CN1428351A - 小麦1Bx14基因、其编码的蛋白质及其启动子 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种编码小麦1B×14亚基的基因，该基因编码的蛋白质，和引导该基因进行表达的启动子。本发明的1B×14亚基基因最好具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；所编码的蛋白质具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。本发明还提供了一种含有1B×14基因的小麦品种(系)的鉴定方法，和用于该方法的DNA引物。

Description

小麦1Bx14基因、其编码的蛋白质及其启动子

技术领域

本发明涉及小麦1Bx14基因、其编码的蛋白质及其启动子；本发明还涉及一种含有1Bx14基因的小麦品种(系)的鉴定方法以及用于该方法的PCR引物。

技术背景

普通小麦(以下简称为小麦)是世界上最重要的粮食作物之一，由小麦面粉所制备的各类产品(如面包、馒头、面条等)是广大民众的日常食品。由于小麦产品的重要性，各国政府和科学家都一直非常注重小麦的遗传改良和遗传学研究。无论是在传统的遗传学，还是在新兴的功能基因组学研究中，小麦籽粒品质性状的遗传基础与改良一直备受各国研究者的重视。小麦籽粒品质性状包括多个方面，但其中最主要是小麦面粉用于加工食品的性能。影响小麦面粉食品加工性能的主要因素有两个，即面团弹性(dough elasticity)和面团延展性(doughextensibility)。一般说来，面包、方便面、馒头和面条的制备需要面团弹性较好的面粉，饼干和点心的制作需要面团延展性较好的面粉。已有的研究表明面团弹性和面团延展性主要受小麦籽粒中三类储藏蛋白，即高分子量麦谷蛋白(HMW glutenin)，低分子量麦谷蛋白(LMW glutenin)和醇溶蛋白(gliadin)，的控制。高分子量麦谷蛋白和低分子量麦谷蛋白主要影响面团的弹性，而醇溶蛋白则主要影响面团的延展性。目前对于三类储藏蛋白影响面团弹性和延展性的机制已有了初步的了解。在揉面过程中，三类储藏蛋白分子间发生相互作用而形成一种网状结构，即面筋(gluten)，面筋的强度受三类储藏蛋白分子的组成和相对比例的影响，某些类型的高分子量麦谷蛋白和低分子量麦谷蛋白亚基的组合可导致较高的面筋强度和较好的面团弹性，而另外一些醇溶蛋白类型的组合则可导致较好的面团延展性。这些结果表明，从理论上讲，可以通过人为地调节籽粒中三类储藏蛋白分子的组成和相对比例来培育可生产具有不同食品加工性能面粉的小麦品种；但在实际育种工作中，这种设想的成功程度最终主要取决于人们是否拥有尽可能多的、类型丰富的和功能优异的储藏蛋白分子的基因资源。

遗传学研究发现，在普通小麦(2n＝6x＝42)的基因组中，编码高分子量麦谷蛋白的基因主要分布于三个染色体位点：Glu-A1，Glu-B1和Glu-D1(分别位于1AL，1BL和1DL染色体)。在每一个高分子量麦谷蛋白基因位点内存在两个基因，其一编码分子量较大的x型亚基，其二编码分子量较小的y型亚基，因此普通小麦的基因组中共含有六个高分子量麦谷蛋白的基因。但由于等位基因现象和沉默效应的发生，每一类型的x和y型亚基都分别拥有一定数量的，包括零等位在内的(因沉默而不表达的基因)，等位基因，所以在普通小麦品种中一般只有4-5个高分子量麦谷蛋白基因的表达，且不同品种中的高分子量麦谷蛋白亚基的组成亦不相同。

基于上述对三类储藏蛋白的认识，世界各国科学家都相继开展了利用储藏蛋白功能培育具有不同籽粒品质性状与用途的小麦品种的研究。常规育种研究发现由Glu-D1位点编码的1Dx5+1Dy10亚基的表达可导致较强的面筋强度和面团弹性，因此在欧美的面包小麦品种中大多数都有1Dx5+1Dy10亚基的表达。除1Dx5+1Dy10亚基外，由Glu-A1位点编码的1Ax1亚基对面筋强度和面团弹性也有积极影响。利用转基因技术在普通小麦中过量表达1Dx5后发现，在大多数情况下，面筋强度可显著增加，但这种增加却可导致面团具有超常的流变学特性而不适用于常规的面包制作业。过量表达1Ax1亚基同样可影响面团的流变学特性，但其效果要较1Dx5亚基稍差一些。这些结果说明虽然在常规育种中可利用1Dx5+1Dy10亚基或1Ax1亚基来改良面筋强度和面团弹性，但在加工品质改良的分子育种实践中，1Dx5或1Ax1亚基的应用潜力却是有限的。至于过量表达1Dx5或1Ax1亚基后面筋强度超常增加的原因，据推测可能是因为这些亚基的分子结构中因含有数量较多的半胱氨酸残基而导致亚基间过量交连而影响面团吸胀性的缘故。

中国是小麦生产和消耗的大国，小麦遗传改良的成绩显著，遗传资源也比较丰富。中国小麦籽粒的蛋白质含量并不低(很多品种甚至超过欧美材料)，但面筋强度一般偏低，因此加工面包、馒头和面条的品质一般较差。面筋强度偏低的主要原因是高分子量麦谷蛋白亚基的组成不尽合理。近年来，中国科研人员注重了小麦籽粒加工品质的改良工作，并已培育出了一些食品加工性能较好的小麦品种。根据高分子量麦谷蛋白的组成特征，基本可将目前已培育出的食品加工性能较好的小麦品种分为两大类。一类品种中含有Glu-D1位点编码的1Dx5+1Dy10亚基，另一类品种中含有Glu-B1位点编码的1Bx14+1By15亚基。含有1Bx14+1By15亚基的优质系列品种，如小偃6号，小偃54，陕优225，陕优229，高优503和PH82-2-2，一般均具有较高的籽粒蛋白质含量，其面粉一般也具有多种用途。如小偃54籽粒的蛋白质含量为18.25％，其面粉既可以用来做馒头，面条和饺子又可以用于做面包和方便面。

综上所述可以看出目前国内外在小麦籽粒品质性状遗传基础与改良研究中的活跃领域是小麦高分子量麦谷蛋白基因资源的发掘及其在籽粒品质性状改良中的应用。目前在国际上，最常用的优异高分子量麦谷蛋白基因的资源主要为编码1Dx5和1Ax1亚基的基因。利用这两种基因改良小麦籽粒品质性状的途径主要有两种。一是在常规育种中利用含1Dx5或1Ax1亚基基因的材料作亲本，然后通过聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)或聚合酶链式反应(PCR)筛选含有上述基因且其它农艺性状较好的杂交后代株系，经进一步培育后获得籽粒品质性状较好的品种。通过这种途径，国内外的育种研究者已培育出一大批籽粒性状有改良的小麦品种。二是利用转基因技术在小麦籽粒中过量表达1Dx5或1Ax1亚基基因而尝试改良小麦籽粒的品质性状。这种途径有可能缩短常规品质育种所需的时间，提高品质改良的效率，因而倍受各国研究人员的重视。但由于目前发现在小麦籽粒中单独过量表达1Dx5或1Ax1亚基基因并不能大幅度地改良小麦的籽粒品质，人们已开始试图发现新的高分子量麦谷蛋白基因资源和探讨新的基因表达或利用方式。

目前在国际上有一些利用高分子量麦谷蛋白亚基基因改良小麦面粉加工面包性能(即面包烘烤品质)的专利，这些专利包括以下几项。①专利WO9808607：这项专利的内容是利用含人为设计的重复区的高分子量麦谷蛋白基因，通过遗传转化，改良小麦面团的弹性。②专利WO9807747：这项专利的内容是利用1Ax1亚基基因，通过遗传转化，改良小麦面粉的面包烘烤品质。③专利WO9903985：这项专利的内容是利用麦谷蛋白亚基基因，通过遗传转化，改良非麦类植物籽粒的终用途，该专利同时还对利用麦谷蛋白基因启动子在非麦类植物籽粒中表达外源序列的遗传操作申请了专利保护。④专利WO9725419：这项专利的内容是利用Glu-D1-1b和Glu-D1-2b亚基基因及其启动子序列，通过遗传转化，改良小麦面粉的面包烘烤品质。上述四项专利所涉及的基因与启动子的种类是1Ax1或Glu-D1-1b和Glu-D1-2b与其启动子，这些基因存在于Glu-1A或Glu-1D位点。另外，上述专利主要是针对利用1Ax1或Glu-D1-1b和Glu-D1-2b与其启动子序列改良小麦面粉用于面包烘烤性能而设的，而有关利用高分子量麦谷蛋白基因及其启动子序列改良小麦面粉用于馒头、面条、饺子和方便面加工的性能的专利目前在国际上还未见记载。再者，目前国际上还未见有关利用高分子量麦谷蛋白基因的PCR标记进行小麦籽粒品质改良研究的专利。

在上述背景下，我们开展了从中国现有优质小麦品种中分离优异高分子量麦谷蛋白基因并利用所分离的基因改良小麦籽粒品质性状和面粉用途的研究。我们的研究材料是李振声教授培育的小麦品种小偃54。小偃54籽粒的蛋白质含量为18.25％(一般小麦品种籽粒的蛋白质含量平均为13％)，湿面筋含量为47.47％(一般小麦品种籽粒的湿面筋含量平均为30％)，面团的沉降值为60ml(一般小麦品种面团的沉降值平均为40％)，面包烘烤品质的总评分平均为94.5(国际面包小麦评分一、二、三级的标准分别为≥90、≥85和≥80分)，表明小偃54的品质特性已经达到了国际一级优质小麦的标准。小偃54籽粒中高分子量麦谷蛋白亚基的组成为1Ax1(由Glu-1A位点编码)，1Bx14+1By15(由Glu-1B位点编码)和1Dx2+1Dy12(由Glu-1D位点编码)。上述五种亚基中，1Bx14亚基的表达量最高，1Ax1、1Dx2和1Dy12次之，1By15更次之(三类亚基的相对比例大致为3∶1∶0.5)。1Ax1亚基的编码基因和基因的启动子已由国外科学家分离、测序并申请和获得专利保护(见上述)。1Dx2和1Dy12亚基的基因及其启动子也已由国外科学家分离、测序并申请和获得专利保护(见上述)。1Bx14和1By15亚基的基因及其启动子目前在国内外其它实验室尚未进行分离、测序研究，在国际专利数据库中目前也没有发现有关1Bx14和1By15亚基的基因及其启动子的专利。主要参考文献

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发明内容

本发明利用分子克隆技术从小偃54的基因组中克隆了1Bx14基因的全长编码区，DNA测序表明1Bx14亚基基因的全长编码区含2391个核苷酸(SEQ ID NO：1)。从推导的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)看，1Bx14亚基具有与所有已发表的高分子量麦谷蛋白亚基不同的一级结构(primary amino acid sequence)。目前已报道的所有x型亚基(如1Ax1，1Dx2，1Dx5，1Bx7等)的氮端均含有三个半胱氨酸残基(表1)，这些半胱氨酸残基在维持x型高分子量麦谷蛋白亚基的三维空间结构以及这类亚基影响品质性状的过程中起重要作用。与目前已报道的所有x型亚基相比，1Bx14亚基的氮端只含有一个半胱氨酸残基(表1)，而另外两个胱氨酸残基均为酪氨酸所替代。这些结果表明1Bx14亚基可能具有与其它已报道的x型亚基不同三维结构和作用机制，该亚基是一种前人尚未从分子水平上加以研究的新型亚基，可能以新颖的机制影响小麦籽粒的品质性状和面粉的用途。表1 1Ax1，1Dx2，1Dx5，1Bx7和1Bx14亚基氮端氨基酸序列一些属性的比较亚基   序列  半胱氨  半胱氨酸残基座位在各自氨基酸序列中的相对

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本发明利用DNA重组技术在大肠杆菌细胞中表达了1Bx14亚基基因的全长编码区，SDS-PAGE分析发现1Bx14亚基基因的全长编码区在大肠杆菌细胞中的表达产物与小偃54种子中1Bx14亚基具有相同的电泳迁移率(分子量)，利用高分子量麦谷蛋白亚基特异性抗体做Western印迹反应证实了1Bx14亚基基因的全长编码区在大肠杆菌细胞中的表达产物为高分子量麦谷蛋白分子。这些结果表明我们所分离的全长编码区的确来自于，并可代表，1Bx14基因。

本发明还利用分子克隆技术从小偃54的基因组中克隆了1Bx14亚基基因的启动子区域(包含编码区翻译起始密码子前的1150个核苷酸，SEQ ID NO：3)，在翻译起始密码子上游的-800至-1000之间存在一个独特的、含193个核苷酸的结构因子(以下简称为U区)。在迄今已报道的、普通小麦的Glu-1A，Glu-1B和Glu-1D位点中含有的高分子量麦谷蛋白亚基的基因的启动子区域均不含类似的U区结构因子。

因而，本发明提供了一种编码1Bx14亚基的基因，该基因编码的蛋白质，和引导该基因进行表达的启动子。本发明的1Bx14亚基基因最好具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；所编码的蛋白质具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；引导该基因进行表达的启动子具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。

本发明根据1Bx14亚基基因及其启动子的DNA序列，设计了一对PCR引物(SEQ ID NO：4和5)。在基因组PCR反应中，我们发现该对引物可以用于鉴别含有1Bx14基因的小麦品种(系)。

一种用于鉴定含有1Bx14基因的小麦品种(系)的方法，该方法包括：

a.提取一种小麦品种或品系的DNA；

b.使用所提取的DNA作为模板，以及SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的序列作为引物进行PCR扩增反应；

c.检测PCR扩增产物是否存在。

实施例

①1Bx14亚基基因全长编码区的克隆和测序。为了从优质小麦品种小偃54的基因组中获得1Bx14亚基基因的全长编码区，我们根据已发表的高分子量麦谷蛋白基因的序列设计了一对PCR引物P3和P4(P3，5’-ATCACCCACAACACCGAGCA-3’(SEQ ID NO：6)；P4，5’-AGCTGCAGAGAGTTCTATCA-3’(SEQ ID NO：7))。利用该对引物和基因组PCR反应，我们获得了小偃54中六种高分子量麦谷蛋白基因的全长编码区的扩增片段(片段长度范围为1.9至2.5kb)。将上述片段克隆于pGEM-T easy(Promega)载体后，获得了200余个阳性克隆。从其中选出50个阳性克隆并对其含有的插入片段进行末端测序，结果发现两个克隆(pBx14-2，pBx14-42)中的插入片段翻译后所获得的氨基酸序列与已发表的来自于普通小麦的1Bx7和1Bx17的氨基酸序列有很高的同源性，但其与普通小麦的1Ax类和1Dx类亚基的氨基酸序列的同源性却相对较低，因此判断pBx14-2和pBx14-42中的插入片段代表了1Bx14亚基基因的全长编码区。利用定向缺失法制备了pBx14-42中插入片段的亚克隆，选取六个末端重叠的亚克隆进行DNA序列测定后获得了覆盖整个插入片段的DNA序列。DNA和氨基酸序列分析表明pBx14-42中的插入片段含有1Bx14亚基的完整编码区，该编码区含2391个核苷酸。从推导的氨基酸序列看，1Bx14亚基具有与所有已发表的高分子量麦谷蛋白亚基不同的一级结构(见“发明内容”部分)。

②1Bx14亚基基因全长编码区序列的体外表达。根据1Bx14亚基基因全长编码区的序列设计了一对引物FN和RX(FN，5’-TTACATATGGAAGGTGAGGCCTCTGGACAAC-3’(SEQ ID NO：8)；RX，5’-GTCCTCGAG CTATCACTGGCTAGCCGACAATG-3’(SEQ ID NO：9))。以pBx14-42中的插入片段为模板，利用FN和RX引物对进行PCR扩增，获得了1Bx14亚基成熟蛋白的编码序列。将该编码序列克隆于细菌表达载体pET-30a(Invitrogen)后进行了蛋白表达诱导实验。SDS-PAGE实验发现1Bx14亚基成熟蛋白的编码序列在细菌中的表达产物与种子中的1Bx14亚基具有相同的电泳迁移率，表明我们确实从优质小麦品种小偃54中获得了1Bx14亚基全长编码区的DNA序列。

③1Bx14亚基基因启动子DNA序列的克隆。根据已发表的高分子量麦谷蛋白基因启动子的序列和1Bx14亚基基因的编码序列设计了一对PCR引物UnipF和1Bx14R(UnipF，5’-GC(TC)AGGGAAAGACAATGGACATG-3’(SEQID NO：10)；1Bx14R，5’-TATGCCTCGAGCTCGCGCTTCCG-3’(SEQ IDNO：11))。利用该对引物和基因组PCR反应，我们从小偃54的基因组中克隆了1Bx14亚基基因的启动子区域(包含编码区翻译起始密码子前的1150个核苷酸)。核苷酸序列比较发现1Bx14亚基基因的启动子区域含有独特的结构因子，在翻译起始密码子上游的-800至-1000之间存在一个独特的、含193个核苷酸的结构因子。在迄今已报道的、普通小麦的Glu-1A，Glu-1B和Glu-1D位点中含有的高分子量麦谷蛋白亚基的基因的启动子区域均不含类似的U区结构因子。

④利用1Bx14亚基基因启动子的DNA序列和1Bx14亚基基因的编码DNA序列设计了一对PCR引物(正向引物，5’-AGTGGCGGAGCTTGGGCTGAT-3’(SEQ ID NO：4)；反向引物，5’-TATGCCTCGAGCTCGCGCTTCCG-3’(SEQ IDNO：5))。在基因组PCR反应中，利用该对引物可从含有1Bx14亚基基因的小麦材料中特异地扩增出一个含1186个核苷酸的DNA片段，表明该对引物可以用于鉴别含有1Bx14基因的小麦品种(系)。

                      序列表<110>中国科学院遗传研究所<120>小麦1Bx14基因、其编码的蛋白质及其启动子<130>I2001661<160>13<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>2391<212>DNA<213>小麦<220><221>CDS<222>(1)..(2391)<223><400>1atg gct aag cgc ctg gtc ctc ttt gcg gca gta gtc gtc gcc ctc atg  48Met Ala Lys Arg Leu Val Leu Phe Ala Ala Val Val Val Ala Leu Met1               5                   10                  15gct ctc acc gcc gct gaa ggt gag gcc tct gga caa cta caa tgt gag  96Ala Leu Thr Ala Ala Glu Gly Glu Ala Ser Gly Gln Leu Gln Cys Glu

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    355                 360                 365caa gga aaa caa cca gga caa gga caa caa agg tac tac cca act tct     1152Gln Gly Lys Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Arg Tyr Tyr Pro Thr Ser

370                 375                 380tca caa cag tca gga caa ggg caa caa ccg gga caa ggg caa cca ggg     1200Ser Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Pro Gly385                 390                 395                 400tac tac cca act tct cca cag cag tca gga caa gga caa caa tca gga     1248Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Ser Gly

            405                 410                 415caa gca caa caa ggg tac tac cca act tct ccg caa cag tca gga caa     1296Gln Ala Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln

        420                 425                 430ggg caa caa ccg gga caa agg caa tcg ggg tac ttc cca act tct cgg     1344Gly Gln Gln Pro Gly Gln Arg Gln Ser Gly Tyr Phe Pro Thr Ser Arg

    435                 440                 445cag cag tca gga caa ggg cag cag cca gga caa gga caa cag tca gga     1392Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Ser Gly

450                 455                 460caa ggg caa caa gat cag caa cca gga caa gga caa caa gcg tac tac     1440Gln Gly Gln Gln Asp Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Ala Tyr Tyr465                 470                 475                 480cca act tct tcg caa cag tca gga caa agg caa cag gca gga caa tgg     1488Pro Thr Ser Ser Gln Gln Ser Gly Gln Arg Gln Gln Ala Gly Gln Trp

            485                 490                 495caa cga ccg gga caa ggg caa cca ggg tac tac cca acc tct cca cag     1536Gln Arg Pro Gly Gln Gly Gln Pro Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln

        500                 505                 510cag ccg gga caa gag caa cag cca gga caa gcg caa caa tca gga caa     1584Gln Pro Gly Gln Glu Gln Gln Pro Gly Gln Ala Gln Gln Ser Gly Gln

    515                 520                 525tgg caa cta gtg tac tac cca act tct ctg caa cag cca ggc caa ttg     1632Trp Gln Leu Val Tyr Tyr Pro Thr Ser Leu Gln Gln Pro Gly Gln Leu

530                 535                 540caa caa cca gca caa ggg caa caa cca gca caa ggg caa caa tca gca     1680Gln Gln Pro Ala Gln Gly Gln Gln Pro Ala Gln Gly Gln Gln Ser Ala545                 550                 555                 560caa gag caa caa cca gga caa gcg caa caa tca gga caa tgg caa cta     1728Gln Glu Gln Gln Pro Gly Gln Ala Gln Gln Ser Gly Gln Trp Gln Leu

            565                 570                 575gtg tac tac cca act tct ccg caa cag cca gga caa ttg caa caa cca     1776Val Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Pro Gly Gln Leu Gln Gln Pro

        580                 585                 590gca caa ggg caa caa ggg tac tac cca act tct cca caa cag tca gga     1824Ala Gln Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly

    595                 600                 605caa ggg caa caa ggg tac tac cca act tct ccg caa cag tca gga caa     1872Gln Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln

610                 615                 620ggg caa caa ggg tac tac cca act tct ccg caa cag tca gga caa ggg     1920Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln Gly625                 630                 635                 640cag cag cca gga caa gga caa cag cca aga caa ggg caa caa ggg tac     1968Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Pro Arg Gln Gly Gln Gln Gly Tyr

            645                 650                 655tac cca att tct ccg cag cag tca gga caa ggg caa caa aca gga caa     2016Tyr Pro Ile Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Thr Gly Gln

        660                 665                 670ggg caa caa gga tac tac cca act tct ccg cag cag tca gga caa ggg     2064Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln Gly

    675                 680                 685caa caa cca agg cat gag caa cag cca gga caa tgg ctg caa cca gga     2112Gln Gln Pro Arg His Glu Gln Gln Pro Gly Gln Trp Leu Gln Pro Gly

690                 695                 700caa ggg caa caa ggg tac tat cca acc tct tca cag cag tca gga caa     2160Gln Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Ser Gln Gln Ser Gly Gln705                 710                 715                 720ggg cag caa tca gga caa ggg caa caa ggg tac tac cca act tct ctg     2208Gly Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Leu

            725                 730                 735tgg caa cca gga caa ggg caa caa cca gga caa agg caa caa ggc tac     2256Trp Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Arg Gln Gln Gly Tyr

        740                 745                 750gac agc cca tac cat gtt agc gcg gag tac cag gcg gcc cgc cta aag     2304Asp Ser Pro Tyr His Val Ser Ala Glu Tyr Gln Ala Ala Arg Leu Lys

    755                 760                 765gtg gca aag gcg cag cag ctc gcg gca cag ctg ccg gca atg tgc cgg     2352Val Ala Lys Ala Gln Gln Leu Ala Ala Gln Leu Pro Ala Met Cys Arg

770                 775                 780ctg gag ggc agc gac gca ttg tcg gct agc cag tga tag                 2391Leu Glu Gly Ser Asp Ala Leu Ser Ala Ser Gln785                 790                 795<210>2<211>795<212>PRT<213>小麦<400>2Met Ala Lys Arg Leu Val Leu Phe Ala Ala Val Val Val Ala Leu Met1               5                   10                  15Ala Leu Thr Ala Ala Glu Gly Glu Ala Ser Gly Gln Leu Gln Cys Glu

        20                  25                  30Arg Glu Leu Arg Lys Arg Glu Leu Glu Ala Tyr Gln Gln Val Val Asp

    35                  40                  45Gln Gln Leu Arg Asp Val Ser Pro Gly Tyr Arg Pro Ile Thr Val Ser

50                  55                  60Pro Gly Thr Arg Gln Tyr Glu Gln Gln Pro Val Val Pro Pro Lys Ala65                  70                  75                  80Gly Ser Phe Tyr Pro Ser Glu Thr Thr Pro Ser Gln Gln Leu Gln Gln

            85                  90                  95Met Ile Phe Trp Gly Ile Pro Ala Leu Leu Arg Arg Tyr Tyr Pro Ser

        100                 105                 110Val Thr Ser Ser Gln Gln Gly Ser Tyr Tyr Pro Gly Gln Ala Phe Pro

    115                 120                 125Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Pro Gly

130                 135                 140Gln Arg Gln Gln Asp Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr145                 150                 155                 160Pro Thr Ser Pro Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Leu Gly Gln Gly

            165                 170                 175Gln Pro Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Gln Gln Pro Gly Gln Lys Gln Gln

        180                 185                 190Ala Gly Gln Gly Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Arg Tyr Tyr Pro

    195                 200                 205Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln

210                 215                 220Pro Gly Tyr Tyr Pro Ile Ser Pro Gln Gln Ser Glu Gln Trp Gln Gln225                 230                 235                 240Pro Gly Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Ser Gly Gln Gly

            245                 250                 255Gln Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Arg Pro Gly Gln Gly Gln

        260                 265                 270Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Leu Gln Gln Pro Arg Gln Gly Gln Gln

    275                 280                 285Ser Gly Gln Gly Gln Pro Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Ser Arg Gln Pro

290                 295                 300Gly Gln Trp Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln305                 310                 315                 320Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln

            325                 330                 335Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Leu Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Pro

        340                 345                 350Gly Gln Gly Gln Pro Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Pro Gly

    355                 360                 365Gln Gly Lys Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Arg Tyr Tyr Pro Thr Ser

370                 375                 380Ser Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Pro Gly385                 390                 395                 400Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Ser Gly

            405                 410                 415Gln Ala Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln

        420                 425                 430Gly Gln Gln Pro Gly Gln Arg Gln Ser Gly Tyr Phe Pro Thr Ser Arg

    435                 440                 445Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Ser Gly

450                  455                460Gln Gly Gln Gln Asp Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Ala Tyr Tyr465                 470                 475                 480Pro Thr Ser Ser Gln Gln Ser Gly Gln Arg Gln Gln Ala Gly Gln Trp

            485                 490                 495Gln Arg Pro Gly Gln Gly Gln Pro Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln

        500                 505                 510Gln Pro Gly Gln Glu Gln Gln Pro Gly Gln Ala Gln Gln Ser Gly Gln

    515                 520                 525Trp Gln Leu Val Tyr Tyr Pro Thr Ser Leu Gln Gln Pro Gly Gln Leu

530                 535                 540Gln Gln Pro Ala Gln Gly Gln Gln Pro Ala Gln Gly Gln Gln Ser Ala545                 550                 555                 560Gln Glu Gln Gln Pro Gly Gln Ala Gln Gln Ser Gly Gln Trp Gln Leu

            565                 570                 575Val Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Pro Gly Gln Leu Gln Gln Pro

        580                 585                 590Ala Gln Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly

    595                 600                 605Gln Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln

610                 615                 620Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln Gly625                 630                 635                 640Gln Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Pro Arg Gln Gly Gln Gln Gly Tyr

            645                 650                 655Tyr Pro Ile Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Thr Gly Gln

        660                 665                 670Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Gln Gln Ser Gly Gln Gly

    675                 680                 685Gln Gln Pro Arg His Glu Gln Gln Pro Gly Gln Trp Leu Gln Pro Gly

690                 695                 700Gln Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Ser Gln Gln Ser Gly Gln705                 710                 715                 720Gly Gln Gln Ser Gly Gln Gly Gln Gln Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Leu

            725                 730                 735Trp Gln Pro Gly Gln Gly Gln Gln Pro Gly Gln Arg Gln Gln Gly Tyr

        740                 745                 750Asp Ser Pro Tyr His Val Ser Ala Glu Tyr Gln Ala Ala Arg Leu Lys

    755                 760                 765Val Ala Lys Ala Gln Gln Leu Ala Ala Gln Leu Pro Ala Met Cys Arg

770                 775                 780Leu Glu Gly Ser Asp Ala Leu Ser Ala Ser Gln785                 790                 795<210>3<211>1146<212>DNA<213>小麦<400>3gctagggaaa gacaatggac atgcaaagag gtaggggcag ggaagaaaca cttggagatc    60atagaagaac ataagaggtt aaacatagga gcagtggcgg agcttgggct gattttatgg   120aggggcaaat gggctggagg ggcaagaaat atgagtttgg gctgatttta actgggcata    180tgggctgaat actaggggat atatgctagt tttctcatgg gctggggggg caatggccca    240ggttgctctc cactaagctc cgccactgca taggagggca taatggacaa ttaaatctac    300attaattgaa ctcatttggg aagtaaacaa aatccatatt ctggtgtaaa tcaaactatt    360tgatgcggat ttactaagat cctatgttaa ttttagacat gactggccaa aggtttcagt    420tagttcattt gtcacggaaa ggtgttttca taagtccaaa actctaccaa cttttttgca    480cgtcatagca tagatagatg ttgtgagtca ttggatagat attgtgagtc agcatggatt    540tgtgttgcct ggaaatccaa ctaaatgaca agcaacaaaa cctgaaatgg gctttaggag    600agatggttta tcaatttaca tgttccatgc aggctacctt ccactactcg acatggttag    660aagttttgag tgccgcatat ttgcggaagc aatggcacta ctcgacatgg ttagaagttt    720tgagtgccgc atatttgcgg aagcaatggc taacagatac atattctgcc aaaccccaag    780aaggataatc actcctctta gataaaaaga acagaccaat gtacaaacat ccacacttct    840gcaaacaata caccagaact aggattaagc ccattacgtg gctttagcag accgtccaaa    900aatctgtttt gcaagcacca attgctcctt acttatccag cttcttttgt gttggcaaac    960tgcccttttc caaccgattt tgttcttctc acgctttctt cataggctaa actaacctcg   1020gcgtgcacac aaccatgtcc tgaaccttca cctcgtccct ataaaagccc atccaacctt   1080cacaatctca tcatcaccca caacaccgag caccccaatc tacagatcaa ttcactgaca   1140gttcac                                                              1146<210>4<211>21<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>Primer<400>4agtggcggag cttgggctga t                                               21<210>5<211>23<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>Primer<400>5tatgcctcga gctcgcgctt ccg                                               23<210>6<211>20<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>Primer<400>6atcacccaca acaccgagca                                                   20<210>7<211>20<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>Primer<400>7agctgcagag agttctatca                                                  20<210>8<211>31<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>Primer<400>8ttacatatgg aaggtgaggc ctctggacaa c                                     31<210>9<211>32<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>Primer<400>9gtcctcgagc tatcactggc tagccgacaa tg                                    32<210>10<211>24<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>Primer<400>10gctcagggaa agacaatgga catg                                             24<210>11<211>23<212>DNA<213>Aritificial Sequence<400>11tatgcctcga gctcgcgctt ccg                                              23

Claims (6)

1.一种小麦1Bx14亚基，它具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

2.一种编码权利要求1所述的小麦1Bx14亚基的基因。

3.按照权利要求2所述的基因，它具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

4.一种用于引导小麦1Bx14亚基基因进行表达的启动子，它具有SEQID NO：3所示的核苷酸序列。

5.一种用于鉴定含有1Bx14基因的小麦品种(系)的方法，该方法包括：

a.提取一种小麦品种或品系的DNA；

b.使用所提取的DNA作为模板，以及SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的序列作为引物进行PCR扩增反应；

c.检测PCR扩增产物是否存在。

6.一种用于鉴定含有1Bx14基因的小麦品种(系)的DNA引物，它具有SEQ ID NO：4和/或SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列。