CN1898394A - 检测高原肺水肿易感性的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种检测高原肺水肿(HAPE)易感性的方法。具体涉及iNOS(可诱导的一氧化氮合酶)基因的等位基因变体，发现其与HAPE的流行相关。
Description
技术领域
本发明涉及检测高原肺水肿(HAPE)易感性的方法。具体涉及利用已发现与HAPE流行有关的iNOS(可诱导的一氧化氮合酶)基因的等位基因变体。
发明背景
高原肺水肿(HAPE)是一种非心源性肺水肿，随机抽取的登山者中大约10％在快速攀登至海拔4000m以上后24小时内发病。出于各种商务原因在海拔超过3000m的低地参与者中可观察到类似现象。在易感HAPE对象中甚至显示了更高的发病率，大约有60％过去曾疾病发生过此病(Houston CS等1960，Bartsch P等1997，1990)。通过预防性使用血管扩张剂或缓慢攀登可有效防止HAPE。然而，在长途旅行和登山运动中，由于接触高海拔，HAPE仍然是最常见的致死原因(Hackett PH等1990)。如果不能实现补充供氧或快速下山的即刻治疗，估计喜马拉雅登山者中HAPE的发病率为50％(Lobenhoffer HP等1982)。人种和种族以及家族群之间的临床表现和疾病严重性有可见差异赞同此病具有明显的遗传易感性。
虽然对影响HAPE发生的因素了解尚不完全，但实验证据表明缺氧性肺血管收缩(HPV)起着重要作用(Scherrer U等1996)。通过侵入性或非侵入性方法测定已证明患HAPE的个体在高海拔时肺动脉压过度升高。毛细血管的不均匀收缩有时会导致“毛细管渗漏”，然后形成水肿(Bartsch P等1991)。易患此病的人即使短时接触高海拔，也显示肺血管反应增加。这种过高的HPV的潜在病理生理学机制仍然未明。然而有证据表明，内源性血管扩张剂一氧化氮(NO)可调节血管反应性(Palmer RMJ等1987)。NO调节血管张力归因于cGMP途径的介导(Bellamy TC等2002)。
以下研究着重涉及NO在HAPE中的作用：
NO的主要作用是改善换气/灌气比率，以及通过增加动脉血氧饱和度而降低肺泡与动脉的血氧张力差(Scherrer U等1996)。然而，在健康志愿者中，缺氧时给予NO合成拮抗剂NG-单甲基-L-精氨酸(L-NMMA)可增加肺动脉压和血管阻力，类似于HAPE中观察到的现象。由于这个原因，已利用NO作为吸入疗法，来治疗受影响个体的HAPE(Anand IS等1998)。
磷酸二酯酶5是负责肺中cGMP水解的关键酶。已发现磷酸二酯酶5的抑制剂可抑制缺氧诱发的肺动脉高压(Goldstein I等1998)。缺氧使易患HAPE的登山者呼出的NO减少，表明这种情况下NO的产生降低(Busch等2001)。因此，认为产生较低NO水平的缺陷性NO合成机制引起了HAPE的发病。NO由三种同工酶nNOS(神经元一氧化氮合酶，NOS1)、iNOS(可诱导的一氧化氮合酶，NOS2)和eNOS(内皮一氧化氮合酶，NOS3)所合成(Michel T等1997)。NOS1和NOS3是组成性表达，而NOS2是诱导后才表达。其中，提出最佳候选者是HAPE(患者)中缺乏的酶eNOS(毛皮一氧化氮合酶)，而同时诱导iNOS(可诱导的一氧化氮合酶)对立即恢复NO总储备似乎也是不可避免的(Xia Y等1998)。而且，强效细胞信号传导机制通常有利于募集定即早期生理反应所需的可诱导基因。预测iNOS的缺乏(即没有激活)可能使缺氧而患HAPE的个体不能恢复其降低的NO水平。
HAPE患者的iNOS缺乏可发生在基因水平。在许多病例中，发现由于该基因序列的多态性，导致该基因表达的改变(Qadar Pasha MA等2001)。因此，iNOS基因的多态性很能够改变其表达并与疾病相关。
目前HAPE的治疗状况是：
1.NO疗法：采用NO吸入疗法来治疗HAPE。NO主要通过改善换气/灌气比率和增加动脉血氧饱和度以降低肺泡与动脉血氧张力差而起作用。在HAPE患者中，NO诱导了动脉氧合作用的改善并伴随肺中血流从水肿区段流向非水肿区段，导致整个毛细血管中血管收缩均匀/一致(Scherrer U等1996，Anand IS等1998)。
2.快速下山：HAPE患者快速下山不仅能够防止病情恶化，而且能够改善疾病的发病(Hackett PH等2001)。
3.便携式气曩(PAC)：常常使用装满氧气的小圆筒形PAC作为HAPE的吸入疗法(Hackett PH等2001)。
4.遗传素质：只有本文中的一项研究提出，内皮一氧化氮合酶基因(eNOS)和血管紧张素转化酶基因(ACE)的遗传变异可能使个体易患HAPE(Droma Y等2002)。该研究结果如下：
| 对照 | 患者 | |
| Glu298Asp(eNOS) | 9.8％ | 25.6％ |
| B/A(eNOS) | 6.9％ | 32.2％ |
| I/D(ACE) | 4％ | 22％ |
HAPE现有疗法的缺陷是：
1.发现HAPE患者对NO吸入没有一致的反应。而且，所需的NO的浓度随疾病的严重程度而不同。有时，吸入不充分可导致患者低血压或甚至感染性休克。
2.由于恶劣的天气和崎岖的山路，HAPE患者立即下山常不可能(AnandIS等1998，Hackett PH等2001)。
3.由于超载问题，携带PAC有时看来不可行。此病症状的改善常常是暂时性的，除去气囊可使患者病情恶化(Hackett PH等2001)。
4.所报道与HAPE相关的多态性不是此病特有的，在诸如糖尿病、冠状动脉疾病、高血压和心肌梗死等的血压升高疾病中也有(Monti LD等2003，ViaM等2003)。所提及的等位基因差异的频率看来与其它疾病相同。因此，等位基因对此病的作用可能是由于其它相关病理生理原因所致加重了HAPE的高血压。而且，该研究没有包括HA本地人(高海拔居民)，即在发生此病的相同环境中快乐居住的人群。
本发明的特征是提供一种检测HAPE易感性的新方法。
另一个特征是提供iNOS基因中新的标记区。
又一个特征是提供iNOS基因中新的SNP。
又一个特征是显示iNOS基因的等位基因变化与HAPE的相关性。
另一个特征是提供含有该新的SNP的新型扩增引物和探针。
发明目的
本发明的主要目的是提供一种能消除上述缺陷的检测HAPE易感性的方法。
另一个目的是提供iNOS基因中新的SNP。
另一个目的是提供含有该新的SNP的新型扩增引物和探针。
另一个目的是对低地居民和HAPE患者进行等位基因变化的相关性分析，以记录与此病的相关性。
发明概述
本发明涉及一种检测HAPE易感性的方法。具有涉及利用与HAPE流行有关的iNOS基因的等位基因变体。已认为产生较低NO水平的缺陷性一氧化氮(NO)合成机制与HAPE的发病有关。证明了iNOS基因负责NO的产生，因为NO产生的抑制剂可增加HAPE的严重性。本发明提供一种检测HAPE易感性的方法，因为在已公开的标记区中这种iNOS基因的新型等位基因变化显示与人群HAPE的流行呈负相关。
附图简要说明
图1可诱导的一氧化氮合酶(iNOS)基因位置17cenq11.2的示意图。垂直条表示外显子区域(来自基因库核苷酸序列ID No.NT010799)。
图2显示具有AA纯合子的个体的序列特征。
图3显示具有GG纯合子的个体的序列特征。
图4显示具有AG杂合子的个体的序列特征。
图5显示具有TC杂合子的个体的序列特征。
通过下面本发明优选实施方式的描述，本发明的其它和另外方面的内容、特征和优点将显而易见，优选实施方式的为了公开的目的。本领域技术人员可考虑本发明其它实施方式。但所有这些其它实施方式均包括在本发明的范围内。
发明详述
本发明涉及检测HAPE易感性的方法。具体涉及利用与HAPE流行有关的iNOS基因的等位基因的变体。
I.鉴定iNOS基因上的标记区：
考虑到高海拔时NO功能的重要性，选择iNOS(可诱导的一氧化氮合酶基因)作为本研究的候选基因。
II.选择研究对象：
通过Lake Louise急性高山病(AMS)计分系统，评价HAPE的临床严重性。简要地说，评价了患者的五种症状：头痛，胃肠不适，疲劳、虚弱、或疲劳虚弱，眩晕、头晕、或眩晕头晕，和睡眠困难。也评价精神状态的改变、共济失调和外周性水肿。每种症状评定为0-3分。0分表示无症状；1分，轻微症状；2分，中度症状；3，严重症状。HAPE评分是所有8种症状的总和，HAPE评分＞6为患者(Anand IS等1998)。地低居民(LL)即使在高海拔下诱导至少三次也没有发现任何上述症状。高海拔(HA)居民是来自远古时期的HA永久居民。
III.提取白细胞基因组DNA：
采用盐析方法提取血基因组DNA。在高盐存在下溶解血红细胞后，用细胞核裂解缓冲液(NLB)处理。乙醇沉淀蛋白和提取获得DNA(Miller SA等1988)。
IV.鉴定iNOS基因的等位基因变化：
本发明新的多态性：
作为本发明的第一步骤，申请者利用自己设计的寡核苷酸引物，进行了iNOS基因标记区域的PCR扩增。根据人iNOS基因序列(基因库登录号NT_010799)设计引物。对纯化的PCR产物的测序揭示，在人iNOS基因内含子7中有一个新的单核苷酸多态性。因此，看来存在迄今尚未识别的人iNOS基因等位基因或亚型。
本发明提供人iNOS基因等位基因变体的序列，与数据库中的人iNOS基因序列相比，该序列包含以下的新的单核苷酸多态性。
例如，具有表1所列多态性的人iNOS基因等位基因变体的核苷酸序列(SEQ ID NO：1)为：
5’CAGCGGAGTGATGGCAAGCACGACTTCCGGGTGTGGAATGCTCAGCT
CATCCGCTATGCTGGCTACCAGATGCCAGATGGCAGCATCAGAGGGGA
CCCTGCCAACGTGGAATTCACTCAGGTACCCGGCCCAGCCTCAGCC
A*/GCCGGCCATTGGGGCGGGGAGCCCCGTGGTGAGCGAGTGACAGAGT
GGAGCCCAGAGGAGACACGCAGCCCGGGCTTACAGACTCACAGGGCCC
GTCTTGTTCCCCAGCTGTGCATC3’
在上述序列中，SNP*用黑体表示。
表1
| 改变的位点 | 碱基变化 | 突变类型 |
| 19480 | A/G | 过渡性 |
V.与疾病相关性分析
42位HA本地居民、39位HAPE对照者和18位HAPE患者中SNP的分析揭示有三种基因型，即AA、AG和GG。这些等位基因的分布见表2小结。
表2
| 研究对象 | A | G |
| HAPE对照(n＝39)HAPE患者(n＝18)HA本地居民(n＝42) | 0.350.580.18 | 0.650.420.82 |
发现G等位基因频率的顺序为HA本地居民＞HAPE对照＞HAPE患者。生物统计学分析表明G等位基因与HA适应性以及A等位基因与该病明显相关，如表3所示。在这里，使用差额比(OR)和95％可信区间作为基因型组合与此病之间相关性强度的一种衡量。认为P值＜0.05具有统计学差异。
表3
| 相关性类型 | X2值 | p值 | 差额比 | 95％Cl | 相对风险 |
| HAPE患者与HAPE对照HAPE患者与HA本地居民HAPE对照与HA本地居民 | 10.6333.967.42 | 0.001＜0.0010.006 | 2.566.29- | 1.45-4.543.30-12.01- | 1.66(1.21-2.27)3.22(2.05-5.06)- |
负责合成一氧化氮的一氧化氮合酶需要氧气作为反应中的辅助因子。氧气与iNOS中的加氧酶结构域结合，而合成NO，在低氧条件下，缺氧可导致较低的NO产生，然而，对该加氧酶结构域中的酶活性修饰使得此酶不需要氧气或需要较少的氧气而正常产生NO。NO改善血红蛋白的氧合作用和正常的NO产生可能涉及作用于适应性的机制，因而加氧酶结构域中的改变有利于NO的产生。在本研究中，内含子7中发现的新SNP靠近横跨外显子7至外显子17的NOS2基因的加氧酶结构域。很可能发现的SNP与附近的SNP有连锁失平衡，导致最终影响到NOS2基因产生NO。
VI.诊断试剂盒
本发明还提供诊断试剂盒，该试剂盒包括至少一个或多个SEQ ID 2和3所述的等位基因特异性寡核苷酸。通常，该试剂盒包括一对或多对能与不同多态性形式的等位基因杂交的等位基因特异性寡核苷酸。在一些试剂盒中，该等位基因特异性寡核苷酸被固定在基质上。例如，同一基质还可含等位基因特异性寡核苷酸探针，至少用于检测表1中所示的多态性。试剂盒任选包括其它组分，例如，限制性内切酶、逆转录酶或聚合酶、底物三磷酸核苷、标记方法(例如，当标记是生物素时，亲和素酶偶联物与酶底物和显色原)，以及用于逆转录、PCR或杂交反应的合适的缓冲液。通常，该试剂盒还包括实施这些方法的说明书。
VII.核酸载体
变体基因可在表达载体中表达，该载体中，变体基因与天然启动子或其它启动子可操作性相连接。通常，所述启动子是能在哺乳动物细胞中表达的真核细胞启动子。转录调控序列一般包括可被宿主识别的异源启动子和任选的增强子。合适的启动子如trp、lac、噬菌体启动子、糖酵解酶启动子和tRNA启动子的选择取决于所选宿主。也可使用市售表达载体。合适的宿主细胞包括细菌，如大肠杆菌、酵母菌、丝状真菌；昆虫细胞；哺乳动物细胞，一般是能无限增殖的细胞，例如小鼠、CHO、人和猴细胞系及其衍生细胞。优选宿主细胞能够加工该变体基因产物，产生适当的成熟多肽。本发明还提供能够表达外源性变体基因的非人转基因动物，和/或将该基因与启动子和任选的增强子可操作性相连接，并将该构建物显微注射入合子中。可通过形成转基因实现内源性变体基因的灭活，该转基因中，通过插入阳性选择标记使克隆的变体基因灭活。然后，将该转基因引入胚胎干细胞，在胚胎干细胞中与内源性变体基因同源重组。小鼠和其它啮齿动物是优选动物。这些动物可提供有用的药物筛选系统。因此，本发明的主要实施方式涉及检测高原肺水肿(HAPE)易感性的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)监测高原肺水肿相关症状选择研究对象，
(b)用常规方法提取研究对象白细胞的基因组DNA，
(c)分别设计和合成SEQ ID No.2和SEQ ID No.3正向和反向寡核苷酸引物，扩增SEQ ID No.1人iNOS基因的内含子7，
(d)与已有的人iNOS基因进行比较，经计算机鉴定新的单核苷酸多态性(SNP)，
(e)用上述SEQ ID No.2(正向引物)和SEQ ID 3(反向引物)引物，筛检高海拔居住人群(HA本地居民)、低地居民(HAPE对照)和低地HAPE患者的新单核苷酸多态性，
(f)计算步骤(e)人群中AA、AG和GG基因型的频率，建立基因型与高海拔肺水肿的相关性，以及
(g)预测和统计学分析人群中该等位基因变体(AA、AG和GG基因型)的分布差异，其中，19480位是GG基因型时高原肺水肿低风险，19480位是AA基因型时该病高风险。
本发明的另一个实施方式涉及选自以下的能够扩增人iNOS基因内含子7的寡核苷酸引物：
(a)5′CAG CGG AGT GAT GGC AAG CAC GAC 3′(SEQ ID No.2)，正向引物，和
(b)5′GAT GCA CAG CTG GGG AAC AAG ACG 3′(SEQ ID No.3)，反向引物。
本发明的另一个实施方式涉及选自以下的包含一个或多个多态性位点的寡核苷酸引物：
(a)5′CAG CGG AGT GAT GGC AAG CAC GAC 3′(SEQ ID No.2)，正向引物，和
(b)5′GAT GCA CAG CTG GGG AAC AAG ACG 3′(SEQ ID No.3)，反向引物。
本发明的又一个实施方式涉及等位基因变体，这些变体中，iNOS基因的所述等位基因变体具有AA、AG和GG基因型
一种检测具有高原肺水肿(HAPE)易感性SNP基因型的诊断试剂盒，所述试剂盒包括引物和探针：
(a)5′CAG CGG AGT GAT GGC AAG CAC GAC 3′(SEQ ID No.2)，正向引物
(b)5′GAT GCA CAG CTG GGG AAC AAG ACG 3′(SEQ ID No.3)，反向引物
本发明的另一个实施方式涉及适合扩增含一个或多个多态性位点的iNOS基因区域的引物，所述引物包括：
(a)5′CAG CGG AGT GAT GGC AAG CAC GAC 3′(SEQ ID No.2)，正向引物
(b)SEQ ID 3：5′GAT GCA CAG CTG GGG AAC AAG ACG 3′(SEQ IDNo.3)，反向引物
本发明的另一个实施方式涉及含iNOS基因的等位基因变体的核酸载体。
提供以下实施例来示例性描述本发明，不应理解为限制本发明的范围。
实施例
实施例1
鉴定标记基因
考虑到NA中NO的重要功能，选择iNOS(可诱导的一氧化氮合酶)作为本研究的候选基因。
实施例2
研究对象的选择
用Lake Louise急性高山病(AMS)计分系统，评价HAPE的临床严重性。简要地说，评价了患者的五种症状：头痛，胃肠不适，疲劳、虚弱、或疲劳虚弱，眩晕、头晕、或眩晕头晕，和睡眠困难。也评价精神状态的改变、共济失调和外周性水肿。每种症状评定为0-3分。0分表示无症状；1分，轻微症状；2分，中度症状；3，严重症状。HAPE评分是所有8种症状的总和，HAPE评分＞6为患者(Anand IS等1998)。地低居民(LL)即使在高海拔下诱导至少三次也没有发现任何上述症状。高海拔(HA)居民是来自远古时期的HA永久居民。
实施例3
提取白细胞基因组DNA：
采用盐析方法提取血细胞基因组DNA。在高盐存在下溶解血红细胞后，用细胞核裂解缓冲液(NLB)处理。采用改进的盐析方法，沉淀蛋白质并提取外周血白细胞DNA。测定样品波长260nm光密度，确定DNA的浓度(Miller SA等1988)。
实施例4
鉴定iNOS基因的等位基因变体：
本实施例描述了用本发明的寡核苷酸引物作PCR和序列测定来鉴定iNOS基因的等位基因变体。然后用以下寡核苷酸引物通过聚合酶链反应扩增该DNA：
1. 5′CAG CGG AGT GAT GGC AAG CAC GAC3′(如SEQ ID NO：2所示)和
2. 5′GAT GCA CAG CTG GGG AAC AAG ACG3′(如SEQ ID NO：3所示)。
采用以下条件进行聚合酶链反应：
步骤1，94℃4分钟
步骤2，94℃30秒
步骤3，62.5℃30秒
步骤4，72℃45秒
步骤5，步骤2的34倍
步骤6，72℃持续10分钟
在Perkin Elmer GeneAmp PCR系统9600中进行PCR。用2％琼脂糖凝胶电泳分析该反应产生的258bp DNA片段。采用Amersham Pharmacia凝胶提取试剂盒(Amersham)纯化切割自琼脂糖凝胶条带中的PCR产物，并且，在ABI Prism 377自动化DNA测序仪上用染料终止化学法对PCR产物的两条链进行直接测序。PCR产物与人iNOS基因序列相同，除了表1所示的一对新碱基改变外。
实施例5
iNOS基因的等位基因变体的核苷酸序列：
使用如实施例1所述的方法，得到iNOS基因的等位基因变体的核苷酸序列：
5’CAG CGG AGT GAT GGC AAG CAC GAC TTC CGG GTG TGG AAT GCT CAG
CTC ATC CGC TAT GCT GGC TAC CAG ATG CCA GAT GGC AGC ATC AGA
GGG GAC CCT GCC AAC GTG GAA TTC ACT CAG GTA CCC GGC CCA GCC
TCA GCC A*/GCC GGC CAT TGG GGC GGG GAG CCC CGT GGT GAG CGA GTG
ACA GAG TGG AGC CCA GAG GAG ACA CGC AGC CCG GGC TTA CAG ACT
在上述序列中，SNP*以黑体表示。
实施例6
G等位基因与适应性相关，A等位基因与疾病相关：
采用如实施例4所述的方法，对一系列提取自HA本地居民、HAPE对照和HAPE患者的DNA样品进行测定。发现G等位基因与HA适应性以及A等位基因与疾病高度明显相关。结果小结于下表：
| 相关性 | X2值 | p值 | 差额比 | 95％Cl | 相对风险 |
| HAPE患者与HAPE对照HAPE患者与HA本地居民HAPE对照与HA本地居民 | 10.6333.967.42 | 0.001＜0.0010.006 | 2.566.29- | 1.45-4.543.30-12.01- | 1.66(1.21-2.27)3.22(2.05-5.06)- |
因此，具有GG基因型的个体是HAPE低风险，而具有AA基因型的个体是HAPE高风险，也可推断到其它人群。
实施例7
含iNOS变体序列的核酸载体：
制备含有一个或多个表1所示多态性位点的iNOS基因的等位基因变体转染的载体和宿主细胞，如下所述。
变体基因可在表达载体中表达，该载体中，变体基因与天然启动子或其它启动子可操作性相连接。通常，所述启动子是能在哺乳动物细胞中表达的真核细胞启动子。转录调控序列一般包括可被宿主识别的异源启动子和任选的增强子。合适的启动子如trp、lac、噬菌体启动子、糖酵解酶启动子和tRNA启动子的选择取决于所选宿主。也可使用市售表达载体。合适的宿主细胞包括细菌，如大肠杆菌、酵母菌、丝状真菌；昆虫细胞；哺乳动物细胞，一般无限增殖的细胞，例如小鼠、CHO、人和猴细胞系及其衍生细胞。优选宿主细胞能够加工该变体基因产物，产生适当的成熟多肽。
本发明的优点：
本发明对治疗HAPE具有以下附加的优点。
1.可诱导的一氧化氮合酶可作为HAPE研究的一种新标记物。
2.负责扩增含新的SNP的PCR产物的新型引物序列。
3.可用于进一步相关性研究的新SNP(19480A/G)。
4.野生型等位基因(A)与该病明显相关(表2和3)。
5.突变等位基因(G)与适应性明显相关(表2和3)。
6.HA本地居民和HAPE对照的等位基因频率之间存在明显的差异(表2和3)。
7.G等位基因的存在使个体患此病的可能性减小。
8.可帮助个体出于各种原因决定是否访问高海拔地区。
下面提供了SEQ ID No.1、2和3的序列表信息
序列表
一般信息：
申请人：CSIR
发明名称：检测高原肺水肿(HAPE)易感性的方法
序列编号：03
通讯地址：lnstitute of genomics and integrative biology，CSIR，DelhiUniversity Campus，MallRoad-110007，lndia.
电话：+91-11-27666156 传真：+91-11-27667471
SEQ ID NO.1的信息
1.序列特征：
1.长度：258bp
2.类型：DNA
5’CAG CGG AGT GAT GGC AAG CAC GAC TTC CGG GTG TGG AAT GCT CAG
CTC ATC CGC TAT GCT GGC TAC CAG ATG CCA GAT GGC AGC ATC AGA
GGG GAC CCT GCC AAC GTG GAA TTC ACT CAG GTA CCC GGC CCA GCC
TCA GCC A*/GCC GGC CAT TGG GGC GGG GAG CCC CGT GGT GAG CGA GTG
ACA GAG TGG AGC CCA GAG GAG ACA CGC AGC CCG GGC TTA CAG ACT
CAC AGG GCC CGT CTT GTT CCC CAG CTG TGC ATC 3’
3.生物体：智人(人类)
4.直接来源：PCR
5.名称/关键词：标记区域
6.序列编号1
SEQ ID NO：2的信息
1.序列特征：
长度：24bp
类型：DNA
5′CAG CGG AGT GAT GGC AAG CAC GAC 3′
生物体：人工序列
直接来源：合成
名称/关键词：合成的寡核苷酸
序列编号2
SEQ ID NO：3的信息
1.序列特征
长度：24bp
类型：DNA
5′GAT GCA CAG CTG GGG AAC AAG ACG 3′
生物体：人造序列
直接来源：合成
名称/关键词：合成的寡核苷酸
序列编号3
参考文献
1.Houston CS.急性高原肺水肿(Acute pulmonary edema of highaltitude).N Engl J Med 1960；263：478-480.
2.Bartsch P.高原肺水肿(High altitude pulmonary edema).Respiration1997；64：435-443.
3.Bartsch P，Vock P等，高海拔下呼吸症状、X光图像和生理学相关性。(Respiratory symptoms，radiographic and physiologic correlations at highaltitude).Hypoxia：the adaptations.1990；241-245.
4.Hackett PH，Roach RC.高海拔药物(High altitude medicine).JWilderness Med 1990；1：3-26.
5.Lobenhoffer HP，Zink RA等，高原肺水肿：分析116个病例(Highaltitude pulmonary edema：analysis of 166 Cases)：High altitude physiologyand medicine New York，NY：Springer-Verlag；1982：219-231.
6.Scherrer U，Vollenweider L等，高原肺水肿吸入的一氧化氮(Inhalednitric oxide for high altitude pulmonary edema).N Engl J Med 1996；334：624-629.
7.Bartsch P，Maggiorini M等，硝苯地平治疗高原肺水肿(Prevalence ofhigh altitude pulmonary edemaby nifedipine.N Engl J Med 1991；325：1284-1289.
8.Palmer RMJ，Ferrige AG，Moncada S(1987)，与内皮细胞衍生舒张因子生物学活性有关的一氧化氮释放(Nitric Oxide release accounts for thebiological activity of endothelium derived relaxing factor).Nature 327：524-526.
9.Tomas C.Bellamy，John Wood等，一氧化氮活化可溶性鸟苷环化酶(On the activation of soluble guanylyl cyclase by nitric oxide).PNAS 200299：507-510.
10.Anand IS，Prasad BAK等，高原肺水肿中吸入NO和O2的作用(Effects of inhaled NO and O2 in high altitude pulmonary edema).Circulation1998；98：2441-2445.
11.Goldstein I，Lue TF.口服西地那非治疗勃起功能障碍(Oral sildenafilin the treatment of erectile dysfunction).N Engl J Med 1998；338：1397-1404.
12.Busch T，Bertsch P等，易患高原肺水肿的登山者吸入一氧化氮后缺氧降低(Hypoxia decrease exhaled nitric oxide in mountaineers susceptibleto high altitude pulmonary edema).Am J Respir Crit Care Med 2001；163：368-373.
13.Michel T，Feron O.一氧化氮合酶：是什么、在那里、怎么样起作用和为什么？(Nitric Oxide synthases：which，where，how，and why？)J ClinInvest.1997；100：2146-2152.
14.Xia Y，Roman LJ等，可诱导的一氧化氮合酶从还原酶结构域产生超氧化物(Inducible nitric-oxide synthase generates superoxide from thereductase domain).J Biol Chem.1998；273：635-22639.
15.MA Qadar Pasha，AP khan，Ratan Kumar，SK Grover，RB Ram，TNorboo，KK Srivastava，WSelvamurthy，SK Brahmachari.插入血管紧张素转化酶等位基因与高海拔适应性相关(Angiotensin Converting enzyme insertionallele in relation to High altitude adaptation).Ann Hum Genet 2001；65(6)：531-536.
16.Hackett PH，Roach RC等，高海拔疾病(High altitude illness).N EnglJ Med 2001；345(2)：107-113.
17.Droma Y，Hanaoka M等，内皮一氧化氮合酶基因多态性与高原肺水肿的正相关(Positive Association of the Endothelial Nitric Oxide SynthaseGene Polymorphisms With High-Altitude pulmonary edema).Circulation2002；106：826-830.
18.Monti LD，Barlassina C.内皮一氧化氮合酶多态性与2型糖尿病和胰岛素耐受综合征的相关性(Endothelial Nitric Oxide synthase polymorphismsare associated With Type 2 Diabetes and the lnsulin resistance syndrome).Diabetes.2003；52(5)：1270-1275.
19.Via M，Lopez-Alomar A.西班牙人群中eNOS基因多态性与缺血性心脏病之间缺乏相关性(Lack of association between eNOS genepolymorphisms and ischemic heart disease in the Spanish population).Am JMed Genet 2003；30：116A(3)：243-8.
20.Miller，S.A.，Dykes，D.D等，提取人有核细胞DNA的简单盐析方法(A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleatedcells).Nucleic Acids Research 1988；16：1215.
Claims (7)
1.一种检测高原肺水肿(HAPE)易感性的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)通过监测高原肺水肿相关症状选择研究对象，
(b)用常规方法提取研究对象白细胞的基因组DNA，
(c)分别设计和合成SEQ ID No.2和SEQ ID No.3正向和反向寡核苷酸引物，扩增SEQ ID No.1人iNOS基因的内含子7，
(d)与已有的人iNOS基因序列进行比较，用计算机鉴定新的单核苷酸多态性(SNP)，
(e)用上述SEQ ID No.2(正向引物)和SEQ ID 3(反向引物)的引物筛检高海拔居住人群(HA本地居民)、低地居民(HAPE对照)和低地HAPE患者的新单核苷酸多态性，
(f)计算步骤(d)人群中AA、AG和GG基因型的频率，建立基因型与高海拔肺水肿的相关性，以及
(g)预测并统计学分析人群中所述等位基因变体(AA、AG和GG基因型)的分布差异，其中，19480位是GG基因型时高原肺水肿低风险，19480位是AA基因型时该病高风险。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述能够扩增人iNOS基因内含子7的寡核苷酸引物选自：
(a)5′CAG CGG AGT GAT GGC AAG CAC GAC 3′(SEQ ID No.2)，正向引物，和
(b)5′GAT GCA CAG CTG GGG AAC AAG ACG 3′(SEQ ID No.3)，反向引物
3.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述含有一个或多个多态性位点的寡核苷酸引物选自：
(a)5′CAG CGG AGT GAT GGC AAG CAC GAC 3′(SEQ ID No.2)，正向引物，和
(b)5′GAT GCA CAG CTG GGG AAC AAG ACG 3′(SEQ ID No.3)，反向引物。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述iNOS基因等位基因变体具有AA、AG和GG基因型。
5.一种检测具有高原肺水肿(HAPE)易感性的SNP基因型的诊断试剂盒，所述试剂盒包括以下引物和探针：
(a)5′CAG CGG AGT GAT GGC AAG CAC GAC 3′(SEQID No.2)，正向引物
(b)5′GAT GCA CAG CTG GGG AAC AAG ACG 3′(SEQ ID No.3)，反向引物。
6.一对适合扩增含一个或多个多态性位点的iNOS基因区域的引物，所述引物包括：
(a)5′CAG CGG AGT GAT GGC AAG CAC GAC 3′(SEQ ID No.2)，正向引物，
(b)SEQ ID 3：5′GAT GCA CAG CTG GGG AAC AAG ACG 3′(SEQ IDNo.3)，反向引物。
7.含iNOS基因等位基因变体的核酸载体。
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