CN1566329A - 一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂 - Google Patents
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Abstract
一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂，属于微生物领域，涉及一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂，它由淀粉、葡萄糖酸钙、低聚异麦芽糖和茶多酚按一定重量配比制备而成。本发明制剂是在5种双歧杆菌固体发酵结束后、干燥开始前按比例加入的。该制剂具有延长固体发酵制备的5种双歧杆菌的保存期的功能。
Description
技术领域
本发明属于微生物领域，涉及一种延长5种双歧杆菌(Bifidobacterium spp)固体发酵物活菌保存期的制剂。
背景技术
以固体发酵工艺生产不同种双歧杆菌，均有文献报道。然而，这类产品在室温下保存过程中，活菌死亡率高，保存12个月后，活菌数从0个月的8～34亿下降到0～6亿，严重影响了产品质量。因为单位重量的产品中，双歧杆菌活菌数量是评判产品质量优劣的关键指标，活菌越多，产品质量越好。固体发酵前往培养基中或发酵后干燥前往发酵物中添加双歧因子(低聚异麦芽糖等)虽有延长活菌保存期的作用，但效果仍不令人满意。
发明内容
本发明之目的在于提供一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂，以达到延长活菌保存期之目的。
本发明是采用下列技术方案完成的：
(1)双歧杆菌菌种
①两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)
②长双歧杆菌(B.longum)
③婴儿双歧杆菌(B.infantis)
④短双歧杆菌(B.breve)
⑤青春双歧杆菌(B.adolescentis)
(2)5种双歧杆菌菌种培养与固体发酵
①原种液体培养
采用双歧杆菌培养基(BS)。0.1MPa下灭菌30min，厌氧下速冷至42℃后，立即接种5％的原种溶液(体积百分比)。在上述培养基上倒一层0.5～1.0cm厚度的无菌食用豆油，在厌氧下37℃培养48h后，终止培养，于厌氧0～4℃下保存备用。
②一级菌种培养
取蛋白胨6.0～11.0g，酵母膏3.0～6.0g，乳糖8.0～11.0g，微量盐溶液30～45ml，(其中CaCl2 0.1～0.5g，MgSO4 0.2～0.4g，K2HPO4 0.5～2.0g，KH2PO4 0.5～2.0g，NaHCO3 5.0～18.0g，NaCl1.0～2.0g，蒸馏水1000ml)，蒸馏水1000ml，pH6.8～7.2，以此作为一级菌种培养基。0.1MPa下灭菌45min，灌入无色透明的磨口细口玻璃瓶，溶积500ml，立既在上述培养基上倒一层0.5cm左右厚的无菌食用豆油，使液面离瓶口2.6～3.0cm。冷至40℃，立即接种5％原种培养物，以磨口瓶盖封口，并于37～38℃恒温培养箱中培养48～96h，每隔3h摇动1min。细胞数达2亿CFU/ml时，终止培养，在厌氧条件下保存备用。
③二级菌种培养
培养基同一级菌种，培养容器为厌氧种子罐，接入一级菌种量为10％。待细胞数达2.0亿CFU/ml(约24～48h)时，终止培养。
④固体发酵
取脱脂大豆粉21.0％～38.5％，麸皮46.0％～66.0％，小麦全粉8.0％～13.0％，低聚异麦芽糖1.5％～3.0％，酵母膏粉0.1％～0.2％，总重量100％。另外加入VB11.0～3.0mg/kg，VB22.0～5.0mg/kg，生物素0.6～2.2mg/kg，用自来水溶解后再加入。加固形物总重的30～50％的自来水，搅拌均匀，在0.1MPa下灭菌120min，冷却至40℃，在无菌条件下接种20％～30％的二级菌种。将培养物包装置厌氧固体发酵罐中，于37℃下厌氧培养24～48h至细数达120亿CFU/g(干基)后，终止培养，得固体发酵物(湿基)。
(3)本发明制剂的制作
①组成
淀粉79％～89％，葡萄糖酸钙4％～15％，低聚异麦芽糖2％～8％，茶多酚1％～3％。
优选为：淀粉82％，葡萄糖酸钙12％，低聚异麦芽糖5％，茶多酚1％。
②原料要求
淀粉：食用玉米淀粉，应符合GB/T8885-1988之规定。
葡萄糖酸钙：应符合GB15571-1995之规定。
低聚异麦芽糖：应符合QB/T2491-2000之标准。产品含低聚异麦芽糖≥50％。
茶多酚：应符合QB2154-1995之规定。
③制作
按组成比例称取经粉碎并过120目筛的各原料淀粉、葡萄糖酸钙、低聚异麦芽糖和茶多酚，合并，在不锈钢药物搅拌机中搅匀，装入内衬无毒塑料薄膜的编织袋中，备用。
(4)本发明制剂的使用方法
①加入时间：不同种双歧杆菌固体发酵结束后，干燥开始前加入。将其与固体发酵物(湿基)在药物或食品搅拌器中搅匀后，立即进行冻干，真空干燥或电热鼓风干燥处理，至物料含水≤4.0％，终止干燥。
②加入量：该制剂与双歧杆菌固体发酵物(湿基)按1∶4～12(重量比)加入。优选为：1∶6.6加入。
不同种双歧杆菌固体发酵物(湿基)中加入本发明制剂后，保存期内活菌死亡率下降，有利于保证产品质量。
具体实施方式
以下通过试验例来进一步阐述本发明所述制剂的有效效果，这些试验例包括了本发明制剂和其他制剂对延长5种双歧杆菌活菌保存期的效果的试验，本发明制剂加入双歧杆菌固体发酵物中的时间试验及加入量试验。
试验例1本发明制剂延长5种双歧杆菌活菌保存期的效果试验
(1)试验材料
制剂A：淀粉82％，葡萄糖酸钙12％，低聚异麦芽糖5％，茶多酚1％。
制剂B：葡萄糖酸钙50％，低聚异麦芽糖50％，过120目筛。
对照组：不加任何制剂。
试验菌种：两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)，长双歧杆菌(B.longum)，婴儿双歧杆菌(B.infantis)，短双歧杆菌(B.breve)，青春双歧杆菌(B.adolescentis)。
5种双歧杆菌固体发酵物(湿基)。
(2)试验方法
5种双歧杆菌固体发酵结束后，立即将各制剂分别拌入5种发酵物(湿基)中。加入量：100g不同制剂分别加入到660g 5种固体发酵物中。拌匀后立即真空干燥(料温≤42℃)至物料含水量≤4％，然后装入0号硬胶囊置26℃恒温条件下保存，定期检测双歧杆菌活菌数。
试验结果见表1。
表1固体发酵物保存期内活菌数目(保存温度26℃，×±SD，n＝12)
| 菌种 | 活菌数目(亿CFU/g) | ||
| 制剂A | 制剂B | 对照组 | |
| 0个月 12个月 24个月 | 0个月 12个月 24个月 | 0个月 12个月 24个月 | |
| 两歧双歧杆菌 | 236±27.5 190±17.0 37±4.2 | 167±19.4 116±10.9 1.8±0.15 | 136±11.5 0.4±0.05 0 |
| 长双歧杆菌 | 197±20.4 161±11.9 22±1.7 | 143±9.8 82±7.1 0.9±0.06 | 115±9.7 0 0 |
| 婴儿双歧杆菌 | 275±30.6 223±24.4 42±5.5 | 189±20.4 122±14.0 1.2±0.15 | 142±14.6 0 0 |
| 短双歧杆菌 | 308±34.5 255±27.7 58±6.4 | 205±19.3 146±10.2 9.7±0.92 | 162±17.8 0 0 |
| 青春双歧杆菌 | 422±50.3 347±40.0 67±8.5 | 211±16.5 151±12.7 6.2±0.71 | 153±9.4 1.7±0.12 0 |
表1数据示明：①本发明制剂(制剂A)对延长5种双歧杆菌固体发酵物的活菌保存期(12个月，24个月)有显著作用(制剂A与制剂B，对照组比较P＜0.01，t检验)。②制剂B也有一定效果(制剂B与对照组比较，P＜0.01，t检验)。③制剂A和制剂B在发酵物干燥过程中对5种双歧杆菌的存活有保护作用，表现在0个月活菌数目高，且制剂A的效果优于制剂B(t检验，P＜0.01)。
试验例2本发明制剂加入双歧杆菌固体发酵物中的时间试验(1)试验材料
本发明制剂(即试验例1中之制剂A)。
试验菌种同试验例1。
5种双歧杆菌固体发酵物(湿基)。
(2)试验方法
①处理A：本发明制剂在5种双歧杆菌固体发酵结束后立即加入。加入量1∶6.6(重量比)。在40℃下真空干燥。
②处理B：本发明制剂在5种双歧杆菌固体发酵物真空干燥(40℃)后加入。加入量与处理A相同，即仍按1∶6.6(湿基)计，尽管干燥后的发酵物重量小于湿基。
③对照组不加任何制剂。
两个处理组及对照组均干燥至含水量4％。
结果见表2
表2本发明制剂加入固体发酵物中的时间试验(保存温度26℃，×±SD，n＝12)
| 菌种 | 活菌数目(亿CFU/g) | ||
| 处理A | 处理B | 对照组 | |
| 0个月 12个月 | 0个月 12个月 | 0个月 12个月 | |
| 两歧双歧杆菌 | 236±27.5 190±17.0 | 159±16.2 87±9.3 | 136±11.5 0.4±0.05 |
| 长双歧杆菌 | 197±±20.4 161±11.9 | 137±10.7 75±7.0 | 115±9.7 0 |
| 婴儿双歧杆菌 | 275±30.6 223±24.4 | 173±19.0 101±9.8 | 142±14.6 0 |
| 短双歧杆菌 | 308±34.5 255±27.7 | 184±20.1 123±11.6 | 162±17.8 0 |
| 青春双歧杆菌 | 422±50.3 347±40.0 | 203±19.4 144±11.1 | 153±9.4 1.7±0.12 |
从表2可以看出，处理A优于处理B，更优于对照组(t检验，P＜0.01)，说明本发明制剂在发酵物干燥前加入好。处理B也对活菌保存期有良好效果(与对照组比较，t检验，P＜0.01)，说明发酵物干燥后加入适量有效辅应剂对活菌保存是有益的。
试验例3本发明制剂加入量试验
试验材料同试验例1，方法也与试验例1基本相同，只是加入量有别。加入量为本发明制剂与发酵物湿基之重量比。
结果见表3
表3本发明制剂加入量试验(保存温度26℃，×±SD，n＝12)
| 菌种 | 活菌数目(亿CFU/g) | ||
| 加入量 | |||
| 1∶6.6 | 1∶8.0 | 1∶4.0 | |
| 0个月 12个月 | 0个月 12个月 | 0个月 12个月 | |
| 两歧双歧杆菌 | 236±27.5 190±17.0 | 183±16.5 148±17.9 | 242±30.4 198±20.7 |
| 长双歧杆菌 | 197±20.4 161±11.9 | 169±14.8 131±15.0 | 205±19.1 168±15.7 |
| 婴儿双歧杆菌 | 275±30.6 223±24.4 | 230±21.7 164±16.6 | 283±31.9 225±26.7 |
| 短双歧杆菌 | 308±34.5 255±27.7 | 258±22.5 181±20.4 | 311±29.7 265±22.9 |
| 青春双歧杆菌 | 422±50.3 347±40.0 | 336±41.2 265±22.8 | 420±41.6 322±30.8 |
表3结果指出，本发明制剂按1∶6.6和1∶4.0效果优于1∶8.0(t检验，P＜0.01)，但1∶6.6与1∶4.0差别不显著(P＞0.05)。从经济角度分析，选择了1∶6.6。
上述3个试验例表明，使用本发明制剂能显著延长5种双歧杆菌固体发酵物的保存期。
Claims (7)
1.一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂，其特征是，它由下述原料组成：淀粉79％～89％，葡萄糖酸钙4％～15％，低聚异麦芽糖2％～8％，茶多酚1％～3％。
2.根据权利要求1所述的一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂，其特征是，两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)，长双歧杆菌(B.longum)，婴儿双歧杆菌(B.infantis)，短双歧杆菌(B.breve)和青春双歧杆菌(B.adolescentis)。
3.根据权利要求1所述的一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂，其特征是，其中原料的用量为：淀粉82％，葡萄糖酸钙12％，低聚异麦芽糖5％，茶多酚1％。
4.根据权利要求1或2所述的一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂，其特征是，制备方法：称取经粉碎并过120目筛的各原料淀粉、葡萄糖酸钙、低聚异麦芽糖和茶多酚，合并，混匀，就制备成了本发明制剂。
5.根据权利要求1和3所述的一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂，其特征是，在5种双歧杆菌固体发酵结束后、干燥开始前加入。
6.根据权利要求1和3和4所述的一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂，其特征是，制剂与5种双歧杆菌固体发酵物(湿基)按1∶4～12(重量比)加入。
7.根据权利要求6所述的一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂，其特征是，制剂与5种双歧杆菌固体发酵物(湿基)按1∶6.6加入。
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|---|---|---|---|
| CN 03146332 CN1566329A (zh) | 2003-07-09 | 2003-07-09 | 一种延长5种双歧杆菌固体发酵物活菌保存期的制剂 |
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN103230005B (zh) * | 2005-10-21 | 2016-03-16 | 努特里希亚公司 | 刺激肠内菌群的方法 |
| CN108456645A (zh) * | 2018-05-04 | 2018-08-28 | 北京中特养生物技术研究所有限公司 | 一种益生菌的保存方法 |
-
2003
- 2003-07-09 CN CN 03146332 patent/CN1566329A/zh active Pending
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| CN108456645A (zh) * | 2018-05-04 | 2018-08-28 | 北京中特养生物技术研究所有限公司 | 一种益生菌的保存方法 |
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