CN1552307A - 山嵛菜及其制品的护肤养颜作用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及山嵛菜及其制品的护肤养颜作用以及含有它的组合物，特别是用山嵛菜为原料制成的护肤美容化妆产品，它们的制备及应用。

Description

山嵛菜及其制品的护肤养颜作用

技术领域：

本发明涉及一种护肤、美容、化妆产品，特别是用山嵛菜为原料制成的护肤美容化妆产品，它们的制备及应用。

背景技术：

山嵛菜(Eutrema wasabi)为十字花科(Cruciferae)山嵛菜属的多年生草本之半阴性植物，又名芥茉、山葵、辣根、山姜等。作为辛辣为主的调味品，已有很长的应用历史，特别在日本、东南亚诸国等有较大的应用市场。由于该植物具有较强的辛辣刺鼻的味道，在我国食用的人群甚少。发明人通过大量的调查和实验研究，并分析了该植物的主要成分，包括各种异硫氰酸盐的配糖体(水解后可产生异硫氰酸盐，是芥茉具有强烈辛辣刺激味的主要成分，如Glucosinolates(葡萄糖甙)、直链脂肪酸、生物碱、黄酮与类黄酮、氨基酸、维生素C、维生素E、各种微量元素等。本公司已于2002年申报其作为药物与保健品的专利(申请号：02125993.3)。

中草药不仅用于内服以预防和治疗多种疾病；在外用方面也有其独特的特点。中草药作为美容美发使用已有悠久的历史。药物专著《神农本草经》即记载有许多用于美容、抗衰老的天然药物如“白芷能润泽色，可做面脂”，能“去面痣”等。在“回归自然”的潮流中，以天然中草药产物或添加有中草药有效活性成分的化妆品，正越来越受到人们的青睐。此外，内服并具有美容美发作用的中草药产品近年来已逐步进入市场并逐渐被人们所采用，这也是中草药中新的开发点。

覆盖体表的皮肤，是人体重要的器官之一，具有重要的生理功能如保护、吸收、分泌、感受刺激等，也是健美的重要标志。随着年龄的增长，人体皮肤逐渐且衰老的特征日趋明显：表现为粗糙、发皱、变黑、出现老年斑等，从而逐渐失去皮肤应有的光泽。

有关人体衰老特别是皮肤衰老的研究一直是人们重点关注的问题，也是研究的热点之一。延缓衰老是人类千百年来孜孜以求的夙愿。

在众多的有关皮肤衰老的学说中，自由基学说日渐引起人们的普遍重视，也是经得起实践考验的第一个衰老理论。它最早由Harman于1956年提出，随着研究的不断深入，现已形成了比较系统的“自由基学说”。该学说认为：在正常生物代谢过程中，细胞不断产生自由基，但它们可被细胞内防御系统迅速地清除，因而不会对细胞造成大的损害。但是，许多因素如电离辐射、氧化性的环境污染物、放射性物质等，均会诱导异常自由基的大量生成；或者机体对清除自由基的能力不断减低如随着年龄的增长等，导致大量自由基的堆积，从而对机体组织细胞产生随机损伤，引起衰老。

自由基是指分子、原子或原子团还有未配对电子的一类基团。生物体内常见的自由基有：超氧阴离子(·O₂ ^-)、羟基自由基(·OH^-)等，可对包括蛋白质、核酸、糖、脂类等物质产生广泛的损害作用。因此，若能增加自由基的清除或减少机体自由基的产生，必然对机体具有保护作用，延缓包括皮肤在内的机体的衰老。

本发明人对山嵛菜的有关护肤美容成分及其功效进行了大量研究，发现山嵛菜具有很强的抗氧化能力、灭活超氧化物能力以及抑制黑色素合成能力，包括山嵛菜的根须、块茎、叶、柄等部分。也在随机选择的人群中试用证明，山嵛菜及其提取成分有明显的嫩肤增白作用。

发明内容：

本发明提供山嵛菜及其制品的护肤美容保健的新用途，本发明所述的山嵛菜指，使用野生的或培植的，新鲜的或物理方法(如冷冻、低温干燥等)存放的山嵛菜的块茎、柄、叶的任何部位或它们任意组合或它们合在一起。

所述山嵛菜的制品是指对植物山嵛菜的块茎、根、须、柄、叶的任何部位经过物理或化学方法进行处理制成的中间产品或最终产品，如山嵛菜的块茎、根、须、柄、叶任何部位经过切、削、压榨、粉碎、干燥、冷冻、煅烧、研磨、过筛等方法得到的产品，或通过渗漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、层析等方法得到的产品、用上述方法得到的产品可以作为具有生物活性的物质，进一步制成任何一种可用于人类应用的产品，如制成药品、食品、食品添加剂、保健食品、化妆品、护肤品、营养品、美容保健品等，这些产品可以通过人类可接受任何方式使用，如口服、注射、外敷、涂抹、粘贴、口含、吸入、直肠内给药、阴道内给药等。

上述具有生物活性的物质可经过提取得到，活性物质可以是浸膏形式的物质，可以是干浸膏形式也可以是流浸膏形式，根据制剂的不同需要，制成不同的浓度。提取时使用合适的溶剂，这些溶剂可选自，水、乙醇、甲醇、丙醇、丙酮、丁酮、乙酸乙酯等。

以山嵛菜经过加工得到的物质为活性物质，通过制剂学常规的技术，制成任何一种适合应用的组合物，形式通常为一种单位剂量，如：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、软膏剂、硬膏剂、油膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂、擦剂、蜜剂、乳剂、奶剂、液剂、油剂、粉剂、面膜、凝胶剂、肥皂、香皂、药皂、透明皂、复合皂、皮肤清洁剂、洗面奶、泡沫浴剂、牙膏、含漱剂、沐浴液、洗发液等。

本发明的山嵛菜组合物在制成制剂时可以加入与生理上可接受的载体(辅料)。所述生理上可接受的载体包括：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

本发明的组合物，如果是口服，含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、湿润剂、防腐剂、助溶剂。

适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。

可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性成分分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。

口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。

对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将炎琥宁溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。

用基本相同的方式制备胃肠外悬浮液，除了是将活性化合物悬浮在载体而不是将其溶解，而且在将其悬浮于无菌载体之前，用环氧乙烷对其进行消毒。表面活性剂或湿润剂可包括在此组合物中，以利于这种活性化合物的均匀分布。

本发明优选的是含有山嵛菜制品的护肤、美容、化妆品组合物，该组合物含有在美容配方中通常生理上可以接受的载体。

除了水和生理上适宜的溶剂外，其中还可以含有一般的保养组分、油蜂蜡、润滑脂、回收脂、增稠剂、乳化剂、适宜作为阳光保护过滤的物质和香料。根据不同的要求，该组分可以是水溶液或醇溶液作为凝胶、油、水/油。或油/水乳液或气溶胶等形式。在一般美容品的配方中均有说明有关适宜的形式。在最简单的情况下水或者醇水液可做为含水载体。优选水性载体含有另外的助剂，这些助剂适合本发明护肤品适应于各种不同的应用目的。

含有例如表面活性剂是为了提高润湿性能，为了乳化或溶解非水溶性的助剂或者是为了使产品可发泡。水溶性增稠剂可以赋予产品更多的“形体”或者改善在皮肤上的粘结性，含有乳化的油相可以使产品具有光滑皮肤和加脂的作用。

水性载体优选含有表面活性剂，水溶性增稠剂，乳化的油相组分或以上的混合物。

首先适合的表面活性剂是水溶解性好的阴离水型，两性离子型，两性型或非离子型表面活性物质。这些表面活性剂优选的特征是碳原子数为10-16的线性烷基或酰基基团并且一端有导致水溶性的基因，例如羧酸根，硫酸根或聚氧乙基或多元醇基因。优选适合的是非离子型表面活性剂，例如脂肪醇聚乙二醇醚，脂肪酸单甘油酯乙氧基化物，山梨醇脂肪酸酯乙氧基化物，烷基配糖物和甲基糖物和甲基葡糖果苷脂肪酸酯乙氧基化物。除这些乳化剂之外，可以含有亲油性共乳化剂，例如C₁₂-C₁₈脂肪醇和C₁₂-C₁₈脂肪酸部分甘油酯。

天然的，生物技术的和合成的优选非离子型水胶体适合作水溶性增稠剂。天然增稠剂有例如植物胶，如琼脂，淀粉，明胶，瓜耳胶和它们的衍生物以及纤维素衍生物，由生物技术得到的水胶体有例如黄原胶和琥珀酰聚糖，合成的水溶性增稠剂有例如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。

乳化的油相组分可以包括所有适于生产化妆乳液或膏剂的油的脂和蜡，它们不自无机物、动物和植物。

除了上述载体组分，可以含有所有常用的用于生产化妆护肤品或皮肤治疗外用药的助剂。这些另外的助剂有例如低级醇如乙醇或异丙醇，二醇和多元醇例如乙二醇，丙二醇，二亚丙基二醇，甘油，二或聚甘油，山梨醇，脲，葡萄糖，盐如硫酸镁，抗氧剂，络合剂，防腐剂，香料、颜料，遮光剂和化妆品活性物质，例如滤光剂，治疗物质例如泛醇或泛酸(盐)，维生素或植物提取物。

如同上面所说明的，本发明的美容组合物可以具有十分不同的应用形式。但是优选以润面露，防护胶或水包油乳液或膏剂形式存在。这些制剂也适合在日光浴之后使用，即晒后制剂，以便重新给予受刺激和烤红的皮肤必备的温度以及促进受刺激皮肤加快舒适下来和迅速的治愈。本发明美容组合物另一表现是长有粉刺皮肤的清洗和防护。

本发明的组合物使用方法包括，将山嵛菜的块茎、根、须、柄、叶等部位经过提取得到提取液，在其中加入适量防腐剂，可直接涂于表皮或按适当比例加入制作化妆品所允许的其它材料而制成化妆品，这些化妆品优选的形式如，膏剂、霜剂、蜜剂、乳剂、奶剂、液剂、油剂、粉类、面膜等或按适当比例加入制作皂类及浴用化学品所允许的其它材料而制成皂类及浴用化学品如香皂、洗面奶等或按适当比例加入口腔清洁剂所允许的其它材料而制成口腔清洁剂如牙膏、含漱剂等。

本发明的组合物可用于护肤、增白、美容、化妆、防晒、祛雀斑、祛老年斑、除粉刺、除螨虫、祛皱、滋润皮肤。

本发明的组合物在使用时根据人的情况确定用法用量，可每日服1-4次，每次1-20剂。

本发明的组合物，以山嵛菜制成的活性物质为活性成分，其在最终的制剂产品中所占重量百分比可以是0.1-99.9％或1-99％，优选的是1-50％，更优选的是5-30％，其余为生理上可接受的载体。

本发明的组合物还可包括至少与一种其他活性物质，其他活性物质选自至少一种，蛋白质、氨基酸、维生素、其他植物提取物、抗菌素、抗真菌物质、抗霉菌物质、抗螨虫物质、抗氧化物质。

本发明还包括分离提取山嵛菜各部分的活性物质的方法，该活性物质可通过水提、醇提或水醇混合提等方法制备。

本发明的山嵛菜原料、活性物质或它们的制品可通过如下方法制备：

(一)口服制剂：将收集到的鲜山嵛菜块茎、柄、叶部整理分级，清洗。将其切成小块，冷冻干燥或低温烘干(50℃)，将干燥原料进行粉碎，粉碎后过筛，加入药物可接受的载体混匀，装胶囊或制粒压片，或制成其他药物上的制剂。

(二)外用制剂：将收集到的鲜山嵛菜块茎、柄、叶部整理分级，清洗。将其切成小块，可直接高速匀浆破碎细胞或者冷冻干燥或低温烘干(50℃)，将干燥原料进行粉碎，粉碎后过筛，加适量去离子水充分浸泡后，高速匀浆破碎细胞，加适量防腐剂后用于涂抹皮肤。

(三)有效成分提取：包括水提、醇提和水醇混合物提取。

1.水提：将收集到的鲜山嵛菜块茎、柄、叶部整理分级，清洗。将其切成小块，可直接高速匀浆破碎细胞或者冷冻干燥或低温烘干(50℃)，将干燥原料进行粉碎，粉碎后过筛，加适量去离子水充分浸泡后，高速匀浆破碎细胞，离心或过滤收集上清液，调节水溶液至酸性，离心或过滤除去水不溶物。余下水溶液用有机溶剂萃取，蒸去萃取液中的有机溶剂，加入酸性水溶液溶解残留物，放置过夜。离心或过滤除去水不溶物。余下水溶液调节pH至中性，即为山嵛菜有效成分水提取液。分析该提取液的总抗氧化能力(单位)、灭活超氧化物能力(IC₅₀，mg/ml)以及抑制酪氨酸酶的能力(IC₅₀，mg/ml)分别为块茎(14.10、6.8、0.35)、柄(13.40、7.1、2.2)、叶部(65.30、0.6、8.8)。表明，通过上述水提取过程，可提取出山嵛菜有关的抗氧化、灭活超氧化物以及抑制酪氨酸酶的成分(有效成分)，见实施例5表2、实施例6表4和实施例7表6。经初步分析表明，水提液中含异硫氰酸盐、生物碱、维生素C等主要成分。

2.醇提：将收集到的鲜山嵛菜块茎、柄、叶部整理分级，清洗。将其切成小块，冷冻干燥或低温(50℃)烘干，将干燥原料进行粉碎，粉碎后过筛或者直接用新鲜山嵛菜，用适量甲醇或乙醇进行浸提或索氏提取器提取，离心或过滤收集上清液，减压浓缩，加入酸性水溶液溶解，离心或过滤除去水不溶物。余下水溶液用有机溶剂萃取，蒸去萃取液中的有机溶剂，加入酸性水溶液溶解残留物，放置过夜。离心或过滤除去水不溶物。余下水溶液调节pH至中性，即为山嵛菜有效成分醇提取液。分析该提取液的总抗氧化能力(单位)、灭活超氧化物能力(IC₅₀，mg/ml)以及抑制酪氨酸酶的能力(IC₅₀，mg/ml)分别为块茎(10.40、5.4、0.41)、柄(10.50、7.4、3.1)、叶部(65.60、0.6、14.6)。表明，通过醇提取过程，也能提取出山嵛菜有关的抗氧化、灭活超氧化物以及抑制酪氨酸酶的成分(有效成分)，见实施例5表2、实施例6表4和实施例7表6。经初步分析表明，醇提液中含异硫氰酸盐、生物碱、黄酮与异黄酮等主要成分。

3.水醇混合物提取：将收集到的鲜山嵛菜块茎、柄、叶部整理分级，清洗。将其切成小块，冷冻干燥或低温(50℃)烘干，将干燥原料进行粉碎，粉碎后过筛或者直接用新鲜山嵛菜，用适量水醇混合液(按适当比例)进行浸提或索氏提取器提取，离心或过滤收集上清液，减压浓缩，加入酸性水溶液溶解，离心或过滤除去水不溶物。余下水溶液用有机溶剂萃取，蒸去萃取液中的有机溶剂，加入酸性水溶液溶解残留物，放置过夜。离心或过滤除去水不溶物。余下水溶液调节pH至中性，即为山嵛菜有效成分水醇混合提取液。分析该提取液的总抗氧化能力(单位)、灭活超氧化物能力(IC₅₀，mg/ml)以及抑制酪氨酸酶的能力(IC₅₀，mg/ml)分别为块茎(12.62、5.9、0.32)、柄(11.40、6.8、2.5)、叶部(68.40、0.7、10.2)。表明：抗氧化物质的提取，醇提取优于水提取；灭活超氧化物物质的提取，醇提取与水提取类似；而抑制酪氨酸酶物质的提取，水提取优于醇提取。见实施例5表2、实施例6表4和实施例7表6。经初步分析表明，水醇混合提液中含异硫氰酸盐、生物碱、黄酮与异黄酮、维生素E等主要成分。

本发明的山嵛菜制品具有如下的生理活性：总抗氧化能力：根据山嵛菜的块茎(包括根须)、柄、叶有效成分提取物，能将

          Fe³⁺还原为Fe²⁺的能力以确定其总抗氧化能力。检测结果表明，每

          毫克新鲜山嵛菜的块茎、柄、叶(水提取)总抗氧化能力(用单

          位表示，单位的定义为在37℃时，1分钟每毫克样品，能使反应

          体系的吸光度(OD)值每增加0.01时，为1个抗氧化能力单位)

          分别为3.76、3.24、7.96(见实施例5表2)。灭活超氧化物能力：利用黄嘌呤氧化酶在氧化次黄嘌呤的过程中会产生大量超氧

          阴离子，而山嵛菜的块茎、柄、叶部有效成分提取物可灭活该超

          氧阴离子，残余超氧阴离子的量即反映了山嵛菜的各部分灭活超

          氧化物的能力。结果表明，新鲜山嵛菜的块茎、柄、叶部(水提

          取)灭活超氧化物的IC₅₀值(50％抑制率时的浓度)分别为

          12.6mg/ml、13.5mg/ml、6.8mg/ml(见实施例6表4)。抑制黑色素合成能力：酪氨酸酶是机体黑色素合成过程中的限速酶，该酶活性的

          高低直接影响机体合成黑色素的多少。山嵛菜的块茎、柄、叶部

          有效成分提取物可抑制酪氨酸酶的活性。结果表明，新鲜山嵛菜

          的块茎、柄、叶部(水提取)抑制酪氨酸酶的IC₅₀值(50％抑制率

          时的浓度)分别为1.7mg/ml、14.3mg/ml、35.3mg/ml(见实施例

          7表6)。

本发明所制成的口服片剂或胶囊以及外用的化妆品，通过随机人群的试用证明，有明确的嫩肤、增白、养颜作用。本发明的优点是：制备工艺简单，属纯天然制品，通过对皮肤的调理、营养和保护，增强皮肤自身的生理功能，改善皮肤的通透性、吸收性和免疫力，抵御紫外线、射线、风沙、冷热、粉尘对皮肤的刺激，从而延缓皮肤的衰老，从根本上实现护肤美容与皮肤保健的目的，长期使用无任何副作用和刺激性，集抗皱增白、保湿、祛斑、美容、防晒、延缓衰老、防治皮肤病等多种功效于一体。

具体实施方式：

实施例1：山嵛菜胶囊剂制备

它包括下列步骤：

(1)将收集到的鲜山嵛菜块茎、柄、叶部约20kg整理分级，清洗。

(2)用自动切药机将其切成长约2厘米的小块。放入II型冻干机中，置-55℃冷冻干燥24h后，用快速水份测定仪测定其水份为0.78％(要求其含水量在1％以下)且为浅绿色后取出，收得干燥品3.6kg(要求干燥品收率为湿品的16％--18％)。

(3)将干燥原料立即进行粉碎，粉碎后过200目筛。

(4)在获得的细粉中加入约450g乳糖、约450g淀粉、稀酒精(酒精与水的比例为1∶1，并溶解尼泊金乙酯3.6g)适量，用等量递加原则混合均匀，过24目筛制粒。

(5)于50℃干燥后整粒，用等量递加原则混合均匀。装填胶囊，平均每粒重0.3g，清洁胶囊外面后，用硅油打光。按每个PVC瓶60粒包装得成品。

实施例2：新鲜山嵛菜的冻干技术

(1)将鲜山嵛菜分级整理后淋洗干净，切成长约2厘米的小块。

(2)将小块置于II型冻干机中，于-55℃冻干。

(3)测定其水份含量在1％以下时，取出。

(4)粉碎，过200目筛。

实施例3：新鲜山嵛菜的低温烘干技术

(1)鲜山嵛菜分级整理后淋洗干净，切成长约2厘米的小块。

(2)将小块50℃烘干。

(3)测定其水份含量在5％以下时，取出。

(4)粉碎，过200目筛。

实施例4：山嵛菜有效成分提取1——水提取

(1)称取上述山嵛菜冻干或烘干品粉末(块茎、柄、叶部)50克，按1∶7加入去离子水。

(2)室温浸泡30分钟。

(3)高速(10,000～12,000rpm)匀浆3～5分钟。

(4)过滤或离心(5,000rpm、10分钟)。

(5)水溶液用盐酸调pH至3，室温放置过夜。

(6)过滤或离心(5,000rpm、10分钟)除去水不溶物。

(7)用等体积乙酸乙酯萃取至萃取液无色。

(8)合并萃取液，减压浓缩至干。

(9)加入25mM磷酸盐缓冲液100ml(pH 3)，室温放置过夜。

(10)过滤或离心(5,000rpm、10分钟)除去水不溶物。

(11)用NaOH调节pH至7.4。

  山嵛菜有效成分提取2——醇提取或水醇混合液提取

(1)取上述山嵛菜冻干或烘干品粉末(块茎、柄、叶部)50克，按1∶7加入乙醇或50％乙醇溶液。

(2)50℃水浴过夜(浸提)或索氏提取器提取7～8小时。

(3)(浸提)过滤或离心(5,000rpm、10分钟)。弃去残渣。

(4)溶液于60℃减压浓缩呈浸膏。

(5)加入25mM磷酸盐缓冲液200ml(pH 3)，室温放置过夜。

(6)加热至50℃过滤或离心(5,000rpm、10分钟)除去水不溶物。

(7)用等体积乙酸乙酯萃取至萃取液无色。

(8)合并萃取液，减压浓缩至干。

(9)加入25mM磷酸盐缓冲液100ml(pH 3)，室温放置过夜。

(10)加热至50℃过滤或离心(5,000rpm、10分钟)除去水不溶物。

(11)用NaOH调节pH至7.4。

实施例5：山嵛菜提取液总抗氧化物质测定

原理：样品中的抗氧化物质，可将Fe³⁺还原为Fe²⁺，后者可与菲啉物质形成稳固

      的络合物，通过比色而测定。

方法：采用北京邦定泰克生物技术有限公司的抗氧化能力检测试剂盒。

单位规定：在37℃时，1分钟每毫克样品(原药)，能使反应体系的吸光度(OD)值每增加0.01时，为1个抗氧化能力单位。

按下表(表1)操作：

               表1：总抗氧化能力测定

                      空白管(ml)                测定管(ml)

样品                       -                         0.1

 A液                      3.5                        3.5

                充分混匀，37℃水浴30分钟

4号试剂                   0.2                        0.2

样品                      0.1                         -

充分混匀，放置10分钟，用空白管调零，520nm处测定OD值。

计算：

样品总抗氧化能力(单位)＝测定管OD值×126.6测定结果如下(表2)：

         表2：山嵛菜总抗氧化能力检测结果(单位/毫克原药)

  样品              水提取          醇提       水醇混合提取

叶(新鲜，)           7.96           7.56           8.82

叶(冻干)             65.30          65.60          68.40

柄(新鲜)             3.24           3.08           2.96

柄(冻干)             13.40          10.5           11.40

块茎(新鲜)           3.76           3.24           3.31

块茎(冻干)           14.10          10.40          12.62

实施例6：山嵛菜提取液清除超氧化物能力测定

原理：黄嘌呤氧化酶在氧化次黄嘌呤的过程中，会产生超氧阴离子(O₂ ^-·)，后者

      可将氮蓝四唑(NBT)还原为非水溶性的蓝黑色物质，再通过二氧六环萃

      取。对二氧六环萃取物溶液在580nm处比色，测定被还原的氮蓝四唑，以

      反映超氧阴离子的量。

方法：按下表(表3)操作：

                   表3：山萸菜灭活超氧化物能力检测

    (单位：ml)             标准管       测定管     测定对照管

  3.5mM次黄嘌呤              0.5          0.5          0.5

    样    品                  -           0.5          0.5

磷酸盐缓冲液(pH 6.86)        1.5          0.5          0.7

黄嘌呤氧化酶(0.1单位         0.2          0.2           -

        /ml)

                         混匀，37℃保温10分钟

NBT(0.75g/L)                 1.0          1.0          1.0

               混匀，37℃保温45分钟

1M HCl            1.0             1.0            1.0

    混匀以终止反应，3,500rpm离心15min，弃上清

                        ↓

        生理盐水洗涤沉淀1次，离心条件同上

二氧六环          1.0             1.0             1.0

                 85℃保温15分钟

                       ↓

         3,500rpm离心15min，上清用于比色

用二氧六环调零，分别读取各管光密度值(波长580nm)。

计算：清除率＝[1-(测定管-测定对照管)/标准管]×100％

分别求出各部分的IC₅₀值(50％抑制率时的浓度)，结果(表4)如下：

          表4：山嵛菜清除超氧化物能力IC₅₀[mg(原药)/ml]

样品              水提取          醇提        水醇混合提取

叶(新鲜，)          6.8            6.6             6.5

叶(冻干)            0.6            0.6             0.7

柄(新鲜)            12.6           13.5            14.2

柄(冻干)            7.1            7.4             6.8

块茎(新鲜)          13.5           13.2            12.8

块茎(冻干)          6.8            5.4             5.9

实施例7：山嵛菜提取液抑制酪氨酸酶能力测定

原理：酪氨酸酶可将L-酪氨酸转变为黑色素，后者在475nm处有明显的光吸收。

操作：按下表(表5)

               表5山嵛菜提取液抑制酪氨酸酶能力测定

                               T₁     T₂     C₁     C₂

0.05％L-酪氨酸溶液(ml)         1.0     1.0     1.0     1.0

样品(ml)                        -       -      1.0     1.0

磷酸盐缓冲液(ml)               2.0     2.0     1.0     1.0

                 混匀，37℃保温10min

酪氨酸酶(0.1单位/ml)           0.03     -      0.03      -

                       混匀，37℃保温8min

                               ↓

                    迅速置于冰水中冷却15min

在475nm处测定光吸收值。

计算：抑制率＝[1-(C₁-C₂)/(T₁-T₂)]×100％

分别求出各部分的IC₅₀值(50％抑制率时的浓度)，结果(表6)如下：

          表6：山嵛菜抑制酪氨酸酶的IC₅₀[mg(原药)/ml]

样品              水提取          醇提         水醇混合提取

叶(新鲜，)         35.3           52.7              44.5

叶(冻干)           8.8            14.6              10.2

柄(新鲜)           14.3           18.8              16.2

柄(冻干)           2.2            3.1               2.5

块茎(新鲜)         1.7            1.7               1.6

块茎(冻干)         0.35           0.41              0.32

实施例8：山嵛菜提取液剥离型面膜制备(1)

按下属配方配制：

PVP(聚乙烯吡咯烷酮，K30)             15.0g

无水乙醇                             10.0g

甘油                                 5.0g

山嵛菜提取液(根∶茎∶叶＝1∶3∶2)      70ml(相当于原药10g)

防腐剂、香精                           适量

用无水乙醇充分溶解PVP，再加入甘油、山嵛菜提取液、防腐剂、香精，充分混匀，静置过夜后，装瓶。密闭保存。

实施例9：山嵛菜提取液剥离型面膜制备(2)

PVP(聚乙烯吡咯烷酮，K30)                10.0g

无水乙醇                                15.0g

海藻酸钠                                3.0g

甘油                                    5.0g

山嵛菜提取液(根∶茎∶叶＝1∶3∶2)       70ml(相当于原药10g)

防腐剂、香精                            适量

先将PVP用乙醇充分溶解，再加到有防腐剂、海藻酸钠的山嵛菜提取液中，加热至50℃使之充分混匀，静置过夜后，加入剩余组份，装瓶。密闭保存。

实施例10：山嵛菜提取液药皂制备

皂料                                     100

山嵛菜提取液(根∶茎∶叶＝1∶3∶2)        5(相当于原药0.5g)

色素                                     适量

防腐剂、香精                             适量

实施例11：山嵛菜提取液含漱液制备

山嵛菜提取液(根∶茎∶叶＝1∶3∶2)        1(相当于原药0.1g)

乙醇                                     5

柠檬酸                                   0.05

甘油                                     7

防腐剂、香精                             适量

水                                       87

实施例12：山嵛菜护肤美容作用在随机人群中的应用

实例1：口服山嵛菜胶囊+外用面膜

某女，35岁，商场营业员，已婚，有生育史。

自述食欲不振，消瘦、面部色素沉着伴痤疮。

患者生育后第2年出现胃部不适、食欲不振、身体消瘦、面部常出现痤疮并伴色素沉着，临床检查无明显器质性病理改变。曾长期服用中药和面部皮肤护理，效果均不佳。自开始服用山嵛菜胶囊半月后，发现胃部不适症状明显好转，同时食欲大增，体重增加，面部皮肤皱纹明显减少，色素沉着明显消退。在服前同时加用外敷山嵛菜面膜做皮肤护理，每周2～3次，坚持半月，现面部皮肤明显变白，面部皱纹消散，常出现的面部痤疮在面部护理期间基本未曾出现，身体状况明显好转，生活充满自信。

实例2：口服山嵛菜胶囊

某女，30岁，公交公司售票员，已婚，有生育史。

自述大便结燥，面部蝴蝶斑5年。

患者自妊娠起开始出现大便结燥，排便困难，同时面部出现小片状蝴蝶样斑块。由于有身孕，不便服用其它药物。生产后经医院诊断“便秘，混合痔”，面部皮肤粗躁、蝴蝶斑有所加重，曾服用多种“润肠通便”药物，效果不佳，面部皮肤外擦多种“祛斑霜”效果不理想。

自服用山嵛菜胶囊，每日2次，每次4粒，服用后大便秘结情况明显好转，每日排便1次，大便带血情况逐日好转，坚持服用2月，现排便基本正常，食欲增强，面部蝴蝶斑已基本消散，面部皮肤变白、细腻。

实例3：外用面膜

某女，40岁，公司职员，已婚，有生育史。

自述皮肤色素沉着、粗躁2年余。

患者2年前自觉皮肤明显粗躁、色素沉着、皱纹增多。曾反复使用多种美容护肤品及坚持去美容院做皮肤护理，但疗效均不理想。

自患者用山嵛菜面膜做皮肤护理，每周1次，每次护理后皮肤感觉清爽，坚持1月后，皮肤色素沉着明显好转，皮肤变白、细腻，皱纹明显减少，目前仍坚持使用，无明显不良反应。

Claims (10)

1.一种护肤、美容、化妆品组合物，其特征在于，该组合物是以山嵛菜为原料制成的。

2.权利要求1的组合物，其中所述山嵛菜为山嵛菜的的根须、块茎、叶、柄的任何一个部位或它们任意组合或它们结合在一起。

3.权利要求1的组合物，由1-99％的以山嵛菜为原料制成的活性物质或1-99％的以山嵛菜为原料制成的活性物质和一种其他活性物质结合，和1-99％的护肤、美容、化妆品可接受的载体组成。

4.权利要求3的组合物，其中其他活性物质选自至少一种，蛋白质、氨基酸、维生素、其他植物提取物、抗菌素、抗真菌物质、抗霉菌物质、抗螨虫物质、抗氧化物质。

5.权利要求3的组合物，其中以山嵛菜为原料制成的活性物质，是山嵛菜的块茎、根、须、柄、叶任何部位或它们任意组合或它们结合在一起，经过至少一种以下方法得到的产品，这些方法选自，切、削、压榨、粉碎、干燥、冷冻、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、回流、水提、醇提、酯提、酮提、层析。

6.权利要求3的组合物，是以单位剂量形式存在的，这些单位剂量形式选自，片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、软膏剂、硬膏剂、油膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂、擦剂、蜜剂、乳剂、奶剂、液剂、油剂、粉剂、面膜、凝胶剂、肥皂、香皂、药皂、透明皂、复合皂、皮肤清洁剂、洗面奶、泡沫浴剂、牙膏、含漱剂、沐浴液、洗发液。

7.权利要求1-6的组合物的用途，其特征在于，该组合物可用于护肤、增白、美容、化妆、防晒、祛雀斑、祛老年斑、除粉刺、除螨虫、祛皱、滋润皮肽。

8.权利要求1-6的组合物的制备方法，其特征在于，将活性物质与护肤、美容、化妆品可接受的载体混合，所述活性物质是经过冷冻干燥、低温烘干、水提、醇提或水醇混合液提取的方法制备的。

9.权利要求8的制备方法，其特征在于，活性物质的制备包括将山嵛菜根、茎、叶、柄，清洗，切成小块，冷冻干燥、低温烘干，或水提、醇提、水醇混合液提取、干燥物粉碎或提取液浓缩、干燥、粉碎的步骤。

10.权利要求9的制备方法，其特征在于，其中的水提步骤如下：将收集到的鲜山嵛菜块茎、柄、叶部整理分级，清洗。将其切成小块，可直接高速匀浆破碎细胞或者冷冻干燥或低温烘干，将干燥原料进行粉碎，粉碎后过筛，加适量去离子水充分浸泡后，高速匀浆破碎细胞，离心或过滤收集上清液，调节水溶液至酸性，离心或过滤除去水不溶物。余下水溶液用有机溶剂萃取，蒸去萃取液中的有机溶剂，加入酸性水溶液溶解残留物，放置过夜。离心或过滤除去水不溶物。余下水溶液调节pH至中性，即为山嵛菜有效成分水提取液；其中的醇提步骤如下：将收集到的鲜山嵛菜块茎、柄、叶部整理分级，清洗。将其切成小块，冷冻干燥或低温烘干，将干燥原料进行粉碎，粉碎后过筛或者直接用新鲜山嵛菜，用适量甲醇或乙醇进行浸提或索氏提取器提取，离心或过滤收集上清液，减压浓缩，加入酸性水溶液溶解，离心或过滤除去水不溶物。余下水溶液用有机溶剂萃取，蒸去萃取液中的有机溶剂，加入酸性水溶液溶解残留物，放置过夜。离心或过滤除去水不溶物。余下水溶液调节pH至中性，即为山嵛菜有效成分醇提取液；其中的水醇混合物提取步骤如下：将收集到的鲜山嵛菜块茎、柄、叶部整理分级，清洗。将其切成小块，冷冻干燥或低温烘干，将干燥原料进行粉碎，粉碎后过筛或者直接用新鲜山嵛菜，用适量水醇混合液进行浸提或索氏提取器提取，离心或过滤收集上清液，减压浓缩，加入酸性水溶液溶解，离心或过滤除去水不溶物。余下水溶液用有机溶剂萃取，蒸去萃取液中的有机溶剂，加入酸性水溶液溶解残留物，放置过夜。离心或过滤除去水不溶物。余下水溶液调节pH至中性，即为山嵛菜有效成分水醇混合提取液；