CN1407107A - 水稻器官形成调控基因OsSET1及其编码的调控蛋白 - Google Patents

Abstract

本发明基因的cDNA全长2606个碱基含一个完整的开放阅读框架为序列表中的1号序列命名为OsSET1。基因中的SET域为自第1927个至第2271个共345个碱基。本发明的调控蛋白由725个氨基酸残基组成为序列表中的序列2。本发明调控基因OsSET1编码的蛋白通过调控转录因子与DNA结合复合体的空间结构来调控发育过程。本发明水稻器官形成调控基因OsSET1的发现使通过基因调控来控制器官形成过程成为可能对于培育高产的转基因水稻具有重要意义。

Description

水稻器官形成调控基因OsSET1及其编码的调控蛋白

技术领域

本发明涉及一种基因及其编码的蛋白质，特别是涉及一种水稻的器官形成调控基因及其编码的蛋白质。

背景技术

在植物的生命活动中，基因以特定的三维结构被组织在染色质上。越来越多的证据表明，基因的表达受到染色质结构的严密调控。因此，在后基因组时代，了解基因表达调控不仅要考虑DNA一级结构，还必须考虑DNA以及染色质的高级结构。目前在动物方面，基因表达的高级结构调控机制研究已有十分引人注目的突破，人们已经找到一批通过调控转录因子与DNA结合特点的蛋白以及相应的编码基因。其中，以果蝇Polycomb基因家族为代表的SET域基因家族就是其中的一类重要成员。到目前为止，研究人员发现真核生物中具有SET域的蛋白可能有286个之多( http：//smart.embl-heidelberg.de)。从拟南芥基因组测序结果分析得知，在拟南芥中就可能有56个SET域基因。通过突变体途径，目前已从拟南芥中分离得到2个SET域基因，它们均与胚乳形成有关，并证明它们类似果蝇中的Polycomb基因，能够调控相关的转录因子基因的表达，并在发育过程中维持细胞的分化状态。研究表明，SET域基因在高等生物的基因表达调控中具有重要的作用，并且存在广泛。

发明内容

本发明的目的是提供一种水稻的器官形成调控基因及其所编码的调控蛋白。

本发明调控基因的cDNA全长2606个碱基，含一个完整的开放阅读框架(ORF)，为序列表中的1号序列，命名为OsSET1。基因中的开放阅读框架为自第178个至第2355个共2178个碱基，其起始密码子为ATG，终止密码子为TAG。

本发明的另一个目的是提供上述基因所编码的调控蛋白。

本发明的调控蛋白由725个氨基酸残基组成，为序列表中的序列2。

含有上述序列1及其开放阅读框架的多核苷酸的载体，以及用上述序列1及其开放阅读框架的多核苷酸转化的生物细胞，特别是具有器官形成调控能力的植物细胞，均是本发明需要保护的内容。

目前，人们已从拟南芥中克隆到2个SET域基因，其中CFL的功能在于抑制一些转录因子基因(如AG、AP3)在特定器官及发育阶段的表达，而MEDEA/FIE/FIS1基因则抑制中央细胞以及球形胚细胞的分裂，使得突变体胚乳在无受精的条件下也能够发育、球形胚体积异常增大。这些资料表明，植物中的SET域基因具有类似动物同类基因的作用，通过调控转录因子与DNA结合复合体的空间结构来调控发育过程。比较OsSET1与CFL及MEDEA/FIE/FIS1所编码蛋白质的氨基酸序列表明，OsSET1的SET域的DNA序列与已知的其他生物中的有关基因序列有高度的一致性，各蛋白质的氨基酸序列如下：OsSET1：

SDVHGWGAFIKNPVNRNDYLGEYTGELISHREADKRGKIYDRANPSFLFDLNEQYVLDAYRKGDKLKFANHSSNPNCYAKVMLVAGGHRVGIYAKDRIEASEELFYDYCYGPELNEZA1：

SDVAGWGAFLKNSVSKNEYLGEYTGELISHHEADKRGKIYDRANSSFLFDLNDQYVLDAQRKGDKLKFANHSAKPNCYAKVMFVAGDHRVGIFANERIEASEELFYDYRYGPDQAMEA：

SDVHGWGAFTWDSLKKNEYLGEYTGELITHDEANERGRIEDRIGSSYLFTLNDQLEIDARRKGNEFKFLNHSARPNCYAKLMIVRGDQRIGLFAERAIEEGEELFFDYCYGPEHACLF：

SDISGWGAFLKNSVSKHEYLGEYTGELISHKEADKRGKIYDRENCSFLFNLNDQFVLDAYRKGDKLKFANHSPEPNCYAKVIMVAGDHRVGIFAKERILAGEELFYDYRYEPDRAE(z)：SDIAGWGIFLKEGAQKNEFISEYCGEIISQDEADRRGKVYDKYMCSFLFNLNNDFVVDATRKGNKIGFANHSINPNCYAKVMMVTGDHRIGIFAKRAIQPGEELFFDYRYGPTEQGenBank Acession No.：EZA1：AF100163；MEA：AF060485；CLF：Y10580；E(z)：U00810

本发明调控基因OsSET1的发现，使通过基因调控来控制发育过程成为可能，对于培育高产的转基因水稻具有重要意义。

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

附图说明

图1为噬菌斑的自显影图。

图2为本发明的基因克隆后的酶切图谱

具体实施方式

实施例1、水稻器官形成调控基因OsSET1的克隆

克隆OsSET1，具体步骤如下：

一、探针的制备

根据已知的SET域保守序列设计引物：SET1：5’-tctgatgttcatggatggggtgca-3’和SET2：5’-atgttctggtccatagcagtagtc-3’。水稻品种月父在正常条件下栽培，从包含早期雌雄蕊原基的水稻幼穗材料中提取mRNA，利用RT-PCR技术进行聚合酶链式反应。琼脂糖凝胶电泳检测有一大小为345bp的条带，测序后进行BLAST检索，结果表明已分离得到水稻保守的SET域基因序列。

二、水稻cDNA文库的构建

1、总RNA的提取

1)实验材料液氮研磨后，分装入1.5ml的Eppendorf管，每管50-100ng，并分别加入1mlTRIZOL试剂，振荡。

2)室温下保温5分钟后，每管加0.2ml氯仿，剧烈震荡15秒，室温放置2-3分钟，4℃下12,000g离心15分钟。

3)转移上清到新管，加0.5ml异戊醇，混匀。室温放置10分钟后，4℃下12,000g离心10分钟。

4)洗涤沉淀。每管加至少1ml 75％的乙醇后，振荡，4℃下7,500g离心5分钟。

5)重溶沉淀。待沉淀稍稍干燥后，每管用20ul DEPC处理过的ddH₂O重溶沉淀。合并各管，存于-20℃。

6)1.2％甲醛变性胶电泳检测。紫外观察，有三条清晰的带，分别为28S，18S和5S。

2、mRNA的分离

1)取0.1-1mg总RNA，加水至500ul。65℃，保温10分钟。

2)分别加入3ul Biotinylated-Oligo(dT)和13ul 20xSSC，轻轻混匀后，冷却至室温。冷却过程中，制备0.5xSSC和0.1xSSC。

3)重悬SA-PMPs后，磁力架捕获磁珠，弃上清。再用0.5xSSC洗涤磁珠3次，每次用0.3ml。最后将磁珠重悬于0.1ml 0.5xSSC。

4)把2中冷却到室温的反应体系加入到3中。室温下放置10分钟，每1-2分钟颠倒一次。

5)用0.3ml的0.1xSSC重悬磁珠，磁力架吸附磁珠后，弃上清。重复洗涤3次。

6)用0.1mlDEPC处理过的水重悬磁珠(其上结合有mRNA)，用磁力架吸附磁珠后，收集上清。

7)用0.15ml水洗脱mRNA。

8)在mRNA洗脱液中加入25ul的3M，pH7.5的醋酸钠和250ul的异丙醇，-20℃沉淀过夜。

9)12,000g离心10分钟。

10)1ml的75％乙醇重悬沉淀，再次离心。

11)沉淀晾干后，用DEPC处理过的水溶解。

3、cDNA第一链的合成

1)向1.5ml Eppendorf管中，依次加入：

    5ul    10x第一链缓冲液

    3ul    第一链甲基核苷酸混合液

    2ul    连接头引物

    Xul    DEPC处理过的水

    1ul    RNA酶抑制剂

    Yul    mRNA

    其中，X+Y＝37.5ul

    轻轻混匀后，室温放置10分钟。

2)加1.5ul的MMLV-RT(50U/ul)，混匀后，稍微离心。

3)37℃，保温1小时。

4)保温结束，置于冰上。

4、cDNA第二链的合成

1)加下列试剂：

    20ul        10x-第二链缓冲液

    6ul         第二链dNTP混合液

    111ul       无菌水

    2ul         RNaseH

    11ul        DNA聚合酶I

轻轻混匀后，稍微离心。

  2)16℃，保温2.5小时。

  3)保温完毕，置于冰上。

5、cDNA平末端化

  1)加：

    23ul         平端化dNTP

    2ul          Pfu DNA聚合酶

迅速涡旋并稍微离心后，置于72℃下保温30分钟。

  2)200ul苯酚：氯仿抽提后，上清中加入等体积的氯仿再次抽提。

  3)上清中加入：

    20ul         3M NaAc

      400ul        100％乙醇

      振荡后，置于-20℃过夜。

    4)4℃，最大速离心1小时，弃上清。

    5)500ul 70％的乙醇洗涤沉淀后，最大速离心2分钟。

    6)晾干沉淀后，用9ul EcoRI接头溶解沉淀。4℃保温至少30分钟。

6、EcoRI接头的连接

    1)加入：

        1ul        10x连接酶缓冲液

        1ul        10mM rATP

        1ul        T4 DNA连接酶

      混匀，8℃过夜或者4℃ 2天。

    2)70℃水浴保温30分钟灭活连接酶。

    3)离心2秒，冷却到室温。

7、磷酸化接头

    1)加：

        1ul        10x连接酶缓冲液

        2ul        10mM rATP

        6ul        无菌水

        1ul        T4多核苷酸激酶

    2)37℃，保温30分钟。

    3)70℃，保温30分钟灭活激酶。

    4)离心2秒，冷却到室温。

8、XhoI进行消化

    1)加入：

      28ul       XhoI缓冲液

      3ul        XhoI(40U/ul)

    2)37℃，保温1.5小时。

    3)加5ul的10xSTE缓冲液和125ul的无水乙醇。

    4)-20℃，过夜。

    5)4℃，最大速离心60分钟，弃上清。

    6)完全干燥沉淀后，用14ul的1xSTE溶解。

    7)加3.5ul上柱染料

9、分级分离

    1)过柱，收集大于500bp的片段。

    2)加等体积的酚∶氯仿(1∶1)，振荡后，室温最大速离心2分钟。

    3)转移上清到新管后，加等体积氯仿，振荡后，室温最大速离心2分钟。

    4)转移上清到新管，每管中加入2倍体积的无水乙醇。

    5)-20℃，过夜。

    6)4℃，最大速离心60分钟，弃上清。

    7)200ul 80％乙醇小心洗涤沉淀，室温最大速离心2分钟，抽干。

    8)重溶于5ul无菌水，取1ul跑1％电泳。

10、cDNA和Uni-ZAP^XR载体的连接

    1)依次加入：

        2.5ul        cDNA

        0.5ul        10x连接酶缓冲液

        0.5ul        10mM rATP(pH7.5)

        1.0ul        Uni-ZAP^XR Vector

        4.5ul        水

        0.5ul        T4 DNA′连接酶(4U/ul)

    2)12℃，保温过夜或4℃ 2天。

11、宿主菌的制备

1)挑取涂有四环素平板上的E.coli XL1-blue MRF′单菌落，50mlLB培养基(含500ul的20％麦芽糖和500ul的1M硫酸镁)中进行过夜培养，同时进行空对照培养。

2)摇菌结束后，空对照无菌生长。把接种管分为两管后，500g离心10分钟。弃上清，加12ml的10mM MgSO₄，振荡混匀后，置于4℃，待用。

3)12℃，保温过夜结束，置于冰上。

12、包装

取出包装提取物，冰上开始融化时，立即加入4ul连接产物，用枪轻吹两下混匀包装体，离心3-5秒后，置于22℃水浴100分钟。

2)分别加500ul的SM缓冲液和20ul的氯仿，轻轻混匀。

3)离心沉淀碎片。

4)上清(525ul)贮存于4℃。

13、滴度的测定

1)取1ul加入到200ul的宿主菌中，混匀后，从中取出20ul加到另一管200ul的宿主菌中。将此两管同时置于37℃水浴中，保温15分钟让噬菌体吸附到细胞上。

2)每管中分别加入3ml的NZY顶层琼脂后，迅速铺到NZY琼脂平板上，放置10分钟后，37℃倒置培养8小时。

3)分别计数两平板的噬菌斑，计算滴度，为1.1×10⁶，达到要求，进一步扩增。

14、文库的扩增

1)取20个50ml的离心管，分别加入600ul的宿主菌，再分别加入21ul的包装产物后，37℃水浴中保温15分钟，让噬菌体吸附到细胞上。

2)各加6.5ml的NZY顶层琼脂后，迅速铺到NZY琼脂平板上，放置10分钟后37℃倒置培养8小时。

3)每个平板中加入10ml的SM缓冲液，4℃过夜。

4)收集平板上液体，加入氯仿至终浓度为5％(v/v)，混匀后室温静置15分钟。

5)500g离心10分钟，转移上清到新管，加氯仿到终浓度0.3％(v/v)，4℃保存。

6)扩增文库滴度测定：

取两个1.5ml的Eppendorf管，标为1和2，并分别加1ml的SM缓冲液。取10ul的扩增文库加入1中，混匀后取出10ul，再加入2中，混匀。从2中取2ul加入到200ul宿主菌中，混匀37℃水浴中保温15分钟。加入3ml的NZY顶层琼脂后，迅速铺到NZY琼脂平板上，放置10分钟后37℃倒置培养8小时。计数噬菌斑，计算滴度为2×10¹⁰。

三、水稻cDNA文库的筛选

1、测滴度

A、准备宿主菌

1)划线接菌，37℃培养过夜，宿主菌的活力对铺板是至关重要的，每周继代一次。侵染的头一天下午重新划线一次。四环素为脂溶性的，应用70％乙醇溶解，且须避光保存于-20℃。

2)选取单克隆，接种于适当体积的培养基中，加入终浓度为10mM MgSO₄和0.2％(W/V)麦芽糖中。先用试管培养，长起来后转接入锥型瓶中。

3)37℃ 200rpm摇床培养4-6小时，至OD₆₀₀＝0.5-0.7，或30℃摇过夜。

4)500g离心10分钟，收集细胞，弃上清。

5)用合适体积的无菌10mM MgSO₄，轻轻重悬细胞。

6)用10mM MgSO₄稀释至OD₆₀₀为0.5。

B、侵染和铺板

1)打开50℃水浴锅，化好NZY顶层琼脂，并每管3ml分装入5ml的离心管中，水浴锅保温。将倒好的NZY琼脂平板放入37℃温箱平衡。

2)SM缓冲液稀释噬菌体：

对于初级文库，加1μl噬菌体或1μl的1∶10稀释的噬菌体到2001μl OD₆₀₀＝0.5的宿主菌中。

对于扩增文库，用SM缓冲液稀释以下梯度：

1∶10,000；1∶100,000；1∶1,000,000。加1μl稀释液于200μl OD₆₀₀＝0.5的宿主菌中。每个梯度做两个平行。

3)将噬菌体与细菌37℃共培养15分钟，进行吸附，每5分钟轻轻混匀。

4)将噬菌体与细菌吸出放入NZY顶层琼脂(50℃)中，快速颠倒混匀。迅速倒入NZY琼脂平板上，并迅速按住平板摇匀，使NZY顶层琼脂均匀铺开。放置10分钟，37℃倒置培养。

若蓝白斑显色反应，可将15μl 0.5M IPTG，50μl X-Gal(250mg/ml in DMF)提前加入NZY顶层琼脂(50℃)，按上述步骤铺板。

5)6-8小时后可见噬菌斑，但过夜培养才可见有显色反应。蓝斑少于1X10⁵pfu/μg，白斑多于蓝斑10-100倍。

2、铺板

提前两天倒35个9cm的NZY琼脂平板，按每个30,000pfu/平板铺板。

1)50℃水浴锅，化好NZY顶层琼脂，并每管3ml分装入5ml离心管中，水浴锅保温。将倒好的NZY琼脂平板放入37℃温箱平衡30分钟以上。

2)加30,000pfu/平板稀释液于200μl OD₆₀₀＝0.5的宿主。

3)将噬菌体与细菌37℃共培养15分钟，进行吸附，每5分钟轻轻混匀。

4)将噬菌体与细菌吸出放入NZY顶层琼脂(50℃)中，快速颠倒混匀，避免产生气泡，快速倒入NZY琼脂平板上，并迅速按住平板摇匀，使NZY顶层琼脂均匀铺开。放置10分钟，37℃倒置培养。

5)37℃倒置培养8小时，斑直径为0.2-0.3mm。

6)将平板放置4℃ 2小时以防止NZY顶层琼脂沾到尼龙膜上。

3、转膜

1)用平头镊子进行以下操作，所有试剂都在室温。

2)在两张膜上同时剪三个不对称的缺口，分别编号，于板对应(1-1，1-2，2-1，2-2)。将膜卷起形成一槽状，沿平板直径标上两点将槽底沿两点放至平板的中心，用释放膜让它展开。在平板底部膜缺口对应处做标记，以定位。第一张膜转移1分钟，第二张膜2分钟，膜完全浸透后开始记时。第二张膜按两点及底部的缺口来定位。

3)用两把平头镊子从膜边缘轻轻将其揭起，放在干滤纸上。

4)揭完膜后，平板4℃保存备用。

5)在四个15cm平皿中分别放入变性液、中和液饱和的滤纸，缓冲液和干滤纸。每个处理都保证DNA朝上，且液体勿弄湿上面，将膜放在干滤纸上以去除底部多余的液体。

6)变性液中，2-5分钟。

7)中和液中，3分钟，重复这一步。

8)在2XSSC中充分洗涤30秒以除去蛋白残留物。

9)放在干滤纸上去除多余水分。

10)紫外交联(Stratalinker2400)：

11)将10XSSC润湿的1-2张滤纸放在底板上，膜放在滤纸上，转有核酸的那面朝上。

12)交联25-50秒。

13取出膜。

14)将膜快速浸入ddH₂O中去除残留的盐。

15)将膜放在两张滤纸之间，外包锡箔，80℃烤干后，4℃保存。

4、探针合成及纯化

1)装柱

杂交前一天，将G50葡聚糖颗粒放入ddH₂O中煮沸10分钟后，溶涨过夜，再用TE平衡。用少许玻璃棉塞紧1ml注射器底部，放入5ml玻璃试管中，吸取TE装至注射器刻度上沿1厘米处，再用200μl枪吸取凝胶，沿壁缓缓流下，装至1厘米刻度处，用TE洗柱至少5ml，将玻璃试管加入比胶面高的TE，把柱子放入其中。

2)65℃水浴预热20ml预杂交液。

3)将标记反应所需各组分冰上化开，在0.5ml离心管中，加入：

    Tem平板             25ng(XμL)

    随机引物            2ul

    ddH₂O              Yul

    其中，X+Y＝3ul      Vt＝5ul

4)95℃加热3分钟后，立即放入冰中，冷却5分钟。

5)加入2.5ul 10X缓冲液，2.5ul dNTP，9ul ddH20。将1ul Klenow放入新管中，与反应管一起放入冰上。

6)加入5ulα-³²P-dCTP，枪吸打混匀后，放入37℃水浴锅中，温育10分钟。

7)加入25ul上柱溴酚蓝。

8)从玻璃试管中取出柱子，待胶面上还剩有0.5厘米高的TE时，加入反应物，待溴酚蓝前沿进胶后，加入200ul TE洗脱，继续加入TE，每次200ul，收集溴酚蓝之前的洗脱液(约800ul)。

5、预杂交

A、把膜放入杂交瓶中

1)剪取与杂交瓶等长的尼龙网，将三张膜放一排，与mesh放在一起，在盛有2XSSC的培养皿中润湿。

2)使膜紧贴mesh，折叠后再放另三张膜，共卷十次，最后卷成小筒。

3)向杂交瓶中加入40ml 2XSSC，将小筒放入2XSSC溶液里。盖紧杂交瓶后，沿着使小筒展开的方向慢慢转动，使膜与mesh贴着瓶内壁逐渐展开。

B、预杂交

1)倒出杂交瓶中的2XSSC，加入40ml预热到65℃的预杂交液。

2)与平衡杂交瓶一起对称地放入杂交仪中，使杂交瓶按膜展开的方向旋转。

3)65℃预杂交15-30分钟。

6、杂交

1)将纯化后的探针放入沸水浴中，加热5分钟变性，冰上冷却。

2)将变性后的探针加入到40ml预热到65℃的预杂交液中，制成杂交液。

3)倒出杂交瓶中的预杂交液，倒入杂交液。

4)放入杂交仪中，65℃杂交12小时。

7、洗膜

1)将杂交液小心地倒入废液瓶中，将杂交仪温度调至25℃。

2)加入100ml预热的洗涤液，平衡瓶中加入等体积的水，室温下洗5分钟。

8、放射自显影

A、将杂交膜包上保鲜膜，接触X光胶片，-80℃曝光过夜。

将带核酸的那面保持平整，压上磷屏，盖好夹子，室温曝光两天。

B、剥离探针(Stripping)

1)加热洗液至沸腾。

2)在玻璃盘中，将杂交膜浸入洗液中，洗两次，每次15分钟。

3)继续进行第二次杂交的预杂交。

9、二轮筛选

1)将同一块板的两张膜的自显影结果进行对比，在两张膜上同一位置均有信号的为阳性斑。

2)在读片机上放上自显影照片及相应的培养皿。

3)取出确定的阳性信号及周围约0.1cm²的顶层琼脂，放于250ul SM溶液中，加入50ul氯仿。

4)振荡30秒，离心。

5)取上清适当稀释再次铺板，密度约200pfu/平板。

6)重复前述的转膜、杂交、放射自显影及上述(该部分)的1-5步，可准确得到阳性噬菌斑。

10、内切除

1)取出确定的阳性信号及周围约0.1cm²的顶层琼脂，放于500ul SM溶液中，加入20ul氯仿，振荡。室温放置1-2小时，或4℃过夜。

2)30℃下，分别过夜震荡培养XL1-Blue MRF`和SOLR菌株。

3)1000g离心收集XL1-Blue MRF`和SOLR菌株，并用10mM MgSO₄重悬细胞至OD₆₀₀＝1.0。

4)在5ml离心管中，建立如下反应体系：

200μl        XL1-Blue MRF`

250μl        噬菌体

1μl          ExAssist helper噬菌体

5)37℃，15分钟。

6)加3ml的LB。37℃下震荡培养2.5-3小时。

7)65-70℃保温20分钟后，1000g离心15分钟。

8)收集上清。

9)分别取上清100μl和10μl，各加200μl SOLR菌液。

10)37℃ 15分钟。

11)各取200μl涂氨苄板，37℃下过夜培养。

11、鉴定

1)提取质粒。

2)限制性酶切，得插入片段大小。

3)测序。

12、基因分离结果

第一次筛选，得到一个阳性斑。取出该噬菌斑，铺板进行第二轮筛选。得到11个阳性斑，如图1所示，部分自显影结果，取出其中的一个阳性斑，进行单克隆内切除，转化为菌落后提取质粒。酶切，得一略大于2.5KB的插入片段，如图2所示，进行测序，得到序列1的基因。

实施例2、OsSET1功能的验证

利用转基因技术，构建OsSET1基因过量表达的转基因水稻。在OsSET1基因表达被抑制的情况下，水稻早期子房的细胞分裂能够增加，从而导致子房体积的增加。OsSET1基因反义表达的转基因水稻也有同样的结果，证实OsSET1基因具有调控器官形成的功能。

                    序列表<160> 2<170><210> 1<211> 2606<212> DNA<213> Oryza Sativa<214> 稻属栽培稻<220><223><400> 1gcacgaggcc tcgtgccgaa ttcggcacga gggaatctgg tcgccgggac gctcgtgctc    60tcgagctctg gtggtagcgg cgcctcgcat aggaccgtcg tgcagcttgt gaagctgcct   120gtggtcgaca agattccgcc ctacaccacg tggatcttcc tggacaaaaa ccaaagaatg   180gccgatgatc agtcagttgg taggaggaga atttactacg acccaattgt caatgaggct   240ctgatctgca gtgaaagtga cgatgatgtt ccagagccag aggaagagaa acatgttttc   300acagaaggag aagatcagct aatatggaaa gctactcaag atcatgggtt aagtcgagag   360gttttaaatg tcctctgcca gtttgttgat gcaactcctt cagaaattga ggaaagatca   420gaagttcttt ttgagaaata tgagaagcag tctcaatctt cttacaagac agatttgcaa   480ctttttcttg acaagaccat ggatgtggct ttagattctt ttgataatct cttctgtcgg   540agatgtttgg tttttgattg ccgtctccat gggtgctccc agaacttggt attccctagc   600gagaagcaac catatggtca tgaacttgat gaaaacaaga gaccgtgtgg cgatcagtgc   660taccttcgaa ggagagaagt atatcaagat acgtgcaatg atgaccgaaa tgcttgtaca   720acatataata tggattcaag atcttcctca ctcaaagtta gtgctaccat attgtctgaa   780tcagaagatt caaacagaga tgaagataac atcaaatcca cttctattgt tgaaaccagc   840agatcaaaaa taactaattc tgaatatgct gacaaaagtg tgacaccacc tcctggagat   900gcttctgaaa ctgaaaatgt gtcccctgac atgcccctaa gaactttagg caggcgtaag   960atttcaaagc atgcctccaa gtctaacgat cattcacctg ataaaaggca gaagatatat  1020agctcaccgt ttccttttgc aatgagtgta ctgaacaagc aatctgttcc agaaattggt  1080gagacatgtc cagattccat agaatctgca gttgatcaac ttccaagtct ggatgaccct  1140aacaagaaaa tttctaccaa agatatgtgt gctggaagca caactaacac tactgaaaat  1200acattacgag ataataataa taatttgttc atctccaaca aggagcactc tatttctcat  1260tggagtgctt tagagagaga tttgtacttg aagggaattg agatatttgg gaaaaacagt   1320tgtctcatag ctagaaacct attgtctggc ctgaagacct gcatggaagt ggccagctac    1380atgtacaaca atggtgcggc aatggcaaag agacctctat ctggtaaatc cattttaggt    1440gactttgcag aggctgaaca aggttacatg gagcaagatt tggtggcaag gacaagaatc    1500tgtcgtcgta agggccgagc tcgaaagctc aaatacactt ggaagtctgc agggcatcca    1560actgtaagaa aaagaatcgg tgatggaaag caatggtaca ctcagtataa cccatgtggg    1620tgtcagcaaa tgtgtggcaa agattgcgcc tgtgtggaaa atggaacttg ttgcgagaag    1680tactgcgggt gctcaaagag ctgcaaaaat aggtttagag gatgtcattg cgcaaaaagt    1740caatgcagaa gcagacagtg cccgtgtttt gctgccagtc gtgaatgtga tccagatgtt    1800tgcagaaact gctgggtgag ctgcggagat ggctcactag gtgagccact ggcaagaggt    1860gatggctatc agtgtggaaa catgaaactc ctcttaaaac aacaacaacg tatattgctt    1920ggaaaatctg atgttgcggg ttggggtgca ttcattaaga acccagtaaa tagaaatgat    1980taccttggtg aatacactgg cgaattgatt tctcatagag aagcagataa gcgtggcaaa    2040atatatgatc gagcaaattc atcgttccta tttgatttaa atgagcagta tgtactggat    2100gcttatcgca agggggataa actgaagttt gcaaatcact cgtcgaatcc taactgctat    2160gcgaaggtta tgttggtggc tggcgatcat cgagttggta tctatgcaaa ggaccgcatt    2220gaggctagcg aggaactctt ttatgattac cgctatggac ctgaccaagc cccagcttgg    2280gctaggagac cggaagggtc aaaaaaggat gaagcatctg tctctcacca ccgagcgcac    2340aaagttgcta gatagtccaa cagcagctcc agatgataat atcaactgta aattataccg    2400tcattgaaac acatagttca atcctagtcc attatacggc caatcgttgg cataataagc    2460atattctata ttccttagtt ccttggtaaa taaactgaga tatcgagtat gcgaataaaa    2520gaaaaataag gcactgtaag tttatttgta caaagtttgg aatttatgct atgtatagtt    2580ttgcctgtaa aaaaaaaaaa aaaaaa                                         2606<210> 2<211> 725<212> PRT<213> Oryza Sativa<214> 稻属栽培稻<220><223><400> 2Met Ala Asp Asp Gln Ser Val Gly Arg Arg Arg Ile Tyr Tyr Asp1                5                   10                  15Pro Ile Val Asn Glu Ala Leu Ile Cys Ser Glu Ser Asp Asp Asp

             20                  25                  30Val Pro Glu Pro Glu Glu Glu Lys His Val Phe Thr Glu Gly Glu

             35                 40                   45Asp Gln Leu Ile Trp Lys Ala Thr Gln Asp His Gly Leu Ser Arg

             50                 55                   60Glu Val Leu Asn Val Leu Cys Gln Phe Val Asp Ala Thr Pro Ser

             65                 70                   75Glu Ile Glu Glu Arg Ser Glu Val Leu Phe Glu Lys Tyr Glu Lys

             80                 85                   90Gln Ser Gln Ser Ser Tyr Lys Thr Asp Leu Gln Leu Phe Leu Asp

             95                 100                 105Lys Thr Met Asp Val Ala Leu Asp Ser Phe Asp Asn Leu Phe Cys

            110                 115                 120Arg Arg Cys Leu Val Phe Asp Cys Arg Leu His Gly Cys Ser Gln

           125                  130                 135Asn Leu Val Phe Pro Ser Glu Lys Gln Pro Tyr Gly His Glu Leu

           140                  145                 150Asp Glu Asn Lys Arg Pro Cys Gly Asp Gln Cys Tyr Leu Arg Arg

           155                  160                 165Arg Glu Val Tyr Gln Asp Thr Cys Asn Asp Asp Arg Asn Ala Cys

           170                  175                 180Thr Thr Tyr Asn Met Asp Ser Arg Ser Ser Ser Leu Lys Val Ser

           185                  190                 195Ala Thr Ile Leu Ser Glu Ser Glu Asp Ser Asn Arg Asp Glu Asp

            200                 205                 210Asn Ile Lys Ser Thr Ser Ile Val Glu Thr Ser Arg Ser Lys Ile

            215                 220                 225Thr Asn Ser Glu Tyr Ala Asp Lys Ser Val Thr Pro Pro Pro Gly

            230                 235                 240Asp Ala Ser Glu Thr Glu Asn Val Ser Pro Asp Met Pro Leu Arg

            215                 250                 255Thr Leu Gly Arg Arg Lys Ile Ser Lys His Ala Ser Lys Ser Asn

            260                 265                 270Asp His Ser Pro Asp Lys Arg Gln Lys Ile Tyr Ser Ser Pro Phe

            275                 280                 285Pro Phe Ala Met Ser Val Leu Asn Lys Gln Ser Val Pro Glu Ile

            290                 295                 300Gly Glu Thr Cys Pro Asp Ser Ile Glu Ser Ala Val Asp Gln Leu

            305                 310                 315Pro Ser Leu Asp Asp Pro Asn Lys Lys Ile Ser Thr Lys Asp Met

            320                 325                 325Cys Ala Gly Ser Thr Thr Asn Thr Thr Glu Asn Thr Leu Arg Asp

            335                 340                 345Asn Asn Asn Asn Leu Phe Ile Ser Asn Lys Glu His Ser Ile Ser

            350                 355                 360His Trp Ser Ala Leu Glu Arg Asp Leu Tyr Leu Lys Gly Ile Glu

            365                 370                 375Ile Phe Gly Lys Asn Ser Cys Leu Ile Ala Arg Asn Leu Leu Ser

            380                 385                 390Gly Leu Lys Thr Cys Met Glu Val Ala Ser Tyr Met Tyr Asn Asn

            395                 400                 405Gly Ala Ala Met Ala Lys Arg Pro Leu Ser Gly Lys Ser Ile Leu

            410                  415                420Gly Asp Phe Ala Glu Ala Glu Gln Gly Tyr Met Glu Gln Asp Leu

            425                 430                 435Val Ala Arg Thr Arg Ile Cys Arg Arg Lys Gly Arg Ala Arg Lys

            440                 445                 450Leu Lys Tyr Thr Trp Lys Ser Ala Gly His Pro Thr Val Arg Lys

            455                 46                  465Arg Ile Gly Asp Gly Lys Gln Trp Tyr Thr Gln Tyr Asn Pro Cys

            470                 475                 480Gly Cys Gln Gln Met Cys Gly Lys Asp Cys Ala Cys Val Glu Asn

            485                 490                 495Gly Thr Cys Cys Glu Lys Tyr Cys Gly Cys Ser Lys Ser Cys Lys

            500                 505                 510Asn Arg Phe Arg Gly Cys His Cys Ala Lys Ser Gln Cys Arg Ser

            515                 520                 525Arg Gln Cys Pro Cys Phe Ala Ala Ser Arg Glu Cys Asp Pro Asp

            530                 535                 540Val Cys Arg Asn Cys Trp Val Ser Cys Gly Asp Gly Ser Leu Gly

           545                  550                 555Glu Pro Leu Ala Arg Gly Asp Gly Tyr Gln Cys Gly Asn Met Lys

            560                 565                 570Leu Leu Leu Lys Gln Gln Gln Arg Ile Leu Leu Gly Lys Ser Asp

            575                 580                 585Val Ala Gly Trp Gly Ala Phe Ile Lys Asn Pro Val Asn Arg Asn

            590                 595                600Asp Tyr Leu Gly Glu Tyr Thr Gly Glu Leu Ile Ser His Arg Glu

            605                 610                615Ala Asp Lys Arg Gly Lys Ile Tyr Asp Arg Ala Asn Ser Ser Phe

            620                 625                630Leu Phe Asp Leu Asn Glu Gln Tyr Val Leu Asp Ala Tyr Arg Lys

            635                 640                645Gly Asp Lys Leu Lys Phe Ala Asn His Ser Ser Asn Pro Asn Cys

            650                 655                660Tyr Ala Lys Val Met Leu Val Ala Gly Asp His Arg Val Gly Ile

            665                 670                675Tyr Ala Lys Asp Arg Ile Glu Ala Ser Glu Glu Leu Phe Tyr Asp

           680                  685                690Tyr Arg Tyr Gly Pro Asp Gln Ala Pro Ala Trp Ala Arg Arg Pro

            695                 700                705Glu Gly Ser Lys Lys Asp Glu Ala Ser Val Ser His His Arg Ala

           710                  715                720His Lys Val Ala Arg

           725

Claims (8)

1、序列1的基因。

2、根据权利要求1所述的基因其特征在于：它的开放读码框为自第178个至第2355个共2178个碱基。

3、根据权利要求2所述的基因其特征在于：所述开放读码框的起始密码子为ATG。

4、根据权利要求2所述的基因其特征在于：所述开放读码框的终止密码子为TAG。

5、序列2的蛋白质。

6、含有权利要求1或2的多核苷酸的载体。

7、用权利要求1或2的多核苷酸转化的生物细胞。

8、根据权利要求7所述的生物细胞，其特征在于：它是具有器官形成调控能力的植物细胞。