CN1379044A - 纯化茶多糖及提成方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种纯化茶多糖及提成方法,具体地说是一种纯化的茶多糖,其总糖含量达到≥70.00%,系将茶叶用水浸泡或提取,或者茶叶用有机溶剂或有机溶剂的水溶液浸泡或提取除去多酚类杂质后,滤渣用水提取;在上述二种水提取液中加入0.01－0.10%重量的蛋白消除剂,除去蛋白质等杂质后的水相液用超滤膜超滤,浓缩或/和干燥。该方法不仅简便、快速、高效、成本低、无污染、多糖纯度高,而且是一种适合工业生产的方法。

Description

纯化茶多糖及提成方法

技术领域本发明涉及一种纯化茶多糖及提成方法，具体地说是一种纯化的茶多糖，其总糖含量达到≥70.00％，系采用超滤技术提成的方法。

背景技术我国是茶的故乡，制茶、饮茶已有千年历史。人们对茶可以说是情有独钟。茶叶也是传统的保健饮品。科学的进步发展，也为茶叶的深度开发利用带来了契机。随着天然产物化学和药理学研究不断深入发展，发现多糖有许多生物活性和药理功能。从茶叶中提取的茶多糖也不例外。据报导：茶多糖自拢血栓，抗血凝，增加机体免疫力，降血糖，降血脂，拢动脉硬化，降血压，保护心血管，抗炎，抗癌等功效。同时，多糖是一种长链大分子聚合物，能防止结晶生存，防止离析，促进微胶囊和薄膜的形成，在乳化系统中能防止油滴的聚集，沉降等特性，对乳化起了稳定剂作用，因此，亦可作为医药辅料和食品添加剂。综观当前提取、纯化茶多糖的技术：1)使用蒸馏水、啤酒、柠檬酸、乙醇混合溶剂，对粗老茶进行分段浸提，浓缩，混合，干燥，提取茶多糖、多酚速溶粗晶。2)利用微波对茶叶进行处理，从茶叶中提取多糖、多酚类物质的方法。3)利用传统方法，如用溶剂提取，纤维素、凝胶柱分离等等。上述方法存在耗时、耗能，步骤较繁杂且成本高，不能快速、有效地从茶叶中提取高纯度的茶多糖。目前市场上提供的茶多糖产品其多糖含量低于40％。(如海南群力药业有限公司的茶多糖产品，含量为≥15％，售价￥150元/kg。)由于上述提取、纯化技术所存在的问题，因此需要进行改进。

发明内容本发明目的是提供一种纯化的茶多糖，其含量达到≥70.00％。本发明的另一目的是提供一种上述纯化茶多糖的纯化提取方法。是为了解决现有提取、纯化技术中所存在的问题，通过利用超过滤技术的特点：快速、高效、低成本、无污染地提取、纯化茶多糖的新方法。本发明提供的纯化茶多糖，其总糖含量达到≥70.00％。分析结果表明本发明的茶多糖由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖醛酸等单糖组成；其中的中性糖含量可达≥29.00％，糖醛酸的含量CUA≥42.00％。是一种既有酸性多糖又有中性多糖的杂多糖。本发明的纯化茶多糖的纯化提取方法，是采用将超过滤技术应用到茶多糖的提取、纯化工艺中，其特点在纯化茶多糖的工艺中尤为突出，操作简便，分离效果好，茶多糖含量高。因不引起任何化学变化，故不会改变茶多糖原有的结构和活性。超过滤是在常规微粒过滤基础上发展起来的细微粒子过滤新技术，是膜法分离的一种。通过孔径不同的半透膜，借助于外加压力所造成膜两侧，截留1-10nm粒子。超过滤技术具有设备简单、操作方便、不需加热或低温操作、不经任何化学物质处理、没有相的转移等优点，所以在化工、制药和食品等领域中可广泛应用。本发明的纯化茶多糖的纯化提取方法详述如下：将茶叶用水浸泡或提取，或者茶叶用有机溶剂或有机溶剂的水溶液浸泡或提取除去苯多酚等杂质后，滤渣用水提取；在上述水提取液中加入蛋白消除剂，除去蛋白质等杂质后的水相液用超滤膜超滤，浓缩或/和干燥。所述的茶叶经粉碎为粉末的为好，如粉碎至1-100目。在本发明的方法中，所述的浸泡或提取中，通常提高固液重量比、温度、时间均对提取有利，固液重量比为1∶1-10，但以1∶3-8为佳；浸泡或提取的时间为0.5-10小时；浸泡或提取的温度为室温至回流温度。进一步提高固液重量比、温度、时间均对提取没有影响。本发明中所述的有机溶剂可以是低分子的醇、酯、醚、腈、鹵代烷或芳烃以及石油醚等。如甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、甲酸甲酯、乙酸乙酯、乙腈、苯、甲苯等。从经济和安全考虑，采用乙醇及其水溶液为好，如50-98％的乙醇水溶液。在本发明的方法中，所述的水建议用去离子水。为使浸泡或提取完全，浸泡或提取可重复一至四次。在本发明的方法中，所述的蛋白消除剂可以是硫化铵、饱和氯化钠或钾、单宁酸或蛋白酶。在水提取液中加入0.01-0.10％重量的蛋白消除剂后，未经过滤或经过滤的水相液，直接进行超滤时。其中，建议采用离心过滤的办法.经过滤后的水相液(滤液)可以用有机溶剂萃取进一步除杂质后再浓缩或/和干燥将有利于纯化。在本发明的方法中水相液直接进行超滤时，采用截留分子量为2000-5000的超滤膜。但以截留分子量为3500-4500的超滤膜为好。超滤时的进出口压力差为0.05-0.80Mpa。截流量可为1-10.0ml/分。在本发明的方法中，所述的浓缩或/和干燥是指蒸馏、真空蒸馏、薄膜蒸馏、离心分离、冷冻干燥、粉末喷雾干燥等。从经济和产物活性考虑，建议采用冷冻干燥或粉末喷雾干燥。采用本发明的方法时，用超滤膜超滤后、浓缩或干燥前的溶液最好先进行浓缩，浓缩液用与水共溶的有机溶剂重沉淀，沉淀液离心分离，固相部分溶解后冻干。所述的与水共溶的有机溶剂可以是乙腈、乙醇、丙酮等。

附图说明：图1是本发明的茶多糖的红外分析光谱图；图2是本发明的茶多糖的气相色谱分析图；图3是各种标准糖的气相色谱分析图。

从图1可知本发明的茶多糖具有多糖类物质的特征。图2和图3表明本发明的茶多糖由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖醛酸等单糖组成。是一种既有酸性多糖又有中性多糖的杂多糖。从上可以看出，本发明方法提取、纯化茶多糖步骤简便，快速有效，容易操作，成本低廉，无环境污染，所得茶多糖含量较高大于70％，且以酸性多糖为主生理活性好。是一种适合工业生产的方法。

具体实施方式通过下述实施例将有助于理解本发明，但并不限制本发明的内容。

实施例1用武夷山岩茶100克，90％的乙醇500ml，浸提四小时，过滤，滤出乙醇液作茶多酚提取原料，滤渣重复浸提一次。重复浸提后的滤渣用700ml去离子水在搅拌条件下低温提取，同样条件重复三次。合并提取液，过滤，滤液适量浓缩，加入0.05％重量的蛋白消除剂硫化铵或饱和氯化钠或钾，放置0.5-10小时，离心去沉淀，溶液用石油醚萃取，水相液进行超滤，超滤膜的分子量为4000，超滤时的进出口压力差为0.1Mpa，截流量为1-10.0ml/分。截留液用一至五倍体积丙酮重沉淀，沉淀溶解后冷冻干燥。得产品1.70克。茶多糖含量72.01％。

实施例2将龙井茶10000克，用10000ml丙酮浸提1-4小时，过滤，滤渣用50000ml蒸馏水在搅拌条件下室温提取，同样条件重复二次，合并提取液，加入0.01-0.10％重量的蛋白消除剂单宁酸或蛋白酶50-200克，放置10小时，水相液进行超滤，超滤膜的分子量为3500，超滤时的进出口压力差为0.05-0.5Mpa，截流量为10ml/分。截留液用二倍体积乙腈重沉淀，沉淀溶解后粉末喷雾干燥。得产品180克。茶多糖含量71.01％。

实施例3将实施例1的茶多糖进行红外分析，谱图如图1所示，结果表明红外扫描在4000-650cm-1区间具有多糖类物质的特征，表现在3600-3200cm-1出现宽峰为O-H的伸缩振动，3000-2800cm-1有一弱峰为C-H吸收峰，这是糖类的特征峰，1665-1635cm-1的较宽吸收峰是糖的水化合物所特有，1400-1200cm-1的一些峰是C-H的变角振动，1100-1010cm-1区域的吸收峰表明含有糖甙键。将茶多糖组分进行分析：将茶多糖样品水解，5mg样品加入5ml2mol/L的三氟乙酸，封管，120℃水解，12小时。水解样品抽干，反复三次。然后样品硅醚化，气相色谱分析如图2。从图2的保留时间并对照各种标准糖的气相色谱分析图3，可以看出单糖组成为阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖醛酸等。从中可以得出本样品是种既有酸性多糖又有中性多糖的杂多糖。茶多糖的含量分析：通过对茶叶多糖提取物的单糖组成分析，我们发现该提取物水解液中同时含有中性单糖和糖醛酸，为了准确的测定中性糖和糖醛酸的含量，采用以下方法进行测量：首先，以半乳糖醛酸为标准，用间羟基联苯法来测定茶叶多糖提取物中糖醛酸的含量CUA(42.54％)；然后分别用葡萄糖和半乳糖醛酸为标准，用苯酚-硫酸法作标准曲线。并用苯酚-硫酸法测定我们的茶多糖样品的吸光度(AT)；根据半乳糖醛酸的苯酚-硫酸法的标准曲线和用间羟基联苯法测定的茶叶多糖提取物中糖醛酸的含量CUA，可以计算出糖醛酸在苯酚-硫酸法中对应的吸光度(AUA)；则中性糖对应的吸光度为(AT-AUA)，根据葡萄糖的苯酚-硫酸法的标准曲线，可以计算出茶多糖中的中性糖含量CNS.(29.47％)。则茶叶多糖中的总糖含量为(CUA+CNS)(42.54％+29.47％＝72.01％)。综上所述，本发明工艺步骤简便、快速、高效、成本低、无污染、多糖纯度高，属提取、纯化茶多糖的新方法。

Claims (10)

1.一种纯化茶多糖，其特征是总糖含量达到≥70.00％。

2.如权利要求1所述的茶多糖，其特征是所述的茶多糖是一种既有酸性多糖又有中性多糖的杂多糖。

3.如权利要求1所述的茶多糖，其特征是所述的总糖其中的中性糖含量≥29.00％，糖醛酸的含量≥42.00％。

4.如权利要求1所述的茶多糖的制备方法，其特征是将茶叶用水浸泡或提取，或者茶叶用有机溶剂或有机溶剂的水溶液浸泡或提取除去多酚类杂质后，滤渣用水提取；在上述二种水提取液中加入0.01-0.10％重量的蛋白消除剂，除去蛋白质等杂质后的水相液用超滤膜超滤，浓缩或/和干燥，所述的蛋白消除剂是硫化铵、饱和氯化钠或钾、单宁酸或蛋白酶，所述的浸泡或提取是重复一至四次。

5.如权利要求4所述的茶多糖的制备方法，其特征是所述的浸泡或提取中，通常提高固液重量比、温度、时间均对提取有利，固液重量比为1∶1-10，但以1∶3-8为佳；浸泡或提取的时间为0.5-10小时；浸泡或提取的温度为室温至回流温度。

6.如权利要求4所述的茶多糖的制备方法，其特征是水相液直接进行超滤时，超滤膜的截留分子量为2000-5000，超滤时的进出口压力差为0.05-0.80Mpa。

7.如权利要求4所述的茶多糖的制备方法，其特征是所述的浓缩或干燥是指蒸馏、真空蒸馏、薄膜蒸馏、离心分离、冷冻干燥、粉末喷雾干燥。

8.如权利要求4所述的茶多糖的制备方法，其特征是所述的浓缩或/和干燥是指蒸馏、真空蒸馏、薄膜蒸馏、离心分离、冷冻干燥、粉末喷雾干燥。

9.如权利要求4所述的茶多糖的制备方法，其特征是超滤后、浓缩或干燥前的溶液最好先进行浓缩，浓缩液用与水共溶的有机溶剂重沉淀，沉淀液离心分离，固相部分溶解后冻干。

10.如权利要求4所述的茶多糖的制备方法，其特征是所述的茶叶经粉碎至1-100目。

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