CN1559402A

CN1559402A - 巴西苏木红素的新用途

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Publication number: CN1559402A
Application number: CNA2004100047589A
Authority: CN
Inventors: 杜力军; 王伟; 赵玉男; 邢东明; 丁怡; 王如峰
Original assignee: Tsinghua University
Current assignee: Tsinghua University
Priority date: 2004-03-05
Filing date: 2004-03-05
Publication date: 2005-01-05
Anticipated expiration: 2024-03-05
Also published as: CN100404028C

Abstract

巴西苏木红素的新用途，涉及一种以苏木为原料制备的巴西苏木红素医药方面的新用途。具体的说，巴西苏木红素在制备治疗脑缺血或脑出血，脑组织过氧化物升高并由此引起的脑功能改变疾病的药物中应用。经实验研究表明，巴西苏木红素具有抗氧化，保护脑神经原，增强脑血流，抑制红细胞膜Na－K ATP酶活性的作用。对于脑缺血再灌注引起的脑组织损伤有明显的作用。在治疗上述疾病时，以巴西苏木红素为活性成分，单独使用或与其它药物配合制备成在临床上可以使用的各种不同剂型的药物。

Description

巴西苏木红素的新用途

技术领域

本发明涉及以苏木为原料提取的巴西苏木红素在医药方面的新用途，属于中药技术领域。

背景技术

苏木，为豆科植物苏木Caesalpinia sappan L.的干燥心材。分布于我国的广西，广东，台湾，贵州，云南，四川等地。全年可采。除去外皮及边材，取心材，晒干。含有巴西苏木素(brasilin)，巴西苏木红素(brasilein)等成分。以苏木为原料提取的巴西苏木红素(C₁₆H₁₂O₅)的结构式如下：

物理化学特征：

红棕色晶体(MeOH)，mp 260-265℃(dec.)，，[a]_D ²⁰-1008(MeOH；c 0.6)。

波谱特征：

UV(MeOH)nm：276，446，556。

EIMS(m/z)：284[M]⁺

NMR如下表

¹H and ¹³C NMR data of Brazilei in DMSO-d₆(500MHz for ¹H and 125MHz for ¹³C，δin ppm，J in Hz)

No.¹H ¹³C

1 7.82(1H，d，J＝8.5Hz) 130.5

10a 110.8

2 6.58(1H，dd，J＝8.5，2.0Hz) 110.8

3 162.2

4 6.36(1H，d，J＝2.0Hz) 102.8

4a 157.7

6 4.10(1H，d，J＝11.5Hz)，4.47(1H，d，J＝11.5Hz) 72.9

7 2.86(2H，s) 39.8

7a 158.9

8 6.33(1H，s) 117.5

9 179.3

10 152.3

11 7.11(1H，s) 104.1

11a 126.0

《本草纲目》记载：苏木具有“破血，排脓止痛”的功效。主治妇人血气心腹痛，消痈肿扑损瘀血“，《中药大辞典-上册》记载：苏木具有“行血破瘀，消肿止痛”的功效。苏木作为脑血管药用的记载比较少见，尤其未见报道苏木或巴西苏木红素在制备治疗脑缺血，脑内过氧化物增高所引起疾病的药物中的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种巴西苏木红素在医药方面的新用途，该用途为：

巴西苏木红素在制备治疗脑内过氧化物过多所引起疾病的药物中的应用。

巴西苏木红素在制备治疗脑血流供应不足所引起的疾病的药物中的应用。

巴西苏木红素在制备治疗脑缺血及脑出血所引起的疾病的药物中的应用。

本发明所述的巴西苏木红素采用以下方法得到：首先将药材重量的5～15倍80％～95％乙醇回流提取，提取次数一般为1～3次，每次1～3小时。将提取液在常压或减压，温度在30～90℃浓缩，回收乙醇，干燥，称重。加甲醇溶解，用聚酰胺或硅胶拌样，装柱，然后分别用4～8倍柱体积的水和30～90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液部分。将收集的洗脱液在30～80℃温度下减压浓缩，减压干燥或冷冻干燥，得到巴西苏木红素。加水溶解，石油醚萃取，萃取物常压浓缩，得到巴西苏木红素。

将上述方法制得的巴西苏木红素采用高效液相色谱法在波长446nm处进行测定，巴西苏木红素(C₁₆H₁₂O₅)含量在80～98％之间。

在治疗脑内过氧化物过多，脑血流供血不足及其由此引起的疾病时，以巴西苏木红素为活性成分，以常规的制剂工艺，单独使用或与其他药物配合制备成在临床上可以使用的各种不同剂型的药物。如散剂，丸剂，胶囊剂，片剂，微囊剂，软胶囊剂，膜剂，栓剂，注射剂，膏剂，酊剂，散剂，冲剂，气雾剂，各种外用制剂等。

本发明的药理实验结果表明，巴西苏木红素具有一定地抑制脑组织MDA生成的作用，有一定的抗氧化作用。巴西苏木红素可以明显升高小鼠脑膜血流量，具有一定地扩张脑血管的作用。巴西苏木红素体外可以明显抑制红细胞膜Na⁺，K⁺ ATP酶活性，提示可以降低脑能量代谢，具有一定保护脑神经原的作用。

附图说明

图1巴西苏木红素结构图；

图2巴西苏木红素标准曲线图；

图3巴西苏木红素的紫外可见光扫描图谱；

图4巴西苏木红素高效液相色谱图。

具体实施方式

下述实施例及药效实验资料使本发明所说的巴西苏木红素的制备及其用途得以证实，同时又不应将下列实施例看作是对本发明的限制。

实施例1：

取苏木0.5公斤用其重量6倍的80％乙醇回流提取1次，每次1小时。将提取液减压，温度45℃下浓缩，回收乙醇，干燥，称重。加甲醇溶解，拌入聚酰胺装柱，然后分别用4倍柱体积的水和4倍柱体积的90％乙醇洗脱，收集后一部分洗脱液。将收集的洗脱液在30℃温度下减压浓缩，减压干燥，得到巴西苏木红素。采用高效液相色谱法进行测定，巴西苏木红素含量为80％左右。

实施例2：

取苏木0.5公斤用药材重量的15倍80％乙醇回流提取2次，每次3小时。将提取液浓缩回收乙醇，拌硅胶装柱，用6倍柱体积的乙醇-氯仿(20∶80)洗脱，收集洗脱液。将收集的洗脱液在60℃温度下减压浓缩，沉淀物常压干燥，得到巴西苏木红素。巴西苏木红素采用高效液相色谱法进行测定，巴西苏木红素含量为90％左右。

实施例3：

取苏木0.5公斤用其重量10倍的95％乙醇回流提取，回流温度80℃，提取3次，每次1小时。将提取液在减压，温度在50℃浓缩，回收乙醇，加水，用石油醚萃取，萃取物常压浓缩，得到巴西苏木红素。巴西苏木红素采用高效液相色谱法进行测定，巴西苏木红素含量为92％左右。

在药剂应用上就是将巴西苏木红素单独地或者加入复方中以常规的制剂工艺制备成药剂。其药剂可以是临床上能够使用的各种不同剂型。

巴西苏木红素测定，采用高效液相色谱法对其进行含量测定。

1、试药与仪器

Waters高效液相色谱仪，515泵，996型二极管阵列紫外可见光检测器。紫外可见光分光光度计(TU-1800PC)。1/100000分析天平。巴西苏木红素(Brasilein，C₁₆H₁₂O₅，分子量284)对照品清华大学药物药理研究室自制(批号：030716)，高效液相色谱仪标定，纯度98％。其余试剂均为分析纯。

(1)对照品溶液的制备

精密称取巴西苏木红素适量，加甲醇制成0.34mg/ml的对照品液。

(2)对照品最大吸收峰的确定

取对照品液，在TU-1800PC紫外可见分光光度计上进行光谱扫描，扫描范围为200-600nm，扫描图谱如附图2所示。由图中得知，巴西苏木红素最大吸收波长为446nm。

(3)色谱条件：色谱柱：Hypersil ODS柱(100×4.6mm i.d.5μm中国科学院大连化学物理研究所)；预柱：ODS柱，柱温：22℃(室温)，流动相：乙腈-水(20∶80)，流速：1ml/min，检测波长：446nm。进样量：10μl。

(4)标准曲线制做

取上述对照品液，分别进样2，4，6，8，10，12μl，以峰面积为纵座标(Y)，以样品质量为横座标(X)，做标准曲线，并求线性关系如下：

样品质量(μg)进样量(μl) 峰面积线性方程相关系数

0.68 2 2010060 Y＝3×10⁶X R²＝0.9991

1.36 4 3533044

2.04 6 5377550

2.72 8 7245427

3.40 10 9014809

4.08 12 10843920

其线性图见附图2。

药效实验例1：对小鼠脑组织的抗氧化作用

观察本发明巴西苏木红素对小鼠脑MDA生成的抑制作用。本发明所用巴西苏木红素，批号：030716。用时以生理盐水配制成所需浓度。实验所用动物为雄性二级ICR小鼠，非近交系封闭群，北京维通利华实验动物中心提供，体重为18-22g。实验室室温20-22℃，相对湿度40％～60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼10只，每三日清扫笼舍一次。取正常小鼠，处死后取脑，加入生理盐水做匀浆液(与脑比例为5∶1)。4℃冰箱静置5分钟，取上部均匀混浊液。每管加入脑组织液150uL，加入不同浓度药液50ul，37℃水浴孵育30分。依次加入10％SDS 0.1ml，50％冰醋酸硫代巴比妥酸液0.5ml和1％盐酸液2ml。沸水浴15分钟，取出后冷水置10分钟，1500转离心15分钟，取上清于532nm处测吸光度A值。每组做三个平行管。

所得数据经EXCEL软件处理。组间t检验。

本试验巴西苏木红素给药终浓度分别为1×10^-6g/ml，1×10^-5g/ml，1×10^-4g/ml。

本试验空白对照为等体积生理盐水.阳性药对照为抗坏血酸，北京芳草医药化工制药公司生产，批号：010621。实验终浓度为1×10^-3g/ml。

本试验数据均以Excel软件处理。其数据见下表1。

表1：巴西苏木红素体外对小鼠脑MDA生成的影响(x±s)

药物终浓度(ug/ml) MDA(OD_532nm)

生理盐水等体积 0.429±0.042

抗坏血酸 1000 0.048±0.01**

巴西苏木红素 100 0.114±0.015**

巴西苏木红素 10 0.209±0.022**

巴西苏木红素 1 0.274±0.02**

与生理盐水组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝3

本实验结果显示，巴西苏木红素体外有较强地抑制缺糖缺氧脑组织MDA生成的作用，最低有效浓度为1×10^-5g/ml。提示巴西苏木红素具有一定的抗氧化的的作用。

药效实验例2：对小鼠脑膜血流量的影响

观察本发明巴西苏木红素对小鼠脑膜血流量的作用。巴西苏木红素，批号：030716。用时以生理盐水配制成所需浓度。试验动物为雄性ICR小鼠，非近交系封闭群，体重18-22g，由北京维通利华实验动物中心提供。实验室室温20-22℃，相对湿度40％～60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼5只，每三日清扫笼舍一次。

取小鼠乌拉坦(1.0g/kg)麻醉后，固定头部，切开皮肤，于大脑皮质运动区(AP_-1，L₂)安置激光探头(MDL-1型多功能激光多谱勒分析仪，天津南开大学生产)，待稳定5-10分钟后开始测试脑血流，记录给药前后脑膜血流量的变化。

本试验观察指标及指标表达：所测结果直接经MDL软件处理，脑膜血流量以KHz(千赫兹)表示，脑膜血流量增加百分值[＝(给药后血流量-给药前血流量)/给药前血流量]。

本试验给药剂量分别为15mg/kg，5mg/kg；给药途径为尾静脉给药；给药体积为0.05ml/10g小鼠。

本试验空白对照为等体积生理盐水，阳性药对照为肾上腺素注射液，10mg/ml。上海天丰制药厂生产，批号：020601，小鼠用量为0.01mg/kg。

本试验数据均以Excel软件处理。其数据见下表2、3。

表2：巴西苏木红素对正常小鼠脑血流量的作用(x±s)

药物剂量脑血流量(KHz)

(mg/kg)0 1 3 5 10 15(分

钟)

对照组 12.11± 12.37± 12.44± 12.16± 12.2± 12.25±

5.68 5.77 5.81 5.45 5.52 5.58

肾上腺素 0.01 12.13± 11.04± 13.06± 13.09± 13.57± 13.0±

1.77 1.72 1.32 1.41 1.43 1.36

巴西苏木 5 8.39± 8.58± 9.57± 9.73± 9.99± 9.92±

红素 2.56 2.51 4.03 3.9 3.67 3.46

巴西苏木 2.5 7.04± 7.26± 8.32± 7.53± 8.21± 8.48±

红素 2.45 1.85 0.93* 2.49* 2.39* 1.44*

与同时间对照组相比，P＜0.05。n＝5

表3：巴西苏木红素对正常小鼠脑血流量增加百分比值(x±s)

药物剂量脑血流量增加百分比值(％)

(mg/k 0 1 3 5 10 15(分钟)

g)

对照组 0 2.38± 2.59± 1.23± 1.21± 1.22±

3.8 4.99 6.66 6.71 9.29

肾上腺素 0.01 0 -8.7± 9.08± 9.58± 12.52± 7.87±

2.97 16.33* 17.98 6.46* 8.07

巴西苏木 5 0 2.5± 11.38± 13.99± 17.86± 17.46±

红素 6.47 12.71 10.75* 12.33* 11.32*

巴西苏木 2.5 0 7.30± 2.26± 7.57± 20.15± 29.61±

红素 15.0 8.46 5.65 14.34* 33.2*

与同时间对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝5

实验结果显示，巴西苏木红素对小鼠脑膜血流量有明显增加的作用。一般在给药后1分钟即有脑血流升高，5-15分钟脑血流升高明显；表明巴西苏木红素对脑血管有直接地扩张作用，提示对于脑缺血及其血管性痉挛所引起的疾病有较好的作用。

药效实验例3：对红细胞膜Na⁺-K⁺ATP酶活性的影响

本发明所用SD大鼠，非近交系封闭群，体重250-270g。购自北京维通利华实验动物技术公司。实验室室温20-22℃，相对湿度40％～60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼5只，每三日清扫笼舍一次。

本发明所用巴西苏木红素，批号：030716。阳性对照药为去乙酰毛花苷注射液，0.4mg/2ml，上海旭东海普药业有限公司，批号：021001。752紫外可见光分光光度计。取大鼠10％乌拉坦麻醉，腹主动脉取血，肝素抗凝，分离红细胞，用10mmol/L Tris-HCl缓冲液破红细胞膜，离心(15000转/分，6分钟)去上清。得红细胞膜液。以蒸馏水作空白，以白蛋白作标准，测定红细胞膜液的蛋白含量。将红细胞膜液浓度定在0.1-1.0mg/ml范围内，每管加入样品2ml，依次加入不同浓度的药物血0.4ml，加入Mg²⁺和Na⁺，K⁺液，37℃预热5分钟，加入ATP 0.4ml，37℃振荡30分钟，4000转离心3分钟，取上清测定Pi含量(张均田。现代药理实验方法。第一版，北京医科大学中国协和医科大学联合出版社。1998：1015)。以单位时间内Pi的变化值反应ATP酶活性。Na⁺-K⁺ ATP酶活性＝总ATP酶活性-Mg²⁺ATP酶活性。每样本做三个平行管。

试验结果见下表4：

表4：对大鼠红细胞膜Na⁺-K⁺ ATP酶活性的影响(x±s)

药物终浓度总ATP酶活性 Mg²⁺ATP酶活性 Na⁺-K⁺ATP酶活性

(ug/ml) (mmol Pi/mg.h) (mmol Pi/mg.h) (mmol Pi/mg.h)

生理盐水等体积 0.801±0.017 0.31±0.018 0.519±0.048

乙酰毛花苷 1 0.401±0.023 0.289±0.013 0.109±0.034**

巴西苏木红 1 0.709±0.023 0.393±0.016 0.316±0.028**

素

巴西苏木红 0.5 0.697±0.018 0.310±0.023 0.402±0.045*

素

与生理盐水组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝3

巴西苏木红素能明显抑制Na⁺-K⁺ATP酶活性，在脑缺血再灌过程中可以减少脑组织的能量代谢，保护神经原。

药效实验例4：对小鼠体内血栓形成的影响

试验动物为雄性ICR小鼠，非近交系封闭群，体重18-22g，由北京维通利华实验动物中心提供。实验室室温20-22℃，相对湿度40％～60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼10只，每三日清扫笼舍一次。

本发明所用巴西苏木红素，批号：030716。阳性对照药为阿斯匹林，25mg/片，北京市曙光制药厂生产，批号：030205。752紫外可见光分光光度计。

取小鼠随机分组，腹腔给预不同剂量的药物，给药后半小时，每只小鼠尾静脉注射血栓形成诱导剂(0.7mg去甲肾上腺素，2.5mg二磷酸腺苷/10ml)，给药体积0.1ml/10g体重。记录观察从注射诱导剂后5分钟内小鼠的死亡情况。计算各组死亡百分率(死亡数/总数×100％)。

试验结果见下表5：

表5：对小鼠体内血栓形成的影响(x±s)

药物剂量总例数死亡数存活数死亡率％

mg/kg

生理盐水等体积 10 10 0 100

阿斯匹林 5 10 6 4 60*

巴西苏木红素5 10 7 3 70

巴西苏木红素10 10 3 7 30**

与生理盐水组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

巴西苏木红素能明显抑制体内血栓诱导剂所致的小鼠死亡，并有一定的量效关系，表明，巴西苏木红素有抗体内血栓形成的作用。

Claims

1.巴西苏木红素在制备治疗脑内过氧化物过多所引起疾病的药物中的应用。

2.巴西苏木红素在制备治疗脑血流供应不足所引起的疾病的药物中的应用。

3.巴西苏木红素在制备治疗脑缺血及脑出血所引起的疾病的药物中的应用。