CN1583004A - 一种干香柏总黄酮组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属天然药物制备方法技术领域，本发明所述抗肿瘤干香柏黄酮组合物，由柏科植物干香柏的枝叶部分提取分离，干香柏总黄酮含量为50－65％，儿茶素含量为25－40％；其制备方法为取干香柏水提液，调pH至9－10、过大孔吸附树脂柱，含水醇洗脱、正丁醇萃取、浓缩。干香柏总黄酮抗肿瘤活性提高，吸湿性降低，可制备成治疗肿瘤的药物。
Description
一、技术领域：
本发明属天然药物制备方法技术领域，具体涉及干香柏枝叶中的抗肿瘤的黄酮组合物及其制备方法。
二、背景技术：
柏科植物干香柏为我国用材树种，材质坚硬，结构细密，有香气，可供建筑、造纸、器具、家具等用材。分布在云南、四川等省作为防风固沙、保持水土的造林树种。其作为药物用途及化学成份均未见报道。
我国柏科植物种类较多，供药用的约20种。其枝叶及心材中，一般含挥发油、黄酮、木脂素、蒽醌和萜类等成份，我国作为民间药用的柏科植物只是简单水煎剂，用于治疗感冒、头痛发热、吐血、肠燥便秘等症。
三、发明内容
本发明需要解决的问题是从未作为药用的干香柏枝叶中研制一种抗肿瘤有效部位黄酮含量高的组合物，提供一种疗效确切，质量稳定，安全有效，成本低廉的一种新的植物来源抗肿瘤天然药物，有效部位黄酮含量提高，有利于减少临床使用的药量。杂质减少不但可改善中成药常有的吸湿性，而且使有效成份含量提高，药效明显，不会产生有些杂质所导致的副作用，本发明要解决的技术问题还涉及研制一种抗肿瘤有效部位黄酮含量高的组合物的制备工艺，该方法能够提高活性成分含量，去除大量非黄酮类杂质，同时要有重复性、稳定性好，并且原料的得率高，以适合工业化生产。
为解决上述技术问题，本发明研究制定了如下技术方案。
一种抗肿瘤的干香柏黄酮组合物，由柏科植物干香柏的枝叶部分提取分离的干香柏总黄酮组合物，该组合物中，干香柏总黄酮含量为50-65％，儿茶素含量为25-40％。并将其制备成干香柏总黄酮的片剂、胶囊、滴丸、软胶囊、粉针或大、小针剂。
抗肿瘤干香柏的黄酮组合物制备方法：
干香柏取水提取液，加入氢氧化钠液调PH至9-10；取碱性滤液过大孔吸附树脂柱，先用水洗至流出液中性，再用加入40-95％浓度的乙醇洗柱；收集洗脱液并浓缩，浓缩物水液用正丁醇萃取；浓缩正丁醇萃取溶液，得干香柏黄酮粉末。所得干香柏黄酮粉末中，干香柏总黄酮含量为50-70％，儿茶素含量为25-40％。干香柏黄酮粉末可以与药学上可接受载体混合，剂型为片剂、胶囊、滴丸、软胶囊、粉针或大、小针剂。
本发明制得的干香柏黄酮组合物，由于采用了中药现代化技术中的大孔树脂吸附技术，不但使其中的活性成分的含量提高，从而提高了药效，而且去除了大量非黄酮类杂质，既解决了中成药常有的吸潮性大的问题，又减小了副作用。
采用本发明制得的干香柏黄酮组合物中，总黄酮的含量为50-65％，符合中华人民共和国《药品管理法》规定的中药二类的原料标准，明确了其主要成分为抗肿瘤活性成分儿茶素，通过高效液相法测定，儿茶素的含量占干香柏黄酮组合物的25-40％。
本发明制得的干香柏黄酮组合物分别进行了抗肿瘤活性筛选模型CCLT和CDC25试验。在CCLT试验中，将2500-4000个/孔人非小细胞肺癌A549细胞株接种到酶标板上，生长成24小时后，加入0.1mg/ml样品再培养48小时后测定活细胞数量。抗肿瘤CCLT实验结果表明，干香柏黄酮组合物对肿瘤细胞生长的抑制率为72.8％，半数有效剂量(IC50)为：0.069mg/ml选择指数(SI)为8.62±0.93；在CDC25试验中，cdc25基因表达分子量为80KDa的蛋白磷酸酶p80cdc25，是主要细胞分裂周期基因cdc2的激活因子，因此抑制cdc25基因的表达，可抑制肿瘤细胞分裂，通过检测样品对酶CDC25活性影响从而检测样品的抗肿瘤活性，干香柏黄酮组合物抗肿瘤CDC25活性的抑制率为63.6％，半数有效剂量(IC50)为0.096mg/ml。人非小细胞肺癌A549细胞株由上海药物研究所提供，重组人源蛋白磷酸酶(CDC25)由Bayer公司提供。本发明制得的干香柏黄酮组合物可制备成治疗肿瘤的药物。
干香柏黄酮组合物用枝叶提取，原料丰富且成本低。此外，本发明克服了中药传统工艺的缺陷，运用中药现代化技术中的大孔树脂吸附技术，提供了一种含量高、成分明确、质量可控、药效确切、副作用小的干香柏黄酮组合物及其制备方法，为一种高效低毒的二类中药抗肿瘤。本发明的制备工艺已经通过多次验证，证明其重复性、稳定性都好，原料的得率高，适合工业化生产。
四、具体实施方式
实施例中，所用的提取用水为自来水，所用乙醇为药用级，氢氧化钠和正丁醇为工业级。干香柏枝叶部分药材产地为云南昆明；大孔树脂购自南开大学化工厂；测定总黄酮含量的对照品芦丁由国家药品生物制品检定所提供；测定儿茶素含量的对照品儿茶素购自SIGMA公司。
测定原料中总黄酮含量的方法，依照中国药典2000版一部附录VB中的比色法。
测定原料中儿茶素含量的方法，依照中国药典2000版一部附录VID中的高效液相色谱法。色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(20∶80)为流动相；检测波长为254nm；理论板数按儿茶素计算应不低于2500。
实施例一：
取干香柏的地上部分60kg，粉碎成粗粉，放入提取罐中；分别加入水360L回流提取3次，每次2小时；提取液加入氢氧化钠液调PH至9.0后，静置，滤除沉淀；滤液过HP-20大孔吸附树脂柱，加去离子水洗脱至流出液澄清且为中性；加入50％的乙醇洗柱，收集洗脱液并浓缩，再加水60L溶解，过滤；滤液分别加入30L正丁醇萃取3次，合并醇溶液；按常规真空减压浓缩醇溶液至干，干燥，得到黄色干香柏黄酮原料1.0kg。
经高效液相色谱法测定：上述实验所得干香柏黄酮原料中总黄酮含量为59％，其原料中抗肿瘤主要成分儿茶素含量为36％。
实施例二：
取干香柏的枝叶部分150kg，粉碎成2-3cm的段，放入提取罐中；分别加入水900L回流提取3次，每次2小时；提取液加入氢氧化钠液调PH至9.0后，静置；滤除沉淀；滤液过HD-2025大孔吸附树脂柱，加去离子水洗脱至流出液澄清且为中性；加入75％的乙醇洗柱，收集洗脱液并浓缩，在加水75L溶解，过滤。滤液分别加入75L正丁醇萃取3次，合并醇溶液。减压浓缩醇溶液至干，干燥，得到黄色干香柏黄酮粉末1.8kg。
经高效液相色谱法测定：该干香柏黄酮粉末原料中总黄酮含量为55％，其原料中抗肿瘤主要成分儿茶素含量为33％。
Claims (4)
1.一种干香柏总黄酮组合物，其特征在于：由柏科植物干香柏的枝叶部分提取分离，该组合物中，干香柏总黄酮含量为50-65％，儿茶素含量为25-40％。
2.据权利要求1所述一种干香柏总黄酮组合物的制备方法，其特征在于：干香柏取水提取液，加入氢氧化钠液调PH至9-10；取碱性滤液过大孔吸附树脂柱，先用水洗至流出液中性；再用加入40-95％浓度的乙醇洗柱；收集洗脱液并浓缩；浓缩物水液用正丁醇萃取，浓缩正丁醇萃取溶液，得干香柏总黄酮粉末。
3.根据利要求1所述一种干香柏总黄酮组合物，其特征在于可制备成片剂、胶囊、滴丸、软胶囊、粉针或大、小针剂剂型。
4.根据利要求1所述干香柏总黄酮组合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
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