CN1486715A - 银杏叶粉针剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种银杏叶提取物粉针剂，它含有银杏叶提取物1重量份，羟基丙基倍他环糊精1－4重量份，本酸碱调节剂葡甲胺或碳酸氢钠0.02－0.08重量份。它的制备方法是：取银杏叶提取物，加入羟丙基倍他环糊精按比例混匀，加入酸碱调节剂，过滤，滤液经50000－150000道尔顿超滤膜超滤，超滤液直接无菌冷冻干燥或无菌喷雾干燥而成粉针剂。本制剂在充分保留有效成分基础上，有效去除原提取物中的大分子、热原、微粒(包括树脂脱落物)、微生物等杂质，制剂安全性和稳定性显著提高。

Description

银杏叶粉针剂及其制备方法

(技术领域)

本发明涉及一种银杏叶提取物粉针剂及该银杏叶提取物粉针剂的制备方法，属中药领域。

(背景技术)

银杏叶，为银杏科银杏属植物银杏(Ginkgo biloba L.)的叶子。银杏是我国特产植物，是现存古代孑遗植物之一。银杏叶的提取物对治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病、心肌梗塞、扩张脑血管、增加脑血流量、治疗缺血性脑病有一定的作用。现代医学研究证明，银杏叶及其它部位含有黄酮类化合物、萜类化合物等多种活性化学成份，具有多方面的生理活性作用。据报道，银杏叶中的主要黄酮类化合物槲皮素、山柰酚和异鼠李素等对于改善心、脑血液循环，降低血清胆固醇，松驰支气管有很好的疗效。目前人们已从银杏叶中分离出银杏内酯A、B、C、白果内酯等，1983年Picrrg G Braquct发现，银杏内酯B(Ginkgolide B)具有高度专属性的PAF拮抗剂，该实验是在家兔血小板细胞膜上分离的PAF受体进行，实验结果证明，银杏内酯B对由PAF引起的豚鼠支气管收缩、红细胞比容增加、血小板和淋巴细胞减少都有抑制作用。银杏内酯治疗喘息性气管炎总有效率为97％，作为PAF拮抗剂已受到当今世界的关注。据文献报道，从银杏叶中提取得到的银杏内酯类化合物，有希望用来拮抗异体器官移植后人体的排异作用。

目前，银杏叶制剂有多种，其中银杏叶提取物冻干粉针剂存在以下主要缺点：将冻干前药物溶液调节成碱性，使银杏内酯开环溶解，并使黄酮成盐。药液调节成碱性后，银杏内酯开环会引起各内酯成分之间的相互转化而不稳定，黄酮成盐后也容易氧化，会使制剂的质量差异较大。该银杏叶冻干粉针剂没有采用超滤工艺，银杏叶提取物中的对制剂安全性有影响的杂质(大分子、热原、微粒、微生物等)难以去除，会影响注射剂的安全性。

(发明内容)

本发明的目的在于提供一种治疗脑中风有确切疗效的银杏叶提取物粉针剂，它能克服现有银杏叶提取物冻干粉针剂的上述缺点，具有高纯度，高疗效，高安全性和稳定性的特点。提高药效。

本发明的另一个目的还在于提取上述银杏叶粉针剂的制备方法，以有效除去大分子有害成分，保留有效成分，使制剂安全、稳定、疗效高。

本发明银杏叶粉针剂含有银杏叶提取物1重量份，羟基丙基倍他环糊精1-4重量份，酸碱调节剂葡甲胺或碳酸氢钠0.02-0.08重量份。上述银杏叶提取物符合《中国药典》2002年增补版规定的银杏叶提取物质量标准。

本发明银杏叶粉针剂的制备方法按如下步骤：

取银杏叶，粉碎成粗粉，用浓度为40％～80％(重量)乙醇溶液在60～70℃下温浸提取，减压回收乙醇，浓缩，加水稀释，静置，滤过；滤液通过大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗至流出液无色，用稀乙醇洗脱，收集洗脱液，减压干燥回收乙醇，精制，得银杏叶提取物；取该银杏叶提取物1重量份，逐渐加入羟丙基倍他环糊精1-4重量份，高速分散混匀；取0.02-0.08重量份的酸碱调节剂用0.4-1.6重量份水溶解后，慢慢加入高速分散下的上述混合物中，调节pH值至6-7，该酸碱调节剂为葡甲胺或碳酸氢钠中的一种，混匀；静置，过滤；将以上滤液以50000-150000道尔顿滤膜超滤，所得超滤液中补充注射用水42-55重量份，无菌分装于灭菌西林瓶中，冷冻干燥，压塞，压盖，即得本发明银杏叶冻干粉针剂。本发明也可以将超滤液无菌喷雾干燥后分装于西林瓶中，压塞，压盖，即得本发明银杏叶无菌喷雾粉针剂。

本发明制备工艺中采用了羟丙基倍他环糊精包合技术，增加银杏叶提取物在水中的溶解度，有效地助溶其中的水不溶性成分，增加了制剂的均一性及稳定性，使银杏叶提取物充分溶解成真溶液，以便于进行超滤提纯；采用葡甲胺或碳酸氢钠作为酸碱调节剂，将药液调节成近中性，可以避免银杏内酯开环变化；选用一定分子量通量的超滤膜，充分保留银杏内脂及银杏黄酮苷类等有效成分及对原提取物中的大分子、热原、微粒、微生物等严重影响注射液安全性的杂质的高去除率，特别是银杏叶提取物采用在大孔吸附树脂工艺，生产时会有树脂脱落物的微粒，经过超滤工艺可去除树脂微粒，显著地提高了制剂的安全性和稳定性；此外，羟丙基倍他环糊精还是很好的成型剂，该包合技术制成的药液不但适用于冻干干燥工艺，也非常适用于喷雾干燥工艺，因此该药液可采用冷冻干燥或无菌喷雾干燥技术，药液在干燥过程中不破坏其中有效成分，得到同样品质的粉针剂，保证药物的疗效。

实施例一  银杏叶冻干粉针剂的制备

取银杏叶粗粉，加8倍量的浓度为60％(重量)的乙醇溶液，在60～70℃温度下温浸3小时，滤过。滤渣中加入7倍量的60％浓度的乙醇溶液，在60～70℃温度下温浸2小时，滤过。合并以上两滤液，滤液减压干燥，使物料浓缩至原体积的三分之一，并回收乙醇。该浓缩后的物料加水稀释至原体积的二倍，放置24小时，滤过。滤液通过大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗至流出液无色，以浓度为80％的乙醇溶液为溶剂洗脱，收集洗脱液，减压干燥回收乙醇，并直至除去水分，精制，得银杏叶提取物。

取银杏叶提取物88g，加3000ml注射用水(50～70℃)，搅拌，逐渐加入羟丙基倍他环糊精176g，高速分散混匀；取葡甲胺5.72g用100ml水溶解，在高速分散时，慢慢加入，混匀；静置，过滤；滤液经通量为10万分子量的超滤膜超滤，在所得超滤液中补充注射用水至4000ml，将其无菌分装于灭菌西林瓶中，每瓶4ml，冷冻干燥，压塞，压盖，即得本发明银杏叶冻干粉针剂。

实施例二  银杏叶喷干粉针剂的制备

采用实施例一相同方法获得超滤液，在超滤液中补充注射用水至5000ml，随后无菌喷雾干燥，得喷干粉，喷干粉无菌分装于西林瓶中，每瓶268mg，压塞，压盖，即得本发明银杏叶喷干粉针剂。

实施例三  银杏叶冻干粉辅料的选择

按实施例一的工艺得银杏叶提取物，取银杏叶提取物三组，每组88mg，三组银杏叶提取物分别按1.5、2.0、2.5倍量加入羟丙基倍他环糊精，并用葡甲胺调节pH值至6-7，其余步骤与实施例一的制粉针剂工艺相同。将超滤药液按每瓶4ml、6ml容积分装，冻干(先-15℃冷冻2小时，待冻结后再以-40℃预冻3小时，置小型冷冻干燥器中冻干48小时)，观察粉针剂成型性，见表1。

                   表1不同辅料量对成型性影响分析

药液体积(ml)	HD-β-环糊精(mg)	制剂品质
			4	132176220	粉针成型稍差，无明显结块，块状物疏松，孔隙大、色泽不均匀。粉针成型良好，无明显结块，疏松度疏松，孔隙、色泽均匀。粉针成型时，有明显结块，部分有萎缩状，有大隙裂，冻干时间明显延长。
6	132176220	粉针成型稍差，无明显结块，块状物疏松但不均匀，孔隙大，冻干时间长。粉针成型稍好，无明显结块，有一定疏松度，孔隙、色泽不均匀，冻干时间长。粉针成型良好，无明显结块，疏松、均匀，但冻干时间很长。

从表1可知，辅料羟丙基倍他环糊精加入量不同，对粉针剂成型性有不同的影响，当按4ml药液分装时，羟丙基倍他环糊精用量为176mg(即银杏叶浸膏粉的2倍用量〕的一组，粉针成型良好，无明显结块，疏松度疏松，孔隙、色泽均匀。当按6ml药液分装时，则羟丙基倍他环糊精用量为220mg(即3倍用量的一组〕较佳，但所需冻干时间很长。据此，本发明制银杏叶粉针剂的优选条件为β-环糊精用量为银杏叶浸膏粉的2倍重量份，按4ml药液分装。超滤时能去除热原、细菌、树脂脱落微粒等，提高注射液的安全性，特别是粉针剂此后不能再进行消毒，因此超滤工艺过程尤为重要。

实施例四  银杏叶冻干粉超滤条件的选择

选用卷式超滤聚砜膜主件，采用不同分子量的膜进行超滤试验，检测超滤前后药液中总黄酮醇苷和萜类内酯的含量，发现因现内脂分子量较小，1万以上分子量膜超滤对总内酯含量影响不大，但对黄酮苷成分影响较明显。本例以药液总黄酮醇苷含量为指标，对各试验样品进行不同分子量超滤膜优选比较，计算相对转移率。实验结果见表2。

                       表2超滤试验结果分析

           试验号             膜分子量         总黄酮醇苷转移率(％)

             1                 10000                53.10

             2                 50000                73.22

             3                 100000               98.01

    注：表中“膜分子量”是膜孔径指标，是指可透过该膜的物质的分子量

由表2可知，不同孔径膜对黄酮成分有不同程度的截留影响。膜分子量越小，黄酮成分的转移率相应地减少，而且10000分子量膜对其总黄酮的转移率影响显著，成分截留近50％，而膜分子量100000时，则对成分影响不明显，膜分子量50000时，药液需经过反复加纯水压滤的操作方式也可以较好地维持原有效成分。因此选用对成分影响较小的分子量为100000的膜进行超滤。

实施例五  银杏叶粉针剂主动过敏性试验

取健康无伤雄性豚鼠6只，按无菌操作方法，给每只豚鼠隔日后腿肌肉注射受试药物0.5ml，共注射3次，然后均分成两组，每组3只。第一组于首次肌肉注射受试药物后的第14日，再从颈静脉注射受试药物2ml；第二组于首次肌肉注射受试药物后的第21日同法进行攻击。在攻击给药后12小时内观察有无抓鼻、坚毛、呼吸困难、痉挛、休克甚至死亡等过敏反应症状。标准评分为：0分：无明显反应；1分：只有轻微抓鼻、颤抖或竖毛；2分：有几次咳嗽、有抓鼻、颤抖或竖毛；3分：多次或连续咳嗽、伴有呼吸困难或痉挛、抽搐等；4分：痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡。结果判定：评分≥2时，为过敏试验阳性。试验结果表明受试药两次攻击试验结果均为阴性。

实施例六  银杏叶粉针剂被动过敏性试验

取200±20g雄性大鼠，将卡介苗(佐剂)1支加2倍量生理盐水稀释后，加入天花粉充分混匀成2.5mg/mL，每鼠注射0.4mL，分别注射0.1mL于大鼠足跖部位，其余部分多点注射于肌肉和皮下。各粉针剂组先按要求将粉针配制成相应注射液，然后将卡介苗以两倍量药液稀释后，每鼠注射0.4mL，方法同天花粉组。将各粉针剂和天花粉分别致敏4只大鼠。注射后10天经颈动脉取血，离心分离抗血清，置-4℃以下保存备用。

另取200±20g正常大鼠，背部去毛，分别于皮下注射由各粉针剂及天花粉溶液致敏的抗血清0.1mL/点，48h后分别静脉注射以1％伊文思蓝配制天花粉溶液(2mg/mL)1mL/200g，和以各粉针剂配制的伊文思蓝(伊文思蓝含量为1％)溶液1mL/200g。30min后处死动物，翻转背部皮肤，测量并记录蓝色反应斑直径大小，蓝斑直径在5mm以上者判定为阳性。

                     表3蓝斑面积的实验结果

           试验药物                          蓝斑直径(mm)

           超滤的银杏叶粉针剂                2.4±0.55

           未超滤的银杏叶粉针剂              4.7±0.83

           天花粉阳性对照                    25.0±3.08

由表3可见，阳性化合物天花粉的蓝斑直径均大于20mm呈强阳性反应，经超滤的银杏叶粉针剂诱发的蓝斑的直径远远均小于5mm，属于不会诱发速发性变态的药物范围。未超滤的银杏叶粉针剂诱发的蓝斑的直径接近于5mm，有诱发速发性变态的潜在危险。

实施例七  银杏叶粉针剂热原检查试验

选取健康家兔按中国药典附录XIII A法检验，用MC-3B电脑数字式体温计测量各兔肛门体温，结果如表4。

                        表4  热原检查的试验结果

给药组	给药前体温(℃)	给药后体温(℃)	最高体温℃	体温升高总数(℃)
					1小时   2小时   3小时
		超滤的粉针				38.738.239.3	38.9    38.8    38.738.4    38.4    38.339.2    39.5    39.4	38.938.639.5	0.30.50.2
未超滤粉针	38.638.539.1		38.9    39.2    38.838.9    39.1    38.839.6    39.3    39.5	39.239.139.6	1.11.31.1

由表4可见，家兔注射经超滤的粉针，体温升高不明显；而注射未经超滤的粉针，体温略有升高；结果表明，溶液经过超滤可以除去热原，保证制剂的安全性。

Claims (6)

1、银杏叶粉针剂，其特征是含有银杏叶提取物1重量份，羟基丙基倍他环糊精1-4重量份，酸碱调节剂葡甲胺或碳酸氢钠0.02-0.08重量份。

2、根据权利要求1的银杏叶粉针剂，其特征是含羟基丙基倍他环糊精2重量份。

3、一种权利要求1的银杏叶粉针剂的制备方法，先按如下步骤制银杏叶提取物：取银杏叶，粉碎成粗粉，用浓度为40～80％(重量)的乙醇溶液在60～70℃下温浸提取，减压回收乙醇，浓缩，加水稀释，静置，滤过；滤液通过大孔吸附树脂吸附，用蒸馏水冲洗至流出液无色，用稀乙醇洗脱，收集洗脱液，减压干燥，得银杏叶提取物；其特征是继续按如下步骤：取银杏叶提取物1重量份，逐渐加入羟丙基倍他环糊精1-4重量份，高速分散混匀；取酸碱调节剂葡甲胺或碳酸氢钠0.02-0.08重量份用0.4-1.6重量份水溶解后，高速分散下慢慢加入混匀，调节pH值至6-7；静置，过滤；将滤液以50000-150000道尔顿滤膜超滤，所得超滤液中补充注射用水42-55重量份，药液无菌干燥，即得本发明银杏叶粉针剂。

4、根据权利要求3的银杏叶粉针剂的制备方法，其特征是将滤液以100000道尔顿滤膜超滤。

5、根权利要求3或4的银杏叶粉针剂的制备方法，其特征是所说的无菌干燥是将药液无菌分装于灭菌西林瓶中，冷冻干燥得银杏叶冻干粉针剂。

6、根据权利要求3或4的银杏叶粉针剂的制备方法，其特征是所说的无菌干燥是将药液无菌喷雾干燥，得银杏叶喷干粉针剂，喷干粉无菌分装于西林瓶中。