CN1179974C - 植物耐逆相关的信号传递基因及其编码的蛋白质 - Google Patents

Abstract

本发明公开了存在于植物中的一类信号传递基因NTHK2以及其所编码的蛋白质和该基因在植物中受伤害(切割)、干旱和高温诱导的特点。该基因所编码的蛋白与植物中的杂合型乙烯受体蛋白有较高的同源性但并非同类，它是一类新的与植物耐逆性相关的蛋白。本发明还涉及NTHK1基因和所编码的蛋白在植物基因工程中的应用。

Description

植物耐逆相关的信号传递基因及其编码的蛋白质

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体地讲它涉及植物中的一类新的信号传递基因及其编码的蛋白质。

技术背景

可逆的蛋白磷酸化是生物体调节自身的各种生理和病理过程的主要方式之一。其中，以组氨酸磷酸化为中心的两组分信号系统在原核生物对环境的适应和芽孢的形成等过程中起着重要的作用^[1，2]。近年来的研究表明这一信号传递机制也存在于许多真核生物如酵母，黏菌和植物中，参与对渗透压和激素信号传递的调节作用^[3-8]。目前，在拟南芥中，已发现5个与乙烯信号传递相关的基因ETR1，ERS1，ETR2，EIN4和ERS2，它们均与细菌或黏菌两组分系统中的组氨酸激酶感受器有显著的序列同源性^(5，9]。其中，对ETR1的功能研究的较为深入，它以结合乙可烯，具有组氨酸激酶活性，因此可能是一种乙烯受体^[10，11]。

另外，在烟草中也相继克隆了4个可能的乙烯受体基因，TETR1(Accession NO.AF022727)，NTERS1，NTHK1。其中，NTHK1属于一类新的乙烯受体基因。对NTHK1的研究表明，它受到各种逆境(盐，干旱，伤害)的明显诱导^[14]。受器结构域。过量表达的转基因拟南芥对盐和干旱胁迫的耐性比野生型明显提高，这表明NTHK1可能是一个有功能的信号传递基因。该基因及其编码蛋白质已申请专利，公开号为CN1288951A.

发明内容

本发明人以全长的NTHK1基因为探针筛选烟草(Nicotiana tabacumvar Xanthi)的cDNA文库，得到了一个同源基因片段NTHK2。本发明人通过5’-RACE方法克隆到NTHK2的全长cDNA，发现NTHK2与已知的信号传递相关基因不同，它所编码的蛋白与植物中的杂合型乙烯受体有较高的同源性但并非同类，NTHK2基因的表达应答多种逆境如干旱、高温和伤害，是一类新的信号传递基因，与植物的耐逆性相关。

因而，本发明的一个目的是提供一种新的杂合型乙烯受体类信号传递蛋白及其编码基因，其表达受干旱、高温和伤害诱导，从而为植物耐逆性基因工程改良提供了目的基因和调控元件。

本发明的另一个目的是提供一类新的信号传递蛋白，此类蛋白中的一种的氨基酸序列如图1所示。

本发明的还一个目的是提供编码上述新的信号传递蛋白的核苷酸序列，此类基因中的一种如图2所示。

本发明所述的蛋白质(基因)可以是来自所有单子叶和双子叶植物，如：烟草、拟南芥、草坪草、杨树、大豆、小麦、水稻、棉花或蕃茄等。

本发明提供了NTHK2基因及其编码蛋白在一种培育耐逆植物品种中的应用。包括将本发明所述的信号系统基因导入植物细胞并使其表达。

可利用本发明NTHK2基因作为目的基因构建植物表达载体，其中可用任何一种启动子例如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、Ubiquitin启动子或其它启动子，该表达载体中必要时可包括增强子，不论是转录增强子或翻译增强子。为了简化转化细胞的鉴定可使用选择性标记包括对抗生素抗性的酶，也可利用颜色变化(例如B-葡糖醛酸糖苷酶GUS)或发光(例如荧光酶)来识别的化合物的酶类，也可用无标记选择。所用的表达载体可使用Ti质粒，Ri质粒，植物病毒载体等。转化方法可用经农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法或其它方法转化植物。

本发明的NTHK2基因的受体植物包括单子叶和双子叶植物，例如水稻、小麦、玉米、大豆、棉花、蔬菜、树木和草坪草等。

具体实施方式

实施例1

营养生长阶段的烟草(40到50cm高，15到20片叶)用于伤害处理。取成熟健康的叶剪成1到2cm²大小，在0.5×MS的溶液中摇动(150r/min)3小时。RNA提取按Zhang J.S.(1996)等的方法进行。用上述RNA制备mRNA然后合成cDNA构建cDNA文库。以烟草NTHK1基因(已申请专利，公开号为：CN1288951A)为探针，从上述cDNA文库中筛选出数个阳性克隆，其中一个与NTHK1基因的同源性为51％。该片段命名为NTHK2。

运用RT-PCR方法获得NTHK2全基因。根据上述NTHK2序列设计并合成基因特异引物GSP1(389-415)和GSP2(203-228)。具体操作按照SMART RACE(CLONTECH)试剂盒进行。首先进行逆转录，反应体系为：1μl伤害处理的烟草叶片的总RNA、1μl 5′-CDS引物、1μl SMARTIIoligo引物(10μmol/L)和2μl灭菌水。混匀后，于70℃加热2min，置冰上冷却2min，离心使液体沉底。加入2μ1 5×第一链缓冲液、1μl DTT(20mmol/L)、1ul dNTP(10mmol/L)和1μl MMLV逆转录酶(200U/μl)，42℃逆转录1.5hr，加入100μl灭菌水，于72℃加热2min终止逆转录反应。随后，以通用引物混合物(UPM)和GSP1进行“Touchdown”PCR扩增^[16]。在Perkin-Elmer(PE)DNA Thermal Cycler 9600启动PCR反应，条件为：5×(94℃ 30s，72℃ 3min)，5×(94℃ 30s，70℃ 30s，72℃ 3min)。通过上述RACE PCR反应，获得了单一条带A，长度大约为1.6Kb。以条带A为模板，使用巢式通用引物(NUP)和GSP2进行鉴定，获得单一条带B，长度大约为1.4Kb。因为GSP1和GSP2在位置上相差200bp，所以所得PCR片段与预计长度一致。从胶中回收B片段，纯化，直接测序。测序结果与已知序列进行拼接，并结合测序峰图进行校正。获得拼接好的序列(图2)。根据拼接好的序列，分别在编码区的5’和3’末端设计一对引物，以烟草的cDNA为模板扩增出单一条带，估计长度为2.3kb。该片段回收后，克隆至pGEM-T Easy载体测序。测序结果与拼接结果完全一致。NTHK2基因全长有3216bp，其中5’非编码区为509bp，3’非编码区为427bp，编码区为2280bp(图2)，编码产物为760个氨基酸(图1)，计算分子量为85.2KD，pI值为7.2。

NTHK2氨基酸序列与植物中的许多杂合型的乙烯受体基因有较高的同源性。例如，它与西红柿的乙烯受体同源物LeETR5的同源性为78.6％，与我们实验室所克隆的NTHK1的同源性为55％，与研究较为深入的ETR1有32.5％的同源性。因为ETR1、NTHK1及其他所比较的蛋白均为乙烯受体或其同源物，所以推测NTHK2也是烟草中的乙烯受体同源物。由SMART程序给出的结构预测参见图3。在NTHK2氨基端有一个信号肽结构，其后紧接着三个疏水螺旋为跨膜区，可能与乙烯的结合有关。有两个功能结构域，即组氨酸激酶结构域和接受域。但是，在激酶结构域中没有保守的组氨酸，这与NTHK1及ETR1不同，因此它具有不同的功能，该基因命名为NTHK2(Nicotiana Tobacum Histidine Kinase-like)。

实施例2

关于NTHK2的特性：NTHK2的表达受干旱诱导。烟草种于含蛭石的花盆中，待长至5叶期时用不同浓度：5％，10％和20％的聚乙二醇6000(PEG6000)进行灌浇至土壤饱和，24小时后收取，提取RNA，进行竞争RT PCR分析，图说明5％PEG处理时NTHK2转录即有大幅度升高，20％PEG处理时回复未处理时水平。说明干旱能诱导NTHK2基因的表达(图3)。

实施例3

NTHK2基因的表达受伤害(切割)诱导。将烟草叶片剪成1-2cm²碎片后，悬于0.5XMS培养基中摇动(150r/min)5，10，15，30，60，180，及480分钟，以未处理叶片为对照，对样品的RNA进行竞争RT-PCR分析，图5说明在15分钟后NTHK2的转录水平即有明显提高，至60分钟达到最高值，说明NTHK2基因的表达受伤害诱导。

实验例4

NTHK2基因的表达受高温诱导。将5叶期的烟草幼苗置于37℃中培养24小时，进行竞争RT-PCR分析表明在高温下NTHK2的表达明显升高，见图4。

实验例5

NTHK2基因的表达不受高盐的诱导。烟草5叶期苗用不同的盐浓度处理：100，200和400mM NaCl，24小时后以竞争RT-PCR分析，图3表明NTHK2的表达不受盐胁迫的诱导。

实验例6

NTHK2基因的表达不受低温的诱导。将5叶期的烟草幼苗置于4℃中培养24小时，进行竞争RT-PCR分析表明在低温下NTHK2的表达无明显变化(图4)，表明NTHK2基因的表达不受低温诱导。

本发明中克隆的植物信号系统基因NTHK2具有杂合型乙烯受体蛋白的特征，与NTHK1蛋白的相似性为55％，上述实验例表明其与已知此类蛋白有不同的功能，因此界定NHTK2为一个新的蛋白，其编码基因为一个新的基因。

附图简要说明

图1.烟草NTHK2蛋白的氨基酸序列。

图2.烟草NTHK2基因的核苷酸序列。

图3.高盐和干旱胁迫对NTHK2基因转录的诱导作用，盐和干旱对烟草幼苗中NTHK2表达的影响用不同浓度的NaCl和PEG溶液浇灌烟草幼苗，24h后收取材料进行竞争RT-PCR。

图4.冷及高温胁迫对NTHK2基因转录的诱导作用，冷、热激及ABA对烟草幼苗NTHK2表达的影响，用竞争RT-PCR法测定。

图5.剪切伤害对NTHK2基因转录的诱导作用，伤害对NTHK2表达的影响，烟草叶片剪切成1-2cm²的碎片并在0.5×MS中摇动不同时间，应用竞争RT-PCR完成。

                       SEQUENCE LISTING

<110>中国科学院遗传与发育生物学研究所

<120>植物耐逆相关的信号传递基因及其编码的蛋白质

<130>植物耐逆相关的信号传递基因及其编码的蛋白质

<140>02105035.X

<141>2002-06-03

<160>2

<170>PatentIn version 3.1

<210>1    序列表1

<211>2283

<212>DNA

<213>tobacco

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(2280)

<223>

<400>1

atg tta agg tgg ttg ttt cta gga ttg ttg att tct ttg gtc att atc     48

Met Leu Arg Trp Leu Phe Leu Gly Leu Leu Ile Ser Leu Val Ile Ile

1               5                   10                  15

tct gtt aaa gct aat gat act gaa ttc tcc aat tgt aac tgt gat gaa     96

Ser Val Lys Ala Asn Asp Thr Glu Phe Ser Asn Cys Asn Cys Asp Glu

            20                  25                  30

gaa ggt atg tgg agt ata cat aac att ctt gag tgc caa aag gtg agt    144

Glu Gly Met Trp Ser Ile His Asn Ile Leu Glu Cys Gln Lys Val Ser

        35                  40                  45

gat ttc ttg att gca gtt gct tac ttt tct att cca ctt gag ttg ctt    192

Asp Phe Leu Ile Ala Val Ala Tyr Phe Ser Ile Pro Leu Glu Leu Leu

    50                  55                  60

tac ttt att agt tgc tca aat att cct ttt aaa tgg gtt ctt atc caa    240

Tyr Phe Ile Ser Cys Ser Asn Ile Pro Phe Lys Trp Val Leu Ile Gln

65                  70                  75                  80

ttc att gca ttc ata gta cta tgt ggc ttg act cat ttg ctc aat gga    288

Phe Ile Ala Phe Ile Val Leu Cys Gly Leu Thr His Leu Leu Asn Gly

                85                  90                  95

ttg act tat aat agt gct cat cct tcc ttc caa ttg ata atg tca tta      336

Leu Thr Tyr Asn Ser Ala His Pro Ser Phe Gln Leu Ile Met Ser Leu

            100                 105                 110

aca gtt gcc aaa atc tta act gcc ctt gtt tct tgt gca act gca att      384

Thr Val Ala Lys Ile Leu Thr Ala Leu Val Ser Cys Ala Thr Ala Ile

        115                 120                 125

acc ctt ttg act ctg ttc cct cta ctc ctc aaa ata aaa gtt aga gaa      432

Thr Leu Leu Thr Leu Phe Pro Leu Leu Leu Lys Ile Lys Val Arg Glu

    130                 135                 140

ctg ttt ttg aca caa aat gtt atg gag ctt gat caa gag gtt ggg ttg      480

Leu Phe Leu Thr Gln Asn Val Met Glu Leu Asp Gln Glu Val Gly Leu

145                 150                 155                 160

atg aag aag cag aaa gaa gta tgt atg caa gtc cgt atg ctt aca cga      528

Met Lys Lys Gln Lys Glu Val Cys Met Gln Val Arg Met Leu Thr Arg

                165                 170                 175

gaa att agg aag tcg att gat aaa cac aat atc ttg tat act act cta      576

Glu Ile Arg Lys Ser Ile Asp Lys His Asn Ile Leu Tyr Thr Thr Leu

            180                 185                 190

gtt gag ctt tca aag acc ttg aat ctg cac aac tgt gca gtt tgg atg      624

Val Glu Leu Ser Lys Thr Leu Asn Leu His Asn Cys Ala Val Trp Met

        195                 200                 205

cca aat gaa aat agg tca gtg atg aac ttg aca cat ggg tta agc ccc      672

Pro Asn Glu Asn Arg Ser Val Met Asn Leu Thr His Gly Leu Ser Pro

    210                 215                 220

ggt tct gct gta gaa tac cat cgt tca ctt cct atc gat gat ccg gat      720

Gly Ser Ala Val Glu Tyr His Arg Ser Leu Pro Ile Asp Asp Pro Asp

225                 230                 235                 240

gtg ttg gag ata aca aag gac aaa ggg gta agg att ttg agg caa gat      768

Val Leu Glu Ile Thr Lys Asp Lys Gly Val Arg Ile Leu Arg Gln Asp

                245                 250                255

tca gtt ctt gca gct gca agc agt gga ggg cct ggt gag ccg tgt act      816

Ser Val Leu Ala Ala Ala Ser Ser Gly Gly Pro Gly Glu Pro Cys Thr

            260                 265                 270

gtt gca gca att cgg atg cca ttg ctt cgt gct tcg gat ttc aaa ggg      864

Val Ala Ala Ile Arg Met Pro Leu Leu Arg Ala Ser Asp Phe Lys Gly

        275                 280                 285

gga acg ccg gtg ttg gtt gac act cgt tac gcc att ttg gtt ttg gtt      912

Gly Thr Pro Val Leu Val Asp Thr Arg Tyr Ala Ile Leu Val Leu Val

    290                 295                 300

ctt cca agt ggg gat ttt gat tgg agc agt aat gag atg gag ata gtg      960

Leu Pro Ser Gly Asp Phe Asp Trp Ser Ser Asn Glu Met Glu Ile Val

305                 310                 315                 320

gaa gta gtt gct gat cag gtg gcg gtg gca ctg tct cat gcc acg gtt     1008

Glu Val Val Ala Asp Gln Val Ala Val Ala Leu Ser His Ala Thr Val

                325                 330                 335

ctt gaa gag tct caa tta atg agg gag aaa cta gag att agg aat ggt     1056

Leu Glu Glu Ser Gln Leu Met Arg Glu Lys Leu Glu Ile Arg Asn Gly

            340                 345                 350

ttg ctg cag cag gct aag gag aat gct gtg aag gca aca cag gca agg     1104

Leu Leu Gln Gln Ala Lys Glu Asn Ala Val Lys Ala Thr Gln Ala Arg

        355                 360                 365

aat tca ttt caa aag gta atg aac aat ggg atg aga cag cca atg cac     1152

Asn Ser Phe Gln Lys Val Met Asn Asn Gly Met Arg Gln Pro Met His

    370                 375                 380

tca gtt ttg ggt ttg ctt tcc ata ctt caa gac gag aac ttt aca agc     1200

Ser Val Leu Gly Leu Leu Ser Ile Leu Gln Asp Glu Asn Phe Thr Ser

385                 390                 395                 400

tct aac cag agg att att att gac aca atg atg aga aca agc acc gtt     1248

Ser Asn Gln Arg Ile Ile Ile Asp Thr Met Met Arg Thr Ser Thr Val

                405                 410                 415

ctg tca act tta aca aat gat gca atg gat ata tcc gag aaa gat gaa     1296

Leu Ser Thr Leu Thr Asn Asp Ala Met Asp Ile Ser Glu Lys Asp Glu

            420                 425                 430

gga aga atc cca gta gaa atg atg ccc ttt cag ctg cat tca ctg atc     1344

Gly Arg Ile Pro Val Glu Met Met Pro Phe Gln Leu His Ser Leu Ile

        435                 440                 445

aga gag gct tct tgt ctt gtt aaa tgc ctg tgt att tat aag ggc ttt     1392

Arg Glu Ala Ser Cys Leu Val Lys Cys Leu Cys Ile Tyr Lys Gly Phe

    450                 455                 460

ggc ttt tct acg gat ttt ccc aat tct ttg cct aat ctg gtg atg ggc     1440

Gly Phe Ser Thr Asp Phe Pro Asn Ser Leu Pro Asn Leu Val Met Gly

465                 470                 475                 480

gat gaa atg aga acg ttt cag gtg tta ctt cat atg gtg ggg cat cta     1488

Asp Glu Met Arg Thr Phe Gln Val Leu Leu His Met Val Gly His Leu

                485                 490                 495

tta aat atc agc ttt gga agc ggc tcc gtt gta ttc agg gtt gga act     1536

Leu Asn Ile Ser Phe Gly Ser Gly Ser Val Val Phe Arg Val Gly Thr

             500                 505                 510

gag gat ggg aat gat aag att tgg gga gca aga aga cat agc ata gtt     1584

Glu Asp Gly Asn Asp Lys Ile Trp Gly Ala Arg Arg His Ser Ile Val

        515                 520                 525

gat gaa tac gtt acc ata aaa ttt gaa act aaa att aat ctt gaa agt     1632

Asp Glu Tyr Val Thr Ile Lys Phe Glu Thr Lys Ile Asn Leu Glu Ser

    530                 535                 540

tct caa aga aat agc tca atg tca agt att cac ttt ggt gga agg agg     1680

Ser Gln Arg Asn Ser Ser Met Ser Ser Ile His Phe Gly Gly Arg Arg

545                 550                 555                 560

tat aac agc aaa gag tta aag gag ggc ttg agt ttc cgc atg tgc aaa     1728

Tyr Asn Ser Lys Glu Leu Lys Glu Gly Leu Ser Phe Arg Met Cys Lys

                565                 570                 575

aag ctt gtt cag atg atg cag gga aac gta tat atg tcc tca aat tcc     1776

Lys Leu Val Gln Met Met Gln Gly Asn Val Tyr Met Ser Ser Asn Ser

            580                 585                 590

gag ggt cgt gca caa ggg atg act ctt att ctc aga ttt cta aaa cag     1824

Glu Gly Arg Ala Gln Gly Met Thr Leu Ile Leu Arg Phe Leu Lys Gln

        595                 600                 605

tca tca ttt aga aaa cac atg ttt gat ctt gga aat cct ttg gag caa     1872

Ser Ser Phe Arg Lys His Met Phe Asp Leu Gly Asn Pro Leu Glu Gln

    610                 615                 620

gca att tcc agc tca atg ttc aaa ggc ctt caa gtt cta ctt gct gat     1920

Ala Ile Ser Ser Ser Met Phe Lys Gly Leu Gln Val Leu Leu Ala Asp

625                 630                 635                 640

gac gat gac gta aat aga atg gta acc aaa aag ctg ctc gaa aaa ctg     1968

Asp Asp Asp Val Asn Arg Met Val Thr Lys Lys Leu Leu Glu Lys Leu

                645                 650                 655

ggt tgc caa gta att gct gtg tca act ggt ttt cag tgc cta agt gca     2016

Gly Cys Gln Val Ile Ala Val Ser Thr Gly Phe Gln Cys Leu Ser Ala

            660                 665                 670

atg ggc cat tca aaa act tct ata caa gtt gtc att ttg gat ctt cac     2064

Met Gly His Ser Lys Thr Ser Ile Gln Val Val Ile Leu Asp Leu His

        675                 680                 685

atg ccg gaa atg gat gga ttt gaa gtg gcg att agg gtg cgc aag ttc     2112

Met Pro Glu Met Asp Gly Phe Glu Val Ala Ile Arg Val Arg Lys Phe

    690                 695                 700

cac agc cat ggt tgg ccg ttg atc ata gcc tta tct gct act tca gag     2160

His Ser His Gly Trp Pro Leu Ile Ile Ala Leu Ser Ala Thr Ser Glu

705                 710                 715                 720

gaa cta gtt tgg gac aga tgc cta cag gtc gga atc aac ggt ctc ata     2208

Glu Leu Val Trp Asp Arg Cys Leu Gln Val Gly Ile Asn Gly Leu Ile

                725                 730                 735

aga aaa cct gtt ctc ttg caa gga atg gcc gag gaa ctt cag aga gtc     2256

Arg Lys Pro Val Leu Leu Gln Gly Met Ala Glu Glu Leu Gln Arg Val

            740                 745                 750

cta caa agg gct ggt gaa ggc ttt tga                                  2283

Leu Gln Arg Ala Gly Glu Gly Phe

        755                 760

<210>2    序列表2

<211>760

<212>PRT

<213>tobacco

<400>2

Met Leu Arg Trp Leu Phe Leu Gly Leu Leu Ile Ser Leu Val Ile Ile

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Ala Asn Asp Thr Glu Phe Ser Asn Cys Asn Cys Asp Glu

            20                  25                  30

Glu Gly Met Trp Ser Ile His Asn Ile Leu Glu Cys Gln Lys Val Ser

        35                  40                  45

Asp Phe Leu Ile Ala Val Ala Tyr Phe Ser Ile Pro Leu Glu Leu Leu

    50                  55                  60

Tyr Phe Ile Ser Cys Ser Asn Ile Pro Phe Lys Trp Val Leu Ile Gln

65                  70                  75                  80

Phe Ile Ala Phe Ile Val Leu Cys Gly Leu Thr His Leu Leu Asn Gly

                85                  90                  95

Leu Thr Tyr Asn Ser Ala His Pro Ser Phe Gln Leu Ile Met Ser Leu

            100                 105                 110

Thr Val Ala Lys Ile Leu Thr Ala Leu Val Ser Cys Ala Thr Ala Ile

        115                 120                 125

Thr Leu Leu Thr Leu Phe Pro Leu Leu Leu Lys Ile Lys Val Arg Glu

    130                 135                 140

Leu Phe Leu Thr Gln Asn Val Met Glu Leu Asp Gln Glu Val Gly Leu

145                 150                 155                 160

Met Lys Lys Gln Lys Glu Val Cys Met Gln Val Arg Met Leu Thr Arg

                165                 170                 175

Glu Ile Arg Lys Ser Ile Asp Lys His Asn Ile Leu Tyr Thr Thr Leu

            180                 185                 190

Val Glu Leu Ser Lys Thr Leu Asn Leu His Asn Cys Ala Val Trp Met

        195                 200                 205

Pro Asn Glu Asn Arg Ser Val Met Asn Leu Thr His Gly Leu Ser Pro

    210                 215                 220

Gly Ser Ala Val Glu Tyr His Arg Ser Leu Pro Ile Asp Asp Pro Asp

225                 230                 235                 240

Val Leu Glu Ile Thr Lys Asp Lys Gly Val Arg Ile Leu Arg Gln Asp

                245                 250                 255

Ser Val Leu Ala Ala Ala Ser Ser Gly Gly Pro Gly Glu Pro Cys Thr

            260                 265                 270

Val Ala Ala Ile Arg Met Pro Leu Leu Arg Ala Ser Asp Phe Lys Gly

        275                 280                 285

Gly Thr Pro Val Leu Val Asp Thr Arg Tyr Ala Ile Leu Val Leu Val

    290                 295                 300

Leu Pro Ser Gly Asp Phe Asp Trp Ser Ser Asn Glu Met Glu Ile Val

305                 310                 315                 320

Glu Val Val Ala Asp Gln Val Ala Val Ala Leu Ser His Ala Thr Val

                325                 330                 335

Leu Glu Glu Ser Gln Leu Met Arg Glu Lys Leu Glu Ile Arg Asn Gly

            340                 345                 350

Leu Leu Gln Gln Ala Lys Glu Asn Ala Val Lys Ala Thr Gln Ala Arg

        355                 360                 365

Asn Ser Phe Gln Lys Val Met Asn Asn Gly Met Arg Gln Pro Met His

    370                 375                 380

Ser Val Leu Gly Leu Leu Ser Ile Leu Gln Asp Glu Asn Phe Thr Ser

385                 390                 395                 400

Ser Asn Gln Arg Ile Ile Ile Asp Thr Met Met Arg Thr Ser Thr Val

                405                 410                 415

Leu Ser Thr Leu Thr Asn Asp Ala Met Asp Ile Ser Glu Lys Asp Glu

            420                 425                 430

Gly Arg Ile Pro Val Glu Met Met Pro Phe Gln Leu His Ser Leu Ile

        435                 440                 445

Arg Glu Ala Ser Cys Leu Val Lys Cys Leu Cys Ile Tyr Lys Gly Phe

    450                 455                 460

Gly Phe Ser Thr Asp Phe Pro Asn Ser Leu Pro Asn Leu Val Met Gly

465                 470                 475                 480

Asp Glu Met Arg Thr Phe Gln Val Leu Leu His Met Val Gly His Leu

                485                 490                 495

Leu Asn Ile Ser Phe Gly Ser Gly Ser Val Val Phe Arg Val Gly Thr

            500                 505                 510

Glu Asp Gly Asn Asp Lys Ile Trp Gly Ala Arg Arg His Ser Ile Val

        515                 520                 525

Asp Glu Tyr Val Thr Ile Lys Phe Glu Thr Lys Ile Asn Leu Glu Ser

    530                 535                 540

Ser Gln Arg Asn Ser Ser Met Ser Ser Ile His Phe Gly Gly Arg Arg

545                 550                 555                 560

Tyr Asn Ser Lys Glu Leu Lys Glu Gly Leu Ser Phe Arg Met Cys Lys

                565                 570                 575

Lys Leu Val Gln Met Met Gln Gly Asn Val Tyr Met Ser Ser Asn Ser

            580                 585                 590

Glu Gly Arg Ala Gln Gly Met Thr Leu Ile Leu Arg Phe Leu Lys Gln

        595                 600                 605

Ser Ser Phe Arg Lys His Met Phe Asp Leu Gly Asn Pro Leu Glu Gln

    610                 615                 620

Ala Ile Ser Ser Ser Met Phe Lys Gly Leu Gln Val Leu Leu Ala Asp

625                 630                 635                 640

Asp Asp Asp Val Asn Arg Met Val Thr Lys Lys Leu Leu Glu Lys Leu

                645                 650                 655

Gly Cys Gln Val Ile Ala Val Ser Thr Gly Phe Gln Cys Leu Ser Ala

            660                 665                 670

Met Gly His Ser Lys Thr Ser Ile Gln Val Val Ile Leu Asp Leu His

        675                 680                 685

Met Pro Glu Met Asp Gly Phe Glu Val Ala Ile Arg Val Arg Lys Phe

    690                 695                 700

His Ser His Gly Trp Pro Leu Ile Ile Ala Leu Ser Ala Thr Ser Glu

705                 710                 715                 720

Glu Leu Val Trp Asp Arg Cys Leu Gln Val Gly Ile Asn Gly Leu Ile

                725                 730                 735

Arg Lys Pro Val Leu Leu Gln Gly Met Ala Glu Glu Leu Gln Arg Val

            740                 745                 750

Leu Gln Arg Ala Gly Glu Gly Phe

        755                 760

Claims (5)

1.一种存在于植物中的信号传递蛋白，它具有如下的氨基酸序列：

LRWLFLGLLISLVIISVKANDTEFSNCNCDEEGMWSIHNILECQKVSDFLI

AVAYFSIPLELLYFISCSNIPFKWVLIQFIAFIVLCGLTHLLNGLTYNSAHPSF

QLIMSLTVAKILTALVSCATAITLLTLFPLLLKIKVRELFLTQNVMELDQEV

GLMKKQKEVCMQVRMLTREIRKSIDKHNILYTTLVELSKTLNLHNCAVW

MPNENRSVMNLTHGLSPGSAVEYHRSLPIDDPDVLEITKDKGVRILRQDS

VLAAASSGGPGEPCTVAAIRMPLLRASDFKGGTPVLVDTRYAILVLVLPSG

DFDWSSNEMEIVEVVADQVAVALSHATVLEESQLMREKLEIRNGLLQQA

K

ENAVKATQARNSFQKVMNNGMRQPMHSVLGLLSILQDENFTSSNQRIIID

TMMRTSTVLSTLTNDAMDISEKDEGRIPVEMMPFQLHSLIREASCLVKCL

CIYKGFGFSTDFPNSLPNLVMGDEMRTFQVLLHMVGHLLNISFGSGSVVF

RVGTEDGNDKIWGARRHSIVDEYVTIKFETKINLESSQRNSSMSSIHFGGR

RYNSKELKEGLSFRMCKKLVQMMQGNVYMSSNSEGRAQGMTLILRFLK

QSSFRKHMFDLGNPLEQAISSSMFKGLQVLLADDDDVNRMVTKKLLEK

LGCQVIAVSTGFQCLSAMGHSKTSIQVVILDLHMPEMDGFEVAIRVRKFH

SHGWPLIIALSATSEELVWDRCLQVGINGLIRKPVLLQGMAEELQRVLQR

AGEGF。

2.一种编码权利要求1所述的蛋白质的基因的核苷酸序列。

3.按照权利要求2所述的核苷酸序列如下所示：

AAAAAAAAAAACTTTATGCTGTTTTAATAGGTTTTAACCTTTTTCTCTT

CATAGTTTCTTGTTTTTGGAGTGCCAAAAAAAATCGAGGAACTTGGAA

TATTGTTTTTTCCAAGATCACTTTTTTATCATCAACTAGAATTTGGGTTT

CTCTATTTATGTGTAAAGATTAAAGCTTTCTGCTCTTTTATTAGTTTTTAA

TCTTTTTCCCTTCATAATTTCTTGTTTTTGGAGTGCAAAGAAGAAAATT

AATTGGGGAAAAGAATAATCTTGGATTGAAAATTTTGAGGCTTTGCTC

AAAAGGGTATGCTAGATTTTGAGGAATATAGGTATGTTAGATCTAGGAA

TGTTAAAGATCATTTTTTGTTACTACTTTTTATTGGAGTTGTGAGCCAAT

GAGATCTAATTGGTTGTTTGCATTTCATGTTGATTGAGTTGAGATATTCA

GAAAATTCAAAATTTTCCCAATTTGATGGTTTGAAAGGAGTCCTTTTAA

GGTAAGAATATTAATTATGTTAAGGTGGTTGTTTCTAGGATTGTTGATTT

CTTTGGTCATTATCTCTGTTAAAGCTAATGATACTGAATTCTCCAATTGT

AACTGTGATGAAGAAGGTATGTGGAGTATACTATAACATTCTTGAGTGC

CAAAAGGTGAGTGATTTCTTGATTGCAGTTGCTTACTTTTCTATTCCAC

TTGAGTTGCTTTACTTTATTAGTTGCTCAAATATTCCTTTTAAATGGGTT

CTTATCCAATTCATTGCATTCATAGTACTATGTGGCTTGACTCATTTGCT

CAATGGATTGACTTATAATAGTGCTCATCCTTCCTTCCAATTGATAATGT

CATTAACAGTTGCCAAAATCTTAACTGCCCTTGTTTCTTGTGCAACTGC

AATTACCCTTTTGACTCTGTTCCCTCTACTCCTCAAAATAAAAGTTAGA

GAACTGTTTTTGACACAAAATGTTATGGAGCTTGATCAAGAGGTTGGG

TTGATGAAGAAGCAGAAAGAAGTATGTATGCAAGTCCGTATGCTTACA

CGAGAAATTAGGAAGTCGATTGATAAACACAATATCTTGTATACTACTC

TAGTTGAGCTTTCAAAGACCTTGAATCTGCACAACTGTGCAGTTTGGA

TGCCAAATGAAAATAGGTCAGTGATGAACTTGACACATGGGTTAAGCC

CCGGTTCTGCTGTAGAATACCATCGTTCACTTCCTATCGATGATCCGGA

TGTGTTGGAGATAACAAAGGACAAAGGGGTAAGGATTTTGAGGCAAG

ATTCAGTTCTTGCAGCTGCAAGCAGTGGAGGGCCTGGTGAGCCGTGTA

CTGTTGCAGCAATTCGGATGCCATTGCTTCGTGCTTCGGATTTCAAAGG

GGGAACGCCGGTGTTGGTTGACACTCGTTACGCCATTTTGGTTTTGGT

TCTTCCAAGTGGGGATTTTGATTGGAGCAGTAATGAGATGGAGATAGT

GGAAGTAGTTGCTGATCAGGTGGCGGTGGCACTGTCTCATGCCACGGT

TCTTGAAGAGTCTCAATTAATGAGGGAGAAACTAGAGATTAGGAATGG

TTTGCTGCAGCAGGCTAAGGAGAATGCTGTGAAGGCAACACAGGCAA

GGAATTCATTTCAAAAGGTAATGAACAATGGGATGAGACAGCCAATGC

ACTCAGTTTTGGGTTTGCTTTCCATACTTCAAGACGAGAACTTTACAA

GCTCTAACCAGAGGATTATTATTGACACAATGATGAGAACAAGCACCG

TTCTGTCAACTTTAACAAATGATGCAATGGATATATCCGAGAAAGATGA

AGGAAGAATCCCAGTAGAAATGATGCCCTTTCAGCTGCATTCACTGAT

CAGAGAGGCTTCTTGTCTTGTTAAATGCCTGTGTATTTATAAGGGCTTT

GGCTTTTCTACGGATTTTCCCAATTCTTTGCCTAATCTGGTGATGGGCG

ATGAAATGAGAACGTTTCAGGTGTTACTTCATATGGTGGGGCATCTATT

AAATATCAGCTTTGGAAGCGGCTCCGTTGTATTCAGGGTTGGAACTGA

GGATGGGAATGATAAGATTTGGGGAGCAAGAAGACATAGCATAGTTGA

TGAATACGTTACCATAAAATTTGAAACTAAAATTAATCTTGAAAGTTCT

CAAAGAAATAGCTCAATGTCAAGTATTCACTTTGGTGGAAGGAGGTAT

AACAGCAAAGAGTTAAAGGAGGGCTTGAGTTTCCGCATGTGCAAAAA

GCTTGTTCAGATGATGCAGGGAAACGTATATATGTCCTCAAATTCCGAG

GGTCGTGCACAAGGGATGACTCTTATTCTCAGATTTCTAAAACAGTCAT

CATTTAGAAAACACATGTTTGATCTTGGAAATCCTTTGGAGCAAGCAA

TTTCCAGCTCAATGTTCAAAGGCCTTCAAGTTCTACTTGCTGATGACG

ATGACGTAAATAGAATGGTAACCAAAAAGCTGCTCGAAAAACTGGGTT

GCCAAGTAATTGCTGTGTCAACTGGTTTTCAGTGCCTAAGTGCAATGG

GCCATTCAAAAACTTCTATACAAGTTGTCATTTTGGATCTTCACATGCC

GGAAATGGATGGATTTGAAGTGGCGATTAGGGTGCGCAAGTTCCACAG

CCATGGTTGGCCGTTGATCATAGCCTTATCTGCTACTTCAGAGGAACTA

GTTTGGGACAGATGCCTACAGGTCGGAATCAACGGTCTCATAAGAAAA

CCTGTTCTCTTGCAAGGAATGGCCGAGGAACTTCAGAGAGTCCTACAA

AGGGCTGGTGAAGGCTTTTGATGTAATACTAATGGCGAAAACAAACTT

GGAGTTCTCGAAATAGTCACGAGCCTGAATTCAAACCACCTTCACTCA

GTAGCAGAGCCAGGAATTCTAACCAAGGATATTCAAAAAAAAATGCA

GGAATGTCACACCAAGGATTCAACCCTGCAACTTAAAAGCAATTTTTG

GACCGCCTTTGCCATTACACTAGAAACTTCTCTTATGTCTAGAGGATTC

AAAAATACAAATATATGCACAAAAAAATTATTTTTCCCTATTTGCACAG

TATAGTTTTCCAACGACTTCATTACATGTAGCTCCGCCAGTGCCTTTACT

GACCATTGTAGAGATAACATCACAGCTTTGGCAGATAAATCAGCTTCTT

GCTAACCTTGTAGTATGTGCAGTTTACATCATACAACATTACAACTTAA

AAAAAAAA。

4.按照权利要求1所述的蛋白质的氨基酸序列在植物基因工程中的应用。

5.按照权利要求2或3所述的核苷酸序列在植物基因工程中的应用。

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