CN1483814A - 一种用细菌生产岩藻聚糖硫酸酯酶的方法 - Google Patents
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Abstract
一种用细菌生产岩藻聚糖硫酸酯酶的方法,包括把菌株接入含海藻粉发酵液培养基中,在一定温度下培养一定时间,然后投入提酶剂,使产生的沉淀物下沉,再进行分离,最后冷冻干燥,其特征是所用的菌种为河弧菌Vibrio fluvialis。本发明用的菌种具有营养要求范围广,容易培养和代时短的特点,特别是具有高的产酶活性,其发酵液酶活力为226U/ml。用本发明的方法生产的岩藻聚糖硫酸酯酶为内切和外切两类,降解岩藻聚糖硫酸酯可得到岩藻聚糖硫酸酯低聚糖、双糖、单糖。该酶产品的活性高,稳定性好,成本低,能够实现工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种用细菌生产岩藻聚糖硫酸酯酶的方法。
背景技术
据本发明人所知,岩藻聚糖硫酸酯酶在制备具有不同分子量的岩藻聚糖硫酸酯低聚糖、双糖、单糖等方面显示出极其重要的作用,它对一些海洋药物的研制和工业化生产有决定性的意义。目前,已经有人用Vibrio sp,N-5得到外切型岩藻糖酶。另有人用Bacillus等其它微生物生产岩藻糖酶。但用这些菌种产酶时间长,产出的酶活性低,培养成分复杂,难适于工业化生产。
发明内容
本发明的目的是提供一种用河弧菌生产岩藻聚糖硫酸酯酶的方法,它能克服现有技术的上述缺点。
将河弧菌用于生产岩藻聚糖硫酸酯酶。
一种用细菌生产岩藻聚糖硫酸酯酶的方法,包括把菌株接入含海藻粉发酵液培养基中,在一定温度下培养一定时间,然后投入提酶剂,使产生的沉淀物下沉,再进行分离,最后冷冻干燥,其特征是所用的菌种为河弧菌Vibrio fluvialis。
本发明用的菌种具有营养要求范围广,容易培养和代时短的特点,特别是具有高的产酶活性,其发酵液酶活力为226U/ml。用本发明的方法生产的岩藻聚糖硫酸酯酶为内切和外切两类,降解岩藻聚糖硫酸酯可得到岩藻聚糖硫酸酯低聚糖、双糖、单糖。该酶产品的活性高,稳定性好,成本低,能够实现工业化生产。
具体实施方式
本发明用的河弧菌
Vibrio fluvialis菌株为弧形,端生单鞭毛,G-,菌落圆形,乳白色。培养该菌采用的培养基为海水细菌培养基2216E,培养基的组分为酵母膏1克,蛋白胨5克,磷酸高铁0.01克,琼脂15克,陈海水1000ml,其pH为7.6-7.8。本发明所用的产酶培养基为上述培养基,另外又加入0.8-1.5%(按重量,以下同)的海藻粉,培养20小时即可得到酶液。上述河弧菌的保藏单位为中国典型培养物保藏中心,简称CCTCC,地址:中国武汉、武汉大学,保藏日期为2000年6月5日。保藏号为M200015。
将河弧菌用上述2216E培养基活化后,以5%的接种量接入装有100ml含有1%藻粉培养基的500ml三角瓶中,26℃摇瓶培养18-24h后,将该培养液用冷冻离心机以4000rpm离心10分钟去除菌体,获得发酵酶液。将该酶液于4℃冰箱中加入(NH4)2SO4至80%的饱和度,4℃下沉淀24h,冷冻离心收集沉淀,该沉淀经冷冻干燥后制成粗酶制剂。所述的培养温度为18-28℃,
Claims (3)
1、将河弧菌Vibrio fluvialis用于生产岩藻聚糖硫酸酯酶。
2、一种用细菌生产岩藻聚糖硫酸酯酶的方法,包括把细菌接入海藻粉发酵液中,在一定的培养温度下培养一定时间,然后投入提酶剂,使产生的沉淀物下沉,再进行分离,最后冷冻干燥,其特征是所用的菌种为河弧菌Vibrio fluvialis。
3、权利要求2所述的方法,其特征是所述的培养温度为18-28℃,所述的培养时间为18-24小时,所述的提酶剂为(NH4)2SO4。
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