CN1568982A - 红外光敏剂在光动力学治疗中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于光敏剂在生物医药中的应用技术领域。本发明将三碳菁类光敏剂用于光动力学治疗实体瘤的细胞模型中，并开发生产制备治疗肿瘤的药物。该类光敏剂是具有吸收波长长，感光度高，生物毒性小的三碳菁类物质。在细胞模型中验证了它用于光动力学治疗的可行性，取得了理想效果。经过光敏剂光动力学治疗处理后，肿瘤细胞的细胞膜的通透性显著增大，肿瘤细胞的生长被明显抑制。
Description
一：技术领域
本发明属于光敏剂在生物医药中应用的技术领域。
二：背景技术
作为红外染料的三碳菁类化合物一直被用作红外胶片的增感剂，它们具有吸收波长长，感光度高的特点。近年来有一部分三碳菁化合物被开发为分子探针，作为检测试剂得到了成功应用。但至今为止，一直未见有将此类红外染料用于光动力学治疗的报道。
三：发明内容
本发明需要解决的问题是将三碳菁类光敏剂用于光动力学治疗实体瘤的细胞模型中，并开发生产制备治疗肿瘤的药物。该类光敏剂是具有吸收波长长、感光度高、生物毒性小等特点的三碳菁类物质。我们在细胞模型中验证了它用于光动力学治疗的可行性，并取得了理想效果。三碳菁类光敏剂的化学结构通式如下：
本发明技术方案是将三碳菁类光敏剂导入肿瘤发生部位，使肿瘤细胞与光敏剂直接作用，并对光敏剂作用的肿瘤细胞实施波长大于600nm的光照，肿瘤细胞发生死亡。
在光照作用下，光敏剂对肿瘤细胞表现出明显的生长抑制，使细胞膜的通透性增加，诱导肿瘤细胞发生凋亡。当给药浓度在10μmol/l时，肿瘤细胞生长抑制率可高达80％以上。本发明所述光敏剂可用于实体瘤的光动力学治疗，制备治疗肿瘤的药物。
三碳菁类光敏剂结构中X可以为O、S、Se元素中的一种；R基团可以为-H，-CH3，-C(CH3)3也可以为
中的一种。
5，5′-dichloro-11-diphenylamine-3，3′-diethyl-10，12-ethylene-thiatricarbocyanine-perchlorate(代号IR-140)是三碳菁类光敏剂中的一种，其结构如下：
四：附图说明
图1：IR-140对KB细胞的生长抑制曲线
横坐标表示IR-140的浓度，单位为μmol/l，纵坐标表示细胞生长抑制率。每个点代表平均值±最大偏差。
图2：IR-140对KB细胞7-AAD染色实验结果
A为空白组，B为阴性对照，C-E是分别加入1、2、4μmol/L的IR-140后细胞膜通透性变化状况，阳性区分别为99.85％、99.86％、99.89％。
图3：IR-140对Hela的生长抑制曲线
横坐标表示IR-140的浓度，单位为μmol/l，纵坐标表示细胞生长抑制率。每个点代表平均值±最大偏差。
图4：IR-140对Hela细胞7-AAD染色实验结果
A为空白组，B为阴性对照，C-E是分别加入1、2、4、8μmol/L的IR-140后细胞膜通透性变化状况，阳性区分别为40.03％、44.61％、77.85％、98.74％。
图5：IR-140对B16细胞的生长抑制曲线
横坐标表示IR-140的浓度，单位为μmol/l，纵坐标表示细胞生长抑制率。每个点代表平均值±最大偏差。
图6：IR-140对B16细胞7-AAD染色实验结果
A为空白组，B为阴性对照，C-E是分别加入1、2、4μmol/l的IR-140后细胞膜通透性变化状况，阳性区分别为79.55％、91.15％、99.97％。
五：具体实施方式
(一)IR-140对人口腔上皮鳞状癌细胞简称KB细胞(KB细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所)的作用
1.MTT实验
(1)将细胞接种于96孔板内，培养(37℃，5％CO2，含10％小牛血清的RPMI1640培养基)过夜使其贴壁。
(2)其中加入1～30μmol/l不同浓度的IR-140，培养0.5～2h，使细胞与IR-140充分接触。
(3)卤素灯以0.65J/cm2的功率照射细胞20min。
(4)继续培养细胞24h(条件同上)。
(5)去培养液，加20μl 5mg/ml MTT(购自Sigma公司)，培养4h。
(6)加入细胞裂解液(50％DMF-20％SDS)，待全部溶解后，用酶标仪(Bio-Rad公司)在570nm处检测吸光度(结果如图1)。
2.7-AAD染色实验
(1)细胞处理同MTT实验，收获处理过的细胞，1000rpm离心10min。
(2)去其上清，PBS洗涤两次，将细胞浓度调节到2-5×106。
(3)取1ml细胞悬浮液1000rpm离心10min，加入50μl染色缓冲溶液(含有1％BSA和0.1％NaN3的PBS)和2μl 7-AAD(购自Chemlab公司)溶液，置于冰上染色30-60min。
(4)用染色缓冲溶液洗涤两次，向每管中加入200μl染色缓冲溶液和等体积的固定液1％多聚甲醛；
(5)混匀后在FACSCalibur流式细胞仪(BectonDickinson公司)上测试(结果如图3)。
(二)IR-140对人宫颈癌细胞简称Hela细胞(Hela细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所)的作用
1.MTT实验
(1)将细胞接种于96孔板内，培养(37℃，5％CO2，含10％小牛血清的RPMI1640培养基)过夜使其贴壁。
(2)向其中加入1～30μmol/l不同浓度的IR-140，培养0.5～2h，使细胞与IR-140充分接触。
(3)用卤素灯以0.65J/cm2的功率照射细胞20min。
(4)继续培养细胞24h(条件同上)。
(5)去培养液，加20μl 5mg/ml MTT(购自Sigma公司)，培养4h。
(6)加入细胞裂解液(50％DMF-20％SDS)，待全部溶解后，用酶标仪(Bio-Rad公司)在570nm处检测吸光度(结果如图3)。
2.7-AAD染色实验
(1)细胞处理同MTT实验，收获处理过的细胞，1000rpm，10min。
(2)去上清，PBS洗涤两次，将细胞浓度调节到2-5×106。
(3)取1ml细胞悬浮液1000rpm离心10min，加入50μl染色缓冲溶液和2μl7-AAD(购自Chemlab公司)溶液，置于冰上染色30-60min。
(4)用染色缓冲溶液洗涤两次，向每管中加入200μl染色缓冲溶液和等体积的固定液1％多聚甲醛。
(5)混匀后在FACSCalibur流式细胞仪(BectonDickinson公司)上测试(结果如图4)。
(三)IR-140对小鼠黑色素瘤细胞简称B16细胞(B16细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所)的作用
1.MTT实验
(1)将细胞接种于96孔板内，培养(37℃，5％CO2，含10％小牛血清的RPMI1640培养基)过夜使其贴壁。
(2)向其中加入1～30μmol/L不同浓度的IR-140，培养0.5～2h，使细胞与IR-140充分接触。
(3)用卤素灯以0.65J/cm2的功率照射细胞20min。
(4)继续培养细胞24h(条件同上)。
(5)去培养液，加20μl 5mg/ml MTT(购自Sigma公司)，培养4h。
(6)加入细胞裂解液(50％DMF-20％SDS)，待全部溶解后，用酶标仪(Bio-Rad公司)在570nm处检测吸光度(结果如图5)。
2.7-AAD染色实验
(1)细胞处理同MTT实验，收获处理过的细胞，1000rpm，10min。
(2)去其上清，PBS洗涤两次，将细胞浓度调节到2-5×106。
(3)取1ml细胞悬浮液1000rpm离心10min，加入50μl染色缓冲溶液和2μl 7-AAD(购自Chemlab公司)溶液，置于冰上染色30-60min。
(4)用染色缓冲溶液洗涤两次，向每管中加入200μl染色缓冲溶液和等体积的固定液1％多聚甲醛。
(5)混匀后在FACSCalibur流式细胞仪(BectonDickinson公司)上测试(结果如图6)。
Claims (2)
1.三碳菁类光敏剂
在制备治疗肿瘤药物中的应用。
2.根据权利要求1所述，三碳菁类光敏剂中X可以为O、S、Se元素中的一种；R基团可以为-H，-CH3，-C(CH3)3也可以为
中的一种，在制备治疗肿瘤药物中的应用。
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|---|---|---|---|---|
| CN108164570A (zh) * | 2018-02-08 | 2018-06-15 | 中南大学湘雅三医院 | 一种含硒光敏剂及其制备方法和应用 |
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