CN1537863A - 人参果三醇组皂苷提取物及其提取、精制方法及其医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及人参果三醇组皂苷提取物及其提取、精制方法及其医药用途。属于医药领域。通过以人参果为原料,采用科学的提取方法提取人参果总皂苷,再经过大孔吸附树脂精制得到人参果三醇组皂苷提取物产品,人参三醇组皂苷含量为55%-85%。该物质特别适合在制备治疗II型糖尿病等药物中应用。
Description
技术领域
本发明涉及通过提取人参果肉有效成分得到人参果三醇组皂苷提取物,其制备方法及含有这些提取物的药物组合物。
背景技术
人参果是人参成熟的果实。人参为五加科Araliaceae人参属panax植物panaxginseng C.A.Mayer,是名贵的中药。具有“主补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、明目开心益智、久服轻身延年”的生物功效。据文献记载人参有单茎、双茎和多茎之分,3-4年生的人参每一茎可结10-30个果实,产量非常大。
我国东北盛产人参,在世界上我国是公认的最早发现和利用人参的国家。人参作为预防疾病、保健身体、治疗疾病已经被广泛应用到人体。近百年来对人参的化学成分及其不同的生物活性的研究取得了惊人的进展,并随着科学的不断进步研究成果层出不穷。科学研究发现人参果中所含的有效成分几乎与人参根部完全一样,甚至某些成分高于其根部,是值得开发和利用的新的有效部位。
科学研究结果表明人参果含有人参皂苷Rb1、-Rb2、-Rc、-Rd、-Re、-Rg1等有效成分,含量分别为0.1%、0.2%、0.1%、0.1%、6.0%、0.04%;人参对实验性糖尿病的影响,国内外学者很早就进行了研究,包天桐等对人参根中三醇组皂苷降血糖作用进行了研究,表明人参根三醇组皂苷具有良好地降糖作用。进一步对单体人参皂苷的降糖活性也有陆续报道,1984年日本学者给大鼠腹腔注射人参皂苷Rb2 10mg后8小时,肝糖元减少到最小值,p<0.01,同时肝中葡萄糖6-磷酸酶水平8小时增加到最大值p<0.01,磷酸果糖激酶的活性也有显著增加,12小时达到高峰,实验显示人参皂苷Rb2还抑制糖原异生与分解,能降低鼠肝中6-磷酸葡萄糖酸酯酶的活性。后又相继报告,大鼠腹腔注射10mg/0.5mlRb2盐水溶液呈现出较强的降血糖活性,使用12小时后,血糖含量为573.8±18.9mg/dl,而对照组为704.8±31.6mg/dl;本课题组对人参皂苷Re降血糖作用进行了研究,实验结果表明:给糖尿病大鼠腹腔注射人参皂苷Re10mg/kg,给药组在给药的1-3周出现明显的降低血糖作用。王庆堂等对人参治疗实验性糖尿病作用的机理进行研究,人参的抑糖作用的机理可能是促进胰岛中β细胞的分泌。
发明内容
本发明提供一种人参果三醇组皂苷提取物,其特征为浅黄色至褐色,粉末状,味苦,紫外光谱(甲醇)在203纳米处有最大吸收峰,高效液相色谱显示6个以上的峰。该人参果三醇组皂苷提取物的含量占人参果肉干重的15%-20%。
本发明还涉及制备上述提取物的方法,它包括如下步骤:
(1)将人参果肉加水在常温下,机械搅拌,100γpm,提取2-3次,每次提取1-3小时;
(2)将各次水提所得的溶液合并,滤过,滤液备用;
(3)将上述滤液过大孔吸附树脂,然后用10%-30%乙醇洗涤,至接近无色,弃取洗液,继以60%-95%乙醇洗涤,收集该次洗脱液;
(4)将该洗脱液回收乙醇后,浓缩,干燥,得人参果三醇组皂苷提取物。
本发明还涉及含有人参果三醇组皂苷提取物作为活性成分的药物组合物,具体地讲,本发明涉及含有该提取物的用于治疗II型糖尿病的药物组合物。
本发明的产品或提取物可以通过适宜的方式配成片剂、软或硬明胶囊、用于制备与其溶解度相适应的即用溶液或液体的颗粒状粉末以及注射液。本发明人参果三醇组皂苷提取物的剂量在30mg-400mg的范围内,可以每日给药一次或多次,优选200mg,每日给药2次,适宜的给药剂型是口服剂型。
本发明的特点及有益效果是:人参果三醇组皂苷提取物作为新的药用有效部位在治疗糖尿病的药物组合中,作用明显,毒副作用小,治愈率高;人参果资源丰富,本发明采用的制备工艺方法,简单易行,适合工业化生产,三醇组皂苷的收率高,具有广阔的应用前景。
本发明中提取、精制人参果三醇组皂苷的具体方案是:
a.提取:以五加科人参属成熟的人参果为原料,经过除籽后,收集果肉、果汁为试验原料,采用最廉价经济的水作为提取溶剂,因为水具备了对人参果三醇组皂苷的溶解度较大,沸点较高,安全又无环境污染,易回收等优点。
上述提取过程在常温下进行、采用机械搅拌方式,100γpm,加快提取,将一定量的人参果肉用3倍量的水,分别提取3次,滤过,合并提取液,减压浓缩,0.07Mp,至流膏状,比重1.11-1.21,得人参果总皂苷粗产品,低温保存。
b.精制:取人参果总皂苷粗品一定量,用水5倍量的水稀释,稀释液上大孔吸附树脂D101,首先用水洗脱至无色,然后用30%乙醇洗脱至无色,最后用70%-85%乙醇洗脱,收集最后洗脱液,回收洗脱剂得人参果三醇组皂苷,产率10%-20%。纯度含人参果三醇组皂苷55%-85%。
本发明的提取、精制方法的优点是以人参果为原料,在常温常压下,以水为溶剂进行提取人参果总皂苷粗产品;进而以大孔吸附树脂进行精制人参果三醇组皂苷,方法简单,不需其它有毒的有机溶剂,收率高,达到了药物生产的纯度。
人参果三醇组皂苷具有较好的治疗II型糖尿病的药理活性,糖尿病中医称之为消渴症。因而人参果三醇组皂苷可用于制备药物,特别适用于治疗糖尿病等疾病。
为了用人参果三醇组皂苷制备药品,将其制成一种形式的药物制剂,该制剂除活性成分外,还有固体或液体的赋形剂。给药方法及给药的剂型通常是这样的,内服情况下,其可以任何常规形式给药,如散剂、粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂等,溶液剂如悬浮剂、糖浆等,口腔含片、舌下含片等。在这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是公知的。
人参果三醇组皂苷制备治疗糖尿病(消渴症)等药物,是由有效成分单体或有效成分与固体或液体的赋形剂一起构成的。下面举几个具体的例子:散剂如果是内服的粉末剂,它的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、磷酸钙、合成的或天然的硅酸铝、氧化镁、无水氧化铝、硬脂酸镁、碳酸氢钠、干燥酵母等,其剂型包括冲剂、片剂、胶囊剂等;溶液剂的赋形剂有水、甘油、丙二醇、单糖浆、乙醇、脂油、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇、木糖醇等;
有效物质的剂量可以根据服用方式、病人的年龄、体重及病情严重程度和其他类似的因素而改变。日用量为:口服200mg-300mg,分二次服用。
用人参果三醇组皂苷制备的治疗糖尿病药物,其优点是疗效好、无毒副作用、价格低廉等。
本发明通过下面的实验进一步说明。
1.人参果三醇组皂苷对Wistar大鼠高血糖动物模型的影响
人参果三醇组皂苷0.52g/kg、0.26g/kg、0.13g/kg,为大、中、小三个剂量组,分别相当于临床等效用量的8倍、4倍、2倍,其中大、中剂量组可使Wistar大鼠高血糖动物模型血糖水平下降,具有明显统计学意义,P<0.05,与消渴丸组2.0g/kg,相当于临床等效用量的4倍,具有相似的作用;可使全血高切比粘度、全血低切比粘度下降,与模型组比较具有明显统计学意义P<0.05,P<0.01,大、中剂量组可使血浆粘度明显下降,与模型组比较具有明显统计学意义P<0.05。
人参果三醇组皂苷0.90g/kg、0.45g/kg、0.09g/kg,分别相当于临床等效用量的10倍、5倍、1倍,对昆明种小鼠糖耐量曲线影响试验结果表明,给予葡萄糖后30分钟,人参果三醇组皂苷大剂量组血糖值下降与模型组比较有明显差异P<0.05,其余各给药组血糖值低于模型组,但无统计学意义。给予葡萄糖60分钟,各组血糖值明显升高,其中人参果三醇组皂苷各组及消渴丸组血糖值低于模型组,但无统计学意义,P>0.05,可120分钟时各组血糖值均恢复正常。
1.1试验材料
药品 人参果三醇组皂苷,由吉林大学基础医学院天然药物研究室提供,批号:20000708;消渴丸由广州中药一厂生产,批准文号:(1994)第11146号,专利号:ZL953081990。
动物 wistar大鼠,雌雄各半,体重195g-245g,由吉林大学实验动物部提供,质量合格证号:医动字第10-5110号;主要试剂和仪器链脲霉素STZ美国sigma化学公司出品,批号:89H0604血糖试条 北京怡成生物电子技术有限公司出品。
JPS-III型快速血糖测试仪 北京怡成生物电子技术有限公司出品。
离心机 北京医用离心机厂,型号:LDZ5-2。
全自动生化仪 日本日立公司出品,型号:日立7170A型。
1.2试验方法
试验条件与方法:
自吉林大学动物部引入Wistar大鼠后,饲养于吉林大学基础医学院动物室,室温22-25℃,湿度30%-60%,饲料组成:玉米面39%、豆饼面25%、麦糠面14%、高粱面10%、骨粉2.5%、鱼粉5%、酵母3.5%、添加剂1%。
取人参果三醇组皂苷药粉配成5.2%(g/v)、2.6%(g/v)、1.3%(g/v)大、中、小三个剂量的供试药液。消渴丸配成浓度为20%(g/v)供试液。
自吉林大学动物部引入Wistar大鼠106只,雌雄各半,在本室适应1周,禁食不禁水4小时后,称体重、测血糖、作标记。选择血糖值在正常范围内、状态好的100只雌雄各半的大鼠做实验,从中留10只作为正常对照组,将90只Wistar大鼠用链脲霉素STZ按0.054g/kg造模型,链脲霉素STZ用0.05mol/L枸椽酸溶液PH=4.5配成2.0%的溶液,现用现配。大鼠禁食不禁水16小时后,按体重腹腔一次注入链脲霉素STZ药液。第8天禁食不禁水4小时后,测血糖,其中血糖值大于10mmol/L为模型成立。与正常对照组比较有显著性差异P<0.001。将54只高血糖模型动物,随机分为五组,每组10~11只,雌雄各组均分。分组为:正常对照组、模型组、消渴丸组2.0g/kg相当于临床用量的4倍、人参果三醇组皂苷大剂量组0.52g/kg、中剂量组0.26g/kg、小剂量组0.13g/kg,相当于临床用量的8、4、2倍。
模型组给水10ml/kg,各给药组均给予10ml/kg供试药液。每日上午9时左右灌胃给药,连续四周,每周测血糖、体重,按新体重计算药量一次。于给药第四周后处死动物,取血测血常规、血液生化指标、血液流变学和胰岛素含量,并取胰腺进行病理组织学检查。将各组所得结果以均值x±标准差S表示,结果与模型组进行组间t检验,判断其显著性。
1.3试验结果
1.3.1对血糖的影响
给药后第三周人参果三醇组皂苷大剂量组与模型组比较血糖明显下降P<0.05。第四周人参果三醇组皂苷大、中剂量组和消渴丸组血糖值均降低,与模型组比较,具有明显统计学意义P<0.05,见表1。
表1 人参果三醇组皂苷对高血糖模型大鼠血糖值(mmol/L)的影响 (
x±s)
组别 正常对照组 模型组 消渴丸组 大剂量组 中剂量组 小剂量组
剂量 10ml/kg 2.0g/kg 0.52g/kg 0.26g/kg 0.13g/kg
动物(只) 10 8 9 10 9 8
给药前 6.12±0.53 17.52±2.40 17.22±3.22 17.04±3.34 17.10±2.63 16.37±3.32
一周 6.19±0.55 17.15±2.23 16.85±3.06 15.54±3.23 15.10±2.36 15.72±3.10
二周 6.12±0.41 15.85±3.02 14.57±3.02 13.57±2.60 14.06±2.53 15.12±3.23
三周 6.12±0.31 14.09±3.52 11.97±2.53 10.93±2.58* 11.71±2.72 13.05±3.26
四周 5.85±0.46 13.80±4.12 9.36±2.83* 9.07±2.78* 9.49±1.98* 11.81±3.63
与模型组比较,*P<0.05
1.3.2对血液生化指标的影响
人参果三醇组皂苷大、中剂量组和消渴丸组的血糖值与模型组比较均有明显下降,具有统计学意义,P<0.05,消渴丸组、大剂量组的总蛋白TP与模型组比较有明显升高,具有统计学意义,P<0.01,人参果三醇组皂苷大剂量组的尿素氮BUN与模型组比较有所降低,具有统计学意义,P<0.05,见表2。
表2 人参果三醇组皂苷对糖尿病大鼠生化指标的影响 (
x±s)
组别 正常对照组 模型组 消渴丸组 大剂量组 中剂量组 小剂量组
剂量 10ml/kg 2.0g/kg 0.52g/kg 0.26g/kg 0.13g/kg
动物(只) 10 8 9 10 9 8
ALT(U/L) 42.7±20.2 101.0±32.6 112.6±58.8 100.9±55.2 108.2±45.9 133.5±85.4
AST(U/L) 87.1±27.3 157.5±49.2 163.8±66.2 171.9±97.5 187.7±81.9 215.4±133.0
ALP(U/L) 204.3±139.0 532.4±156.1 600.1±256.9 390.0±181.9 530.1±234.4 669.4±201.9
TP(g/L) 62.3±4.1 61.2±3.5 66.7±2.5** 66.4±3.3** 64.6±3.5 62.9±6.1
ALB(g/L) 34.5±3.5 30.2±2.4 31.2±1.8 33.7±4.1 32.3±2.4 32.9±2.0
TBIL(umol/L) 0.37±0.23 0.39±0.34 0.17±0.11 0.36±0.32 0.24±0.20 0.45±0.43
BUN(mmol/L) 8.1±0.8 11.2±4.5 8.9±1.0 7.5±1.6* 8.8±0.9 8.8±1.6
CRE2(umol/L) 58.5±4.7 82.5±29.5 69.8±7.7 64.4±4.8 66.1±5.8 68.3±6.7
GLU(mmol/L) 6.07±1.82 13.98±4.94 9.33±3.29* 8.68±2.78* 9.27±2.76* 11.58±3.82
CHO(mmol/L) 1.3±0.2 1.4±0.5 1.2±0.2 1.4±0.4 1.2±0.1 1.2±0.1
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01
1.4实验结论
人参果三醇组皂苷具有降低大鼠实验性糖尿病的生物活性。
具体实施方式
本发明人参果三醇组皂苷提取物提取、精制方法
实施例一:
a.提取:取1.0kg人参果肉,溶于3L水中,在室温下,搅拌,100γpm下,提取1h,提取3次,滤过,合并滤过液,减压浓缩,0.07Mpa,至一定体积,密度1.102,得人参果总皂苷粗品;
b.精制:取粗人参果总皂苷,上大孔吸附树脂D101,先用水洗至无色,改用30%乙醇洗脱至无色,最后用95%的乙醇洗脱,收集洗脱液,回收至干,得人参果三醇组皂苷产品,产率20%。
实施例二:
a.提取:取1.0kg人参果肉,溶于3L水中,在室温下,搅拌,100γpm下,提取3h,提取2次,滤过,合并滤过液,减压浓缩,0.07Mpa,至一定体积,密度1.192,得人参果总皂苷粗品;
b.精制:取粗人参果总皂苷,上大孔吸附树脂D4020,先用水洗至无色,改用20%乙醇洗脱至无色,最后用75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,回收至干,得人参果三醇组皂苷产品,产率18%。
实施例三:
a.提取:取1.0kg人参果肉,溶于3L水中,在室温下,搅拌,100γpm下,提取2h,提取2次,滤过,合并滤过液,减压浓缩,0.07Mpa,至一定体积,密度1.192,得人参果三醇组皂苷粗品;
b.精制:取粗人参果总皂苷,上大孔吸附树脂AB-8,先用水洗至无色,改用10%乙醇洗脱至无色,最后用50%的乙醇洗脱,收集洗脱液,回收至于,得人参果三醇组皂苷产品,产率15%。
制备药物实施方式
实施例一:
人参果三醇组皂苷 225g
淀粉 25g
将人参果三醇组皂苷与淀粉混合均匀,装入胶囊,0.25g/粒,制成1000粒,压板,灭菌即可。
实施例二:
人参果三醇组皂苷 25g
山梨酸 10g
乙醇 100ml
取人参果三醇组皂苷溶解于乙醇中,加入山梨酸后,用制药用水稀释至10000ml,过滤,灌瓶,10ml/瓶,制成1000瓶,蒸汽灭菌30min,即可。
Claims (5)
1、一种人参果三醇组皂苷提取物,其特征为浅黄色至褐色,粉末状,味苦,紫外光谱(甲醇)在203纳米处有最大吸收峰,高效液相色谱显示出3个以上的峰,主要为人参皂苷Re、Rg1、Rg2化合物,该人参果三醇组皂苷提取物的含量占人参果肉干重的15%-20%;该人参果三醇组皂苷是经下列步骤得到的:
(1)取人参果肉一定量,加3倍量的水在常温下,机械搅拌,100γpm,提取2-3次,每次提取1-3小时;
(2)将各次水煮所得的溶液合并,滤过,滤液备用;
(3)将上述滤液过大孔吸附树脂,然后用10%-30%乙醇洗涤,至接近无色,弃取洗液,继以50%-95%乙醇洗脱,收集该次洗脱液;
(4)将该洗脱液回收乙醇后,浓缩,干燥,得人参果三醇组皂苷提取物。
2、一种人参果三醇组皂苷的提取、精制方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)取人参果肉一定量,加3倍量的水在常温下,机械搅拌,100γpm,提取2-3次,每次提取1-3小时;
(2)将各次水煮所得的溶液合并,滤过,滤液备用;
(3)将上述滤液过大孔吸附树脂,然后用10%-30%乙醇洗涤,至接近无色,弃取洗液,继以50%-95%乙醇洗脱,收集该次洗脱液;
(4)将该洗脱液回收乙醇后,浓缩,干燥,得人参果三醇组皂苷提取物。
3、根据权利要求2所述的人参果三醇组皂苷提取物的制备方法,其特征在于:大孔吸附树脂选自D101、D4020、DA201、AB-8、XAD-4或D14。
4、一种药物组合物,含有权利要求1所述人参果三醇组皂苷提取物作为活性成分。
5、如权利要求1所述的人参果三醇组皂苷提取物在制备治疗II型糖尿病的药物中的应用。
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