CN1628649A - 一种含丹参素的药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含丹参素的药物组合物及其制备方法,其特征在于从中药丹参中得到丹参素,使其含量不低于80%,与药用辅料混合,制备成注射制剂,药理实验表明,本发明的各组制剂具有更好的药理作用。
Description
技术领域
本发明属于中药制药技术领域,具体涉及一种含丹参素的药物组合物及其制备方法。
技术背景
丹参(Radix Salviae Miltiorrhiza Bge)为唇形科(Labiatae)鼠尾草属植物,又名:紫丹参、红根、血参、大红袍等。味苦,性微寒。具有活血调经、祛瘀生新、镇静安神、凉血消痈、消肿止痛等功能。用于治疗月经不调、痛经、产后瘀阻腹痛、关节酸痛、神经衰弱失眠、心悸、痈肿疮毒等症。近代医学临床证明,丹参有扩张血管与增进冠状动脉血流量的作用,用来治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、心动过速等症,有显著的疗效。丹参主要成分为脂溶性成分和水溶性成分,先前丹参的化学工作集中于脂溶性成分,从中分离出丹参酮为代表的一系列二萜化合物,经药理实验证实具有一定的生理活性,但大量的药理和临床研究结果表明丹参的水溶性成分的活性强于脂溶性成分,丹参水溶性成分为:丹参酸A、B、C,丹参酸A又称丹参素,其结构为D(+)-β-(3,4-二羟基苯基)乳酸,丹参酸B是由3分子的丹参素和1分子的咖啡酸缩合形成的,就是丹参酚酸B,该物质不稳定,在一定条件下转化成丹参素;丹参酸C是2分子丹参素的缩合物;丹参药材中丹参素的含量0.02%,丹参酚酸B的含量为3-9%,而其市场提取物中丹参素的含量5-8%,丹参酚酸B的检测几乎为阴性,以上数据说明在一定条件下,丹参总酚酸可以转化为丹参素。
丹参素的具有很好的药理作用。(1)对心血管系统的作用:经药理试验证明,丹参素能显著增加离体豚鼠的冠脉血流量;舒张离体猪冠状动脉;对抗吗啡及心得安的缩血管作用;对抗或显著保护由垂体后叶素引起的大鼠S-T段缺血性心电变化;明显缩小狗心肌梗塞的范围和改善左心室功能;促进缺血性心肌损伤细胞的修复;为丹参水溶性部分中抗心肌缺血的主要成分;并具有改善心脏及外周微循环障碍等作用。(2)对血液系统的作用:丹参素可抑制ADP诱导的兔血小板聚集;使血小板粘附降低;明显降低血液粘度;抑制血小板的合成;对抗血栓形成和抗凝血作用;并可激活纤溶,促进纤维蛋白(原)降解;尚具钙拮抗作用,能抑制由氯化钾激发的红细胞的钙内流,稳定红细胞膜,从而产生抗溶血作用。
专利(申请号01126883)采用离子交换树脂或者大孔吸附树脂纯化丹参得到丹参素,该方法对丹参素的含量未作任何描述,只是从形式上说明该方法可行,是否能够工业化、产业化也未描述,经过分析该发明属于实验室小实验得到的结论;查阅专利文献,没有一种方法可以使丹参素含量达到80%以上。
发明内容
基于上述原因,本发明采用超声水提法进行提取,提取液醇沉除去一部分杂质,将上清液进行碱化、酸化处理,得到的溶液在用极性大孔树脂进行洗脱,洗脱液用醋酸乙脂萃取得到丹参素含量不低于80%的有效部位,与药用辅料混合制备成注射制剂,药理实验表明,本发明的各组制剂具有更好的药理作用。
本发明通过以下技术方案实现的。
一.工艺制法
(1)取丹参药材、切碎,置超声提取罐中,加6-10倍的水进行超声提取,时间为20-50分钟,振荡频率为20-100KHz,控制温度为室温,提取2-4次,合并提取液过滤,滤液60℃浓缩至相对密度为1.05-1.15(50℃),加乙醇使含醇量达50%-70%,于0℃-10℃静置24小时,过滤,滤液浓缩至相对对密度为1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小时,过滤,滤液加入碱液调PH值为9-11,煮沸0.5-3小时,放冷,4℃冷藏24小时,过滤,滤液用盐酸调节pH值为2-3,得到溶液;
(2)将上述溶液上大孔吸附树脂柱,先用3-6倍水洗,洗脱液弃去,再用6-10倍1-3mol/l的氯化钠洗脱,洗脱液用0.5-3倍的醋酸乙酯萃取3-9次,合并醋酸乙酯液,减压回收醋酸乙酯至尽,60℃以下真空干燥得以丹参素有效部位;
(3)取丹参有效部位80-100重量份,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到水针剂;
(4)取丹参有效部位160-200重量份,药用辅料200-240重量份,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到输液剂;
(5))取丹参有效部位80-100重量份,药用辅料100-120重量份,加注射用水溶解完全,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液灌装干燥,得到粉针剂。
输液剂的药用辅料为氯化钠、葡萄糖的一种。
粉针制剂的制备中赋形剂为甘露醇、蔗糖、乳糖中的一种或几种。
大孔吸附树脂为极性大孔吸附树脂。
二.检测分析
丹参有效部位丹参素含量检测分析
1.仪器与试药 高效液相色谱仪包括LC-10ATvp型溶剂输送泵,SPD-10ATvp型紫外可见检测器(日本岛津公司);N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所);KQ3200型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司),TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。色谱纯甲醇(北京化学试剂有效公司);水为三蒸水(自制);其它试剂均为分析纯。丹参素对照品(中国药品生物制品检定所)。
2.色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:迪马公司C18柱(5μm,150mm×4.6mm,I.D);流动相:甲醇-5%乙酸(25∶75);流速:1.0ml/min;检测波长:280nm。理论板数按丹参素峰记算应不低于3000。
3.对照品溶液制备 精密称取丹参素对照品5.0mg,置入10ml量瓶中,加入甲醇,超声使溶解,再加甲醇至刻度,摇匀,即得。
4.标准曲线制备 分别精密吸取上述对照品溶液1μl、2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl,在上述测定条件下进样测定,结果丹参素在0.5μg~6.0μg范围内呈良好线性关系,回归方程为Y=9726483X+3989,r=0.9997。
5.供试品溶液的制备 精密称定本发明丹参有效部位约10mg,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇10ml,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,取续滤液离心(12000rpm)10min,上清液作为供试品溶液。
6.测定法 精密吸取供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定峰面积,用标准曲线计算含量。
上述实验进行三次。结果见表1。
表1丹参有效部位丹参素含量
丹参有效部位丹参素含量 平均含量
组别
(%) (%)
1 83.2
2 82.5 82.9
3 82.9
结论:通过以上检测分析实验,我们可以分析到,采用本发明的工艺得到的丹参有效部位中丹参素含量大于80%,符合国家药监局对中药创新药5类的要求,充分说明本发明具有实际意义。
三.药理实施例
实施例1
对小鼠缺氧耐力的影响实验
实验药物:本发明各组制剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)丹参注射液(浙江天瑞药业有限公司)
生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
实验方法:取健康昆明种小鼠50只,体重20~24g。每组10只,雌雄各半,分笼饲养。以人常规治疗剂量折算为小鼠的剂量。折算公式为:待测动物试用剂量=已知动物给药量×待测动物的体表面积比值/已知动物的体表面积比值。对照组给生理盐水,1次/d,连续7d。于末次给药后1h,将小鼠分别置于体积为150ml磨口瓶中,内放15g钠石灰,密闭观察其存活时间。结果见表2.
表2 对小鼠常压缺氧的影响(X±SD)
鼠数 平均存活时间
组别
(只) (min)
生理盐水 10 15.81±2.91
丹参注射液 10 20.12±3.62**
本发明水针剂 10 31.98±4.68**[*]
本发明输液剂 10 32.41±4.15**[*]
本发明粉针剂 10 32.06±4.23**[*]
注:**P<0.01,与阳性对照组比较[*]P<0.05
实施例2
对小鼠心肌缺氧的保护作用实验
实验药物:本发明各组制剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
丹参注射液(浙江天瑞药业有限公司)
生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
实验方法:取健康昆明种小鼠50只,体重18~22g,随机分成5组。每组雌雄各半,分笼饲养。以人常规治疗剂量折算为小鼠的剂量。折算公式为:待测动物试用剂量=已知动物给药量×待测动物的体表面积比值/已知动物的体表面积比值。对照组给生理盐水。给药方法:1次/d,连续6d。于末次给药后1h用乌拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉,背部固定,分离气管,以动脉夹夹闭气管,用心电仪观察心电,并用秒表记下小鼠夹闭气管后至心电消失的时间。结果见表3。
表3对小鼠心肌缺氧的影响(X±SD)
鼠数 平均存活时间
组别
(只) (min)
生理盐水 10 5.01±0.28
丹参注射液 10 9.81±0.77**
本发明水针剂 10 14.12±1.34**[*]
本发明输液剂 10 14.01±1.29**[*]
本发明粉针剂 10 14.56±1.38**[*]
注:**P<0.01,与阳性对照组比较[*]P<0.05
结论:通过以上药理实验表明,本发明的各组制剂具有更好的药理作用。
四.制备实施例
实施例1
(1)取丹参药材4000克、切碎,置超声提取罐中,加6倍的水进行超声提取,时间为20分钟,振荡频率为20KHz,控制温度为室温,提取2次,合并提取液过滤,滤液60℃浓缩至相对密度为1.05(50℃),加乙醇使含醇量达50%,于0℃静置24小时,过滤,滤液浓缩至相对对密度为1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小时,过滤,滤液加入碱液调PH值为9,煮沸0.5小时,放冷,4℃冷藏24小时,过滤,滤液用盐酸调节pH值为2,得到溶液;
(2)将上述溶液上极性大孔吸附树脂柱,先用3倍水洗,洗脱液弃去,再用6倍1mol/l的氯化钠洗脱,洗脱液用0.5倍的醋酸乙酯萃取3次,合并醋酸乙酯液,减压回收醋酸乙酯至尽,60℃以下真空干燥得以丹参素有效部位;(经过检测分析实验,丹参素含量83.1%)
(3)取丹参有效部位80克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到水针剂1000支;
(4)取丹参有效部位160克,药用辅料葡萄糖240克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到输液剂1000瓶;
(5)取丹参有效部位80克,药用辅料甘露醇120克,加注射用水溶解完全,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液灌装干燥,得到粉针剂1000瓶。
实施例2
(1)取丹参药材4000克、切碎,置超声提取罐中,加10倍的水进行超声提取,时间为50分钟,振荡频率为100KHz,控制温度为室温,提取4次,合并提取液过滤,滤液60℃浓缩至相对密度为1.15(50℃),加乙醇使含醇量达70%,于10℃静置24小时,过滤,滤液浓缩至相对对密度为1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小时,过滤,滤液加入碱液调PH值为11,煮沸3小时,放冷,4℃冷藏24小时,过滤,滤液用盐酸调节pH值为3,得到溶液;
(2)将上述溶液上极性大孔吸附树脂柱,先用6倍水洗,洗脱液弃去,再用10倍3mol/l的氯化钠洗脱,洗脱液用3倍的醋酸乙酯萃取9次,合并醋酸乙酯液,减压回收醋酸乙酯至尽,60℃以下真空干燥得以丹参素有效部位;(经过检测分析实验,丹参素含量83.6%)
(3)取丹参有效部位100克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到水针剂1000支;
(4)取丹参有效部位200克,药用辅料氯化钠200克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到输液剂1000瓶;
(5)取丹参有效部位100克,药用辅料蔗糖100克,加注射用水溶解完全,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液灌装干燥,得到粉针剂1000瓶。
实施例3
(1)取丹参药材4000克、切碎,置超声提取罐中,加7倍的水进行超声提取,时间为25分钟,振荡频率为30KHz,控制温度为室温,提取3次,合并提取液过滤,滤液60℃浓缩至相对密度为1.08(50℃),加乙醇使含醇量达55%,于2℃静置24小时,过滤,滤液浓缩至相对对密度为1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小时,过滤,滤液加入碱液调PH值为9.5,煮沸1小时,放冷,4℃冷藏24小时,过滤,滤液用盐酸调节pH值为2.5,得到溶液;
(2)将上述溶液上极性大孔吸附树脂柱,先用4倍水洗,洗脱液弃去,再用7倍1.5mol/l的氯化钠洗脱,洗脱液用1倍的醋酸乙酯萃取4次,合并醋酸乙酯液,减压回收醋酸乙酯至尽,60℃以下真空干燥得以丹参素有效部位;(经过检测分析实验,丹参素含量82.9%)
(3)取丹参有效部位85克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到水针剂1000支;
(4)取丹参有效部位170克,药用辅料葡萄糖230克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,
滤液进行灌装,检验,得到输液剂1000瓶;
(5)取丹参有效部位85克,药用辅料乳糖115克,加注射用水溶解完全,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液灌装干燥,得到粉针剂1000瓶。
实施例4
(1)取丹参药材4000克、切碎,置超声提取罐中,加8倍的水进行超声提取,时间为30分钟,振荡频率为40KHz,控制温度为室温,提取3次,合并提取液过滤,滤液60℃浓缩至相对密度为1.10(50℃),加乙醇使含醇量达60%,于0℃-10℃静置24小时,过滤,滤液浓缩至相对对密度为1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小时,过滤,滤液加入碱液调PH值为10,煮沸1.5小时,放冷,4℃冷藏24小时,过滤,滤液用盐酸调节pH值为2.5,得到溶液;
(2)将上述溶液上极性大孔吸附树脂柱,先用5倍水洗,洗脱液弃去,再用8倍2mol/l的氯化钠洗脱,洗脱液用2倍的醋酸乙酯萃取5次,合并醋酸乙酯液,减压回收醋酸乙酯至尽,60℃以下真空干燥得以丹参素有效部位;(经过检测分析实验,丹参素含量83.4%)
(3)取丹参有效部位90克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到水针剂1000支;
(4)取丹参有效部位180克,药用辅料氯化钠220克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到输液剂1000瓶;
(5)取丹参有效部位90克,药用辅料甘露醇、蔗糖110克,加注射用水溶解完全,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液灌装干燥,得到粉针剂1000瓶。。
实施例5
(1)取丹参药材4000克、切碎,置超声提取罐中,加9倍的水进行超声提取,时间为35分钟,振荡频率为60KHz,控制温度为室温,提取3次,合并提取液过滤,滤液60℃浓缩至相对密度为1.12(50℃),加乙醇使含醇量达65%,于6℃静置24小时,过滤,滤液浓缩至相对对密度为1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小时,过滤,滤液加入碱液调PH值为10,煮沸2小时,放冷,4℃冷藏24小时,过滤,滤液用盐酸调节pH值为2.5,得到溶液;
(2)将上述溶液上极性大孔吸附树脂柱,先用5倍水洗,洗脱液弃去,再用9倍3mol/l的氯化钠洗脱,洗脱液用2.5倍的醋酸乙酯萃取8次,合并醋酸乙酯液,减压回收醋酸乙酯至尽,60℃以下真空干燥得以丹参素有效部位;(经过检测分析实验,丹参素含量82.8%)
(3)取有丹参效部位95克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到水针剂1000支;
(4)取丹参有效部位190克,药用辅料210克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到输液剂1000瓶;
(5)取丹参有效部位95克,药用辅料甘露醇、乳糖105克,加注射用水溶解完全,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液灌装干燥,得到粉针剂1000瓶。
实施例6
(1)取丹参药材4000克、切碎,置超声提取罐中,加8倍的水进行超声提取,时间为45分钟,振荡频率为85KHz,控制温度为室温,提取3次,合并提取液过滤,滤液60℃浓缩至相对密度为1.14(50℃),加乙醇使含醇量达65%,于7℃静置24小时,过滤,滤液浓缩至相对对密度为1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小时,过滤,滤液加入碱液调PH值为10,煮沸2小时,放冷,4℃冷藏24小时,过滤,滤液用盐酸调节pH值为3,得到溶液;
(2)将上述溶液上极性大孔吸附树脂柱,先用4倍水洗,洗脱液弃去,再用7倍2mol/l的氯化钠洗脱,洗脱液用2倍的醋酸乙酯萃取7次,合并醋酸乙酯液,减压回收醋酸乙酯至尽,60℃以下真空干燥得以丹参素有效部位;(经过检测分析实验,丹参素含量83.5%)
(3)取丹参有效部位98克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到水针剂1000支;
(4)取丹参有效部位196克,药用辅料氯化钠204克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到输液剂1000瓶;
(5)取丹参有效部位98克,药用辅料蔗糖、乳糖102克,加注射用水溶解完全,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液灌装干燥,得到粉针剂1000瓶。
实施例7
(1)取丹参药材40000克、切碎,置超声提取罐中,加8倍的水进行超声提取,时间为40分钟,振荡频率为60KHz,控制温度为室温,提取3次,合并提取液过滤,滤液60℃浓缩至相对密度为1.10(50℃),加乙醇使含醇量达60%,于4℃静置24小时,过滤,滤液浓缩至相对对密度为1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小时,过滤,滤液加入碱液调PH值为10,煮沸2小时,放冷,4℃冷藏24小时,过滤,滤液用盐酸调节pH值为2,得到溶液;
(2)将上述溶液上极性大孔吸附树脂柱,先用4倍水洗,洗脱液弃去,再用8倍2mol/l的氯化钠洗脱,洗脱液用2倍的醋酸乙酯萃取6次,合并醋酸乙酯液,减压回收醋酸乙酯至尽,60℃以下真空干燥得以丹参素有效部位;(经过检测分析实验,丹参素含量82.9%)
(3)取丹参有效部位1000克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到水针剂10000支;
(4)取丹参有效部位2000克,药用辅料葡萄糖2000克,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到输液剂10000瓶;
(5)取丹参有效部位1000克,药用辅料甘露醇、蔗糖、乳糖1000克,加注射用水溶解完全,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液灌装干燥,得到粉针剂10000瓶。
Claims (3)
1.一种丹参素的药物组合物,其特征在于它是由下述方法制备而成的:
(1)取丹参药材、切碎,置超声提取罐中,加6-10倍的水进行超声提取,时间为20-50分钟,振荡频率为20-100KHz,控制温度为室温,提取2-4次,合并提取液过滤,滤液60℃浓缩至相对密度为1.05-1.15(50℃),加乙醇使含醇量达50%-70%,于0℃-10℃静置24小时,过滤,滤液浓缩至相对对密度为1.05(50℃)左右的浸膏冷藏(4℃)48小时,过滤,滤液加入碱液调PH值为9-11,煮沸0.5-3小时,放冷,4℃冷藏24小时,过滤,滤液用盐酸调节pH值为2-3,得到溶液;
(2)将上述溶液上大孔吸附树脂柱,先用3-6倍水洗,洗脱液弃去,再用6-10倍1-3mol/l的氯化钠洗脱,洗脱液用0.5-3倍的醋酸乙酯萃取3-9次,合并醋酸乙酯液,减压回收醋酸乙酯至尽,60℃以下真空干燥得以丹参素有效部位,其中丹参有效部位丹参素的含量不低于80%。
2.根据权利要求1所述的大孔吸附树脂为极性大孔吸附树脂。
3.根据权利要求1所述的药物组合物,其特征将上述丹参有效部位制备成水针剂、输液剂、粉针剂:
(1)取丹参有效部位80-100重量份,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到水针剂;
(2)取丹参有效部位160-200重量份,药用辅料200-240重量份,加注射用水溶解完全,用葡甲胺调PH值为5-8,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液进行灌装,检验,得到输液剂;
(3)取丹参有效部位80-100重量份,药用辅料100-120重量份加注射用水溶解完全,用0.22um微孔滤膜过滤,滤液灌装干燥,得到粉针剂。
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2004
- 2004-09-10 CN CN 200410074650 patent/CN1264506C/zh not_active Expired - Fee Related
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