CN1404394A - 组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种药物组合物，其中含有(i)式(I)的化合物，其中：X是环中具有至少4个原子的烃基环；K是烃基基团；Rs是氨基磺酸根；(ii)任选地与药用载体、稀释剂、赋形剂或辅剂混合，其中该化合物以提供不大于200μg/天剂量的量存在。

Description

组合物
发明领域
本发明涉及组合物。
具体地讲，本发明涉及含有其含量能提供不大于200μg/天剂量的化合物的药物组合物。该化合物是含有环系和氨基磺酸根的环状化合物。本发明还涉及该组合物在治疗中的用途。
发明背景
雌激素在激素避孕法、在绝经后激素替代疗法(HRT)中起主要作用，并用于治疗妇科疾病(例如，乳腺癌)和男科疾病(如前列腺癌)。对于HRT和避孕，雌激素主要与促孕素一起使用，促孕素如左炔诺孕酮、去氧孕烯、炔诺酮、醋酸环丙孕酮、氯地孕酮、地诺孕素。
当用于避孕时，需要用雌激素安全地抑制卵泡成熟和排卵，但是另一方面它们代替了雌二醇的内源性卵巢分泌，而雌二醇很大程度上受到抑制。此替代对于维持人工月经周期及其它生殖功能是重要的，其不能仅仅通过使用促孕素达到任何令人满意的程度。
此外，内源性和外源性雌激素在女性机体中履行重要的中枢神经和代谢功能：正常的雌激素水平对妇女的康乐起决定性作用。它们在此系统中的存在通过多种机理抵抗心血官疾病的发生：在血液中产生有利的脂蛋白，抑制脂类在血管壁沉积，通过正面影响血管张力来降低血压，降低重要血管扇面中灌注阻力，减弱对血管肌肉的收缩刺激。内膜，当受雌激素影响时，释放对抗血栓形成的因子。雌激素对于保护妇女骨结构也是不可或缺的。它们的缺乏会导致骨的破坏(骨质疏松)。雌激素的这些近期发现的“中枢神经”和“代谢”作用是HRTd的一个主要方面。可以认为雌激素在男性机体中具有类似的功能，而它们的撤除导致与妇女中所见相类似的紊乱。这两种性别之间的一个不同之处是，较女性而言，在男性中激素产生的停止缺乏规律性且发生得较晚。
然而，尽管雌激素疗法具有全面的正面作用，它们也存在尚未解决的问题，这些问题限制了雌激素的治疗用途或带来了副作用。
已知雌激素表现出了药动学方面的不足。当口服时，天然雌激素(雌二醇、雌酮、硫酸雌酮、雌二醇的酯、雌三醇)仅仅提供了程度非常低的生物利用度。此程度在人与人之间变化非常大，致使不能给出一般的推荐剂量。此物质从血液中快速清除是另一个问题。在HRT中雌激素的替代常常必须依个体调整。
合成的雌激素也是一样。最重要的合成修饰雌激素甾类是乙炔基雌二醇(EE)。此雌激素是口服激素避孕药中的主要成分。除EE外，在一些情况下使用美雌醇；其是前药，在生物体中其代谢为EE。当给人口服时，EE比上述雌激素具有更好的生物利用度，但是在个体之间其口服生物利用度变化很大。一些作者已指出此事实，并还指出已证实在此物质口服后其血液浓度非常不规律(Goldzieher，J.W.1989，Goldzieher，J.W.1990，Humpel，M.1987，Kuhnz，1993)。
此外，已知的雌激素表现出药效学方面的不足。由肠腔吸收后，口服给药的活性组分通过肝脏进入机体。
事实是雌激素制剂特别重要，因为肝脏是雌激素的靶器官；雌激素的口服吸收导致在肝脏中的强雌激素作用。在人肝脏中由雌激素控制的分泌活性包括合成转移蛋CBG、SHBG、TBG、血管紧张肽原、对于凝血生理很重要的一些因子以及脂蛋白。如果天然雌激素被引入雌性机体并同时避免通过肝脏(例如通过透皮使用)，则上述肝脏功能本质上保持不变。当口服给药时，等量的天然雌激素(见上述定义)，产生了肝脏参数的清晰反应：SHBG、CBG、血管紧张肽原、HDL(高密度脂蛋白)升高。当替代天然雌激素，使用马雌激素制剂(所谓的轭合雌激素)时，雌激素的这些肝脏作用明显较强(Campbell，S.等，1981)。乙炔基雌二醇和DES具有更强的肝脏雌激素活性。
当涉及抗促性腺激素性质时，在肝脏中EE较口服给药的天然雌激素的雌激素活性高约4至18倍(Campbell，S.等，1981)。
当使用已知天然和合成雌激素时，这些缺点在临床上是非常显著的。
给前列腺癌男性患者使用高剂量的雌激素后，已知可能发生的并发症是致命的血栓栓塞。在肝脏中EE产生副作用的可能性(通过某种减弱的形式)决定了口服激素避孕方法的策略。一方面考虑到所需避孕效果和维持月经过程，另一方面需要考虑相当大的产生副作用的可能性，控制血液中EE水平可能就像走钢丝。很大可能是大量的妇女不能口服避孕药，这是因为经血异常和与雌激素相关的副作用超出了耐受阈值。
有证据表明雌激素是主要的促细胞分裂剂，其参与促进内分泌依赖性组织如乳腺和子宫内膜中肿瘤的生长。
虽然血浆雌激素浓度在乳腺癌女性患者或非乳腺癌女性中类似，但是乳腺癌雌酮和雌二醇水平显著高于正常乳腺组织或血液中的水平。人们认为雌激素的就地合成是肿瘤中雌激素水平高的重要原因，因此雌激素生物合成的抑制剂，特别是特异性抑制剂对治疗内分泌依赖性肿瘤具有潜在价值。
过去二十多年中，人们对芳香酶途径的抑制剂的开发极为关注，该途径将雄激素前体雄二酮转变为雌酮。然而，现在有证据表明硫酸雌酮(E1-STS)途径，即将硫酸雌酮水解为雌酮(E1S至E1)，与芳香酶途径相反，在乳腺癌中是雌激素的主要来源。这一理论得到了下面事实的支持：用芳香酶抑制剂，如氨鲁米特和4-羟基雄二酮治疗的绝经后女性乳腺癌患者中，血浆雌激素浓度得到适度降低，以及在接受这些芳香酶抑制剂治疗的患者中血浆E1S浓度保持较高水平这一事实。与非共轭雌激素(半衰期20分钟)比较，在血液中E1S的长半衰期(10-12小时)，以及在肝脏中高水平的甾类硫酸酯酶活性，也支持这一理论。
PCT/GB92/01587说明了新的甾类硫酸酯酶抑制剂及含有这些抑制剂的药物组合物用于治疗雌酮依赖性肿瘤特别是乳腺癌。这些甾类硫酸酯酶抑制剂是氨基磺酸酯，如N，N-二甲基雌酮-3-氨基磺酸酯，优选雌酮-3-氨基磺酸酯(也称为“EMATE”)。其它氨基磺酸酯公开于WO96/05216和WO96/05217。这些氨基磺酸酯包括雌二醇-3-氨基磺酸酯(本文中称为J995)。
EMATE(雌酮-3-O-氨基磺酸酯)-具有如下结构：
Figure A0180364200081
已知EMATE是有效的E1-STS抑制剂，因为在完整MCF-7细胞中在浓度为0.1M时其对E1-STS活性表现出大于99％的抑制。EMATE也以时间依赖的方式和浓度依赖的方式抑制E1-STS酶，这表明它起到了活性位点直接灭活的作用。虽然EMATE原来为抑制E1-STS而设计，但是它抑制脱氢表雄甾酮硫酸酯酶(DHA-STS)，据信它在雌激素甾类雄甾烯二醇生物合成的调节中具有关键的作用。另外，现在有证据表明雄甾烯二醇作为乳腺肿瘤生长的促进剂可能更重要。EMATE在体内也有活性，当其口服或皮下给药时，几乎完全抑制了大鼠肝脏E1-STS(99％)和DHA-STS(99％)活性。此外，已表明EMATE在大鼠中具有提高记忆的作用。在小鼠中的研究已表明在DHA-STS活性和部分免疫反应的调节之间存在联系。人们认为这也可能在人类中发生。EMATE中氨基磺酸酯的桥氧原子对抑制活性很重要。因此，当雌酮-3-N-氨基磺酸酯和雌酮-3-S-氨基磺酸酯中的3-O-原子被其它杂原子替代时，这些类似物便成为较弱的非时间依赖性灭活剂。
虽然EMATE中可能已经获得了对E1-STS的抑制的最佳效果，但是在硫酸酯酶抑制期间可能释放雌酮，EMATE及其雌二醇同类物可能具有雌激素活性。
Ahmed等(Biochem Biophys Res Commun1999 Jan27；254(3)：811-5)报告了STS的甾类和非甾类抑制剂的构效关系的研究。
因此，本发明的目的是提供适于口服避孕、激素替代疗法、抑制E1-STS以及其它治疗用途的新的组合物。
发明概述
本发明基于令人惊奇的发现：提供环状化合物的组合物，其中该环状化合物包括环系和氨基磺酸根基团(“氨基磺酸酯化合物”)，其含量提供不大于200μg/天的剂量，该组合物可以用于口服避孕、激素替代疗法和/或抑制E1-STS。在本发明组合物提供的剂量，所转运的化合物在所需的治疗作用和治疗不需要的副作用之间表现出了更为有利的关系。
氨基磺酸酯化合物含有至少一个环组分。该环组分含有至少4个环原子。一般来说，这4个原子应为碳原子。因此，一般来说，该环组分应是烃基。该环状化合物也包括氨基磺酸根基团作为环系上的其它取代基(一个或多个)。该氨基磺酸根基团是该环组分的取代基。发明详述
按照本发明的一个方面，提供了一种药物组合物，其中含有
(i)式(I)的化合物
Figure A0180364200091
    式I
其中：X是环中具有至少4个碳原子的烃基环；K是烃基；Rs是氨基磺酸根基团；
(ii)其任选地与药用载体、稀释剂、赋形剂或辅剂混合，其中该化合物的含量能提供不大于200μg/天的剂量。
在本发明的另一个方面，提供了一种含有一种化合物的药物组合物，其中该化合物的存在量使  该化合物或其代谢物为接受治疗的对象的血浆提供不大于200μg/天的量。
除非另行说明，上述最大剂量及本说明书中所指的所有剂量指70kg体重对象的剂量。对于体重超过70kg的对象，本领域技术人员会容易地修改所列举的剂量。
通过用要给患者使用的剂量除以数天内的预期给药时间来计算每天的剂量。预期的给药时间一般是直到下次给药的时期，在此时间内该剂量必须具有作用或者在该时间内该剂量必须起作用。
按照本发明的一个方面，提供了用于医药的本发明的组合物。
按照本发明的一个方面，提供了本发明的组合物在制备用于口服避孕的药物中的用途。
按照本发明的一个方面，提供了本发明的组合物在制备用于激素替代治疗的药物中的用途。
按照本发明的一个方面，提供了本发明的组合物在制备用于与STS有关病症或疾病治疗的药物中的用途。
按照本发明的一个方面，提供了本发明的组合物在制备用于与不利的STS水平有关的病症和疾病治疗的药物中的用途。
按照本发明的一个方面，提供了治疗患者的方法，包括给所述患者使用用量不大于200μg/天的本发明化合物。
为了便于参考，现在在适当的小标题下对本发明的这些及其它方面进行探讨。但是，在每个部分中的说法不必限制于各特定的部分。优选方面
优选，该化合物以能提供10至200μg/天的剂量的量存在于该组合物中。
优选，该化合物以能提供50至200μg/天的剂量的量存在于该组合物中。
优选，该化合物以能提供20至50μg/天的剂量的量存在于该组合物中。
在另一方面，该化合物以能提供不大于和少于100μg/天的剂量的量存在于该组合物中。
该组合物可以进行配制，以便每天、每周和每月的给药会提供所需的日剂量。例如，本发明可以提供一种组合物，其中含有该氨基磺酸酯化合物的量不大于200μg/剂量(每日剂量)，不大于1.4mg/剂量(每周剂量)和不大于5mg/剂量(每月剂量)。应领会该组合物还可以配制为给药频率多于和少于每天一次、每周一次和每月一次的形式。
优选，X与K联合模拟甾类结构。
优选，K环状基团。
优选，X是6员环。
优选，环X具有6个环碳原子。
优选，式I化合物具有式II的结构，其中各Rs、X和K具有上述定义。
    式II
优选基团K和环X一起含有，包括所有的取代基，最多约50个碳原子，更常见不超过约30至40个碳原子。
优选，X与K联合为甾类环结构。
优选，基团K和环X是甾类环结构或其被取代的衍生物。
优选，Rs基团在环X的3位。
优选，Rs是氨基磺酸根基团。
优选该化合物是式III
    式III其中X、K和Rs定义如上；且其中Rh1是任选地存在的卤素基团；Rh2是任选地存在的卤素基团；Rh1和Rh2至少存在一个。
优选，该Rh1在X环的2位。
优选，此Rh2在环X的4位。
对于一些应用，优选这些化合物没有和有最低的雌激素作用。
对于一些应用，优选这些化合物具有雌激素作用。
在一个实施方案中，本发明的组合物用于治疗乳腺癌。一些优点
本发明的关键优点包括改善了本发明组合物的药动力学和药效学。
本发明的一个关键优点是给药时这些氨基磺酸酯化合物具有较低的肝脏代谢。据信本发明的化合物如EMATE和J995，对红细胞具有较高的亲合性，高达99％的化合物在血液中是这样结合的。在此包合结构中，该化合物的肝脏通过避免了提取、代谢和肝脏首过作用。因此，转运的氨基磺酸酯化合物具有高度的生物利用度。
本发明的另一个关键优点是这些氨基磺酸酯化合物在个体间的血浆浓度方面表现出低差异。血液中雌激素水平的个体差异的降低特别允许对子宫切除和非子宫切除的对象提供单一的产品，而不需要开发个别的产品。
本发明的另一个关键的优点是这些氨基磺酸酯化合物从患者中清除的速度慢。本发明的组合物提供了雌酮(E1)和雌二醇(E2)的稳定的血浆水平。
本发明的一个关键优点是在给药时这些氨基磺酸酯化合物具有低的激素作用。因此，降低了深部静脉血栓形成的危险性。
本发明的一个关键优点是在给药时提供了骨保护，而该剂量低于子宫内膜增生/刺激阈值。如上所述，雌激素对于保护妇女的骨结构是不可或缺的。它们的缺乏会导致骨的破坏(骨质疏松)。但是，在典型的HRT中，雌酮以产生有利作用同时导致子宫内膜增生的剂量给药。本发明的组合物为骨保护提供了一种激素替代疗法，该疗法对子宫内膜没有刺激。
因此，在本发明的另一方面中，其提供了如本文所定义的化合物，优选本文中所定义的组合物在制备对子宫内膜没有刺激作用的骨保护激素替代疗法的药物中的用途。
另一个优点是该组合物可以在不加入孕激素的条件下进行配制。
另一个优点是该组合物可以在不加入促孕素的条件下进行配制。
另一个优点是这些化合物中的一些不能代谢为显示或诱发激素活性的化合物。
本发明的一些化合物在它们可以具有口服活性方面也是有利的。
本发明的一些化合物可以用于治疗癌症，如乳腺癌，以及(或者)非恶性病症，如自身免疫性疾病的预防，特别是当从年轻时起就需要的药物。
因此，据信本发明的一些化合物除治疗内分泌依赖性癌症以外还具有治疗应用，如治疗自身免疫性疾病。激素替代疗法
可以配制本发明的组合物以提供激素替代疗法。该组合物配制成含有该氨基磺酸酯化合物，根据医嘱的给药频率，该化合物的含量能提供氨基磺酸酯化合物的所需日剂量。
在该组合物的一个方面，其配制为可每天给药的形式。此组合物可以与孕激素混合配制。
在本发明的所有方面中，包括每天口服给药，以比使用透皮贴剂——HRT的一种典型给药途经更方便的方式进行激素替代疗法。每天
当每天给药方案提供，例如，100μg/天的给药时，特别观察到下列关键的优点
·个体间对象血液的雌激素水平差异降低
·E1和E2的血浆浓度稳定
当每天给药方案提供20至50μg/天的给药时，特别观察到以下优点
·没有观察到子宫出血
·对乳腺没有影响每周给药
在该组合物的一方面，将其配制为允许每周给药的形式。可以提供0.5至2mg/周，例如1mg/周的每周剂量。
较本发明组合物的贴剂和每天给药而言，每周剂量具有更方便的益处。每月给药
还设计了本发明组合物的每月HRT，其中提供了化合物的2至4mg，和高达5mg/给药的单一的每月剂量。
此外，含有本发明化合物的药物组合物可以用来治疗子宫内膜异位和用于治疗雌激素依赖性肿瘤。在此方面，本发明的一个关键优点是本发明的这些氨基磺酸酯化合物可以作为甾类硫酸酯酶抑制剂。甾类硫酸酯酶
甾类硫酸酯酶，有时称为甾基(steryl)硫酸酯酶或简称“STS”，其水解一些硫酸化的甾类化合物，如雌酮硫酸酯、脱氢表雄雌酮硫酸酯和胆固醇硫酸酯。已指定STS的酶编号为EC3.1.6.2。
STS已被克隆和表达。例如，见Stein等(J.Biol.Chem.264：13865-13872(1989))和Yen等(Cell 49：443-454(1987))。
STS是一种牵连一些疾病的酶。
例如，人们已发现STS的完全缺乏导致鳞癣。按照一些科研人员的说法，STS缺乏在日本相当普遍。正是这些科研人员(Sakura等，JInherit Metab Dis 1997 Nov；20(6)：807-10)还报告过敏性疾病如支气管哮喘、过敏性鼻炎或特应性皮炎，可能与甾类硫酸酯酶缺乏有关。
除了由STS活性的完全缺乏导致的疾病外，STS活性升高也可以带来疾病。例如，并如上所述，存在有力的证据支持STS在乳腺癌生长和转移中的作用。
STS还牵涉其它疾病。例如，Le Roy等(Behav Genet 1999年3月；29(2)：131-6)已确定在甾类硫酸酯酶浓度和小鼠攻击性行为发作之间可能存在遗传关系。这些作者推断甾类的硫酸酯化可能是复杂网络，包括在诱变攻击中涉及的基因，的主要原动力。STS抑制
据信与STS活性有关的一些疾病是由于无活性的硫酸化雌酮向有活性的非硫酸化雌酮的转变。在与STS活性有关的疾病中，需要抑制STS活性。
此处，术语“抑制”包括降低和/或消除和/或掩盖和/或防止STS的有害作用。STS抑制剂
按照本发明，本发明的化合物能作为STS抑制剂。
此处，术语“抑制剂”在本文中针对本发明的化合物指可以抑制STS活性的化合物，如降低和/或消除和/或掩盖和/或防止STS的有害作用。STS抑制剂可以作为拮抗剂。
化合物抑制雌酮硫酸酯酶活性的能力可以用完整MCF-7乳腺癌细胞或胎盘微粒体检测。此外，可以使用动物模型。适宜检测方案的细节在以下部分中给出。注意可以使用其它检测方法来测定STS活性和对STS的抑制。例如，还可以参考WO A-99/50453的内容。
优选，对于一些应用，该化合物进一步的特征是如果氨基磺酸根基团被硫酸根基团取代以形成硫酸酯衍生物，则该硫酸酯衍生物会被具有甾类硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解，即当与甾类硫酸酯酶EC3.1.6.2在pH7.4和37℃下孵育时。
在一个优选的实施方案中，如果该化合物的氨基磺酸根基团被硫酸根基团代替以形成硫酸酯化合物，则当甾类硫酸酯酶EC3.1.6.2在pH7.4和37℃下孵育时，此硫酸酯化合物会被具有甾类硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解，并会使得Km值小于200毫摩尔，优选小于150毫摩尔，优选小于100毫摩尔，优选小于75毫摩尔，优选小于50毫摩尔。
在一个优选的实施方案中，本发明的化合物不被具有甾类硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解。
对于一些应用，优选本发明的化合物对所需的靶(如STS)具有至少约100倍的选择性，对所需的靶优选有至少约150倍的选择性，对所需的靶优选有至少约200倍的选择性，对所需的靶优选有至少约250倍的选择性，对所需的靶优选有至少约300倍的选择性，对所需的靶优选有至少约350倍的选择性。
应注意本发明的化合物除了或者代替其抑制STS活性外可能具有其它有利的性质。基团K
基团K不需要是环状结构。为此，基团K可以是线性结构，当在体内时其具有可以符合环状结构的能力。
在优选的方面中，基团K是环状的，以便形成环基团K。
环基团K不需要稠合到环X上。鉴于此，它们可以被适宜的间隔基(其可以是烃基)分隔。
在优选的方面中，环基团K稠合在环X上。
基团K可以是多环基团，其不需要是稠合的多环。
因此，在优选的方面中，基团K和环X构成了多环化合物。如上所述，此处术语“多环”包括稠合的和非稠合的环结构，包括其联合形式。
至少一个环基团K和X可以是杂环基团(杂环)或非杂环基团。
至少一个环基团K和X可以是饱和环结构或不饱和的环结构(如芳基)。
优选，至少一个环基团是芳环。
如果环基团是多环，该化合物环成员中的一些或全部可以稠合在一起或者通过一个或多个适宜的间隔基连接。
该多环化合物可以含有一些稠合的环。在此方面，稠合的环可以包括不同大小的环的任何结合，如3个六员环(6，6，6)，1个六员环、1个七员环和1个六员环(6，7，6)，1个六员环和2个八员环(6，8，8)等。
在本发明的一个方面中，其涉及其中多环化合物不是(6，6，7)环的化合物。在另一方面，本发明涉及其中多环化合物只含有非7员的环的化合物。
优选此多环化合物含有，包括所有的取代基，不超过约50个碳原子，更常见不超过约30个至40个碳原子。
该多环化合物可以含有至少两个环成员，或者至少三个环成员，或者至少四环成员。
优选，该多环化合物含有四个环成员。
优选的多环化合物具有甾环成员，或其生物电子等排物。烃基
术语“烃基”在本文中指含有至少C和H并可以任选地含有一个或多个其它适宜的取代基的基团。这样的取代基的实例可以包括卤素、烷氧基、硝基、烷基、环基团等。除取代基是环基团的可能外，取代基联合起来可以形成环基团。如果该烃基含有一个以上的碳原子，则这些碳原子不需要彼此连接。例如，至少两个碳原子可以通过适宜的元素或基团连接。因此，此烃基可以含有杂原子。适宜的杂原子对于本领域技术人员来说是显而易见的并包括，例如，硫、氮和氧原子。烃基的非限制性实例是酰基。
典型的烃基是碳氢化合物基团。此处，术语“烃”指烷基、链烯基、链炔基中的任何一种，这些基团可以是直链、支链或环，或者是芳基。术语烃还包括其中被任选地取代的上述那些基团。如果该烃是其上具有取代基(一个或多个)的支链结构，则取代可以在烃主链或侧链上；或者取代可以在主链和侧链上。氨基磺酸根基团
在一个实施方案中，环X具有氨基磺酸根基团作为取代基。术语“氨基磺酸根”在本文中包括氨基磺酸的酯，或者氨基磺酸的N-取代的衍生物的酯，或其盐。
如果Rs是氨基磺酸根基团，则本发明的化合物称为氨基磺酸根化合物。
一般来说，该氨基磺酸根基团具有下式：
                (R1)(R2)N-S(O)(O)-O-其中优选R1和R2独立地选自H、烷基、环烷基、链烯基和芳基，或其联合，或一起表示亚烷基，其中所有或各烷基或环烷基或链烯基或芳基任选地含有一个或多个杂原子或基团。
当被取代时，本发明的N-取代的化合物可以含有一个或两个N-烷基、N-链烯基、N-环烷基或N-芳基取代基，优选含有或各含有最多10个碳原子。当R1和/或R2是烷基时，优选其中R1和R2各自独立地选自含有1至6个碳原子的低级烷基，即甲基、乙基、丙基等。R1和R2可以都是甲基。当R1和/或R2是芳基时，一般是苯基或甲苯基(PhCH3；o)。当R1和R2表示环烷基时，一般是环丙基、环戊基、环己基等。当R1和R2结合到一起时，一般表示含4至6个碳原子的亚烷基，其中任选地被一个或多个杂原子或基团间隔，例如，提供5员杂环，如4-吗啉基、1-吡咯烷基或1-哌啶基。
在作为其中取代基的烷基、环烷基、链烯基和芳基范围内，取代基包括一个或多个不干扰所讨论化合物的硫酸酯酶抑制活性的基团。非干扰性取代基的实例包括羟基、氨基、卤素、烷氧基、烷基和芳基。
在一些实施方案中，该氨基磺酸根基团可以通过与基团X中或上的一个或多个原子稠合(或相联系)形成环结构。
在一些实施方案中，可以存在一个以上氨基磺酸根基团。例如，可以存在两个氨基磺酸根(即双氨基磺酸根化合物)。如果这些化合物是在甾核上，优选弟二个(或其余中的至少一个)氨基磺酸根基团位于该甾核的17位。这些基团没有必要相同。
在一些优选的实施方案中，R1和R2的至少一个是H。
在一些进一步优选的实施方案中，R1和R2各是H。模拟
在一个方面中，X和K可以是甾环结构的模拟物。
术语“模拟”在本文中指具有类似或不同的结构，但是具有相似的功能。换言之，基团K和环X一起可以是甾环或其活性部分的生物电子等排物。
在优选的方面中，基团K和环X一起可以是雌酮环或其部分的生物电子等排物。甾环结构
在一个优选的方面中，X和K构成甾环结构，就是说一个环戊并菲骨架，或其生物电子等排物。
本领域的人们熟知，典型的杂环结构具有如下通式：
在上述结构式中，以常规方式对环进行了标注。
生物电子等排物的实例是，当A、B、C和D环的任何一个或多个环是杂环是和/或当A、B、C和D环的任何一个或多个环已被取代时和/或当A、B、C和D环的任何一个或多个环已被修饰时；但是其中不存在氨基磺酸根基团的生物电子等排物具有甾类性质。
就此而言，优选的多环结构可以表示为：
Figure A0180364200192
其中各环A′、B′、C′和D′独立地表示杂环和非杂环，其中各环可以独立地被取代和不取代，可以是饱和的和不饱和的。
例如，环A′、B′、C′和D′的任何一个和多个可以独立地被适当的基团取代，如烷基、芳基、羟基、卤素基团、烃基、氧烃基等。
D′的一个实例是具有至少一个取代基的5或6员非杂环。
在一个优选的实施方案中，环D′被乙炔基取代。
如果环A′、B′、C′和D′的任何一个是杂环，则优选该杂环含有碳原子和至少一个氮原子和/或至少一个氧原子的联合形式。在该环中可以存在其它杂环原子。
本发明化合物的适宜的、优选的甾核环A′-D′的实例，包括脱氢表雄雌酮和雌激素的环A-D。优选的雌激素包括天然雌激素如雌酮、雌二醇、雌三醇、表雌三醇；及共轭的雌激素(马萘雌酮衍生物)。
在本发明的一个方面，优选本发明的化合物是天然雌激素的前药，优选的天然雌激素选自雌酮、雌二醇、雌三醇和表雌三醇。
本发明化合物优选的甾核环A′-D′包括下列化合物的环A-D：雌酮和被取代的雌酮，即：
雌酮
4-OH-雌酮
6α-OH-雌酮
7α-OH-雌酮
16α-OH-雌酮
16β-OH-雌酮
17-脱氧雌酮
雌酮雌二醇和被取代的雌二醇。即：
4-OH-17β-雌二醇
6α-OH-17β-雌二醇
7α-OH-17β-雌二醇
4-OH-17α-雌二醇
6α-OH-17α-雌二醇
7α-OH-17α-雌二醇
16α-OH-17α-雌二醇
16α-OH-17β-雌二醇
16β-OH-17α-雌二醇
16β-OH-17β-雌二醇
17α-雌二醇
17β-雌二醇
17α-乙炔基-17β-雌二醇
17β-乙炔基-17a-雌二醇
17-脱氧雌二醇雌三醇和被取代的雌三醇，即：
雌三醇
4-OH-雌三醇
6α-OH-雌三醇
7α-OH-雌三醇
17-脱氧雌三醇脱氢表雄酮和被取代的脱氢表雄酮，即：
脱氢表雄酮
6α-OH-脱氢表雄酮
7α-OH-脱氢表雄酮
16α-OH-脱氢表雄酮
16β-OH-脱氢表雄酮
在一般性术语中，环系A′B′C′D′可以含有多种非干扰性取代基。具体地讲，环系A′B′C′D′可以含有一个或多个羟基；烷基，特别是低级(C1-C6)烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基及其它戊基异构体以及正己基及其它己基异构体；烷氧基，特别是低级(C1-C6)烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基等；炔基，如乙炔基；或卤素，如氟取代基。
在高度优选的方面，甾环结构与本发明优选的取代基结合，于是本发明的化合物选自下式的化合物
17α乙炔基17β雌二醇-3-氨基磺酸酯                17β雌二醇-3-氨基磺酸酯
17α雌二醇-3-氨基磺酸酯                          雌酮-3-氨基磺酸酯(EMATE)
雌三醇-3-氨基磺酸酯非甾类结构
在另一个实施方案中，本发明的化合物可以不含或者不基于甾核。鉴于此，多环化合物可以含有或基于非甾环系如二乙基己烯雌酚、己烯雌酚、香豆素、类黄酮、风车子抑制素(combrestatin)及其它环系。用于或用作本发明组合物的其它适宜的非甾类化合物见US-A-5567831。其它取代基
本发明的化合物可以具有Rh1、Rh2和Rs以外的取代基。例如，这些其它取代基可以是一个或多个如下基团：一个或多个氨基磺酸根基团，一个或多个磷酸根基团，一个或多个硫代磷酸根基团，一个或多个磺酸根基团，一个或多个氨磺酰基团，一个或多个卤素基团，一个或多个O基团，一个或多个羟基基团，一个或多个氨基基团，一个或多个含硫的基团，一个或多个烃基如氧烃基。氧烃基
术语“氧烃基”基团在本文中指至少含有C、H和O并任选地含有一个或多个其它适宜的取代基的基团。这样的取代基的实例可以包括卤素、烷氧基、硝基、烷基、环基团等。
除了取代基可以是环基团外，取代基的组合可以形成环基团。如果此氧烃基基团含有一个以上的C，则这些碳原子不必彼此连接。例如，至少两个碳原子可以通过适宜的元素或基团连接。因此，此氧烃基基团可以含有杂原子。适宜的杂原子对本领域技术人员来说是显而易见的，并包括，例如，硫和氮原子。
在本发明的一个实施方案中，此氧烃基基团是氧碳氢化合物基团。
此处，术语“氧碳氢化合物”指烷氧基、链烯基氧基、链炔基氧基中的任何一种，其中该基团可以是直链、支链或环，或者是芳氧基。术语氧碳氢化合物还包括任选地被取代的上述那些基团。如果此氧烃基是其上具有取代基(一个或多个)的支链结构，则取代可以在该烃骨架上或在该侧链上；或者取代可以在烃骨架和侧链上。
一般来说，此氧烃基基团是式C1-6O(如C1-3O)。
                   用癌细胞测定STS活性的试验
                            (方案1)抑制MCF-7细胞中的甾类硫酸酯酶活性
甾类硫酸酯活性在体外用完整的MCF-7人乳腺癌细胞检测。此激素依赖性细胞系被广泛用于控制人乳腺癌细胞生长的研究。它具有显著的甾类硫酸酯活性(Maclndoe等，Endocrinology，123，1281-1287(1988)；Purohit & Reed，Int.J.Cancer，50，901-905(1992))并由U.S.A.的美国模式培养物包藏所(ATCC)和U.K.(如皇家癌症研究基金会)提供。
细胞维持在极限必需培养基(MEM)(Flow Laboratories，Irvine，Scotland)中，其中含有20mM HEPES、5％胎牛血清、2mM谷酰胺、非必需氨基酸和0.075％碳酸氢钠。用上述培养基用大约1×105细胞/烧瓶接种多达30个平行测定25平方厘米组织培养瓶。
细胞生长至80％融合并每3天更换一次培养基。
完整的单层MCF-7细胞在25平方厘米组织培养烧瓶中，一式三份，用Earle′s平衡盐溶液(EBSS，得自ICN Flow，High Wycombe，U.K.)洗涤并在37℃下与5pmol(7×105dpm)[6，7-3H]雌酮-3-硫酸酯(特异活性60Ci/mmol，得自New England Nuclear，Boston，Mass.，U.S.A.)在无血清MEM(2.5ml)中和雌酮-3-氨基磺酸酯(11个浓度：0；1fM；0.01pM；0.1pM；1pM；0.01nM；0.1nM；1nM；0.01mM；0.1mM；1mM)一起孵育3-4小时。孵育后，将各烧瓶冷却并将培养基(1ml)用移液管加入到独立的试管中，试管中加有[14C]雌酮(7×103dpm)(特异活性97Ci/mmol，得自Amersham International RadiochemicalCentre，Amersham，U.K.)。将此混合物与甲苯(5ml)彻底摇动30秒。试验显示通过此处理＞90％[14C]雌酮和＜0.1％[3H]雌酮-3-硫酸酯从液相中除去。移出部分(2ml)有机相、蒸发并通过闪烁光谱检测残余物中3H和14C的含量。由3H的计数计算雌酮-3-硫酸酯水解的量(校正所用培养基体积和有机相，并校正加入的[14C]雌酮的回收率)和底物的特异性活性。每批试验包括培养由硫酸酯酶阳性人胎盘制备的微粒体(阳性对照)和没有细胞的烧瓶(评估可见的底物的非酶水解)。用Zaponin处理该细胞单层后用Coulter计数器测定每烧瓶的细胞核数目。每批中选一个烧瓶用胎盘兰排除法(Phillips，H.J.(1973)，组织培养和应用[Kruse，D.F.& Patterson，M.K.编辑]；pp.406-408；Academic Press，New York)来评价细胞膜情况和活力。
甾类硫酸酯活性的结果以106细胞在培养期间(20小时)形成的产物(雌酮+雌二醇)的平均值±1S.D.表示，并以表明统计学意义的数值表示，以相对于不含雌酮-3-氨基磺酸酯培养物的降低(抑制)百分率表示。用不成对学生t检验计算结果的统计学意义。
                用胎盘微粒体测定STS活性的实验
                           (方案2)抑制胎盘微粒体中的甾类硫酸酯酶活性
将得自正常足月妊娠的硫酸酯酶阳性人胎盘用剪刀彻底切碎并用冷磷酸盐缓冲液(pH7.4，50mM)洗涤一次，然后再悬浮于冷磷酸盐缓冲液(5ml/g组织)中。在冰中用间隔2分钟冷却期的3个10秒暴发集落，用Ultra-Turrax匀浆器彻底匀浆化。通过以2000g离心(4℃)30分钟除去细胞核和细胞碎片，并浆部分(2ml)上清夜保存在20℃。上清夜的蛋白浓度通过Bradford方法(Anal.Biochem.，72，248-254(1976))检测。
用蛋白浓度为100mg/ml，底物浓度为20mM[6，7-3H]雌酮-3-硫酸酯(特异活性60Ci/mmol，得自New England Nuclear，Boston，Mass.，U.S.A.)的培养物(1ml)进行，并在37℃下孵育20分钟。如果需要，用8种浓度的化合物：0(即对照)；0.05mM；0.1mM；0.2mM；0.4mM；0.6mM；0.8mM；1.0mM。孵育后，将各样品冷却并用移液管将培养基(1ml)加入到独立的试管中，试管中加有[14C]雌酮(7×103dpm)(特异活性97Ci/mmol，得自Amersham InternationalRadiochemical Centre，Amersham，U.K.)。用甲苯(5ml)将此混合物彻底摇动30秒。实验显示出通过此处理＞90％[14C]雌酮和＜0.1％[3H]雌酮-3-硫酸酯从水相中除去。将部分(2ml)有机相移出，蒸发并通过闪烁光谱测定残余物的3H和14Cd含量。由获得的3H计数计算雌酮-3硫酸酯水解的量(校正所用培养基和有机相的体积，并校正加入的[14C]雌酮的回收率)及底物的特异活性。
                    检测STS活性的动物模型
                          (方案3)体内对雌酮硫酸酯活性的抑制
本发明的化合物可以用动物模型进行研究，特别是在卵巢切除的大鼠中。在此模型中，雌激素性化合物刺激子宫的生长。
给大鼠口服该化合物(0.1mg/Kg/天，5天)，另外一组动物只接受载体(丙二醇)。研究结束时，采集肝组织样本，并用3H雌酮硫酸酯作为底物检测雌酮硫酸酯酶的活性，如上所述(见PCT/GB95/02638)。
                    测定雌激素活性的动物实验模型
                             (方案4)体内雌激素活性的缺乏
本发明的化合物可以用动物模型进行研究，特别是在卵巢切除的大鼠中。在此模型中，雌激素性化合物刺激子宫的生长
给大鼠口服该化合物(0.1mg/Kg/天，5天)，另外一组动物只接受载体(丙二醇)。研究结束时，采集子宫并称重，结果以子宫重量/全部体重×100表示。
对子宫生长没有显著作用的化合物不是雌激素性化合物。
                测定STS活性的生物工程实验
                          (方案5)
化合物抑制雌酮硫酸酯活性的能力也可以用氨基酸序列和核苷酸序列编码STS，或其活性片断、衍生物、同源物或变体检测，例如，高流通量筛选。
任何一个或或多个适当的靶，如氨基酸序列和/或核苷酸序列，可以在多种药物筛选技术的任何一种中用来鉴定能调节STS的试剂。在此试验中使用的靶可以游离地存在于溶液中、固定在固体载体上、携带在细胞表面上或者位于细胞内。可以检测靶活性的消失或在靶和被测试剂之间结合复合物的形成。
本发明的此实验可以是筛选实验，其中检测一些试剂。一方面，本发明的检测方法是高流通量筛选。
药物筛选技术可以基于Geysen的欧洲专利申请84/03564(1984年9月13日公开)的方法。概括的说，在固体底物如塑料针或其它一些表面上合成大量不同的小的肽被测化合物。此肽被测化合物与适宜的靶或其片断反应并洗涤。然后，通过本领域熟知的适当修改的方法检测结合体。纯化的靶也可以直接包被在用于药物筛选技术中的板上。或者，可以用非中和抗体来捕获肽并将其固定在固体载体上。本发明还会考虑使用竞争性药物筛选实验，其中能特异性结合靶的中和抗体与被测化合物竞争结合该靶。
为对一些物质具有结合亲合性的试剂的高流通量筛选(HTS)提供了另一种筛选技术，且该技术基于WO84/03564详述的方法。
预计本发明的检测方法在被测化合物的小规模和大规模筛选中以及在定量实验中都是适宜的。
在优选的一个方面，本发明涉及鉴定选择性调节STS的试剂的方法，该试剂具有式(Ia)。报道分子
在本发明的检测方法(以及筛选)中可以使用多种报道分子，其中优选提供适于检测的信号(例如通过光谱法)的报道分子。例如，报道基因可以编码催化改变光吸收性的反应的酶。
其它方案包括酶联免疫吸附检测(ELISA)、发射免疫测定(RIA)和荧光激活细胞分选(FACS)。还可以使用双位点、单克隆免疫检测，其中使用对两个非干扰性表位具有反应性的单克隆抗体。例如，这些及其它实验描述于Hampton R等(1990，Serological Methods，ALaboratory Manual，APS Press，St Paul MN)和Maddox DE等(1983，J Exp Med 158：121 1)。
报道分子的实例包括但不限于β-半乳糖苷酶、转化酶、绿荧光蛋白、荧虫素酶、氯霉素、乙酰基转移酶、β-葡萄糖醛酸酶、外切葡聚糖酶和葡糖淀粉酶。或者，可以将标记的或荧光标记物标记的核苷酸掺入初期的转录物中，当与低聚核苷酸探针结合时再对其进行鉴定。
再如，一些公司如Pharmacia Biotech(Piscataway，NJ)、Promega(Madison，WI)和US Biochemical Corp(Cleveland，OH)提供了商业试剂盒以及检测过程的方案。适宜的报道分子或标记物包括放射性核素、酶、荧光物质、化学荧光物质或产色试剂，以及底物、辅因子、抑制剂、磁性颗粒等。教导此类标记物的用法的专利包括US-A-3817837；US-A-3850752；US-A-3939350；US-A-3996345；US-A-4277437；US-A-4275149和US-A-4366241。宿主细胞
术语“宿主细胞”在本发明中包括可以包含在本发明试剂的靶中的任何细胞。
因此，本发明的另一个实施方案提供了使用作为或其表达为本发明的靶的多核苷酸转化或转染的宿主细胞。
优选所述多核苷酸携带在载体上进行多核苷酸的复制和表达，它们是靶或者表达该靶。选择这些细胞以与所述载体相容并可以是原核生物(如细菌)、真菌、酵母和植物细胞。
革兰氏阴性细菌E.coli在异种基因表达中被广泛地用作宿主。但是，大量的异种蛋白易于蓄积在细胞内。有时，随后从大量蛋白质中纯化所需的蛋白质可能会很困难。
与E.coli相比，得自杆菌属的细菌作为异种宿主是非常合适的，这是由于它们能将蛋白质分泌道培养基中。适于作宿主的其它细菌为链霉菌属和假单胞菌属的细菌。
根据编码本发明的多肽的多核苷酸的性质，和/或进一步处理表达的蛋白质的适宜性，真核生物宿主如酵母或其它真菌可能是优选的。一般来说，酵母细胞比真菌细胞更优选，这是因为它们更易于处理。但是，一些蛋白质从酵母细胞中分泌得很差，且有时不能适当地加工(如在酵母中的过度糖基化)。在这些实例中，应选择不同的真菌宿主有机体。
本发明范围内适宜表达宿主的实例为真菌如曲霉种(如描述于EP-A-0184438和EP-A0284603的)和木霉种；细菌如杆菌种(如描述于EP-A-0134048和EP-A-0253455的)，链霉菌种和假单胞菌种；及酵母如克鲁维氏酵母种(如描述于EP-A-0096430和EP-A-0301670的)以及酵母种。例如，典型的表达宿主可以选自黑曲霉、黑色曲霉var.tubigenis、黑色曲霉var.awamori、棘孢曲霉、构巢曲霉、米曲霉、发菌霉属reesei、枯草芽孢杆菌，地衣型芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、乳克鲁维氏酵母和酿酒酵母。
适宜的宿主细胞，如酵母、真菌和植物宿主细胞的使用，可以提供翻译后变型(如肉豆蔻酰基化、糖基化、截短、投石(lapidation)和酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸磷酰基化)，可能需要它们赋予本发明重组表达产物最佳的生物活性。有机体
术语“有机体”在本发明中包括任何有机体，其可以包括本发明的靶和/或由其获得的产物。有机体的实例可以包括真菌、酵母或植物。
术语“转基因有机体”在本发明中包括任何有机体，其包括本发明的靶和/或获得的产物。宿主细胞/宿主有机体的转化
如早期所指出的，宿主有机体可以是原核或真核有机体。
适宜的原核宿主的实例包括E.coli和枯草杆菌。有关原核宿主转化的教导在本领域中已充分记述，例如，见Sambrook等(MolecularCloning：A Laboratory Manual，第二版，1989，Cold Spring HarborLaboratory Press)和Ausubel等，Current Protocols inMolecular Biology(1995)，John Wiley & Sons，Inc。
如果使用原核宿主，则在转化之前可能需要对核苷酸序列进行适当的修饰，如除去内含子。
在另一个实施方案中，转基因有机体可以是酵母。鉴此，酵母也已被广泛用作异种基因表达中的载体。酿酒酵母种在工业上具有悠久的历史，包括其用于异种基因表达。Goodey等(1987，YeastBiotechnology，D R Berry等编，pp 401-429，Allen and Unwin，London)和King等(1989，Molecular and Cell Biology of Yeasts，E F Walton and G T Yarronton编，pp107-133，Blackie，Glasgow)已对在酿酒酵母中的异种基因表达进行了综述。
酿酒酵母能很好地适于异种基因表达，这存在若干原因。第一，其对于人来说是非病原性的，且其不能产生某些内毒素。第二，历经出于不同目的的几个世纪的商业开发后，其安全使用的历史悠久。这使其更广泛地被公众接受。第三，对该有机体的多方面的商业应用和研究，使人们对其遗传学和生理学以及对酿酒酵母的大规模发酵特性有了更充分的了解。
有关酿酒酵母中异种基因表达和基因产物分泌的原则的综述，见EHinchcliffe E Kenny(1993，“Yeast as a vehicle for theexpression of heterologous genes”，Yeasts，Vol 5，Anthony HRose and J Stuart Harrison编，第二版，Academic Press Ltd.)。
一些类型的酵母载体能够购得，包括综合载体，为了维持其需要与宿主基因组及自主复制质粒载体重组。
为了制备转基因酿酒酵母，通过将核苷酸序列插入到酵母中设计用于表达的构件中来制备表达构件。已经开发出了若干用于异种表达的构件。这些构件中含在酵母中有活性的、与核苷酸序列稠合的启动子，通常使用得自酵母的启动子，如GAL1启动子。通常使用得自酵母的信号序列，如编码SUC2信号肽的序列。在酵母中有活性的终止子终止表达系统。
为了酵母的转化，已经开发出了若干转化方案。例如，本发明的转基因酿酒酵母可以按照Hinnen等(1978，Proceedings of theNational Academy of Sciences of the USA75，1929)；Beggs，JD(1978，Nature，London，275，104)；和Ito，H等(1983，JBacteriology 153，163-168)的教导制备。
用多种选择标记物选择转化后的酵母细胞。用于转化的这些标记物为一些营养缺陷的标记物如LEU2、HIS4和TRP1，以及抗生素抗药显性的标记物如氨基苷类抗生素标记物，例如G418。
另一种宿主有机体是植物。构建经基因修饰的植物的基本原则是在植物基因组中插入遗传信息，以便获得插入遗传物质的稳定维持性。已有若干技术用来插入遗传信息，两个主要原理是直接引入遗传信息以及通过使用载体系统引入遗传信息。对常规技术的综述可参见Potrykus(Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol[1991]42：205-225)和Christou(Agro-Food-Industry Hi-Tech March/April1994 17-27)的论文。有关植物转化的其它一些教导可以参见EP-A-0449375。
因此，本发明还提供了转化带有作为靶和表达靶的核苷酸序列的宿主细胞的方法。用该核苷酸序列转化的宿主细胞可以在适于表达编码蛋白质的条件下培养。重组细胞产生的蛋白质可以表现在该细胞表面。如果需要，且本领域技术人员应理解，含编码序列的表达载体可以用通过特定的原核或真核细胞膜直接分泌的信号序列进行设计。其它重组构件可以将此编码序列结合到编码多肽功能域的核苷酸序列上，该功能域会有利于可溶性蛋白质的纯化(Kroll DJ等(1993)DNA CellBiol 12：441-53)。变种/同源物/衍生物
除了本文中提及的特异性氨基酸序列和核苷酸序列外，本发明还包括其变种、同源物和衍生物的应用。此处，术语“同源性”可以视为“相同”。
在本文中，同源系列包括至少75、85或90％相同的序列，优选至少95或98％相同的序列。虽然同源性也可以视为相似(即具有相似的化学性质/功能的氨基酸残基)，在本发明的文本中，优选以序列的一致性来表示同源性。
通过肉眼，通常借助于容易得到的序列比较程序来进行同源性比较。这些商购的计算机程序可以计算两个或多个序列之间的同源性百分率。
同源性％可以用相邻的序列即来计算，所谓相邻的序列即一个序列与另一个序列平行排列，且一个序列中的每个氨基酸与另一个序列中的相应的氨基酸直接对比，一次一个残基。这称为“无缝”排列。一般来说，这样的无缝排列只在相对来说小数目的残基上进行。
虽然这是非常简单且一致的方法，但是其无法顾及，例如，序列中另外相同的对，一个插入或缺失会引起随后的氨基酸残基超出此排列，因此，当进行总体排列时可能导致同源性％的大幅度降低。因此，多数序列比较方法的涉及是为了产生最佳的排列，其中考虑到了可能的插入和缺失，不会不适当地影响总体同源性评分。通过在序列排列中插入“缝隙”以试图将局部同源性最大化，可以达到此目的。
但是，这些更复杂的方法给在此排列中发生的各缝隙分配了“缝隙罚分”，致使对于相同氨基酸的相同数目，具有尽可能少的缝隙的序列排列(在两个对比序列之间反应了较高的相关性)将比具有很多缝隙的获得更高的评分。一般使用“类源缝隙成本”，即对于存在缝隙赋予相对高的成本，而对于该缝隙中的各序列残基赋予较小的罚分。这是最常用的缝隙评分系统。高的缝隙罚分当然产生具有较少缝隙的最佳排列。大多数排列程序允许修改缝隙罚分。但是，当用这样的软件进行序列比较时，优选使用缺省值。例如，当使用GCG Wisconsin Bestfit软件包(见下文)，对于氨基酸序列缺省缝隙罚分是每个缝隙为-12，而每个扩展为-4。
因此，最大同源性％的计算首先需要产生最佳排列，考虑缝隙罚分。进行此排列的计算机程序为GCG Wisconsin Bestfit软件包(University of Wisconsin，U.S.A.；Devereux等，1984，Nucleic Acids Research 12：387)。可以进行序列比较的其它软件包括但不限于BLAST软件包(见Ausubel等，1999，出处同上，弟18章)、FASTA(Atschul等，1990，J.Mol.Biol.，403-410)和比较工具GENEWORKS软件套装。BLAST和FASTA都提供了单机和联网检索(见Ausubel等，1999，出处同上，第7-58页至7-60页)。但是，优选使用GCG Bestfit程序。
其它可利用的参考资料见FEMS Microbiol Lett，1999年5月15日；174(2)：247-50(及在FEMS Microbiol Lett，1999年8月1日；177(1)：187-8刊发的勘误表)。
虽然就一致性检测最终的同源性％，但是此排列方法本身一般不基于全部和绝无成对比较。相反，一般使用顺序相似性评分模型，给基于化学相似性或展开距离给每个成对比较打分。常用的这样的模型的实例为BLOSUM62模型--BLAST程序套装的缺省模型。GCGWisconsin程序一般使用公共缺省值或通用符号比较表(如果给出)，详见使用手册。优选使用GCG软件包的公共缺省值，或者在使用其它软件时，用缺省模型，如BLOSUM62。
一旦软件给出了最佳排列，就可能计算同源性％，优选序列一致性％。该软件一般将此作为序列比较的一部分内容并产生数字化结果。
序列还可以具有氨基酸残基的缺失、插入或替换，这样产生沉默变化并产生功能等同物质。审慎的氨基酸替换可以基于这些残基的极性、电荷、溶解性、疏水性、亲水性和/或两亲性，只要该物质的次级活性得以保持。例如，带负电荷的氨基酸，包括天门冬氨酸和谷氨酸；带正电荷的氨基酸包括赖氨酸和精氨酸；及具有相似亲水性值的无电荷极性端基的氨基酸，包括亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷酰胺、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。
例如，可以按照下表进行保守的替代。在第二栏相同组中的氨基酸，和优选在第三栏同一行中的氨基酸可以彼此替代。
脂族 非极性 GAP
ILV
极性-无电荷 CSTM
NQ
极性-带电荷 DE
KR
芳族 HFWY
表达载体
用作靶或用于表达靶的核苷酸序列可以掺入重组可复制载体。该载体可以用来复制和表达相容性宿主细胞中和/或来自该宿主细胞的该核苷酸序列。可以用控制序列来控制表达，该控制序列包括启动子/增强子以及其它表达调节信号。可以使用原核启动子和在原核细胞中具有功能的启动子。可以使用组织特异性或刺激特异性启动子。也可以使用嵌合启动子，其中包括来自上述两个或多个不同启动子的序列要素。
通过核苷酸序列的表达由宿主重组细胞产生的蛋白质，根据所用的序列和/或载体，可以分泌或可以含于细胞内。可以用信号序列设计编码序列，其通过特定的原核或真核细胞膜直接分泌编码序列的物质。融合蛋白
靶氨基酸序列可以以融合蛋白的形式产生，例如，为了有助于提取和纯化。融合蛋白对的实例包括谷胱甘肽S-转移酶(GST)、6xHis、GAL4(DNA结合和/或转录活性功能域)和β-半乳糖苷酶。在融合蛋白对和相关蛋白序列之间还可以适当地包括蛋白水解裂解位点，以允许融合蛋白序列的除去。优选此融合蛋白不会妨碍该靶的活性。
该融合蛋白可以包括与本发明物质稠合的抗原或抗原决定簇。在此实施方案中，融合蛋白可以是非天然产生的融合蛋白，其中含有可以作为辅剂以提供对免疫系统一般性刺激的物质。该抗原或抗原决定簇可以与该物质的氨基或羧基末端连接。
在本发明的另一个实施方案中，该氨基酸序列可以与异种序列连接以编码融合蛋白。例如，为了由肽文库中筛选能影响物质活性的试剂，编码表达了商购抗体可识别的异种抗原表位的嵌合物质可能是有利的。治疗
本发明的化合物可以用作治疗剂，即用于治疗中。
术语“治疗”包括治愈、减轻及预防作用。
治疗可以针对人或动物，优选雌性，更优选女性。药物组合物
本发明提供了药物组合物，其中含有本发明的化合物和任选地存在的药用载体、稀释剂或赋形剂(包括其组合)。
药物组合物可以在人用药和兽用药中给人和动物使用，并一般含有任何的一种或多种药用稀释剂、载体或赋形剂。治疗用可接受的载体或稀释剂是制药领域熟知的，并描述于，例如，Remington ′sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro编，1985)。依预计的给药途经和标准制药实践可以选择药用载体、赋形剂或稀释剂。作为载体、赋形剂或稀释剂，或除此以外，这些药物组合物可以含有任何适宜的一种或多种粘合剂、一种或多种润滑剂、一种或多种助悬剂、一种或多种包衣剂、一种或多种溶剂。
在该药物组合物中还可以含有防腐剂、稳定剂、颜料、以及甚至较味剂。防腐剂的实例包括苯甲酸钠、山梨酸以及对羟基苯甲酸酯。还可以使用抗养剂和助悬剂。
根据不同的给药系统，对组合物/制剂可能存在不同的要求。例如，本发明的药物组合物可以配制为用微型泵给药或者通过粘膜途经给药的形式，例如，鼻内喷雾剂或吸入性气雾剂或者可摄入的溶液，或者是非肠道给药的形式，其中该组合物配制为注射形式，通过如静脉内、肌肉内或皮下途经给药。或者，该制剂设计为可以通过这两种途经给药的形式。
当该制剂通过胃肠粘膜进行粘膜给药时，在经过胃肠道过程中其应能够保持稳定；例如，其应抗蛋白水解降解、在酸性pH条件下稳定并抗胆汁的去污降解作用。
如果适当，这些药物组合物可以通过吸入给药、以栓剂或阴道栓的形式给药、在子宫系统内给药、以洗剂，溶液，霜，软膏或扑粉的形式局部给药、通过使用透皮贴剂给药、以含有赋形剂如淀粉或乳糖的片剂形式口服给药、或者以胶囊或胶丸的形式单独或与赋形剂混合给药、或以含有较味剂或着色剂的酏剂，溶液或混悬剂的形式给药，或者它们可以非肠道注射，例如，静脉内、肌肉内或皮下注射。对于非肠道给药，这些药物组合物最好以灭菌含水溶液的形式使用，其中可以含有其它物质，例如，使该溶液与血液等渗需要的足够的盐或单糖。对于颊部或舌下给药，这些组合物可以以片剂或锭剂的形式给药，它们可以以常规方式配制。联合药物
本发明的化合物可以与一种或多种其它活性试剂联合使用，例如，一种或多种其它药物活性试剂。
例如，本发明的化合物可以与其它STS抑制剂和/或其它抑制剂如芳香酶抑制剂(例如，4-羟基雄甾烯二酮(4-OHA))和/或甾类，如天然产生的甾类脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)和孕烯醇酮硫酸酯(PS)和/或其它结构类似的有机化合物联合给药。
本发明的化合物可以单独使用或与孕激素联合使用。优选本发明的化合物在不存在孕激素的条件下使用。因此，在优选的方面中，本发明的组合物基本上不含孕激素。
此外，或供选择的，本发明的化合物可以与生物反应修饰剂联合使用。
术语生物反应修饰剂(“BRM”)包括细胞因子，免疫调节剂，生长因子，血细胞生成调节剂，集落刺激因子，趋化、溶血和溶解血栓因子，细胞表面受体，配体，白细胞粘附分子，单克隆抗体，预防性和治疗性疫苗，激素，细胞外基质组分，纤连蛋白等。对于一些应用，优选，该生物反应修饰剂是细胞因子。细胞因子的实例包括：白介素(IL)，如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-19；肿瘤坏死因子(TNF)，如TNF-α；α、β和γ干扰素；TGF-β。对于一些应用，优选该细胞因子是肿瘤坏死因子(TNF)。对于一些应用，TNF可以是任何类型的TNF，如TNF-α、TNF-β，包括其衍生物或混合物。更优选该细胞因子是TNF-α。在本领域可以发现有关TNF的教导，如WO-A-98/08870和WO-A-98/13348。给药
一般来说，医生会确定最适于个体患者的实际剂量，且该剂量会随特定患者的年龄、体重和反应而变化。下面的剂量是平均情况的实例。当然，可以存在应接受较高和较低剂量范围的个例。
本发明的组合物可以通过直接注射给药。该组合物可以配制为非肠道、内膜、肌肉内、静脉内、皮下、眼内和透皮给药的形式。
对于任何特定的患者来说特异性剂量水平和给药频率是可以变化的，并可根据多种因素变化，其中包括所用特定化合物的活性、代谢稳定性以及此化合物作用时间的长度、年龄、体重、健康状况、性别、饮食、给药的方式和时间、排泄速度、药物联合、特定病症的严重性以及该对象接受的疗法。
除了上述典型的给药方式外，术语“给药”还包括通过技术如脂类介导转染、脂质体、免疫脂质体、脂质转染试剂、阳离子表面两亲物(CFAs)及其联合形式进行给药。此类转运机制的途经包括但不限于粘膜、鼻内、口服、非肠道、胃肠道、局部和舌下途经。
术语“给药”包括但不限于通过粘膜途经转运药物，例如，以鼻内喷雾剂和吸入气雾剂或者可摄入的溶液的形式；非肠道途经，其中给药通过注射形式，例如，静脉内、肌肉内和皮下途经。
因此，为了药物给药，本发明的STS抑制剂可以用常规药物配制技术以任何适宜的方式与药用载体、辅剂、赋形剂、稀释剂等一起配制，并通常用于非肠道给药。可以以单剂量方式、均分剂量方式和/或多剂量发生在持续的若干天内给药。为了口服给药，它们可以配制为片剂、胶囊、溶液剂和混悬剂。或者，这些化合物在适宜的非肠道给药载体中配制并提供单日剂量等级以便非肠道给药。但是，有效的日剂量应随患者的体重而变化，此变化是本领域技术人员的一般知识并可以由医生判断。细胞周期
本发明该化合物可以用于治疗细胞周期紊乱的方法中。
正如在“Molecular Cell Biology”，第三版，Lodish等，第177-181页讨论的那样，不同的真核细胞可以以差别很大的速度生长和分裂。例如，酵母细胞可以每120分钟分裂一次，而在海胆和昆虫的胚细胞中受精卵的第一次分裂只需要1530分钟，这是因为一个大的原始细胞被再分裂。但是，大多数生长植物和动物细胞需要10-20小时使数量加倍，而一些以更慢的速度复制。成人中的很多细胞，如神经细胞和纹状肌细胞根本不分裂；另外，如促进伤口愈合过程中成纤维细胞按照需要生长，否则就处于静止状态。
再者，每个分裂的真核细胞必须准备将相等的遗传物质赋予两个子代细胞。真核细胞中的DNA合成不是发生于整个细胞分裂周期中，而是在细胞分裂前限于其一部分中。
已在都能够生长和分裂的哺乳动物细胞的培养物中，彻底分析了真核细胞DNA合成和细胞分裂之间的联系。与细菌相反，人们发现真核细胞在DNA合成中只花费了其时间的一部分，而在细胞分裂(有丝分裂气)数小时前，其已完成。因此，DNA合成后与细胞分裂前产生了时间间期；在分裂后与DNA合成的下个循环前发现了其它间期。该分析得到了以下结论：真核细胞周期由M(有丝分裂)期、G1期(第一个间期)、S(DNA合成)期、G2期(第二个间期)，并回到M。有丝分裂之间的期(G1、S和G2)总称为分裂间期。
组织中很多不分裂的细胞(例如，所有的静止成纤维细胞)在有丝分裂后并恰在DNA合成前终止了该周期；据称这样的“静止”细胞已从细胞周期中退出并处于G0状态。
当它们处于细胞周期的三个分裂间期阶段时，通过用荧光激活细胞分选仪检测其相对的DNA含量，鉴定细胞是可能的：处于G1(在DNA合成前)的细胞具有确定量x的DNA；在S期(DNA复制)，其含量为x至2x；而当处于G2期(或M)，期具有2x的DNA。
动物细胞中有丝分裂和胞质分裂的阶段如下：
(a)分裂间期。分裂间期的G2阶段立即处于有丝分裂开始之前。染色体DNA已经复制，并在S期与蛋白质结合，但是还不可能看到染色体的明显结构。此分子只是核亚结构，其在光学显微镜下是可见的。在DNA复制前在二倍体细胞中，每种类型存在两种形态的染色体，而该是＝细胞被称为2n。在G2中，DNA复制后，此细胞是4n。每个染色体DNA存在4个拷贝。由于姐妹染色体还没有彼此分离，它们被称为姐妹染色单体。
(b)前期的早期。中心粒，各具有新形成的子中心粒，开始向细胞相反的极移动；可以看到染色体象长丝。核膜开始解聚为小泡。
(c)前期的中和晚期。完成了染色体的缩合；各可见的染色体结构由在其着丝点结合在一起的两个染色单体组成。各染色单体含有两个新复制的子DNA分子之一。微管纺锤体开始从与中心粒相邻的区域向外辐射，中心粒移动接近它们的两极。一些纺锤丝从一个极到达另一个极；大多数趋向染色单体并到达着丝点。
(d)中期。染色体移向细胞的赤道，它们在赤道面排列成行。姐妹染色单体还没有分离。
(e)后期。两个姐妹染色单体分离为独立的染色体。各含有一个着丝点，其通过纺锤丝与一个极相连，向该极移动。因此，各染色体的一个拷贝献给每个子细胞。同时，该细胞伸延，正如极与极纺锤体所为。当分裂沟开始形成时，胞质分裂便开始了。
(f)末期。在子核周围形成新的膜；染色体展开并变得不太明显，核再次变得可见，且在各子核周围形成核膜。胞质分裂接近完成，随着微管及其它纺锤丝的解聚纺锤体消失。在整个有丝分裂中，每个极上的子中心粒生长到其全长。在末期，完成各原始中心粒的复制，而而在下个分裂间期中会产生新的子中心粒。
(g)分裂间期。胞质分裂完成时，细胞进入细胞周期的G1期并再进行下个周期。
应领会细胞周期是极其重要的细胞过程。正常细胞周期的偏差可导致一些疾病。升高和/或无限制的细胞周期可能导致癌症。降低的细胞周期会导致变应性病症。本发明化合物的使用可以为治疗这些疾病和病症提供一种方法。
因此，本发明的化合物可以适用于治疗细胞周期紊乱，如癌症，包括激素依赖性和激素非依赖性癌症。
此外，本发明化合物适用于治疗癌症如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肉瘤、前列腺癌、胰腺癌等，以及其它的实体瘤。
对于一些应用，细胞周期受到抑制和/或阻止和/或停滞，优选其中细胞循环受到阻止和/或停滞。在另一方面，细胞周期可以在G2/M期中受到抑制和/或停滞。在一个方面中，细胞周期可以不可逆逆地被阻止和/或抑制和/或停滞。优选其中细胞周期不可逆地被阻止和/或停滞。
术语“不可逆地阻止和/或抑制和/或停滞”指在本发明化合物应用后，在撤除该化合物时，该化合物的作用，即细胞周期的阻止和/或抑制和/或停滞，仍是可以观察到的。更具体地讲，术语“不可逆地受到阻止和/或抑制和/或停滞”，指当按照本文中给出的细胞周期检测方案进行检测时，接受被测化合物处理的细胞比对照细胞在方案I的阶段2显示出了较差的生长。此方案的细节在下文中给出。
因此，本发明提供了化合物，它们通过阻止和/或抑制和/或停滞细胞周期，引起体内雌激素受体阳性(ER+)和ER阴性(ER-)的乳腺癌细胞的抑制，和/或在完整动物(即，非卵巢切除的动物)中引起亚硝基-甲基脲(NMU)诱发的乳腺肿瘤的消退，和/或阻止和/和抑制和/或停滞癌症细胞中的细胞周期；和/或通过阻止和/或抑制和/或停滞细胞周期在体内起作用和/或作为细胞周期激动剂。细胞周期实验(方案6)方法阶段1
将MCF-7乳腺癌细胞以105个细胞/孔的密度接种到多孔培养板中。当将其作如下处理时，让细胞吸附并生长直到约30％融合：
对照组：不处理
被测化合物(COI)20μM
在含COI的生长培养基中，细胞生长6天，每3天更换培养基/COI。在该过程结束时，用Coulter细胞计数器进行细胞计数。阶段2
用COI处理细胞6天后，以104个细胞/孔的密度再接种细胞。不再进行处理。在生长培养基的存在下让细胞再生长6天。该过程结束时，再对细胞进行计数。癌症
如上所述，本发明化合物可以用于治疗细胞周期紊乱。一种特别的细胞周期紊乱是癌症。
在大多数西方国家，癌症一直是主要的死亡原因。至今，研发的癌症疗法包括阻断激素的作用或合成，以抑制激素依赖性肿瘤的生长。但是，为了治疗非激素依赖性肿瘤，常采用攻击性更强的化疗。
因此，对激素依赖性和/或非激素依赖性肿瘤进行治疗又没有与化疗有关的一些和全部副作用的抗癌药物的研发，将会代表主要的治疗进展。
已知雌激素在其合成后，进行一些羟基化和轭合反应。直到最近，人们才想到这些反应是代谢过程的一部分，该过程最终赋予雌激素水溶性并促进它们从体内清除。现在，人们清楚地认识到一些羟基代谢物(如2-羟基和16α-羟基)及轭合物(如雌酮硫酸酯，E1S)在测定雌激素的一些体内复杂作用中是重要的。
研究人员已对2-和16-羟基化雌激素的形成与改变乳腺癌危险性的病症之间的关系进行了研究。现已清楚增加2-羟化酶活性的因素与癌症危险性的降低有关，而升高的16α-羟基化作用会提高乳腺癌的危险性。雌激素代谢物的生物作用中的其它利益受到不断增加证据的鼓舞，即2-甲氧基雌二醇是具有抗有丝分裂性质的内源性代谢物。2-甲氧基雌酮-3-O-氨基磺酸酯(2-MeOE2)通过儿茶酚雌激素甲基转移酶由2-羟基雌二醇(2-OHE2)形成，该酶广泛分布在体内。
研究人员已揭示了体内2-MeOE2抑制肿瘤的生长，这些肿瘤由皮下注射的Meth A肉瘤、B16黑素瘤或MDA-MB-435雌激素受体阴性的(ER-)乳腺癌细胞产生。它还抑制内皮细胞增殖和迁移，以及体外血管生成。这暗示2-MeOE2体内抑制肿瘤生长的能力可能是由于其抑制肿瘤诱发的血管生成的能力，而不是对肿瘤细胞增殖的直接抑制。
2-MeOE2发挥其有力的抗有丝分裂和抗血管生成作用的机理还正在研究。显然，其以高浓度可以抑制微管的聚合，并作为秋水仙碱结合微管蛋白的弱抑制剂。但是，最近发现以阻断有丝分裂的浓度，细胞中的微管蛋白细丝解聚，但是具有与紫杉醇处理后观察的相同的形态。因此，象一种用于乳腺癌和卵巢癌治疗的药物紫杉醇一样，2-MeOE2通过稳定微管的动力学起作用。
虽然将2-MeOE2确定为治疗癌症的新方法代表了重要的进步，但是口服雌激素的生物利用度差。此外，它们在其通过肝脏期间进行深度代谢。作为开发用于乳腺癌治疗的甾类硫酸酯抑制剂研究过程的一部分，雌酮-3-O-氨基磺酸酯(EMATE)被确定为有效的直接针对活性位点的抑制剂。出人意料的是，证明EMATE具有强雌激素性质，其在大鼠中的口服亲子宫活性是雌二醇的100倍。认为其升高的动情性能来自红细胞(rbc)对其的吸收，该吸收在其通过肝脏期间能防止灭活，且其作为贮库在延长的时间内释放药物。合成并检测了一些A环修饰的类似物，包括2-甲氧基雌酮-3-O-氨基磺酸酯。虽然该化合物作为甾类硫酸酯酶抑制剂与EMATE具有等价活性，但是其完全没有动情能力。
我们相信本发明的化合物为治疗癌症，并特别是乳腺癌的治疗提供了手段。
此外或者二者择一地，本发明的化合物可以用于阻断癌症的生长，包括白血病和实体瘤，如乳腺、子宫内膜、前列腺、卵巢和胰腺的肿瘤。治疗相关性雌激素
我们相信本发明的一些化合物可以用于控制体内特别是女性体内的雌激素水平。因此，一些这样的化合物可以用于提供控制生育的手段，如口服避孕片剂、丸剂、溶液剂和锭剂。或者，该化合物可以是埋植剂和贴剂的形式。
因此，本发明的化合物可以用于治疗与雌激素有关的病症，特别是治疗与雌激素缺乏有关的激素病症。
此外，或供选择的，本发明的化合物可以用于治疗除与雌激素有关的激素病症。因此，本发明的化合物还能影响激素活性并还能影响免疫反应。神经变应性疾病
我们相信一些本发明的化合物可以用于治疗神经变应性疾病及相似病症。
例如，据信STS抑制剂可以用于提高以下疾病患者的记忆功能：例如，健忘症、头部损伤、早老性痴呆、癫痫性痴呆、外伤后痴呆、老年性痴呆、血管性痴呆和中风后痴呆或者其它需要提高记忆力的个体。TH1
我们相信本发明的一些化合物可以用于TH1交织。
例如，据信在巨噬细胞或其它存在抗原的细胞内STS抑制剂的存在，可能导致致敏T细胞增长TH1(高IL-2、IFNγ，低IL-4)反应的能力降低。其它甾类如糖皮质激素的正常调节剂的影响将因此占主导地位。炎症
我们相信本发明的一些化合物可以用于治疗炎症，如与下列任何一种或多种情况有关的病症：自身免疫性，包括例如，类风湿先关节炎、I型和II型糖尿病、系统性红斑狼疮、多发性硬化、重症肌无力、甲状腺炎、结节性脉管炎、溃疡性结肠炎和节段性回肠炎，皮肤疾病如牛皮癣和接触性皮炎；移植物抗宿主病；湿疹；哮喘和移植后器官排斥反应。
例如，据信STS抑制剂可以防止DHEA和相关甾类对免疫和/或炎性反应的正常生理作用。
本发明的化合物可以用于制备显示内源性糖皮质激素样作用的药物。其它治疗
还应理解本发明的化合物/组合物可以具有其它重要的医药用途。
例如，本发明的化合物或组合物可以用于治疗WO-A-99/52890所列出的疾病，即：
此外，或供选择的，本发明的化合物或组合物可以用于治疗WO-A-98/05635中所列出的疾病。为了便于参考，现提供其中列出的部分疾病：癌症，炎症或炎性疾病、皮肤病、发烧、心血管病、溶血病、凝血病和急相反应、恶病质、厌食、急性感染、HIV感染、休克、移植物抗宿主反应、自身免疫性疾病、再灌注损伤、脑膜炎、偏头痛和阿司匹林依赖性抗血栓形成；肿瘤生长、侵入和扩散，血管生成，肿瘤转移，恶性肿瘤，腹水和恶性胸膜渗漏；脑局部缺血，局部缺血性心脏病，骨关节炎，类风湿先关节炎，骨质疏松，哮喘，多发性硬化，神经变应性疾病，早老性痴呆，动脉硬化，中风，结节性脉管炎，节段性回肠炎和溃疡性结肠炎；牙周炎，齿龈炎；牛皮癣，特应性皮炎，慢性溃疡，表皮松解大疱；角膜溃疡，视网膜病和外科伤口愈合；鼻炎，变应性结膜炎，湿疹，过敏反应；再狭窄，充血性心力衰竭，子宫内膜异位，动脉粥样硬化或内硬化(endosclerosis)。
此外，或供选择的，本发明的化合物或组合物可以用于治疗WO-A-98/07859所列出的疾病。为了便于参考，现提供其中所列出的一部分：细胞因子和细胞增殖/分化活性；免疫抑制或免疫刺激活性(如，用于治疗免疫缺陷，包括人类免疫缺陷病毒感染；调节淋巴细胞生长；治疗癌症和很多自身免疫性疾病，并用来防止移植物排斥反应或诱发肿瘤免疫性)；调节造血，如治疗骨髓或淋巴样疾病；促进骨、软骨、腱和神经组织的生长，如用于愈合伤口，治疗烧伤、溃疡和牙周病以及神经变应性疾病；抑制和活化卵泡刺激激素(调节生育力)；趋化性/化学促活活性(如用于调动特异细胞类型到损伤活感染的部位)；止血和溶栓活性(如用于治血友病和中风)；抗炎活性(用于治疗如脓毒性休克和节段性回肠炎)；在人或兽医药中作为抗菌剂；调节剂如代谢或行为调节剂；作为止痛剂；治疗特异性缺陷疾病；治疗牛皮癣。
此外，或供选择的，本发明的组合物可以用于治疗WO-A-98/09985中所列疾病。为了便于参考，现提供其中所列出的一部分：巨噬细胞抑制和/或T细胞抑制活性，并因此具有抗炎活性；抗免疫活性，即对细胞和/或体液免疫反应的抑制活性，包括与炎症无关的反应；抑制巨噬细胞和T细胞粘附细胞外基质组分和纤连蛋白的能力，以及上调fas受体在T细胞中的表达；抑制不需要的免疫反应和炎症，包括关节炎，包括类风湿先关节炎，与过敏性有关的炎症，过敏反应，哮喘，系统性红斑狼疮，胶原性疾病及其它自身免疫性疾病，与动脉粥样硬化有关的炎症、动脉硬化、动脉粥样硬化性心脏病、再灌注损伤、心动停止、心肌梗塞、脉管炎、呼吸窘迫综合症或其它心肺疾病，与消化性溃疡有关的炎症、溃疡性结肠炎及其它胃肠道疾病、肝纤维化、肝坏死或其它肝病、甲状腺炎或其它腺体疾病、肾小球性肾炎或其它肾和泌尿系统疾病、耳炎或其它耳鼻喉科疾病、皮炎或其它皮肤病、牙周病或其它牙科疾病、睾丸炎或附睾炎、不育症、睾丸外伤或其它免疫相关性睾丸病、胎盘机能障碍、胎盘机能不全、习惯性流产、惊厥、惊厥前期和其它免疫和/或与炎症有关的妇科疾病、后色素层炎、中色素层炎、前眼色素层炎、结膜炎、脉络膜视网膜炎、色素层视网膜炎、眼神经炎、眼内炎症如视网膜炎或囊性斑水肿、交感神经眼炎、巩膜炎、视网膜炎性色素沉着、变应性蛋白乳酪酥样疾病(degenerative fondus disease)的免疫和炎症部分、眼外伤的炎症部分、感染引起的眼炎、增殖性玻璃体-视网膜病、急性局部缺血性视神经病、疤痕形成过度如在青光眼滤光手术后、对眼移植的免疫和/或炎症反应以及其它免疫和炎症相关性眼病、与自身免疫性疾病有关的炎症、或者在中枢神经系统(CNS)或在任何其它器官中存在的且会得益于免疫和/或炎症反应抑制的病症或疾病、帕金森氏病、治疗帕金森氏病产生的并发症和/或副作用、AIDS有关的痴呆综合征、HIV相关性脑病、德维克氏病、舞蹈病、早老性痴呆及其它变应性疾病、CNS的病症或紊乱、中风的炎症反应部分、脊髓灰质炎后综合征、神经病的免疫和炎症部分、脊髓炎、脑炎、亚急性硬化盘脑炎、脑脊髓炎、急性神经病、亚急性神经病、慢性神经病、格巴二氏综合征、Sydenham舞蹈病、重症肌无力、假脑瘤(pseudo-tumour cerebri)、Down氏综合征、Huntington氏舞蹈病、肌萎缩性侧索、CNS压迫或CNS外伤的炎症部分或者CNS感染、肌萎缩和营养不良的炎症部分、及免疫和炎性相关性疾病、脑和外周神经系统的病症或紊乱、外伤后炎症、脓毒性休克、传染病、手术的炎症并发症或不良反应、骨髓移植或其它移植并发症和/或不良反应、基因疗法的炎性和/或免疫性并发症和不良反应，如由于受病毒载体感染、或者与AIDS有关的炎症；抑制体液和/或细胞免疫反应，治疗或减轻单核细胞或白细胞增殖性疾病如白血病，通过降低单核细胞或淋巴细胞的量来预防和/或治疗天然和人造细胞、组织和器官移植情况中的移植排斥反应，如角膜、骨髓、器官、晶状体、起搏器、天然或人造皮肤组织。化合物制备
本发明的化合物可以通过适当的醇与氯化物反应制备。例如，本发明的氨基磺酸酯化合物可以通过适当的醇与式R1R2NSO2Cl的适宜的氨基磺酰基氯反应制备。
进行该反应的典型条件如下。
在0℃下，将氢化钠和氨基磺酰基氯加入到搅拌的、该醇的无水二甲基甲酰胺溶液中。接着，让该反应升到室温下，再继续搅拌24小时。将该反应混合物倒入到冷的碳酸氢钠饱和溶液中，并用二氯甲烷萃取水相。将合并的有机萃取物用无水硫酸镁干燥。过滤，接着真空蒸发溶剂，并与甲苯共蒸发，得到粗品残余物，将其通过快速色谱进一步纯化。
优选，在与氨基磺酰基氯反应前，将该醇适当地衍生化。如果需要，该醇中的官能基可以以已知方式进行保护，并在该反应结束时除去一个或多个保护基。
优选，这些氨基磺酸酯化合物按照Page等的教导(1990Tetrahedron46；2059-2068)来制备。或者，这些氨基磺酸酯化合物可以按照WO96/05216或WO96/05217来制备。概要
总之，本发明提供了适于口服避孕、激素替代疗法、抑制E1-STS及其它治疗应用的新的组合物。实施例
现仅参照附图通过实施例描述本发明，其中：
附图1表示流程图；
附图2表示曲线图；
附图3表示曲线图；
附图4表示曲线图；
附图5表示曲线图；
附图6表示曲线图；
附图7表示曲线图；
附图8表示曲线图；
附图9表示曲线图；
附图10表示曲线图；
附图11表示曲线图；制备本发明的下列化合物(一种或多种)制备雌酮-3-氨基磺酸酯
在0℃下，将氢化钠(60％分散液；2eq)和氨基磺酰基氯(2eq)加入到搅拌的、雌酮(1eq)的无水二甲基甲酰胺溶液中。接着，让该反应升到室温下，再继续搅拌24小时。
将该反应混合物倒入到冷的碳酸氢钠饱和溶液中，并用二氯甲烷萃取水相。将合并的有机萃取物用无水硫酸镁干燥。过滤，接着真空蒸发溶剂，并与甲苯共蒸发，得到粗品残余物，将其通过快速色谱进一步纯化。
分析显示如下数据：δ1H(270MHz；CD3OD)：0.91(s，3H，C18-Me)，1.40-2.55(m系列，13H)，2.90-2.92(m，2H)，7.04(brd，2H，J＝10.44Hz)，7.33(brd，1H，J＝8.42Hz)。δ13C(67.8MHz；CD3OD)：14.53(q，C18-Me)，22.80(t)，27.24(t)，27.73(t)，30.68(t)，33.05(t)，37.01(t)，39.76(d)，45.73(s，C18)，51.86(d)，120.76(d)，123.54(d)，127.89(d)，139.83(s)，150.27(s)，223.87(s，C＝O)。m/z(％)：349(9)(m+)，270(100)，213(26)，185(43)，172(31)，159(21)，146(36)，91(33)，69(37)，57(73)，43(56)，29(24)。
微量分析：
           C           H         N
理论值：    61.87％      6.63％     4.01％
实测值：    61.90％      6.58％     3.95％用雌二醇氨基磺酸酯(J995)进行研究 技术
研究雌二醇氨基磺酸酯(J995)的体外和体内激素性质。体外研究包括评价其与雌激素受体的特异性结合，其中使用大鼠和小鼠及MCF-7肿瘤细胞的胞质制剂。用几种动物进行体外研究，包括完整和卵巢切除的大鼠和cynomolgus猴。这些物种用来研究该化合物非肠道给药和口服时的详细药效学和药动学。
给绝经后妇女口服该化合物，在人类中进行研究。评价单剂量和多剂量给药的若干剂量。用非肠道给药用在油性载体中的溶液进行体外研究。用结晶J995在含水载体中的悬浮液进行口服治疗。用无定型药物与常规组分的混合物配制的盖仑制剂以胶囊或片剂的形式进行临床研究。
体外研究表明J995本身对雌激素受体没有亲合性。放射性标记的J995对小鼠、大鼠和人的雌激素受体没有特异性结合。大大过量的J995不能特异性地置换结合的放射性标记的雌二醇。这两个发现都强烈地证明J995在由无激素活性分子转变为有激素活性分子后才发挥雌激素作用。前药J995，或其主要代谢物雌酮氨基磺酸酯(EMATE)，分别水解为氨基磺酸和天然的雌激素雌二醇及雌酮(附图1)。
由于在红细胞中优先运输，该前药和J995具有特殊的药物动力学性质。J995不象常规雌激素那样在血液的血浆部分中循环，98-99％的J995在红细胞内循环。这种红细胞运输致使肝脏激素作用和在肝脏首过中的提取大大降低，而红细胞作为贮库使J995从其中长时间释放。就口服雌激素治疗而言J995的优越性：
·改变血液浓度的个体差异(附图2和3)：
雌激素治疗的头号标准物是乙炔基雌二醇。此化合物不能带来恰当规定的血液浓度(附图4)。这种个体差异的不利之处是为了达到可以接受的成功治疗率在大多数个体中需要使用比实际需求更高的剂量。
·雌激素剂量的降低及活性代谢物的负荷可能促进了一些激素依赖性肿瘤的生长：
用所谓的共轭雌激素、雌二醇、雌三醇戊酸酯和雌酮硫酸酯进行的常规口服雌激素替代疗法，导致循环中雌酮硫酸酯的大量蓄积。一些该代谢物水解带来雌酮和雌二醇的治疗性血液浓度。但是，雌酮硫酸酯的缺点是在乳腺癌组织中其特别积极地被硫酸酯酶水解，这会产生可能促进生长的雌激素。J995，联系其剂量而言，在相同的剂量下比雌二醇戊酸酯带来更高并持续时间更长的雌二醇水平(附图6、7)。较雌二醇戊酸酯治疗，下游产生的代谢物雌酮硫酸酯至少降低了10倍(附图5)。
·肝脏雌激素作用的降低：
为了应付肝脏的大量激素损失，对于常规口服雌激素治疗来说，高剂量的雌激素是必需的。这种高剂量的缺点是对雌激素调节肝功能方面不利的作用。其中包括对止血系统和相关血栓栓塞疾病的作用因素，在循环中血管紧张肽原升高，及其带来的对肾上腺、肾和血管功能的作用，胆汁分泌和脂代谢的变化。J995作用的肝脏绕过机理和本发明的超低剂量策略，避免了绝经后雌激素治疗的副作用。口服给药的J995几乎100％到达红细胞贮库。多于50％的此前药在循环中以雌酮和雌二醇的形式出现(附图11)。与常规口服雌激素治疗相比，这样为每单位时间使用更低的剂量提供了可能。
·获得恒定的血液浓度：
常规每天口服雌激素治疗中，每天之间的雌激素血液浓度不断波动(附图5，6，7)，而J995带来了非常恒定、长时间持续的血液浓度(附图5，6，7，8，9，10)。附图9显示了几乎恒定的雌酮硫酸酯水平，这反映出以每天100μg非常低的剂量用J995治疗14天后在144小时的冲洗阶段中上游产生的雌二醇和雌酮。
·在雌激素缺乏骨骼中雌二醇氨基磺酸酯的作用：
已确立的口服雌激素疗法不能获得本文中描述的恒定和很好规定的血液浓度。J995能恰在导致子宫内膜生长的阈值下提供精确的骨保护治疗。没有子宫内膜作用允许，在优选的方面中，在不同时使用孕激素的前提下使用J995。基于J995对于雌激素替代疗法来说用只含雌激素的制剂就可以获得改 善
·不带有出血的治疗：
联合雌激素/孕激素治疗的原理是控制代表子宫内膜癌症恶化危险的子宫内膜增殖。这种保护基本作用的代价是巨大的。周期性和持续性的联合治疗导致出血，这些可能是中断雌激素替代治疗的最重要的原因。
·对健康的作用：
该治疗的另一个已明确的副面作用是，对于雌激素对绝经期妇女健康发挥的正面作用的损害。
·乳腺
孕激素对乳腺的增生作用带来的问题类似于孕酮在妊娠中的作用。对这些作用的忧虑与它们在乳腺癌发展中的潜在作用有关。
·代谢副作用：
孕激素，如孕酮本身，对很多代谢功能具有重要作用。其中包括胰岛素分泌和降低的胰岛素抗性，以及对脂代谢的作用。在雌激素替代治疗中相应的作用代表了不希望的作用。雌激素替代疗法的意义：
在绝经后，在卵巢雌激素分泌停止后，妇女会发生恒定的骨质损失。由于妇女的预期寿命非常高并仍不断升高这一事实，必须防止骨损失和所造成的骨骼脆性。至今，这是高龄残废和患病以及死亡的最重要的危险性。
上述说明书中所有的出版物和专利引入本文中作为参考。
在不背离本发明的范围和实质的前提下，本发明的多种改变和变化对本领域技术人员来说是显而易见的。虽然已结合特别优选的实施方案对本发明进行了描述，但是应理解本发明所要求保护的不应只限于这样的特定实施方案。实际上，我们要将对化学、生物和相关领域技术人员来说显而易见的实施本发明的所述方式的各种改进形式，包括在下列权利要求的范围内。

Claims (26)

1.一种药物组合物，其中含有
(i)式(I)的化合物
           式I
其中：X是环中具有至少4个原子的烃基环；K是烃基基团；Rs是氨基磺酸根；
(ii)任选地与药用载体、稀释剂、赋形剂或辅剂混合，其中该化合物以提供不大于200μg/天剂量的量存在。
2.权利要求1的药物组合物，其中该化合物以提供10至200μg/天剂量的量存在。
3.权利要求1或2的药物组合物，其中该化合物以提供50至200μg/天剂量的量存在。
4.权利要求1或2的药物组合物，其中该化合物以提供20至50μg/天剂量的量存在。
5.权利要求1的药物组合物，其中该化合物以不大于200μg/剂量的量存在。
6.权利要求1的药物组合物，其中该化合物以不大于1mg/剂量的量存在。
7.权利要求1的药物组合物，其中该化合物以不大于4mg/剂量的量存在。
8.上述任一权利要求所述的药物组合物，其中X与K联合模拟甾类结构。
9.上述任一权利要求所述的药物组合物，其中K是环状基团。
10.上述任一权利要求所述的药物组合物，其中X是6员环。
11.上述任一权利要求所述的药物组合物，其中环X具有6个环碳原子。
12.上述任一权利要求所述的药物组合物，其中该化合物是式II的化合物
Figure A0180364200031
               式II其中各Rs、X和K如权利要求1所定义。
13.上述任一权利要求所述的药物组合物，其中X与K联合是甾类环结构。
14.上述任一权利要求所述的药物组合物，其中基团K和环X是甾类环结构或其被取代的衍生物。
15.权利要求14的药物组合物，其中所述Rs基团在X环的3位上。
16.上述任一权利要求所述的药物组合物，其中Rs是氨基磺酸根基团。
17.上述任一权利要求所述的药物组合物，其中该化合物是式III的化合物
Figure A0180364200032
           式III其中X、K和Rs如权利要求1所定义；且其中Rh1是任选的卤素基团；Rh2是任选的卤素基团；Rh1和Rh2的至少一个是存在的。
18.权利要求17的药物组合物，其中Rh1在环X的2位上。
19.权利要求17或18的药物组合物，其中Rh2在环X的4位上。
20.权利要求1的药物组合物，其中所述式I化合物选自如下化合物：
Figure A0180364200041
17α乙炔基17β雌二醇-3-氨基磺酸酯                 17β雌二醇-3-氨基磺酸酯
Figure A0180364200042
17α雌二醇-3-氨基磺酸酯                            雌酮-3-氨基磺酸酯(EMATE)
Figure A0180364200043
雌三醇-3-氨基磺酸酯。
21.用于药物的上述任一权利要求所述的组合物。
22.权利要求1至20任一项所述的组合物在制备用于口服避孕的药物中的用途。
23.权利要求1至20任一项所述的组合物在制备用于激素替代疗法中的药物中的用途。
24.权利要求1至20任一项所述的组合物在制备用于没有子宫内膜刺激的骨保护激素替代疗法的药物中的用途。
25.权利要求1至20任一项所述的组合物在制备用于治疗与STS有关的病症或疾病的药物中的用途。
26.权利要求1至20任一项所述的组合物在制备用于治疗与有害的STS水平有关的病症或疾病的药物中的用途。
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