CN1530369A - 一种提取山楂总黄酮的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提取山楂总黄酮的方法，用该方法得到的山楂总黄酮纯度高，可以满足医用要求。本发明的技术方案是，以粉碎的山楂果或/和山楂叶为原料，包括以下步骤：1)粗提物的制备；2)将粗提物用超滤、柱层析纯化，得到产品。为了使得到的产品纯度更高，所述柱层析纯化后的产物再经过溶剂结晶后得到产品；所述溶剂结晶法的溶剂为乙酸乙酯。样品在所述柱层析后经瞬间干燥，再进行所述溶剂结晶。溶剂结晶后得到的产物经粉碎、过筛、包装、灭菌后得到成品。本发明的方法使产品中总黄酮的含量高达96％，提取率达到93.6％。

Description

一种提取山楂总黄酮的方法

技术领域

本发明涉及一种提取山楂总黄酮的方法。

背景技术

黄酮类化合物是山楂的主要活性成分，含量在2.8％左右。山楂总黄酮化合物是以苯基色原酮为基核的化合物，既含有极性较大的甙又含有极性较小的甙元，其中包括牡荆素、牡荆素-4-鼠李糖甙、牡荆素-4、7-双葡萄糖甙、乙酰牡荆素-4-鼠李糖甙、牡荆甙、异牡荆甙、东方蓼素、异东方蓼素等多种化合物。

心脑血管药物在药品消费市场中占有较大的份额，全球每年大约有八百亿元的市场。在中国，降血脂药每年大约有20亿元的市场。流行病学调查表明，我国20岁以上成人患心脑血管病的比率为6％，且发病率与死亡率存在上升趋势。我国中老年人约占全国人口的40％，查出血脂水平高的占13％。估计目前我国成人高血脂患者有8000多万人，降血脂药物原料的研发具有巨大的市场潜力。

国内目前治疗高血脂的成方药中，有81％的处方中使用山楂，由于食用山楂时酸涩不宜入口，食用过多还易引发结石等副作用。有研究报导，山楂黄酮类物质对252例冠心病、心绞痛病人总有效率为94.4％，对降低血脂总有效率为85％，对治疗冠心病、心肌炎及心肌病引起的早搏总有效率为63.2％，此外对降低舒张压，防治心率失常、心血管病和活血化瘀也起重要作用。因此，制备高纯度山楂总黄酮对国宝中药进行西药化临床应用具有重大意义。

临床应用表明，山楂叶总黄酮可以治疗冠心病、心绞痛、心律失常等心脑血管疾病。北京植物研究所、中医研究院等单位，以山楂叶总黄酮制成的山楂黄酮片，经6家医院对137例冠心病心绞痛病人治疗观察表明，对心绞痛总有效率达94.4％。症状改善总有效率为92.2％，心电图改善有效率为46.4％。46例经双盲对照观察，对心绞痛总有效率山楂总黄酮组为84.8％，安慰剂对照组仅37％，心电图有效率分别为46.4％及3.3％，两组比较差异非常显著。上海、浙江和山西的3家医院，以双盲对照法对300例心脑血管病患者所作临床疗效观察表明，益心酮(山楂叶总黄酮)总有效率84.8％，对冠心病心绞痛有效率85.7％，明显改善冠心病患者24小时心电图，显著降低血清总胆固醇和甘油三酯含量，提高血清HDL含量，降低心血管病患者血小板和红细胞电泳时间，改善血流量和微循环，显著增加脑血流量，有效地抑制脑血管病患者过氧化脂质的产生，且均未见毒副作用。同时，山楂总黄酮作为一种安全有效的功能因子，在保健食品开发中也有重要价值。

有关医药用高纯度山楂总黄酮的制备工艺研究较少，提取含量较低。有效成分纯化和分离的方法主要有溶剂萃取(包括两相溶剂萃取和系统溶剂萃取)，醇沉，盐析，结晶，透析和层析法。溶剂萃取法收率低且有机溶剂价格较高，工艺不合理。水浸提醇沉法，尽管可以达到提纯目的，但在杂质多糖、果胶，果酸、等沉淀的同时，仍有少部分山楂黄酮沉淀，使产品收率下降。中国专利公开号1062294，名称为“由山楂叶提取山楂总黄酮的方法”的专利申请中，公开了一种提取含量在80％左右的方法，即存在着上述问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种提取高纯度医用山楂总黄酮的方法。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术方案：一种提取山楂总黄酮的方法，以粉碎的山楂果或/和山楂叶为原料，包括以下步骤：

1)粗提物的制备；

2)将粗提物用超滤、柱层析纯化，得到产品。

为了使得到的产品纯度更高，所述柱层析纯化后的产物再经过溶剂结晶后得到产品；所述溶剂结晶法的溶剂为乙酸乙酯。样品在所述柱层析后经瞬间干燥，再进行所述溶剂结晶。溶剂结晶后得到的产物经粉碎、过筛、包装、灭菌后得到成品。

其中，所述粗提物通过有机溶剂提取、过滤、浓缩得到，具体包括以下步骤：

①原料的处理：将山楂或干燥山楂叶粉碎，过120目筛备用。

②浸提：采用有机溶剂循环使用萃取法进行浸提，用以浸提的有机溶剂有甲醇，乙醇，丙酮，乙酸乙酯，乙酸乙酯/甲醇等，其中以乙醇为优选，较优选的乙醇浓度为40-90％，最优选的乙醇浓度为50-70％。浸提的条件为：溶剂和山楂的比例为2-8∶1(V∶W)，较适宜的比例为3-5∶1(V∶W)；提取温度为30-60℃；提取时间为3-5小时。

③浓缩：提取液中除山楂总黄酮外，还有酒精，水、多糖、纤维素、蛋白质、色素、果酸、果胶、萜烯类等物质，本发明采用减压蒸馏法，在60-70℃下，将提取液进行浓缩。

粗提物经超滤—柱层析—溶剂结晶进行纯化：

浓缩后的粗提物用超滤法有效地滤除大分子多糖、蛋白质等杂质，优选的是以中空纤维膜(截留分子量3000-8000)为介质，超滤的压力优选为0.15KPa。然后用大孔吸附树脂柱层析法进行纯化，优选的是以大孔阴离子交换树脂或聚酰胺树脂为层析介质，洗脱剂为梯度乙醇溶液。

3)山楂总黄酮含量测定

本发明的优点在于：本发明采用乙醇逆流萃取提取工艺进行浸提，提取率可高达93.6％。同时，该法将乙醇循环使用，能减少乙醇的用量，降低能耗。采用乙醇为溶剂，使提取后的残渣能再作果醋原料等用，具有良好的环保效果，操作简便。采用以中空纤维膜为介质的超滤法能有效地滤除大分子多糖、蛋白质等杂质，具有节约能源，分离杂质确定等优点。采用大孔阴离子交换树脂或聚酰胺树脂为介质的吸附性大孔树脂层析法进行纯化，以乙醇为洗脱剂进行洗脱，操作简便，设备要求低，离子交换树脂再生简单，可以多次重复利用。离子交换树脂法纯化后的山楂黄酮的含量可提高60％左右。采用乙酸乙酯溶剂结晶法进一步纯化，产品含量可提高到96％左右。采用瞬间喷雾干燥工艺，使黄酮在极短的时间内干燥为成品，从而保证黄酮不因加工而改变特性。

用本发明的方法可以得到纯度较高的产品，对工业化生产高纯度的山楂黄酮具有重要的意义及良好的经济效果，为山楂总黄酮在药物、养生保健品开发等方面应用的扩大奠定了基础。

附图说明

图1为山楂黄酮生产工艺流程图

具体实施方式

实施例1、从山楂果中提取山楂总黄酮

在1000升搪瓷罐中投入经粉碎成米粒大小的山楂果200公斤，加入70％乙醇溶液800公斤，加热回流4小时，浸提三次。合并浸提液，在60℃下减压蒸馏浓缩提取液，并回收乙醇。浓缩液用中空纤维素膜(截留分子量3000)进行超滤，超滤液进行大孔树脂柱层析分离，分离介质为D241大孔阴离子交换树脂，用蒸馏水及不同浓度的乙醇进行分级洗脱，先以蒸馏水洗脱，去除水溶性蛋白质和多糖，再以20％、30％、40％、50％、60％乙醇洗脱，去除醇溶性多糖和鞣质等，最后以70％乙醇洗脱，得到山楂总黄酮。将含有黄酮物质的洗脱液在60℃下减压浓缩，并回收乙醇。再将浓缩液用乙酸乙酯溶剂结晶法提纯，喷雾干燥，粉碎，过60-80目筛，得山楂黄酮产品4.5公斤，含量98％(采用紫外分光光度法在510nm下，用芦丁作为基准测定山楂总黄酮含量。详细操作参见《中华人民共和国药典》2000年版P563)，最后将产品经原子能辅照灭菌后避光存放。

在上述过程中，当黄酮的含量要求不是非常高时，也可以是将大孔树脂淋洗液经60-70℃减压浓缩后，在高速离心干燥器中进行瞬间干燥，干燥后的样品用紫外分光光度法测定含量，当黄酮含量大于90％时，将其粉碎，过60-80目筛，即为山楂黄酮产品。

实施例2、从山楂叶中提取山楂总黄酮

方法与实施例1的方法相同，只是在1000升搪瓷罐中投入的是经粉碎成米粒大小的山楂叶200公斤，得山楂黄酮产品5公斤，含量95％。

实施例3、乙醇溶剂循环使用萃取法从山楂果中提取山楂总黄酮

如图1所示，采用乙醇循环连续萃取提取工艺进行浸提。在1000升搪瓷罐中投入粉碎成米粒大小的山楂果200公斤，加入上一批第三次浸提液800公斤，加热回流4小时，过滤；第一次滤渣加入70％乙醇液800公斤加热回流4小时，过滤；第二次滤渣中加入70％乙醇800公斤加热回流4小时，过滤，滤液留做下一批的第一次浸提用，滤渣另做处理。合并前两次滤液，在60℃下减压蒸馏浓缩，并回收乙醇。经上述浓缩后得到的浓缩液中除山楂黄酮外，还有部分的多糖、果胶，果酸、等其他物质，用芦丁作为基准的紫外分光光度法在510纳米测定山楂果总黄酮含量为19％左右。浓缩液用中空纤维素膜进行超滤后，进行大孔树脂柱层析分离，分离介质为80-100目聚酰胺树脂，用蒸馏水及不同浓度的乙醇进行分级洗脱。先以蒸馏水洗脱，再以20％、30％、40％、50％、60％、70％乙醇洗脱。将含有黄酮物质的洗脱液在60℃下减压浓缩，并回收乙醇。再将浓缩液用乙酸乙酯溶剂结晶法提纯，喷雾干燥，粉碎，过60-80目筛，得山楂黄酮产品4.4公斤，含量96％，提取率为93.6％。最后将产品经原子能辅照灭菌后避光存放。

Claims (10)

1、一种提取山楂总黄酮的方法，以粉碎的山楂果或/和山楂叶为原料，包括以下步骤：1)粗提物的制备；

2)将粗提物用超滤、柱层析纯化，得到产品。

2、按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述柱层析纯化后的产物再经过溶剂结晶后得到产品；所述溶剂结晶法的溶剂为乙酸乙酯。

3、按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述粗提物通过有机溶剂提取、过滤、浓缩得到。

4、按照权利要求3所述的方法，其特征在于：所述有机溶剂提取采用溶剂逆流萃取法，其中提取温度为30-60℃，提取时间为3-5小时。

5、按照权利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述有机溶剂和山楂的比例为2-8∶1(V∶W)，较适宜比例为3-5∶1(V∶W)。

6、按照权利要求3所述的方法，其特征在于：所述有机溶剂为乙醇，其中优选的乙醇浓度为40-90％，最优选为50-70％。

7、按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述超滤的介质为中空纤维膜。

8、按照权利要求1或7所述的方法，其特征在于：所述超滤的压力为0.15KPa。

9、按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述柱层析中的层析介质为大孔阴离子交换树脂或聚酰胺树脂，其洗脱剂为梯度乙醇溶液。

10、按照权利要求2中所述的方法，其特征在于：样品在所述柱层析后经瞬间干燥，再进行所述溶剂结晶；所述溶剂结晶后得到的产物经粉碎、过筛、包装、灭菌后得到成品。

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