CN1539504A - 一种戊型肝炎病毒嵌合基因疫苗 - Google Patents
一种戊型肝炎病毒嵌合基因疫苗 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1539504A CN1539504A CNA031168620A CN03116862A CN1539504A CN 1539504 A CN1539504 A CN 1539504A CN A031168620 A CNA031168620 A CN A031168620A CN 03116862 A CN03116862 A CN 03116862A CN 1539504 A CN1539504 A CN 1539504A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gene
- hev
- orf2
- orf23
- hepatitis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及生物医药技术领域,是一种预防戊型肝炎病毒感染的嵌合基因疫苗。它是一种含戊型肝炎病毒开放读码框2(ORF2)和开放读码框3(ORF3)嵌合基因的真核表达重组质粒。该基因疫苗可诱导机体产生特异性细胞和体液免疫,用于预防戊型病毒性肝炎。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域,是一种预防戊型肝炎病毒感染的嵌合基因疫苗。
背景技术
戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(HEV)引起的病毒性肝炎,是发展中国家较常见的传染病,我国为高发区,人群感染率达17.2%,且呈上升趋势。该病流行广泛,病人发病症状重,病死率高(平均为1%-2%,最高可达10%-20%),病情凶险,主要威胁青壮年,常引起爆发或流行,给社会带来恐慌和经济损失。1986年至1988年我国新疆维吾尔族自治区南部,曾发生迄今为止最大的HEV流行,历时20个月,共发病119280人,72%为15~44岁青壮年,总罹患率为2.96%,病死率0.59%,孕妇平均病死率13.46%,晚期妊娠病死率高达20.96%,流行原因主要为水源及食物污染。此外,该病在我国急性散发性病毒性肝炎中也占有较高的比例,平均约为8.6%,病死率为2.5%。随着甲型肝炎疫苗的使用,甲型肝炎的发病率逐年大幅度下降,但与甲型肝炎病毒具有相同的粪-口传播途径的戊型肝炎病毒发病率却不断攀升,控制该病已刻不容缓。为此全世界科学家进行了艰苦的努力。
研制有效疫苗是控制HEV传染的关键。由于戊型肝炎病毒组织培养困难,难以研制减毒或灭活疫苗。因此,基因疫苗和多肽疫苗的研制成为研究的热点。基因疫苗是一种新型疫苗,具有以下优点:能诱导T、B淋巴细胞参与机体的免疫应答,并兼有多肽疫苗和合成肽疫苗的特性;兼有重组亚单位疫苗的安全性和减毒活疫苗诱导全面免疫应答的高效性;一次接种可获长期免疫力;制备简单,成本低,运输储存方便,临床应用安全有效。
抗原位点选择是基因疫苗研制能否成功的关键。国内外最新研究结果表明,HEV具有3个开放读码框(ORF),ORF1位于非结构区,编码非结构蛋白;ORF2和ORF3位于结构区,前者编码结构蛋白或核壳蛋白,含有7个抗原表位,具有与HEV颗粒抗原相似的抗原性,后者介于ORF1和ORF2之间,含有4个抗原表位。根据以上研究成果,国内外对HEV进行了大量研究,证明HEV的抗原表位主要在ORF2和ORF3中,并进行了ORF2和ORF3的表达及抗原性研究。但国内外尚未开展HEV嵌合基因疫苗的研制。
发明内容
本发明的目的是研制一种安全、高效的戊型肝炎病毒(HEV)嵌合基因疫苗(见附图1),为预防控制戊型肝炎流行提供最有效的措施。
本发明以戊型肝炎病人粪便为标本,按常规方法提取病毒RNA,用引物1和2,对HEV ORF2基因进行RT-PCR扩增,用引物2和4对HEV ORF3基因进行RT-PCR扩增。上述PCR产物经过纯化后,用BamHI/EcoRI酶切后将ORF2基因片断插入到pET28a+质粒中,获得pET28-ORF2(见附图2),再用EcoRI/XhoI酶切后将ORF3基因片段插入到pET28-ORF2质粒中,获得嵌合重组质粒pET28-ORF23(见附图3)。将重组质粒pET28-ORF23转化E.coli BL21(DE3)菌株,用IPTG进行诱导,用His-纯化体系纯化目的蛋白,获得融合蛋白ORF23。该融合蛋白可作为抗原用于HEV诊断试剂盒的制备,也可用于制备预防戊型病毒性肝炎的多肽疫苗。
本发明以嵌合重组质粒pET28-ORF23为模板,用引物T1和T2进行PCR扩增。上述PCR产物经过纯化后,用Kpn I/Xba I酶切后将ORF23基因片断插入到酵母表达重组质粒pPICZαA中,获得嵌合重组质粒pPICZαA-ORF23(见附图4)。嵌合重组质粒pPICZαA-ORF23用Sac I将质粒载体线性化,通过电转移将线性化后的质粒DNA转入酵母细胞中,用纯甲醇进行诱导,用His-纯化体系纯化目的蛋白,获得融合蛋白ORF23。该融合蛋白可作为抗原用于HEV诊断试剂盒的制备,也可用于制备预防戊型病毒性肝炎的多肽疫苗。
本发明用BamHI/XhoI双酶解,从重组质粒pET28-ORF23中切下HEVORF23基因片段,再插入到pcDNA3质粒中,获得重组质粒pcDNA3-ORF23(见附图5)。重组质粒作为基因疫苗免疫Blab/C小鼠,免疫途径为肌肉注射,注射剂量为100ug和200ug,隔3周1次,共注射2次。每次注射后2周取小鼠血清检测抗体,末次注射后检测小鼠的T细胞增殖反应。结果发现经2次免疫后,小鼠均产生HEV特异性抗体,并产生明显的T细胞增殖反应。说明该重组质粒可作为HEV嵌合基因疫苗。
戊型肝炎病毒(HEV)嵌合基因疫苗,它含有编码HEV开放读码框2蛋白(ORF2)基因,它能够指导产生HEV蛋白质或与HEV蛋白质基本同源的蛋白质。该核酸序列被称为HEV ORF2示于下面:
HEV ORF2:
CAGCTGTTCT ACTCTCGTCC CGTCGTCTCA GCCAATGGCG AGCCGACTGT 50
TAAGCTTTAT ACATCTGTAG AGAATGCTCA GCAGGATAAG GGTATTGCAA 100
TCCCGCATGA CATCGACCTC GGGGAGTCTC GTGTAGTTAT TCAGGATTAT 150
GACAACCAAC ATGAGCAGGA CCGACCGACA CCTTCCCCAG CCCCATCGCG 200
CCCTTTTTCT GTCCTCCGAG CTAATGATGT GCTTTGGCTT TCTTTCACCG 250
CTGCCGAGTA TGACCAGTCC ACTTACGGCT CTTCGACCGG CCCAGTCTAT 300
GTCTCTGACT CTGTGACCTT GGTTAATGTT GCGACCGGCG CGCAGGCCGT 350
TGCCCGGTCA CTCGACTGGA CCAAGGTCAC ACTTGATGGT CGCCCCCTTT 400
CCACCATCCA GCAGCATTCA AAGACCTTCT TTGTCCTGCC GCTCCGCGGT 450
AAGCTCTCCT TTTGGGAGGC AGGTACTACT AAAGCCGGGT ACCCTTATAA 500
TTATAACACC ACTGCTAGTG ACCAACTGCT CGTTGAGAAT GCCGCTGGGC 550
ATCGGGTTGC TATTTCCACT TACACCACTA GCCTGGGTGC TGGCCCCGTC 600
TCTATTTCCG CGGTTGCTGT TTTAGCCCCC CACTCCGCGC TAGCATTGCT 650
TGAGGATACC ATGGACTACC CTGCCCGCGC CCATACTTTC GATGACTTCT 700
GCCCGGAGTG CCGCCCCCTT GGCCTCCAGG GCTGTGCTTT TCAGTCTACT 750
GTCGCTGAGC TTCAGCGCCT TAAGATGAAG GTGGGTAAAA CTCGGGAGTT 800
G 801
戊型肝炎病毒(HEV)嵌合基因疫苗,它含有编码HEV开放读码框3蛋白(ORF3)基因,它能够指导产生HEV蛋白质或与HEV蛋白质基本同源的蛋白质。该核酸序列被称为HEV ORF3示于下面:
HEV ORF3:
ATGAATAACA TGTCTTTTGC TGCGCCCATG GGTTCGCGAC CATGCGCCCT 50
CGGCCTATTT TGCTGTTGCT CCTCATGTTT CTGCCTATGC TGCCCGCGAC 100
ACCGCCCGGT CAGCCGTCTG GCCGCCGTCG TGGGCGGCGC AGCGGCGGTT 150
CCGGCGGTGG TTTCTGGGGT GACCGGGTTG ATTCTCAGCC CTTCGCAATC 200
CCCTATATTC ATCCAACCAA CCCCTTCGCC CCCGATGTCA CCGCTGCGGC 250
CGGGGCTGGA CCTCGTGTTC GCCAACCCGC CCGACCACTC GGCTCCGCTT 300
GGCGTGACCA GGCCCAGCGC CCCGCCGCTG CCTCACGTCG TAGACCTACC 350
ACAGCTGGGG CCGCGCCGCT AA 372
戊型肝炎病毒(HEV)嵌合基因疫苗,它同时含有编码HEV ORF2基因和ORF3基因,并组成一个嵌合基因ORF23,它能够指导产生HEV蛋白质或与HEV蛋白质基本同源的蛋白质。该核酸序列被称为HEV ORF23示于下面:
HEV ORF23:
ATGCAGCTGT TCTACTCTCG TCCCGTCGTC TCAGCCAATG GCGAGCCGAC 50
TGTTAAGCTT TATACATCTG TAGAGAATGC TCAGCAGGAT AAGGGTATTG 100
CAATCCCGCA TGACATCGAC CTCGGGGAGT CTCGTGTAGT TATTCAGGAT 150
TATGACAACC AACATGAGCA GGACCGACCG ACACCTTCCC CAGCCCCATC 200
GCGCCCTTTT TCTGTCCTCC GAGCTAATGA TGTGCTTTGG CTTTCTTTCA 250
CCGCTGCCGA GTATGACCAG TCCACTTACG GCTCTTCGAC CGGCCCAGTC 300
TATGTCTCTG ACTCTGTGAC CTTGGTTAAT GTTGCGACCG GCGCGCAGGC 350
CGTTGCCCGG TCACTCGACT GGACCAAGGT CACACTTGAT GGTCGCCCCC 400
TTTCCACCAT CCAGCAGCAT TCAAAGACCT TCTTTGTCCT GCCGCTCCGC 450
GGTAAGCTCT CCTTTTGGGA GGCAGGTACT ACTAAAGCCG GGTACCCTTA 500
TAATTATAAC ACCACTGCTA GTGACCAACT GCTCGTTGAG AATGCCGCTG 550
GGCATCGGGT TGCTATTTCC ACTTACACCA CTAGCCTGGG TGCTGGCCCC 600
GTCTCTATTT CCGCGGTTGC TGTTTTAGCC CCCCACTCCG CGCTAGCATT 650
GCTTGAGGAT ACCATGGACT ACCCTGCCCG CGCCCATACT TTCGATGACT 700
TCTGCCCGGA GTGCCGCCCC CTTGGCCTCC AGGGCTGTGC TTTTCAGTCT 750
ACTGTCGCTG AGCTTCAGCG CCTTAAGATG AAGGTGGGTA AAACTCGGGA 800
GTTGAATTCG GGTGGAATGA ATAACATGTC TTTTGCTGCG CCCATGGGTT 850
CGCGACCATG CGCCCTCGGC CTATTTTGCT GTTGCTCCTC ATGTTTCTGC 900
CTATGCTGCC CGCGACACCG CCCGGTCAGC CGTCTGGCCG CCGTCGTGGG 950
CGGCGCAGCG GCGGTTCCGG CGGTGGTTTC TGGGGTGACC GGGTTGATTC 1000
TCAGCCCTTC GCAATCCCCT ATATTCATCC AACCAACCCC TTCGCCCCCG 1050
ATGTCACCGC TGCGGCCGGG GCTGGACCTC GTGTTCGCCA ACCCGCCCGA 1100
CCACTCGGCT CCGCTTGGCG TGACCAGGCC CAGCGCCCCG CCGCTGCCTC 1150
ACGTCGTAGA CCTACCACAG CTGGGGCCGC GCCGCTAA 1188
戊型肝炎病毒(HEV)嵌合基因疫苗,它是将嵌合基因ORF23插入到真核表达质粒中,构成重组质粒,重组质粒可作为一种预防戊型肝炎病毒感染的嵌合基因疫苗。
戊型肝炎病毒嵌合基因ORF23,它可插入到各类表达载体中,构成表达重组质粒,并可表达出HEV ORF2和ORF3融合蛋白,该融合蛋白可用于制备预防戊型病毒性肝炎的多肽疫苗。
基因疫苗作为近年发展起来的一种全新疫苗,不仅可诱发机体产生保护性抗体,更重要的是可诱导针对病毒的细胞免疫。研究表明,基因疫苗诱导细胞免疫的机制在于它模拟了病毒的自然感染过程。质粒DNA(基因疫苗)被肌细胞摄取后,合成的蛋白质被降解为含抗原表位的肽段,进入内质网与MHC I类分子结合,再转运至细胞膜,激活受MHC I类分子限制的CD8+CTL。部分分泌入血的抗原,诱导体液免疫,或被树突状细胞等抗原递呈细胞俘获,经加工并与MHC II类分子结合,激活CD4+Th细胞,分泌IFN-γ,IL-2等细胞因子,参与免疫调节作用。基因疫苗的出现为人类征服病毒性疾病等带来了希望,具有极为广阔的应用前景。
附图说明
图1为本发明戊型肝炎病毒嵌合基因疫苗的结构示意图。
图2为含戊型肝炎病毒ORF2基因的重组质粒pET28-ORF2的构建流程图。
图3为含戊型肝炎病毒ORF2基因和ORF3基因的重组质粒pET28-ORF23的构建流程图。
图4为含戊型肝炎病毒ORF2基因和ORF3基因的酵母表达重组质粒pPICZαA-ORF23的构建流程图。
图5为含戊型肝炎病毒ORF2基因和ORF3基因的嵌合基因疫苗pcDNA3-ORF23的构建流程图。
具体实施方式
实施例1:含HEV ORF23嵌合基因的原核表达质粒的构建
以戊型肝炎病人粪便为标本,按常规方法提取病毒RNA,用引物1和2,对HEV ORF2基因进行RT-PCR扩增,用引物2和4对HEV ORF3基因进行RT-PCR扩增。逆转录反应(RT)条件为:42℃ 1小时;PCR条件为:94℃ 1分钟,52℃ 1分钟,72℃ 2分钟,共35个循环。上述PCR产物经过纯化后,用BamHI/EcoRI酶切后将ORF2基因片断插入到pET28a+质粒中,获得pET28-ORF2(见附图2),再用EcoRI/XhoI酶切后将ORF3基因片段插入到pET28-ORF2质粒中,获得嵌合重组质粒pET28-ORF23(见附图3)。
引物1:5’GTC GGA TCC ATG CAG CTG TTC TAC TCC CGT 3’
引物2:5’GTC GAA TTC AAC TCC CGA GTT TTA CC 3’
引物3:5’GGC TGG AAT TCG GGT GGA ATG AAT AAC ATG 3’
引物4:5’GTG GCT CGA GTT AGC GGC GCG GCC CCA GCT GT 3’
嵌合蛋白ORF23的表达和纯化:将表达重组质粒pET28-ORF23转化E.coliBL21(DE3)菌株,挑取单克隆,用50ug/ml卡那霉素的LB 37℃培养至A600达0.8左右,用0.5mM的IPTG进行诱导,诱导条件:32℃,4小时。离心收集菌体,用缓冲液(0.5M NaCl,20mM Tris-HCl,PH7.9)悬浮,超声粉碎菌体,用His-纯化体系纯化目的蛋白,获得融合蛋白ORF23。融合蛋白经ELISA,Western-blot等鉴定,为HEV特异性抗原。融合蛋白ORF23可作为抗原用于HEV诊断试剂盒的制备,也可用于预防戊型病毒性肝炎的多肽疫苗的制备。
实施例2:含HEV ORF23嵌合基因的酵母表达重组质粒的构建
以嵌合重组质粒pET28-ORF23为模板,用引物T1和T2进行PCR扩增。PCR条件为:94℃ 1分钟,52℃ 1分钟,72℃ 2分钟,33个循环。上述PCR产物经过纯化后,用Kpn I/Xba I酶切后将ORF23基因片断插入到酵母表达重组质粒pPICZαA中,获得嵌合重组质粒pPICZαA-ORF23(见附图4)。
引物T1:5’GAC TGG GTA CCC AGC TGT TCT ACT CTC GT 3’
引物T2:5’GTA CTC TAG ACA GCG GCG CGG TCC CAG C 3’
嵌合蛋白ORF23的表达和纯化:将嵌合重组质粒pPICZαA-ORF23用Sac I将质粒载体线形化,通过电转移将线性化后的质粒DNA转入酵母细胞中。电转后细胞用含100ug/ml Zeocin的YPDS平板进行培养、筛选直到获得单菌落。再用MDH平板和MMH平板测定表形。将所获得野生型菌落,用MGYH培养基,28-30℃,250-300rpm振荡培养,直到A600=2-6,离心收集细胞,并用MMH培养基重悬细胞,用纯甲醇至终浓度0.5%进行诱导。离心收集菌体,用缓冲液(50mM sodium phosphate,PH7.4,1mM PMSF,1mM EDTA,5%glycerol)悬浮,用His-纯化体系纯化目的蛋白,获得融合蛋白ORF23,融合蛋白经ELISA,Western-blot等鉴定,为HEV特异性抗原。融合蛋白ORF23可作为抗原用于HEV诊断试剂盒的制备,也可用于预防戊型病毒性肝炎的多肽疫苗的制备。
实施例3:嵌合基因疫苗的构建及免疫小鼠实验
用BamHI/XhoI双酶解,从重组质粒pet28-ORF23中切下HEV ORF23基因片段,再插入到pcDNA3质粒中,获得重组质粒pcDNA3-ORF23(见附图1、附图5)。重组质粒作为嵌合基因疫苗免疫Blab/C小鼠,免疫途径为肌肉注射,注射剂量为100ug和200ug,隔3周1次,共注射2次。每次注射后2周取小鼠血清检测抗体,末次注射后检测小鼠的T细胞增殖反应。结果发现经2次免疫后,小鼠均产生HEV特异性抗体,并产生明显的T细胞增殖反应。说明重组质粒可作为HEV嵌合基因疫苗。
Claims (9)
1.一种戊型肝炎病毒(HEV)嵌合基因疫苗,其特征是它同时含有编码HEV开放读码框2蛋白(ORF2)基因和开放读码框3蛋白(ORF3)基因。
2.根据权利要求1所述的基因疫苗,其特征是它含有HEV ORF2基因。
3.根据权利要求2所述的基因疫苗,其特征是该基因的核苷酸序列为HEV ORF2。
4.根据权利要求1所述的基因疫苗,其特征是它含有HEV ORF3基因。
5.根据权利要求4所述的基因疫苗,其特征是该基因的核苷酸序列为HEVORF3。
6.根据权利要求1所述的基因疫苗,其特征是HEV ORF2基因和HEV ORF3基因组成一个嵌合基因ORF23。
7.根据权利要求6所述的基因疫苗,其特征是该基因的核苷酸序列为HEVORF23。
8.根据权利要求6所述的嵌合基因,其特征在于它可编码HEV ORF2和ORF3融合蛋白。
9.根据权利要求6所述的HEV嵌合基因,其特征在于它可插入到各类表达载体中,构成表达重组质粒,并可表达出HEV ORF2和ORF3融合蛋白。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB031168620A CN100438907C (zh) | 2003-05-09 | 2003-05-09 | 一种戊型肝炎病毒嵌合基因疫苗 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB031168620A CN100438907C (zh) | 2003-05-09 | 2003-05-09 | 一种戊型肝炎病毒嵌合基因疫苗 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1539504A true CN1539504A (zh) | 2004-10-27 |
CN100438907C CN100438907C (zh) | 2008-12-03 |
Family
ID=34320502
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNB031168620A Expired - Fee Related CN100438907C (zh) | 2003-05-09 | 2003-05-09 | 一种戊型肝炎病毒嵌合基因疫苗 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN100438907C (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN100354004C (zh) * | 2004-11-19 | 2007-12-12 | 李忠明 | 结核杆菌嵌合基因疫苗及其制备方法 |
CN110013549A (zh) * | 2019-04-29 | 2019-07-16 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种戊型肝炎亚单位疫苗 |
CN113855795A (zh) * | 2021-11-16 | 2021-12-31 | 山东农业大学 | 禽戊型肝炎病毒orf2亚单位疫苗 |
-
2003
- 2003-05-09 CN CNB031168620A patent/CN100438907C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN100354004C (zh) * | 2004-11-19 | 2007-12-12 | 李忠明 | 结核杆菌嵌合基因疫苗及其制备方法 |
CN110013549A (zh) * | 2019-04-29 | 2019-07-16 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种戊型肝炎亚单位疫苗 |
CN110013549B (zh) * | 2019-04-29 | 2022-09-30 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种戊型肝炎亚单位疫苗 |
CN113855795A (zh) * | 2021-11-16 | 2021-12-31 | 山东农业大学 | 禽戊型肝炎病毒orf2亚单位疫苗 |
CN113855795B (zh) * | 2021-11-16 | 2023-09-26 | 山东农业大学 | 禽戊型肝炎病毒orf2亚单位疫苗 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN100438907C (zh) | 2008-12-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2565925C (en) | Vaccine for periodontal disease | |
US20040247617A1 (en) | Fusion antigen used as vaccine | |
CN101062410A (zh) | 一种肠出血性大肠杆菌o157:h7基因工程疫苗及其制备方法 | |
EP2391383B1 (en) | Codon-optimized hepatitis b virus core antigen (hbcag) | |
CN1216064A (zh) | 合成的hiv基因 | |
CA2674454A1 (en) | Improved hcv vaccines and methods for using the same | |
CN113293148A (zh) | 一种h基因替换的嵌合麻疹减毒株的构建 | |
CN101880647A (zh) | 重组猪霍乱沙门氏菌及二价基因工程疫苗与应用 | |
CN1322250A (zh) | 呼吸合胞病毒的吸附(g)蛋白衍生的肽 | |
CN1539504A (zh) | 一种戊型肝炎病毒嵌合基因疫苗 | |
CN1657626A (zh) | 抗真菌多肽及其制备方法 | |
CN1287858C (zh) | 一种口蹄疫基因工程多肽疫苗及其制备方法 | |
CN1273482C (zh) | 能在大肠杆菌中全长表达的丙型肝炎病毒被膜蛋白e2基因及其编码蛋白和应用 | |
CN100335636C (zh) | 日本血吸虫中国大陆株硫氧还蛋白基因及其克隆表达方法和应用 | |
CN1736490A (zh) | 结核杆菌嵌合基因疫苗及其制备方法 | |
Yin et al. | High dose of plasmid IL-15 inhibits immune responses in an influenza non-human primates immunogenicity model | |
KR101127926B1 (ko) | 해수어 이리도바이러스 항원성 펩타이드 및 이를 이용한 이리도바이러스 예방용 백신 | |
CN1589901A (zh) | 一种口蹄疫双价多肽疫苗及其制备方法和用途 | |
CN1772297A (zh) | 一种猪疫苗使用的pIFN-γ基因佐剂及制备方法 | |
CN1279979C (zh) | 一种结核杆菌核酸疫苗 | |
CN1467291A (zh) | 鸡白细胞介素-2(il-2)基因与真核表达质粒及禽类疫苗的免疫增强剂 | |
CN1229437A (zh) | 用作为免疫治疗剂的多肽和制备多肽的方法 | |
CN1249240C (zh) | 表达载体pBVTB及其构建方法和在HCV疫苗研究中的应用 | |
KR102568329B1 (ko) | 조류인플루엔자 뉴라미니다아제를 포함하는 바이러스-유사입자 및 이를 이용한 범용 백신 | |
CN1129460A (zh) | 编码诊断相关的病毒衣壳抗原的eb病毒dna序列,通过聚合酶链反应产生的表达克隆和该重组抗原在诊断检测中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C17 | Cessation of patent right | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20081203 Termination date: 20110509 |