CN1467204A

CN1467204A - 益母草总生物碱的制备方法及药物新用途

Info

Publication number: CN1467204A
Application number: CNA021239673A
Authority: CN
Inventors: 伟萧; 萧伟; 戴翔翎; 凌娅; 詹永成; 刘涛; 廖正根
Original assignee: Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2002-07-10
Filing date: 2002-07-10
Publication date: 2004-01-14

Abstract

本发明公开了益母草总生物碱的制备方法，该方法为，取益母草煎煮2－3次，提取浓缩液加乙醇沉淀12～48小时，滤液加入树脂柱(床〕，水冲洗后，用盐酸或碱冲洗，洗脱液浓缩后精制即得总生物碱。本发明还公开了益母草总生物碱在制备治疗子宫内膜异位症和制备降低雌激素水平的药物中的应用。

Description

益母草总生物碱的制备方法及药物新用途

技术领域：

本发明涉及一种益母草总生物碱的制备方法及药物新用途，特别是涉及一种益母草总生物碱在制备治疗子宫内膜异位症及降低雌激素水平的药物中的应用。

背景技术：

目前国内外治疗子宫内膜异位症的方法很多，如期待疗法、药物疗法、手术疗法、药物与手术综合疗法等。手术治疗虽可缓解疼痛，但复发率高。在药物治疗方面，国外多采用丹哪唑(Danazol)假绝经疗法，这种方法是通过药物减少病灶的活性，使其逐渐消失。此法在改善病情及继续使用率方面均比假孕疗法效果好。尽管丹哪唑是当今治疗子宫内膜异位症普遍使用的药物，但它的缺点是会造成低雌激素环境，从而引起异位内膜退变，由此出现阵热、潮红、骨质丢失等副反应，同时还影响患者的肝功能及血小板、血红蛋白的产生，往往在治疗早期即可引起肝功能的损害。

中医治疗子宫内膜异位症多用复方，常用的有活血化瘀法方用三棱，莪术、生蒲黄、王灵脂、桃仁等、补肾祛瘀法，方用仙灵脾、仙茅、熟地、山药、鸡血藤、丹参、香附、三棱、莪术等，也常用棉酚以及雷公藤多甙、异位安等。

技术内容：

本发明目的在于提供一种益母草总生物碱的制备方法；本发明目的还在于提供一种益母草总生物碱在制备治疗子宫内膜异位症及降低雌激素水平的药物中的应用。

本发明益母草总生物碱的制备方法为：取益母草，分别加水8-12倍加热煎煮2-3次，每1.5～2小时，提取液合并浓缩至密度d-1.0～1.10，浓缩液加乙醇至含醇60-80％，沉淀12～48小时，滤过，滤液回收乙醇完全；浓缩液加乙醇至含醇60-80％，沉淀12～48小时，滤过，滤液回收乙醇完全，加盐酸调至PH＝1～3，冷藏12～48小时，滤过；滤液加入阳离子交换树脂柱(床〕，用蒸馏水或去离子水冲洗至水液清亮，水液蒸干至无内容物后，用盐酸或碱冲洗树脂柱，至用生物碱检测试剂检测无生物碱为止；洗脱液浓缩后精制，即浸膏加乙醇热提取，滤过，提取液浓缩得总生物碱。

精制还可以是浸膏酸水溶解，调PH＝1～3后，重复上阳离子交换树脂柱，用蒸馏水或去离子水冲洗至水液清亮，水液蒸干至无内容物后，用盐酸或碱冲洗树脂柱，至用生物碱检测试剂检测无生物碱为止，洗脱液浓缩得总生物碱。

本发明方法制备的总生物碱用雷氏胺盐沉淀法检测生物碱含量大于50％；用药典法检测水苏碱含量大于20％。

本发明是通过如下科学实验完成的。实验例1：观察益母草总生物碱对大鼠子宫内膜异位症的影响

一、方法：利用大鼠自体子宫异位的方法，观察益母草总生物碱对子宫内膜异位症大鼠性激素E2的影响，并通过光镜、电镜观察异位子宫内膜的形态变化。

1、动物：雌性SD大鼠，150g左右，由南京医科大学实验动物中心提供

2、试剂：益母草总生物碱连云港康缘制药有限公司提供批号：20000914

3、仪器：1470WIZARDTM液闪仪

4、EMT模型制备：取雌性SD大鼠120只，随机分为7组，分别为正常组10只；假手术组10只；模型组；阳性组；益母草总生物碱高、中、低三剂量组每组20只。除正常组外，余各组动物择动情期，建立EMT动物模型。将大鼠以3％戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉，于下腹正中做一垂直切口，挑出右侧子宫角，切除7mm的子宫，于生理盐水中分离子宫内膜，取3mm×3mm大小的子宫内膜片，令其表面上皮对着腹壁，将四角与腹壁肌肉缝合，并将右侧断离之子宫对接缝合，常规关腹消毒，并注射青霉素1万单位/kg。假手术组仅切除子宫，并不将其异位。每日按剂量定时灌胃给药，观察并记录大鼠生长情况。

二、观察指标

1.阴道脱落细胞生理盐水混合阴道分泌物滴片，95％乙醇固定，HE染色，光镜下直接观察阴道脱落细胞角化率。于造模后连续观察4-5天。

2.移植物外观分别于术后第8周剖腹观察内膜移植物生长情况。用双脚圆规测量其直径。

3.雌激素测定于给药后一个月对大鼠眼眶后静脉取血，分离血清，用放射免疫法测定E2水平。

三.实验结果

1.对造模后大鼠进行连续5天的阴道脱落细胞观察，结果显示大鼠发情周期并未因异位内膜移植而改变。

2.于术后8周对大鼠腹内异位子宫内膜进行观察，结果显示各大鼠内膜贴壁生长良好，呈丘疹形，透明，内有液体，说明本发明模型组造模成功(见表1〕。

表1甲生物碱对大鼠异位子宫内膜的影响

组别剂量动物数半径(mm)

模型组 -- 9 0.53±0.25

阳性组 0.35 9 0.51±0.25

高剂量组 0.50 9 0.53±0.22

中剂量组 0.25 8 0.44±0.19

低剂量组 0.10 9 0.38±0.27

3.从大鼠血清雌激素测定资料统计可以看出：子宫内膜异位症大鼠E2有明显的升高，模型组与正常组比较有明显的差别(P＜0.01)，表明异位内膜生长良好并已对大鼠体内雌激素水平产生明显的影响，而假手术组未见E2有变化：给药一个月后，益母草总生物碱各剂量组对E2的升高都有较明显的降低作用，说明益母草总生物碱具有治疗子宫内膜异位症的作用(见表2-3〕。

表2甲生物碱对子宫内膜异位症大鼠E₂、PRL的影响组别剂量(g/kg) 动物数 E₂(pg/ml) PRL(mIU/ml)正常组 -- 10 11.96±9.46 1.07±0.95假手术组 -- 8 15.95±16.05 1.71±0.67模型组 -- 18 49.03±31.89## 1.16±0.82阳性组 0.35 15 26.40±19.53^* 1.22±0.55高剂量组 0.50 17 23.50±12.71^* 0.86±0.56中剂量组 0.25 15 21.51±18.31^* 1.10±0.70低剂量组 0.10 17 25.49±17.56^* 1.03±0.67

表3甲生物碱对子宫内膜异位症大鼠FSH、LH的影响组别剂量(g/kg) 动物数 FSH(mIU/ml) LH(ng/ml)正常组 -- 10 0.72±0.48 0.96±0.47假手术组 -- 8 0.88±0.41 1.65±0.61模型组 -- 18 0.89±0.46 1.18±0.66阳性组 0.35 15 0.99±0.52 1.32±0.47高剂量组 0.50 17 1.05±0.50 1.51±0.56中剂量组 0.25 15 0.85±0.51 1.21±0.55低剂量组 0.10 17 0.66±0.45 1.07±0.39

实施例1：

取益母草，分别加水10倍加热煎煮2次，每次1.5～2小时，提取液合并浓缩至密度d-1.7，浓缩液加乙醇至含醇60％沉淀24小时，滤过，滤液回收乙醇完全；浓缩液加乙醇至含醇80％沉淀24小时，滤过，滤液回收乙醇完全；加1mol/L盐酸调至PH＝1～3，冷藏24小时，滤过；滤液加入阳离子交换树脂柱，用蒸馏水冲洗至水液清亮，水液蒸干后无内容物后，用1-3mol/L氨水冲洗树脂柱，至用生物碱检测试剂检测无生物碱为止；洗脱液浓缩后继续精制，浸膏加乙醇热提取，滤过，提取液浓缩得总生物碱。实施例2：

取益母草，分别加水9倍加热煎煮3次，每次1.5～2小时，提取液合并浓缩至密度d-1.5，浓缩液加乙醇至含醇65％沉淀36小时，滤过，滤液回收乙醇完全；浓缩液加乙醇至含醇75％沉淀36小时，滤过，滤液回收乙醇完全；加1mol/L盐酸调至PH＝1～3，冷藏36小时，滤过；滤液加入阳离子交换树脂上，用去离子水冲洗至水液清亮，水液蒸干后无内容物后，用9-12％盐酸冲洗树脂柱，至用生物碱检测试剂检测无生物碱为止；洗脱液浓缩后继续精制，浸膏酸水溶解，调PH＝1～3后，重复上阳离子交换树脂上，用去离子水冲洗至水液清亮，水液蒸干后无内容物后，用盐酸冲洗树脂柱，至用生物碱检测试剂检测无生物碱为止，洗脱液浓缩得总生物碱。

Claims

1、益母草总生物碱的制备方法，其特征在于该方法为，取益母草，分别加水8-12倍加热煎煮2-3次，每1.5～2小时，提取液合并浓缩至密度d-1.0～1.10，浓缩液加乙醇至含醇60-80％，沉淀12～48小时，滤过，滤液回收乙醇完全；浓缩液加乙醇至含醇60-80％，沉淀12～48小时，滤过，滤液回收乙醇完全，加盐酸调至PH＝1～3，冷藏12～48小时，滤过；滤液加入阳离子交换树脂柱(床〕，用蒸馏水或去离子水冲洗至水液清亮，水液蒸干至无内容物后，用盐酸或碱冲洗树脂柱，至用生物碱检测试剂检测无生物碱为止；洗脱液浓缩后精制即得总生物碱。

2、如权利要求1所述的益母草总生物碱的制备方法，其特征在于该方法中的浓缩后继续精制是指浸膏加乙醇热提取，滤过，提取液浓缩得总生物碱。

3、如权利要求1所述的益母草总生物碱的制备方法，其特征在于该方法中的浓缩后继续精制是指浸膏酸水溶解，调PH＝1～3后，重复上阳离子交换树脂柱，用去离子水冲洗至水液清亮，水液蒸干后无内容物后，用盐酸冲洗树脂柱，至用生物碱检测试剂检测无生物碱为止，洗脱液浓缩得总生物碱。

4、如权利要求2所述的益母草总生物碱的制备方法，其特征在于该方法为，取益母草，分别加水10倍加热煎煮2次，每次1.5～2小时，提取液合并浓缩至密度d-1.7，浓缩液加乙醇至含醇60％沉淀24小时，滤过，滤液回收乙醇完全；浓缩液加乙醇至含醇80％沉淀24小时，滤过，滤液回收乙醇完全；加1mol/L盐酸调至PH＝1～3，冷藏24小时，滤过；滤液加入阳离子交换树脂柱，用蒸馏水冲洗至水液清亮，水液蒸干后无内容物后，用1-3mol/L氨水冲洗树脂柱，至用生物碱检测试剂检测无生物碱为止；洗脱液浓缩后继续精制，浸膏加乙醇热提取，滤过，提取液浓缩得总生物碱。

5、如权利要求3所述的益母草总生物碱的制备方法，取益母草，分别加水9倍加热煎煮3次，每次1.5～2小时，提取液合并浓缩至密度d-1.5，浓缩液加乙醇至含醇65％沉淀36小时，滤过，滤液回收乙醇完全；浓缩液加乙醇至含醇75％沉淀36小时，滤过，滤液回收乙醇完全；加1mol/L盐酸调至PH＝1～3，冷藏36小时，滤过；滤液加入阳离子交换树脂上，用去离子水冲洗至水液清亮，水液蒸干后无内容物后，用9-12％盐酸冲洗树脂柱，至用生物碱检测试剂检测无生物碱为止；洗脱液浓缩后继续精制，浸膏酸水溶解，调PH＝1～3后，重复上阳离子交换树脂上，用去离子水冲洗至水液清亮，水液蒸干后无内容物后，用盐酸冲洗树脂柱，至用生物碱检测试剂检测无生物碱为止，洗脱液浓缩得总生物碱。

6、如权利要求1、2、或3所述的益母草总生物碱的制备方法，其特征在于该方法中冲洗树脂柱的碱可以是氨水或氢氧化钠。

7、益母草总生物碱在制备治疗子宫内膜异位症的药物中的应用。

8、益母草总生物碱在制备降低雌激素水平的药物中的应用。