CN1401765A - 甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法 - Google Patents
甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1401765A CN1401765A CN 02129245 CN02129245A CN1401765A CN 1401765 A CN1401765 A CN 1401765A CN 02129245 CN02129245 CN 02129245 CN 02129245 A CN02129245 A CN 02129245A CN 1401765 A CN1401765 A CN 1401765A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sweet potato
- culture
- suspension cell
- murashige
- cultivate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
一种甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法，它包括以下步骤：(1)胚性细胞悬浮培养系的建立、(2)菌株的活化及菌液的制备、(3)侵染和共培养、(4)选择培养和(5)转基因植株再生，建立了一个适合多种甘薯品种的胚性细胞悬浮培养系，该体系通过体细胞胚胎发生途径再生植株，植株再生率均为98％以上，达到用甘薯胚性悬浮细胞为转化受体，建立一个高效及适应性广的甘薯遗传转化体系。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，特指一种甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法。
背景技术
众所周知，甘薯基因工程将是改良甘薯的抗病虫性、品质等的有效手段。甘薯基因工程研究目前已取得一些进展，已获得少量的转基因植株。
Otani和Mii等人于1993年，用14个甘薯品种的叶片与8个发根农杆菌菌系共培养诱导得到毛状根，并诱导植株再生，首次在甘薯这一作物中获得了少量转基因植株。
Newell等人在1995年，分别用携带pCTI5和pPCG6质粒的根癌农杆菌菌株LBA4404转化甘薯品种“Jewel”的新鲜块根组织，得到几株转基因植株。
Gama等人于1996年，用根癌农杆菌菌株EHA101转化甘薯品种“WhiteStar”的愈伤组织，获得8株转基因植株。
Moran等人于1998年，以叶片为受体，用农杆菌介导法将Bt基因导入甘薯品种“Jewel”，获得数株转基因甘薯植株。
Otani等人于1998年，用农杆菌介导法将GUS基因导入甘薯品种“高系14号”的愈伤组织，获得少量转基因植株。
Kimura等人于2001年，用农杆菌介导法将GBSSI基因导入甘薯品种“高系14号”的愈伤组织，获得数株转基因甘薯植株。
Otani等人于2001年，用农杆菌介导法将Bar基因导入甘薯品种“高系14号”的愈伤组织，获得少量转基因植株。
但是，目前上述这些甘薯遗传转化研究中，均采用再分化能力很低的叶片、叶柄或愈伤组织等材料作为受体，所以到目前为止的研究中，仅获得少数几株转基因甘薯植株，尚未获得可在生产上应用的转基因甘薯植株。因此，甘薯基因工程应用的最主要问题是缺乏一个高效及适应性广的遗传转化体系。
发明内容
本发明的目的是提供一种甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法，通过建立了一个适合多种甘薯品种的胚性细胞悬浮培养系，该体系是通过体细胞胚胎发生途径再生植株，植株再生率均为98％以上，达到用甘薯胚性悬浮细胞为转化受体，建立一个高效及适应性广的甘薯遗传转化体系的目的。
本发明的目的是这样实现的：一种甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法，其特征是：它包括以下步骤：
(1)胚性细胞悬浮培养系的建立：
将长0.3-0.8mm的茎尖组织在添加1.0-3.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、3.0％蔗糖和0.8％琼脂的Murashige和Skoog培养基上进行培养，培养条件为26～30℃，pH5.8、黑暗，培养6-8周后，将诱导得到的胚性愈伤组织破碎成小细胞团或单细胞，将其转移到含有1.0-3.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸的Murashige和Skoog液体培养基中，于水平摇床上90～120rpm进行振荡培养。培养条件为26～30℃、每日13小时、100～500Lx光照，悬浮培养物每7-10天继代1次；
(2)菌株的活化及菌液的制备：
将在4℃以下冰箱中保存的农杆菌(如LBA4404、EHA101)在固体平板培养基上划线培养，使其活化，挑取培养2天的单菌落，在含有50mg/L卡那霉素和125mg/L链霉素的LB液体培养基中，250rpm下振荡培养，培养条件为26～30℃、pH值在6.8～7.4之间、黑暗，培养14～18小时后，将得到的悬浮培养物在固体平板培养基上划线培养，以进一步活化获得农杆菌单菌落。培养14～18小时后，将达到对数生长期的菌液置于离心管中，5000×g下离心5分钟收集菌体，最后将农杆菌悬浮于Murashige和Skoog液体培养基中稀释OD值为0.5～0.8；
(3)侵染和共培养：
将继代培养2-3天的胚性悬浮细胞用0.45mol/L的甘露醇在室温下进行高渗处理，将预处理过的悬浮细胞重新悬浮于制备好的菌液中，低速振荡10-15分钟，然后将菌液吸出，将侵染过的悬浮细胞重新悬浮于含有1.0-3.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸的Murashige和Skoog液体培养基中，进行共培养3-5天，培养条件为26～30℃、黑暗；
(4)选择培养：
将共培养后的胚性悬浮细胞用无菌水清洗2-3次，再用含有300-500mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog液体培养基抑菌处理12小时，将侵染过的胚性悬浮细胞悬浮于含有1.0-3.0mg/L 2.4-二氯苯氧乙酸、100-300mg/L羧苄青霉素以及50-75mg/L卡那霉素的Murashige和Skoog液体培养基中进行选择培养，培养条件为26～30℃、每日13小时、100～500Lx光照；
(5)转基因植株再生：
在选择培养基中，当胚性细胞团长至直径约0.5-2mm时，将其转移到含有相应抗生素的固体培养基上进行培养，使其增殖形成胚性愈伤组织和体细胞胚，培养条件为28℃、黑暗，转移6-8周后，将形成体细胞胚的胚性愈伤组织转移到添加0.5-1.5mg/L脱落酸、50-75mg/L卡那霉素以及100-300mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog固体培养基上，使体细胞胚成熟并发芽，培养条件为26～30℃、每日13小时、2000～4000Lx光照；4-6周后，将再生的小植株转移到添加50-75mg/L卡那霉素、100-300mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog基本培养上，使其形成完整的甘薯转基因植株。
该步骤(1)的茎尖组织为带有1-2片叶原基，2，4-二氯苯氧乙酸浓度一定为2.0mg/L，悬浮培养物继代时间为7天。该步骤(3)要求使用悬浮培养12周内的悬浮培养物。侵染和共培养中，在进行高渗处理后，用0.16mol/L的CaCl2·2H2O清洗2次。该步骤(4)的羧苄青霉素浓度为100mg/L，卡那霉素浓度为50mg/L；在选择培养基中悬浮培养物要每7天继代一次。它还包括将抗性基因导入甘薯细胞中，以提高甘薯的产量和品质。
下面结合较佳实施例和附图进一步说明。
附图说明
图1是本发明的方法流程示意图。
具体实施方式
参阅图1所示，本发明的方法主要包括以下几个方面：
1、胚性细胞悬浮培养系的建立：
将长0.3-0.5mm的茎尖组织(带1-2片叶原基)在添加1.0-3.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、3.0％蔗糖和0.8％琼脂的Murashige和Skoog培养基(pH5.8)上进行培养，培养条件为26～30℃，黑暗，培养6-8周后，将诱导得到的胚性愈伤组织破碎成小细胞团或单细胞，将其转移到含有1.0-3.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸的Murashige和Skoog液体培养基中，于水平摇床上90～120rpm进行振荡培养。培养条件为26～30℃、每日13小时、100～500Lx光照。悬浮培养物每7-10天继代1次。
2、菌株的活化及菌液的制备：
将在4℃以下冰箱中保存的农杆菌如LBA4404、E小时A101在固体平板培养基上划线培养，使其活化，挑取培养2天的单菌落，在含有50mg/L卡那霉素125mg/L链霉素的Liquid Bacterium液体培养基(pH值在6.8～7.4之间)中，250rpm下振荡培养，培养条件为26～30℃、黑暗，培养14～18小时后，将得到的悬浮培养物在固体平板培养基上划线培养，以进一步活化获得农杆菌单菌落。培养14～18小时后，将达到对数生长期的菌液置于离心管中，5000×g下离心5分钟收集菌体。最后将农杆菌悬浮于Murashige和Skoog液体培养基中稀释OD值为0.5～0.8。
3、侵染和共培养：
将继代培养2-3天的胚性悬浮细胞用0.45mol/L的甘露醇在室温下进行高渗处理，然后用0.16mol/L的CaCl2·2H2O清洗2次。将预处理过的悬浮细胞重新悬浮于制备好的菌液中。低速振荡10-15分钟，然后将菌液吸出，将侵染过的悬浮细胞重新悬浮于含有1.0-3.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸的Murashige和Skoog液体培养基中，进行共培养3-5天，培养条件为26～30℃、黑暗。
4、选择培养：
将共培养后的胚性悬浮细胞用无菌水清洗2-3次，再用含有300-500mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog液体培养基抑菌处理12小时。将侵染过的胚性悬浮细胞悬浮于含有1.0-3.0mg/L 2.4-二氯苯氧乙酸、100-300mg/L羧苄青霉素以及50-75mg/L卡那霉素的Murashige和Skoog液体培养基中进行选择培养，培养条件为26～30℃、每日13小时、100～500Lx光照。
5、转基因植株再生：
在选择培养基中，当胚性细胞团长至直径约0.5-2mm时，将其转移到含有相应抗生素的固体培养基上进行培养，使其增殖形成胚性愈伤组织和体细胞胚，培养条件为28℃、黑暗，转移6-8周后，将形成体细胞胚的胚性愈伤组织转移到添加0.5-1.5mg/L脱落酸、50-75mg/L卡那霉素以及100-300mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog固体培养基上，使体细胞胚成熟并发芽，培养条件为26～30℃、每日13小时、2000～4000Lx光照。4-6周后，将再生的小植株转移到添加50-75mg/L卡那霉素、100-300mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog基本培养基上，使其形成完整的甘薯转基因植株。
本发明相对现有技术而言所具有的主要优点和效果如下：
1、转化效率高：
到目前为止的所有报道，其遗传转化效率仅为1％～5％，而本发明的转化效率为53％～79％，本发明的转化效率比现有技术高10-79倍。(转化效率＝获得转基因植株数/转化的外植体总数*100)。
2、适应范围广：
本发明所用的材料是植株再生率高且适用于多种甘薯品种(例如：徐薯18、高系14号、玉丰或新大紫等)的胚性细胞悬浮培养系，本发明的胚性细胞悬浮培养系的遗传转化系统适用于多种甘薯品种，而现有的其他遗传转化体系仅适用单一或少量甘薯品种(如：宝石、白星或高系14号等)。
3、处理群体大：
本发明用甘薯胚性悬浮培养细胞作为受体，在一个100ml的三角瓶中一次可处理10,000个以上的受体，一次可生产大量转基因植株，具有生产效率高和成本低廉的优点。
4、操作比较方便：本发明技术操作较方便，重复性好，易于掌握。
5、具有广泛应用性：
本发明的方法可将有关基因导入到甘薯中，改良其病毒病、线虫病、蚁象或品质等性状。例如到目前为止，在甘薯中还未发现抗病毒病或蚁象的材料，利用常规方法无法解决这些抗性问题，而用本发明的遗传转化方法，可以有效地将抗性基因(如，OC I、CP基因等)导入到甘薯细胞中，提高甘薯的产量和品质，从而提高经济效益。
本发明的主要创造点在于：
(1)本发明是本发明人积二十年的研究和实践，首创出的新方法，到目前为止，国内外尚无利用胚性悬浮细胞进行甘薯的遗传转化方法。
(2)本发明对甘薯胚性悬浮细胞的预培养方式、共培养时间、选择压、菌株等遗传转化条件进行了详细的研究，确立了适宜的范围，建立了甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化体系。
(3)本发明的转化体系具有转化率高及适应范围广的优点，适用于甘薯几乎所有的主栽品种。
实施例1
1、OCI(水稻巯基蛋白酶抑制剂)基因的遗传转化：
用携带OCI基因的农杆菌菌株LBA4404(质粒pBI121)和甘薯品种栗子香的胚性悬浮细胞共培养4-5天。培养条件为26-30℃、黑暗。将共培养后的胚性悬浮细胞转移到含有500mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog液体培养基中，进行抑菌处理24小时。
将转化细胞(团)用含有2.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、50mg/L卡那霉素和300mg/L羧苄青霉素的选择培养基进行选择培养。培养条件为26-30℃、每日13小时、100-500Lx、光照。
选择培养2～4周后，陆续将直径约1mm的细胞团转移到添加2.0mg/L2，4-二氯苯氧乙酸、50mg/L卡那霉素和100mg/L羧苄青霉素的MS固体培养基上，培养8-20周，获得一批卡那霉素抗性愈伤组织。培养条件为26-30℃、黑暗。
将得到的卡那霉素抗性愈伤组织转移到添加1.0mg/L脱落酸、25-50mg/L卡那霉素和100mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog固体培养基上，培养4～6周后，愈伤组织形成了体细胞胚，体细胞胚进一步发育成熟并发芽形成小植株。将得到的小植株进一步转移到添加50mg/L卡那霉素的Murashige和Skoog基本培养基上，获得了194株完整植株。培养条件为26-30℃、每日13小时、2000-4000Lx、光照。
对得到的194株抗性植株进行GUS检测、PCR检测、Southern杂交等常规分子检测，结果表明，165株再生植株是转基因植株，转化率为85.1％(85.1％＝165/194*100)，详见表1。
表1 OCI(巯基蛋白酶抑制剂)抗性植株转化率
实验序数 卡那霉素抗性 转基因植 转化率 平均转化率
植株数 株数 (％) (％)
1 50 38 76.0
2 62 55 88.7 85.1
3 82 72 87.8
总计 194 165
实施例2
2、CpTI(豇豆胰蛋白酶抑制剂)基因的遗传转化
用携带CpTI基因的农杆菌菌株LBA4404(携带pBI121质粒)和甘薯品种栗子香的胚性悬浮细胞共培养4-5天。培养条件为26-30℃、黑暗。将共培养后的胚性悬浮细胞转移到含有500mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog液体培养基中，进行抑菌处理24小时。
将转化细胞(团)用含有2.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、50-75mg/L卡那霉素和100-300mg/L羧苄青霉素的选择培养基进行选择培养。培养条件为26-30℃、每日13小时、100-500Lx、光照。
选择培养4周后，陆续将直径约1mm的细胞团转移到添加2.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、50-75mg/L卡那霉素和100-300mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog固体培养基上，培养10-20周，获得一批卡那霉素抗性愈伤组织。培养条件为26-30℃，黑暗。
将得到的卡那霉素抗性愈伤组织转移到添加1.0mg/L脱落酸、50mg/L卡那霉素和100mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog固体培养基上，培养4～6周后，愈伤组织形成了体细胞胚，体细胞胚进一步发育成熟并发芽形成小植株。将得到的小植株进一步转移到添加50mg/L卡那霉素的Murashige和Skoog基本培养基上，获得了完整再生植株。培养条件为26-30℃、每日13小时、2000-4000Lx、光照。
对得到的抗性植株进行GUS检测、PCR检测、Southern杂交等分子检测，结果表明，再生植株的40％～60％是转基因植株。详见表2。
表2 CpTI(豇豆胰蛋白酶抑制剂)抗性植株转化率
实验序数 卡那霉素抗性 转基因植 转化率 平均转化率
植株数 株数 (％) (％)
1 87 42 48.3
2 58 34 58.6 51.9
3 94 48 51.1
总计 239 124
本发明通过与上述相同的方法，测得多种甘薯品种胚性悬浮细胞的植株再生率，如表3所示。
表3 甘薯品种胚性悬浮细胞的植株再生率
甘薯品种 20周 32周 36周
北京553 100 80.7 -
北京138 100 - -
高自1号 100 98.0 83.3
冀薯4号 100 55.6 -
金千贯 100 89.1 84.8
高系14号 100 93.7 79.2
栗子香 100 63.0 45.8
农大603 100 - -
农大红 100 88.7 68.8
冲绳100号 98.8 75.1 -
玉丰 100 95.7 90.4
坦桑尼亚 100 - -
向阳红 100 - -
向阳黄 100 58.3 -
新大紫 100 100 100
徐薯18 100 91.8 87.3
一窝红 100 87.3 76.5
综上所述，本发明的方法是本发明人通过长期的创造性的劳动，建立的一种适合多种甘薯品种的胚性细胞悬浮培养系，该体系通过体细胞胚胎发生途径再生植株，植株再生率均为98％以上，达到用甘薯胚性悬浮细胞为转化受体，建立一个高效及适应性广的甘薯遗传转化体系。
本发明使用常用的两种培养基MS(Murashige和Skoog)和LB(LuquidBacterium)的组分，详见附表1和2。
附表1 MS(Murashige和Skoog)培养基组分
培养基成分 含量(mg/L)
NH4NO3 1650
KNO3 1900
CaCl2.2H2O 440
MgSO4.7H2O 370
K2HPO4.H2O 170
Na2-EDTA 37.3
FeSO4.7H2O 27.8
MnSO4.4H2O 22.3
ZnSO4.7H2O 8.6
H3BO3 6.2
KI 0.83
Na2MoO4.2H2O 0.25
CuSO4.5H2O 0.025
CoCl2.6H2O 0.025
盐酸硫胺素VB1 0.1
烟酸 0.5
盐酸吡哆醇VB6 0.5
肌醇 100
甘氨酸 1.0
蔗糖 30000
琼脂(g) 10
pH 5.8
附表2 LB(Luquid Bacterium)培养基组分
培养基组分 含量(g/L)
蛋白胨 10
酵母提取物 5
NaCl 10
琼脂 15
pH 7.0
Claims (7)
1、一种甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法，其特征是：它包括以下步骤：
(1)胚性细胞悬浮培养系的建立：
将长0.3-0.5mm的茎尖组织在添加1.0-3.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、3.0％蔗糖和0.8％琼脂的Murashige和Skoog培养基上进行培养，培养条件为26～30℃，pH5.8，黑暗，培养6-8周后，将诱导得到的胚性愈伤组织破碎成小细胞团或单细胞，将其转移到含有1.0-3.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸的Murashige和Skoog液体培养基中，于水平摇床上90～120rpm进行振荡培养。培养条件为26～30℃、每日13小时、100～500Lx光照，悬浮培养物每7-10天继代1次；
(2)菌株的活化及菌液的制备：
将在4℃以下冰箱中保存的农杆菌在固体平板培养基上划线培养，使其活化，挑取培养2d的单菌落，在含有50mg/L的卡那霉素和125mg/L的链霉素的Liquid Bacterium液体培养基中，250rpm下振荡培养，培养条件为26～30℃、pH值在6.8～7.4之间，黑暗，培养14～18小时后，将得到的悬浮培养物在固体平板培养基上划线培养，以进一步活化获得农杆菌单菌落。培养14～18小时后，将达到对数生长期的菌液置于离心管中，5000×g下离心5min收集菌体，最后将农杆菌悬浮于Murashige和Skoog液体培养基中稀释OD值为0.5～0.8；
(3)侵染和共培养：
将继代培养2-3天的胚性悬浮细胞用0.45mol/L的甘露醇在室温下进行高渗处理，将预处理过的悬浮细胞重新悬浮于制备好的菌液中，低速振荡10-15min，然后将菌液吸出，将侵染过的悬浮细胞重新悬浮于含有10-3.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸的Murashige和Skoog液体培养基中，进行共培养3-5天，培养条件为26～30℃，黑暗；
(4)选择培养：
将共培养后的胚性悬浮细胞用无菌水清洗2-3次，再用含有100-500mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog液体培养基抑菌处理12小时，将侵染过的胚性悬浮细胞悬浮于含有1.0-3.0mg/L 2.4-二氯苯氧乙酸、100-300mg/L羧苄青霉素以及50-75mg/L卡那霉素的Murashige和Skoog液体培养基中进行选择培养，培养条件为26～30℃，每日13小时及100～500Lx光照；
(5)转基因植株再生：
在选择培养基中，当胚性细胞团长至直径约0.5-2mm时，将其转移到含有相应抗生素的固体培养基上进行培养，使其增殖形成胚性愈伤组织和体细胞胚，培养条件为28℃、黑暗，转移6-8周后，将形成体细胞胚的胚性愈伤组织转移到添加0.5-1.5mg/L脱落酸、50-75mg/L卡那霉素以及100-300mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog固体培养基上，使体细胞胚成熟并发芽，培养条件为26～30℃、每日13小时、2000～4000Lx光照；4-6周后，将再生的小植株转移到添加50-75mg/L卡那霉素、100-300mg/L羧苄青霉素的Murashige和Skoog基本培养上，使其形成完整的甘薯转基因植株。
2、根据权利要求1所述的甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法，其特征是：该步骤(1)的茎尖组织为带有1-2片叶原基。
3、根据权利要求1所述的甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法，其特征是：该步骤(1)的2，4-二氯苯氧乙酸浓度为2.0mg/L。
4、根据权利要求1所述的甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法，其特征是：该步骤(2)的农杆菌选用LBA4404或EHA101。
5、根据权利要求1所述的甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法，其特征是：该步骤(3)要求使用悬浮培养12周内的悬浮培养物。侵染和共培养中，在进行高渗处理后，用0.16mol/L的CaCl2·2H2O清洗2次。
6、根据权利要求1所述的甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法，其特征是：该步骤(4)的羧苄青霉素的浓度为100mg/L，卡那霉素浓度为50mg/L；在选择培养基中悬浮培养物要每7天继代一次。
7、根据权利要求1所述的甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法，其特征是：在根癌农杆菌介导的甘薯遗传转化方法中，利用胚性悬浮细胞为转化受体，大大提高转化频率，从而提高甘薯的产量和品质。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB021292450A CN1168823C (zh) | 2002-09-27 | 2002-09-27 | 甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB021292450A CN1168823C (zh) | 2002-09-27 | 2002-09-27 | 甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1401765A true CN1401765A (zh) | 2003-03-12 |
| CN1168823C CN1168823C (zh) | 2004-09-29 |
Family
ID=4746163
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB021292450A Expired - Fee Related CN1168823C (zh) | 2002-09-27 | 2002-09-27 | 甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1168823C (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101831399A (zh) * | 2010-05-18 | 2010-09-15 | 华南师范大学 | 一种甘薯固体培养基的制备方法 |
| CN102864120A (zh) * | 2012-10-11 | 2013-01-09 | 顾向华 | 甘薯胚性细胞悬浮培养方法及通过该方法得到的胚性细胞 |
| CN103181323A (zh) * | 2011-12-29 | 2013-07-03 | 洛阳理工学院 | 一种蓝莓胚状体培养方法 |
| CN104885939A (zh) * | 2015-05-26 | 2015-09-09 | 福建农林大学 | 一种甘薯化学消毒组培方法 |
| CN107287147A (zh) * | 2017-06-29 | 2017-10-24 | 湖北省农业科学院粮食作物研究所 | 一种控制甘薯胚性愈伤组织增殖速度的方法 |
| CN109392721A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-03-01 | 江苏徐淮地区徐州农业科学研究所(江苏徐州甘薯研究中心) | 一种诱导甘薯植株再生的方法 |
| CN110616182A (zh) * | 2019-10-11 | 2019-12-27 | 中国科学院成都生物研究所 | 浮萍细胞的快速悬浮培养和高效遗传转化方法 |
| CN116602214A (zh) * | 2023-06-21 | 2023-08-18 | 普宁市农业科学研究所 | 一种甘薯植株再生的方法 |
-
2002
- 2002-09-27 CN CNB021292450A patent/CN1168823C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101831399A (zh) * | 2010-05-18 | 2010-09-15 | 华南师范大学 | 一种甘薯固体培养基的制备方法 |
| CN103181323A (zh) * | 2011-12-29 | 2013-07-03 | 洛阳理工学院 | 一种蓝莓胚状体培养方法 |
| CN102864120A (zh) * | 2012-10-11 | 2013-01-09 | 顾向华 | 甘薯胚性细胞悬浮培养方法及通过该方法得到的胚性细胞 |
| CN102864120B (zh) * | 2012-10-11 | 2014-11-05 | 顾向华 | 甘薯胚性细胞悬浮培养方法及通过该方法得到的胚性细胞 |
| CN104885939A (zh) * | 2015-05-26 | 2015-09-09 | 福建农林大学 | 一种甘薯化学消毒组培方法 |
| CN107287147A (zh) * | 2017-06-29 | 2017-10-24 | 湖北省农业科学院粮食作物研究所 | 一种控制甘薯胚性愈伤组织增殖速度的方法 |
| CN109392721A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-03-01 | 江苏徐淮地区徐州农业科学研究所(江苏徐州甘薯研究中心) | 一种诱导甘薯植株再生的方法 |
| CN109392721B (zh) * | 2018-12-20 | 2021-11-30 | 江苏徐淮地区徐州农业科学研究所(江苏徐州甘薯研究中心) | 一种诱导甘薯植株再生的方法 |
| CN110616182A (zh) * | 2019-10-11 | 2019-12-27 | 中国科学院成都生物研究所 | 浮萍细胞的快速悬浮培养和高效遗传转化方法 |
| CN116602214A (zh) * | 2023-06-21 | 2023-08-18 | 普宁市农业科学研究所 | 一种甘薯植株再生的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1168823C (zh) | 2004-09-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1042638A (zh) | 通过苗端转化植物的方法 | |
| CN101445808B (zh) | 以花生种子休眠芽胚轴为外植体的农杆菌介导的遗传转化方法 | |
| CN1198655A (zh) | 棉花植株的转化 | |
| CN1630723A (zh) | 树木的遗传转化方法 | |
| CN101044840A (zh) | 西洋杜鹃组培快速繁殖及试管开花的方法及所用的培养基 | |
| CN1168823C (zh) | 甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化方法 | |
| CN101715730B (zh) | 甘蔗新台糖10号组织培养快速繁殖方法 | |
| CN1024886C (zh) | 大量生产人工种用马铃薯(马铃薯微块茎)的方法 | |
| CN113584072A (zh) | 草莓的遗传转化体系构建方法 | |
| WO2009096900A1 (en) | Regeneration and mass propagation of jatropha curcas through somatic embryogenesis | |
| CN1240841C (zh) | 用新外植体进行农杆菌介导的棉花转化 | |
| CN1112843C (zh) | 香桂组织培养快速繁殖方法 | |
| CN1818065A (zh) | 棉花GhZFP1基因序列及其克隆与应用 | |
| CN1429904A (zh) | 一种对玉米进行基因转化的方法 | |
| CN1180681C (zh) | 马哈利樱桃砧木繁殖方法 | |
| CN1946849A (zh) | 植物悬浮培养物高效转化和再生的方法 | |
| CN1176576C (zh) | 澳洲青苹快速繁殖方法 | |
| CN1253576C (zh) | Acacia mangium的再生和遗传转化 | |
| CN1247080C (zh) | 一种建立草地早熟禾基因转化体系的方法 | |
| CN1168376C (zh) | 玉米植株再生方法以及用于该方法的培养基 | |
| CN106047921A (zh) | 一种二倍体草莓的转基因培养基及其转基因方法 | |
| CN1209007C (zh) | 制备无病毒植物的方法 | |
| CN112430620B (zh) | 根癌农杆菌介导的菊花‘神马’的转基因方法 | |
| CN1925740A (zh) | 利用愈伤组织诱导培育转基因辣椒的方法 | |
| CN1308454C (zh) | 利用农杆菌介导的培育籼稻转基因植株的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |