CN1586611A

CN1586611A - 一种治疗肝炎的颗粒剂的制备及质量控制方法

Info

Publication number: CN1586611A
Application number: CN 200410078096
Authority: CN
Inventors: 濮桂宝
Original assignee: YITAI MEDICINE SCIENCE AND TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co Ltd INNER MENGOLIA
Current assignee: Inner Mongolia Kang'enbei Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2004-09-23
Filing date: 2004-09-23
Publication date: 2005-03-02
Anticipated expiration: 2024-09-23
Also published as: CN1309372C

Abstract

本发明涉及一种具有清热利湿，补脾养血，益气解郁之功效，主要用于治疗慢性肝炎，早期肝硬化，脂肪肝，中毒性肝炎的中药颗粒剂的制备方法和质量控制方法。该制剂由茵陈等16味中药为原料药制成，含β－环糊精200重量份，制备工艺中采用喷雾干燥及干式制粒的方法，最大限度地保留了有效成分，显著提高了药物的稳定性。该制剂的质量控制方法包括：当归、白芍、丹参、黄芪、甘草的薄层鉴别，芍药苷的含量测定(色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为28∶72的甲醇－0.05％三氟乙酸水为流动相，检测波长为230nm流速1.0ml/min；柱温30℃)，各制剂每袋含白芍以芍药苷计，不得少于8.0mg。

Description

一种治疗肝炎的颗粒剂的制备及质量控制方法

〔技术领域〕

本发明涉及一种治疗肝炎的颗粒剂的制备方法及质量控制方法，该颗粒是一种具有清热利湿，补脾养血，益气解郁之功效，用于治疗慢性肝炎，早期肝硬化，脂肪肝，中毒性肝炎的药物，属中药领域。

〔背景技术〕

我国是病毒性肝炎的高发地区，据卫生防疫部门的疫情报告，我国病毒性肝炎的年发病率为万分之九十五，在法定传染病中其发病率位居第三，仅次于感染性腹泻和流行性感冒；并且，肝炎还需长期服用保肝药物。长期服用现代化学药物多有伤肝的副作用，而中药以多活性成分、多靶点药效为特色，治疗与调理病态生理功能为特点，并可供长期服用。因此，发扬中医药传统优势，开发制剂稳定、用药安全、剂量准确、质量可控、疗效可靠的中药制剂具有重要意义。

中药强肝糖浆(《中华人民共和国国家药品标准中药成方制剂第二册》，中华人民共和国卫生部药典委员会主编，1991年12月31日)是一种用于治疗慢性肝炎，早期肝硬化，脂肪肝，中毒性肝炎的中药成药制剂，由主原料药茵陈、板蓝根、当归、白芍、丹参、郁金、黄芪、党参、泽泻、黄精、地黄、山药、山楂、六神曲、秦艽、甘草制成，方中以茵陈清热利湿，党参补益中气，黄芪、山药补气健脾，丹参养血活血，共为主药；当归、白芍、生地、黄精滋阴(血)养肝，山楂、六神曲健脾和胃；板兰根清热解毒，秦艽通络止痛，郁金活瘀清肝，共为佐药，泽泻利湿，甘草和中，共为使药。现代科学研究表明，茵陈的有效成分是绿原酸，绿原酸具有保肝、利胆、抗病毒之功效[胡润生.茵陈有效成分与品种、采收期及药用部位关系.中成药，1998，20(5)：47]，阿魏酸具有抗菌、抗病毒的作用[欧仕益，包惠燕，蓝志东.阿魏酸及其衍生物的药理作用研究进展.中药材，2001，24(3)：220]，甘草酸可直接抗HBV及改善肝功能障碍[白木公康.甘草酸抗乙肝病毒的作用机理.和汉医药学杂志(日)，1995，12(1)：24]，当归中水溶性成分当归素有保护肝脏的作用[汪晖，彭仁秀.当归素对四氯化碳肝损害的保护作用.湖北医学院学报，1992，13(2)：117]，白芍中的芍药苷也具有保肝作用[淫羊藿苷、芍药苷.中国农业投资指南，2001，(12)：31～32]。

目前，“强肝糖浆”为液体制剂，其制剂工艺落后，为了提高酸性有效成分的溶解度，药液需调pH值至8，但在较高pH值的条件下，加热浓缩时会使大量多酚类成分(如绿原酸、阿魏酸等)破坏，并可使芍药苷等苷类有效成分碱水解破坏，使其含量成倍下降(参见实施例四表3)；其剂型落后，其中药物的稳定性差，长时间储存会产生沉淀浑浊，水溶性差的多种挥发油成分、藁本内酯、丹参酮、梓醇、23-乙酰泽泻醇B、表泽泻醇等有效成分析出，同时液体制剂中的阿魏酸、藁本内酯在水溶液里亦不稳定，易分解转化；“强肝糖浆”中无严格的质量控制方法，使其制剂的疗效无法得到保证。因此，“强肝糖浆”制剂不符合现代药物疗效可靠、质量可控的要求。所以，本发明的内容就是提供一种“强肝糖浆”的新剂型及其制备方法和质量控制方法。

本发明的目的之一是提供一种中药“强肝颗粒”的制备工艺，该工艺避免了原工艺中调pH值至8的操作，使绿原酸、阿魏酸、芍药苷等主要有效成分基本保留，成倍提高了有效成分的含量；本发明又加入β-环糊精使脂溶性成分分散，起到助溶作用，从而减少有效成分的损失，更好的保留其有效成分，制成的混悬型颗粒使溶解度差的多种挥发油成分、藁本内酯、丹参酮、梓醇、23-乙酰泽泻醇B、表泽泻醇等有效成分被助溶或与辅料呈混悬态，最大限度地保留了有效成分，而制剂中的阿魏酸、藁本内酯在水溶液里不稳定，通过制成颗粒的固体制剂，使有效成分比原剂型显著提高，从而大大提高了本方的疗效；本发明目的之二是提供了该“强肝颗粒”的质控方法，通过薄层鉴别、含量测定，较好地控制了药物的质量，达到现代药物质量可控的目的。

〔发明内容〕

本发明“强肝颗粒剂”由250重量份茵陈、125重量份板蓝根、125重量份当归、125重量份白芍、250重量份丹参、125重量份郁金、250重量份黄芪、125重量份党参、125重量份泽泻、125重量份黄精、125重量份地黄、125重量份山药、100重量份山楂、100重量份六神曲、100重量份秦艽、100重量份甘草原料药制成，药剂还含β-环糊精200重量份，成型剂糊精267重量份。

本中药“强肝颗粒剂”的制备方法按如下步骤：

称取250重量份茵陈、125重量份板蓝根、125重量份当归、125重量份白芍、250重量份丹参、125重量份郁金、250重量份黄芪、125重量份党参、125重量份泽泻、125重量份黄精、125重量份地黄、125重量份山药、100重量份山楂、100重量份六神曲、100重量份秦艽、100重量份甘草，备用；

以上十六味，加水煎煮三次，合并滤液，滤液浓缩至相对密度1.12(50℃)，加入β-环糊精200重量份，使之溶解，趁热充分搅拌，喷雾干燥(热空气进风温度170℃，出风温度80℃)，喷干粉加成型剂糊精267重量份，加矫味剂甜菊糖苷5重量份，充分拌匀，物料在60℃温度下干法压片、制粒，整粒，分装，即得产品(5g/袋)。

本发明强肝颗粒剂的鉴别方法，具体步骤是：

a.取本品10g，加水20ml，加热使溶解，加醇使含醇量达70％，取上清液，蒸干，加水20ml使溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加10ml乙酸乙酯超声提取30min，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯体系为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下(365nm)观察，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b.取本品15g，加水60ml，加热使溶解，上已处理好的AB-8大孔树脂(大孔树脂用量为40ml，湿法上柱，内径15-20mm)，40％的乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，加15ml水溶解，上已处理好的聚酰胺柱(聚酰胺用量为20ml，湿法上柱，内径15-20mm)，收集流出液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，用甲醇溶解，制成每1ml含1mg对照品溶液；吸取上述供试品液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为40∶5∶10∶0.2的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.取本品15g，加水30ml，加热使溶解，加醇使含醇量达70％，取上清液，蒸干，加水30ml使溶解，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材粉末1g，加乙醚5ml，置具塞试管中，振摇，放置1小时，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作成对照药材溶液；吸取上述供试品液15μl，对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1∶9的醋酸乙酯-甲苯体系为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d.取本品25g，加水50ml，加热使溶解，加醇使含醇量达70％，取上清液，蒸干，加水50ml使溶解，置分液漏斗中，用乙醚洗三次，每次40ml，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇萃取5次，每次30ml，合并正丁醇液，用1％氢氧化钾洗涤两次，每次60ml，弃去洗液，再用正丁醇饱和的水洗至中性，提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液；吸取上述供试品液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为65∶35∶10的氯仿-甲醇-水10℃以下放置的下层溶液体系为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

e.取本品15g，加水60ml，加热使溶解，加于已处理好的D₁₀₁型大孔树脂柱(大孔树脂用量为40ml，湿法上柱，内径15-20mm)上，用60ml70％乙醇洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加水30ml溶解，上已处理好的聚酰胺柱(聚酰胺用量为30ml，湿法上柱，内径15-20mm)，用60ml70％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材粉末0.5g，加30ml水饱和正丁醇超声提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇使溶解，作为甘草对照药材溶液；吸取上述二种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40∶10∶1的二氯甲烷-甲醇-水体系为展开剂，展开，取出，吹干，喷以10％硫酸乙醇溶液，置105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

本发明强肝颗粒剂的含量测定方法，具体步骤是：

含量测定指标及方法的选择：

白芍中含多种苷类化合物，芍药苷为其主要的有效成分，性质稳定，可以准确定量，故将其定为本制剂含量测定的指标成分。文献报道的芍药苷含量测定方法有薄层扫描法、高效液相色谱法等。我们采用了HPLC法测定制剂中芍药苷含量，建立了制剂质量控制方法。

色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。比较淮阴汉邦科技公司生产的反相C₁₈柱：Kromasil C₁₈(4.6×250mm，5μm)和淮阴汉邦科技公司的反相C₁₈柱：Lichrospher C₁₈(4.6×250mm，5μm)，结果显示，两根不同型号的色谱柱均能达到良好分离，但以Kromasil C₁₈色谱柱较好，故选用。泵：Waters510泵。检测器：Waters486紫外检测器。流动相：以多种比例(20∶80、25∶75、30∶70等)甲醇-0.05％三氟乙酸水系统为流动相进行色谱分析，结果以流动相为甲醇∶0.05％三氟乙酸水＝(28∶72)(V/V)或甲醇∶0.05％乙酸水＝(28∶72)(V/V)或甲醇∶0.05％磷酸水＝(28∶72)(V/V)为好。测定波长：据芍药苷的紫外光谱，其最大吸收波长为230nm，故将其测定波长确定在230nm。流速1.0ml/min。柱温：30℃。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。

本发明测定了白芍中保护肝细胞损伤的芍药苷的含量，并对当归、白芍、丹参、黄芪、甘草进行了薄层鉴别。制剂质控方法的确立，提高了药物的质量控制，保证了制剂均一性及有效性。

〔具体实施方式〕

实施例一强肝颗粒剂的制备

称取原料250g茵陈、125g板蓝根、125g当归、125g白芍、250g丹参、125g郁金、250g黄芪、125g党参、125g泽泻、125g黄精、125g地黄、125g山药、100g山楂、100g六神曲、100g秦艽、100g甘草。

以上十六味，加水煎煮三次，合并滤液，滤液浓缩至相对密度约1.12(50℃)，加入β-环糊精200g，搅拌均匀，喷雾干燥(热空气进风温度170℃，出风温度80℃)，得喷干粉，加267g糊精及5g甜菊糖苷，混匀，物料在60℃温度下干式制粒，整粒，得棕色颗粒1000g，以铝塑复合膜分装(5.0g/袋)，即得。

实施例二进、出风温度对喷雾干燥粉的影响

喷雾干燥条件对有效成分的保留及颗粒成型极为重要。为利于有效成分的保留和颗粒成型，对进风温度、出风温度进行比较如表1。

表1 进、出风温度对喷雾干燥粉的影响

进风温度出风温度芍药苷保留绿原酸保留阿魏酸保留

含水量(％) 对制粒的影响

(℃) (℃) 率(％) 率(％) 率(％)

190 90 92.84 88.75 87.04 2.8 稍差

180 80 96.34 90.96 89.52 3.6 非常好

180 70 96.03 90.32 90.17 3.8 非常好

170 80 97.89 91.05 90.95 3.4 较好

170 70 98.11 92.84 92.16 5.3 流动性较差

制粒试验结果表明，本制剂半成品细粉粒的含水量在3.0～5.0％时，可以直接干式制得粒度、硬度适宜的颗粒；含水量高于5.0％时，颗粒流动性较差，制粒后水分难以控制在5％以内；含水量小于3.0％时，颗粒的细粉稍多，产率会下降。因此应控制喷雾干燥的进风温度为170-180℃，出风温度70-80℃。又从各有效成分的保留率的角度考虑，选择保留率高的喷雾干燥条件，故选择进风温度为170℃，出风温度80℃。

实施例三 β-环糊精分散助溶条件的选择

由于本方中含有多种水溶解性较差的活性成分，故采用β-环糊精使其更好的分散，使其活性成分更好的得到保留。为了选择β-环糊精分散的最佳条件，进行了三次比较试验。称取250g茵陈、125g板蓝根、125g当归、125g白芍、250g丹参、125g郁金、250g黄芪、125g党参、125g泽泻、125g黄精、125g地黄、125g山药、100g山楂、100g六神曲、100g秦艽、100g甘草，加水煎煮三次，滤液浓缩至相对密度1.12(50℃)，将浓缩液分成等量的三份，分别加不同量的β-环糊精，趁热充分搅匀后进行试验。以丹参酮、23-乙酰泽泻醇B作为考察指标，考察其对丹参酮、23-乙酰泽泻醇B的保留率的影响，结果见表2。

表2 β-环糊精用量对成分保留率的影响

结果表明，β-环糊精用量为60g时助溶效果不理想，当增加至90g时，指标成分丹参酮、23-乙酰泽泻醇B的保留率较高，如β-环糊精用量再增加为120g时，与90g时指标成分的保留率差异很小，故选择β-环糊精的用量为90-120g，最佳为90g。

实施例四强肝糖浆、强肝颗粒剂的有效成分含量的研究

对原工艺生产的强肝糖浆和新工艺制备的强肝颗粒剂进行了有效成分含量对比试验，实验结果如表3。

表3 强肝糖浆、强肝颗粒剂的有效成分对比试验

从上可知，强肝颗粒的绿原酸的含量比强肝糖浆提高2倍，强肝颗粒的阿魏酸的含量比强肝糖浆提高1倍，强肝颗粒的甘草酸、芍药苷的含量都比强肝糖浆提高。

实施例五强肝糖浆、强肝颗粒对实验性肝中毒小鼠的保护作用

取小鼠50只，雌雄各半，体重18～24g，随机分为5组，每组10只。阳性对照组ip护肝片50mg/kg，强肝糖浆(10ml/支)ip3.33ml/kg，强肝颗粒(5g/袋)ip1.7g/kg，每支强肝糖浆的生药用量与每袋强肝颗粒的生药用量相同，故强肝糖浆ip3.33ml/kg和强肝颗粒ip1.7g/kg的用量相同。每天1次，连续给药7天，末次给药后，正常溶媒组ip等量溶媒，其余各组ip0.1％CCL₄植物油5ml/kg，或对硫代乙酞胺(TAA)40mg/kg，禁食16h后拉颈处死动物，眼眶采血，取肝脏制备匀浆供测试。

表4 强肝糖浆、强肝颗粒对CCL₄中毒小鼠ALT、TBIL的影响

(x±s)

组别 ALT(U/dL) TBIL(umol/L)

照组 33±13 9.34±1.89

模型组CCL₄ 874±221*** 11.44±2.43

阳性药组+CCL₄ 286±168***ΔΔ 10.54±2.28

强肝糖浆组+CCL₄ 579±257** 11.13±2.56

强肝颗粒组+CCL₄ 281±209***ΔΔ 10.61±2.99

与模型组相比，^**P＜0.05，^***P＜0.01，与强肝糖浆组比，ΔΔ^**P＜0.05(下同)。

表5 强肝糖浆、强肝颗粒对TAA中毒小鼠ALT、AST的影响

(x±s)

组别 ALT(U/dL) AST(umol/L)

照组 68±23 153±25

模型组TAA 700±231 325±53

阳性药组+TAA 300±64***ΔΔ 210±66***

强肝糖浆组+TAA 426±147*** 237±41***

强肝颗粒组+TAA 263±91***ΔΔΔ 213±34***

由表4、表5可见，强肝颗粒对实验性中毒小鼠血清ALT的升高的抑制程度比强肝糖浆提高1倍，对实验性中毒小鼠血清TBIL、AST亦较强肝糖浆有所降低。

实施例六强肝颗粒剂当归的薄层鉴别

取本品10g，加水20ml，加热使溶解，加醇使含醇量达70％，取上清液，蒸干，加水20ml使溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1g，加10ml乙酸乙酯超声提取30min，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下(365nm)观察，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例七强肝颗粒剂白芍的薄层鉴别

取本品15g，加水60ml，加热使溶解，上已处理好的AB-8大孔树脂(大孔树脂用量为40ml，湿法上柱，内径15-20mm)，40％的乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，加15ml水溶解，上已处理好的聚酰胺柱(聚酰胺用量为20ml，湿法上柱，内径15-20mm)，收集流出液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，用甲醇溶解，制成每1ml含1mg对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例八强肝颗粒剂丹参的薄层鉴别

取本品15g，加水30ml，加热使溶解，加醇使含醇量达70％，取上清液，蒸干，加水30ml使溶解，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材粉末1g，加乙醚5ml，置具塞试管中，振摇，放置1小时，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品液15μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲苯(1∶9)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例九强肝颗粒剂黄芪的薄层鉴别

取本品25g，加水50ml，加热使溶解，加醇使含醇量达70％，取上清液，蒸干，加水50ml使溶解，置分液漏斗中，用乙醚洗三次，每次40ml，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇萃取5次，每次30ml，合并正丁醇液，用1％氢氧化钾洗涤两次，每次60ml，弃去洗液，再用正丁醇饱和的水洗至中性，提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例十强肝颗粒剂甘草的薄层鉴别

取本品15g，加水30ml，加热使溶解，加于已处理好的D₁₀₁型大孔树脂柱(大孔树脂用量为40ml，湿法上柱，内径15-20mm)上，用80ml70％乙醇洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加水30ml溶解，上已处理好的聚酰胺柱(聚酰胺用量为30ml，湿法上柱，内径15-20mm)，用60ml70％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材粉末0.5g，加30ml水饱和正丁醇超声提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇使溶解，作为甘草对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(40∶10∶1)为展开剂，展开，取出，吹干，然后喷以10％硫酸乙醇溶液，置105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例十一强肝颗粒剂芍药苷的含量测定

本制剂根据高效液相色谱法(《中国药典》2000版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验：使用Waters510泵和Waters486紫外检测器；甲醇-0.05％三氟乙酸水＝28∶72(V/V)为流动相；检测波长为230nm；流速1.0ml/min；柱温为30℃。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。

其中流动相还可是：甲醇-0.05％乙酸水＝28∶72(V/V)甲醇-0.05％磷酸水＝28∶72(V/V)。

对照品溶液的制备：精密称取于70℃干燥至恒重的芍药苷对照品适量，用流动相制成每1ml含0.164mg芍药苷的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品1.5g至25ml量瓶中，加流动相20ml，称重，超声提取30min，冷却，补足重量，摇匀，静置，取清液，离心，取上清液，即得；

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标法计算，即得，本品每袋含芍药以芍药苷计不少于8.0mg。

本强肝颗粒剂采用上述方法进行质量控制，即对当归、白芍、丹参、黄芪和甘草分别进行薄层鉴别和测定芍药苷的含量，与强肝糖浆相比较，本发明提供了质量标准，有效地控制了产品的质量，确保了药物的疗效。

附图说明

图1：缺芍药阴性样品HPLC图

图2：芍药苷对照品HPLC图

图3：强肝颗粒样品HPLC图(5号峰为芍药苷峰)

Claims

1、一种治疗肝炎的中药颗粒剂，由250重量份茵陈、125重量份板蓝根、125重量份当归、125重量份白芍、250重量份丹参、125重量份郁金、250重量份黄芪、125重量份党参、125重量份泽泻、125重量份黄精、125重量份地黄、125重量份山药、100重量份山楂、100重量份六神曲、100重量份秦艽、100重量份甘草原料药制成，其特征是：含β-环糊精200重量份，含成型剂糊精267重量份。

2、根据权利要求1所述的治疗肝炎的颗粒剂的制备方法，按具体步骤如下：

称取茵陈、板蓝根、当归、白芍、丹参、郁金、黄芪、党参、泽泻、黄精、地黄、山药、山楂、六神曲、秦艽、甘草备用；以上十六味，加水煎煮三次，药液滤过，滤液浓缩到50℃测定的相对密度为1.12；加入β-环糊精200重量份，使之溶解，趁热充分搅拌，喷雾干燥，热空气进风温度170℃，出风温度80℃，喷干粉加成型剂糊精267重量份，加矫味剂甜菊糖苷5重量份，充分拌匀，物料在60℃温度下干法压片、制粒，整粒，分装，即得产品。

3、根据权利要求1所述的治疗肝炎的颗粒剂的质量控制方法，其薄层鉴别方法如下：

a.当归的鉴别

取本品10g，加水20ml，加热使溶解，加醇使含醇量达70％，取上清液，蒸干，加水20ml使溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加10ml乙酸乙酯超声提取30min，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的石油醚-乙酸乙酯体系为展开剂，石油醚的沸点范围是30～60℃，展开，取出，晾干，置紫外灯下观察，波长为365nm，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b.白芍的鉴别

取本品15g，加水60ml，加热使溶解，上已处理好的AB-8大孔树脂，大孔树脂用量为40ml，湿法上柱，内径15-20mm，40％的乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，加15ml水溶解，上已处理好的聚酰胺柱，聚酰胺用量为20ml，湿法上柱，内径15-20mm，收集流出液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，用甲醇溶解，制成每1ml含1mg对照品溶液；吸取上述供试品液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为40∶5∶10∶0.2的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃烘5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.丹参的鉴别

取本品15g，加水30ml，加热使溶解，加醇使含醇量达70％，取上清液，蒸干，加水30ml使溶解，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材粉末1g，加乙醚5ml，置具塞试管中，振摇，放置1小时，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作成对照药材溶液；吸取上述供试品液15μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1∶9的醋酸乙酯-甲苯体系为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d.黄芪的鉴别

取本品25g，加水50ml，加热使溶解，加醇使含醇量达70％，取上清液，蒸干，加水50ml使溶解，置分液漏斗中，用乙醚洗三次，每次40ml，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇萃取5次，每次30ml，合并正丁醇液，用1％氢氧化钾洗涤两次，每次60ml，弃去洗液，再用正丁醇饱和的水洗至中性，提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液；吸取上述供试品液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为65∶35∶10的氯仿-甲醇-水10℃以下放置的下层溶液体系为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃烘5分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

e.甘草的鉴别

取本品15g，加水60ml，加热使溶解，加于已处理好的D₁₀₁型大孔树脂柱上，大孔树脂用量为40ml，湿法上柱，内径15-20mm，用80ml70％乙醇洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加水30ml溶解，上已处理好的聚酰胺柱，聚酰胺用量为30ml，湿法上柱，内径15-20mm，用60ml70％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材粉末0.5g，加30ml水饱和正丁醇超声提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇使溶解，作为甘草对照药材溶液；吸取上述二种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40∶10∶1的二氯甲烷-甲醇-水体系为展开剂，展开，取出，吹干，喷以10％硫酸乙醇溶液，置105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4、根据权利要求1所述的治疗肝炎的颗粒剂的芍药苷含量测定方法：

取制剂1.5g至25ml量瓶中，加流动相20ml，称重，超声提取30min，冷却，补足重量，摇匀，静置，取清液，离心，取上清液，作为供试品溶液，以流动相配制的芍药苷液为对照，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，使用Waters510泵和Waters486紫外检测器，体积比28∶72的甲醇-0.05％三氟乙酸水为流动相，检测波长为230nm，流速1.0ml/min，柱温30℃。

5、根据权利要求4所述的治疗肝炎的颗粒剂的芍药苷含量测定方法，其特征是：体积比28∶72的甲醇-0.05％乙酸水为流动相。

6、根据权利要求4所述的治疗肝炎的颗粒剂的芍药苷含量测定方法，其特征是：体积比28∶72的甲醇-0.05％磷酸水为流动相。

7、根据权利要求1所述的治疗肝炎的颗粒剂，其特征在于用于制备治疗慢性肝炎，早期肝硬化，脂肪肝，中毒性肝炎的药物。