CN102491869B - 一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物及其制备方法 - Google Patents
一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102491869B CN102491869B CN201110404970.4A CN201110404970A CN102491869B CN 102491869 B CN102491869 B CN 102491869B CN 201110404970 A CN201110404970 A CN 201110404970A CN 102491869 B CN102491869 B CN 102491869B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- rhizome
- root
- lijiang
- rhubarb
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有从蓼科大黄属植物丽江大黄中提取的总质量不低于40％的如下结构式的二苯乙烯化合物：其中母核的亚乙烯基为反式结构，R1、R2、R3、R4分别独立选自-H、-OH、-CH3、-OCH3、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。本发明丽江大黄提取物中活性成分的结构清楚、组成明确、分析检测方法成熟，有利于各级产品的质量监测和控制，符合天然药物复合制剂的发展方向及要求。同时，本发明还公开了该提取物的制备方法。
Description
技术领域
本发明涉及天然植物药用成分和保护肝损伤药效活性成分领域，尤其涉及一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物及其制备方法。
背景技术
大黄作为我国著名的传统中药材，其药用记载始见于《神农本草经》，列为下品，具有“泻下通便，破积滞”之功效。在传统的中医药应用中，大黄植物的药用范围非常单一，主要偏重其泻下功效。近现代研究证明了大黄泻下功效的主要物质基础成分是蒽醌类化合物。因此，蒽醌类成分被认定为是大黄的传统成药化合物。目前，《中国药典》规定的大黄药材的活性指标成分以及世界各国用于评价大黄药材品质优劣的依据都是以蒽醌类化合物为主。(许义杵，大黄的应用及其机理研究进展，中国医院药学杂志。1992，12(9)：421-422。)
然而，中国的大黄属(Rheum L.)植物约有45种(李秀才，大黄的研究进展，中国药学杂志。1998，33(10)：581-584)，除了《中国药典》收载的掌叶大黄(Rheum palmutum L.)、唐古特大黄(R..tonguticum Maxim.ex Balf.)和药用大黄(R..officinale Baill.)这3利“正品”大黄以外，同属的其它40余种“非正品”大黄由于不含或仅含痕量的蒽醌类成分，并且几乎不含大黄酸和番泻苷，因此其泻下药效作用很弱或全无。但是长期以来，这些“非正品”大黄在民间医疗中通常与“正品”大黄混淆使用，并且在药材市场中掺杂或冒充“正品”大黄混乱销售的现象十分严重。
我国肝病发病人群广、发病率高、肝病类型主要包括酒精性肝病、化学性肝病及病毒性肝病，每年大约有200万急性肝炎病例，这个数字还在逐年增加。这些庞大的患者群体造就了诱人的肝病治疗药物市场。据2006年的统计表明，我国肝药市场容量在100亿元左右。因此，从我国丰富的植物资源中寻找具有较高成药潜力的化合物或提取物用于开发为治疗肝病的新药，具有重要现实意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供该丽江大黄提取物的制备方法。
本发明所要解决的第三个技术问题是提供该丽江大黄提取物所含的主成分在用于制备保护肝损伤药物中的用途。
为解决上述问题，本发明所述的一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，其特征在于：该提取物含有从蓼科大黄屈植物丽江大黄(Rheumlikiangense.)中提取的总量不低于40％的如下结构式的二苯乙烯化合物：
其中母核的亚乙烯基为反式结构，R1、R2、R3、R4分别独立选自-H、-OH、-CH3、-OCH3、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。
该提取物含有化合物3，3’，5-三羟基-4’-甲氧基二苯乙烯-3-O-β-D-葡萄糖苷。
该提取物含有化合物3，5-二羟基-4’-甲氧基二苯乙烯-3-O-β-D-葡萄糖苷。
该提取物含有化合物3，5-二羟基-4’-甲氧基二苯乙烯。
该提取物含有化合物3，5，3’-三羟基-4’-甲氧基二苯乙烯。
如上所述的一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料；
(2)原料前处理：将所述原料经自然晾干或风干或晒干或在25～60℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉碎，得到提取原料；
(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为30％～98％的醇水溶液中加入10mol/L的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，调节至该醇水溶液的pH值为6～14，即得提取溶剂；
(4)将所述提取原料和所述提取溶剂按1∶1～1∶50的料液质量体积比混合均匀后，在提取温度为10～95℃、提取时间为0.5～12小时、提取次数为1～5次的条件下进行提取，收集合并提取液，该提取液经减压浓缩，得到粗提液；
(5)在所述粗提液中加入其体积0.1～10倍的无水乙醇，并按照提取原料质量的0.5倍量加入钙盐并搅拌，然后再加入10mol/L的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，使混合液的pH值至7～14，搅拌均匀后，室温下静置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；所述滤液经减压浓缩，得到浓缩液；
(6)在所述浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液，调节浓缩液的pH值至3～7后，在0～25℃温度下静置，直到沉淀完全析出，收集沉淀物；所述沉淀物经洗涤、在25～60℃温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。
所述步骤(4)中所述提取原料和所述提取溶剂的料液质量体积比为1∶5～1∶20，其提取温度为25～65℃、提取时间为1～5小时、提取次数为1～2次。
所述步骤(4)和(5)中减压浓缩的条件是指抽真空到负压为0.01～0.1MPa，温度为20～50℃。
所述步骤(5)中无水乙醇的体积量为所述粗提液体积量的0.5～5倍。
所述步骤(5)中的钙盐是指氯化钙、碳酸钙、硫酸钙、氧化钙中的任意一种。
所述步骤(6)静置温度为0～15℃。
如上所述的一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物在制备保护肝损伤药物制剂中的应用。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明丽江大黄提取物经HPLC-DAD检测分析(Agilent1200高效液相色谱仪；C18反相色谱柱；甲醇-乙腈-水三元梯度洗脱；Agilent DAD波长320nm)，其主含成分是二苯乙烯化合物(参见图1)。由此可知，本发明丽江大黄提取物中活性成分的结构清楚、组成明确、分析检测方法成熟，有利于各级产品的质量监测和控制，符合天然药物复合制剂的发展方向及要求。
2、本发明采用了无机盐离子络合、酸碱沉淀等技术，因此，本发明提供的制备方法简单易行、成本低、效率高、较完全地保留其生物活性，适合于工业化生产及应用。
3、本发明所得的丽江大黄提取物经保护肝损伤活性试验证明具有显著的保护肝损伤的药效活性作用，因此在制备预防和治疗肝损伤疾病的药物方面具有广泛的用途，可用于开发为治疗肝病的药物及制剂。这一发现，将使资源丰富的“非正品”大黄中的丽江大黄作为一种新的药源植物，开辟其药用新价值。
其中，本发明所说的肝损伤保护作用，是指对急性肝损伤的保护作用。
在活性试验中，首先用四氯化碳对肝细胞L02进行氧化损伤造模，然后加入不同浓度的本发明丽江大黄提取物，通过检测细胞内外超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷草转氨酶(AST)、细胞MDA含量等指标，反应加药前后细胞清除自由基的能力，以及细胞受损严重程度，进而评价丽江大黄提取物的保护肝损伤活性大小。
(1)材料与仪器：
肝细胞L02(由中科院上海细胞库提供)；RPMI1640培养基(购于上海英俊生物技术公司)；SOD试剂盒、CAT试剂盒、AST试剂盒(购于南京建成生物研究所)。其它试剂均为分析纯。
生物净化工作台(BCM-1000，苏州净化设备有限公司)，酶标仪(Bio-Rad680)，光学显微镜(BX-202B，强肝光学仪器厂)。
(2)方法与结果：
①细胞形态学变化：
肝细胞LO2经消化铺孔板并加药后，培养20h后，于倒置显微镜下观察其细胞形态及变化。由本发明图2细胞形态观察显示，A正常组：细胞饱满而且均匀，细胞间粘连紧密；B损伤组：呈现不同程度的细胞皱缩，细胞粘连变疏、不饱满，细胞数量没有明显减少；C损伤+丽江大黄提取物组：与丽江大黄提取物共孵育后，细胞状态有不同程度的改善，细胞形态接近正常组，说明丽江大黄提取物对于肝损伤有修复作用。
②细胞MDA含量变化：
本发明图3反映出了丽江大黄提取物对肝细胞LO2四氯化碳损伤后MDA含量的影响，即随着丽江大黄提取物浓度的增大，MDA含量逐渐降低，在10～20μg/mL范围内，MDA含量维持在较低的水平下，当丽江大黄提取物浓度增大至50μg/mL时，MDA含量有升高的趋势。试验结果说明，在10～30μg/mL浓度范围内，细胞受到四氯化碳损伤后在丽江大黄提取物的作用下，脂质过氧化程度减小，细胞膜受损程度降低，因此，丽江大黄提取物对四氯化碳引起的损伤具有显著的抑制作用。
③细胞SOD活力变化：
本发明图4反映出四氯化碳对肝细胞LO2有明显的损伤作用，细胞损伤后胞内SOD酶活性升高；然而加药后，丽江大黄提取物能显著提高细胞内SOD活性(p＜0.05)，当丽江大黄提取物的浓度为1.85μg/mL时SOD活力显著增高并接近正常组，说明对于四氯化碳引起的肝损伤，丽江大黄提取物具有显著的治疗效果。
④细胞CAT活力变化：
本发明图5反映出细胞损伤后胞内CAT酶活性略有降低，损伤加入丽江大黄提取物后能够显著提高细胞内CAT活性(p＜0.01)，在5.0～20μg/mL的浓度范围内，可明显增强清除氧自由基的能力，具有很好的保护肝损伤疗效。
⑤细胞AST活力变化：
本发明图6反映出当肝细胞受损伤后其AST活性会升高，加药后当丽江大黄提取物在2.0～20μg/mL的浓度范围内其AST活力明显低于正常组(P＜0.05)，且维持在较低的稳定水平，说明丽江大黄提取物具有保护肝损伤的作用。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
图1为本发明丽江大黄提取物的HPLC色谱图和紫外图(320nm处的最大吸收峰特征性的表明提取物的主成分是具有二苯乙烯骨架结构的化合物)。
图2为本发明丽江大黄提取物的保护肝损伤试验结果一：损伤及加药后细胞形态变化，其中A正常组细胞，B四氯化碳损伤组，C损伤+丽江大黄提取物组。
图3为本发明丽江大黄提取物的保护肝损伤试验结果二：丽江大黄提取物对肝细胞四氯化碳损伤后细胞MDA含量的影响。
图4为本发明丽江大黄提取物的保护肝损伤试验结果三：丽江大黄提取物对损伤后肝细胞中SOD活力的影响。
图5为本发明丽江大黄提取物的保护肝损伤试验结果四：丽江大黄提取物对损伤后肝细胞中CAT活力的影响。
图6为本发明丽江大黄提取物的保护肝损伤试验结果五：丽江大黄提取物对肝细胞损伤后AST活力的影响。
具体实施方式
实施例1一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于40％的如下结构式的化合物：
其中母核的亚乙烯基为反式结构，R1、R2、R3、R4分别独立选自-H、-OH、-CH3、-OCH3、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。
该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。
(2)原料前处理：将原料在25℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉碎，得到提取原料。
(3)提取义溶剂的制备：在乙醇质量浓度为90％的醇水溶液中加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节其pH值至6，即得提取溶剂。
(4)将10g提取原料和30mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在提取温度为65℃、提取时间为2小时、提取次数为1次的条件下进行提取，收集合并提取液，该提取液在温度为45℃、压力为0.1MPa的条件下经减压浓缩，得到粗提液。
将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行HPLC含量测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的总量为60.79mg/g。
(5)在粗提液中加入其体积10倍的无水乙醇，并加入5g氯化钙并搅拌，然后再加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至10，搅拌均匀后，室温下静置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为45℃、压力为0.1MPa的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。
(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液调节至浓缩液的pH值为5后，在25℃下静置直到沉淀完全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、在60℃温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。
实施例2一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于40％的如下结构式的化合物：
其中母核的亚乙烯基为反式结构，R1、R2、R3、R4分别独立选自-H、-OH、-CH3、-OCH3、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。
该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。
(2)原料前处理：将原料在30℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉碎，得到提取原料。
(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为30％的醇水溶液中加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节其pH值至7，即得提取溶剂。
(4)将10g提取原料和120mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在提取温度为85℃、提取时间为4小时、提取次数为1次的条件下进行提取，收集合并提取液，该提取液在温度为50℃、压力为0.05MPa的条件下经减压浓缩，得到粗提液。
将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行HPLC含量测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的总量为57.17mg/g。
(5)在粗提液中加入其体积5倍的无水乙醇，并加入5g碳酸钙并搅拌，然后再加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至14，搅拌均匀后，室温下静置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为50℃、压力为0.05MPa的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。
(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液调节至浓缩液的pH值为7后，在25℃下静置直到沉淀完全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、45℃温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。
实施例3一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于40％的如下结构式的化合物：
其中母核的亚乙烯基为反式结构，R1、R2、R3、R4分别独立选自-H、-OH、-CH3、-OCH3、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。
该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。
(2)原料前处理：将原料在60℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉碎，得到提取原料。
(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为65％的醇水溶液中加入10mol/L的氢氧化钾溶液调节其pH值至14，即得提取溶剂。
(4)将50g提取原料和50mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在提取温度为55℃、提取时间为0.5小时、提取次数为4次的条件下进行提取，收集合并提取液，该提取液在温度为35℃、压力为0.06MPa的条件下经减压浓缩，得到粗提液。
将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行HPLC含量测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的总量为66.32mg/g。
(5)在粗提液中加入其体积4倍的无水乙醇，并加入25g氯化钙并搅拌，然后再加入10mol/L的氢氧化钾溶液调节pH值至11，搅拌均匀后，25℃下静置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为35℃、压力为0.06MPa的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。
(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液调节至浓缩液的pH值为5后，在0℃下静置直到沉淀完全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、45℃温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。
实施例4一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于60％的如下结构式的化合物：
其中母核的亚乙烯基为反式结构，R1、R2、R3、R4分别独立选自-H、-OH、-CH3、-OCH3、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。
该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。
(2)原料前处理：将原料在60℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉碎，得到提取原料。
(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为85％的醇水溶液中加入10mol/L的氢氧化钠溶液，调节其pH值至8，即得提取溶剂。
(4)将10g提取原料和200mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在提取温度为10℃、提取时间为2小时、提取次数为3次的条件下进行提取，收集合并提取液，该提取液在温度为20℃、压力为0.01MPa的条件下经减压浓缩，得到粗提液。
将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行HPLC含量测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的总量为61.41mg/g。
(5)在粗提液中加入其体积2倍的无水乙醇，并加入5g氯化钙并搅拌，然后再加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7，搅拌均匀后，25℃下静置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为45℃、压力为0.01MPa的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。
(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液，调节至浓缩液的pH值为4后，在25℃下静置直到沉淀完全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、40℃温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。
实施例5一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于60％的如下结构式的化合物：
其中母核的亚乙烯基为反式结构，R1、R2、R3、R4分别独立选自-H、-OH、-CH3、-OCH3、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。
该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。
(2)原料前处理：将原料在45℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉碎，得到提取原料。
(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为98％(？)的醇水溶液中加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节其pH值至11，即得提取溶剂。
(4)将10g提取原料和500mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在提取温度为75℃、提取时间为1小时、提取次数为5次的条件下进行提取，收集合并提取液，该提取液在温度为40℃、压力为0.08MPa的条件下经减压浓缩，得到粗提液。
将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行HPLC含量测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的总量为80.79mg/g。
(5)在粗提液中加入其体积5倍的无水乙醇，并加入5g碳酸钙并搅拌，然后再加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至10，搅拌均匀后，室温下静置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为20℃、压力为0.01MPa的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。
(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液调节至浓缩液的pH值为3后，在4℃下冷藏静置直到沉淀究全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、40℃温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。
实施例6一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于60％的如下结构式的化合物：
其中母核的亚乙烯基为反式结构，R1、R2、R3、R4分别独立选自-H、-OH、-CH3、-OCH3、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。
该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。
(2)原料前处理：将原料在35℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉碎，得到提取原料。
(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为75％的醇水溶液中加入10mol/L的氢氧化钾溶液调节其pH值至12，即得提取溶剂。
(4)将10g提取原料和300mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在提取温度为95℃、提取时间为12小时、提取次数为2次的条件下进行提取，收集合并提取液，该提取液在温度为45℃、压力为0.1MPa的条件下经减压浓缩，得到粗提液。
将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行HPLC含量测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的总量为73.15mg/g。
(5)在粗提液中加入其体积0.1倍的无水乙醇，并加入5g氧化钙并搅拌，然后再加入10mol/L的氢氧化钾溶液调节pH值至9，搅拌均匀后，室温下静置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为40℃、压力为0.1MPa的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。
(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液调节至浓缩液的pH值为4后，在8℃冷藏静置直到沉淀完全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、25℃温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。
实施例7一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于60％的如下结构式的化合物：
其中母核的亚乙烯基为反式结构，R1、R2、R3、R4分别独立选自-H、-OH、-CH3、-OCH3、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。
该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。
(2)原料前处理：将原料在35℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉碎，得到提取原料。
(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为75％的醇水溶液中加入10mol/L的氢氧化钾溶液调节其pH值至12，即得提取溶剂。
(4)将10g提取原料和50mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在提取温度为25℃、提取时间为5小时、提取次数为2次的条件下进行提取，收集合并提取液，该提取液在温度为30℃、压力为0.01MPa的条件下经减压浓缩，得到粗提液。
将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行HPLC含最测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的总量为73.15mg/g。
(5)在粗提液中加入其体积0.5倍的无水乙醇，并加入5g硫酸钙并搅拌，然后再加入10mol/L的氢氧化钾溶液调节pH值至9，搅拌均匀后，室温下静置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为30℃、压力为0.01MPa的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。
(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液调节至浓缩液的pH值为4后，在15℃静置直到沉淀完全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、25℃温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。
上述实施例1～7所得的丽江大黄提取物，其中包含至少一种以上的结构式化合物(如含有化合物3，3’，5-三羟基-4’-甲氧基二苯乙烯-3-O-β-D-葡萄糖苷，或含有化合物3，5-二羟基-4’-甲氧基二苯乙烯-3-O-β-D-葡萄糖苷，或含有化合物3，5-二羟基-4’-甲氧基二苯乙烯，或含有化合物3，5，3’-三羟基-4’-甲氧基二苯乙烯。)，并且随着原料产地、采收季节、处理工艺参数的不同，此提取物中各种结构式化合物的含量和比例有所变化。
实施例8一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物在制备保护肝损伤药物制剂中的应用。
本发明药物制剂由本发明中任意一种丽江大黄提取物与本领域内熟知的常规或通用的载体、赋形剂、或其它活性成分配伍使用后组合加工制成(但并不限于)片剂、丸剂、胶囊剂、粉针剂等任何一种适用于临床给药的药物制剂。
上述实施例1～8是对本发明的进一步详细说明，但不意味着对本发明的任何限制。在不脱离本发明上述思想的情况下，根据本领域普通技术知识和常规手段作出的各种替换方式或变更，均包含在本发明之内。
Claims (7)
1.一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，其特征在于：该提取物含有从蓼科大黄属植物丽江大黄中提取的总质量不低于40％的化合物3,3’，5-三羟基-4’-甲氧基二苯乙烯-3-O-β-D-葡萄糖苷，或化合物3，5-二羟基-4’甲氧基二苯乙烯-3-O-β-D-葡萄糖苷；
该具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料；
(2)原料前处理：将所述原料经自然晾干或风干或晒干或在25～60℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉碎，得到提取原料；
(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为30％～98％的醇水溶液中加入10mol／L的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，调节至该醇水溶液的pH值为6～14，即得提取溶剂；
(4)将所述提取原料和所述提取溶剂按1：1～1：50的料液质量体积比混合均匀后，在提取温度为10～95℃、提取时间为0.5～12小时、提取次数为1～5次的条件下进行提取，收集合并提取液，该提取液经减压浓缩，得到粗提液；
(5)在所述粗提液中加入其体积0.1～10倍的无水乙醇，并按照提取原料质量的0.5倍量加入钙盐并搅拌，然后再加入10mol／L的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，使混合液的pH值至7～14，搅拌均匀后，室温下静置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；所述滤液经减压浓缩，得到浓缩液；
(6)在所述浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液，调节浓缩液的pH值至3～7后，在0～25℃温度下静置，直到沉淀完全析出，收集沉淀物；所述沉淀物经洗涤、在25～60℃温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。
2.如权利要求1所述的一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，其特征在于：所述步骤(4)中所述提取原料和所述提取溶剂的料液质量体积比为1：5～1：20，其提取温度为25～65℃、提取时间为1～5小时、提取次数为1～2次。
3.如权利要求1所述的一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，其特征在于：所述步骤(4)和(5)中减压浓缩的条件是指抽真空到负压为0.01～0.1MPa，温度为20～50℃。
4.如权利要求1所述的一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，其特征在于：所述步骤(5)中无水乙醇的体积量为所述粗提液体积量的0.5～5倍。
5.如权利要求1所述的一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，其特征在于：所述步骤(5)中的钙盐是指氯化钙、碳酸钙、硫酸钙中的任意一种。
6.如权利要求1所述的一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，其特征在于：所述步骤(6)静置温度为0～15℃。
7.如权利要求1所述的一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物在制备保护肝损伤药物制剂中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110404970.4A CN102491869B (zh) | 2011-12-07 | 2011-12-07 | 一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110404970.4A CN102491869B (zh) | 2011-12-07 | 2011-12-07 | 一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102491869A CN102491869A (zh) | 2012-06-13 |
| CN102491869B true CN102491869B (zh) | 2014-07-23 |
Family
ID=46183739
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201110404970.4A Active CN102491869B (zh) | 2011-12-07 | 2011-12-07 | 一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102491869B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103735933B (zh) * | 2014-01-24 | 2016-04-27 | 成都乾坤动物药业有限公司 | 铁雪丹锌组合物、其制剂和应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102058678A (zh) * | 2010-12-10 | 2011-05-18 | 成都华西天然药物有限公司 | 一种治疗脂肪肝的药物或保健食品组合物 |
-
2011
- 2011-12-07 CN CN201110404970.4A patent/CN102491869B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102058678A (zh) * | 2010-12-10 | 2011-05-18 | 成都华西天然药物有限公司 | 一种治疗脂肪肝的药物或保健食品组合物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102491869A (zh) | 2012-06-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101244129B (zh) | 拉萨大黄提取物、其制备方法及其在制备治疗心脑血管疾病制剂中的应用 | |
| US20060233896A1 (en) | Medicinal preparation containing phenylethanoid glycosides extracted from herbaceous plant, Cistanche tubulosa (Schenk.) Wight, process of making the same, and uses of the same | |
| CN106389453B (zh) | 黄酮糖苷组合物 | |
| CN103641717B (zh) | 一种从开花期向日葵花盘中提取分离绿原酸的方法 | |
| CN108558837B (zh) | 黄烷醇生物碱及其制备方法和应用 | |
| CN104490961A (zh) | 一种罗布麻叶提取物的制备方法及应用 | |
| CN106749731A (zh) | 一种小分子三七多糖提取物的制备方法及应用 | |
| CN102321129A (zh) | 一种二苯乙烯苷注射剂及其制备工艺 | |
| WO2008145064A1 (fr) | Procédé d'obtention d'un extrait contenant du séquoyitol à partir d'une espèce du genre trifolium, de soja et de ginkgo biloba, et utilisation de celui-ci | |
| CN108329368A (zh) | 一种从黄芩中制备黄芩苷的方法 | |
| CN102775375B (zh) | 一种色酮类化合物及制备方法、应用以及所制备的抗艾滋病药物组合物和制剂 | |
| CN102491869B (zh) | 一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物及其制备方法 | |
| CN115590905B (zh) | 一种提高金荞麦茎叶提取物中黄酮和多酚含量的萃取分离方法 | |
| CN101336964A (zh) | 一种具有降血糖活性的桑皮提取物及其制备方法 | |
| CN103739652A (zh) | 一种新的23,29-降齐墩果烷酸化合物及其制备方法和在制备糖苷酶抑制剂药物中的用途 | |
| Islam et al. | Antidiabetic, cytotoxic activities and phytochemical screening of Peltophorum pterocarpum (DC.) K. Heyne root | |
| CN100584345C (zh) | 具抗病毒作用的小紫金牛提取物及其提取方法和应用 | |
| CN102688263A (zh) | 紫地榆有效部位的制备及其防治结肠炎的药物用途 | |
| CN103800386B (zh) | 一种金蝉花提取物及其在制备神经保护和抗衰老药物中的应用 | |
| CN103127251B (zh) | 大黄地上部分提取物及其提取纯化方法和用途 | |
| CN1169873A (zh) | 一种治疗皮肤病的药物及制备方法 | |
| CN111690023B (zh) | 马钱苷乙酰化衍生物类环烯醚萜化合物及其提取方法和应用 | |
| CN109303785A (zh) | 一种党参炔苷类似化合物在制备治疗心率失常药物中的应用 | |
| CN103641882A (zh) | 新的2,3二羟基-30-降齐墩果酸及其制备方法和在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用 | |
| CN102977177B (zh) | 一种从甘青铁线莲中提取的三萜皂苷类抗心肌缺血化合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230921 Address after: Room 1218-19, Building 3, No. 1366 Hongfeng Road, Huzhou Economic and Technological Development Zone, Huzhou City, Zhejiang Province, 313098 Patentee after: Zhonghe baosang Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 810001 No. 59 Xiguan Street, Xining, Qinghai Patentee before: Northwest Institute of Plateau Biology, Chinese Academy of Sciences |
|
| TR01 | Transfer of patent right |