CN1557143A

CN1557143A - 囊丝黄精再生体系的建立方法

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Publication number: CN1557143A
Application number: CNA2004100216591A
Authority: CN
Inventors: 鲍锦库; 吴传芳; 安洁; 高顺; 赵曦; 常丽青; 荣艳珍; 吕鸿周; 何小佳; 洪志霞; 邓洁; 刘超; 顾莹; 陈放
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Sichuan University
Priority date: 2004-01-13
Filing date: 2004-01-13
Publication date: 2004-12-29
Anticipated expiration: 2024-01-13
Also published as: CN1240269C

Abstract

本发明公开了囊丝黄精再生体系的建立方法，其步骤为：A.囊丝黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)外植体愈伤组织的诱导；B.将前述愈伤组织接种到分化培养基中诱导生苗；C.将步骤B中未生根的幼苗移至生根培养基中诱导生根；D.将步骤B和C中生根的幼苗先炼苗，然后，栽培。采用本发明方法只需3－4个月即可得到囊丝黄精再生体系，其移栽后的成活率达70－75％；其根状茎与药用黄精相比较，甘露糖结合凝集素的含量相近，凝血活性无明显差异。

Description

囊丝黄精再生体系的建立方法

技术领域

本发明涉及一种具有药用价值的黄精属植物再生体系的建立方法，特别是囊丝黄精再生体系的建立方法。

背景技术

黄精为百合科植物黄精(Polygonatum sibiricum Redoute)、囊丝黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)、热河黄精(Polygonatum macropodiumTurcz.)、滇黄精(Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.)、卷叶黄精(Polygonatum cirrhifolium(Wall.)Royle)等的根茎^[1]。黄精入药治病古已有之，《神农本草经》把它列为上品，黄精性甘、味平，归肺、脾、肾、经，具养阴润肺补脾益气的功效，用于滋补强身和治疗肾虚精亏、肺虚燥咳以及脾胃虚之症，是中医常用药物。现代药理学研究证明，黄精具有增强免疫、降低血脂、血糖、延缓衰老、营养神经和解毒功能等多种药理作用，对黄精化学成分的研究表明，黄精含有黄精皂苷、菸酸、糖类、醌类、氨基酸及微量元素。

近年来，对黄精多糖的研究已取得一些很有意义的进展，从囊丝黄精中提取的多聚糖(提供组培植物的多聚糖含量)具有增强大鼠免疫系统的活性^[2]；其根状茎中的甘露糖结合凝集素-黄精凝集素II(Polygonatumcyrtonema Hua.lectin II，PCL II)具有特异结合甘露糖的活性，作为植物凝集素超家族的一员具有广泛的生物学活性，可作为逆转录病毒的有效抑制剂和用于防止农作物的病虫害等^[3，4，5]。

目前，黄精主要采用根状茎繁殖。由于根状茎繁殖率低，需3-5年才能长成具药用价值的植株，加之，长期大规模的无序采挖黄精，我国黄精已经面临匮乏的危险。虽然，美国申请号为20030100109的发明专利提供了一种新的培养基和一种黄精属植物卷叶黄精离体再生系统的建立方法，该方法将黄精种子分别在三种培养基上进行培养，产生上胚轴、胚芽鞘、根并终止上胚轴的休眠，促进种子萌发，但是，该方法所得幼苗要长成具药用价值的植株所需年限仍然很长。

利用组织培养方法快速繁殖营养繁殖系及产生有效药用成分，已渐渐成为药物生产的新方向之一。对于囊丝黄精来说，在组织培养中易发生黄化或玻璃化现象，到目前为止还没有见到通过诱导它的外植体产生愈伤组织，再经组织分化形成再生体系，并在该再生体系根状茎中发现甘露糖结合凝集素的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种囊丝黄精再生体系的建立方法，克服囊丝黄精根状茎繁殖殖率低、生长年限长的缺陷，并使再生体系中的蛋白质成分种类和含量与野生的植株相似。

本发明对所要解决的技术问题所采用的技术方案为：提供一种囊丝黄精再生体系的建立方法，其步骤为：

a、囊丝黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)外植体愈伤组织的诱导；

b、将前述愈伤组织接种到分化培养基中诱导生苗；

c、将步骤b中未生根的幼苗移至生根培养基中诱导生根；

d、将步骤b和c中生根的试管苗先炼苗，然后，栽培。

在步骤a中，所述的囊丝黄精外植体为其根、根状茎或叶；将囊丝黄精外植体灭菌后接种到愈伤组织诱导培养基上，于避光条件下诱导培养愈伤组织，培养温度为25±2℃，培养时间为5-8周，所述的愈伤组织的诱导培养基组成为：MS基本培养基、0.5-2.0mg/L 6-BA、0.5-4.0mg/L 2，4-D、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；本发明愈伤组织诱导培养基优选组成为：MS基本培养基、1.0mg/L 6-BA、2.0mg/L 2，4-D、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

以上所述的MS基本培养基的组成为：大量元素(1.65g/L NH₄NO₃，1.9g/L KNO₃，0.44g/L CaCl₂.2H₂O，0.37g/L MgSO₄.7H₂O，0.17g/L KH₂PO₄)、微量元素(37.25mg/L Na₂EDTA，27.8mg/L FeSO₄.7H₂O，0.83mg/L KI，6.2mg/L H₃BO₃，22.3mg/L MnSO₄.4H₂O，8.6mg/L ZnSO₄.7H₂O，0.25mg/LNa₂MoO₄.2H₂O，0.025mg/L CuSO₄.5H₂O，0.025mg/L CoCl₂.6H₂O)、2mg/L苷氨酸、100mg/L肌醇、0.1mg/L盐酸硫胺素(B1)、0.5mg/L盐酸吡哚醇(B6)、0.5mg/L烟酸。

在步骤b中，将愈伤组织接种到分化培养基中诱导生苗，培养温度为25±2℃，光照时间为12-16小时/天，光照强度为1200-2000Lx，培养时间3-4周，所述的分化培养基组成为：MS基本培养基、0.5-4.0mg/L 2，4-D、0-2.0mg/L 6-BA、0-0.6mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；本发明分化培养基优选组成为：MS基本培养基、2.0mg/L 2，4-D、2.0mg/L6-BA、0.3mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8，培养温度为25±2℃，光照时间为12小时/天，光照强度为1200Lx，培养2-3周。

在步骤c中，将未生根的幼苗移至生根培养基中诱导根的分化，培养温度为25±2℃，光照时间为12-16小时/天，光照强度为1200-2000Lx，培养3-4周，所述的生根培养基组成为：1/2MS基本培养基、0.3-0.5mg/LNAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；本发明生根培养基优选组成为：1/2MS基本培养基、0.5mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8，光照时间为12小时/天，光照强度为1200Lx，培养3-4周。

在步骤c中，本发明所述的生根培养基组成也可为：1/2MS基本培养基、0.5mg/L 6-BA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；培养温度为25±2℃，光照时间为12小时/天，光照强度为1200Lx，培养3-4周。

以上所述的1/2MS基本培养基的组成为：大量元素(0.83g/L NH₄NO₃，0.95g/L KNO₃，0.22g/L CaCl₂.2H₂O，0.185g/L MgSO₄.7H₂O，0.085g/LKH₂PO₄)、微量元素(37.25mg/L Na₂EDTA，27.8mg/L FeSO₄.7H₂O，0.83mg/LKI，6.2mg/L H₃BO₃，22.3mg/L MnSO₄.4H₂O，8.6mg/L ZnSO₄.7H₂O，0.25mg/LNa₂MoO₄.2H₂O，0.025mg/L CuSO₄.5H₂O，0.025mg/L CoCl₂.6H₂O)、2mg/L苷氨酸、100mg/L肌醇、0.1mg/L盐酸硫胺素(B1)、0.5mg/L盐酸吡哚醇(B6)、0.5mg/L烟酸。

在步骤d中，所述的炼苗和栽培包括：将生根的试管苗移至自然光下培养3-4天，打开瓶盖，炼苗2-3天，然后再取出幼苗，洗净琼脂，移入疏松的重量比为1∶1的泥炭土与蛭石中，在温度为27±1℃、自然光下培养。

本发明的有益效果为：本发明方法具有较高的分化率，只需3-4个月即可得到囊丝黄精再生体系，其移栽后的成活率达70-75％，有利于大规模的栽培和使用；而且，其根状茎中的蛋白质成分种类和含量与野生的植株相似，特别是甘露糖结合凝集素与野生的植株含量和凝血活力相近，为根状茎中的主要蛋白；此外，培养的根状茎与野生型形态相似(如附图8所示)，而生长快于野生型。

附图说明

图1黄精体外培养生长过程中外植体表面形成愈伤组织；

图2黄精体外培养生长过程中愈伤组织膨大；

图3黄精体外培养生长过程中愈伤组织形成分化芽点；

图4黄精体外培养生长过程中形成不定芽；

图5黄精体外培养生长过程中形成黄精植株；

图6黄精体外培养生长过程中形成膨大的根状茎；

图7黄精体外培养生长过程中黄精植株生根；

图8黄精体外培养生长过程中移植成活的黄精幼苗

图9黄精总蛋白和黄精凝集素II的SDS-PAGE图；

其中，1，2分别为野生和离体再生型根状茎总蛋白；3为黄精凝集素II。

具体实施方式

一、本发明囊丝黄精外植体愈伤组织的诱导：

实施例1

1、植物材料

囊丝黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)，为百合科黄精属囊丝黄精。材料取自四川省长宁县山区。

2、愈伤组织诱导培养基

培养基组成为：

(1)MS基本培养基组成为：大量元素(1.65g/L NH₄NO₃，1.9g/L KNO₃，0.44g/L CaCl₂.2H₂O，0.37g/L MgSO₄.7H₂O，0.17g/L KH₂PO₄)、微量元素(37.25mg/L Na₂EDTA，27.8mg/L FeSO₄.7H₂O，0.83mg/L KI，6.2mg/LH₃BO₃，22.3mg/L MnSO₄.4H₂O，8.6mg/L ZnSO₄.7H₂O，0.25mg/L Na₂MoO₄.2H₂O，0.025mg/L CuSO₄.5H₂O，0.025mg/L CoCl₂.6H₂O)、2mg/L苷氨酸、100mg/L肌醇、0.1mg/L盐酸硫胺素(B1)、0.5mg/L盐酸吡哚醇(B6)、0.5mg/L烟酸。

(2)琼脂8g/L、蔗糖30g/L。

(3)激素组成及含量见表见表1-1

2.4-D(2，4-dichlorophenoxyacetic acid)，2，4-二氯苯氧乙酸)，6-BA(N⁶-Benzyladenine，N⁶-苄氨基嘌呤)，NAA(a-naphthaleneacetic acid，a-萘乙酸)为中科院上海生化所产品。

(4)pH为5.8。

3、愈伤组织的诱导

取幼嫩黄精根状茎，用软毛刷轻轻刷洗干净；再放入75％的乙醇中浸泡1min；之后置于0.1％的升汞溶液(HgCl₂)中浸泡8min灭菌，每过2min轻荡烧杯；最后用无菌水洗5~6次，每次2min。在无菌纸上将材料切成0.5cm×0.5cm×0.5cm大小，接种到愈伤组织诱导培养基上。置于温度为25±2℃、黑暗的环境下培养5-8周。

4、结果

如附图1所示，在黑暗环境中培养两周后，接种的黄精外植体开始膨大且表面有黄色的小突起，4周左右有明显愈伤组织生成。由表1-1结果可知，最佳培养基组成为：MS基本培养基、1.0mg/L 6-BA、2.0mg/L 2，4-D、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8，可有效诱导愈伤组织形成。

表1-1 不同培养基对诱导黄精愈伤组织形成的影响

接种的外植体(个) 形成的愈伤组织(个)

MS 2，4-D(mg/l) 6-BA(mg/l)

0.0 0.0 0 0

0.0 0.5 0 0

0.5 0.5 72 53

1.0 1.0 77 57

2.0 1.0 86 72

4.0 1.0 61 45

2.0 1.5 88 61

2.0 2.0 79 65

2.0 0.0 74 32

二、黄精愈伤组织的诱导分化

实施例2

1、材料

实施例1所诱导的囊丝黄精愈伤组织。

2、培养基

愈伤组织分化培养基为：MS基本培养基、0.50mg/L 2，4-D+0.5mg/L6-BA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

3、培养条件

6周后，将实施例1中长成的愈伤组织直接转入分化培养基中，在25±2℃，光照13h/d，2000Lx光照强度的条件下培养2-3周。

实施例3

培养基为：MS基本培养基、1.0mg/L 2，4-D、A1.0mg/L 6-B、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

培养条件为：温度为25±2℃，光照14h/d，光照强度为1800Lx。

其它与实施例2相同。

实施例4

培养基为：MS基本培养基、2.0mg/L 2，4-D、1.0mg/L 6-BA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

培养条件为：温度为25±2℃，光照12h/d，光照强度为1200Lx。

其它与实施例2相同。

实施例5

培养基为：MS基本培养基、4.0mg/L 2，4-D、1.0mg/L 6-BA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

培养条件为：温度为25±2℃，光照15h/d，光照强度为1600Lx。

其它与实施例2相同。

实施例6

培养条件为：温度为25±2℃，光照16 h/d，光照强度为1400Lx。

其它与实施例2相同。

实施例7

培养基为：MS基本培养基、2.0mg/L 2，4-D、2.0mg/L 6-BA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

培养条件为：温度为25±2℃，光照12h/d，光照强度为1200Lx。

其它与实施例2相同。

实施例8

培养基为：MS基本培养基、2.0mg/L 2，4-D、0.4mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

培养条件为：温度为25±2℃，光照12h/d，光照强度为1200Lx。

其它与实施例2相同。

实施例9

培养基为：MS基本培养基、2.0mg/L 2，4-D、0.5mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

培养条件为：温度为25±2℃，光照12 h/d，光照强度为1200Lx。

其它与实施例2相同。

实施例10

培养基为：MS基本培养基、2.0mg/L 2，4-D、0.6mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

培养条件为：温度为25±2℃，光照12h/d，光照强度为1200Lx。

其它与实施例2相同。

上述实施例2-10的黄精愈伤组织诱导分化结果见表1-2：

如附图2-6所示，将实施例1所得的愈伤组织转移至分化培养基上后，愈伤组织进一步膨大，颜色变为绿色。从表1-2可知，两周后分化出小芽，实施例4中茎的分化率最高，可达83.7±2.1％。

实施例7中根和茎的分化效果最佳，平均分化率为48.1±3.1％。随着培养时间的延长，茎继续生长，在基部还有大量的球状膨大，叶子展开直至长成小苗。

表1-2 黄精愈伤组织的分化结果.

分化的状态分化率(％)

实施例 AS AR AS+AR

实施例2 AS 73.6 0.0 0.0

实施例3 AS 74.0 0.0 0.0

实施例4 AS 83.7 0.0 0.0

实施例5 AS 73.8 0.0 0.0

实施例6 AS+AR 37.5 0.0 31.8

实施例7 AS+AR 34.2 0.0 48.1

实施例8 AR 0.0 43.2 0.0

实施例9 AR 0.0 64.9 0.0

实施例10 AR 0.0 48.6 0.0

AS，分化出茎；AR，分化出根。

分化率＝(愈伤组织分化的数目/接种的愈伤组织块数)×100％

三、生根诱导

实施例11

1、材料

实施例2-10中未生根的幼苗。

2、培养基

生根培养基：1/2MS基本培养基、0.3mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

1/2MS基本培养基组成为：大量元素(0.83g/L NH₄NO₃，0.95g/L KNO₃，0.22g/L CaCl₂.2H₂O，0.185g/L MgSO₄.7H₂O，0.085g/L KH₂PO₄)、微量元素(37.25mg/L Na₂EDTA，27.8mg/L FeSO₄.7H₂O，0.83mg/L KI，6.2mg/LH₃BO₃，22.3mg/L MnSO₄.4H₂O，8.6mg/L ZnSO₄.7H₂O，0.25mg/L Na₂MoO₄.2H₂O，0.025mg/L CuSO₄.5H₂O，0.025mg/L CoCl₂.6H₂O)、2mg/L苷氨酸、100mg/L肌醇、0.1mg/L盐酸硫胺素(B1)、0.5mg/L盐酸吡哚醇(B6)、0.5mg/L烟酸。

3、培养条件

在培养出黄精外植体的幼苗后，将未生根的幼苗移植至生根培养基中，在25±2℃，光照14h/d，2000Lx光照强度的条件下培养3-4周。

实施例12

1、培养基

生根培养基：1/2MS基本培养基、0.5mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

2、培养条件

温度为25±2℃，光照12h/d，光照强度为1200Lx。

其它同实施例11。

实施例13

1、培养基

生根培养基：1/2MS基本培养基、0.4mg/NAAL、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

2、培养条件

温度为25±2℃，光照116h/d，光照强度为1500Lx。

其它同实施例11。

实施例14

1、培养基

生根培养基：1/2MS基本培养基、0.5mg/L 6-BA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

2、培养条件

温度为25±2℃，光照12h/d，光照强度为1200Lx，培养2-3周。

其它同实施例11。

上述实施例11-14的生根诱导结果见表1-3：

如附图7所示，将未生根的幼苗转移至生根培养基中，两周后，幼苗分化出根，各实施例的生根诱导率见表1-3。黄精离体培养生长过程见说明书附图1-8。

表1-3 幼芽在不同条件下离体生根的情况.

实施例 SN NSR FR(％)

实施例11 20 6 30.0

实施例12 20 13 65.0

实施例13 20 9 45.0

实施例14 20 3 15.0

SN幼芽数 NSR生根幼芽数 FR生根频率

实施例15

将实施例2-14中的已生根试管苗从玻璃温室中移至自然光下培养3~4天；之后打开瓶盖，炼苗三天；然后取出幼苗，洗净琼脂，移入疏松的泥炭土∶蛭石(1∶1)中，在温度为27℃、自然光下培养。

移栽后的幼苗成活率达70-75％，培养的根状茎与野生型形态相似(如附图8所示)，而生长快于野生型，但有效成分与野生型含量相似。

四、囊丝黄精再生体系中甘露糖结合凝集素的鉴定和含量测定

实施例16

1.1 根状茎总蛋白的提取

分别取野生可药用的黄精和上述实施例制备的离体再生黄精根状茎，液氮研磨后加入2倍体积(W/V)的Tris-HCl(50mM，pH6.8，含有0.2M NaCl)，4℃静置过夜。匀浆液过滤后3000g离心15min。将上清液用滤纸(Whatman3MM)过滤，-20℃保存待用。

1.2 SDS-PAGE电泳活性分析

取野生型和离体再生型总蛋白提取液及从野生黄精中纯化的黄精凝集素II样品(纯化方法见文献^[6])进行不连续SDS-PAGE电泳^[7](Tris-HCl，缓冲液pH7.2，浓缩胶5％，分离胶10％)，银染观察电泳结果。

1.3 兔红细胞凝集活性分析

分别取上述两种提取液和黄精凝集素II 25ul(浓度相同)，在96孔微量血清稀释板上进行系列倍比稀释^[8]，再向每孔中加入25ul兔血红细胞(兔血红细胞用生理盐水洗涤3次，并用相同溶液配制成2％细胞悬液)。震荡混匀后，室温放置2h，显微镜下检查凝集结果。

2.1 SDS-PAGE电泳鉴定结果

比较野生根状茎和离体再生的根状茎总蛋白提取物的SDS解离电泳图谱(附图9)，黄精凝集素II占有较大的比例(约占20％)，为主要蛋白染色带；离体再生型和野生型根状茎总蛋白中蛋白种类和含量相似，尤其是甘露糖结合凝集素含量没有明显差别，且均为总蛋白中主要组分。

2.2 黄精凝集素凝血活性的测定结果

根状茎总蛋白提取物的凝血活性测定结果见表1-4，黄精凝集素II在0.25μg/ml时仍能凝集兔红细胞；野生黄精根状茎的总蛋白抽提液在1.95μg/ml时有活性，而离体再生型根状茎中抽提的总蛋白在1.95μg/ml时仍有微弱活性，而在3.9μg/ml时具有明显活性。野生型与离体再生型根状茎中甘露糖结合凝集素最低凝集浓度相差不到一个数量级，可以判断野生型与离体再生的黄精根状茎中甘露糖结合凝集素的含量相近，均为根状茎中的主要蛋白。与SDS-PAGE电泳结果所得出的结论一致。

表1-4 野生和离体再生型根状茎总蛋白提取物兔血凝集活性

蛋白质浓度(ug/ml)

样品 1000 500 250 125 62.5 31.25 15.6 7.8 3.9 1.95 0.98 0.49

野生型 + + + + + + + + + + - -

再生型 + + + + + + + + + +- - -

黄精凝集素+ + + + + + + + + + + +

II

+：凝血 -：未凝血

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

参考文献：

1、中药大辞典，江苏新医学院编，上海科学技术出版社，1986年，2041-2042

2、黄泰康著，《常用中药成分和药理手册》，北京：中国医药科技出版社，2000，1590-1596

3、Blazarini J，Neyts J，Schols D，Hosoya M，Van Damme E J M，Peumans W，and De Clercq E，The mannose-specific plant lectinsfrom Cymbidium hybrid and Epipactis helleborine andthe(N-Acetylgucosamine)_n-specific plant lectin from Urticadioica are potent and selective inhibitors of humanimmunodeficiency virus and cytomegalovirus replication in vitro.Antiviral Res，1992，18：191-207

4、Powell K S，Gatehouse A M R，Hilder V A，Van Damme E J M，PeumansW J，

Different antimetabolic effects of related lectins towardnymphal stages of Nilaparvata lugens，Entomol Exp Appl，1995，75：61-65

5、Peumans W J，Smeets K，Van Nerum K，Van Leuven F，Van Damme E JM，Lectin and alliinase are the predominant proteins in thenectar from leek(Allium porrum)flowers，Planta，1997，201：298-302

6、鲍锦库，曾仲奎，黄精凝集素II的纯化及部分性质研究，生物化学杂志，1996，12(2)：165-170

7、Merril C R，Washart K M，In“Gel electrophoresis of proteins：a practical approach 3^rd ed，Hames B D ed，Oxford UniversityPress，New York”，(1998)pp53-91

8、Oda Y，Minami K，Isolation and characterization of a lectin fromtulip rhizomes，Tulipa gesneriana，Eur J Biochem，1986，159：239-245

Claims

1、囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于：其步骤为：

a、囊丝黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)外植体愈伤组织的诱导；

b、将前述愈伤组织接种到分化培养基中诱导生苗；

c、将步骤b中未生根的幼苗移至生根培养基中诱导生根；

d、将步骤b和c中生根的幼苗先炼苗，然后，栽培。

2、根据权利要求1所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于：在步骤a中，所述的囊丝黄精外植体为其根、根状茎或叶。

3、根据权利要求1所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于：在步骤a中，所述的愈伤组织的诱导培养基组成为：MS基本培养、0.5-2.0mg/L6-BA、0.5-4.0mg/L2，4-D、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；培养温度为25±2℃，避光培养，培养时间为5-8周。

4、根据权利要求3所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于：所述的愈伤组织诱导培养基组成为：MS基本培养基、1.0mg/L6-BA、2.0mg/L2，4-D、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。

5、根据权利要求1所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于：在步骤b中，所述的分化培养基组成为：MS基本培养基、0.5-4.0mg/L2，4-D、0-2.0mg/L6-BA、0-0.6mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；培养温度为25±2℃，光照时间为12-16小时/天，光照强度为1200～2000Lx，培养3-4周。

6、根据权利要求5所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于：所述的分化培养基组成为：MS基本培养基、2.0mg/L2，4-D、2.0mg/L6-BA、0.3mg/LNAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；培养温度为25±2℃，光照时间为12小时/天，光照强度为1200Lx，培养2-3周。

7、根据权利要求1所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于：在步骤c中，所述的生根培养基组成为：1/2MS基本培养基、0.3-0.5mg/LNAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；培养温度为25±2℃，光照时间为12-16小时/天，光照强度为1200～2000Lx，培养3-4周。

8、根据权利要求7所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于：所述的生根培养基组成为：1/2MS基本培养基、0.5mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；培养温度为25±2℃，光照时间为12小时/天，光照强度为1200Lx，培养3-4周。

9、根据权利要求1所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于：步骤c所述的生根培养基组成为：1/2MS基本培养基、0.5mg/L6-BA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；培养温度为25±2℃，光照时间为12-16小时/天，光照强度为1200-2000Lx，培养3-4周。

10、根据权利要求1所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于：步骤d所述的炼苗和栽培包括：将生根的试管苗移至自然光下培养3-4天，打开瓶盖，炼苗2-3天，然后再取出幼苗，洗净琼脂，移入疏松的重量比为1∶1的泥炭土与蛭石中，在温度为27±1℃、自然光下培养。