CN1503848A - 高血压的定量诊断分析 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及人sgk家族同系物的过量表达或功能性分子修饰与高血压之间的正相关性在特定形式的遗传决定性高血压的定量诊断中的应用。本发明尤其涉及hsgk1基因中2种不同的单核苷酸多态性与遗传决定的高血压易感性之间的正关联。本发明还涉及提供含有可用于检测诊断性靶子hsgk1、hsgk2和hsgk3的抗体或多核苷酸的诊断试剂盒。

Description

高血压的定量诊断分析
本发明涉及sgk家族中人同系物的过量表达或其功能性分子修饰与高血压之间的正相关性。本发明尤其涉及到对hsgk1基因中两种不同的单个核苷酸多态性(单核苷酸多态性＝SNP)与遗传决定的高血压易感性之间的正相关性的检测。
许多细胞外信号能引起胞内磷酸化/去磷酸化级联，以此保证这些信号能快速通过质膜以及其受体传递到细胞质和细胞核。这些可逆的信号转导级联的特异性通过大量的独特蛋白，尤其通过将磷酸基团转移到独特底物上的激酶而成为可能。
因血清和糖皮质激素而表达升高的血清-和糖皮质激素-依赖性激酶(sgk)，丝氨酸/苏氨酸激酶，首先从鼠乳腺癌细胞中得到克隆(Webster等，1993)。sgk的人类形式被称作hsgk1，其克隆自肝细胞(Waldegger等，1997)。已发现hsgk1的表达受细胞体积调节的影响。迄今，在鼠sgk的表达中尚未检查到此种对细胞体积的依赖。另外，还发现大鼠激酶刺激上皮Na+通道(ENaC)(Chen等，1999；Naray-Pejes-Toth等，1999)。而ENaC在肾脏Na+排泄中扮演了决定性的角色。增高的ENaC活性导致钠离子的肾脏潴留量增高，并因此导致高血压的发生。
最后，另外两个人类sgk家族成员：hsgk2和hsgk3已被克隆(Kobayashi等，1999)，此两者可以被胰岛素和IGF1通过P13激酶途径激活，hsgk1亦如此。电生理学实验证实hsgk2和hsgk3的共表达也导致ENaC活性的显著增高。
据DE 197 08 173 A1可知，在细胞体积的变化扮演了决定性病理生理学角色的许多疾病，例如高钠血症、低钠血症、糖尿病、肾功能不全、分解代谢过度、肝性脑病和微生物感染或病毒感染中，hsgk1具有显著的诊断潜力。
WO 00/62781已经描述了hsgk1对内皮Na+通道的激活，这可导致肾Na+吸收的增高。因为此增高的肾Na+吸收与高血压相关，所以认为hsgk1表达的增高应当能导致高血压，而且hsgk1表达的降低应当最终导致低血压。
人同系物hsgk2和hsgk3的过量表达或过高活性与ENaC的过度激活、所致的肾Na+吸收增高和最终引发的高血压之间有类似的关系，这在未出版的、具有较早优先权的28.08.00德国申请中有描述，此申请的标题为“用作诊断和治疗性靶子的hsgk2和hsgk3”(内部编号A 35 048)。另外，激酶hsgk2和hsgk3在动脉高血压中的诊断潜力也已被论述。
本发明的任务是找到对正相关性，即人sgk家族同系物的过量表达或功能性分子修饰与高血压之间的正关联性的实验性检验方法。
人sgk家族同系物在上面的含义中包括功能性分子修饰，其在本文中应理解为具有突变的sgk家族同系物，所述突变使相应蛋白质的性质，尤其是催化性质或者甚至是底物特异性发生了改变。
本发明的另一个任务是将人sgk家族同系物的过量表达或功能性分子修饰与高血压之间的正相关性或关联性用于诊断遗传决定性高血压的易感性的方法中。
在本发明框架中给出了对人sgk基因的过量表达或功能性分子修饰与高血压之间的正相关性的检测，并且针对hsgk1基因实例用实验对此进行了具体的证明。
因此，针对上面任务的一个技术方案是在遗传决定形式的高血压的诊断中应用人sgk家族同系物，尤其是hsgk1基因的过量表达和功能性分子修饰与高血压之间的这种正相关性。
具体地，上述任务因如下发现而得以实现，即在本发明的范围内，在hsgk1基因内鉴定出两个不同的SNP——如果它们以特定形式在hsgk1基因中出现的话，将导致患者有明确的高血压患病倾向。这样，可以在取自患者的身体样本中检测hsgk1基因或者甚至其他的sgk基因家族人同系物中这些SNP的存在，并视其为高血压发生中遗传决定的易感性的诊断指征。
上面的任务可以进一步通过提供对特定形式的遗传决定性高血压进行定量诊断的诊断方法而实现，其中，人sgk家族同系物的过量表达或这些同系物的功能性分子修饰通过定量检测患者身体样品中的这些同系物来检测，所述定量检测通过使用针对同系物蛋白质的抗体或与同系物的DNA或mRNA在严紧条件下杂交的多核苷酸以及适用于执行本方法的试剂盒来进行。
本发明的试剂盒优选包含所述针对hsgk1蛋白质的抗体或所述能够与hsgk1基因在严紧条件下杂交的多核苷酸。
尤其是，此诊断试剂盒含有特异性针对hsgk1蛋白质的区域的抗体，所述区域包括对应于hsgk1基因中特定SNP的突变hsgk1蛋白片段。但是，试剂盒还可含有针对hsgk1基因或其他sgk家族人同系物的更高频率等位基因的抗体，利用此抗体可定量检测hsgk1或这些同系物的表达水平的改变。
另外，本发明的诊断试剂盒优选含有具有特定区域的多核苷酸，此特定区域包含hsgk基因中的一种或者另一种高血压相关SNP，因此此多核苷酸适宜对患者hsgk1基因中的特定SNP通过用来自身体样品的基因组DNA、cDNA或mRNA在严紧条件下杂交进行检测。
本发明中高血压与人sgk家族同系物之间的正相关性表明，在一些患者中hsgk1、hsgk2或hsgk3基因可能发生个体突变，从而改变激酶hsgk1、hsgk2或hsgk3的表达水平或功能性质，并因此遗传性地导致高血压患病倾向。例如这种突变可发生在sgk基因基因座的调节基因区域或内含子序列中并因此导致相应激酶的过量表达以及ENaC的过度激活。另一方面，sgk基因座位的遗传构成的个体差异也可能影响基因的编码区域。而编码区域的突变可能导致相应激酶的功能改变，例如改变激酶的催化活性。因此，上面所述的两种类型的突变都能引起ENaC激活的增高并因此最终在患者身上造成遗传性原因的高血压。
在患者身上引起遗传决定性高血压发生的sgk家族人同系物中的这些突变通常是所谓的单核苷酸多态性(SNP)，它们位于同系物的外显子或内含子区域。hsgk基因外显子中的SNP的较少频率发生的形式(下文中称之为突变型)可能会引起相应hsgk蛋白中的氨基酸替换从而导致激酶的功能改变。hsgk基因的内含子或调节序列中的SNP的突变型可能会引起相应激酶表达水平的改变。
在本发明的范围内，进行相关性的研究，研究中将不同患者(双生)的收缩压测定值和舒张压测定值与患者的hsgk1基因的基因型作比较，其中每种情况下血压值为在身体处于不同姿势(坐，站，卧)时测量的并进行了统计学评估。
因此，在本发明范围内，证实在外显子8的两个等位基因上同时具有(C→T)的交换(第一SNP，参见SEQ ID NO.1)(在外显子8的SNP上的纯合TT携带者)虽不引起蛋白质水平的氨基酸交换(参见SEQ IDNO.2)，但引起血压值显著地升高并因此导致遗传决定的高血压患病倾向(表3)。
此外，还证实存在(T→C)改变(第二SNP)的纯合形式可导致较低的血压值并由此导致较低的遗传决定性高压患病倾向(表3)，所述(T→C)改变距第一SNP 5516p，位于内含子6向外显子7过渡的供体剪接侧。
因为本发明的hsgk1基因中的两个SNP都不在蛋白质水平上引起氨基酸交换，因此由它们引起的较高或较低的高血压遗传易感性的基础可能是hsgk1基因的表达水平的变化。
图1更详细地对外显子8上的第一SNP(C→T)进行了解释。图1显示hsgk1基因的各个外显子并按外显子编号(外显子ID)对每个的相关“毗连序列群”和链以及外显子的起点、终点和长度进行了描述。在外显子8的SNP框架中的(C→T)交换的确切位置用黑色标记的C标示在外显子8中。在图1中外显子8上的浅色标记指示的是hsgk1基因中位于SNP侧翼的序列，其明确地界定了此SNP在基因组中所处的位置。
在内含子6中的第二SNP(T→C)由直接测序鉴定，而且可以明确地表征为：在hsgk1基因(包含外显子和内含子)中准确地位于外显子8的第一SNP上游551bp处，即，hsgk1基因的内含子6到外显子7的供体剪接位点内，而且与T向C的交换有关。
而且，证实，在不同姿势下身体的收缩血压和舒张血压测量数值都显示对hsgk1基因的基因型有同等程度的依赖性(表4)。因此，从表4中可以看出，患者血压测量值与患者hsgk1基因中存在的前述多态性(SNP)之间的相关性实际上有统计学显著性。
另外，所分析的hsgk1基因中的两个SNP显示出在相关发生率方面有很大的不平衡(表5)。尽管外显子8中的SNP的CC携带者多数也是内含子6中SNP的TT携带者(64％)，但反之则不是这样(仅有2％的外显子8的TT携带者也是内含子6的CC携带者)。
首次查明的在患者血压与其个人hsgk1基因座位的基因型之间的相关性说明，针对hsgk1的特异性抗体或多核苷酸适用于对特定的、遗传决定的高血压患病倾向进行诊断。这种特定的、遗传引起的高血压可以由hsgk1的表达增高，即，hsgk1的过量表达或者可能地以及hsgk1的改变的功能性质来表征。
因为sgk家族的2个同源激酶，hsgk2和hsgk3，也能够激活ENaC，所以根据本发明，针对hsgk2和hsgk3的特异性的抗体和多核苷酸同样也适用于特定的遗传决定性高血压的诊断分析。
根据本发明，hsgk1基因中这2个SNP的发生与高血压患病倾向有关的这一发现特别说明了：具有hsgk1基因中的这2个SNP的一个或另一个的多核苷酸尤其适用于通过与来自患者身体样本的内源DNA(cDNA或基因组DNA)或mRNA杂交对遗传决定性高血压进行诊断。
类似的，根据本发明结果，抗体也适用于对遗传决定的高血压易感性进行诊断，所述抗体针对hsgk1蛋白或其任一种人同系物中的特定高血压-相关多态性(SNP)。这些SNP也在蛋白质水平上导致高血压相关的多态性，它们特别可能与hsgk1蛋白的功能改变有关并因此造成高血压易感性。
本发明因此涉及将正相关性，即人sgk家族同系物，尤其是hsgk1的过量表达或功能性分子修饰与高血压之间的正关联应用在对特定形式的遗传决定性高血压的定量诊断上。
具体的，将hsgk1基因中与高血压患病倾向相关的2个SNP用于遗传决定性高血压的定量分析。
本发明还涉及到对遗传决定性高血压的定量诊断方法，其中，对sgk家族人同系物的过量表达或这些同系物的功能性分子修饰通过在患者身体样品中定量检测同系物来进行检测，对同系物的定量检测是使用针对同系物蛋白的抗体或可在严紧条件下与同系物的基因组DNA、cDNA或mRNA杂交的多核苷酸进行的。
在本发明的诊断方法中，使用的患者身体样品优选为血液样品或唾液样品，这些样品含有细胞材料且能以相对低廉的费用从患者身上获得。但是，也可以使用其他也含有细胞的身体样品，如组织样品等。从含细胞材料的身体样品出发，根据标准方法(Sanbrook，J.和Russel，D.W.(2001)冷泉港，NY，CSHL出版社)能够制备基因组DNA或cDNA或甚至mRNA，而且如果需要的话可对之进行扩增，然后在严紧条件下和能够与此基因组DNA、cDNA或甚至mRNA特异性地杂交的多核苷酸杂交。另外，也可以通过标准方法(Sanbrook，J.和Russel，D.W.(2001)冷泉港，NY，CSHL出版社)从含细胞材料的身体样品(血液、唾液、组织等)中分离出蛋白提取物，然后其中的相应sgk蛋白可通过与针对此蛋白的抗体一起孵育进行定量检测。
在本发明的方法中，优选使用针对hsgk1蛋白的抗体或能与hsgk1基因的基因组DNA，cDNA或mRNA杂交的多核苷酸。
在本发明的方法中，尤其使用如下多核苷酸，其能够在严紧条件下与具有hsgk1基因内含子6中的一种SNP形式或hsgk1基因外显子8中的一种SNP形式的DNA、cDNA或mRNA杂交。
在本文中，严紧条件下的杂交意味着在杂交温度和杂交溶液的甲酰胺含量如相关技术文献所述(Sanbrook，J.和Russel，D.W.(2001)冷泉港，NY，CSHL出版社)的杂交条件下进行杂交。
另外，本发明还涉及对特定形式的遗传决定性高血压进行定量诊断的试剂盒，此试剂盒含有针对sgk蛋白家族的人同系物的抗体或能在严紧条件下与sgk基因家族人同系物杂交的多核苷酸或者这些抗体和多核苷酸的联合，它们可以用于对这些同系物的过量表达或功能性分子修饰作定量测定。
试剂盒中含有的抗体优选针对hsgk1蛋白，试剂盒中含有的多核苷酸优选能与hsgk1基因杂交。
特别优选地诊断试剂盒可以含有能与具有内含子6中的SNP(T→C)的一种形式或外显子8中的SNP(C→T)的一种形式的基因组DNA，cDNA或mRNA杂交的多核苷酸。
本发明通过下面的实施例进行详细的解释。
实施例1
征选75对二卵双生子进行相关性分析(Busjahn等，J.Hypertens.1996，14：1195-1199；Busjahn等，Hypertension，1997，29：165-170)。受试人员全部属于德国高加索人种，来自于德国各个区域。抽取每对双生子及其父母的血液样品用来验证他们是二卵双生的并用于进一步的分子遗传学分析。每个参加的受试人员均事先进行了医学检查。已知，受试人员无一患有慢性医学疾病。5分钟后由熟练医生用标准的水银血压测量计测量受试人的坐姿血压(进行2次测量，间隔1分钟)。两次测量的平均值用作血压数值。
二卵双生子用于相关性研究的优点是他们严格地同龄而且外部对于他们表型的影响可被视为最低(Martin等，Nat.Genct.，1997，17：387-392)。
最近Martin等(1997)描述了双生子研究对解释复杂遗传疾病的重要性。
每对双生子是否为二卵双生通过用聚合酶链反应(PCR)扩增5个微卫星标记来进行确认。在这个微卫星标记分析中，使用特定寡核苷酸通过PCR扩增脱氧核糖核酸(DNA)片段，该片段含有在不同的人类个体中高度可变的区域。在基因组的这些区域中的高可变性可以通过所扩增片段的大小的微小差异检测到，如果基因的相应位点上有多样性的话，则通过凝胶电泳分离PCR产物之后将形成称作微卫星带的双带(Becker等，J.Reproductive Med.1997，42：260-266)。
对靶基因——此处为hsgk1基因的分子遗传学分析，用PCR方法扩增紧邻hsgk1基因座位的另外3个微卫星标记区域(d6s472，d6s1038，d6s270)，然后将其与另一个双生子以及其父母的相应样品进行比较。用这种方法可以确定就所研究的等位基因而言，此对双生子从其父母遗传到的等位基因是相同的还是不同的。用名为“结构方程模拟”(SEM)的模型进行相关性研究(Eaves等，Behav.Genet.1996，26：519-525；Neale，1997：Mx：Statistical modeling。Box 126 MCV，Richmond，VA 23298：精神病系，第4版)。此模型的基础是受试对的方差-协方差矩阵，其特征在于他们具有一个或两个或完全不具有相同等位基因的可能性。与表型有关的方差被分成基于所有基因的遗传背景的方差(A)、基于靶基因-此处为hsgk 1基因的遗传背景的方差(Q)以及由外界影响产生的方差(E)。
VAR＝A2+Q2+E2
对于3种可能的等位基因的组合IBD0、IBD1、IBD2(IBD＝“遗传得到的相同等位基因”；0、1或2个相同的等位基因)，受试对的协方差定义如下：
COV(IBD0)＝0.5A2COV(IBD1)＝0.5A2+0.5Q2COV(IBD2)＝0.5A2+Q2
为了评价hsgk1基因座位的遗传构成与受试人血压之间的相关性，以x2统计形式计算考虑和不考虑hsgk1靶基因的遗传方差的两个模型的差别。对于每一对双生子和每一个基因座位，等位基因比率在亲本基因型的基础上用所谓的“多点”模型进行计算(MAPMAKER/SIBS；Kruglyak等，Am.J.Hum.Genet.，1995，57：439-454)。
最近在模拟研究中(Fulker等，Behav.Gen.1996，26：527-532)确认了基于方差-协方差估计的分析方法与上述x2统计(S.A.G.E.遗传流行病学的统计学分析，2.2版，计算机程序包，流行病学与生物统计学学部，Case Western Reserve大学，Cleveland，OH，USA，1996)相比有更多的信息价值。为了保证相对于Lander和Kruglyak标准(Lander等，Nat.Genet.，1995，11：241-246)具有显著的相关性，而采用p＜0.01的显著性水平。
此相关性研究的结果列于表1中。
表1：
表型 最大x2 P
收缩压数值(卧姿) 4.44 0.04
舒张压数值(卧姿) 14.36 0.0002
收缩压数值(坐姿) 5.55 0.019
舒张压数值(坐姿) 4.92 0.027
收缩压数值(站姿) 1.91 0.17
舒张压数值(站姿) 4.83 0.028
由表1可知，显著性水平P的低值，即仅略超过或者完全没有超过所接受的p＜0.01显著性水平的值证明关于hsgk1基因座位的遗传方差与表型确定的血压测量值方差之间有正相关性。
实施例2
hsgk1基因的基因组结构已被描述(Waldegger等，Genomics，51，29[1998])，httD：//wwww.ensmble.org/Homo sapiens/geneview？gene＝ENSG000001185 15)。
为了鉴定与高血压易感性相关的SNP，首先研究数据库中公布的hsgk1基因的SNP是否是真正的SNP而不仅仅是测序错误，以及这些SNP是否有足够的多态性使其能够提供高血压易感性的诊断检测基础。外显子8中的SNP rs 1057293与C替换T有关，它满足所要求的前提条件( http：//wwww.ensmble.org/Homo sapiens/snpview？snp＝1057293；http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snp ref.cgi？type＝rs&rs＝1057293)。另外，通过直接测序得到第二个SNP，其在hsgk1基因中距第一个SNP准确的551bp，位于内含子6到外显子7的供体剪接位点中，而且其与T替换C相关。对内含子6(T→C)和外显子8(C→T)中的这两个SNP的分析如下所述。
在所有情况下，PCR扩增之后，加入1单位碱性磷酸酶和1单位核酸外切酶以降解PCR引物和使dNTP去磷酸化。在下面的条件中进行PCR：在9600热循环仪(Applied Biosystems)中95℃10分钟，然后95℃下15秒、62℃下15秒、72℃下30秒循环35次，及72℃下10分钟延伸步骤。
用针对内含子6的SNP(T→C)的引物5’-CTC CTT GCA GAG TCCGAA和针对外显子8的SNP(C→T)的引物5’-ACC AAG TCA TTC TGGGTT GC进行微型测序反应。用0.15pmol的PCR纯化产物作为测序PCR中的模板。对于测序PCR，用下面各步骤进行25个扩增循环：在9600热循环仪中96℃下变性10秒，50℃退火10秒，60℃下延伸步骤30秒。
对于同一个已确定了hsgkl基因的SNP基因型的患者，测量其在躺姿、站姿和坐姿时的收缩血压和舒张血压数值，以确定hsgk1基因的SNP基因型与血压之间的相关性。
表2显示双生子的一些人口统计学数据以及hsgk1基因座位的遗传构成与血压测量值之间的相关性分析结果。在受试人员中证实每种姿势的血压测量值都受到强烈的遗传影响。
表2：
表型 单卵双生 二卵双生 a2(r单卵/r二卵) p(相关性)
N 200 132
年龄(年) 29±12 31±12
性别(男/女) 52/148 85/47
身高(cm) 169±8 170±8
体重(kg) 65±11 67±12
身体质量指数(BMI)体重/身高2(kg/m2) 22.4±3.5 22.8±3.4
收缩血压(卧姿)(mmHg) 128±17 124±14 0.69(0.69/0.3 1) 0.04
舒张血压(卧姿)(mmHg) 71±12 71±11 0.66(0.66/0.42) 0.0002
收缩血压(坐姿)(mmHg) 125±16 123±13 0.74(0.74/0.38) 0.019
舒张血压(坐姿)(mmHg) 73±11 73±10 0.72(0.72/0.51) 0.027
收缩血压(站姿)(mmHg) 124±15 122±14 0.67(0.66/0.48) 0.04
舒张血压(站姿)(mmHg) 80±10 79±10 0.64(0.63/0.40) 0.0002
表3显示本发明相关性研究的其他结果。外显子8中的SNP的等位基因频率是C为91％、T为9％，而对于内含子6中的SNP则是T为79％、C为21％(两个多态性都保持Hardy-Weinberg平衡)。
每个姿势(坐姿、卧姿和站姿)的血压测量值都显示同样的趋势。外显子8中的SNP的纯合CC携带者和杂合CT携带者在血压数值上未显示有任何差异，但是他们确实比外显子8中的SNP的纯合TT携带者有低得多的收缩血压和舒张血压数值。
与外显子8中的SNP相比，对于内含子6中的SNP，相关性研究的相应结果较不一致。但是，发现内含子6中的SNP的纯合CC携带者通常比内含子6中的SNP的纯合TT携带者和杂合TC携带者有低的血压数值。
表3：
表型 外显子8中第一SNPCC 外显子8中第一SNPCT 外显子8中第一SNPTT 外显子8中第一SNPCC/CT 内含子6中第二SNPTT 内含子6中第二SNPCT 内含子6中第二SNPCC 内含子6中第二SNPTT/CT
收缩血压(卧) 125±15 125±18 132±14 125±16 125±16 128±18 119±6 126±16
舒张血压(卧) 70±10 72±13 74±12 71±11 71±10 72±13 67±10 71±11
收缩血压(坐) 124±14 123±15 129±13 124±14 124±14 125±17 117±6 124±14
舒张血压(坐) 72±10 74±10 79±9 73±10 73±10 74±11 72±9 73±10
收缩血压(站) 123±15 123±14 129±13 123±15 123±14 126±16 119±8 123±15
舒张血压(站) 79±10 81±10 84±8 80±10 80±10 82±11 78±8 80±10
表4详细地显示了不管在哪一种姿势下测量血压(坐姿、站姿、卧姿)，内含子6中的SNP的遗传构成对于收缩血压和舒张血压数值有实质上等同的显著性。外显子8中的SNP的遗传构成的显著性结果与此类似，但是与内含子6中的SN P相比不同姿势下收缩血压测量值与舒张血压测量值之间的显著性关联却要稍小一些。
表4：
表型 内含子6中的第二SNP 外显子8中的第一SNP
收缩压数值(卧姿) ＜0.01 ＜0.05
舒张压数值(卧姿) ＜0.05  0.08
收缩压数值(坐姿) ＜0.05 ＜0.05
舒张血压数值(坐姿) ＜0.01  0.08
收缩压数值(站姿) ＜0.05  0.07
舒张压数值(站姿) ＜0.05  0.09
如表5所示，在分析的2个SNP之间有强相关性平衡：尽管外显子8中的SNP的多数CC携带者也是内含子6中的SNP的TT携带者(64％)，但反之却不是这样(外显子8的TT携带者中仅有2％也是内含子6的CC携带者)。
表5：
内含子6的TT 内含子6的TC 内含子6的CC
外显子8的CC 197(64％) 59(19％) 3(1％)
外显子8的CT 2(1％) 30(10％) 11(4％)
外显子8的TT 0(0％) 0(0％) 6(2％)
                        序列表
<110>弗洛里安·朗(FLORIANLANG)
<120>高血压的定量诊断分析
<130>L61882
<140>DE 101 13 876.8
<141>2001-03-21
<160>2
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>2354
<212>DNA
<213>homo sapiens
<220>
<221>CDS
<222>(43)..(1335)
<223>
<220>
<221>变异
<222>(762)..(762)
<223>第一SNP(C到T)，沉默突变，
即，SNP的两种形式均在第240位氨基酸位置处导致氨基酸Asp
<400>1
ggtctttgag cgctaacgtc tttctgtctc cccgcggtgg tg atg acg gtg aaa     54
                                               Met Thr Val Lys
                                               1
act gag gct gct aag ggc acc ctc act tac tcc agg atg agg ggc atg    102
Thr Glu Ala Ala Lys Gly Thr Leu Thr Tyr Ser Arg Met Arg Gly Met
5                   10                  15                   20
gtg gca att ctc atc gct ttc atg aag cag agg agg atg ggt ctg aac    150
Val Ala Ile Leu Ile Ala Phe Met Lys Gln Arg Arg Met Gly Leu Asn
                25                  30                  35
gac ttt att cag aag att gcc aat aac tcc tat gca tgc aaa cac cct    198
Asp Phc Ilc Gln Lys Ile Ala Asn Asn Ser Tyr Ala Cys Lys His Pro
            40                  45                  50
gaa gtt cag tcc atc ttg aag atc tcc caa cct cag gag cct gag ctt    246
Glu Val Gln Ser Ile Leu Lys Ile Ser Gln Pro Gln Glu Pro Glu Leu
        55                  60                  65
atg aat gcc aac cct tct cct cca cca agt cct tct cag caa atc aac    294
Met Asn Ala Asn Pro Ser Pro Pro Pro Ser Pro Set Gln Gln Ile Asn
    70                  75                  80
ctt ggc ccg tcg tcc aat cct cat gct aaa cca tct gac ttt cac ttc    342
Leu Gly Pro Ser Ser Asn Pro His Ala Lys Pro Ser Asp Phe His Phe
85                  90                  95                  100
ttg aaa gtg atc gga aag ggc agt ttt gga aag gtt ctt cta gca aga    390
Leu Lys Val Ile Gly Lys Gly Ser Phe Gly Lys Val Leu Leu Ala Arg
                105                 110                 115
cac aag gca gaa gaa gtg ttc tat gca gtc aaa gtt tta cag aag aaa    438
His Lys Ala Glu Glu Val Phe Tyr Ala Val Lys Val Leu Gln Lys Lys
            120                 125                 130
gca atc ctg aaa aag aaa gag gag aag cat att atg tcg gag cgg aat    486
Ala Ile Leu Lys Lys Lys Glu Glu Lys His Ile Met Ser Glu Arg Asn
        135                 140                 145
gtt ctg ttg aag aat gtg aag cac cct ttc ctg gtg ggc ctt cac ttc    534
Val Leu Leu Lys Asn Val Lys His Pro Phe Leu Val Gly Leu His Phe
    150                 155                 160
tct ttc cag act gct gac aaa ttg tac ttt gtc cta gac tac att aat    582
Ser Phe Gln Thr Ala Asp Lys Leu Tyr Phe Val Leu Asp Tyr Ile Asn
165                 170                 175                 180
ggt gga gag ttg ttc tac cat ctc cag agg gaa cgc tgc ttc ctg gaa    630
Gly Gly Glu Leu Phe Tyr His Leu Gln Arg Glu Arg Cys Phe Leu Glu
                185                 190                 195
cca cgg gct cgt ttc tat gct gct gaa ata gcc agt gcc ttg ggc tac    678
Pro Arg Ala Arg Phe Tyr Ala Ala Glu Ile Ala Ser Ala Leu Gly Tyr
            200                 205                 210
ctg cat tca ctg aac atc gtt tat aga gac tta aaa cca gag aat att    726
Leu His Ser Leu Asn Ile Val Tyr Arg Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile
        215                 220                 225
ttg cta gat tca cag gga cac att gtc ctt act gac ttc gga ctc tgc    774
Leu Leu Asp Ser Gln Gly His Ile Val Leu Thr Asp Phe Gly Leu Cys
    230                 235                 240
aag gag aac att gaa cac aac agc aca aca tcc acc ttc tgt ggc acg    822
Lys Glu Asn Ile Glu His Asn Ser Thr Thr Ser Thr Phe Cys Gly Thr
245                 250                 255                 260
ccg gag tat ctc gca cct gag gtg ctt cat aag cag cct tat gac agg    870
Pro Glu Tyr Leu Ala Pro Glu Val Leu His Lys Gln Pro Pyr Asp Arg
                265                 270                 275
act gtg gac tgg tgg tgc ctg gga gct gtc ttg tat gag atg ctg Hat    918
Thr Val Asp Trp Trp Cys Leu Gly Ala Val Leu Tyr Glu Met Leu Tyr
            280                 285                 290
ggc ctg ccg cct ttt tat agc cga aac aac gct gaa atg tac gac aac    966
Gly Leu Pro pro Phe Tyr Ser Arg Asn Thr Ala Glu Met Tyr Asp Asn
        295                 300                 305
att ctg aac aag cct ctc cag ctg aaa cca aat att aca aat tcc gca      1014
Ile Leu Asn Lys Pro Leu Gln Leu Lys Pro Asn Ile Thr Asn Ser Ala
    310                 315                 320
aga cac ctc ctg gag ggc ctc ctg cag aag gac agg aca aag cgg ctc      1062
Arg His Leu Leu Glu Gly Leu Leu Gln Lys Asp Arg Thr Lys Arg Leu
325                 330                 335                 340
ggg gcc aag gat gac ttc atg gag att aag agt cat gtc ttc ttc tcc      1110
Gly Ala Lys Asp Asp Phe Met Glu Ile Lys Ser His Val Phe Phe Ser
                345                 350                 355
tta att aac tgg gat gat ctc att aat aag aag att act ccc cct ttt      1158
Leu Ile Asn Trp Asp Asp Leu Ile Asn Lys Lys Ile Thr Pro Pro Phe
            360                 365                 370
aac cca aat gtg agt ggg ccc aac gac cta cgg cac ttt gac ccc gag      1206
Ash Pro Asn Val Ser Gly Pro Asn Asp Leu Arg His Phe Asp Pro Glu
        375                 380                 385
ttt acc gaa gag cct gtc ccc aac tcc att ggc aag tcc cct gac agc      1254
Phe Thr Glu Glu Pro Val Pro Asn Ser Ile Gly Lys Ser Pro Asp Ser
    390                 395                 400
gtc ctc gtc aca gcc agc gtc aag gaa gct gcc gag gct ttc cta ggc      1302
Val Leu Val Thr Ala Ser Val Lys Glu Ala Ala Glu Ala Phe Leu Gly
405                 410                 415                 420
ttt tcc tat gcg cct ccc acg gac tct ttc ctc tgaaccctgt tagggcttgg    1355
Phe Ser Tyr Ala Pro Pro Thr Asp Ser Phe Leu
                425                 430
ttttaaagga ttttatgtgt gtttccgaat gttttagtta gccttttggt ggagccgcca    1415
gctgacagga catcttacaa gagaatttgc acatctctgg aagcttagca atcttattgc    1475
acactgttcg ctggaagctt tttgaagagc acattctcct cagtgagctc atgaggtttt    1535
catttttatt cttccttcca acgtggtgct atctctgaaa cgagcgttag agtgccgcct    1595
tagacggagg caggagtttc gttagaaagc ggacgctgtt ctaaaaaagg tctcctgcag    1655
atctgtctgg gctgtgatga cgaatattat gaaatgtcc  ttttctgaag agattgtgtt    1715
agctccaaag cttttcctat cgcagtgttt cagttcttta ttttcccttg tggatatgct    1775
gtgtgaaccg tcgtgtgagt gtggtatgcc tgatcacaga tggattttgt tataagcatc    1835
aatgtgacac ttgcaggaca ctacaacgtg ggacattgtt tgtttcttcc atatttggaa    1895
gataaattta tgtgtagact tttttgtaag atacggttaa taactaaaat ttattgaaat    1955
ggtcttgcaa tgactcgtat tcagatgctt aaagaaagca ttgctgctac aaatatttct    2015
atttttagaa agggttttta tggaccaatg ccccagttgt cagtcagagc cgttggtgtt    2075
tttcattgtt taaaatgtca cctgtaaaat gggcattatt tatgtttttt tttttgcatt    2135
cctgataatt gtatgtattg tataaagaac gtctgtacat tgggttataa cactagtata    2195
tttaaactta caggcttatt tgtaatgtaa accaccattt taatgtactg taattaacat    2255
ggttataata cgtacaatcc ttccctcatc ccatcacaca actttttttg tgtgtgataa    2315
actgattttg gtttgcaata aaaccttgaa aaatattta                           2354
<210>2
<211>431
<212>PRT
<213>人(homo sapiens)
<400>2
Met Thr Val Lys Thr Glu Ala Ala Lys Gly Thr Leu Thr Tyr Ser Arg
1               5                   10                  15
Met Arg Gly Met Val Ala Ile Leu Ile Ala Phe Met Lys Gln Arg Arg
            20                  25                  30
Met Gly Leu Asn Asp Phe Ile Gln Lys Ile Ala ASn Asn Ser Tyr Ala
        35                  40                  45
Cys Lys His Pro Glu Val Gln Ser Ile Leu Lys Ile Ser Gln Pro Gln
    50                  55                  60
Glu Pro Glu Leu Met Asn Ala Asn Pro Ser Pro Pro Pro Ser Pro Ser
65                  70                  75                  80
Gln Gln Ile Asn Leu Gly Pro Ser Ser Asn Pro His Ala Lys Pro Ser
                85                  90                  95
Asp Phe His Phe Leu Lys Val Ile Gly Lys Gly Ser Phe Gly Lys Val
            100                 105                 110
Leu Leu Ala Arg His Lys Ala Glu Glu Val Phe Tyr Ala Val Lys Val
        115                 120                 125
Leu Gln Lys Lys Ala Ile Leu Lys Lys Lys Glu Glu Lys His Ile Met
    130                 135                 140
Ser Glu Arg Asn Val Leu Leu Lys ASn Val Lys His Pro Phe Leu Val
145                 150                 155                 160
Gly Leu His Phe Ser Phe Gln Thr Ala Asp Lys Leu Tyr Phe Val Leu
                165                 170                 175
Asp Tyr Ile Asn Gly Gly Glu Leu Phe Tyr His Leu Gln Arg Glu Arg
            180                 185                 190
Cys Phe Leu Glu Pro Arg Ala Arg Phe Tyr Ala Ala Glu Ile Ala Ser
        195                 200                 205
Ala Leu Gly Tyr Leu His Ser Leu Asn Ile Val Tyr Arg Asp Leu Lys
    210                 215                 220
Pro Glu Asn Ile Leu Leu Asp Ser Gln Gly His Ile Val Leu Thr Asp
225                 230                 235                 240
Phe Gly Leu Cys Lys Glu Asn Ile Glu His Asn Ser Thr Thr Ser Thr
                245                 250                 255
Phe Cys Gly Thr Pro Glu Tyr Leu Ala Pro Glu Val Leu His Lys Gln
            260                 265                 270
Pro Tyr Asp Arg Thr Val Asp Trp Trp Cys Leu Gly Ala Val Leu Tyr
        275                 280                 285
Glu Met Leu Tyr Gly Leu Pro Pro Phe Tyr Ser Arg Asn Thr Ala Glu
    290                 295                 300
Met Tyr Asp Asn Ile Leu Asn Lys Pro Leu Gln Leu Lys Pro Asn Ile
305                 310                 315                 320
Thr Asn Ser Ala Arg His Leu Leu Glu Gly Leu Leu Gln Lys Asp Arg
                325                 330                 335
Thr Lys Arg Leu Gly Ala Lys Asp Asp Phe Met Glu Ile Lys Ser His
            340                 15                  350
Val Phe Phe Ser Leu Ile Asn Trp Asp Asp Leu Ile Asn Lys Lys Ile
        355                 360                 365
Thr Pro Pro Phe Asn Pro Asn Val Ser Gly Pro Asn Asp Leu Arg His
    370                 375                 380
Phe Asp Pro Glu Phe Thr Glu Glu Pro Val Pro Asn Ser Ile Gly Lys
385                 390                 395                 400
Ser Pro Asp Ser Val Leu Val Thr Ala Ser Val Lys Glu Ala Ala Glu
                405                 410                 415
Ala Phe Leu Gly Phe Ser Tyr Ala Pro Pro Thr Asp Ser Phe Leu
            420                 425                 430

Claims (13)

1.sgk家族人同系物的过量表达或功能性分子修饰与高血压之间的正相关性在定量诊断特定形式的遗传决定性高血压中的用途。
2.根据权利要求1的用途，其特征在于sgk家族人同系物是hsgk1基因。
3.根据权利要求2的用途，其特征在于过量表达或功能性修饰是由hsgk1基因中内含子6内的核苷酸多态性(SNP)(T→C)引起的。
4.根据权利要求2的用途，其特征在于过量表达或功能性修饰是由hsgk1基因中外显子8内的核苷酸多态性(SNP)(C→T)引起的。
5.用于对特定形式的遗传决定性高血压进行定量诊断的试剂盒，其含有针对sgk蛋白家族的人同系物的抗体或能够在严紧条件下与sgk基因家族的人同系物杂交的多核苷酸或这些抗体和多核苷酸的联合以用于定量确定这些同系物的过量表达或功能性分子修饰。
6.根据权利要求5的试剂盒，其特征在于sgk家族人同系物是hsgk1基因。
7.根据权利要求6的试剂盒，其特征在于所述抗体针对由SNP引起的突变hsgk1蛋白或所述多核苷酸可在严紧条件下与由SNP引起的突变hsgk1基因杂交。
8.根据权利要求7的试剂盒，其特征在于所述多核苷酸能在严紧条件下与由内含子6中的SNP(T→C)引起的突变hsgk1基因杂交。
9.根据权利要求7的试剂盒，其特征在于所述多核苷酸能在严紧条件下与由外显子8中的SNP(C→T)引起的突变hsgk1基因杂交。
10.对特定形式的遗传决定性高血压进行定量诊断的方法，其中对sgk家族人同系物的过量表达或这些同系物的功能性分子修饰进行检测，方式是：用针对这些同系物蛋白的抗体或者用可在严紧条件下与这些同系物的DNA或mRNA杂交的多核苷酸定量检测患者身体样品中的这些同系物。
11.根据权利要求10的方法，其特征在于sgk家族人同系物为hsgk1基因。
12.根据权利要求10的方法，其特征在于所述多核苷酸能在严紧条件下与具有hsgk1基因内含子6内的SNP(T→C)的一种形式的DNA或mRNA杂交。
13.根据权利要求10的方法，其特征在于所述多核苷酸能在严紧条件下与具有hsgk1基因外显子8内的SNP(C→T)的一种形式的DNA或mRNA杂交。
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