CN1589897A - 一种治疗奶牛临床乳房炎的生物性免疫制剂及其制作方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗奶牛临床乳房炎的生物性免疫制剂及其制作方法，其具有抗细菌、病毒、真菌及寄生虫等多种功能，避免了抗生素只抗细菌的局限，并且克服了抗生素治标不治本的局限，从提高奶牛免疫抵抗力尤其是乳房局部免疫力来达到治疗奶牛临床乳房炎这一根本途径入手，实现治愈奶牛乳房炎的目的。本发明包括以下组分：猪淋巴细胞转移因子为0％－100％；牛淋巴细胞转移因子为0％－100％。工艺过程为：选取猪、牛的脾脏绞碎按比例混合后进行组织捣碎匀浆，将匀浆液反复进行冰冻、解融，再进行冷冻离心，取上清液经过透析、冰冻、解冻、过滤后制成成品。

Description

一种治疗奶牛临床乳房炎的生物性免疫制剂及其制作方法

一、技术领域：

本发明涉及一种生物性免疫制剂，尤其是涉及一种治疗奶牛临床乳房炎的生物性免疫制剂及其制作方法。

二、背景技术：

奶牛临床乳房炎已成为奶牛场最严重最常见的疾病之一，发病率高达30％-80％，它严重影响奶牛的产奶量，降低奶牛养殖场的经济效益。据专家估计，全球每年因为奶牛乳房炎所造成的牛奶损失可达380万吨。更重要的是，患乳房炎奶牛所产的牛奶品质下降，有害微生物含量超标，严重危及人体健康。奶牛乳房炎已经成为制约奶牛养殖业健康快速发展的关键因素之一。

奶牛乳房炎是由多种非特定的病原微生物感染奶牛乳房所导致，这些病原包括细菌、病毒、真菌和霉形体。引起奶牛乳房炎的病原微生物多达80多种，较常见的有23种，其中细菌14种，霉形体2种，真菌和病毒7种，这是奶牛乳房炎不同于其他疾病的主要特点之一。

奶牛乳房炎的主要致病微生物以细菌为主，抗生素一直是该病的主要治疗药物。目前，兽医治疗奶牛临床乳房炎所使用的抗生素有p-内酰胺类抗生素包括青霉素和头孢菌素，氨基糖甙类药物如链霉素、新生霉素，大环内脂类抗生素如红霉素、螺旋霉素，土霉素类及林可霉素和克林霉素等。

抗生素使用的缺点：由于抗生素的长期使用使得奶牛体内的病原菌产生了耐药性。大量的研究资料证实，牛奶中分离出的病原菌对许多种抗生素没有反应。细菌耐药性的出现，使得临床治疗乳房炎时，抗生素的用量由过去的几十万个单位猛增到现在的几百万个单位，即使这样，有时还难以奏效。大剂量使用抗生素，不仅提高了奶牛养殖成本，降低了利润，而且导致奶牛抗生素残留量上升，牛奶品质下降。由于抗生素的热稳定性较强，即使经高温加热也无法把它们清除掉。长期饮用这样的含有大量抗生素残留的牛奶，势必危害消费者身体健康：抗生素过敏体质的人可能出现过敏反应，甚至发生过敏休克，危及生命；正常人群则会使体内的细菌产生抗药性。乳房炎奶牛生产的牛奶中除了抗生素残留外，还有含有病原菌及其代谢产物等对人体有害的成分。

乳房炎疫苗的缺点：目前国内外有些公司或个人从乳房炎患牛中分离病原菌，将其培养灭活后制成灭活菌苗，然后免疫奶牛以预防奶牛乳房炎的发生。据报道，这种方法在试验中取得了一定的效果。但疫苗免疫法存在有两个问题难以解决，首先由于引起乳房炎病原菌的复杂性及多样性(前面已详述)，所制备的疫苗在免疫奶牛后只能使奶牛对有限的几种病原菌产生特异性免疫力。更重要的是这种疫苗属于预防性疫苗而不是治疗性疫苗，难以解决乳房炎的治疗问题。另外，据调查，这种疫苗属于灭活苗，价格昂贵(每头份超过100元)。

中药使用的缺点：中药防治奶牛乳房炎是我国的一大特色。但其治疗效果还不如抗生素，并且疗效慢，配方复杂。更重要的，该制剂使用时需要灌服，耗费大量的人力。如果添加在饲料中，则影响治疗效果，或者适口性差，影响奶牛的饲料摄入。

三、发明内容：

本发明为了解决上述背景技术中的不足之处，提供一种治疗奶牛乳房炎的生物性免疫制剂及其制作方法，其具有抗细菌、病毒、真菌及寄生虫等多种功能，避免了抗生素只抗细菌的作用局限，并且克服了抗生素治标不治本的局限，从提高奶牛免疫功能尤其是乳房局部免疫功能来达到治疗奶牛临床乳房炎这一根本途径入手，实现治愈奶牛乳房炎的目的。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种治疗奶牛临床乳房炎的生物性免疫制剂，其特殊之处在于包括以下组分：猪淋巴细胞转移因子为0％-100％；牛淋巴细胞转移因子为0％-100％。

一种治疗奶牛临床乳房炎的生物性免疫制剂的制作方法，其特殊之处在于包括以下操作步骤：选取猪、牛的脾脏绞碎单独或按比例混合后进行匀浆，将匀浆液反复进行冰冻、解冻，再进行冷冻离心，取上清液经过透析、冰冻、解冻、过滤后制成成品。

上述操作步骤包括：选取健康猪、牛的新鲜脾脏，除去脾脏表面及内部的解缔组织后，冰冻保存，取上述冰冻脾脏，待其解融后，绞碎，将绞碎的猪脾和牛脾混合，每份按照猪脾∶牛脾＝0～10∶0～10(重量比)，再加入与脾脏等重量的无菌三蒸水后，进行组织捣碎匀浆，速度为8000～10000转/分钟，时间为6～10分钟，制备好的匀浆液于-20℃冰冻24～48小时后，取出置于水浴恒温振荡器中进行往复振荡直至冰冻的匀浆块全部化为匀浆液，振荡器水温保持在室温，振荡速度为60～100转/分钟，将匀浆液冰冻、解冻，反复6次，取最后一次解冻的匀浆液，以10000转/分钟冷冻离心30分钟后，取上清液，装入透析袋，在用三蒸水配制的无菌生理盐中透析48小时，收取透析袋外的透析液，冰冻48～96小时后再次解冻，经滤膜过滤，除去细菌及沉淀，收集滤过液，该滤过液经无菌分装后冰冻保存。

上述组织捣碎匀浆过程采用间歇方式，即每匀浆3分钟停止10分钟。

上述透析袋截留分子量可以是10KD。

与现有技术相比，本发明具有的优点和效果如下：

1、本产品具有抗细菌、病毒、真菌及寄生虫的优点。①避免了抗生素只抗细菌的作用局限。抗生素只对细胞外细菌有杀灭作用，对细胞内寄生的细菌如结核菌等则无作用。本产品本身不能直接杀灭病原微生物，而是通过激活乳房炎患牛的免疫系统来达到清除病原微生物、治愈乳房炎的效应。乳房炎患牛的免疫系统一旦被激活，对体内所有病原微生物包括细菌、真菌、病毒及寄生虫均发挥清除作用。②克服了抗生素治标不治本的局限，并且长期使用抗生素也会降低奶牛的抵抗力，导致奶牛临床乳房炎复发率提高。本产品从提高奶牛免疫功能尤其是乳房局部免疫功能来达到治疗奶牛临床乳房炎这一根本途径入手，实现治愈奶牛乳房炎的目的。乳房炎患牛使用本产品后，由于整体免疫功能提高，因而治愈后复发率大大低于抗生素治愈后的奶牛乳房炎复发率。③奶牛使用本产品，不仅对治疗临床乳房炎有良好的疗效，同时对奶牛抗其他传染病也有较好的效果。

2、本产品进入机体后，能够迅速发挥其效应，避免了中药作用缓慢的缺点。中药之所以在治疗奶牛临床乳房炎中不被重视，其很重要的一个原因是药效不如抗生素快，此外一些中药还有毒副作用。据我们对本产品在奶牛厂的试验观察，本产品的疗效丝毫不亚于抗生素。

3.、本产品进入奶牛体内后，能够被迅速、完全吸收，且无任何残留，奶牛分泌的牛奶中也无任何残留。

4、本产品使用途径为肌肉注射，且可在奶牛的任何肌肉部位注射。避免了经乳头注射抗生素或灌服中药耗工、费时的缺陷。

5、本产品使用后，奶牛所产的牛奶可正常出售，避免了抗生素使用后一周内必须废弃牛奶的缺陷。为奶牛厂挽回了废弃牛奶所造成的损失。

6、经过临床试验，本产品对奶牛临床乳房炎的治愈率约为80％。患临床乳房炎的奶牛，每日注射本产品一次，每次注射10毫升，平均连续使用约4天左右，即可治愈乳房炎患牛。

7.本产品多次使用，奶牛不会产生抗药性，因此药效稳定。避免了抗生素连续使用导致奶牛产生抗药性，从而不得不在使用中加大药量的缺陷。

四、具体实施方式：

本发明制剂包括猪淋巴细胞转移因子、牛淋巴细胞转移因子。各组分组成所占比例范围为：猪淋巴细胞转移因子0％-100％；牛转移因子为0％-100％。

实施例1：  猪淋巴细胞转移因子     18iu

           牛淋巴细胞转移因子     2iu

实施例2：  猪淋巴细胞转移因子     10iu

           牛淋巴细胞转移因子     10iu

工艺过程：

从屠宰车间选取健康猪、牛的新鲜脾脏，并经检视脾脏无病变、色泽正常后，除去脾脏表面及内部的解缔组织后，冰冻保存。取上述冰冻脾脏，待其解融后，绞碎。将绞碎的猪脾和牛脾混合，每份按照猪脾∶牛脾＝0～10∶0～10(重量比)，再加入与脾脏等重量的无菌三蒸水后，进行组织捣碎匀浆，速度为约8000～10000转/分钟，时间为6～10分钟左右。组织捣碎匀浆过程以间歇方式，即每匀浆3分钟停止10分钟左右进行为佳，其目的是防止匀浆机高速运转过热，影响机器寿命。制备好的匀浆液于零下20℃冰冻24～48小时后，取出置于水浴恒温振荡器中进行往复振荡，振荡器水温保持在室温条件，振荡速度约为60～100转/分钟，振荡时间以冰冻的匀浆块全部化为匀浆液为标准。如此，将匀浆液冰冻、解冻，反复进行6次。取最后一次解冻的匀浆液，以10000转/分钟高速冷冻离心30分钟后，取上清液，装入透析袋(截留分子量为10KD)，在用三蒸水配制的无菌生理盐中透析48小时。收取透析袋外的透析液，冰冻48～96小时后再次解冻，经0.22μm的滤膜过滤，除去细菌及沉淀，收集滤过液。该滤过液经无菌分装，冰冻保存。使用时用自来水或自然解冻，待瓶内液体恢复至室温后即可直接注射给牛奶。

本发明的工作原理：

本发明所含的生物活性因子进入乳房炎奶牛体内后，首先刺激牛奶骨髓造血干细胞产生大量免疫细胞，并促使这些免疫细胞被释放至外周血。外周血的T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞及粒细胞被本产品的活性因子激活，然后经淋巴细胞循环进入乳房组织，杀灭导致乳房炎的病原微生物。和治疗前乳房组织中低活性的免疫细胞相比，经本制剂激活的免疫细胞杀伤病原微生物能力得到极大的增强，因此使用本产品后奶牛乳房中的病原微生物能够被迅速清除，使临床乳房炎患牛很快得以康复。

本发明所含活性成分全部来自动物免疫细胞。所有成分这些进入奶牛体内后，其作用的靶细胞均为奶牛免疫细胞，奶牛免疫细胞受这些成分的作用后，静息免疫细胞被激活，活化免疫细胞活性被强化，尤其是奶牛白细胞数量及活性的显著提高。这些活化的免疫细胞使得奶牛乳腺免疫力和整体免疫力得到明显改善，具体表现在乳房局部的白细胞杀灭病原微生物能力大大提高，导致奶牛乳房炎的病原微生物迅速被清除，乳房炎患牛很快被治愈。另外，由于奶牛整体免疫力的提高，抗御病原微生物侵袭能力加强，奶牛不易被包括细胞内寄生菌和病毒在内的病原微生物再次感染，这是本产品在治疗乳房炎奶牛中优于抗生素之关键所在。

此外，本产品所有成分均为生物活性因子，其受体细胞均为免疫细胞，所以进入奶牛机体后能够直接作用于奶牛免疫细胞。因此，使用后见效快，并且被奶牛全部、迅速吸收，无任何残留及毒副作用。这是其优于抗生素及中药的另一方面。

由于本产品不直接作用于细菌，而是通过提高奶牛细胞免疫功能达到清除病原微生物，治愈奶牛乳房炎的目的，因此不会使细菌产生耐药性。

本产品为生物活性成分，经注射途径进入机体效果最佳，因此直接肌肉注射是保证本产品发挥最佳效果的前提。本产品经肌肉注射在治疗奶牛乳房炎时，和抗生素经乳头注射进乳池治疗乳房炎相比，使用方法简便，省时、省力。

Claims (5)

1、一种治疗奶牛临床乳房炎的生物性免疫制剂，其特征在于包括以下组分：猪淋巴细胞转移因子为0％-100％；牛淋巴细胞转移因子为0％-100％。

2、一种治疗奶牛临床乳房炎的生物性免疫制剂的制作方法，其特征在于包括以下操作步骤：选取猪、牛的脾脏绞碎按比例混合后进行匀浆，将匀浆液反复进行冰冻、解冻，再进行冷冻离心，取上清液经过透析、冰冻、解冻、过滤后制成成品。

3、根据权利要求2所述的一种治疗奶牛临床乳房炎的生物性免疫制剂的制作方法，其特征在于包括以下操作步骤：选取健康猪、牛的新鲜脾脏，除去脾脏表面及内部的结缔组织后，冰冻保存，取上述冰冻脾脏，待其解融后，绞碎，将绞碎的猪脾和牛脾混合，每份按照猪脾∶牛脾＝0～10∶0～10(重量比)，再加入与脾脏等重量的无菌三蒸水后，进行组织捣碎匀浆，速度为8000～10000转/分钟，时间为6～10分钟，制备好的匀浆液于-20℃冰冻24～48小时后，取出置于水浴恒温振荡器中进行往复振荡直至冰冻的匀浆块全部化为匀浆液，振荡器水温保持在室温，振荡速度为60～100转/分钟，将匀浆液冰冻、解融，反复进行6次，取最后一次解冻的匀浆液，以10000转/分钟冷冻离心30分钟后，取上清液，装入透析袋，在用三蒸水配制的无菌生理盐中透析48小时，收取透析袋外的透析液，冰冻48～96小时后再次解冻，经滤膜过滤，除去细菌及沉淀，收集滤过液，该滤过液经无菌分装后冰冻保存。

4、根据权利要求3所述的一种治疗奶牛临床乳房炎的生物性免疫制剂的制作方法，其特征在于包括以下操作步骤：所述组织捣碎匀浆过程采用间歇方式，即每匀浆3分钟停止10分钟。

5、根据权利要求4所述的一种治疗奶牛临床乳房炎的生物性免疫制剂的制作方法，其特征在于包括以下操作步骤：所述透析袋截留分子量为10KD。