CN1631418A - 一种治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎的药物及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎的药物及制备方法，属于中药及其制备方法领域。它主要是由下列重量份的原料药制成：盐补骨脂120～200份，炒白术120～200份，炒山药80～160份，茯苓80～160份，五倍子40～120份，秦皮40～120份，煨肉豆蔻40～120份，煨木香20～60份，吴茱萸20～60份，炙甘草20～60份。本发明药物的活性组分可以加入制备不同剂型时所需的各种常规辅料，如崩解剂、润滑剂、粘合剂等以常规的中药制剂方法制备成任何一种常用剂型，如丸剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液等。本发明具有补肾健脾、涩肠止泻之功效，适用于治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎。

Description

一种治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎的药物及制备方法

技术领域

本发明属于一种中药及其制备方法。

背景技术

目前伴随着社会的发展和人们生活水平的提高，人们生活节奏也不断加快，同时也会导致生活的不规律，脾胃功能失调，腹泻伴有持续性或反复性粘液血便、腹痛及不同程度的全身症状。特发性溃疡性结肠炎又称为非特异性溃疡性结肠炎，是一种原因不明的主要发生在结肠粘膜层的炎症性肠病，以溃疡糜烂为主，主要累及直肠、乙状结肠粘膜，向上扩展可至左半、右半结肠，甚至全结肠和回肠末端。本病多见于青、中年，其主要的临床表现有血性粘液便、腹痛、腹泻、里急后重等。本病可发生严重的并发症。因此研究一种高效、无毒的治疗药物，就显得非常重要，它对改善人民生活质量，提高工作效率，造福人类具有非常重要的意义。

发明内容

本发明提供一种治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎的药物及制备方法，以解决目前治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎疗效不好的问题。

结肠炎中医应属于“泄泻”、“肠癖”、“休息痢”等范畴。早在《内经》中就有相关记载。肾为先天之本，为胃之关，主司二便开合，且脾胃腐熟水谷与运化精微有赖于肾阳命火的温煦。若肾阳不足，命门火衰，则不能温养脾土，以至运化失常，每易引起久泻不愈之证。故《不居集》吴澄指出：“命门火衰；则阴寒独盛；丹田不暖，则尾闾不固。”汪昂《医方集解》亦指出：“久泻皆由肾命火衰，不能专责脾胃，故大补下焦元阳，使火胜土强，则能制水而不复妄行矣。”说明温肾助阳是涩肠止泻较重要的治疗方法。同时由于脾居中焦，职司运化，若脾失健运，不能腐熟水谷并运化精微，遂致泻泄之证。《景岳全书》张介宾指出：“泻泄之本，无不由于脾胃。”因而对于脾胃虚寒所致的泻痢日久，滑脱不禁者，其脾虚失运亦是其关键的病机之一。

结肠病变与先天不足、肾阳亏损、调理二便之职失调有关。其致病原因，有感受外邪、饮食所伤，七情不和及脏腑虚弱等，但主要关键在于脾肾功能失调，脾失健运，肾失固涩。慢性结肠炎大多病程长、病情缠绵难愈，尤其是溃疡性结肠炎，大便带粘液和脓血，患者十分痛苦，这些症状不是通过调理脾胃、健脾益肠就能解决的，以中医辩证和西医辨病相结合的“整体观念”为指导。  应补肾健脾、兼以益气、宽中、厚肠止泻、燮理阴阳，调整免疫功能，诱导炎症细胞调亡，减轻炎症反应，从而达到治疗结肠炎的目的。本方适合脾肾两虚的久治不愈的非特异性溃疡型结肠炎。

分析以上过程，本方以盐补骨脂、白术为君药，补骨脂其性温敛涩，益脾助阳，温脾止泻，可补肾阳以养脾土，使中阳充足，水谷腐熟，运化不息而泄泻自止。白术苦、甘温、入脾胃经。补脾燥湿，《珍珠囊》：“除湿益气，和中补阳，消疾逐水，生津止渴，止泻痢”。补骨脂以补肾为主，白术以补脾为长。二药合用，则一肾一脾，肾脾同治，相得益彰，温肾健脾，而有釜底抽薪之功。

臣药为炒山药、煨肉豆蔻、五倍子、茯苓、吴茱萸五味药。炒山药补脾胃，益肺肾，补而不滞，性平不燥，能补脾气而益胃阴，作用和缓，君药的辅助之品肉豆蔻味辛性温，归脾、胃、大肠经。性善温脾胃并涩肠止泻，行气消胀。五倍子固肾气，涩精止泻。《本草拾遗》：“治肠虚泻痢”吴茱萸温脾胃，以散阴寒。茯苓的作用一是健脾补中，二是利尿渗湿，肠道水分因而减少，使稀溏的大便变稠。与白术配伍，一健一渗，脾土健运、水湿可除。两药相辅相成，增强健中运化水湿之力。

秦皮为佐药，中医有″无湿不成泻″之说，感受湿邪，影响脾的运化，能导致腹泻，加以秦皮，苦涩寒，入肝、胆、大肠经。可清热燥湿，收涩止泻。

使药为炙甘草、煨木香二味。甘草甘平，入心肺脾胃经，具有益气补中，缓急止痛作用，与健脾补气的白术配伍，出自《太平惠民和剂局方》白术六一汤，起到相辅相成、互相发挥特长，增强补脾益气、缓急止痛下利等作用。大队的固涩、补益之品，易壅滞气机，且肠腑以通为补，以行为顺。酌配少量行气药木香，使涩中有行，有敛而不滞之妙。诸药合用共奏益肾健脾涩肠止泻之效，主要用于慢性溃疡性结肠炎中医辨证为脾肾两虚之证。

本发明药物组分的用量也是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量为在下述重量范围内都具有较好疗效：

盐补骨脂120～200份，炒白术120～200份，炒山药80～160份，茯苓80～160份，五倍子40～120份，秦皮40～120份，煨肉豆蔻40～120份，煨木香20～60份，吴茱萸20～60份，炙甘草20～60份。

优选为：

盐补骨脂160份，炒白术160份，炒山药120份，茯苓120份，五倍子80份，秦皮80份，煨肉豆蔻80份，煨木香40份，吴茱萸40份，炙甘草40份。

本发明药物活性组分的制备方法如下：

1)称取以上十味，其中盐补骨脂及1/3量的炒山药粉碎成细粉，备用；

2)炒白术、煨肉豆蔻、煨木香和吴茱萸加6倍量水，浸泡12小时，水蒸气蒸馏6小时，得挥发油与水提取液，水提取液及药渣备用；

3)称取2)所得挥发油8倍量的β-环糊精，置适当玻璃容器中，加入β-环糊精6倍量的水，于磁力加热搅拌器上，恒温搅拌至30℃，取上述挥发油，按1∶1比例用无水乙醇稀释后，滴入β-环糊精溶液中，恒温搅拌3小时，置4℃冰箱中冷藏24小时，抽滤，40℃干燥4小时，备用。

4)药渣与其余2/3量炒山药，茯苓、五倍子、秦皮、炙甘草等五味加6倍量水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，过滤。将滤液与上述提取挥发油后的水提取液合并，浓缩至相对密度为1.12的稀膏，加入乙醇使含醇量达50％，放置24小时，过滤，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.30～1.40稠膏，

5)将4)所得稠膏加入1)中所述细粉，混匀，60℃～80℃下干燥，加入3)中所述挥发油β-环糊精包合物。

本发明药物的活性组分可以加入制备不同剂型时所需的各种常规辅料，如崩解剂、润滑剂、粘合剂等以常规的中药制剂方法制备成任何一种常用剂型，如丸剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液等。

将步骤5)所得活性组分粉碎，制粒，干燥，装入胶囊，得到胶囊剂。

本发明具有补肾健脾、涩肠止泻之功效，适用于治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎。本发明药物用法用量：成人1.7g～4.0g/人.日。

具体实施方式

以下通过试验例来进一步阐述本发明药物的有益效果，这些试验例包括了本发明药物(以下简称慢结灵胶囊)的药效学试验及急性毒性试验和长期毒性试验。

试验例1慢结灵胶囊药效学研究

1.材料

1.1动物  昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22g，购自长春生物制品研究所动物室，合格证编号分别为10-1001。Wstar大鼠，体重180～200g雌性，125～155g，雌雄各半，购自解放军农牧大学动物室，合格证编号为10-5112。大耳白兔体重2.5～3.0kg，购自解放军农牧大学动物室，合格证编号为10-5113。

1.2药物  慢结灵胶囊内容物为棕色粉末，2.71g生药/g内容物，临床成人4粒/次，2次/日，0.34g/粒。批号20030308。由吉林大学药学院提供。柳氮磺吡啶片为上海福达制药有限公司，批号030407。固本益肠片为沈阳绿洲制药有限责任公司产品，批号20030304。补脾益肠丸为中国深圳三九医药股份有限公司产品，批号20030314。番泻叶购自吉林省中医中药研究院中药房，用开水浸泡24小时，制成20％浸剂。

1.3试剂盒  一氧化氮、考马斯亮兰蛋白、丙二醛和超氧化物歧化酶测定试剂盒南京建成生物工程研究所，批号20030701、20030630、20030318、20030702。分泌性免疫球蛋白A和免疫球蛋白G放射免疫药盒购自中国原子能科学研究院同位素研究所，肿瘤坏死因子和白细胞介素-2放射免疫试剂盒购自天津九鼎医学生物工程有限公司。T细胞亚群试剂盒购自深圳达科为生物技术有限公司。弗氏完全佐剂盒购自北京鼎国生物技术发展中心。

1.4仪器：美国COULTER流式细胞仪，上海752紫外可见分光光度计，日本日立高速冷冻离心机，中佳光电GC-2016γ放射免疫计数器。

1.5数据处理  试验数据以 X±SD表示，结果进行组间t检验。

2.方法和结果

2.1慢结灵胶囊对醋酸型溃疡性结肠炎的影响

取180～220g雌性大鼠72只，禁食12小时，不禁水，随机分6组，分别为正常对照组，模型组，阳性药组，慢结灵胶囊高、中、低剂量组。除正常对照组外，其余5组均灌胃番泻叶浸剂15ml/kg，每日一次，连续3日。禁食不禁水35小时，用20％氨基甲酸乙酯0.5g/kg腹腔注射轻度麻醉，用0.5％肥皂水2ml灌肠冲洗，20分钟后，自肛门约8厘米处注入5％冰醋酸1ml，计时30秒钟。大鼠清醒后正常饲养，次日继续灌胃番泻叶浸剂15ml/kg2次。自造模后第3日，取6只模型大鼠结肠光镜下观察。其余大鼠开始灌胃。正常对照组和模型组灌胃给予10ml/kg蒸馏水；阳性药组灌胃补脾益肠丸3.86g/kg(临床用药剂量15倍)，慢结灵胶囊高、中、低剂量组分别灌胃慢结灵内容物1.16、0.58、0.29g/kg(临床剂量30、15、7.5倍)。每日一次，连续7日。每日观察大鼠的外观情况和脾虚症状等。末次给药后，禁食12小时，不禁水，称体重后，戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉采血，用于测定肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-2(IL-2)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)，取全部结肠，肉眼观察结肠变化(充血评分：0分：无充血；1分：充血小于全长1/3；2分：充血在全长1/3＞2/3之间；3分：充血大于全长2/3)(总评分标准：0分：无损伤；1分：局部充血水肿，但未出现溃疡；2分：有轻度溃疡＜0.5cm；3分：溃疡在＜1.0cm＞0.5cm之间；4分：溃疡＞1.0cm。注：即充血水肿又有溃疡累计加分)，取近肛门8厘米结肠段(1cm)甲醛液固定，进行组织切片检查。

结果：

(1)外观：模型组大鼠给予番泻叶后陆续出现稀便、拱背，体重下降，活动减少，毛失光泽，精神倦怠，给与醋酸后，2～3天，有的大鼠出现腹胀、粘液便，血性便，有的大鼠肠穿孔死亡。经药物治疗后，大鼠脾虚症状有不同程度好转，稀便逐渐减少，体重回升，活动增加，精神状态较好。结果见表1。

            表1  慢结灵胶囊对醋酸型溃疡性结肠炎大鼠体重的影响

   组别         动物数                            体重(g)

  (g/kg)         (只)       开始        给醋酸前           结束        前后差值

正常对照组        10    207.1±14.2    215.6±14.8^*   226.6±12.7^*  19.5±6.8^*

模  型  组        10    208.2±13.5    194.5±10.8     210.7±19.1     1.8±19.4

补脾益肠丸3.86    10    207.8±13.9    194.4±12.0     225.5±14.2     17.7±4.6^*

慢结灵胶囊1.16    10    207.5±10.1    194.7±8.8      228.3±9.5^*    20.8±6.9^*

慢结灵胶囊0.58    10    207.3±11.8    193.7±9.7      223.9±14.6     16.6±8.4^*

慢结灵胶囊0.29    10    207.9±11.1    195.5±12.9     222.0±15.6     14.1±11.3

     (注：与模型组比较^*表示P＜0.05，^**P＜0.05，^***P＜0.05下同)

(2)结肠：先处死的6只模型大鼠，结肠粘膜水肿、充血、镜下观察：粘膜和粘膜下充血水肿，弥漫炎细胞浸润，粘膜大面积坏死，结构破坏，出现大面积溃疡，表明模型成立。肉眼观察：给药组结肠水肿面积和溃疡面积与模型组比较显著缩小，充血情况稍有好转，综合评分显著低于模型组。光镜下观察，正常对照组结肠粘膜细胞排列整齐，粘膜完整，无炎性细胞浸润。模型组结肠粘膜层和粘膜下层有大量炎细胞浸润，腺体结构破坏明显，细胞大部分坏死脱落，形成溃疡。阳性药组炎细胞大量减少，粘膜上皮基本恢复。慢结灵胶囊高剂量组炎细胞大量减少，粘膜上皮基本恢复，粘膜下肌层增厚。慢结灵胶囊中剂量组炎细胞多于高剂量组，大部分粘膜上皮基本恢复，粘膜下肌层大部分增厚。慢结灵胶囊低剂量组炎细胞仍有很多，但少于模型组，粘膜上皮修复不完全，仍可见腺体缺损。结果见表2。

             表2  慢结灵胶囊对醋酸型溃疡性结肠炎大鼠结肠的影响

   组别          动物数   水肿面积        充血积分        糜烂面积          总评分

  (g/kg)         (只)     (cm²)                            (cm²)

正常对照组-       10    0^***           0.1±0.32^***    0^***            0.1±0.32^***

模  型  组-       10    2.15±0.57      2.6±0.51       0.38±0.10       4.9±0.32

补脾益肠丸3.86    10    1.20±0.76**    1.0±0.47***    0.17±0.12***    3.8±1.13*

慢结灵胶囊1.16    10    1.33±0.43**    1.1±0.57***    0.18±0.08***    3.7±0.82***

慢结灵胶囊0.58    10    1.35±0.44**    1.4±0.52***    0.21±0.15*      4.0±0.82**

慢结灵胶囊0.29    10    1.59±0.48*     1.5±0.53***    0.25±0.13*      4.3±0.82*

(3)生化指标：慢结灵胶囊组血清中TNF、NO、MDA明显降低，IL-2和SOD明显升高，见表3。

            表3慢结灵胶囊对醋酸型溃疡性结肠炎大鼠血清中TNF、IL-2、NO、MDA、SOD的影响

    组别        动物数      TNF            IL-2             NO              MDA              SOD

   (g/kg)        (只)     (ng/ml)         (ng/ml)       (μmol/L)         (nmol/L)          (U/L)

正常对照组-       10    0.86±0.23^**   2.41±0.71**    5.34±1.73***    4.25±0.99      202.0±8.75**

模  型  组-       10    1.15±0.16      1.44±0.31      12.46±4.85      8.21±2.16      187.9±10.28

补脾益肠丸3.86    10    0.91±0.22*     2.05±0.38**    7.39±4.51*      5.68±1.43**    204.2±6.39***

慢结灵胶囊1.16    10    0.80±0.24**    2.38±0.70**    6.09±2.53**     5.15±1.34**    203.7±8.79**

慢结灵胶囊0.58    10    0.72±0.19***   1.96±0.36**    7.19±3.51*      5.41±1.98**    199.8±11.38*

慢结灵胶囊0.29    10    0.89±0.21*     1.89±0.37*     7.53±4.64*      6.18±1.51*     196.1±9.14

2.2慢结灵胶囊对免疫型溃疡性结肠炎的影响

取125～155g大鼠80只，随机分为正常对照组(10只)，模型组(70只)。抗原制备：取大耳白兔4只，血栓致死，取结肠(距肛门10厘米至横结肠处)粘膜，用生理盐水研磨，冷冻3日，低温离心3000转30分钟，取上清，测定蛋白质浓度，按每次所需浓度与弗氏完全佐剂配成乳液。分别在首次、7日、14日、21日、28日在不同部位(足跖、足跖、皮下、腹股沟、腹腔)注射抗原(末次不加佐剂)4mg，于21日和28日各取3只大鼠，检查模型是否成立。观察大鼠外观症状。将模型大鼠随机分6组，模型对照组(11只)，灌胃给予蒸馏水10ml/kg，西药对照组(10只)给予柳氮磺吡啶片0.86g/kg(临床剂量15倍)，中药对照组(10只)给予固本益肠片1.64g/kg(临床剂量15倍)，慢结灵胶囊组(10、10、10只)，分别给予慢结灵胶囊内容物1.16、0.58、0.29g/kg(临床剂量30、15、7.5倍)。每日一次，连续4周，末次给药后，禁食12小时，不禁水，称体重后，戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉采血，用于T细胞亚群CD₃、CD₄、和CD₈(由中日联谊医院中心实验室协助完成)，IgG和IgA，取全部结肠，肉眼观察结肠变化(充血评分：0分：无充血；1分：充血小于全长1/3；2分：充血在全长1/3＞2/3之间；3分：充血大于全长2/3)，(总评分标准：0分：无损伤；1分：局部充血水肿，但未出现糜烂；2分：有轻度糜烂＜0.5cm；3分：糜烂在1.0cm＜0.5cm之间；4分：糜烂＞1.0cm。注：即充血水肿又有糜烂累计加分)，取近肛门8～9厘米结肠段(1cm)甲醛液固定，进行组织切片检查，剩下结肠取近肛9～13cm处，测定一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。

结果：

(1)造型21日3只大鼠结肠光镜下可见：大量炎细胞浸润，粘膜和粘膜下充血水肿，杯状细胞减少；造型28日3只大鼠结肠大量炎细胞浸润，粘膜和粘膜下充血水肿，杯状细胞减少，腺体大部分破坏，粘膜脱落坏死。证明免疫型溃疡性结肠炎模型成立。

(2)一般外观：给予抗原2周后，大鼠陆续开始出现生长缓慢(体重降低)，多数大鼠粪便不成形，个别有溏便，特臭，倦怠，活动减少，毛皮不洁，有些出现拱背现象，随着时间延长症状加重。经过4周药物治疗后，模型组大鼠，外观症状变化不明显；西药对照组大鼠第四周消瘦死亡1只，其余大鼠4只仍有溏便，其他基本恢复正常，体重较模型组增加，但无明显差异，活动有所增加；中药对照组还有2只大鼠溏便，整组体重增加；慢结灵胶囊高剂量组大鼠无溏便现象，体重均增加，与模型组比较有显著差异，外观与正常大鼠相似；慢结灵胶囊中剂量组还有1只大鼠溏便，1只稀便，体重增加；慢结灵胶囊低剂量组3只有溏便现象，体重增长缓慢。见表4。

                                      表4慢结灵胶囊对免疫型溃疡性结肠炎大鼠体重的影响

组别          动物数              体重(g)                             动物数              体重(g)

(g/kg)         (只)       造型前         造型后          前后差值      (只)       给药前          给药后        前后差值

正常对照组-     10    ♀145.6±7.6    235.4±17.1**    89.8±13.6***    10    ♀236.4±17.7    292.8±23.5**    56.4±15.9*

                      ♂143.8±8.6    254.6±18.3**    110.8±15.6**          ♂255.2±19.5    330.0±20.9*     74.8±5.9*

模  型  组-     100   ♀143.2±8.6    209.3±18.8      66.1±16.6       10    ♀212.4±12.4    249.0±17.2      36.6±6.2

                      ♂144.0±11.2   223.5±31.7      79.5±27.5             ♂234.6±29.2    277.6±50.2      43.0±25.0

柳氮磺吡啶片0.86                                                        9     ♀210.6±12.2    247.7±24.8      41.0±18.2

                                                                              ♂234.8±19.5    305.0±38.6      70.2±24.6

固本益肠片1.64                                                          10    ♀209.6±8.0     251.6±15.3      42.0±9.4

                                                                              ♂236.8±45.7    294.8±64.1      58.0±22.8

慢结灵胶囊1.16                                                          10    ♀212.2±8.4     267.8±21.6      55.6±15.1*

                                                                              ♂234.6±34.8    306.6±33.0      72±19.1*

慢结灵胶囊0.58                                                          10    ♀212.4±15.9    259.4±17.9      47.0±20.4

                                                                              ♂234.2±29.5    303.8±52.0      69.6±27.1

慢结灵胶囊0.29                                                          10    ♀210.6±17.3    253.6±15.1      43.0±5.5

                                                                              ♂236.6±20.9    298.0±26.0      61.4±14.3

注：动物数均雌雄各半，柳氮磺吡啶片组给药期间死亡1只。

(3)肉眼观察：慢结灵胶囊各剂量组结肠水肿面积、糜烂面积明显小于模型组，充血评分值和总评分值，明显低于模型组。见表5。

                表5  慢结灵胶囊对免疫型溃疡性结肠炎大鼠结肠的影响

组别               动物数   水肿面积        充血积分      糜烂面积          总评分

(g/kg)              (只)     (cm²)                         (cm²)

正常对照组  -       10    0^***           0.1±0.32^***    0^***           0.1±0.32^***

模  型  组  -       10    4.33±1.90      2.3±0.48       0.67±0.25      4.6±0.52

柳氮磺胺砒啶0.86    9     2.62±1.39*     0.3±0.50***    0.43±0.05**    3.3±0.50***

固本益肠片  1.64    10    2.17±0.95**    0.2±0.42***    0.46±0.09*     3.2±0.42***

慢结灵胶囊  1.16    10    1.85±0.85**    0.6±0.70***    0.41±0.08**    2.8±0.63***

慢结灵胶囊  0.58    10    2.31±0.86**    0.6±0.51***    0.43±0.09*     3.5±0.71**

慢结灵胶囊  0.29    10    2.46±1.01*     0.80±0.79***   0.42±0.17*     3.9±0.87*

(4)光镜下观察：正常组大鼠结肠粘膜上皮完整，腺体排列整齐，结构正常。模型对照组：有大量炎细胞浸润，杯状细胞减少，表面粘膜细胞脱落、坏死。西药对照组仍可见炎细胞浸润，还有4只大鼠结肠粘膜细胞没有完全修复。中药对照组有少量炎细胞浸润，除3只大鼠结肠粘膜细胞没有完全修复好外，粘膜细胞基本修复。慢结灵胶囊高剂量组个别可见少量炎细胞浸润，粘膜细胞基本修复正常。慢结灵胶囊中剂量组有少量炎细胞浸润，3只大鼠结肠没有修复完全，其余大鼠结肠粘膜细胞基本修复正常。慢结灵胶囊低剂量组粘膜修复状况远不如高剂量组，炎细胞浸润较上两组多，但都好于模型组。

(5)生化指标：慢结灵胶囊三个剂量组结肠粘膜NO和MDA明显低于模型组，SOD显著高与模型组。见表6。

表6慢结灵胶囊对免疫型溃疡性结肠炎大鼠肠粘膜中NO、MDA、SOD的影响

组别              动物数        NO              MDA              SOD

(g/kg)             (只)   (μmol/mgProt)   (nmol/mgProt)      (U/mgProt)

正常对照组          10    1.16±0.47^***   3.71±1.29***    130.8±10.3***

模  型  组          10    3.33±1.13       6.97±1.53       65.9±24.3

柳氮磺胺砒啶0.86    9     2.24±0.58*      5.05±1.49*      94.6±25.7*

固本益肠片  1.64    10    1.95±1.08*      5.17±1.06**     97.1±19.9**

慢结灵胶囊  1.16    10    1.64±0.88**     5.12±1.21**     108.7±24.3**

慢结灵胶囊  0.58    10    1.93±1.01*      5.32±1.14*      99.0±22.2**

慢结灵胶囊  0.29    10    2.08±0.85*      5.65±1.11*      96.8±26.9*

(6)T淋巴细胞亚群CD₃和CD₄所占T细胞中百分比明显降低，CD₈无明显变化，CD₄/CD₈比值明显降低。IgG含量降低，IgA无明显变化。见表7。

                     表7慢结灵胶囊对免疫型溃疡性结肠炎大鼠T淋巴细胞亚群和IgG和IgA的影响

组别              动物数     CD3            CD4             CD8         CD4/CD8            IgG           IgA

(g/kg)             (只)      (％)           (％)            (％)          比值          (μg/ml)       (μg/ml)

正常对照组  -       10    54.8±8.05^*   36.4±6.30**    22.8±4.97    1.62±0.22**    1.33±0.14*    0.15±0.04

模  型  组  -       10    65.1±7.80     46.1±8.00      20.3±5.01    2.41±0.73      1.61±0.30     0.18±0.03

柳氮磺胺砒啶0.86    9     59.9±7.43     40.6±5.72      21.4±4.05    1.95±0.37      1.45±0.28     0.15±0.05

固本益肠片  1.64    10    60.3±10.49    40.7±5.96      21.9±6.62    2.03±0.73      1.33±0.26*    0.15±0.03

慢结灵胶囊  1.16    10    55.2±11.0*    38.4±4.83*     23.8±4.61    1.69±0.54*     1.30±0.26*    0.15±0.06

慢结灵胶囊  0.58    10    59.7±9.6      39.9±3.71*     21.6±4.87    1.94±0.49      1.49±0.18     0.16±0.06

慢结灵胶囊  0.29    10    61.7±9.28     41.9±5.16      20.5±5.34    2.13±0.45      1.35±0.24*    0.15±0.07

2.3镇痛作用

2.3.1慢结灵胶囊对热板法致小鼠疼痛的影响

取雌性小鼠放于热板上(GJ-8402型热板测痛仪，浙江产)筛选。以自小鼠放在热板上至出现舔后足所用的时间(秒)，作为该鼠痛阈值，取痛阈值在8～22秒的小鼠50只，随机分5组，分别灌胃给药10ml/kg蒸馏水，固本益肠片2.18g/kg，慢结灵胶囊内容物1.56、0.78、0.39g/kg。每日1次，连续7日，末次给药后1、2、3、4小时，测小鼠痛阈值，结果见表8。

                               表8  慢结灵胶囊对小鼠的镇痛作用(热板法)

组别            动物数    分组痛                        给药不同时间(小时)痛阈值(秒)

                 (只)    阈值(秒)         1                2                 3                4

正常对照  -       10    15.6±3.53    16.5±3.41       17.2±3.12       16.5±2.79       17.8±3.55

固本益肠片2.18    10    15.5±4.17    30.8±7.55^###   37.1±10.62^###   32.8±7.25^###   31.6±9.89^###

慢结灵胶囊1.56    10    15.3±3.87    29.4±6.71^###   35.3±10.79^###   34.1±9.06^###   32.1±8.97^###

慢结灵胶囊0.78    10    15.6±3.94    29.0±10.85^##   32.5±8.04^###    33.2±5.67^###   35.5±12.83^###

慢结灵胶囊0.39    10    15.3±4.59    24.0±9.77^#     24.3±8.12^#     20.9±9.84       23.5±9.97

注：与正常对照组比较#表示P＜0.05，##表示P＜0.01，###表示P＜0.001。

结果表明：慢结灵胶囊可延长小鼠痛阈值，与正常对照组比较差异显著。

2.3.2慢结灵胶囊对醋酸所致小鼠扭体反应次数的影响

取小鼠50只，随机分5组，分别灌胃给药10ml/kg蒸馏水，固本益肠片2.18g/kg(临床剂量20倍)，慢结灵胶囊内容物1.56、0.78、0.39g/kg(临床剂量40、20、10倍)。每日1次，连续7日，末次给药后1h，腹腔注射1％HAC10ml/kg，观察15分钟内扭体次数。结果见表9。

      表9  慢结灵胶囊对醋酸所致小鼠扭体反应次数的影响

组别(g/kg)     动物数(只)    15分钟内扭体次数(次)        P

正 常 对 照 -     10              20.7±7.2

固本益肠片2.18    10              12.8±4.8            ＜0.05

慢结灵胶囊1.56    10              11.8±5.0            ＜0.01

慢结灵胶囊0.78    10              12.5±5.5            ＜0.05

慢结灵胶囊0.39    10              13.9±5.3            ＜0.05

结果表明，慢结灵胶囊能显著减少醋酸引起的小鼠扭体反应次数。

2.4慢结灵胶囊对小鼠二甲苯所致耳肿胀的影响

取小鼠50只，随机分5组，分别灌胃给药10ml/kg蒸馏水，固本益肠片2.18g/kg，慢结灵胶囊内容物1.56、0.78、0.39g/kg。每日一次，连续7日。末次给药后1h，给小鼠右耳涂二甲苯0.03ml/只，左耳作对照，2h拉颈处死小鼠，用直径7mm打孔器将双耳同部位的面积切下，用JN-A型精密扭力天平称重，以左右耳片重量之差为肿胀程度。结果见表10。

      表10  慢结灵胶囊对小鼠二甲苯所致耳肿胀的影响

组别(g/kg)      动物数(只)      耳肿胀程度(mg)           P

正常对照组-        10            9.3±2.26

固本益肠片2.18     10            6.2±2.97            ＜0.05

慢结灵胶囊1.56     10            5.6±2.29            ＜0.01

慢结灵胶囊0.78     10            6.7±1.77            ＜0.05

慢结灵胶囊0.39     10            7.6±1.84            ＞0.05

结果表明，慢结灵胶囊1.56、0.78g/kg剂量组，能够明显抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀。

2.5慢结灵胶囊对小鼠毛细血管通透性的影响

取小鼠50只，随机分5组，分别灌胃蒸馏水10ml/kg，固本益肠片2.18g/kg，慢结灵胶囊内容物1.56、0.78、0.39g/kg，每日1次，连续7日，末次给药后1小时，每只小鼠静脉注射0.5％伊文氏兰生理盐水溶液10ml/kg，随即腹腔注射0.6％冰醋酸0.2ml/只，20分钟后脱颈椎处死小鼠，剪开腹部皮肤肌肉，用6ml生理盐水溶液冲洗腹腔，用吸管吸出洗涤液，合并生理盐水至10ml，3000rpm离心15分钟，取上清，于590nm处比色，用伊文氏兰标准曲线测出伊文氏兰含量。结果见表11。

       表11  慢结灵胶囊对小鼠毛细血管通透性的影响

组别(g/kg)     动物数(只)    伊文氏兰含量(μg/ml)        P

正常对照组-       10              3.5±0.54

固本益肠片2.18    10              2.9±0.49           ＜0.05

慢结灵胶囊1.56    10              2.5±0.88           ＜0.01

慢结灵胶囊0.78    10              2.8±0.55           ＜0.05

慢结灵胶囊0.39    10              2.9±0.75           ＞0.05

结果表明，慢结灵胶囊1.56、0.78g/kg剂量组能够明显抑制冰醋酸所致的小鼠腹腔毛细管通透性的增加。

3.讨论  结肠炎中医应属于“泄泻”、“肠癖”、“休息痢”等范畴。益以补肾阳健脾为本。本方是以补骨脂补肾阳温脾，白术健脾燥湿二味为主药，配合肉豆蔻、五倍子等共奏补肾健脾涩肠止泻的功效。

本试验认为：慢结灵胶囊作用机制为：1.降低血中和肠粘膜中NO含量，促进溃疡面愈合。2.降低血中和肠粘膜中MDA含量，提高SOD活性，减少粘膜损伤程度。3.降低TNF含量，增加IL-2含量，提高肠道防御功能。4.调节T淋巴细胞亚群比例，降低IgG含量，调节免疫功能。5.减轻血管水肿，降低血管通透性，利于组织修复。

4.结论：慢结灵胶囊对醋酸型和免疫型大鼠溃疡性结肠炎有较好治疗作用。

试验例2慢结灵胶囊最大给药量的研究

目的：一日内以最大剂量灌胃给予慢结灵胶囊，观察小鼠的急性毒性反应。

动物：昆明种小鼠，体重19～21克，雌雄各半，购自长春生物制品研究所，动物合格证编号：10-5112。实验动物环境设施合格证号为吉动设字10-1028。实验动物繁殖鼠全价颗粒饲料(粗蛋白18～20％、粗脂肪3～4％、粗纤维10～15％、粗灰粉7～9％、钙1～1.5％、磷0.6～1.0％、氯化钠0.5、水分＜11)购自沈阳市实验动物饲料厂。受试物：慢结灵胶囊内容物为棕色粉末，2.71g生药/g内容物，临床4粒/次，2次/日，0.34g/粒。批号20030308。由吉林大学药学院提供。成人按70公斤计算，临床成人每公斤用药量为4×0.34/次×2次÷70kg＝0.038857g/kg

药物配制：取慢结灵胶囊内容物60g加水至90ml，即0.6667g/ml。方法：取小鼠60只，雌雄各半，禁食12小时，不禁水。按40ml/kg体重灌胃给药，24小时内分别给药1次和3次。给药后，观察小鼠体重、行为活动、外观、饮食、饮水、粪便等情况。

结果：24小时内一次性给药：给药后1小时内小鼠自主活动明显减少，多数静卧，趴着不动，闭眼。1小时后小鼠陆续开始活动。外观行为活动与对照组小鼠无明显差异。粪便中有药物颜色。其他未见异常。24小时内三次给药(每次间隔6小时)：第一次给药后与上述症状一样，第二次给药后，小鼠活动明显减少，有6只小鼠闭眼，8只小鼠有耸毛现象，有2只小鼠体软。第三次给药后2小时内，有2只小鼠死亡。解剖：小鼠胃体大，肠胀气，肝脏颜色加深，心、脾、肺、肾未见明显异常。存活小鼠第二日，又有5只小鼠死亡，死亡小鼠眼边有分泌物，其他症状同上。存活下来的小鼠，吃食物后，外观症状有所好转，活动增多，毛色光亮，粪便正常，体重增加。未见其他异常表现。计算：

40ml/kg×1次/日×0.6667g/ml＝26.67g/kg，相当于临床用药量26.67g/kg÷0.038857g/kg＝686.4倍。

40ml/kg×3次/日×0.6667g/ml＝80.0g/kg，相当于临床用药量80.0g/kg÷0.0388g/kg＝2059.1倍。

           表12.慢结灵胶囊一次和三次最大剂量给药对小鼠体重的影响

组别        性别    动物数(只)  给药前体重(g)  动物数(只)  给药后第七日体重(g)

对照组      雄性        10       20.0±0.62        10          25.5±1.07

            雌性        10       20.0±0.63        10          24.4±1.13

慢结灵胶囊  雄性        10       20.0±0.51        10          25.2±1.18

一次给药    雌性        10       20.1±0.61        10          24.5±1.17

慢结灵胶囊  雄性        10       20.1±0.64        6           23.3±2.57*

三次给药    雌性        10       20.1±0.58        7           23.5±1.95

            注：给药前后自身比较P＜0.001，*表示与对照组雄性比较P＜0.05

结论：慢结灵胶囊一日内最大剂量(最大浓度和最大体积)一次性灌胃给药26.67g/kg，对小鼠无急性毒性反应。此剂量相当于临床用药量的686.4倍。一日内最大剂量(最大浓度和最大体积)三次灌胃给药，累积剂量为80.0g/kg，有7只小鼠死亡，死亡率为35％。小鼠活动明显减少，有耸毛现象，死亡小鼠胃体大，肠胀气，肝脏颜色加深，雄性小鼠体重增长缓慢等。此剂量相当于临床用药量2059.1倍。由于此剂量已经是最大浓度和最大体积，故末能求出LD₅₀。

试验例3慢结灵胶囊长期毒性研究

一、目的

观察连续26周灌胃给予慢结灵胶囊是否对大鼠产生毒性反应，并观察是否有延迟毒性反应，为临床应用提供依据。

二、试验材料

动物  Wistar大鼠，体重60～80克，5～6-周龄普通级，雌雄各半，中国人民解放军农牧大学实验动物中心，合格证号：10-5113。实验动物环境设施合格证号为吉动设字10-1028。实验动物繁殖鼠全价颗粒饲料(粗蛋白18～20％、粗脂肪3～4％、粗纤维10～15％、粗灰粉7～9％、钙1～1.5％、磷0.6～1.0％、氯化钠0.5、水分＜11)购自沈阳市实验动物饲料厂。

受试物  慢结灵胶囊胶囊内容物为棕色粉末，2.71g生药/g内容物，临床成人4粒/次，2次/日，0.34g/粒。批号20030308。由吉林大学药学院提供。试验时用蒸馏水配成所需浓度。

试剂盒  生化检验所用试剂盒均为北京中生生物工程高技术公司(酶法或速率法)，血常规检查试剂盒为美国库尔特公司提供。

仪器    日立7080型全自动生化分析仪，美国库尔特(COULTRT)ACT-diff2全自动血球计数仪。

三、方法

观察饲养大鼠1周后，取160只随机分成4组，每组雌雄各半。第一组为对照组，灌胃20ml/kg水，第二、三、四组为慢结灵胶囊高、中、低剂量组，分别灌胃给予慢结灵胶囊粉5.8、2.4、0.6g/kg(相当于临床用药量约150、60、15倍)，每日1次，一般均在上午8.30～10.30分。连续180日。每日观察动物的行为活动、饮食、饮水及粪便等情况，每周称体重1次。每周3次测定大鼠的饮食、饮水量。在给药后24小时，第91日181各组分别处死10只大鼠，取血作白细胞(WBC)计数及分类、红细胞计数(RBC)、血小板数(Pit)、血红蛋白(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)含量检查，取血离心，用血清测定谷丙转氨酶(ALT，IFCC推荐的酶法)、谷草转氨酶(AST，IFCC推荐的酶法)、总蛋白(TP，双缩脲法)、白蛋白(ALB，溴甲酚绿法)、肌酐(CR酶法)、尿素(UREA，PAP酶法)、血糖(GLU，氧化酶法)、总胆固醇(CHOL，PAP酶法)、总胆红素(T-BLL，重氮法)、碱性磷酸酶(ALP，IFCC推荐的酶法)。解剖大鼠，肉眼观察动物各脏器的变化，并取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、前列腺、甲状腺、脑、卵巢和子宫称重，计算脏器指数并取上述组织和胃、小肠、结肠做组织病理学检查。剩下大鼠停药后，继续饲养两周，同上述方法检测。试验结果经t检验处理，用X±SD表示。

四、试验结果

1.对大鼠外观行为等的影响  连续26周给大鼠灌胃慢结灵胶囊5.8、2.4、0.6g/kg，大鼠行为活动正常，毛色光亮、粪便正常，无异常现象发生。

2.对大鼠体重的影响  连续26周给大鼠灌胃慢结灵胶囊5.8、2.4、0.6g/k，高剂量组大鼠，在给药4周后体重稍低于对照组，但与对照组比较均无明显差异。由于高剂量组大鼠摄食量也减少，认为是给药剂量大，造成的体重增长较对照组稍慢。结果见表13。

3.对大鼠饮食饮水的影响  高剂量组、中剂量组、低剂量组大鼠与对照组大鼠饮食饮水量无明显差异。高剂量组摄食量稍少于模型组。结果见表14。

4.对大鼠脏器指数的影响  高剂量组肝脏系数在给药后三个和六个月有增加趋势，高、中、低三个剂量剂量组脾脏系数均有增加趋势，但与对照组比较无明显差异。结果见表15。

5.对大鼠血液生化指标的影响  三个剂量组大鼠的ALT、TP、ALB、UREA、CR、CHOL、ALP、AST、GLU、T-BIL检测值均在正常范围内，与对照组比较无明显差异。但高剂量组ALT和AST在给药后三个和六个月有增加趋势，停药后二者含量均降下来，结合肝脏系数的增加，认为高剂量组对肝脏有一定的影响。结果见表16。

6.对大鼠血常规影响  三个剂量组大鼠的RBC、WBC、Hb、Pit、GR、LY、MO、MCH、MCV检测值均在正常范围内，与对照组比较无明显差异。结果见表17。

7.对大鼠组织病理学的影响  三个剂量组大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、前列腺、甲状腺、脑、卵巢、子宫、胃、小肠、结肠组织病理切片检查，均是正常组织，与对照组比较无明显差异。个别大鼠肺有间质性肺炎，可能是与动物饲养坏境有关，与受试药物无关。

试验期间状态不好的大鼠或死亡的大鼠解剖，肉眼观察，心、肝、脾、肺、肾未见异常。可能是与动物自身条件和饲养环境有关。

结论 给大鼠灌胃慢结灵胶囊5.8、2.4、0.6g/kg，连续六个月，对大鼠无长期毒性反应，也无延迟毒性反应。此剂量相当于临床用药量的150、60和15倍。计算：0.34g/粒×4粒/次/成人×2次/日÷70kg＝0.0388g/kg

  5.8g/kg÷0.0388g/kg＝149.5倍

  2.4g/kg÷0.0388g/kg＝61.8倍

  0.6g/kg÷0.0388g/kg＝15.5倍

                                             表13  慢结灵胶囊连续灌胃给药对大鼠体重的影响( X±SD)

组别           初次          二周           四周           六周           八周           十周         十二周         十四周

对照组♂    73.5±6.3    134.8±16.4    178.4±27.5    216.2±36.4    251.2±42.4    287.3±48.4    324.2±55.0    349.8±56.5

高剂量♂    73.2±6.2    130.0±16.3    169.4±18.7    212.8±28.4    246.2±38.3    279.6±38.9    311.9±44.7    337.4±48.9

中剂量♂    73.0±6.4    131.2±14.2    175.3±21.6    218.1±27.4    252.4±36.5    287.6±46.7    323.4±55.2    345.6±47.7

低剂量♂    73.4±6.1    131.4±15.2    178.6±17.0    221.8±33.0    254.3±45.4    290.5±53.4    328.8±56.2    357.9±45.3

对照组♀    73.7±6.5    122.8±13.1    164.6±14.9    195.1±25.9    219.8±30.6    241.1±33.8    256.8±34.2    276.3±27.9

高剂量♀    73.2±6.3    121.4±14.1    154.8±22.8    187.9±30.2    214.2±33.9    231.1±35.6    248.6±31.4    264.2±27.8

中剂量♀    73.5±6.5    124.5±13.6    162.4±19.2    196.7±23.6    222.8±21.9    239.2±22.5    254.0±27.1    271.6±19.9

低剂量♀    73.3±6.5    123.0±13.5    162.7±19.7    198.3±24.4    224.6±22.5    245.2±22.5    262.1±21.6    273.2±22.8

                                               续表13

组别           十六周        十八周          二十周        二十二周       二十四周      二十六周      停药后两周

对照组♂    365.5±55.5    378.2±54.0    392.2±53.9    403.8±54.4    415.8±54.5    428.5±54.5    432.9±47.1

高剂量♂    353.6±51.4    364.6±54.3    381.4±51.6    391.5±50.3    401.0±49.4    413.7±52.9    418.5±48.9

中剂量♂    360.2±51.9    374.6±52.3    387.7±54.3    400.2±57.2    409.6±57.4    421.5±57.9    424.0±45.8

低剂量♂    373.6±50.1    385.8±50.2    397.8±49.0    410.5±48.1    422.5±50.1    432.2±48.7    435.5±35.0

对照组♀    288.0±24.8    300.4±25.0    312.0±26.7    324.0±26.7    334.2±27.8    346.8±30.2    355.9±24.9

高剂量♀    277.2±29.6    292.9±30.8    304.3±27.0    315.3±26.3    325.8±28.3    336.0±28.4    346.0±24.9

中剂量♀    287.6±21.0    300.6±25.0    310.3±24.6    323.9±26.9    334.2±30.7    346.7±31.7    351.7±22.2

低剂量♀    290.0±22.0    304.4±23.9    315.2±23.6    325.4±25.5    335.8±28.8    350.7±28.6    361.8±17.8

                                        表14  慢结灵胶囊连续灌胃给药对大鼠摄食饮水量的影响  ( X±SD)

组别             动物数       二周           四周           六周           八周           十周          十二周     (只数)      十四周

♂水量(ml)

对照组            (20)    705.3±31.0    714.6±29.6    746.0±54.1    855.6±32.6    748.0±25.5    951.6±65.8    (15)    722.0±70.1

慢结灵胶囊高剂量  (20)    693.6±33.6    704.6±49.6    768.0±30.6    813.3±29.1    756.6±22.1    944.6±58.2    (15)    690.6±51.0

慢结灵胶囊中剂量  (20)    728.0±49.1    674.0±48.6    727.3±40.5    834.6±28.0    758.0±48.5    939.3±72.5    (15)    728.3±72.2

慢结灵胶囊低剂量  (20)    716.6±26.4    678.6±15.0    735.6±34.5    840.0±36.1    724.0±19.2    958.3±88.3    (15)    687.3±64.7

♂食量(g)

对照组            (20)    315.3±14.1    369.0±16.7    408.6±24.1    440.0±15.3    480.0±14.1    508.0±21.6    (15)    373.6±9.0

慢结灵胶囊高剂量  (20)    310.3±15.0    360.6±15.9    392.6±10.2    425.6±11.5    465.6±20.7    488.0±18.7    (15)    355.6±20.5

慢结灵胶囊中剂量  (20)    315.0±15.7    365.0±10.0    401.6±11.5    443.0±17.3    476.0±27.5    508.6±16.7    (15)    363.3±17.0

慢结灵胶囊低剂量  (20)    318.6±16.5    366.0±14.0    410.0±14.1    445.0±20.0    481.0±17.6    513.0±8.5     (15)    382.0±24.9

♀水量(ml)

对照组            (20)    589.3±36.1    606.6±55.6    610.3±26.5    712.3±43.8    600.6±50.2    783.3±60.4    (15)    589.6±27.9

慢结灵胶囊高剂量  (20)    594.3±43.1    587.3±39.5    614.0±39.8    729.0±31.0    584.0±39.7    797.0±54.2    (15)    564.3±35.5

慢结灵胶囊中剂量  (20)    615.3±27.0    570.6±47.0    623.6±50.3    723.0±53.8    601.3±29.5    770.3±49.7    (15)    560.3±40.5

慢结灵胶囊低剂量  (20)    605.0±23.8    585.6±44.5    601.6±22.0    707.0±32.6    612.0±54.2    790.6±40.0    (15)    571.0±52.0

♀食量(g)

对照组            (20)    301.6±17.2    342.6±13.0    375.3±11.9    398.3±15.3    435.6±12.5    453.3±20.7    (15)    325.6±7.0

慢结灵胶囊高剂量  (20)    297.3±12.0    332.6±12.4    361.0±7.8     387.3±11.3    414.0±16.0    433.6±8.0     (15)    303.6±22.4

慢结灵胶囊中剂量  (20)    303.3±12.0    343.6±13.0    380.0±12.8    402.3±10.6    430.3±28.3    457.0±8.1     (15)    315.6±9.2

慢结灵胶囊低剂量  (20)    304.6±7.0     340.0±10.0    385.3±12.8    408.3±20.1    438.3±16.8    456.6±18.9    (15)    320.0±10.8

                                                             续表14

组别                   十六周        十八周    (只数)   二十周    (只数)  二十二周   (只数)  二十四周       二十六周       停药两周   (只数)

♂水量(ml)          670.6±45.4    734.0±21.5        625.3±37.0        705.0±57.6        770.6±52.8    615.3±48.2    426.0±23.4  (10)

对照组              664.0±42.7    720.3±56.5        576.0±36.8  (14)  671.0±45.5        714.0±45.8    581.3±43.0    379.0±30.0  (9)

慢结灵胶囊高剂量    660.6±22.0    705.3±45.0        620.6±44.7        696.0±47.0        769.6±56.5    602.6±39.7    409.3±16.2  (10)

慢结灵胶囊中剂量    651.3±58.0    718.6±36.3        643.0±35.5        726.3±38.1        775.0±40.9    627.6±32.0    417.6±26.7  (10)

慢结灵胶囊低剂量

♂食量(g)           387.0±15.3    402.6±22.1        414.0±24.7        429.6±14.5        435.3±10.0    443.3±14.0    286.6±12.5  (10)

对照组              367.3±14.2    380.3±14.1        366.0±22.6        380.0±20.0        388.3±15.7    390.6±10.5    260.3±10.5  (9)

慢结灵胶囊高剂量    382.0±13.0    396.0±23.3        406.6±10.4        420.0±13.7        428.3±12.0    437.0±9.0     294.6±7.5   (10)

慢结灵胶囊中剂量    397.1±12.0    411.6±24.0        424.6±6.1         435.6±16.0        442.0±9.1     448.3±12.3    307.3±6.4   (10)

慢结灵胶囊低剂量

♀水量(ml)          494.6±18.5    562.3±43.1        476.3±40.9        550.0±45.8        646.3±31.1    455.0±33.1    270.6±28.0  (10)

对照组              511.6±58.5    517.6±45.1        439.6±33.2        495.0±31.0        573.3±41.5    403.3±55.3    234.6±29.5  (9)

慢结灵胶囊高剂量    483.3±31.3    550.0±33.1        485.3±43.3        484.0±35.1(14)    588.0±50.5    413.3±39.5    215.0±27.5  (8)

慢结灵胶囊中剂量    484.3±21.8    560.0±21.0        484.6±53.5        558.0±27.1        609.1±37.1    463.3±34.5    260.0±35.0  (10)

慢结灵胶囊低剂量

♀食量(g)           332.6±15.9    341.6±11.5        349.0±12.7        356.1±16.0        3362.0±9.1    366.6±11.5    234.0±14.0  (10)

对照组              310.3±16.0    293.±10.3(14)     301.3±10.0        307.0±10.5        312.1±17.0    313.0±12.1    203.3±12.5  (9)

慢结灵胶囊高剂量    330.3±15.0    344.6±21.0        348.0±16.7        322.3±11.6        331.3±10.9    336.3±13.0    184.3±15.5  (8)

慢结灵胶囊中剂量    337.3±13.2    350.3±11.5        358.0±13.0        364.0±15.0        371.3±4.1     377.0±12.1    254.3±5.0   (10)

慢结灵胶囊低剂量

              表15    慢结灵胶囊连续灌胃给药对大鼠脏器指数的影响    ( X±SD)

时间  组别                    心           肝            脾           肺           肾         肾上腺

                           (g/100g)     (g/100g)      (g/100g)     (g/100g)     (g/100g)     (mg/100g)

给    对照组              0.33±0.04    3.81±0.6    0.39±0.1    0.80±0.1    0.34±0.06    17.5±4.6

药    慢结灵胶囊 高剂量   0.32±0.03    4.23±0.3    0.40±0.2    0.82±0.2    0.33±0.05    18.4±4.2

后    慢结灵胶囊 中剂量   0.32±0.03    3.95±0.5    0.50±0.2    0.76±0.2    0.35±0.07    16.4±3.8

13    慢结灵胶囊 低剂量   0.33±0.03    3.92±0.4    0.44±0.1    0.80±0.2    0.35±0.02    19.6±5.9

周

给    对照组              0.30±0.05    3.62±0.6    0.39±0.1    0.66±0.1    0.31±0.05    15.3±3.1

药    慢结灵胶囊 高剂量   0.29±0.04    3.78±0.6    0.43±0.1    0.60±0.1    0.30±0.02    15.0±3.9

后    慢结灵胶囊 中剂量   0.30±0.06    3.63±0.8    0.48±0.2    0.67±0.2    0.29±0.05    14.0±2.7

26    慢结灵胶囊 低剂量   0.31±0.04    3.56±0.7    0.45±0.1    0.70±0.1    0.32±0.06    16.0±3.8

周

停    对照组              0.29±0.04    3.42±0.6    0.35±0.1    0.62±0.2    0.29±0.06    13.2±2.8

药    慢结灵胶囊 高剂量   0.28±0.03    3.39±0.8    0.39±0.1    0.60±0.1    0.29±0.06    12.7±2.8

后    慢结灵胶囊 中剂量   0.30±0.02    3.28±0.7    0.37±0.2    0.58±0.1    0.29±0.03    13.1±3.1

2     慢结灵胶囊 低剂量   0.29±0.04    3.20±0.5    0.36±0.1    0.62±0.1    0.31±0.07    14.5±4.0

周

                                                       续表15

时间  组别                  甲状腺        睾丸          附睾          子宫         卵巢          前列腺         胸腺

                          (mg/100g)     (g/100g)      (g/100g)      (g/100g)     (mg/100g)      (g/100g)      (g/100g)

给    对照组              13.3±2.5    0.52±0.11    0.20±0.06    0.25±0.09    54.1±17.2    0.12±0.03    0.15±0.07

药    慢结灵胶囊 高剂量   14.1±1.5    0.56±0.15    0.19±0.05    0.21±0.06    50.7±9.1     0.13±0.05    0.14±0.04

后    慢结灵胶囊 中剂量   12.8±2.7    0.59±0.18    0.19±0.05    0.20±0.10    58.2±8.1     0.15±0.07    0.15±0.06

13    慢结灵胶囊 低剂量   14.6±2.0    0.58±0.12    0.22±0.05    0.24±0.09    57.9±11.2    0.13±0.02    0.17±0.02

周

给    对照组              12.9±2.8    0.50±0.12    0.19±0.03    0.20±0.02    45.2±16.8    0.11±0.03    0.13±0.04

药    慢结灵胶囊 高剂量   13.1±1.8    0.49±0.09    0.18±0.02    0.19±0.04    43.5±12.7    0.12±0.04    0.12±0.03

后    慢结灵胶囊 中剂量   11.9±3.0    0.50±0.14    0.19±0.01    0.19±0.05    48.1±8.6     0.11±0.04    0.13±0.05

26    慢结灵胶囊 低剂量   13.2±3.0    0.50±0.10    0.21±0.06    0.21±0.04    47.2±11.1    0.12±0.02    0.14±0.01

周

停    对照组              12.0±3.5    0.45±0.06    0.15±0.04    0.19±0.04    43.5±7.8     0.10±0.02    0.11±0.04

药    慢结灵胶囊 高剂量   12.7±2.8    0.42±0.10    0.16±0.04    0.20±0.02    48.0±9.3     0.09±0.03    0.10±0.02

后    慢结灵胶囊 中剂量   10.8±1.5    0.41±0.06    0.15±0.03    0.18±0.03    46.6±6.2     0.08±0.02    0.12±0.03

2     慢结灵胶囊 低剂量   12.0±3.2    0.40±0.07    0.16±0.02    0.20±0.04    49.4±3.0     0.10±0.02    0.13±0.02

周

                  表16  慢结灵胶囊连续灌胃给药对大鼠血液生化指标的影响  ( X±SD)

时  组别                动物数      ALT           AST            ALP          T-BIL         TP

间                       (只)      (U/L)         (u/L)          (u/L)       (μmol/L)      (g/L)

给  对照组                10    44.0±15.5    122.5±28.2    189.0±36.1    6.35±0.4    61.9±4.1

药  慢结灵胶囊高剂量组    10    47.1±14.9    132.7±36.8    197.4±33.2    6.40±0.3    62.2±7.8

后  慢结灵胶囊中剂量组    10    38.9±9.3     116.9±32.3    193.6±33.6    6.27±0.3    60.7±2.5

13  慢结灵胶囊低剂量组    10    40.2±16.8    122.4±40.5    188.3±32.5    6.18±0.3    63.7±6.3

周

给  对照组                10    44.4±13.7    136.8±28.3    186.0±33.1    6.17±1.1    62.9±1.7

药  慢结灵胶囊高剂量组    10    51.2±16.6    142.0±28.9    181.0±54.0    6.02±0.8    65.1±3.9

后  慢结灵胶囊中剂量组    10    47.1±12.4    126.0±29.0    166.7±63.3    6.12±1.0    62.9±1.7

26  慢结灵胶囊低剂量组    10    45.8±13.6    125.2±29.3    174.3±65.6    6.05±0.4    67.8±7.2

周

停  对照组                10    47.0±6.7     130.4±34.8    178.6±41.9    6.41±0.4    62.1±2.6

药  慢结灵胶囊高剂量组    10    48.6±13.2    133.3±35.7    167.0±59.7    6.27±0.5    61.2±2.1

后  慢结灵胶囊中剂量组    10    44.6±11.0    127.2±47.4    154.0±60.2    6.21±0.4    62.9±2.5

2   慢结灵胶囊低剂量组    10    46.6±12.6    115.5±26.5    153.2±61.7    6.27±0.4    63.2±6.2

周

                                             续表16

时间  组别                动物数     ALB          UREA          CR           CHOL         GLU

                           (只)     (g/L)       (mmol/L)     (umol/L)      (mmol/L)     (mmol/L)

给    对照组                10    22.2±3.0    6.48±1.82    78.9±6.1    1.36±0.22    5.7±1.1

药    慢结灵胶囊高剂量组    10    22.7±2.5    6.63±1.92    81.2±6.0    1.40±0.40    6.0±1.6

后    慢结灵胶囊中剂量组    10    22.3±2.9    6.40±2.20    78.6±7.8    1.35±0.37    6.2±1.3

13    慢结灵胶囊低剂量组    10    21.7±2.2    6.55±2.10    76.6±18.9   1.36±0.27    5.6±1.3

周

给    对照组                10    22.9±1.7    6.53±1.40    72.7±16.4   1.50±0.16    6.4±1.2

药    慢结灵胶囊高剂量组    10    24.0±2.0    6.69±1.36    73.1±16.6   1.45±0.31    6.5±1.7

后    慢结灵胶囊中剂量组    10    24.7±0.9    6.29±1.66    75.7±13.3   1.49±0.42    6.6±1.0

26    慢结灵胶囊低剂量组    10    24.2±3.0    6.58±1.74    74.0±14.8   1.35±0.25    6.9±1.1

周

停    对照组                10    22.5±2.6    6.54±1.28    74.6±8.8    1.44±0.19    5.6±0.6

药    慢结灵胶囊高剂量组    10    23.3±1.2    6.13±1.34    76.8±4.3    1.55±0.17    5.5±0.8

后    慢结灵胶囊中剂量组    10    24.4±1.0    6.30±1.71    76.2±2.3    1.40±0.21    5.4±1.3

2     慢结灵胶囊低剂量组    10    23.3±3.5    7.95±1.6     78.6±4.7    1.38±0.30    6.0±0.9

周

                                           表17  慢结灵胶囊连续灌胃给药对大鼠血常规的影响( X±SD)

时间  组别      动物数     WBC           LY          MO           GR         RBC           Hgb            Pit            MCV         MCH

                 (只)   (×10⁹/L)      (％)        (％)         (％)     (×10¹²/L)     (g/L)        (×10⁹/L)        (fL)        (Pg)

给    对照组      10    11.4±3.9    73.2±5.7    7.9±1.9    18.9±5.4    7.4±0.7    137.9±19.9    709.3±227.2    58.7±5.3    25.0±3.5

药    高剂量组    10    11.9±4.7    71.5±6.9    8.2±2.0    20.3±5.7    7.1±0.6    138.1±16.3    673.2±149.9    59.5±3.3    27.7±4.0

后    中剂量组    10    12.3±3.4    71.9±7.2    8.5±1.7    19.4±6.9    7.3±0.7    139.6±16.1    689.7±161.9    58.4±4.6    25.9±4.2

13    低剂量组    10    10.8±3.9    72.3±7.6    8.5±1.3    19.1±6.5    7.2±0.8    142.3±12.1    659.9±98.0     58.7±7.4    24.4±3.9

周

给    对照组      10    12.2±2.7    72.4±6.1    7.6±1.5    20.0±6.0    7.0±0.9    144.4±10.4    680.3±134.9    60.1±2.4    22.5±0.9

药    高剂量组    10    13.1±4.9    74.0±4.5    7.2±2.6    18.8±3.9    7.2±0.8    146.3±9.3     687.8±167.4    60.2±2.6    22.4±1.2

后    中剂量组    10    12.7±2.7    73.9±2.9    7.6±1.8    18.4±3.1    6.8±0.8    150.6±8.5     715.1±151.6    61.7±2.4    23.3±1.0

26    低剂量组    10    13.9±2.9    72.6±6.7    7.6±2.4    19.8±6.8    7.1±0.8    147.9±10.9    740.8±130.5    60.0±1.9    22.4±0.7

周

停    对照组      10    12.5±4.2    72.1±5.2    8.2±3.0    19.6±3.9    7.2±1.0    140.4±9.7     692.6±79.1     64.2±2.5    21.7±0.9

药    高剂量组    10    11.9±4.6    73.8±5.6    8.4±3.1    17.8±8.0    7.4±0.9    140.9±9.5     659.9±102.9    61.2±6.7    23.5±3.3

后    中剂量组    10    12.9±4.3    73.5±4.9    7.8±2.1    18.6±4.8    6.9±0.9    142.0±6.4     707.8±55.5     59.5±4.0    21.3±1.5

2     低剂量组    10    12.5±5.7    73.8±7.7    8.1±1.1    17.9±7.5    7.2±1.1    140.0±9.0     724.9±92.0     59.4±5.6    21.9±0.9

周

以下通过实施例来进一步阐述本发明药物的制备方法。

实施例1  本发明药物胶囊剂的制备

它由下列的原料药制成：

盐补骨脂160g，炒白术160g，炒山药120g，茯苓120g，五倍子80g，秦皮80g，煨肉豆蔻80g，煨木香40g，吴茱萸40g，炙甘草40g。

1)称取以上十味，其中盐补骨脂及1/3量的炒山药40g粉碎成细粉，备用；

2)炒白术、煨肉豆蔻、煨木香和吴茱萸加6倍量水，浸泡12小时，水蒸气蒸馏6小时，得挥发油与水提取液，水提取液及药渣备用；

3)称取2)所得挥发油8倍量的β-环糊精，置适当玻璃容器中，加入β-环糊精6倍量的水，于磁力加热搅拌器上，恒温搅拌至30℃，取上述挥发油，按1∶1比例用无水乙醇稀释后，滴入β-环糊精溶液中，恒温搅拌3小时，置4℃冰箱中冷藏24小时，抽滤，40℃干燥4小时，备用。

4)药渣与其余2/3量炒山药80g，茯苓、五倍子、秦皮、炙甘草等五味加6倍量水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，过滤。将滤液与上述提取挥发油后的水提取液合并，浓缩至相对密度为1.12的稀膏，加入乙醇使含醇量达50％，放置24小时，过滤，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.30～1.40稠膏，

5)将4)所得稠膏加入1)中所述细粉，混匀，60℃～80℃下干燥，加入3)中所述挥发油β-环糊精包合物；

6)将5)所得活性组分粉碎，制粒，干燥，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例2  本发明药物颗粒剂的制备

它由下列的原料药制成：

盐补骨脂120g，炒白术120g，炒山药80g，茯苓80g，五倍子40g，秦皮40g，煨肉豆蔻40g，煨木香20g，吴茱萸20g，炙甘草20g。

制备活性物质的步骤同实施例1的1)～5)，

6)将5)所得活性组分粉碎，制粒，干燥。

实施例3  本发明药物片剂的制备

它由下列的原料药制成：

盐补骨脂200g，炒白术200g，炒山药160g，茯苓160g，五倍子120g，秦皮120g，煨肉豆蔻120g，煨木香60g，吴茱萸60g，炙甘草60g。

制备活性物质的步骤同实施例1的1)～5)，

6)将5)所得活性组分粉碎，压片。

Claims (4)

1、一种治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎的药物，其特征在于：它主要是由下列重量份的原料药制成：

盐补骨脂120～200份，炒白术120～200份，炒山药80～160份，茯苓80～160份，五倍子40～120份，秦皮40～120份，煨肉豆蔻40～120份，煨木香20～60份，吴茱萸20～60份，炙甘草20～60份。

2、根据权利要求1所述的药物，其中各原料药的用量为：

盐补骨脂160份，炒白术160份，炒山药120份，茯苓120份，五倍子80份，秦皮80份，煨肉豆蔻80份，煨木香40份，吴茱萸40份，炙甘草40份。

3、权利要求1或2所述药物的制备方法：它包括下列步骤：

1)称取以上十味原料药，其中盐补骨脂及1/3量的炒山药粉碎成细粉，备用；

2)炒白术、煨肉豆蔻、煨木香和吴茱萸加6倍量水，浸泡12小时，水蒸气蒸馏6小时，得挥发油与水提取液，水提取液及药渣备用；

3)称取2)所得挥发油8倍量的β-环糊精，置适当玻璃容器中，加入β-环糊精6倍量的水，于磁力加热搅拌器上，恒温搅拌至30℃，取上述挥发油，按1∶1比例用无水乙醇稀释后，滴入β-环糊精溶液中，恒温搅拌3小时，置4℃冰箱中冷藏24小时，抽滤，40℃干燥4小时，备用。

4)药渣与其余2/3量炒山药，茯苓、五倍子、秦皮、炙甘草等五味加6倍量水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，过滤。将滤液与上述提取挥发油后的水提取液合并，浓缩至相对密度为1.12的稀膏，加入乙醇使含醇量达50％，放置24小时，过滤，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.30～1.40稠膏，

5)将4)所得稠膏加入1)中所述细粉，混匀，60℃～80℃下干燥，加入3)中所述挥发油β-环糊精包合物，就制备成了本发明药物的活性组分。

4、权利要求3所述药物的制备方法，还包括如下步骤：

6)将步骤5)所得活性组分粉碎，制粒，干燥，装入胶囊，得到胶囊剂。