóbulos rojos maduros típicamente viven alrededor de 120 días, permite una dosificación mucho menos rigurosa de EPO, mientras proporciona incrementos incluso mejores o similares en el conteo de glóbulos rojos y/o concentración de hemoglobina totales. La presente invención de esta manera proporciona un régimen de dosificación en combinación de EPO que, por medio de la administración de por lo menos un segmento de dosificación, estimula la dedicación de progenitores para volverse reticulocitos y neocitos y posteriormente ayudar en el mantenimiento y maduración de los mismos a medida que se desarrollan en los glóbulos rojos maduros. El término "segmento de dosificación" se refiere a un programa de dosificación que incluye una exposición inicial a EPO en donde la exposición es efectiva para estimular un incremento que se puede medir en la producción de reticulocitos, aunque ligero, ese incremento que se puede medir, seguido por una segunda explosión efectiva para sostener los reticulocitos y neocitos y para ayudar a la maduración de los mismos en glóbulos rojos maduros. Ya que los reticulocitos, una vez introducidos en la corriente sanguínea, se espera que maduren en neocitos en aproximadamente 2 días y se cree que los neocitos inician su procedimiento de maduración iniciando al menos aproximadamente 10-15 días después de la introducción de los reticuiocitos en la corriente sanguínea, la segunda exposición se desea y más ventajosamente se inicia alrededor de 3 a aproximadamente 10 días después del cese de la primera exposición. Además, ya que se cree que la exposición de EPO, siendo un EPO nativo o EPO exógenamente administrado, puede requerirse con el fin de sostener la supervivencia de los neocitos durante este periodo de maduración, la segunda exposición es deseable y se inicia más ventajosamente no más de alrededor de 10 días después del cese de la primera exposición y puede además ventajosamente sostenerse, ya se mediante administración repetida o administración de un EPO de acción prolongada, u otra exposición continua a EPO, es decir por medio de un parche, o implante, durante al menos alrededor de 7 días y hasta al menos alrededor de 15 días.

Como se usa en la presente, el término "exposición" tiene por objeto indicar una dosis única, dosis individuales repetidas o dosificación que se pueda proveer de manera relativamente continua después de una administración única por ejemplo de una EPO de acción prolongada, aplicación, por ejemplo de un parche transdérmico que contenga EPO, o implantación de un implante de EPO. Es decir, el modo particular de administración de la dosis, y de hecho la cantidad de la misma, no es crítica para la práctica del presente segmento o régimen de dosificación. Todo lo que se requiere es administrar una primera exposición en cualquier cantidad y de cualquier manera que sea eficaz para estimular la producción de reticulocitos, seguido por la administración de una segunda exposición en cualquier cantidad y de cualquier manera eficaz para realzar el mantenimiento de la maduración de los reticulocitos y neocitos en los glóbulos rojos maduros. Además, se puede utilizar cualquier modo de administración para cualquier exposición, incluyendo aquéllas actualmente conocidas y aquéllas que se puedan desarrollar en lo futuro. Además, el término "exposición" se refiere a la administración de una dosis de EPO a un paciente que se va distinguir de exposiciones que un paciente pueda tener a sus propios niveles nativos de EPO endógena. Los expertos en la técnica son fácilmente capaces de determinar las cantidades y maneras apropiadas de exposición en cada caso. Dicho esto y solamente con un propósito de proveer guía adicional y no estando innecesariamente limitados a lo mismo, las pautas terapéuticas generales sugieren que los sujetos tendrían deseablemente una concentración de hemoglobina por lo menos superior a aproximadamente 9 g/dl, y las dosificaciones de EPO capaces de proveer tal nivel de hemoglobina son apropiadas y son determinadas de manera rápida y fácil por los expertos en la técnica. En la técnica se entiende generalmente que los niveles elevados de hemoglobina superiores a las normas actuales de la medicina clínica pueden estar asociados en algunos casos con el riesgo incrementado de eventos trombovasculares al paciente. Por lo tanto, los expertos en la técnica apreciarán que se deben monitorear regularmente los niveles de hemoglobina a través de cualquier régimen de tratamiento con EPO. Siendo así, la cantidad de EPO a administrar en cualquier exposición particular de cualquier segmento dado de dosificación está limitada solamente por cuestiones de seguridad del paciente y se puede administrar cualquier cantidad de EPO por cada exposición, segmento de dosificación o régimen de dosificación en combinación, siempre que no se manifiesten sustancialmente efectos tóxicos debidos a la administración de EPO. Sin embargo, se cree que, aunque la estimulación de reticulocitos tras al administración de la primera exposición de un segmento de dosis es sensible a la dosis, se puede alcanzar la saturación de dosis a dosis mayores a aproximadamente 2400 lU/kg. Así, aunque no se puede hacer algún daño, no se puede ver beneficio adicional, si se administra una primera exposición superior a esta cantidad. Si solamente con propósitos económicos, entonces, la primera exposición de EPO en un segmento de dosificación puede proveer de aproximadamente 150 lU/kg a aproximadamente 2400 lU/kg de EPO, o preferiblemente, de aproximadamente 600 lU/kg a aproximadamente 1200 lU/kg de EPO. Como se menciona anteriormente, se puede proveer la exposición en cualquier formato de dosificación conocido, o recientemente desarrollado. Dicho eso, puesto que el resultado deseado de la primera exposición es la estimulación de la cantidad máxima de reticulocitos y puesto que se cree que tal estimulación es dependiente de la dosis, se puede proveer la primera exposición de EPO deseablemente en un formato que pueda proveer la exposición de manera sustancialmente instantánea, por ejemplo tal como una inyección, sea por vía cutánea, intramuscular o intraperitoneal. Similarmente y aunque se cree que mientras mayor sea la segunda exposición de EPO administrada en un segmento de dosificación, más prolongada es la duración de la elevación de los niveles de EPO en la sangre y mayor es el impacto en el índice de supervivencia y de maduración de los neocitos en los glóbulos rojos, y se espera que ocurra la saturación de dosis a exposiciones que provean más de aproximadamente 2400 lU/kg de EPO. Las cantidades adecuadas de EPO para su administración como segunda exposición de segmento de dosis puede ser por lo tanto de aproximadamente 600 lU/kg a aproximadamente 2400 lU/kg de EPO, o preferiblemente de aproximadamente 900 lU/kg a aproximadamente 1500 lU/kg de EPO. Como se menciona anteriormente, los solicitantes han descubierto sorprendentemente que esta segunda exposición de EPO sincronizada en administración para coincidir con la maduración de reticulocitos y/o neocitos a glóbulos rojos maduros, puede ayudarlos a hacer lo mismo. La investigación de los solicitantes sugiere además que la duración de exposición de esta etapa puede ser tan importante como el tamaño conjunto, o incluso más, de la dosis misma a la cual se expone los reticulocitos/neocitos. Siendo así, se puede proveer la segunda exposición de manera ventajosa y deseable como exposiciones múltiples de bajo nivel, por ejemplo menores a aproximadamente 100 lU/kg/día, o menos de aproximadamente 50 lU/kg/día, o incluso menores a aproximadamente 25 lU/kg/día, según se puedan proveer, por ejemplo mediante inyecciones subcutáneas, parche transdérmico, implante, administración de una EPO de acción prolongada y similares. Se conocen muchas EPO de acción prolongada y están comercialmente disponibles y se pueden usar cualesquiera de éstos. Cada segmento de dosificación administrado de acuerdo con el presente régimen de dosificación en combinación puede proveer un incremento dependiente de la dosis en la concentración de reticulocitos mediante la primera exposición, como se puede esperar basándose en el entendimiento farmacológico convencional de la EPO. Cada segmento de dosificación puede ayudar también sorprendentemente al mantenimiento y la maduración de un porcentaje sustancial de reticulocitos y neocitos a glóbulos rojos maduros, resultado que no se espera, predecible basándose en el buen criterio convencional, ni visto en realidad después de una dosis convencional, por ejemplo una dosis subcutánea única de EPO. Aunque ventajosa en sí y de por sí, este índice de maduración realzado de los neocitos se puede explotar además para proveer ventajas incluso adicionales. Es decir, puesto que la maduración realzada de los neocitos puede producir números incrementados de glóbulos rojos maduros, hay más flexibilidad para dosificar EPO para mantener los glóbulos rojos maduros. Esto es en contraste con los regímenes actuales que se enfocan en el uso de dosis semanales grandes de EPO para estimular continuamente los reticulocitos. También, si se desea o requiere un aumento o una disminución de recuento total de glóbulos rojos y/o de la concentración de hemoglobina, se puede variar por consiguiente la administración del segmento o de los segmentos de dosificación. Siendo así, se puede adaptar el régimen de dosificación en combinación de la presente invención a las necesidades o los deseos particulares de un sujeto. Ventajosamente entonces, se puede repetir el segmento de dosificación después de un intervalo de tiempo apropiado para efectuar el resultado deseado, o por lo menos después de aproximadamente 2 semanas, o incluso aproximadamente 4 semanas y, de hecho, la repetición del segmento de dosificación después de aproximadamente 8 semanas puede ser suficiente en algunos casos para mantener el aumento de recuento total de glóbulos rojos y/o la hemoglobina, provisto por el segmento de dosificación inmediatamente precedente. Similarmente, se puede repetir el segmento de dosificación tantas veces como se desee o requiera para proveer un régimen de dosificación en combinación capaz de abarcar cualquier periodo de tratamiento deseado y el número de repeticiones no está restringido de manera alguna. Como se usa en la presente, "eritropoyetina" o "EPO" incluirá aquellos polipéptidos y proteínas que tengan la actividad biológica de la eritropoyetina humana recombinante (r-HuEPO), es decir, se unen al receptor de EPO y estimulan finalmente un aumento de la producción de hemoglobina. El término EPO, como se usa en la presente, se refiere también a análogos de eritropoyetina, isoformas de eritropoyetina, imitaciones de eritropoyetina, fragmentos de eritropoyetina, proteínas híbridas de eritropoyetina, proteínas de fusión, oligómeros y multímeros de los anteriores, homólogos de los anteriores, variantes de patrón de glicosilación de los anteriores, incluyendo EPO pegilada, muteínas de los anteriores y además, independientemente del método de síntesis de fabricación de los mismos incluyendo, pero no limitados a los mismos, métodos recombinantes (ya sea que se produzcan a partir de ADNc o ADN genómico), sintéticos, transgénicos y de genes activados, y además aquellas moléculas de EPO que contienen las modificaciones secundarias enumeradas anteriormente. Los métodos de diseño y sintetización, por ejemplo las imitaciones de péptido, son bien conocidas por los expertos en la técnica y se describen, por ejemplo, en las patentes de E.U.A. Nos. 4,833,092, 4,859,765; 4,853,871 y 4,863,857.

Las moléculas de EPO particularmente preferidas son aquéllas que son capaces de estimular la eritropoyesis en un mamífero. Algunos ejemplos específicos de eritropoyetina incluyen Epoetin alfa (EPREX®, ERYPO®, PROCRIT®), así como proteína estimuladora de la eritropoyesis (NESP™, ARANESP™, darbepoetina alfa) y análogo hiperglicosilado de eritropoyetina humana recombinante (Epoetin), tal como las descritas en la solicitud de patente europea EP640619, así como CERA™, análogos de eritropoyetina humana (tales como las proteínas de fusión de albúmina de suero humano, descritas en la solicitud de patente internacional WO 99/66054, mutantes de eritropoyetina descritos en la solicitud de patente internacional WO 99/38890, eritropoyetina omega, la cual se puede producir a partir del fragmento de restricción Apa I del gen de eritropoyetina humana descrito en la patente de Estados Unidos 5,688,679, eritropoyetina humana glicosilada alterada descrita en la solicitud de patente internacional WO 99/11781 y EP1064951 , y análogos de eritropoyetina conjugada con PEG descritos en los documentos WO 98/05363, WO 01/76640, o la patente de Estados Unidos 5,643,575. Se describen ejemplos específicos de líneas celulares modificadas mediante la expresión de eritropoyetina humana endógena en la solicitudes de patente internacional WO 99/05268 y WO 94/12650. Una forma preferida de EPO es la EPO humana recombinante purificante (r-HuEPO), formulada y distribuida actualmente bajo las marcas de EPREX®, ERYPO®, PROCRIT® o ARANESP™.

Se contemplan también formas de acción prolongada de EPO y, de hecho, se pueden preferir en algunas modalidades de la presente invención para su administración como la segunda exposición en un segmento de dosificación. Como se usa en la presente, una "EPO de acción prolongada" incluye composiciones y formulaciones de EPO de liberación sostenida con vida media circulante incrementada, lograda típicamente mediante modificaciones que reducen la inmunogenicidad o alteran la velocidad de eliminación. Se incluye también la EPO encapsulada en microesferas poliméricas. Los ejemplos de "EPO de acción prolongada" incluye, pero no se limitan a los mismos, conjugados de eritropoyetina con polietilenglicol "PEG), expuestos en la publicación PCT WO 2002049673 (Burg et al.), EPO modificada con PEG expuesta en la publicación PCT WO 02/32957 (Nakamura et al.), conjugados de glicoproteínas que tienen actividad eritropoyética y que tienen por lo menos una porción carbohidrato oxidada enlazada covalentemente a un polímero no antigénico, expuestos en la publicación PCT WO 94/28024 (Chyi et al.), y otras moléculas de PEG-EPO que se preparan usando SCM-PEG, SPA-PEG y SBA-PEG. Las porciones polietilenglicol son porciones metoxipolietilenglicol (mPEG). Las porciones se añaden preferiblemente usando derivados de succinimidiléster de las especies de metoxipolietilenglicol. En un ejemplo un derivado preferido de succinimidiléster de una especie de metoxipolietilenglicol incluye: succinimidilésteres de polietilenglicol carboximetilado (SCM-PEG) de la siguiente fórmula: (R es alquilo de C-i-ß,' n es un entero) SCM-PEG derivados de succinimidilo de ácido poli(etilenglicol) propiónico (SPA-PEG) de la siguiente fórmula, en donde R es alquilo C-?-8 y n es un entero, (R-(OCH2CH2)n-O-CH2CH2-CO-OSu); Y derivados de succinimidilo de ácido poli(etilenglicol)butanóico (SBA-PEG) de la siguiente fórmula, en donde R es alquilo de C-?-8 y n es un entero, Los métodos para preparar SCM-PEG, SPA-PEG y SBA-PEG son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 5672662 de Harris et al. describe esteres activos de ácidos PEG y polímeros relacionados que tienen una porción única de ácido propiónico o butanoico y no otros enlaces de éster. Se ha descrito la preparación de SCM-PEG, por ejemplo en Veronese et al. (1989), Journal of Controlled Reléase, 110:145-54. El uso del término "SPA-PEG" incluye mPEG-SPA (propionato de metoxi-PEG-succinimidilo) y el uso del término "SBA-PEG" incluye mPEG- SBA (butanoato de metoxi-PEG-succinimidilo). Los polímeros activados, tales como SBA-PEG y SPA-PEG, son comercialmente disponibles en ambos casos y se pueden obtener, por ejemplo de Néctar, Inc., Huntsville, Alabama, E.U.A.

El uso del término "SCM-PEG" (R-(OCH2CH2)n-O-CH2-CO-OSu (R es alquilo de C -8 y n es un entero) incluye metoxi-PEG-succinimidiléster de PEG carboximetilado (mPEG-SCM). De acuerdo con Greenwald et al., "la reacción de SCM-PEG con proteína formaría una amida estable, pero se ha informado acerca de la hidrólisis que t1/2 (Nektar, Huntsville, AL, Jan 1996 catalog, p 46) como <1 min a pH 8, reduciendo así al mínimo su utilidad para la modificación de proteína en solución acuosa..." (Bioconjugate Chem., 7 (6), 638-641 , 1996). Actualmente, el SCM-PEG puede ser sintetizado según especificaciones del cliente, por ejemplo por Delmar Chemicals, Inc, Québec, Canadá. SCM-PEG, SPA-PEG y SBA-PEG reaccionan principalmente con los grupos amino primarios de lisina y el grupo amino N-terminal. Se muestran a continuación las reacciones con EPO para SCM-PEG5K, SPA-PEG5K y SBA-PEG5K, respectivamente, en donde OSu representa n-hidroxisuccinimida, y n es 1-4, n es un entero: (SCM-PEG) CH3O-(OCH2CH2)N-O-CH2-CO-OSU+EPO (NH2)M ?CH3O-(OCH2CH2)N-O-CH2-CO-NH-EPO (SPA-PEG) CH3O-(OCH2CH2)N-O-CH2CH2-CO-OSU+EPO (NH2)M ?CH3O-(OCH2CH2)N-O-CH2CH2-CO-NH-EPO (SBA-PEG) CH3O-(OCH2CH2)N-O-CH2CH2CH2-CO-OSU+EPO (NH2)M ?CH3O-(OCH2CH2)N-O-CH2CH2CH2-CO-NH-EPO El régimen de dosificación en combinación de la presente invención se puede administrar a cualquier sujeto en el cual es preferible un incremento inicial en el conteo total de glóbulos rojos en la sangre y/o la concentración de hemoglobina. Los sujetos también se pueden veneficiar del régimen de dosificación en combinación si es deseable o requerido el mantenimiento, o el manejo, del conteo total del glóbulos rojos en la sangre y/o la concentración de hemoglobina. Es decir, el régimen de dosificación en combinación se puede administrar profilácticamente para proporcionar un incremento en, o para mantener, o para manipular el conteo total de glóbulos rojos en la sangre y/o la hemoglobina en un sujeto antes de un evento anticipado, para impactar el conteo total de glóbulos rojos en la sangre y/o la concentración de hemoglobina. Los sujetos que se pueden veneficiar del régimen de dosificación no están particularmente limitados y pueden incluir tanto seres humanos como sujetos animales, y de preferencia pueden ser sujetos mamíferos. Como se describió antes con más amplitud, el régimen de dosificación en combinación que se describe en la presente no solamente puede estimular de manera sorprende e inesperada la producción de reticulocitos, sino también puede sostener una porción significativa de estos reticulocitos a medida que éstos se desarrollan en neocitos y por último, maduran como glóbulos rojos. También, se sugeriría que este efecto se puede sostener sometiendo a circulación el régimen de dosificación en incrementos de tiempos mayores que la dosificación convencional de EPO. De esta manera el régimen de dosificación se puede administrar adecuadamente a cualquier sujeto que tenga necesidad de dicho tratamiento o a cualquier sujeto que anticipe una caída en el conteo total de glóbulos rojos. De esta manera también se proporcionan métodos para tratar a un sujeto en el que se requiera o se desee un aumento en el conteo total de glóbulos rojos y/o la concentración de hemoglobina, así como para prevenir que un sujeto sufra de una reducción no deseable en el conteo total de glóbulos rojos y/o en la concentración de hemoglobina. Existen muchas situaciones u ocurrencias que pueden llevar a que un sujeto tenga menos del conteo óptimo de glóbulos rojos y/o la concentración de hemoglobina, y cualquiera de estos se pueden tratar de manera apropiada, o se pueden prevenir sustancialmente, mediante el presente método. Hablando generalmente, cualquier condición u ocurrencia que pueda resultar en una hipoxia episódica o crónica del tejido se trata de manera apropiada con el presente método, y ejemplos de estos incluyen el ejercicio físico, los viajes o la latitud alta, la pérdida de sangre, una dieta no apropiada, enfermedad o administración de otros agentes terapéuticos, tales como agentes quimioterapéuticos, etc. Debido a que el método de la presente invención es tan efectivo en aumentar y sostener el conteo total de glóbulos rojos en la sangre y/o la concentración de hemoglobina, se espera que sea particularmente benéfico cuando se aplique a sujetos que sufran de hipoxia aguda y/o crónica, tales como los sujetos que han sufrido de una lesión traumática que resulta de la pérdida de grandes cantidades de sangre, aquellos pacientes que sufren quimioterapia y similares. Aunque el EPO y los métodos para dosificar el mismo, ya se encuentran disponibles comercialmente, la conveniencia de la administración del presente segmento de dosificación, o la práctica de los presentes métodos, puede mejorar adicionalmente proporcionando los componentes que se requieren para hacerlo en forma de un equipo, y dicho equipo también está contemplado dentro del alcance de la presente invención. Es preferible que un equipo para administrar el segmento de dosificación o para practicar el presente método incluya por lo menos un primer segmento de dosificación de EPO que comprende una primera unidad de dosis de EPO que es capaz de proporcionar una exposición a EPO efectiva para aumentar por lo menos marginalmente la producción de reticulocitos. Como se mencionó antes, la primera exposición puede comprender cualquier dosis en cualquier formato de dosis deseado, pero puede proporcionar resultados óptimos si se proporciona en un modo de administración de bolo de rápida actuación, como por ejemplo, una jeringa adaptada para la administración subcutánea. También se puede proporcionar una segunda unidad de dosis de EPO, que comprenda una cantidad y/o forma de dosis de EPO diferente de la primera, y que sea capaz de proporcionar una exposición a EPO por lo menos marginalmente efectiva, para sostener los reticulocitos cuando éstos maduren en glóbulos rojos. En forma similar a la primera exposición, la segunda explosión puede comprender cualquier dosis en cualquier formato de dosificación deseado. Sin embargo, como también a se discutió antes, los resultados óptimos se pueden proporcionar si la segunda exposición se provee en un formato que proporcione una exposición relativamente sostenida a EPO, como por ejemplo, múltiples jeringas que estén adaptadas para dosis subcutáneas diarias de bajo nivel, múltiples formas de dosificación oral para la administración diaria, un EPO de acción prolongada en cualquier formato de dosis, un parche transdérmico, etc. Las instrucciones podrían incluirse en cualquier formato, que indiquen de preferencia que los resultados de la administración de los dos segmentos de dosificación se podrían optimizar si la segunda exposición se inicia en aproximadamente 3 días, pero no más de 10 días después de la primera exposición. Se puede proporcionar cualquier número de segmentos de dosificación en conexión con el equipo, cada segmento de dosificación comprendiendo la mima dosis o dosis diferente, o formatos de dosificación para cada exposición, de tal manera que un equipo individual puede estar provisto convenientemente para días, semanas o meses de tratamiento o prevención, según se desee o se requiera. Sin embargo, para sacar una completa ventaja de la flexibilidad provista por el presente régimen de dosificación en combinación, de preferencia los equipos pueden estar provistos con componentes que requieran administrar un solo segmento de dosificación, de tal manera que múltiples equipos, que comprendan cualquier segmento de dosificación, se puedan combinar para que los componentes lleven cualquier régimen de dosificación en combinación deseado o requerido, según sea determinado antes del tratamiento con el segmento de dosificación inicial, o después de la administración y el análisis del resultado del mismo. Los equipos pueden incluso optimizarse adicionalmente para sujetos que tengan una variedad de etiología diferente. Por ejemplo, se puede proporcionar un equipo que indique que es particularmente benéfico para pacientes que estén bajo tratamiento de quimioterapia, en cuyo caso, las instrucciones pueden indicar que el segmento de dosificación provisto en el mismo se repite, y la repetición de preferencia está indicada antes de cada sesión de quimioterapia. Los siguientes ejemplos se proporcionan para ¡lustrar la presente invención, y no deberán ser considerados como limitantes de la misma. Esta invención se entenderá mejor haciendo" referencia a los esquemas y ejemplos siguientes, pero los expertos en la técnica apreciarán fácilmente que éstos únicamente son ilustrativos de la invención que se describe de manera más completa en las reivindicaciones que siguen a continuación.

EJEMPLO COMPARATIVO 1 Una sola dosis subcutánea de 40,000 IU EPO (EPREX®, Ortho Biotech, Toronto, ON) se administró a sujetos sanos (n=8). Se tomaron muestras de suero durante 29 días y se probaron para ver los niveles de EPO así como para detectar los reticulocitos y la concentración total de hemoglobina y glóbulos rojos en la sangre. Como se puede ver en la figura 2, los niveles de EPO en el suero subieron con la dosificación y luego regresaron a los niveles endógenos en aproximadamente 10 días. También, como se le puede ver en la figura 3, los niveles de reticulocitos subieron aproximadamente 10 días después de la administración y regresaron a la línea de base cerca del día 15. Finalmente, como se puede ver en las figuras 4 y 5, respectivamente, no hay un aumento sostenido en el conteo total de glóbulos rojos y en la concentración de hemoglobina después de una sola administración subcutánea de una dosis terapéutica típica de EPO.

EJEMPL0 1 Para este estudio se utilizaron tres grupos de perros (n=3 en cada grupo). Un grupo recibió una dosis convencional de EPO, es decir, una sola dosis subcutánea de 400 lU/kg el primer día de dosificación, un segundo grupo recibió (25 IU/kg)dosis diarias subcutáneas de bajo nivel EPO en los días 4-161 de la prueba, y un tercer grupo recibió un segmento de dosificación de acuerdo con una modalidad de la presente invención, es decir, una primera exposición que comprendía una sola dosis subcutánea de 400 lU/kg de EPO el primer día de dosificación, seguida por una segunda exposición que comprendía dosis diarias subcutáneas de 25 lU/kg de EPO los días 4-16 de prueba. Se tomaron diariamente muestras del suero y se probaron para detectar el EPO, los reticulocitos, y los niveles de hemoglobina así como el conteo total de glóbulos rojos en la sangre.

Los resultados de este ejemplo se muestran en las figuras 6 a 9, que muestran claramente que el segmento de dosificación de acuerdo con esta modalidad de la presente invención, produjo un aumento mayor tanto en el conteo total de glóbulos rojos como en la concentración de la hemoglobina, en comparación con las dos dosificaciones convencionales así como la dosificación diaria a bajo nivel. Se cree que, si este segmento de dosificación fuera sometido a ciclo después de por lo menos 14 días, o incluso después de hasta por lo menos 32 días, el aumento producido por la administración del primer segmento de dosificación podría mantenerse sustancialmente.

EJEMPLO 2 Se utilizaron en este estudio tres grupos de perros (n=3 en cada grupo). Un grupo recibió una dosificación convencional de EPO, es decir, una sola dosis subcutánea de 400 lU/kg el primer día de dosificación, un segundo grupo recibió dosis subcutáneas diarias de bajo nivel (50 lU/kg) de EPO los días 4-16 de la prueba, y un tercer grupo recibió un segmento de dosis de acuerdo con una modalidad de la presente invención, es decir, una primera exposición que comprendía una sola dosis subcutánea de 400IU/kg de EPO el primer día de dosificación, seguida por una segunda exposición que comprendía dosis subcutáneas diarias de 50 lU/kg de EPO los días 4-16 de prueba. Se tomaron diariamente muestras del suero y se probaron para detectar el EPO, los reticulocitos, y los niveles de hemoglobina así como el conteo total de glóbulos rojos. Los resultados de este ejemplo se muestran en las figuras 10-13, que muestran claramente que el segmento de dosificación de acuerdo con esta modalidad de la presente invención produjo un aumento mayor tanto en el conteo total de glóbulos rojos como en la concentración de hemoglobina, en comparación con las dos dosificaciones convencionales, así como la dosificación diaria de bajo nivel. Se cree que, si este segmento de dosificación fuera sometido a ciclo después de por lo menos aproximadamente 14 días, o incluso hasta por lo menos aproximadamente 32 días, el aumento producido por la administración del primer segmento de dosificación se podría mantener sustancialmente.

EJEMPLO 3 En este estudio se utilizaron tres grupos de perros (n=3 en cada grupo). Un grupo recibió una dosis convencional de EPO, es decir una sola dosis subcutánea de 800 lU/kg el primer día de dosificación, un segundo grupo recibió dosis subcutáneas diarias de bajo nivel (25 lU/kg) de EPO los días 4-16 de la prueba, y un tercer grupo recibió un segmento de dosificación de acuerdo con una modalidad de la presente invención, es decir, una primera exposición que comprendía una sola dosis subcutánea de 800 lU/kg de EPO el primer día de dosificación, seguida por una segunda exposición que comprendía dosis subcutáneas diarias de 25 lU/kg de EPO los días 4-16 de la prueba. Se tomaron diariamente muestras del suero y se probaron para detectar EPO, los reticulocitos y los niveles de hemoglobina, así como el conteo total de glóbulos rojos. Los resultados de este ejemplo se muestran en las figuras 14-17, que claramente demuestra que el segmento de dosificación de acuerdo con esta modalidad de la presente invención produjo un mayor incremento tanto como en el conteo total de glóbulos rojos como en la concentración de hemoglobina, que las dos dosificaciones convencionales, así como la dosis diaria de bajo nivel. Se cree que, si este segmento de dosificación fuera sometido a ciclo después de por lo menos aproximadamente 14 días, o incluso después de por lo menos aproximadamente 32 días, se podría mantener sustancialmente el aumento producido por la administración del primer segmento de dosificación.

EJEMPLO 4 En este estudio se utilizaron tres grupos de perros (n=3 en cada grupo). Un grupo recibió una dosificación convencional de EPO, es decir, una sola dosis subcutánea de 800 lU/kg en el primer día de dosificación, un segundo grupo recibió dosis subcutáneas diarias de bajo nivel (50 lU/kg los días 4-16 de la prueba, y un tercer grupo recibió un segmento de dosis de acuerdo con una modalidad de la presente invención, es decir, una primera exposición que comprendía una sola dosis subcutánea de 800 lU/kg de EPO el primer día de dosificación, seguida por una segunda exposición que comprendía dosis subcutáneas diarias de 50 lU/kg de EPO los días 4-16 de la prueba. Se tomaron diariamente muestras del suero y se probaron para EPO, los reticulocitos y los niveles de hemoglobina, así como el conteo total de glóbulos rojos. Los resultados de este ejemplo se muestran en las figuras 18-21 , que muestran claramente que el segmento de dosificación de acuerdo con esta modalidad de la presente invención produjo un incremento mayor tanto en el conteo total de glóbulos rojos como en la concentración de hemoglobina en comparación con las dos dosificaciones convencionales, así como la dosificación diaria de bajo nivel. Se cree que, si este segmento de dosificación fuera sometido a ciclo después de por lo menos 14 días, o incluso después de hasta por lo menos 32 días se podría mantener sustancialmente el aumento producido por la administración del primer segmento de dosificación.

EJEMPLO 5 Tres grupos de tratamiento de perros (n=3 en cada grupo), recibieron dosificaciones convencionales de EPO (600 lU/kg/semana) durante 4 semanas. Después se detuvo la dosificación para el grupo A como un grupo de control, mientras que el grupo B recibió 1800 lU/kg EPO en la semana 5 y después en la semana 8 y el grupo C recibió un régimen de dosificación en combinación de acuerdo con la presente invención, que comprendía la administración de un primer segmento de dosificación de una primera exposición de 600 lU/kg de EPO en la semana 5 y una segunda exposición de 1200 lU/kg EPO en la semana 6, con el segmento de dosificación siendo repetido en este grupo en las semanas 8 y 9, es decir, una primer exposición de 600 lU/kg de EPO en la semana 8 y una segunda exposición de 1200 lU/kg en la semana 9. A todos los grupos se les midió la hemoglobina cada semana. Los resultados de este ejemplo se muestran en la figura 22. Como se puede ver, los niveles de hemoglobina en el grupo A declinaron naturalmente a los niveles endógenos, incluso después de la dosificación convencional de las dosis equivalentes para 4 semanas. En contraste, la hemoglobina se mantuvo en un estado elevado para el Grupo C, dosificada de conformidad con una modalidad del régimen de dosificación en combinación inventivo, no solamente entre segmentos de dosificación, sino también durante por lo menos aproximadamente 4 semanas después de la administración de la segunda exposición del último segmento de dosificación. Además, la figura 22 muestra que aunque el Grupo B, el cual recibió la misma dosis total que el Grupo C, mantuvo un nivel más alto de hemoglobina que aquel del Grupo A, el Grupo B no mantuvo una elevación tan alta de hemoglobina como el Grupo C, mostrando que el régimen de dosificación en combinación de la presente invención provee una mejor respuesta de hemoglobina que la administración de la misma dosis total a través de un régimen de dosificación diferente.

Aunque la especificación anterior enseña los principios de la presente invención, con ejemplos provistos para propósitos ilustrativos, se entenderá que la práctica de la invención abarca todas las variaciones habituales, adaptaciones y/o modificaciones que estén dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones y sus equivalentes.

Claims (40)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un régimen de dosificación en combinación de eritropoyetina que comprende administrar por lo menos un primer segmento de dosificación, dicho primer segmento de dosificación comprende una primera exposición a EPO efectiva para incrementar la producción de reticulocitos seguida de una segunda exposición a EPO efectiva para sostener los reticulocitos a medida que maduran en glóbulos rojos, en donde la administración de la segunda exposición inicia en aproximadamente 3 días pero no más de aproximadamente 10 días después de la primera exposición.

2.- El régimen de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el segmento de dosificación se repite para proveer un conteo de glóbulos rojos y/o concentración de hemoglobina total deseado durante un periodo deseado.

3.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la primera exposición comprende una inyección subcutánea, intramuscular, intravenosa o ¡ntraperitoneal de EPO.

4.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque la segunda exposición comprende una o más inyecciones subcutáneas diarias de EPO de menos de aproximadamente 100 lU/kg.

5.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque la segunda exposición comprende la aplicación de un parche transdérmico que comprende EPO.

6.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque la segunda exposición comprende la colocación de un implante que comprende EPO.

7.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque la segunda exposición comprende la administración de una EPO de acción prolongada.

8.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la primera exposición comprende una dosificación total de EPO diferente a la segunda exposición.

9.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque el conteo de glóbulos rojos y/o concentración de hemoglobina total se mantiene entre por lo menos dos segmentos de dosificación.

10.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque el segmento de dosificación se repite después de por lo menos aproximadamente 8 semanas después de la administración de la segunda exposición.

11.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque el segmento de dosificación se repite después de por lo menos aproximadamente 4 semanas después de la administración de la segunda exposición.

12.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 11 , caracterizado además porque el segmento de dosificación se repite después de por lo menos aproximadamente 2 semanas después de la administración de la segunda exposición.

13.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el segmento de dosificación se repite por lo menos aproximadamente 6 veces.

14.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque el segmento de dosificación se repite por lo menos aproximadamente 4 veces.

15.- El régimen de dosificación en combinación de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado además porque el segmento de dosificación se repite por lo menos aproximadamente 2 veces.

16.- Un método para mejorar la producción y mantenimiento de un conteo de glóbulos rojos maduros y/o concentración de hemoglobina deseado que comprende el paso de administrar por lo menos un primer segmento de dosificación que comprende una primera exposición a EPO efectiva para incrementar la producción de reticulocitos seguida de una segunda exposición a EPO efectiva para sostener los reticulocitos a medida que maduran en glóbulos rojos, en donde la administración de la segunda exposición inicia en aproximadamente 3 días pero no más de aproximadamente 10 días después de la primera exposición.

17.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque el segmento de dosificación se puede repetir para proveer un conteo de glóbulos rojos y/o concentración de hemoglobina total deseado durante un periodo deseado.

18.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque el método se utiliza para tratar a un sujeto que sufre de anemia.

19.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque la anemia es anemia crónica.

20.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque el método se utiliza para tratar a un sujeto sometido a quimioterapia.

21.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque el método se utiliza para tratar a un sujeto que ha sufrido una lesión traumática.

22.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque la primera exposición comprende una dosis de EPO superior a la dosis de EPO de la segunda exposición.

23.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque la primera exposición comprende una inyección subcutánea de EPO.

24.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque la segunda exposición comprende por lo menos dos inyecciones subcutáneas diarias de EPO de menos de aproximadamente 100 lU/kg.

25.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque la segunda exposición comprende la aplicación de un parche transdérmico que comprende EPO.

26.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque la segunda exposición comprende la colocación de un implante que comprende EPO.

27.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque la segunda exposición comprende la administración de una EPO de acción prolongada.

28.- El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque la administración de segmentos de dosificación posteriores mantiene el conteo de glóbulos rojos y/o concentración de hemoglobina total producido a través de un segmento de dosificación anterior.

29.- El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado además porque el segmento de dosificación se administra por lo menos aproximadamente 8 semanas después de la administración de la segunda exposición.

30.- El método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado además porque el segmento de dosificación se administra por lo menos aproximadamente 4 semanas después de la administración de la segunda exposición.

31.- El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado además porque el segmento de dosificación se administra por lo menos aproximadamente 2 semanas después de la administración de la segunda exposición.

32.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque el segmento de dosificación se administra por lo menos aproximadamente 6 veces.

33.- El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado además porque el segmento de dosificación se administra por lo menos aproximadamente 4 veces.

34.- El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado además porque el segmento de dosificación se administra por lo menos aproximadamente 2 veces.

35.- Un equipo que comprende por lo menos un primer segmento de dosificación de EPO, dicho primer segmento de dosificación comprende una primera unidad de dosificación de EPO capaz de proveer una exposición a EPO efectiva para incrementar la producción de reticulocitos, una segunda unidad de dosificación de EPO, que comprende una dosificación de EPO a una concentración inferior al primer segmento de dosificación y capaz de proveer una exposición a EPO efectiva para sostener los reticulocitos a medida que maduran en glóbulos rojos, y que comprende adicionalmente instrucciones que indican que la administración de la segunda exposición se iniciará en un momento el cual es en aproximadamente 3 días pero no más de aproximadamente 10 días después de la primera exposición.

36.- El equipo de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque las instrucciones indican adicionalmente que se puede repetir el segmento de dosificación.

37.- El equipo de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque las instrucciones indican adicionalmente que, para un sujeto sometido a quimioterapia, el segmento de dosificación se puede repetir de manera deseable junto con tratamientos de quimioterapia.

38.- El equipo de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque las instrucciones indican que el segmento de dosificación se repetirá después de por lo menos aproximadamente 8 semanas después de la administración de la segunda exposición.

39.- El método de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado además porque las instrucciones indican que el segmento de dosificación se repetirá después de por lo menos aproximadamente 4 semanas después de la administración de la segunda exposición.

40.- El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado además porque las instrucciones indican que el segmento de dosificación se repetirá después de por lo menos aproximadamente 2 semanas después de la administración de la segunda exposición.