CN1367830A - 癌症相关抗原及其应用 - Google Patents

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Abstract

使用从癌症患者获取的抗血清,通过表达在肾癌细胞中的核酸文库的自身抗体筛查已鉴别出了癌症相关抗原。本发明涉及核酸和编码的多肽,它们是在患有肾癌的患者中表达的癌症相关抗原。本发明特别地提供了分离的核酸分子,含有这些分子的表达载体和用这些分子转染的宿主细胞。本发明还提供分离的蛋白质和肽,这些蛋白质和肽的抗体,和识别蛋白质和肽的细胞毒性T淋巴细胞。还提供了前述物质的片段,包括功能片段和变体。又提供了含有前述分子的试剂盒。本发明提供的分子可用来诊断,监测,研究或治疗特点在于表达一种或多种癌症相关抗原的病况。

Description

癌症相关抗原及其应用
本发明的领域
本发明涉及核酸和编码多肽，其是在患有各种癌症的患者中表达的癌症相关抗原。本发明还涉及结合核酸或多肽的试剂。核酸分子，由这些分子编码的多肽和由其衍生的肽，以及相关的抗体和溶细胞性T淋巴细胞，都是特别地有用于诊断和治疗中的。
本发明的背景
T细胞赖以识别外源物质的机理与癌症有关。对抗自身恶性黑素瘤抗原，睾丸抗原和黑素细胞分化抗原的大量溶细胞性T淋巴细胞(CTL)克隆体已有描述。在许多情况中，由这些克隆体识别的抗原已被定性。
使用自身CTL鉴别肿瘤抗原需要表达抗原的靶细胞能在体外培养，并且需要识别抗原表达细胞的自身CTL克隆体的稳定系能分离并能繁殖。虽然这种方法对于恶性黑素瘤抗原已很好地适用，但其他肿瘤种类，如上皮细胞癌，包括乳腺癌和结肠癌，已证实难以适用这种方法。
最近，Sahin等人描述了解决这种问题的其他方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92：11810-11813，1995)。依据这种方法，通过筛查从肿瘤细胞cDNA构建的表达文库，自身抗血清用来鉴别表达在癌细胞中的免疫原性蛋白质抗原。这样鉴别的抗原-编码克隆体已发现在获取抗血清的患者体内引起高滴定度的体液免疫反应。这样高滴定度的IgG反应说明所检测抗原的辅助性T细胞识别作用。然后这些肿瘤抗原能进行筛查I类和II类的MHC/HLA的存在和与CTL的反应性。
目前，有一种对其他癌症抗原的需要，来发展适用于患有不同癌症的更多患者的诊断和治疗方法。
本发明的概述
现在，使用从癌症患者获取的抗血清进行的自身抗体筛查已应用在肾癌中。多种癌症相关抗原已被鉴别出。本发明特别地提供了分离的核酸分子，含有这些分子的表达载体和用这些分子转染的宿主细胞。本发明还提供分离的蛋白质和肽，这些蛋白质的抗体和肽和识别蛋白质和肽的CTL。本发明还提供含有前述分子的试剂盒。前述物质可用来诊断，检测，研究，或治疗其特点在于表达一种或多种癌症相关抗原的病况。
在本发明之前，在过去20年中只有少量癌症相关基因已被鉴别出来。本发明涉及对几种基因的令人惊异的发现，一些是以前已知的，一些是以前不知道的，这些基因表达在患有癌症的个体中。这些个体都含有抗由这些基因编码的蛋白质(或其片段)的血清抗体。因此，异常的表达基因被宿主免疫系统识别，由此可形成诊断，检测和治疗的根据。
本发明涉及单一物质，多种不同的物质，甚至物质的大型系列和组合的应用。如单一基因，由基因编码的单一蛋白质，其单一功能片段，其单一抗原等可应用在本发明的方法和产品中。同样，这些物质的对、组甚至系列和任意地其他癌症相关抗原基因和/或基因产品可用来诊断，检测和治疗。对，组或系列可以包括2，3，4，5或更多个基因，基因产品，其片段或识别这些物质的试剂。多种这样的物质不仅可使用在检测，分类，定性和诊断异常表达这样基因的细胞，多种这样的物质还可用来诊断。使用多种这样的物质来预防，延迟发作，改善癌细胞的一个实施例，其预防性地或急剧地表达或将表达这样的基因。为了本发明的应用，基因，基因产品和识别基因和基因产品的物质的任何及所有组合可进行检测及鉴别。要阐述所有这样的组合要太长的篇幅；此领域中的技术人员，特别是看到包含在本文中的内容的技术人员，能方便地确定哪种组合适用哪种情况。
从下列讨论中将会清楚，本发明具有体内和体外的应用，包括治疗，诊断，检测和研究应用。本发明的一个方面是能指纹分析表达多种依据本发明鉴别的基因的细胞，如通过定量分析这样的基因产品的表达。这样的指纹分析将会定性，如癌症的阶段，癌症的种类，或甚至是在动物模型中一种治疗方法对癌症的效果。细胞还能进行筛查确定是否这样的细胞异常地表达了本发明鉴别的基因。
本发明在一个方面是诊断一种特点在于表达由核酸编码的癌症相关抗原前体的病变的方法。该方法包括将从受试体分离的生物样品与特异结合核酸分子，其表达产品，或其与MHC复合的表达产品的片段，较好地是HLA分子的试剂接触的步骤，其中核酸分子是NA组1核酸分子，和确定试剂和核酸分子，表达产品或表达产品的片段之间相互作用来确定病变的步骤。
在一个实施方案中，试剂是从下列试剂组中选取的，包括(a)含有NA组1核酸分子或其片段的核酸分子，(b)含有NA组3核酸分子或其片段的核酸分子，(c)含有NA组5核酸分子或其片段的核酸分子，(d)与NA组1核酸的表达产品，或其片段结合的抗体，(e)与NA组3核酸的表达产品，或其片段结合的抗体，(f)与NA组5核酸的表达产品，或其片段结合的抗体，(g)与MHC分子，较好地是HLA分子和NA组1核酸的表达产品片段的复合物结合的试剂，(g)与MHC分子，较好地是HLA分子和NA组3核酸的表达产品片段的复合物结合的试剂，和(i)与MHC分子，较好地是HLA分子和NA组5核酸的表达产品片段的复合物结合的试剂。
病变的特点在于表达多种癌症相关抗原前体。这样，诊断方法可以包括使用多种试剂，其中每种特异于不同的人类癌症相关抗原前体(包括至少一种本文公开的癌症相关抗原前体)，其中所说的多种试剂是至少2种，至少3种，至少4种，至少5种，至少6种，至少7种，至少8种，至少9种，或至少10种这样的试剂。
在每一个上述实施方案中，试剂可以特异于从下列组中选取的人类癌症相关抗原，包括乳腺癌，胃癌，肺癌，前列腺癌，肾癌，结肠癌，甲状腺癌，Hodgkin症，和肝癌癌症相关抗原前体。
在另一个实施方案中，本发明是确定病况的衰退，发展或发作的方法，病况的特点在于表达了异常量的由是NA组1分子的核酸分子编码的蛋白质。方法包括检测从患有或怀疑患有病况的受试体中获取的样品，检测从下列参数组选取的的参数，包括(i)蛋白质，(ii)从蛋白质衍生的肽，(iii)选择性结合蛋白质或肽的抗体，(iv)特异于从蛋白质衍生的肽和MHC分子的复合物的溶细胞性T细胞，来确定所说的病况的衰退，发展或发作。在一个实施方案中，样品是体液，身体渗出物或组织。
在另一个实施方案中，检测步骤包括将样品与从下列试剂组中选取的的可检测的试剂接触，包括(a)选择性结合(i)蛋白质的，或(ii)肽的抗体，(b)结合(iii)抗体的蛋白质或肽，(c)含有(iv)MHC分子和肽的复合物的细胞。在一个较好的实施方案中，抗体，蛋白质，肽或细胞用放射性标记或酶标记。在较好的实施方案中的样品检测的是肽。
依据另一个实施方案，核酸分子是下列中的一个：NA组3分子或NA组5分子。在另一个实施方案中，蛋白质是多种蛋白质，参数是多种参数，多种参数的每一种特异于多种蛋白质的一种不同的蛋白质。在某些实施方案中，蛋白质导航多种蛋白质，其中至少一种是激长素，剩余的是非-激长素癌症相关蛋白质，其中参数是多种参数，多种参数的每一种特异于多种蛋白质的一种不同的蛋白质。
本发明的另一个方面是人类受试体的药物制备品。药物制备品包括试剂，当给受试体服用时其选择性地增加人类癌症相关抗原和HLA分子的复合物的存在量，和药物可接受的载体，其中人类癌症相关抗原是由包含NA组1分子的核酸分子编码的人类癌症相关抗原前体的片段。在一个实施方案中，核酸分子是NA组3核酸分子。
在一个实施方案中，试剂包括多种试剂，其中每一种在受试体中选择性地增加HLA分子和不同人类癌症相关抗原的复合物。较好地，多种试剂是至少两种，至少三种，至少四种或至少五种不同的这样的试剂。
在某些实施方案中，试剂包括多种试剂，其中至少一种是激长素，剩余的是非-激长素癌症相关蛋白质，其中每一种在受试体中选择性地增加HLA分子和不同人类癌症相关抗原的复合物。
在另一个实施方案中，试剂是从下列试剂组中选取的，包括(1)含有人类癌症相关抗原的分离的多肽，或其功能变体，(2)可操作地与表达分离多肽的启动子结合的分离的核酸，或其功能变体，(3)表达分离的多肽的宿主细胞，或其变体，(4)多肽，或其功能变体和HLA分子的分离复合物。
试剂可以是表达分离多肽的细胞。在一个实施方案中，试剂是表达含有人类癌症相关抗原或其功能变体的分离多肽的细胞。在另一个实施方案中，试剂是表达含有人类癌症相关抗原或其功能变体的分离多肽的细胞，其中细胞表达结合多肽的HLA分子。细胞能重组地表达多肽和HLA分子的一种或重组地表达两种。在较好的实施方案中，细胞是非增殖性的。在其他较好的实施方案中，分离多肽是或包括激长素多肽。在另一个较好的实施方案中试剂是至少两种，至少三种，至少四种或至少五种不同的多肽。每种表示不同的人类癌症相关抗原或其功能变体。
在一个实施方案中，试剂是PP组2多肽。在其他实施方案中，试剂是PP组3多肽或PP组4多肽。
在一个实施方案中，本文所公开的每种药物制备品还包括辅剂。
依据本发明的另一个方面，提供了一种组合物，该组合物包括选择性地结合PP组1多肽的分离试剂。在独立的实施方案中，试剂选择性地与下列多肽中选取的多肽结合：PP组2多肽，PP组3多肽，PP组4多肽，PP组5多肽。在其他实施方案中，试剂是多种选择性地结合至少两种，至少三种，至少四种或至少五种不同的这样的多肽的不同试剂。在上述的每一个实施方案中，试剂可以是抗体。在一个较好的实施方案中，至少一种多肽是激长素或其片段。
在另一个方面，本发明是一种组合物，组合物是含有本发明上述组合物试剂和治疗或诊断试剂的缀合物的物质的组合物。较好地，缀合物是试剂和是抗癌试剂的诊断或治疗试剂的缀合物。
另一个方面，本发明是药物组合物，其包括从下列核酸组中选取的分离核酸分子，包括：(1)NA组1分子，和(2)NA组2分子，和药物可接受的载体。在一个实施方案中，分离核酸分子包括NA组3或NA组4分子。在另一个实施方案中，分离核酸分子包括至少两种编码不同多肽的分离核酸分子，每种多肽包括不同的癌症相关抗原。在较好的实施方案中，至少一种多肽是激长素多肽。
较好地，药物组合物还包括带有可操作地结合分离核酸分子的启动子的表达载体。在另一个实施方案中，药物组合物还包括重组地表达分离核酸分子的宿主细胞。
依据本发明的另一个方面，提供了药物组合物。药物组合物包括含有PP组1或PP组2多肽的分离多肽，和药物可接受的载体。在一个实施方案中，分离多肽包括PP组3或PP组4多肽。
在另一个实施方案中，分离多肽包括至少两种不同的多肽，每种包括至少一种是由本文所公开的NA组1分子编码的不同的癌症相关抗原。在独立的实施方案中，分离多肽是从下列中选取的：PP组3或其HLA结合片段和PP组5多肽或其HLA结合片段。
在一个实施方案中，本文所描述的每种药物组合物还包括辅剂。
另一个方面，本发明是包括NA组3分子的分离核酸分子。另一个方面，本发明是包括NA组4分子的分离核酸分子。
在另一个方面，本发明是从下列核酸分子组中选取的分离核酸分子，包括：(a)从包括下列SEQ ID NO号和包括SEQ IDNO.1-11和22-46的所有核酸序列的核酸分子组中选取的，长度足以在人类基因组中表现序列单一性，并鉴别编码人类癌症相关抗原前体的核酸的片段，(b)互补(a)的片段，只要片段包括与从下列序列组中选取的任何序列不一致的邻接核苷酸的序列，包括(1)具有表1 GenBank登记号码的序列，(2)互补(1)的序列，和(3)即(1)和(2)的片段。
在一个实施方案中，邻接核苷酸的序列是从下列序列组中选取的，包括：(1)至少两个与表1中的序列不一致的邻接核苷酸，(2)至少三个与表1中的序列不一致的邻接核苷酸，(3)至少四个与表1中的序列不一致的邻接核苷酸，(4)至少五个与表1中的序列不一致的邻接核苷酸，(5)至少六个与表1中的序列不一致的邻接核苷酸，或(6)至少七个与表1中的序列不一致的邻接核苷酸。
在另一个实施方案中，片段的大小是从下列组中选取的，包至少：8个核苷酸，10个核苷酸，12个核苷酸，14个核苷酸，16个核苷酸，18个核苷酸，20个核苷酸，22个核苷酸，24个核苷酸，26个核苷酸，28个核苷酸，30个核苷酸，50个核苷酸，75个核苷酸，100个核苷酸，200个核苷酸，1000个核苷酸和其间的每个整数长度。
在另一个实施方案中，分子编码多肽，多肽或其片段结合人类HLA受体或人类抗体。
本发明的另一个方面是含有可操作地结合启动子的上述本发明的分离核酸分子的表达载体。
依据一个方面，本发明是含有可操作地结合启动子的核酸的表达载体，其中核酸是NA组1分子或组2分子。在另一个方面，本发明是含有NA组1分子或组2分子和编码MHC，较好地是HLA分子的核酸的表达载体。
在另一个方面，本发明是用上述的本发明的表达载体转染的或转化的宿主细胞。
在另一个方面，本发明是用含有上述可操作地结合启动子的本发明的分离核酸分子的表达载体转染的或转化的宿主细胞，或用含有可操作地结合启动子的核酸及进一步含有编码HLA的核酸的表达载体转染的或转化的宿主细胞，其中核酸是NA组1或组2分子。
依据本发明的另一个方面，提供了由上述本发明的分离核酸分子编码的分离多肽。这些多肽包括PP组1-5多肽。本发明还包括免疫原性多肽片段。在一个实施方案中，片段，或部分片段，结合HLA或人类抗体。在另一个方面中，本发明提供了含有免疫原性激长素多肽片段的分离多肽。
另一方面，本发明包括结合，或其部分结合HLA或人类抗体的人类癌症相关抗原前体的分离片段，其中前体是由是NA组1分子的核酸分子编码的。在一个实施方案中，片段是含HLA的复合物的一部分。在另一个实施方案中，片段长度为8到12个氨基酸。在另一个实施方案中，本发明包括含有长度足以在人类基因组中表现序列单一性，并鉴别多肽是人类癌症相关抗原前体的分离多肽的多肽片段。
依据本发明的另一个方面，提供了检测存在癌症相关抗原前体表达的试剂盒。试剂盒包括一对分离核酸分子，其中每种必要地包括从下列分子组中选取的分子，包括(a)任何NA组1分子的核苷酸序列的12-32个核苷酸邻接片段和(b)(a)的互补片段，其中邻接片段是非重叠性的。在一个实施方案中，构建并排列分离核酸分子对以选择性地扩增是NA组3分子的分离核酸分子。较好地，核酸对扩增人类NA组3分子。
依据本发明的另一个方面，提供了治疗患有特点在于表达人类癌症相关抗原前体的病变的受试体的方法。该方法包括给受试体服用一定量的试剂的步骤，试剂选择性地增加受试体中HLA分子和人类癌症相关抗原的复合物的存在量，以有效地改善病变，其中人类癌症相关抗原是由从下列核酸组中选取的核酸分子编码的人类癌症相关抗原前体的片段，包括(a)含有NA组1核酸分子的核酸分子，(b)含有NA组3核酸分子的核酸分子，(c)含有NA组5核酸分子的核酸分子。
在一个实施方案中，病变的特点在于表达了多种人类癌症相关抗原前体，其中试剂是多种试剂，其中每种选择性地增加受试体中HLA分子和不同的人类癌症相关抗原的复合物的存在量。较好地，多种试剂是至少2种，至少3种，至少4种，或至少5种这样的试剂。在一个较好的实施方案中，至少一种人类癌症相关抗原是激长素或其片段。
在另一个实施方案中，试剂是从下列多肽组中选取的的多肽，包括PP组1，PP组2，PP组3，PP组4，和PP组5多肽。
在另一个实施方案中，病变是癌症。
依据另一个方面，本发明是治疗患有特点在于在受试体的细胞中表达癌症相关抗原前体的病况的受试体方法。该方法包括步骤(i)从受试体移出含有免疫反应性细胞的样品，(ii)在适于产生抗是前体片段的癌症相关抗原的溶细胞性T细胞的条件下，将含有免疫活性细胞的样品与宿主细胞接触，(iii)将溶细胞T细胞引入到受试体中，以有效裂解表达人类癌相关抗原的细胞的量，其中宿主细胞用含有可操作地结合启动子的分离核酸分子，从下列核酸分子组中选取的分离核酸分子的表达载体转染或转化，核酸组包括NA组1，NA组2，NA组3，NA组4，NA组5。
在一个实施方案中，宿主细胞重组地表达结合人类癌症相关抗原的HLA分子。在另一个实施方案中，宿主细胞内源性地表达结合人类癌症相关抗原的HLA分子。
另一个方面，本发明包括治疗患有特点在于在受试体的细胞中表达癌症相关抗原前体的病况的受试体的方法。方法包括步骤(i)鉴别由与所说的病况有关的细胞表达的核酸分子，其中所说的核酸分子是NA组1分子；(ii)用从下列核酸组中选取的核酸转染宿主细胞，包括(a)鉴别的核酸分子，(b)包括编码癌症相关抗原的片段的鉴别的核酸的片段，(c)(a)和(b)的缺失，置换或添加，(d)(a)，(b)，或(c)的简并；(iii)培养所说的转染宿主细胞以表达转染的核酸分子；(iv)将一定量所说的宿主细胞或其提取物引入到受试体中以有效地增加对与病况相关的受试体细胞的免疫反应。较好地，抗原是人类抗原，受试体是人类。在某些较好的实施方案中，核酸分子是激长素核酸分子。
在一个实施方案中，方法还包括步骤(a)鉴别MHC分子，其呈递部分核酸分子的表达产品，其中宿主细胞表达如在(a)中所鉴别的相同的MHC分子，其中宿主细胞呈递核酸分子的表达产品的MHC结合部分。
在另一个实施方案中，方法还包括治疗宿主细胞以使它们成为非-增殖性的步骤。
在另一个实施方案中，免疫反应包括B-细胞反应和T-细胞反应。较好地，反应是T细胞反应，其包括产生对呈递核酸分子的部分表达产品的宿主细胞或受试体的表达人类癌症相关抗原的细胞特异的溶细胞性T-细胞。
在另一个实施方案中，核酸分子是NA组3分子。
本发明的另一个方面是治疗或诊断或检测患有特点在于表达异常量的由是NA组1分子的核酸分子编码的蛋白质的病况的受试体的方法。方法包括给受试体服用治疗病况有效的量的与蛋白质或从其中衍生的肽特异结合的抗体的步骤，抗体与治疗上有用的试剂偶联。
在一个实施方案中，抗体是单克隆抗体，较好地，单克隆抗体是嵌合抗体或是人源化抗体。
在另一个方面中，本发明是治疗特点在于在受试体内表达异常量的由是NA组1核酸分子的核酸分子编码的蛋白质的病况的方法。方法包括给受试体服用有效量的上述本发明的至少一种药物组合物，以在受试体内预防，延迟病况发作，或抑制病况的步骤。在一个实施方案中，病况是癌症。在另一个实施方案中，方法包括首先鉴别受试体在组织中表达异常量的蛋白质的步骤。
在另一个方面，本发明是治疗患有特点在于表达异常量的由是NA组1核酸分子的核酸分子编码的蛋白质的病况的受试体的方法。方法包括步骤(i)鉴别从表达异常量的蛋白质的受试体中获取的细胞；(ii)分离细胞样品；(iii)培养细胞；(iv)将有效量的细胞引入到受试体中以刺激对抗细胞的免疫反应。
在一个实施方案中，方法包括在将细胞引入到受试体前，使细胞成为非-增殖性的步骤。
在另一个方面，本发明是治疗特点在于异常表达由是NA组1核酸分子的核酸分子编码的蛋白质的病理细胞状况的方法。方法包括给需要的受试体服用有效量的抑制蛋白质表达或活性的试剂的步骤。
在一个实施方案中，试剂是选择性地与蛋白质结合的抑制性抗体，其中抗体是单克隆抗体，嵌合抗体，人源化抗体或它们的片段。在另一个实施方案中，试剂是选择性地结合编码蛋白质的核酸分子的反义核酸分子。在另一个重要的实施方案中，核酸分子是NA组3核酸分子。在其他较好的实施方案中，核酸分子是激长素核酸分子。
在另一个方面中，本发明包括物质的组合物，物质应用在刺激对抗由是NA组1分子的核酸分子编码的多种蛋白质的免疫反应中。组合物是从蛋白质的氨基酸序列中衍生出的多种肽，其中肽与存在于表达异常量的蛋白质的细胞表面上的MHC分子结合。在较好的实施方案中，至少一种蛋白质是激长素。
在一个实施方案中，至少部分多种肽与MHC分子结合，并产生对其的溶细胞性反应。在另一个实施方案中，物质的组合物包括辅剂。在另一个实施方案中，辅剂是皂角苷，GM-CSF，或白细胞介素。在另一个实施方案中，组合物还包括至少一种用来刺激对至少一种不是由是NA组1分子的核酸分子编码的蛋白质的免疫反应的肽，其中至少一种肽与一种或多种MHC分子结合。
依据另一个方面，本发明是选择性地结合下列物质的复合物的分离的抗体，(i)从由是NA组1分子的核酸分子编码的蛋白质衍生的肽和(ii)肽与其结合的MHC分子以形成复合物，其中分离的抗体不与(i)或(ii)单独结合。
在一个实施方案中，抗体是单克隆抗体，嵌合抗体，人源化抗体或它们的片段。
本发明还涉及使用基因，基因产品，它们的片段，与它们结合的试剂等制备药物。具体药物是治疗癌症的药物，更具体的药物是治疗乳腺癌，肺癌，肾癌，结肠癌，前列腺癌或胃癌的药物。本发明的详细描述
在上面的概述中和随继的描述中，提供了序列清单。清单独立地包括每种单一序列，一起形成部分相同基因的两种或多种序列，涉及不同基因的两种或多种序列的任何组合，如果每种和每个组合分别地并具体地列举时，包含并多达清单上的总数。同样，当提及片段大小时，其指包括提及的最小片段到序列全长(小于一个核苷酸或氨基酸，因此其是片段)的范围，当具体列举时每种和每个片段长度都包括。因此，如果片段长度在10到15之间，那么它明确地意指长度10，11，12，13，14或15。
概述和权利要求书提及了抗原前体和抗原。如在概述和权利要求书中所使用的，前体实质上是分离的DNA的编码区域编码的全长蛋白质，抗原是与MHC，较好地是HLA复合的肽，其作为部分复合物参与免疫反应。这样的抗原通常有9个氨基酸的长度，尽管这个长度可能很短。
如本文所使用的，受试体是人类，非-人类灵长类动物，牛，马，猪，绵羊，山羊，狗，猫或啮齿类动物。在所有实施方案中，较好的是人类癌症抗原和人类受试体。
在一个方面中，本发明涉及使用患有肾癌受试体的自身抗血清克隆编码人类癌症相关抗原前体的cDNA。表示依据本文所描述的方法鉴别的基因的克隆体的序列在所附序列表中列出。对于前述，可以看出由于在研究的数据库中没有发现编码区域的核苷酸或氨基酸同源性，所以一些克隆体可完全认为是新型的，其他克隆体也是新型的，但对存储在数据库(大部分EST序列)中的序列有一些同源性。然而，全基因序列不是预先知道的。在一些情况中，没有功能可推测到，在其他情况中，即使一个功能可推测到，但不知道基因与癌症相关。在所有情况中，不知道或没有推测到，基因编码与从自身血清中获取的抗体反应的癌症抗原。通过与核酸和蛋白质数据库的比较分析克隆体序列确定，还有其他克隆体令人惊异地与其他预先-克隆的基因密切相关。这些相关基因的序列也在序列表中列出。前述基因作为由癌症患者的免疫系统识别的编码抗原的属性当然是未预料的。
因此，在一个方面中，本发明涉及癌症相关抗原多肽，编码这些多肽的基因，前述物质的功能修饰和变体，前述物质的有用片段，以及与其相关的诊断和治疗法。
本发明的癌症相关抗原核酸的同系物和等位基因可通过传统的技术鉴别。这样，本发明的一个方面是编码癌症相关抗原前体的那些核酸序列。因为本申请包括很多序列，提供下列表以鉴别在权利要求书和简述中讨论的不同组的序列。核酸序列
NA组1.(a)在严紧条件下与包括从下列核酸序列组中选取的核酸序列的分子杂交的核酸分子，核酸组包括SEQ ID NO.1-11和22-46中的核酸序列，和编码癌症相关抗原前体的核酸分子，
(b)编码不同的癌症相关抗原前体的缺失，添加和置换，
(c)由于遗传密码的简并，与(a)或(b)的核酸分子在密码子序列上不同的核酸分子，和
(d)对(a)，(b)或(c)的互补体。
NA组2.NA组1的片段，其编码与MHC分子结合或部分与之结合以形成自身抗体或淋巴细胞识别的复合物的多肽。
NA组3.NA组1的子集，其中核酸序列是从下列组中选取的
(a)先前不知道的编码人类癌症相关抗原前体的人类核酸(即SEQ ID NO.1-11中的核酸序列)，
(b)编码不同癌症相关抗原前体的缺失，添加和置换，
(c)由于遗传密码的简并，与(a)或(b)的核酸分子在密码子序列上不同的核酸分子，和
(d)对(a)，(b)或(c)的互补体。
NA组4.NA组3的片段，其编码与MHC分子结合或部分与之结合以形成自身抗体或淋巴细胞识别的复合物的多肽。
NA组5.NA组1的子集，包括与同种异型癌症抗血清反应的人类癌症相关抗原。多肽序列
PP组1.由NA组1编码的多肽。
PP组2.由NA组2编码的多肽。
PP组3.由NA组3编码的多肽。
PP组4.由NA组4编码的多肽。
PP组5.由NA组5编码的多肽。
如本文所使用的“严紧条件”是指此领域熟悉的参数。核酸杂交参数可在汇编这样的方法的参考文献中找到，如分子克隆：实验室手册，J.Sambrook等人编辑，第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，1989，或分子生物学的当前技术，F.M.Ausubel等人编辑，John Wiley & Sons有限公司，纽约。更具体地，本文所使用的严紧条件是指，如在杂交缓冲液(3.5×SSC，0.02％Ficoll，0.02％聚乙烯吡咯烷酮，0.02％牛血清清蛋白，2.5mM NaH2PO4(PH7)，0.5％SDS，2mM EDTA)中在65℃杂交。SSC是0.15M氯化钠/0.15M柠檬酸钠，pH 7；SDS是十二烷基硫酸钠；EDTA是乙二胺四乙酸。杂交后，冲洗DNA在上面转化的膜，如在室温用2×SSC，然后在温度低于68℃用0.1-0.5×SSC/0.1×SDS冲洗。
还有其他可以使用的产生相同严紧性程度的条件，试剂等。技术人员会熟悉这样的条件，因此这些条件在本文没有给出，然而可以理解认为，技术人员将能以允许清楚地鉴别本发明的癌症相关抗原核酸的同系物和等位基因的方式操作这些条件(如使用较低的严格条件)。技术人员也熟悉筛查表达这样的分子的细胞和文库的方法，然后这样的分子可被常规分离，接着分离相关的核酸分子并测序。
通常，同系物和等位基因一般与癌症相关抗原核酸和多肽分别有至少75％的核苷酸一致性和/或至少90％的氨基酸一致性，在一些情况中，有至少90％的核苷酸一致性和/或至少95％的氨基酸一致性，在其他情况中，有至少95％的核苷酸一致性和/或至少99％的氨基酸一致性。同系物可使用能通过国际互联网(ftp：/ncbi.nlm.nih.gov/pub/)获得的NCBI(Bethesda，Maryland)研究的多种公开可获得的软件工具计算得到。工具示例包括在http：//www.ncbi.nlm.nih，gov上可获得的BLAST系统，使用缺省设置。使用MacVector序列分析软件(牛津分子集团)也可获得Pairwise和ClustalW排序(BLOSUM30基质设置)以及Kyte-Doolittle亲水性分析。前述核酸的Watson-Crick互补体也包括在本发明中。
在筛查癌症相关抗原基因中，可使用前述条件，以及放射性探针实施Southern印迹法。在冲洗DNA最终在其上被转化的膜后，将膜置于X-射线膜的反面以检测信号。在筛查癌症相关抗原核酸表达中，使用前述条件(参看实施例)可在样品上实施Northern印迹杂交，样品是从乳腺癌患者或从怀疑患有特点在于表达乳腺癌相关抗原基因的病况的受试体中获得。扩增技术如使用与存在序列杂交的引物的聚合酶链反应也可用来检测癌症相关抗原基因或其表达。
肾癌相关基因与SEQ ID NO.1-11和22-3 5相对应。激长素癌症相关序列与SEQ ID NO.36-46相对应。对于本文所公开的诊断方法，较好的的癌症相关抗原是发现与同种异型抗原反应的那些抗原(即NA组5)。对于诊断编码的多肽(如蛋白质)，肽和其抗血清也是较好的。
本发明还包括含有天然物质中存在的密码子的可置换密码子简并核酸。如丝氨酸残基是由密码子TCA，AGT，TCC，TCG，TCT和AGC编码。六个密码子的每一种是从编码丝氨酸残基来看是等同物。因此，对此领域中的技术人员很显然的是任何编码丝氨酸的核苷酸三联体可用来指导蛋白质合成设备，在体内或体外，来将丝氨酸残基掺入到延长的乳腺癌相关抗原多肽中。同样地，编码其他氨基酸残基的核苷酸三联体包括但不限于：CCA，CCC，CCG和CCT(脯氨酸密码子)；CGA，CGC，CGG，CGT，AGA和AGG(精氨酸密码子)；ACA，ACC，ACG和ACT(苏氨酸密码子)；AAC和AAT(天冬酰胺密码子)；和ATA，ATC和ATT(异亮氨酸密码子)。其他氨基酸残基同样地可由多种核苷酸序列编码。因此，由于遗传密码的简并，本发明包括与在密码子序列中的生物分离核酸不同的简并核酸。
本发明还包括包括添加，置换和缺失一个或多个核苷酸的修饰核酸分子。在较好的实施方案中，这些修饰核酸分子和/或它们编码的多肽保持未修饰核酸分子和/或多肽的至少一种活性或功能，如抗原性，酶活性，受体结合，通过肽结合MHCI类和II类分子形成复合物，等。在某些实施方案中，修饰核酸分子编码修饰多肽，较好地，如本文其他地方所描述的，多肽含有保守性氨基酸置换。修饰核酸分子在结构上与未修饰核酸分子相关，在较好的实施方案中，修饰核酸分子在结构上充分与未修饰核酸分子相关，以使修饰和未修饰核酸分子在此领域中的技术人员已知的严紧条件下杂交。
如，编码含有单一氨基酸转变的多肽的修饰核酸分子可以制备。这些核酸分子的每一种可含有除了对应本文所描述的遗传密码简并的核苷酸转变外的一个，两个或三个核苷酸置换。同样，编码含有两个氨基酸转变的修饰核酸分子可制备获得，其包括如2-6个核苷酸转变。此领域中的技术人员可方便地设想到多种类似这些的修饰核酸分子，包括如，在编码氨基酸2和3，2和4，2和5，2和6等的密码子中的核苷酸的置换。在前述实施例中，两种氨基酸的每种组合包括在修饰核酸分子，以及编码氨基酸置换物的核苷酸置换物的设置中。如此领域中的技术人员方便地设想到的，其他编码含有其他置换(即，3个或更多个)，添加或缺失(如，通过引入终止密码子或剪接位点)的多肽的核酸分子，也可制备并包括在本发明中。任何前述核酸或多肽可通过常规试验检测与本文所公开的核酸和/或多肽的结构相关性或活性。
本发明还提供癌症相关抗原核酸序列或其互补体的分离的单一性片段。单一性片段是大型核酸的“特征”片段。如，它是足够长的片段以确保其精确序列在上述癌症相关抗原核酸外的人类基因组的分子(和人类等位基因)中不能被发现。此领域中的技术人员可仅使用常规试验来确定是否一个片段在人类基因组中是单一性的。然而，单一性片段不包括完全由列在表1中的任何GenBank登记号的核苷酸序列组成的片段，或由其他预先公开的序列组成的片段，对于列在各自优先文件中的序列到优先文件提交日止，或对于第一次列在本申请中的重叠本发明的序列的序列到本申请的提交日止。
完全由在前述GenBank储存库中描述的序列组成的片段是不包括只有本发明的序列才有的任何核苷酸的片段。因此，单一性片段必须含有不同于GenBank中序列或其片段的原样序列的核苷酸序列。相对于GenBank序列，这种不同可以是添加，缺失或置换，或它可以是与GenBank序列完全不同的序列。
在Southern和Northern印迹测试中单一性片段可用作探针，来鉴别这样的核酸，或可用在扩增测试中，如使用PCR的测试中。如此领域中的技术人员所了解的，大型探针如200，250，300个或更多个核苷酸对某些应用是较好的，如Southern和Northern印迹测试。而小型片段对如PCR应用是较好的。单一性片段也可用来制备融合蛋白，以产生抗体或确定多肽片段的结合，或产生免疫测定组成。同样，单一性片段可用来制备癌症相关抗原多肽的非融合片段，如可用来制备抗体，及使用在免疫测试中。单一性片段进一步可用作反义分子以抑制癌症相关抗原核酸和多肽的表达，特别是用作治疗目的，如在下面描述中所阐述的。
此领域中的技术人员会认识到，单一性片段的大小将取决于在遗传密码中的其保持性。因此，癌症相关抗原序列和其互补体的一些区域将需要较长的区段以保持单一性，而其他仅需要较短的区段，通常在12个到32个核苷酸之间(如12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31和32个或更多个碱基长度，直到公开序列的全长)。如上面所提及的，这种公开包括每种序列的每个片段，开始于第一个核苷酸，第二个核苷酸等，直到终点前8个核苷酸，对于每个序列终止于从核苷酸8，9，10的任何地方，直到最后一个核苷酸(如上所述，只要序列是单一性的)。
事实上，新型癌症相关抗原核酸，或其互补体的多肽编码区域的任何区段，也就是长度为18个或更多个核苷酸将是单一性的。此领域中的技术人员对选择这样的序列的方法是很精通的，通常根据单一性片段选择性地将有兴趣的序列从片段的人类基因组中的其他序列中区分出来的能力，一般对了解数据库的人是全部所需的了，尽管可能实施体外证实性杂交和测序分析。
特别较好的包括编码一系列抗原表位，称为“多表位”的核酸。抗原表位能以顺序的或重叠的方式排列(参看，如Thomson等人，15：1280-1284，1997)，有或没有天然侧翼序列，如果需要可通过不相关接头序列分离。处理多表位产生通过免疫系统产生免疫反应来识别的个体抗原表位。
因此，从含有由本文所公开的一种核酸编码的氨基酸序列的多肽衍生的肽，并且其通过MHC分子呈递并通过CTL或T辅助性淋巴细胞识别，可与从一种或多种其他癌症相关抗原(如通过制备杂交核酸或多肽)获得的肽结合，以形成“多表位”。两种或多种肽(或编码肽的核酸)可从本文所描述的肽中选出，或它们可包括预先已知的癌症相关抗原的一种或多种肽。可服用以诱导或增强免疫反应的示例癌症相关肽抗原是从肿瘤相关基因衍生的，并编码蛋白质，包括：MAGE-A1，MAGE-A2，MAGE-A3，MAGE-A4，MAGE-A5，MAGE-A6，MAGE-A7，MAGE-A8，MAGE-A9，MAGE-A10，MAGE-A11，MAGE-A12，MAGE-A13，GAGE-1，GAGE-2，GAGE-3，GAGE-4，GAGE-5，GAGE-6，GAGE-7，GAGE-8，BAGE-1，RAGE-1，LB33/MUM-1，PRAME，NAG，MAGE-B2，MAGE-B3，MAGE-B4，酪氨酸酶，脑糖原磷酸化酶，Melan-A，MAGE-Cl，MAGE-C2，NY-ESO-1，LAGE-1，SSX-1，SSX-2(HOM-MEL-40)，SSX-4，SSX-5，SCP-1和CT-7。参看，如PCT申请公开号No.WO96/10577。其他实例对此领域中的普通技术人员是熟知的(如，参看Coulie，干细胞13；396-403，1995)，并且如本文公开的其他实例一样以类似的方式应用在本发明中。此领域中的技术人员依据分子生物学的标准方法可制备含有一种或多种肽及一种或多种前述癌症相关肽的多肽，或制备编码这样多肽的核酸。
这样，多表位是在不同排列(如多联的，重叠的)中能结合在一起的两个或多个潜在免疫原性的肽或免疫反应刺激肽的组。多表位(或编码多表位的核酸)可在标准免疫接种技术中服用，如，给动物，以测定多表位刺激，增强和/或促进免疫反应的有效性。
肽可直接结合或通过使用侧翼序列形成多表位，使用多表位作为疫苗在此领域中是众所周知的(参看，如Thomson等人，Proc.Acad.Natl.Sci.USA 92(13)：5845-5849，1995；Gilbert等人，自然生物技术，15(12)：1280-1284，1997；Thomson等人，免疫学期刊，157(2)：822-826，1996；Tam等人，J.Exp.Med.171(1)：299-603，1990)。如Tam阐述在鼠模型中，包括MHCI类和II类结合表位的多表位成功地产生抗体和保护性免疫。Tam还指出含有表位“行”的多表位经处理产生通过MHC分子呈递的并通过CTL识别的个体表位。这样，可制备含有不同量表位和组合的多表位，并测试CTL的识别作用和增加免疫反应的功效。
已知肿瘤表达一系列肿瘤抗原，系列中只有某些亚集可在任何给定的患者的肿瘤中表达。可制备多表位，其对应表示在具体患者中表达的肿瘤排斥抗原亚集的表位的不同组合。还可制备反射较宽光谱的已知要由肿瘤种类表达的肿瘤排斥抗原的多表位。多表位可作为多肽结构引入到需要这种治疗的患者中，或通过使用此领域已知的核酸分送系统(参看，如Allsopp等人，欧洲免疫学期刊，26(8)：1951-1959，1996)。腺病毒，痘病毒，类颗粒Ty-病毒，腺伴随病毒，质粒，细菌等可用在这样的分送系统中。人们可在鼠模式中测试多表位分送系统以确定分送系统的功效。系统也可在人类临床测试中检测。
在人类HLA I类分子呈递从癌症相关核酸衍生的肿瘤排斥抗原的情况中，表达载体也可包括编码呈递从这些核酸和多肽衍生出的任何具体肿瘤排斥抗原的HLA分子的核酸序列。或者，编码这种HLA分子的核酸序列可包括在独立的表达载体中。在载体含有两种编码序列的情况中，单载体可用来转染异常表达任何一个的细胞。编码癌症相关抗原前体和呈递它的HLA分子的序列可包含在独立的表达载体上，表达载体可共转染。癌症相关抗原前体编码序列可单独使用，当如，宿主细胞已经表达呈递从前体分子衍生出的癌症相关抗原的HLA分子时。当然，对具体能使用的宿主细胞没有限制。由于如果需要含有两种编码序列的载体可使用在任何抗原呈递细胞中，所以癌症相关抗原前体的编码基因可使用在没有表达呈递癌症相关抗原的HLA分子的宿主细胞中。并且，不含细胞的转录系统可用来替代细胞。
如上面所提及的，本发明包括选择性地结合编码癌症相关抗原多肽的核酸分子的反义寡核苷酸，以减少癌症相关抗原的表达。在事实上的任何需要减少癌症相关抗原表达的医疗状况中，如在治疗癌症中都是需要的。这也可用在减少一种或多种癌症相关抗原表达效果的体外或体内检测中。
如本文所使用的，“反义寡核苷酸”或“反义”描述了寡核苷酸，其是在生理条件下与含有具体基因的DNA杂交或与该基因的mRNA转录物杂交的寡核糖核苷酸，寡脱氧核糖核苷酸，修饰的寡核苷酸，或修饰的寡脱氧核糖核苷酸，从而抑制该基因的转录和/或mRNA的翻译。由于与靶基因或转录物杂交，设计反义分子以干扰靶基因的转录或翻译。此领域中的技术人员会认识到，反义寡核苷酸的确切长度和其与靶的互补性程度取决于所选取的的具体靶，包括靶的序列和含有该序列的具体碱基。较好的是反义寡核苷酸构建或排列成在生理条件下与靶选择性结合，即在生理条件下与靶序列杂交比与靶细胞中的任何其他序列杂交要充分多。根据编码乳腺癌相关抗原的核酸序列，或根据等位基因或同源基因组和/或cDNA序列，此领域中的技术人员可方便地选取并合成任何多种适合使用在本发明中的反义分子。为了充分选择性的和有效的抑制作用，尽管在某些情况中短到7个碱基的修饰寡核苷酸已成功地用作反义寡核苷酸(Wagner等人，自然生物技术，14：840-844，1996)，但这样的反义寡核苷酸应包括至少10个，更好地，至少15个与靶互补的连续碱基。更好地，反义寡核苷酸包括20-30个碱基的互补序列。尽管对基因或mRNA转录物的任何区域反义的寡核苷酸可以选取，但在较好的实施方案中，反义寡核苷酸对应N-末端或5’上游位点如翻译起始位点，转录起始位点或启动子位点。此外，3’-非翻译区域可被靶中。靶中mRNA剪接位点也已使用在此领域中，但如果可置换的mRNA剪接出现，就不那么好了。此外，较好地，反义被靶中到预期没有mRNA二级结构(参看，如Sainio等人，细胞分子神经生物学，14(5)：439-457，1994)以及预期没有结合蛋白质的位点中。最后，尽管所列序列是cDNA序列，但此领域中的普通技术人员可方便地获得与癌症相关抗原的cDNA对应的基因组DNA。因此，本发明还提供了与编码癌症相关抗原的核酸对应的基因组DNA互补的反义寡核苷酸。同样地，不用过分试验，可获得等位基因或同源cDNA和基因组DNA的反义。
在一套实施方案的中，本发明的反义寡核苷酸可以由“天然”脱氧核糖核苷酸，核糖核苷酸或其任何组合组成。也就是，一个天然核苷酸的5’末端和另一个天然核苷酸的3’末端可共价结合。如在自然系统中，通过磷酸二酯核苷酸间连键。这些寡核苷酸可通过此领域认可的人工实施或使用自动缓冲器方法制备。它们也可通过载体重组制备。
然而，在较好的实施方案中，本发明的反义寡核苷酸也可包括“修饰的”寡核苷酸。即，寡核苷酸可通过多种不阻碍它们与它们的靶目标杂交并增强它们的稳定性或寻靶作用或另外增强它们的治疗有效性的方式修饰。
如本文所使用的“修饰的寡核苷酸”描述了寡核苷酸，其中(1)至少两个它的核苷酸是通过合成的核苷酸间连键共价结合的(即，一个核苷酸5’末端和另一个核苷酸3’末端间的不是磷酸二酯键的连键)和/或(2)通常与核酸不相关的化学基团也共价附着在寡核苷酸上。较好的合成核苷酸间连键是硫代磷酸酯，磷酸烷基酯，二硫代磷酸酯，磷酸酯，硫代磷酸烷基酯，氨基磷酸酯，氨基甲酸酯，碳酸盐，磷酸三酯，乙酰胺酯，羟甲基酯和肽。
“修饰的寡核苷酸”也包括带有共价修饰碱基和/或糖的寡核苷酸。如，修饰的寡核苷酸包括含有共价附着在不是3’位置上的羟基基因及不是5’位置上的磷酸酯基团的小分子量有机基团的主链糖的寡核苷酸。因此，修饰的寡核苷酸可以包括2’  -O-烷基化核糖基团。此外，修饰的寡核苷酸可以包括糖如阿拉伯糖置换核糖。因此，本发明考虑包括含有在生理条件下与编码乳腺癌相关抗原多肽的核酸互补或杂交的修饰反义分子，以及药物可接受的载体的药物制备品。反义寡核苷酸可作为部分药物组合物服用。这样的药物组合物可以包括反义寡核苷酸和此领域已知的任何标准生理学上和/或药物可接受的载体。组合物应是无菌的，并在适合给患者服用的单位重量或单位体积中含有治疗上有效量的反义寡核苷酸。“药物可接受的”意指不干扰活性成分的生物活性的有效性的无-毒性物质。“生理学上可接受的”是指与生物系统如细胞，细胞培养物，组织或生物体相容的无-毒性物质。载体的特性取决于服用途径。生理学上和药物可接受的载体包括稀释剂，填充剂，缓冲液，稳定剂，增溶剂，和其他此领域中众所周知的物质，如下面所描述的。
如本文所使用的，“载体”可以是任何为了在不同遗传环境之间转运或者为了在宿主细胞中表达，所需序列可通过限制和连接反应插入到其中的多种核酸。尽管RNA载体也可使用，但载体通常由DNA组成的。载体包括，但不限于，质粒，噬菌粒和病毒基因组。克隆载体是能自主复制或整合到宿主细胞的基因组中的载体。进一步其特点在于有载体能以可确定的方式切入到其中的及所需DNA序列能连接到其中的一个或多个内切核酸酶限制性位点，以使新重组的载体保持其在宿主细胞中复制的能力。在质粒的情况中，当质粒在宿主细菌中拷贝数增加时，所需序列的复制可发生许多次，或在宿主通过有丝分裂繁殖前每个宿主中所需序列的复制只发生一次。在噬菌体的情况中，复制主动发生在裂解期或被动发生在溶源期。表达载体是所需DNA序列可通过限制和连接插入到其中以使其可操作地结合调节序列并能表达为RNA转录物的载体。载体可进一步包括一种或多种适于使用在鉴别已被或未被载体转化或转染的细胞中的标记序列。标记包括，如，编码增加或减少对抗体或其他化合物抗性或敏感性的蛋白质的基因，编码其活性通过此领域中众所周知的标准测试法可检测的酶(如β-半乳糖苷酶，荧光素酶或碱性磷酸酶)的基因，显然影响转化的或转染的细胞，宿主，菌落或噬菌斑的基因(如绿荧光蛋白)。较好的载体是能自主复制和表达存在于它们可操作地结合的DNA区段中的结构基因产物的载体。
如本文所使用的，当编码序列和调节序列在调节序列的影响和控制下，以设置编码序列的表达和转录的方式共价结合时，编码序列和调节序列可描述成“可操作地”结合。如果将编码序列翻译到功能蛋白质中是所需的，如果对5’调节序列中的启动子的诱导作用导致编码序列的转录，并且如果两个DNA序列间的连键的性质不会(1)导致引入移码突变，(2)干扰启动子区域定向编码序列转录的能力，或(3)干扰对应RNA转录物被翻译成蛋白质的能力，两个DNA序列可描述成可操作地结合。因此，如果启动子区域能影响DNA序列的转录，以使产物转录物能翻译成所需蛋白质或多肽，那么启动子区域会可操作地结合编码序列。
基因表达所需的调节序列的精确性质随着物种或细胞种类的变化而变化，但由于需要包括分别涉及转录和翻译启动的5’非-转录和5’非-翻译序列，如TATA框，加帽序列，CAAT序列等应是相同的。特别地，这样的5’非-转录调节序列将包括含有转录控制可操作结合基因的启动子序列的启动子区域。如需要，调节序列也可包括增强子序列或上游激活物序列。本发明的载体可任意地包括5’前导序列和信号序列。适当载体的选择和设计在此领域中普通技术人员的能力和判断力范围内。
含有所有表达必要因子的表达载体可购到并对此领域中的技术人员是已知的。参看如Sambrook等人。分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，1989。通过将编码乳腺癌相关抗原多肽或片段或其变体的异源DNA(RNA)引入到细胞中来遗传工程地设计细胞。在转录因子的可操作控制下将异源DNA(RNA)安置，以使得异源DNA在宿主细胞中表达。
将mRNA在哺乳动物细胞中表达较好的系统是如含有可选择性标记，如具有G418抗性(以便对稳定转染的细胞种系的选择)和人类巨细胞病毒(CMV)增强子-启动子序列的基因的pRc/CMV(可从Invitrogen，Carlsbad，CA获得)的系统。此外，适于在灵长类或犬科细胞种系中表达的是pCEP4载体(Invitrogen)，其含有复制的Epstein Barr病毒(EBV)源，促使保持质粒为多拷贝染色体外因子。另一个表达载体是含有多肽延伸因子1α的启动子的pEFBOS质粒，其有效地刺激体外转录。质粒由Mishizuma和Nagata(Nuc.Acids Res.18：5322，1990)描述，其在转染试验中的应用由如Demoulin(分子细胞生物学，16：4710-4716，1996)公开。另一个较好的表达载体是腺病毒，由Stratford-Perricaudet描述，其缺失E1和E3蛋白质(J.Clin.Invest.90：626-630，1992)。使用腺病毒作为抗原表达的腺.P1A重组体由Warnier等人公开，在鼠中真皮下注射免疫接种抗P1A(Int.J.Cancer，67：303-310，1996)。其他分送核酸的载体在下面提供。
本发明还包括所谓的表达试剂盒，其使技术人员制备所需表达载体或载体。这样的表达试剂盒至少包括载体的个别部分和一种或导致前面讨论的癌症相关抗原核酸分子。如所需可加入其他组分，只要前面提及的核酸分子是所需的就可加入。本发明还包括扩增癌症相关抗原核酸的试剂盒，至少包括一对与癌症相关抗原核酸杂交的扩增引物。较好地，引物的长度为12-32个核苷酸，并且是非-重叠的以预防形成“引物-二聚体”。一个引物与癌症相关抗原核酸的一条链杂交，第二个引物与癌症相关抗原核酸的互补链杂交，以允许癌症相关抗原核酸扩增的排列。选择适当的引物对在此领域中是标准化的。如选择在设计用作这种目的的计算机程序的协助下作出，任意地接着测试引物的扩增特异性和有效性。
本发明还允许在细胞和动物中构建癌症相关抗原基因“剔除物”，提供研究癌症和对癌症的免疫系统反应方面的物料。
本发明还提供由前述癌症相关抗原核酸编码的分离多肽(包括完整蛋白质和部分蛋白质)。这样的多肽可单独使用，或作为融合蛋白以产生抗体，作为免疫测试或诊断测试的组成或作为治疗物。癌症相关抗原多肽可从包括组织或细胞匀浆物的生物样品中分离出来，也可通过构建适于表达系统的表达载体，将表达载体引入到表达系统中，并分离重组表达蛋白质，来重组表达在多种原核和真核表达系统中。短多肽，包括抗原性肽(如为免疫识别，在细胞表面上由MHC分子呈递的肽)也可使用完善建立的肽合成法化学合成。
通常，癌症相关抗原多肽的单一性片段具有如上讨论的有关核酸的单一性片段的属性和特点。此领域中的技术人员将认识到，单一性片段的大小取决于多种因素，如是否片段包括部分保守蛋白质。因此，癌症相关抗原的一些区域将需要较长的区段以成为单一性的，而其他区域将仅需要较短区段，通常为5到12个氨基酸(如5，6，7，8，9，10，11或12或更多氨基酸，包括直到全长的每个整数)。
多肽的单一性片段是保持独特多肽功能性能的片段。能保持在多肽的单一性片段中的功能性能包括与抗体的相互作用，与其他多肽或其片段的相互作用，选择性地结合核酸或蛋白质，和酶活性。一个重要的活性是能作为鉴别多肽的特征。另一个是能与HLA复合，并促进人类的免疫反应。此领域中的技术人员精通选取单一性氨基酸序列的方法，一般根据单一性片段能选择性地将有兴趣的序列从非-家族成员中区别出来。将片段的序列与已知数据库中的序列比较通常就是所需的。
本发明包括上述癌症相关抗原多肽的变体。如本文所使用的，癌症相关抗原多肽的“变体”是含有对癌症相关抗原多肽的初级氨基酸序列一个或多个修饰的多肽。产生癌症相关抗原变体的修饰可通过对癌症相关抗原多肽(1)减少或消除癌症相关抗原多肽的活性；(2)增强癌症相关抗原多肽的特性，如在表达系统中的蛋白质稳定性或蛋白质-蛋白质结合的稳定性；(3)提供癌症相关抗原多肽的新型活性或特性，如添加抗原性表位或添加可检测组成；或(4)提供等同物或更好地与HLA分子结合的物质来实施。对癌症相关抗原多肽的修饰一般对编码癌症相关抗原多肽的核酸实施，并且可包括缺失，点突变，截短，氨基酸置换和氨基酸或非-氨基酸组成的添加。或者，修饰可直接对多肽实施，如通过切割，添加接头分子，添加可检测组成，如生物素，添加脂肪酸等。修饰也包括含有全部或部分癌症相关抗原氨基酸序列的融合蛋白质。此领域中的技术人员会熟悉预测在蛋白质序列中的一个变化对蛋白质构象的影响的方法，这样，就能依据已知方法“设计”变体癌症相关抗原多肽。这种方法的一个实施例由Dahiyat和Mayo在科学278：82-87，1997中描述，其中蛋白质可从头设计。这种方法可适用在已知的蛋白质中以改变仅部分多肽序列。通过使用Dahiyat和Mayo的计算方法，可提议癌症相关抗原多肽的特异变体，并测试以确定是否变体保持了所需的构象。
通常，变体包括特异修饰以改变与其所需的生理活性不相关的多肽属性的癌症相关抗原多肽。如，半胱氨酸残基能被置换或缺失，与预防不需要的二硫键。同样地，能改变某些氨基酸，通过消除表达系统中蛋白酶的蛋白酶解作用以增强乳腺癌相关抗原多肽的表达(如在酵母表达系统中的二元氨基酸残基，其中表现KEX2蛋白酶活性)。
编码癌症相关抗原多肽的核酸的突变较好地保持编码序列的氨基酸读框，较好地不在核酸中产生可能杂交形成二级结构，如发夹结构或环的区域，其对变体多肽的表达是有害的。
通过选择氨基酸置换，或通过对在编码多肽的核酸中选取位点的随机诱变制备突变体。然后将变体多肽表达并测试一种或多种活性，以确定哪种突变体提供了具有所需属性的变体多肽。可对对于多肽的氨基酸序列来说是沉默的，但其在具体宿主中提供了较好的翻译密码子的变体(或对非-变体癌症相关抗原多肽)制备进一步的突变体。对如E.coli中的核酸翻译较好的密码子对此领域中的普通技术人员是众所周知的。也可对癌症相关抗原基因或cDNA克隆体的非编码序列制备其他突变体，以增强多肽的表达。癌症相关抗原多肽的变体活性可通过将编码变体癌症相关抗原多肽的基因克隆到细菌或哺乳动物表达载体中，将载体引入到适当的宿主细胞中，表达变体癌症相关抗原多肽，并测定如本文所公开的癌症相关抗原多肽的功能性能来检测。如，变体癌症相关抗原多肽可通过与在实施例中公开的自身或同种异型血清反应来测试。其他变体多肽的制备有利于其他活性的测试，如对此领域中的普通技术人员是已知的。
本领域技术人员还将认识到，在癌症相关抗原多肽中可实施保守性氨基酸置换，以提供前述多肽的功能等同物变体，即变体保持癌症相关抗原多肽的功能性能。如本文所使用的，“保守性氨基酸置换”是指不改变氨基酸置换在其中实施的蛋白质的相对电荷或大小特性的氨基酸置换。变体可依据此领域中的普通技术人员已知的改变多肽序列的方法制备，如在汇编这样的方法的文献中发现的，如分子克隆：实验室手册，J.Sambrook等人编辑，第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，1989，或分子生物学的当前技术，F.M.Ausubel等人编辑，John Wiley &Sons有限公司，纽约。癌症相关抗原多肽的功能等同物变体的示例包括本文公开的蛋白质的氨基酸序列中的保守性氨基酸置换。氨基酸保守性置换包括在下列组中的氨基酸间实施的置换：(a)M，I，L，V；(b)F，Y，W；(c)K，R，H；(d)A，G；(e)S，T；(f)Q，N；和(g)E，D。
如，根据确定从癌症相关抗原多肽衍生的肽是由MHC分子呈递的并由CTL识别(如在实施例中所描述的)，人们可以对肽的氨基酸序列实施保守性氨基酸置换，特别在认为不是与MHC分子的直接接触点的残基上。如，鉴别HLAII类结合肽的功能变体的方法在Strominger和Wucherpfennig的出版的PCT申请(PCT/US96/03182)中提供。在合成前，使用如D’Amaro和Drijfhout(D’Amaro等人，人类免疫学，43：13-18，1995；Drijfhout等人，人类免疫学，43：1-12，1995)描述的计算机程序，可测定带有一个或多个氨基酸置换的肽与已知HLA/MHC基元的一致性。然后当结合MHC时，可测试置换肽的与MHC的结合以及由CTL的识别作用。这些变体也可测试改进的稳定性，具体地使用在疫苗组合物中。
产生癌症相关抗原多肽功能性等同物变体的，癌症相关抗原多肽的氨基酸序列中的保守性氨基酸-置换通常通过改变编码癌症相关抗原多肽的核酸来实施。这样的置换可通过多种此领域中的普通技术人员已知的方法来实施。如依据Kunkel的方法，氨基酸置换可通过PCR-定向突变，位点-定向诱变来实施(Kunkel，Proc.Nat.Acad，Sci.U.S.A.82：488-492，1985)，或通过编码癌症相关抗原多肽的基因的化学合成来实施。当氨基酸置换对癌症相关抗原多肽的小型单一性片段实施时，如由自身或同种异型血清或溶细胞性T淋巴细胞识别的抗原表位，置换可通过直接合成肽来实施。癌症相关抗原多肽的功能等同物片段的活性可通过将编码改变的癌症相关抗原多肽的基因克隆到细菌或哺乳动物表达载体中，将载体引入到适当的宿主细胞中，表达改变的癌症相关抗原多肽，检测如上所述的癌症相关抗原多肽的功能性能来测定。化学合成的肽可直接测定功能，如结合抗血清识别相关抗原的功能。
如本文所描述的，本发明具有多种应用，一些在本文的其他地方描述。首先，本发明提供癌症相关抗原蛋白质分子的分离。对技术实施者众所周知的多种方法可以使用，以获得分离的癌症相关抗原分子。多肽可通过层析法或免疫识别从天然产生多肽的细胞中提纯。或者，表达载体可引入到细胞中以促成产生多肽。在另一种方法中，mRNA转录物可微注射或用其他方式引入到细胞中以促成产生编码多肽。在不含细胞的提取物如网状细胞裂解物系统中mRNA的翻译也可用来制备多肽。此领域中的技术人员也可方便地遵从分离癌症相关抗原多肽的已知方法。这些方法包括，但不限于，免疫层析法，HPLC，大小排阻层析法，离子交换层析法和免疫-亲合层析法。
对癌症相关抗原基因的分离和鉴别使技术人员有可能来诊断特点在于表达癌症相关抗原的病变。这些方法包括测定一种或多种癌症相关抗原核酸，和/或编码的癌症相关抗原多肽和/或从其衍生的肽的表达。在前面的情况中，这样的测定可通过任何标准核酸测定测试法来实施，包括聚合酶链反应，或使用标记的杂交探针测定法。在后面的情况中，这样的测定可通过筛查患者抗血清的多肽识别作用来实施。
本发明还使分离结合如本文描述的癌症相关抗原的蛋白质成为可能，包括癌症相关抗原的抗体和细胞结合伙伴。其他应用在本文中进一步描述。
在某些实施方案中，本发明还提供从癌症相关抗原多肽衍生的“显性失活”多肽。显性失活多肽是蛋白质的失活变体，通过与细胞机的相互作用，其将活性蛋白从与细胞机的相互作用中转移出来，或与活性蛋白竞争，以降低活性蛋白的作用。如，结合配体但不传导对结合配体反应的信号的显性失活受体可降低配体表达的生物学作用。同样，通常与靶蛋白质相互作用但不磷酸化靶蛋白质的显性失活催化灭活激酶可降低对细胞信号反应的靶蛋白质的磷酸化作用。同样地，结合基因控制区域中启动子位点但不增加基因转录的显性失活转录因子可通过占据启动子结合位点但不增加转录来降低正常转录因子的作用。
在细胞中表达显性失活多肽的最终结果是降低活性蛋白质的功能。此领域中的普通技术人员可使用标准诱变技术以产生一种或多种显性变体多肽来评定蛋白质显性失活变体的潜能。如，给定本文描述的肾癌相关抗原的内容，特别是与已知的具有已知活性的蛋白质相似的蛋白质，此领域中的普通技术人员可通过位点-特异诱变，扫描诱变，部分基因缺失或截短等来修饰癌症相关抗原的序列。参看如，美国专利No.5,580,723和Sambrook等人，分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，1989。然后技术人员可测试在选取物中被诱变多肽种群的缩小和/或这样活性的保持力。产生并测试蛋白质的显性失活变体的类似方法对此领域中的普通技术人员是显而易见的。
本发明还包括试剂，如结合癌症相关抗原多肽的多肽。这样的结合试剂可使用在如筛查测试中，以检测存在或不存在癌症相关抗原多肽和癌症相关抗原多肽的复合物和它们的结合伙伴，并可使用在提纯技术方案中以分离癌症相关抗原多肽和癌症相关抗原多肽的复合物和它们的结合伙伴。这样的试剂还可用来抑制癌症相关抗原多肽的天然活性，如通过与这些多肽结合。
因此，本发明包括肽结合试剂，其可以是抗体或具有选择性地结合癌症相关抗原多肽的能力的抗体片段。抗体包括依据传统方法制备的多克隆和单克隆抗体。
有意义的是，如此领域中众所周知的，抗体分子仅一小部分，互补位，涉及抗体与其表位的结合(通常参看，Clark.W.R.(1986)，现代免疫学的试验基础，Wiley & Sons有限公司，纽约；Roitt，I.(1991)，基础免疫学，第7版，Blackwell科学出版社，牛津)。如pFc’和Fc区域是补体级联的效应子但与抗原结合无关。从中pFc’区域已被酶促裂解的抗体，或已制备的没有pFc’区域的抗体，指定F(ab’)2片段，保持完整抗体的两个抗原结合位点。同样地，从中Fc区域已被酶促裂解的抗体，或已制备的没有Fc区域的抗体，指定Fab片段，保持完整抗体分子的一个抗原结合位点。并且，Fab片段包括共价结合抗体轻链和表示Fd的部分抗体重链。Fd片段是抗体特异性的主要决定簇(在没有改变抗体特异性的情况下，单一Fd片段可能与多达十种不同的轻链有关)，并且Fd片段在分离中保持表位结合能力。
在抗体的抗原结合部分内，如此领域中众所周知的，有互补决定区域(CDR)，其直接与抗原的表位相互作用，和构架区域(FR)，其保持互补位的三级结构(参看，Clark，1986；Roitt，1991)。在IgG免疫球蛋白的重链Fd片段和轻链中，有四个构架区域(FR1到FR4)分别被三个互补决定区域(CDR1到CDR3)分离开。CDR，具体地是CDR3区域，更具体地是重链CDR3，是决定抗体特异性的主要因素。
目前，此领域中已完善建立的是，哺乳动物抗体的非-CDR区域能用共特异性或异特异性抗体的相似区域替换而保持源抗体的表位特异性。这一点在研究和使用其中非-人类CDR共价结合人类FR和/或Fc/pFc’区域以产生功能抗体的“人源化”抗体中得到明确的证实。参看，如美国专利No.4,816,567，5,225,539，5,585,089，5,693,762和5,859,205。
因此，如PCT国际公开号WO92/04381公开制备和使用人源化鼠科RSV抗体，其中至少部分鼠科FR区域已被人源FR其他替换。这样的抗体，包括具有抗原结合能力的完整抗体的片段常常称位“嵌合”抗体。
因此，如对此领域中的技术人员是显而易见的，本发明还提供了F(ab’)2，Fab，Fv和Fd片段；其中Fc和/或FR和/或CDR1和/或CDR2和/或轻链CDR3区域已被同源人类或非-人类序列替换的嵌合抗体；其中FR和/或CDR1和/或CDR2和/或轻链CDR3区域已被同源人类或非-人类序列替换的嵌合F(ab’)2片段抗体；其中FR和/或CDR1和/或CDR2和/或轻链CDR3区域已被同源人类或非-人类序列替换的嵌合Fab片段抗体；其中FR和/或CDR1和/或CDR2区域已被同源人类或非-人类序列替换的嵌合Fd片段抗体。本发明还包括所谓的单链抗体。
因此，本发明涉及特异地结合癌症相关抗原多肽的多种大小和种类的多肽，和癌症相关抗原多肽和它们的结合伙伴的复合物。这些多肽也可从不是抗体技术的源获得。如这样的多肽结合试剂可通过简并可方便地制备成溶液，固定化的或噬菌体展示文库的肽文库提供。组合文库也可用含有一种或多种氨基酸的肽合成。文库进一步可用肽和非-肽合成组成合成。
噬菌体展示在鉴别依据本发明的结合肽中特别有效。简单地，人们可制备噬菌体文库(使用如m13，fd或λ噬菌体)，使用传统方法展示从4个到约80个氨基酸残基的插入。如插入可以表示完全的简并或偏性列阵。然后人们可选择带有噬菌体的结合癌症相关抗原多肽的插入。通过重选择结合癌症相关抗原多肽的噬菌体的几个周期重复这个过程。重复循环导致带有噬菌体的特殊序列增加。可实施DNA序列分析以鉴别表达多肽的序列。结合癌症相关抗原多肽的序列的最小线性部分可以确定。使用含有部分或全部最小线性部分和其一种或多种另外的简并残基上游或下游的偏性文库人们可以重复这些过程。因此，本发明的癌症相关抗原多肽，或其片段，可用来筛查肽文库，包括噬菌体展示文库，可用来鉴别和选择本发明的癌症相关抗原多肽的肽结合伙伴。如所描述的，这样的分子可用来进行筛查测试，进行提纯方案，进行直接干扰癌症相关抗原的功能及进行对此领域中的普通技术人员显而易见的其他目的应用。
如本文所描述的，前面的抗体和其他结合分子可用来，如鉴别表达蛋白质的组织或提纯蛋白质。抗体也可依据标准偶联方法与特异诊断标记试剂偶联来成像表达癌症相关抗原的细胞和组织，或与治疗上有用的试剂偶联。诊断试剂包括，但不限于，硫酸钡，iocetamic acid，iopanoic acid，ipodate钙，3，5-双(乙酰氨基)-2，4，6-三碘苯甲酸钠，3，5-双(乙酰氨基)-2，4，6-三碘苯甲酸镁，碘葡酰胺，tyropanoate钠，和放射诊断试剂包括正电子发射剂，如氟-18和碳-11，γ发射器剂如碘-123，technitium-99m，碘-131和铟-111，核磁共震的核素如氟和钆。使用在本发明中的其他诊断试剂对此领域中的普通技术人员是显而易见的。如本文所使用的，“治疗上有用的试剂”包括任何治疗分子，其可按所需地选择性地靶中表达本文所公开的一种癌症抗原的细胞，包括抗肿瘤试剂，放射性碘标记的化合物，毒素，其他抑制细胞生长或溶细胞性药物，等等。抗肿瘤治疗试剂是众所周知的，包括氨基导眠能，硝基咪唑硫嘌呤，硫酸博来霉素，白消胺，卡氮芥，苯丁酸氮芥，顺氯氨铂，环磷酰胺，环胞菌素，cytarabidine，氮烯唑胺，放线菌素D，道诺霉素，亚德里亚霉素，红豆杉醇，表鬼臼毒亚乙基吡糖甙，氟二氧嘧啶，干扰素-α，环己亚硝脲，mercaptopuine，氨甲叶酸，对氯苯二氯乙烷，盐酸甲基苄肼，硫鸟嘌呤，硫酸长春碱，硫酸长春新碱。其他抗肿瘤试剂包括在抗肿瘤试剂(PaulGalabresi和Bruce A，Chabner)，第52章，和其绪论中公开的试剂，Goodman和Gilman的“治疗试剂的药理学基础”，英文版，1990年，McGraw-Hill有限公司(健康专业处)，1202-1263中公开的试剂。毒素可以是蛋白质如商陆抗病毒蛋白质，霍乱毒素，百日咳毒素，蓖麻毒素，白树毒素，相思豆毒素，白喉外毒素，或假单胞菌外毒素。毒素组成也可以是高能-发射放射性核素如钴-60。
在前述方法中，依据本发明制备的抗体较好地对本文所描述的肾癌相关抗原/MHC复合物特异。
当本文使用“病变”时，是指表达癌症相关抗原的任何病理状况。这样的病变所实施例是癌症，具体是实施例是乳腺癌，结肠癌，胃癌，肾癌，前列腺癌和肺癌。
使用在本文所描述的多种方法中的组织和/或细胞的样品可通过标准方法获得，如组织的活组织切片检查，包括打孔活组织切片检查和刮细胞，和通过吸入或其他方法收集血液或其他体液。
在本发明的某些实施方案中，免疫反应性细胞样品是从受试体中移出的。“免疫反应性细胞”是指在适当的刺激作用下能培养成免疫细胞(如B细胞，辅助性T细胞或溶细胞性T细胞)的细胞。因此，免疫反应性细胞包括CD34+造血干细胞，未成熟的T细胞和未成熟的B细胞。当需要制备识别癌症相关抗原的溶细胞性T细胞中，可在适于制备，分化和/或选取溶细胞性T细胞的条件下，将免疫反应性细胞与表达癌症相关抗原的细胞接触；在暴露给抗原的条件下T细胞前体分化成溶细胞性T细胞与免疫系统的克隆选择是相似的。
基于公开内容，根据受试体的免疫系统的反应对一些治疗方法作出假设，致使抗原呈递细胞裂解，如呈递一种或多种癌症相关抗原的乳腺癌细胞。一种这样的方法是给怀疑带有异常细胞表型的受试体服用对癌症相关抗原/MHC复合物特异的自身CTL。在体外培养这样的CTL在此领域中的普通技术人员的能力范围内。T细胞分化方法的一个实施例在国际申请号PCT/US96/05607中公开。通常，将从受试体中获得的样品细胞，如血液细胞与呈递复合物并能刺激CTL扩增的细胞接触。靶细胞可以是转染子，如COS细胞。这些转染子在它们的表面呈递所需的复合物，当与有兴趣的CTL组合时，刺激它的扩增。COS细胞可广泛地获得，如其他适用的宿主细胞。CTL克隆体的具体制备在此领域中是众所周知的。然后将克隆延伸自身CTL给受试体服用。
选择抗原特异CTL克隆体的另一种方法目前已有描述(Altman等人，科学274：94-96，1996；Dunbar等人，当前生物学，8：413-416，1998)，其中MHCI类分子/肽复合物的荧光团四聚物用来检测特异CTL克隆体。简单地，在存在β2-微球蛋白和结合I类分子的肽抗原的情况下，溶解的MHCI类分子折叠。提纯后，将MHC/肽复合物提纯并用生物素标记。通过以摩尔比或4∶1将生物素化的肽-MHC复合物与标记的抗生素蛋白(藻红蛋白)混合形成四聚体。然后将四聚体与CTL源接触如周边血液或淋巴节。四聚体结合识别肽抗原/MHCI类复合物的CTL。四聚体结合的细胞可通过荧光激活细胞分选仪分选以分离反应性CTL。然后，分离的CTL可在体外延伸以作本文所描述的应用。
为了详细阐述治疗方法，称位过继转移法(Greenberg，免疫学期刊，136(5)：1917，1986；Riddel等人，科学257：238，1992；Lynch等人，欧洲免疫学期刊，21：1403-1410，1991；Kast等人，细胞59：603-614，1989)，将呈递所需复合物的细胞(如树状细胞)与CTL组合，产生对其特异的CTL扩增。然后将扩增的CTL给患有细胞异常症的受试体服用，细胞异常症特点在于有某些呈递特别复合物的异常细胞。然后CTL裂解异常细胞，从而获得所需的治疗目的。
前述治疗法假设，至少一些受试体的异常细胞呈递了有关的HLA/癌症相关抗原复合物。这一点可方便地证实，因为此领域非常熟悉鉴别呈递特别HLA分子的细胞的方法，以及如何鉴别表达相关序列，即癌症相关抗原序列的DNA的细胞的方法。通过前述筛查方法，呈递相关复合物的细胞一旦被鉴别，它们可与从患者中获得的样品组合，其中样品含有CTL。如果呈递复合物细胞被混合的CTL样品裂解，那么就能假定存在癌症相关抗原，那么受试体就是上述治疗方法的适当候选人。
过继转移不是适用于本发明的唯一的治疗形式。CTL也能使用多种方法在体内刺激。一种方法是使用非-扩增细胞表达复合物。使用在这种方法中的细胞可以是正常表达复合物的细胞，如扩散的肿瘤细胞或用一种或两种呈递复合物需要的基因(即抗原性肽和呈递HLA分子)转染的细胞。Chen等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：110-114，1991)示例了这种方法，演示在治疗法中使用转染的表达HPVE7肽的细胞。多种细胞种类可以使用。同样地，携带一种或两种有兴趣的基因的载体也可使用。病毒或细菌载体特别推荐。如编码癌症相关抗原多肽或肽的核酸可以可操作地与在某些组织或细胞种类中定向表达癌症相关抗原多肽或肽的启动子和增强子序列结合。核酸可掺入到表达载体中。表达载体可以是未修饰的染色体外核酸，或构建或修饰以使外源核酸，如本文其他地方所描述的编码癌症相关抗原的核酸插入的质粒或病毒基因组。编码癌症相关抗原的核酸也可插入到逆转录病毒基因组中，从而促使核酸整合到靶组织或细胞种类的基因组中。在这些系统中，有兴趣的基因由微生物携带，如痘苗病毒，痘病毒，单纯疱疹病毒，逆转录病毒或腺病毒，和事实上感染宿主细胞的物质。产生呈递有兴趣的复合物所细胞可通过自身CTL识别，然后扩增。
通过将癌症相关抗原或其刺激性片段与辅剂组合以在体内促使掺入到抗原呈递细胞中，也可获得相同的效果。虽然可能存在肽不需要进一步处理，可处理癌症相关抗原多肽以产生HLA分子的肽伙伴。通常，受试体可接受真皮下注射有效量的癌症相关抗原。初始剂量可接着加强剂量，遵照此领域中的免疫接种技术标准。较好的癌症相关抗原包括发现与同种异型癌症抗血清反应的抗原，如在下面实施例中所演示的。
本发明涉及使用本文所公开的多种物质“免疫接种”受试体或作为“疫苗”。如本文所使用的，“免疫接种”或“疫苗接种”意指增加或激活对抗原的免疫反应。其不是要求消除或根除病况，而是预期临床上对增强对抗原的免疫反应起到促进作用。使用癌症相关抗原核酸，通常已接受的动物模型可用来测试抗癌免疫作用。如，人类癌症细胞可引入到鼠中以产生肿瘤，一种或多种癌症相关抗原核酸可通过本文所描述的方法给药。可评定对癌细胞的影响(如减小肿瘤大小)作为癌症相关抗原核酸免疫作用有效性的量度标准。当然，使用更传统的方法测试前述动物模型的免疫作用，包括服用一种或多种癌症相关抗原多肽或从其衍生的肽，任意地组合一种或多种辅剂和/或细胞因子以推进免疫反应。免疫接种的方法，包括配方疫苗组合物和选择剂量，服用途径和服用方案(如初始和一种或多种的加强剂量)在领域中是众所周知的。测试以可以在人类中实施，其中在末点可测试存在增强量的抗携带抗原细胞的循环CTL，测试抗抗原循环抗体的量，测试存在表达抗原的细胞，等等。
作为部分免疫接种组合物，一种或多种癌症相关抗原或其刺激性片段可与一种或多种辅剂一起服用，以诱导免疫反应或增强免疫反应。辅剂是掺入到增强免疫反应的抗原中或与其一起服用的物质。辅剂可以通过提供抗原储库(细胞外或巨噬细胞内)来增强免疫反应，激活巨噬细胞及刺激特异组的淋巴细胞。许多种辅剂在此领域中是众所周知的。辅剂的具体实施例包括单磷酰基脂质A(MPL，SmithKline Beecham)，沙门氏菌minnesota Re 595脂多糖的酸水解作用及提纯后获得的同种物；皂角苷包括QS21(SmithKline Beecham)，从Quillja肥皂草提取物中提纯的纯QA-21皂角苷；DQS21，在PCT申请WO96/33739(SmithKline Beecham)中描述的；QS-7，QS-17，QS-18，和QS-L1(So等人，分子细胞7：178-186，1997)；不完全弗氏辅剂；完全弗氏辅剂；montanide；和从生物可降解油如角鲨烯和/或生育酚制备的多种油包水乳液。较好地，肽混合DQS21/MPL组合物服用。DQS21与MPL的比率通常为约1∶10到10∶1，较好的为约1∶5到5∶1，更好的为约1∶1。一般对于人类服用，DQS21和MPL在疫苗配方中存在的量的范围在约1ug到约100ug。其他辅剂在此领域中是众所周知的，也可使用在本发明中(参看，如Goding，单克隆抗体：原理及实践，第二版，1986)。制备肽和辅剂的混合物或乳液的方法对疫苗接种领域的技术人员是众所周知的。
刺激受试体的免疫反应的其他试剂也可给受试体服用。如由于其他细胞因子的淋巴细胞调节属性，其他细胞因子也可使用在疫苗接种技术中。用于这种目的的许多其他细胞因子对此领域中的普通技术人员是已知的，包括已显示能增强对疫苗保护性作用的白细胞介素-12(IL-12)，GM-CSF和IL-18。因此，细胞因子可与抗原和辅剂一起服用以增加对抗原的免疫反应。
可使用在疫苗接种技术中的免疫反应增强化合物有许多种。这些化合物包括以蛋白质或核酸形式提供的共同刺激性分子。这样的共同刺激性分子包括在树状细胞(DC)上表达并与在T细胞上表达的CD28分子相互作用的B7-1和B7-2(分别为CD80和CD86)分子。这种相互作用提供了对抗原/HMC/TCR刺激的(信号1)T细胞的共同刺激作用(信号2)，增加T细胞扩增及效应子功能。B7也与T细胞上的CTLA4(CD152)相互作用，对包括CTLA4和B7的配体的研究显示，B7-CTLA4的相互作用能增强抗肿瘤免疫性和CTL扩增(ZhengP等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95(11)：6284-6289(1998))。
B7通常不在肿瘤细胞上表达，所以它们不是T细胞有效的抗原呈递细胞(APC)。诱导B7表达能使肿瘤细胞更有效地刺激CTL扩增和效应子功能。B7/IL-6/IL-12共同刺激作用的组合已显示能诱导T细胞群中的IFN-γ和Thl细胞因子的分布，致使进一步增强T细胞活性(Gajewski等人，免疫学期刊，154：5637-5648(1995))。用B7转染肿瘤细胞已在Wang等人的有关体外CTL延伸进行过继转移免疫治疗中讨论(免疫学期刊，19：1-2，1986)。其他B7分子的分送机理包括核酸(裸DNA)免疫接种(Kim等人，Nat.生物技术，15：7：641-646(1997))和重组病毒如腺病毒和痘病毒(Wendtner等人，基因治疗，4：7：726-735(1997))。这些系统对共表达B7和其他选取的分子，如本文所讨论的抗原或抗原片段(包括多表位)或细胞因子的表达盒的构建和应用都是适用的。这些分送系统可用来体外诱导适当的分子，及使用在体内免疫接种情况中。也可考虑在体外和体内使用抗-CD28抗体直接刺激T细胞。同样地，诱导T细胞对外源抗原反应的可诱导共-刺激性分子ICOS也可被调节，如通过使用抗-ICOS抗体(Hutloff等人，自然397：263-266，1999)。
淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3)在APC和一些肿瘤细胞上表达，并与在T细胞上表达的CD2相互作用。这种相互作用诱导T细胞IL-2和IFN-γ产生，并能因此互补但不置换，B7/CD28共同刺激性相互作用(Parra等人，免疫学期刊，158：637-642(1997)；Fenton等人，免疫治疗期刊，21：2：95-108(1998))。
淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)在白细胞上表达，并与表达在APC和一些肿瘤细胞上的ICAM-1相互作用。这种相互作用诱导T细胞IL-2和IFN-γ产生，并能因此互补但不置换，B7/CD28共同刺激性相互作用(Fenton等人，免疫治疗期刊，21：2：95-108(1998))。因此LFA-1是能在上面讨论的有关B7的多种方法中提供给疫苗接种技术的共同刺激性分子的另一个实例。
完全CTL激活和效应子功能需要Th细胞辅助，通过Th细胞DC40L(CD40配体)分子和由DC表达的CD40分子间的相互作用(Ridge等人，自然，393：474(1998)；Bennett等人，自然，393：478(1998)；Schoenberger等人，自然，393：480(1998))。这种共同刺激性信号的机理可能涉及B7的增量调节和DC(APC)产生的相关IL-6/IL-12。这样，CD40-CD40L相互作用互补信号1(抗原/MHC-TCR)和信号2(B7-CD28)相互作用。
使用抗CD-40抗体直接刺激DC细胞，预计会增强对肿瘤抗原的反应，肿瘤抗原通常在炎性范围外遇到或由非-专职APC(肿瘤细胞)呈递。在这些情况中，Th辅助和B7共同刺激信号没有提供。这种机理可以使用在基于抗原脉冲DC的治疗法中，或使用在在已知的TRA前体的范围内Th表位尚未确定的情况中。
癌症相关抗原多肽，或其片段，也可用来分离它们的天然结合伙伴。分离这样的结合伙伴可依据已知的方法实施。如，分离的癌症相关抗原多肽可附着在底物(如层析介质，如聚苯乙烯珠或滤纸)上，然后将怀疑含有结合伙伴的溶液加在底物上。如果在溶液中存在结合伙伴，其可与癌症相关抗原多肽相互作用，那么结合伙伴就会与底物结合癌症相关抗原多肽结合。结合伙伴就可以被分离了。
还可以认识到的是，本发明包括使用表达载体中的癌症相关抗原cDNA序列，以及转染宿主细胞和细胞种系，如真核细胞(如E.coli)，或原核细胞(树状细胞，B细胞，CHO细胞，COS细胞，酵母表达系统和昆虫细胞中的重组体杆状病毒表达)。特别有用的是哺乳动物细胞如，人类，鼠，大颊鼠，猪，山羊，灵长类动物等。它们可以是很多种的组织种类，包括初生细胞和细胞种系。具体实例包括角化细胞，周边血液白细胞，骨髓干细胞和胚胎干细胞。表达载体需要相关序列，即上面描述的核酸序列与启动子可操作地结合。
本发明还考虑包括核酸，多肽或肽的疫苗接种给药。多肽和肽的给药可依据此领域中众所周知的标准疫苗接种技术实施。在另一个实施方案中，核酸分送可通过使用活体材料的方法实施，即通过从受试体中移出细胞，基因工程设计细胞以包括乳腺癌相关抗原，重新将设计细胞引入到受试体中。这种过程的一个实例在美国专利5,399,346中及在该专利的提交记录中提呈的展示品中列出，所有文献是公众可以获得的。通常，包括将基因的功能拷贝体外引入到受试体细胞中，并将基因工程设计的细胞重新引入到受试体中。基因的功能拷贝在允许基因在基因工程设计细胞中表达的调节因子的可操作控制下。多种转染和转导技术以及适当的表达载体对此领域中的普通技术人员是熟知的，一些内容在PCT申请WO95/00654中描述。使用载体如病毒和靶脂质体体内核酸分送也考虑包括在本发明中。
在较好的实施方案中，分送编码癌症相关抗原的核酸的病毒载体是从下列载体组中选取的，包括腺病毒，腺伴随病毒，痘病毒包括痘苗病毒和减毒痘病毒。Semliki Forest病毒，Venezuelan马脑炎病毒，逆转录病毒，Sindbis病毒，和类Ty病毒粒。已用来分送外源核酸的病毒和类病毒粒实例包括复制缺损型腺病毒(如Xiang等人，病毒学219：220-227，1996；Eloit等人，病毒学期刊，7：5375-5381，1997；Chengalvala等人，疫苗15：335-339，1997)，修饰的逆转录病毒(Townsend等人，病毒学期刊，71：3365-3374，1997)，非复制型逆转录病毒(Irwin等人，病毒学期刊，68：5036-5044，1994)，复制缺损型Semliki Forest病毒(Zhao等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA92：3009-3013，1995)，Canary痘病毒和高减毒痘苗病毒衍生物(Paoletti，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：11349-11353，1996)，非-复制型痘苗病毒(Moss，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：11341-11348，1996)，复制型痘苗病毒(Moss，Dev.Biol.Stand.82：55-63，1994)，Venezuelan马脑炎病毒(Davis等人，病毒学期刊，70：3781-3787，1996)，Sindbis病毒(Pugachev等人，病毒学期刊，212：587-594，1995)，和类Ty病毒粒(Allsopp等人，欧洲免疫学期刊，26：1951-1959，1996)。在较好的实施方案中，病毒载体是腺病毒。
对某些应用的其他较好的病毒是腺-伴随病毒，双链DNA病毒。腺-伴随病毒能感染大范围的细胞类型和种类，并能设计成复制-缺损型的。它还具有优点如热和脂质溶剂稳定性，在不同种系的细胞，包括造血细胞中的高转导率，并缺少超感染抑制作用因此允许多种转导。腺-伴随病毒能以位点-特异方式整合到人类细胞DNA中，从而最小化插入性突变的可能性剂插入基因表达的可变性。此外，在不存在选择性压力的情况下，在组织培养物中野生型腺-伴随病毒感染延续100多代，说明腺伴随病毒基因组整合是相对稳定的事件。腺伴随病毒也可以染色体外方式起作用。
通常，其他较好的病毒载体基于非-细胞病变真核病毒，其中非-关键基因已被兴趣基因替换。非细胞病变病毒包括逆转录病毒，其生命周期包括基因组病毒RNA到DNA的逆转录，和随后前病毒体整合到宿主细胞DNA中。腺病毒和逆转录病毒已经人类基因治疗试验证实。一般，逆转录病毒是复制-缺损型的(即能指导合成所需的蛋白质，但不能制备感染性颗粒)。这种基因上改变的逆转录病毒表达载体通常可用在基因体内的高效转导中。制备复制-缺损型逆转录病毒的标准技术(包括步骤，将外源遗传物质掺入到质粒中，转染衬有质粒的包装细胞，通过包装细胞系制备重组体逆转录病毒，从组织培养介质中收集病毒颗粒，用病毒颗粒感染靶细胞)在Kriegler，M.的“基因转化和表达，实验室手册”W.H.Freeman公司，纽约(1990)中和Murry，E.J.编辑的“分子生物学中的方法”，第7卷，Humana出版有限公司，Cliffton，新泽西州(1991)中描述。
较好地，前述核酸分送载体：(1)含有能转录并翻译到哺乳动物细胞中并能诱导宿主体内免疫反应的外源遗传物质，(2)表面含有选择性地结合靶细胞，如哺乳动物细胞表面受体的配体，从而获得进入靶细胞。
根据核酸是体内还是体外引入到宿主中，可实施多种技术将本发明的核酸引入到细胞中。这样的技术包括核酸-磷酸钙沉淀物的转染，与DEAE有关的核酸的转染，用前述病毒感染或转染，包括有兴趣的核酸，脂质体调节转染等。对于某些应用，较好地将核酸靶中到具体细胞上。在这种情况中，用来将本发明的核酸分送到细胞中的载体(如逆转录病毒，或其他病毒；脂质体)可有一个附着在其上的靶分子。如，分子如对靶细胞上的表面膜蛋白特异的抗体或靶细胞上受体的配体可与核酸分送载体结合或掺入到核酸分送载体中。较好的抗体包括选择性地结合癌症相关抗原的抗体，单独的或与MHC分子的复合物。特别推荐的是单克隆抗体。使用脂质体分送本发明的核酸的情况中，结合与细胞内吞作用有关的表面膜蛋白的蛋白质可以掺入到脂质体配方中以导向或促进吸收。这样的蛋白质包括具体细胞种类的衣壳蛋白或其片段，在循环中经历内在化的蛋白质的抗体，导向胞内定位并增强胞内半衰期的蛋白质，等等。聚合物分送系统也已成功地用来将核酸分送到细胞中，如此领域中的技术人员已知的，这样的系统甚至允许口服分送核酸。
当服用时，本发明的治疗组合物可以药物可接受的制备品方式服用。这样的制备品可常规地含有药物可接受浓度的盐，缓冲试剂，防腐剂，相容载体，补充的免疫增强试剂如辅剂和细胞因子，和任意的其他治疗试剂。
本发明的治疗试剂可通过任何传统的方式服用，包括注射或通过一段时间的逐渐注入。服用可以是，如口服，静脉内服用，腹腔内服用，肌肉内服用，腔内服用，皮下服用，或经皮服用。当治疗使用抗体时，较好的服用方式是通过肺部气雾服用方式。制备含有抗体的气雾剂的技术对此领域中的技术人员是熟知的。通常，这样的系统应使用不会显著地减弱抗体生物属性，如互补体结合能力的组成(参看，如，Sciarra和Cutic的“气雾剂”，Remington药物科学，第18版，1990，1694-1712页；参考收入)。不需要借助非常规试验的情况下，此领域的技术人员可方便地确定制备抗体气雾剂的各种参数和条件。当使用本发明的反义制备品时，缓慢的静脉服用是较好的。
本发明的组合物以有效量服用。“有效量”是单独或与其他药剂一起服用，产生所需的反应，如增加了对癌症相关抗原的免疫反应的癌症相关抗原组合物的量。在治疗特点在于表达一种或多种癌症相关抗原的具体疾病或病况中，如肾癌中，所需反应是抑制疾病的发展。尽管更较好地其包括永久地阻止疾病的发展，但其可能只包括临时减缓疾病的发展。这可以通过常规的方法监测，或依据本文所讨论的本发明的诊断方法来监测。对治疗疾病或病况的所需反应也可以是延迟疾病或病况的发作或甚至阻止疾病或病况的发作。
这样的量将取决于要进行治疗的具体病况，病况的严重性，个体患者参数包括年龄，身体状况，体重，治疗的持续时间，同时进行的治疗的性质(如果有)，服用的特异方式等等，健康领域从业者知识和专业技术范围内的因素。这些因素对此领域中的普通技术人员是众所周知的，并且仅使用常规试验就可以实施。一般较好的是，使用最多剂量的个体组成会其组合物，即依据合理的医学判断最大的安全剂量。然后，此领域中的普通技术人员可理解，由于医学上的原因，心理上的原因或事实上的任何其他原因，患者可以坚持较低的或可忍受的剂量。
使用在前述方法中的药物组合物较好地是无菌的，并在适于给患者服用的单位体积或重量中含有有效量的癌症相关抗原或编码癌症相关抗原的核酸，以产生学所需的反应。反应可以，如经受体系统通过测定下游效应如基因表达，或通过测定癌症相关抗原组合物的生理学效应如肿瘤的退化或疾病症状的减弱，通过确定服用癌症相关抗原组合物后的免疫反应来测定。其他测试法对此领域中的普通技术人员是已知的，并且可以用来测定反应的程度。
给受试体服用的癌症相关抗原组合物(如多肽，肽，抗体，细胞或核酸)的剂量可依据不同的参数来选取，具体地依据使用的服用方式和受试体的状况。其他因素包括所需的治疗时间，在使用初始剂量受试体的反应不充分的情况中，可使用较大剂量(或通过不同的，更局部化的给药方式有效发挥较大剂量)到患者耐药性允许的程度。
通常，对于引发或增加免疫反应的治疗，依据此领域中的标准技术，癌症相关抗原以剂量在1ng到1mg之间配制并服用，较好地，在10ng到100μg之间。在使用编码癌症相关抗原的核酸或其变体的情况中，依据标准技术，剂量通常在1ng到0.1mg之间配制并服用。服用癌症相关抗原组合物的其他方案对此领域中的普通技术人员是已知的，其中剂量，注射安排，注射部位，服用模式(如肿瘤内)等等与前述不同。给不是人类的哺乳动物服用癌症相关抗原组合物，如为测试目的或兽医治疗目的，可在基本上与上述相同的条件下实施。
在癌症相关抗原肽用作疫苗接种的情况中，可使用有效地传递癌症相关抗原和辅剂以使对抗原的免疫反应增加的服用模式。对于癌症相关抗原在辅剂中的服用方式，较好的方法包括真皮内服用，静脉内服用，肌肉内服用和皮下服用。尽管有较好的实施方案，本发明不受本文公开的具体服用模式限制。此领域中的标准文献(如Remington药物科学，第18版，1990)中提供了分送含辅剂或在非-辅剂载体中的免疫原的服用和配制模式。
当服用时，本发明的药物制备品可以药物可接受的量应用，并应用在药物可接受的组合物中。“药物可接受的”意指不干扰活性组分的生物活性有效性的非-毒性物质。这样的制备品可常规地含有盐，缓冲试剂，防腐剂，相容载体和任意的其他治疗试剂。当使用在药中时，盐应是药物可接受的，但是非-药物可接受的盐可以方便地用来制备其药物-可接受的盐，这样的盐不排除在本发明的范围外。这样的药理学及药物可接受的盐包括但不限于，从下列酸制备来的盐：氢氯酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸，马来酸，乙酸，水杨酸，柠檬酸，蚁酸，丙二酸，琥珀酸等。并且，药物可接受的盐也可制备成碱性金属盐，或碱土金属盐，如钠，钾或钙盐。
如果需要，肾癌相关抗原组合物可与药物可接受的载体组合。如本文所使用的“药物可接受的载体”意指适用于人类服用的一种或多种相容固态或液态填充剂，稀释剂或微囊化物质。“载体”是指天然或合成的，活性组分与其结合促进应用的有机或无机组成。药物可接受的组成还能以没有会显著减弱所需药物功效的相互作用的方式，与本发明的组成共同混合，彼此共同混合。药物组合物可含有适当的缓冲试剂，包括：乙酸和盐；柠檬酸和盐，硼酸和盐；磷酸和盐。
药物组合物还可任意地含有适当的防腐剂，如苯甲烃胺氯，氯丁醇，对羟基苯甲酸酯类和thimerosal。
药物组合物可方便地以单一药剂形式存在，可使用制药领域中众所周知的任何方法制备。所有方法包括步骤：将活性试剂与含有一种或多种辅助成分的载体制成组合。通常，组合物通过均匀地并紧密地将活性试剂与液态载体，均匀分开的固态载体，或两种载体制成组合，如果需要，然后成形产品。
适于口服的组合物可以分散单位存在，如胶囊，片剂，锭剂，每种含有预定量的活性化合物。其他组合物包括水溶液或非-水溶液中的悬浮液如糖浆，西也剂或乳液。
适于非肠道服用的组合物方便地包括乳腺癌相关抗原多肽或核酸的无菌水溶液或非-水溶液制备品，其较好地与受体血液等张。这种制备品可依据已知的方法使用适当的分散或润湿试剂和悬浮试剂配制。无菌可注射制备品也可以是在无-毒性非肠道-可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，如在1，3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受的载体和溶剂是水，Ringer溶液和等张氯化钠溶液。此外，无菌，固定油也方便地用作为溶剂或悬浮介质。用作这种目的，任何无刺激性的固定油可以使用，包括合成的单-或双-甘油酯。此外，脂肪酸如油酸也可使用在制备可注射物中。适于口服，皮下服用，静脉内服用，肌肉内服用等的载体配方可在Remington药物科学，Mack出版公司，Easton，PA中找到。
如本文所使用，对于核酸，“分离的”意指(i)体外通过如聚合酶链反应(PCR)扩增的；(ii)通过克隆重组制备的；(iii)提纯的，如通过切割和凝胶分离；或(iv)合成的，如通过化学合成。分离的核酸是通过此领域中众所周知的重组DNA技术可方便地操作的核酸。因此，包含在其中5’和3’限制性位点是已知的载体中的核苷酸序列或包含在对于载体聚合酶链反应(PCR)引物序列已公开的载体中的核苷酸序列认为是分离的，但在其天然宿主中以其天然状态存在的核酸序列不是分离的。分离核酸可以是基本上纯的，但不是必须的。如，在克隆或表达载体内是分离的核酸就不是纯的，因为它可能仅占其存在的细胞中物质的很小的百分比。然而，这样的核酸是分离的，如本文所使用的术语，因为它可通过此领域中的普通技术人员已知的标准技术方便地操作。如本文所使用的分离的核酸不是自然存在的染色体。
如本文所使用的，对于多肽，“分离的”意指从其天然环境中分离的并以允许其鉴别或使用的充足量存在。分离的，当指蛋白质或多肽时，意指：(i)通过表达克隆选择性地制备的或(ii)通过层析法或电泳法提纯的。分离的蛋白质或多肽可以是，但不是必须是基本上纯的。“基本上纯的”是指蛋白质或多肽基本上不含与其在自然或体内系统中一起发现的其他物质，到实用并适于它们预期应用的程度。基本上纯的多肽可通过此领域中众所周知的技术制备。因为分离的蛋白质可能与药物可接受的载体在药物制备品中混合，所以蛋白质可能仅占制备品的很小的百分比。虽然如此蛋白质还是分离的，因为它已从在生存系统与它在一起的物质中分离出来，即从其他蛋白质中分离。
实施例
实施例1：肾癌细胞系1973/10.4的SEREX筛查
使用5μg从细胞系1973/10.4衍生的聚A+RNA制备标准cDNA文库。通过标准SEREX方法，使用1∶200稀释比的吸收自身患者血清[Sahin，U.等人，Proc.Natl.Sci.USA 92：11810-3(1995)；Chen，Y.T.等人，Proc.Natl.Sci.USA 94：1914-8(1997)]，免疫筛查初级(未扩增的)cDNA文库(每个文库5×105克隆体)。排除编码免疫球蛋白基因片段的假-正克隆体，提纯克隆体并进行序列分析。序列对比显示，这些克隆体表现22个不同的基因的cDNA，从NY-REN-45到NY-LU-66[表A和序列清单(SEQ ID NO.1-21)]。通过GenBank/EMBO数据库的同源性研究显示，22个基因中14个与预先已知的分子对应，其他8个是未知基因，序列一致性仅局限于已知基因的短区段或表达序列标记(EST)。
对分离克隆体的分析：I、是已知基因产品的NY-REN克隆体
    名称     基因/序列一致性   登记号 SEQ ID NO
 NY-REN-46  乳酸脱氢酶B   Y00711     22
 NY-REN-47  ERK酪氨酸激酶   D31661     23
 NY-REN-48  PINCH蛋白   U09284     24
 NY-REN-51  BBP/53BP2   U58334     25
 NY-REN-52  类固醇受体辅激活蛋白   U59302     26
 NY-REN-53  KIAA0336mRNA标记   AB002334     27
 NY-REN-54  E6致癌蛋白质相关蛋白   X98033     28
 NY-REN-55  鼠科动物NEK1蛋白激酶同源物   S45828     29
 NY-REN-56  6-果糖磷酸激酶   D49817     30
 NY-REN-59  乳酸脱氢酶A   X02152     31
 NY-REN-61  KIAA0081mRNA标记   D42039     32
 NY-REN-63  DDBp127-相关蛋白   AF035950     33
 NY-REN-65  HREV107蛋白质   X92814     34
 NY-REN-66  酸性核糖磷酸蛋白2   M17887     35
II、新型基因产品克隆体          SEQ ID      大小         组织mRNA      蛋白质SEQ ID
                NO                       表达              NO：NY-REN-45            1        4.0kb        普遍存在            12NY-REN-49            2        1.1kb        普遍存在            13NY-REN-50            3        1.8kb        普遍存在            14NY-REN-57           4，5      2.9kb        普遍存在          15，16NY-REN-58            6        1.9kb        普遍存在            17NY-REN-60            7        4.0kb        普遍存在            18NY-REN-62           8，9      2.7kb        普遍存在          19，20NY-REN-64          10，11     3.0kb        普遍存在            21
III、仅与自身血清反应的克隆体
NY-REN-47
NY-REN-49
NY-REN-50
IV、与从正常对照供体的血清反应的克隆体
                     血清反应性频率
  克隆体                   正常                    癌症患者
NY-REN-46                  4/4                        6/14
NY-REN-48                 14/14                      17/17
NY-REN-51                  1/12                       3/17
NY-REN-52                  4/12                       7/17
NY-REN-53                  4/19                      10/31
NY-REN-54                  5/8                        7/7
NY-REN-55                  3/19                       6/31
NY-REN-56                  3/19                       7/31
NY-REN-57                  1/19                       3/31
NY-REN-58                  1/12                       2/17
NY-REN-59                  1/19                       4/31
NY-REN-61                  3/19                       5/31
NY-REN-62                  1/19                       4/31
NY-REN-63                  2/19                      12/31
NY-REN-64                  3/19                       6/31
NY-REN-65                  2/19                       2/31
V、仅与癌症患者的血清反应的克隆体(不与19个正常受试体血清样品反应)。对于治疗和诊断应用，这些克隆体是较好的。
                   反应性频率
    NY-REN-32                        3/31
    NY-REN-45                        3/31
    NY-REN-57                        2/31
    NY-REN-60                        5/31
    NY-REN-66                        2/31
VI、NY-REN肾SEREX克隆体的其他同同种异型筛查
测试肾SEREX克隆体与下面列出的正常受试体和不同癌症患者的血清的反应性
                            血清
  克隆体     正常    结肠癌     肾癌     肺癌    乳腺癌
 NY-REN-3     0/26     7/37     8/32     0/23     1/26
 NY-REN-12     0/19     0/16     3/32     0/15     0/16
 NY-REN-19     0/19     0/16     2/32     0/15     0/16
 NY-REN-21     0/16     3/16     3/32     1/15     0/16
 NY-REN-25     0/15     0/16     5/32     0/15     0/16
 NY-REN-31     0/14     0/16     5/32     0/15     0/16
 NY-REN-32     0/14     2/16     3/32     0/15     0/16
 NY-REN-37     0/15     0/16     2/32     0/15     0/16
 NY-REN-45     0/14     0/16     3/32     1/15     0/16
 NY-REN-57     0/19     0/16     2/32     0/15     0/16
 NY-REN-60     0/19     0/16     7/32     0/15     0/16
 NY-REN-66     0/19     0/16     2/32     0/15     0/16
实施例2：肿瘤细胞和睾丸文库的SEREX筛查
使用从不同癌症源，以及睾丸衍生的聚A+RNA制备标准cDNA文库。通过标准SEREX方法，使用吸收自身患者血清[Sahin，U.等人，Proc.Natl.Sci.USA 92：11810-3(1995)；Chen，Y.T.等人，Proc.Natl.Sci.USA 94：1914-8(1997)]，免疫筛查cDNA文库。排除编码免疫球蛋白基因片段的假-正克隆体，提纯克隆体并进行序列分析。序列对比显示，这些克隆体所有都与kinectin cDNA基本上一致(GenBank登记号L25616)。
           表A：通过SEREX分离的激长素克隆体
    克隆体名称  SEQ IDNO：    文库 筛查用患者血清
    NGO-St-47     36   胃肿瘤     自身
    TS-64-5’     37    睾丸     自身
  HOM-TSOv3-41(5’)     38    睾丸     自身
  HOM-TSOv3-41(3’)     39    睾丸     自身
  HOM-HD2-2(3’)     40  Hodgkin症     自身
  HOM-HD2-232(3’)     41  Hodgkin症     自身
    Thy4(3’)     42 甲状腺肿瘤     自身
    Thy4(3’)     42 甲状腺肿瘤     自身
    Thy5(3’)     43 甲状腺肿瘤     自身
    Thy8(3’)     44 甲状腺肿瘤     自身
    Thy10(3’)     45 甲状腺肿瘤     自身
    NGO-Br-1     46   乳腺癌     自身
此外，用自身血清筛查的肝癌文库也鉴别出几种测序并发现与激长素基本上一致的克隆体。
同种异型(胃癌)
12/12胃癌患者血清识别的激长素
0/27正常个体血清识别的激长素
因此确定，识别激长素是诊断癌症患者的方法。
实施例3：制备重组体癌症相关抗原
为了方便筛查患者血清的与癌症相关抗原反应的抗体，如通过ELISA，依据标准方法制备重组体蛋白质。在一种方法中，编码癌症相关抗原的克隆体亚克隆到杆状病毒载体中，将重组体表达载体引入到适当的昆虫细胞中。杆状病毒/昆虫克隆体系是较好的，因为后翻译修饰在昆虫细胞中实施。其他较好的真核系统是从Invitrogen获得的果蝇表达系统。选取表达大量重组体蛋白质的克隆体并用来制备重组体蛋白质。使用从患者获取的用来分离具体克隆体的血清，或在由同种异型血清识别的癌症相关抗原情况中，使用从任何患者获得的用来分离克隆体的血清或识别克隆体基因产品的血清，来测试重组体蛋白质的抗体识别作用。
可替换地，将癌症相关抗原克隆体插入到原核表达载体中，以在细菌中制备重组体蛋白质。其他系统，包括酵母表达系统和哺乳动物细胞培养系统也可使用。
实施例4：制备癌症相关抗原的抗体
依据标准方法，如在说明实施例4中制备的重组体癌症相关抗原可用来产生多克隆抗血清和单克隆抗体。通过在已知表达具体癌症相关抗原的患者的细胞提取物的检测(如ELISA测试法)中使用抗血清/抗体，测试这样制备的抗血清和抗体对癌症相关抗原的正确识别作用。这些抗体可用作试验目的(如定位癌症相关抗原，免疫沉淀法，Western印迹法等)，也可用作诊断目的(如检测组织活组织切片的提取物，检测是否存在癌症相关抗原)。
实施例5：在不同或相同癌症源中癌症相关抗原的表达
在多种肿瘤样品中测试一种或多种癌症相关抗原的表达，以确定，如果有，依据本文所述方法哪种恶性肿瘤应被诊断出和/或被治疗。测试肿瘤细胞系和肿瘤样品癌症相关抗原表达，较好地依据标准方法通过RT-PCR。也可使用Northern印迹法以测定癌症相关抗原的表达。依据抗体的测试法，如ELISA和Western印迹法也可用来确定蛋白质表达。测试癌症相关抗原表达(在其他癌症中及在其他相同类型癌症患者中)较好的方法是使用修饰的SEREX方案(如上所述)的同种异型血清型法。
在所有前述内容中，从提供血清进行癌症相关抗原初始分离的患者的肿瘤中获取的提取物用作正对照物。在上述实施例中描述的含有重组体表达载体的细胞也可用作正对照物。
前述试验获得的结果提供了多种癌症相关核酸和/或多肽的测试组，可用在诊断方法中(如确定癌症的存在，确定进行治疗的患者的预后)及用在治疗方法中(如疫苗组合物等)。
实施例6：癌症相关抗原阳性患者的HLA分类
为了确定哪种HLA分子呈递从本发明的癌症相关抗原衍生的肽，表达癌症相关抗原的患者的细胞进行HLA分类。从患者中获取周边血液淋巴细胞并进行HLAI类或II类，以及进行I类或II类的具体亚类的分类。肿瘤活组织切片样品也可用来分类。HLA分类可通过临床免疫学领域中任何标准方法实施，如通过特异单克隆抗体的识别，或通过HLA等位基因-特异PCR(如在WO97/31126中所描述的)。实施例7：定性由MHCI类和II类分子呈递的癌症相关抗原肽
刺激受试体内抗体反应的抗原也可刺激细胞-调节免疫反应。细胞将蛋白质加工成肽以在细胞表面上的MHCI类或II类分子上呈递来进行免疫监视。由某些MHC/HLA分子呈递的肽通常与基元一致。这些基元在一些情况中是已知的，并可用来筛查肾癌相关抗原是否存在可能的I类和/或II类肽。对I类和II类基元的归纳已公开(如Rammensee等人，免疫遗传学，41：178-228，1995)。依据试验结果，如上面所描述的试验结果，得到了呈递个体乳腺癌相关抗原的HLA类型。因此，由这些HLA分子呈递的肽的基元优先进行研究。
也可使用计算机运算法来研究I类和II类基元。如根据已知的I类基元预定可能的CTL表位的计算机程序公开(参看如，Parker等人，免疫学期刊，152：163，1994；D’Amaro等人，人类免疫学，43：13-18，1995；Drijfhout等人，人类免疫学43：1-12，1995)。根据已知的II类基元预定可能的T细胞表位的计算机程序公开(参看如，Sturniolo等人，Nat Biotechnol 17(6)：555-61，1999)。使用通过互联网在国家健康研究院在URL网站http：//bimas.dert.nih.gov上得到的运算法来方便地进行HLA结合预测。还可参看网站：SYFPEITHI：MHC配体和肽基元的互联网数据库(http：//www.uni-tuebingen.de/uni/kxi或http：//134.2.96.221/scripts/hlaserver.dll/eppredict.htm)。确定HLAII类肽及制备其置换的方法也可了解到(如Strominger和Wucherpfennig(PCT/US96/03182))。
实施例8：鉴别编码抗原的部分癌症相关多肽
为了确定是否如上所述的分离癌症相关抗原能刺激溶细胞性T淋巴细胞反应，实施下列方法。通过用编码癌症相关抗原多肽的一种克隆体转染的自身正常细胞，或用与推定蛋白质对应并与适当的HLAI类分子匹配的合成肽标记的扩散PBL(如上所述)，刺激患者周边血液淋巴细胞(PBL)以在癌症相关抗原克隆体内定位抗原性肽来产生CTL克隆体(参看Knuth等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：3511-3515，1984；Van der Bruggen等人，欧洲免疫学期刊，24：3038-3043，1994)。筛查这些CTL克隆体对用癌症相关抗原克隆体和自身HLA等位基因转染的COS细胞的特异性，如Brichard等人所描述的(欧洲免疫学期刊，26：224-230，1996)。癌症相关抗原的CTL识别作用可通过测定从溶细胞性T淋巴细胞释放的TNF或通过51Cr释放测定法(Herin等人，国际癌症期刊，39：390-396，1987)来确定。如果CTL克隆体特异地识别转染COS细胞，那么测试在该COS细胞中转染的癌症相关抗原克隆体的较短片段，以鉴别编码肽的基因的区域。癌症相关抗原克隆体的片段可通过外切核酸酶III消化或其他标准分子生物学方法来制备。制备合成肽以证实抗原的确切序列。
任意地，癌症相关抗原cDNA的较短片段可通过PCR产生。较短片段可用来刺激上述的TNF释放或51Cr释放。
制备与刺激TNF释放的癌症相关抗原的部分最短片段对应的合成肽。合成渐次较短的肽以确定给定HLA分子的最优癌症相关抗原肿瘤排斥抗原肽。
实施相似的方法以确定是否癌症相关抗原含有一种或多种T细胞识别的HLAII类肽。可研究如上癌症相关抗原多肽序列的HLAII类基元。与I类肽相比，II类肽由有限数量的细胞种类呈递。因此对应这些试验，较好地使用表达HLAII类分子的树状细胞或B细胞克隆体。
表1：序列同源性SEQ ID NO.：1AB002794，U46118RNU46118U19482AF026216AB002739，AB002730，AB002728，AF058796，AB002777，AF020187，AF009411，AB015609，AF006627，M95076，U43527，AB002741，U25846，AF006628，AF019043，D83352，U10355，M99575，U48288，AF090440，AB007504，U82480，Y15794，AJ005572，AF029349，L10111，S80963，U38894，L41731，AF022733，AJ225108，Y11879，AF001688，U33214，Z97178，AF009413，AF019907，AF016371，X71980，AF001522，M77169，AF023132，D83476，AJ009675，U90554，AF069324，AF048691，Z34799，AF004947，U60149，AF022732，AF019887，L02937，U55848，AF011331，AF045770，AF043533，X69524，M32882，U08214，U50847，AF017364，U35364，Y14339，AJ005969，U90555，U44430，U74296，AF001501，AJ223316，D78609，U41060，Z54362，AF034387，U62398，AB005545，AB002533，Y13865，AF009959，L02938，U10555，AL010246，AC003041，U37699，S75970，AF071010，Z81311，AB003681，X16353，AB002731，X53081，D63450，D10911，D90115，X97065，Z82275，AB016891，Y09455，X77990，，W58357，W07820，AA188593，W81046，AA858164，AI018124，AI139112，AA769634，W00437，D80849，AA448160，N98650，T31293，H15307，H51146，N29314，AA770301，AA187822，AA978299，T31823，AA936410，AA993194，N41386，W45601，W81099，C05691，D60153，AA780119，AA929004，R68608，Z43271，N37024，AA974718，AA928663，T30120，AA936583，H51109，N20251，W92917，T36035，AA480197，Z24908，N79450，AA872019，AA902275，N59810，R13443，AA740162，AA937759，N72168，AA970708，T36257，AA433833，H15700，D51185，AA249138，R37356，W93028，Z28641，AA371494，N72757，AA719126，N56164，T31790，D57384，Z41959，N58984，AA847848，AA587009，Z39343，AA654834，AA505490，Z38243，D20344，AA252395，AA025593，H70133，R09101，AA159862，AI032981，Z28355，C75020，AI139642，D82421，AI126922，C75170，AI016032，C18748，C75478，AI129334，C75472，AA310765，D63057，C05952，AA357303，C16591，D82132，L48852，D82799，C75176，AI124552，AA669404，U30155，C75118，AA374918，C75108，C05853，U30151，D57346，AI127548，AA918527，AA317816，AA573490，R21699，AA917928，R36311，AA361522，AA701252，AI085492，H44387，AA156256，AA587935，AA976510，AA515269，W73374，T27986，N34493，AA737770，N32609，N32612，H64420，，AA415243，AA413717，AA117350，AA242502，AA117343，AA545256，AA795651，AA106372，U31322，AA681967，AA221922，AA600546，AA050610，AU018628，C80932，AA920654，AA863834，AI099036，AA183239，AI115182，AA590910，W65628，AA162291，，AA109440，AI052952，AA999324，AI105714，AI026280，AI072678，AA964820，AA754198，AA944557，AI045710，C94989，AA471630，AA933231，AA509077，AA257557，AA509328，AA109365，AA963207，AA435473，AA999306，AA406684，AI105662，AA509174，AI108597，AA109374，AA925182，AA471671，AA088161，AA752812，AA626989，AA406924，AA840999，AA509033，C94899，AA406875，AA842672，AA123619，AA072471，AA509339，AA933108，AI110259，AA842135，N99262，AA661430，AA842512，AA180648，AI066048，AA559515，AA406761，AA109423，AF074736，AA257676，D87312，AA257488，AA114390，AI087701，W06665，W32852，AA123649，AA842505，AA509330，AA908025，AA257279，AI105717，AA406673，AA627018，AA406850，AA161668，AA114453，AA109372，AA257572，AA803997，AA406943，AA257495，AA842019，AA661368，AI082949，AA842888，W06539，AA118223，AA406986，AA471717，AI096212，AA257707，AA257649，AI053126，AA508950，AA713366，W69049，AA965381，AA208680，AI057997，AA161707，AI058071，AA675858，AA257513，AI083337，AA406908，AI083256，AA659956，AA842532，AA754036，AA753165，W18199，AI109620，AI058022，AI064026，AA471431，AA032116，AA754544，AI108146，C42045，AA843025，AI109103，AA509237，AA161620，AA257665，AA471605，W84932，AA841358，AA843040，AA471695，AA003471，AA840977，AA509267，AA841711，AA471488，AA257699，N98079，AA454318，W04102，AA842874，N99754，AA509307，AA751845，AA661358，AA508954，AA406746，AA842720，W23363，AA508951，AI068913，AA417420，AI108220，AA508946，AA471497，AA842911，AA842501，AA123614，AA509218，AA547812，AA752986，AA752003，AA406839，AA508993，AA161747，AA509008，AA180623，AA508986，AA842627，AA753129，AA509214，AA406733，AI105737，N74818，AA753300，AA430818，AA417415，AA114426，R46936，AA979824，AA246112，AA753138，AI058077，AA842464，AA966639，AA842265，AA509025，AA601853，W15128，AA660039，AA842275，AA454424，AA180651，AA842423，AA257507，AI063375，AA180692，AA051990，W15094，AA180620，W00308，AA406729，AA257712，AA257445，AA433148，C48534，AA495533，C08939，AA406845，AA933362，AA509242，AA842023，W29144，AI087490，AA842237，AA601823，W06538，AI087739，AI087524，AA842164，AA842642，AA471553，AA842419，AI113700，AA675813，AI083003，AI021727，AI083274，AI083309，W32823，AA253962，AA114520，AA430792，C47230，AA842674，AI053141，D75937，AA843034，W68979，AI105681，W91819，AA756971，AA509104，AA111828，AI109720，AI110161，AA933311，AA180602，AA842093，R86419，AI058057，AA186285，AA406891，AI105725，AA406888，AA649397，N94700，W51718，AA547916，AA840646，U74116，AA257756，AI082996，W91818，N74830，AA123585，AA118224，AA454446，AA841367，AA509109，AA842387，AI052833，AA751998，AA123634，AA257327，AA803962，AA842493，AA471448，AA406716，AA841361，AA840661，AA713447，AA406754，AA257695，AA841403，AA751834，AA406947，AI096182，AI105734，W15132，W59918，AA089352，AA180566，AA257427，AA257522，AA406980，AA471469，AA509264，AA509032，AA749469，AA752028，AA754167，AA754646，AA842335，AA842574，AI065957，AI065970，AI096289，AA109379，AA109472，AA114484，AA161689，AA430830，AA406948，AA433246，AA454371，AA471492，AA471703，AA752086，AA842624，AI096185，R47079，R86415，AA161711，AA161655，AA180549，AA257424，AA257437，AA257749，AA433393，AA471419，AA471602，AA430922，AA661401，AA752034，AA752066，AA842384，AI082936，AI083329，AI105677，Z33912，AA109362，AA1094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此领域中的技术人员仅使用常规试验会认出，或能确定本文描述的发明的具体实施方案的许多等同物。这样的等同物包括在下列权利要求书的范围内。
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<110>路德维哥癌症研究院
<120>癌症相关抗原及其应用
<130>L0461/7050WO
<140>US 09/166,300
<141>1997-10-05
<140>US 09/166,350
<141>1997-10-05
<160>45
<170>FastSEQ的Windows 3.0版
<210>1
<211>4422
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<400>15Met Ala Glu Ala Glu Glu Asp Cys His Ser Asp Thr Val Arg Ala Asp1               5                  10                  15Asp Asp Glu Glu Asn Glu Ser Pro Ala Glu Thr Asp Leu Gln Ala Gln
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    35                  40                  45Ser Ser Ser Asn Leu Glu Asn Arg Pro Cys Arg Ala Ala Arg Gly Ser
50                  55                  60Leu Gln Lys Thr Ser Ala Asp Thr Lys Gly Lys Gln Glu Gln Ala Lys65                  70                  75                  80Glu Glu Lys Ala Arg Glu Leu Phe Leu Lys Ala Val Glu Glu Glu Gln
            85                  90                  95Asn Gly Ala Leu Tyr Glu Ala Ile Lys Phe Tyr Arg Arg Ala Met Gln
        100                 105                 110Leu Val Pro Asp Ile Glu Phe Lys Ile Thr Tyr Thr Arg Ser Pro Asp
    115                 120                 125Gly Asp Gly Val Gly Asn Ser Tyr Ile Glu Asp Asn Asp Asp Asp Ser
130                 135                 140Lys Met Ala Asp Leu Leu Ser Tyr Phe Gln Gln Gln Leu Thr Phe Gln145                 150                 155                 160Glu Ser Val Leu Lys Leu Cys Gln Pro Glu Leu Glu Ser Ser Gln Ile
            165                 170                 175His Ile Ser Val Leu Pro Met Glu Val Leu Met Tyr Ile Phe Arg Trp
        180                 185                 190Val Val Ser Ser Asp Leu Asp Leu Arg Ser Leu Glu Gln Leu Ser Leu
    195                 200                 205Val Cys Arg Gly Phe Tyr Ile Cys Ala Arg Asp Pro Glu Ile Trp Arg
210                 215                 220Leu Ala Cys Leu Lys Val Trp Gly Arg Ser Cys Ile Lys Leu Val Pro225                 230                 235                 240Tyr Thr Ser Trp Arg Glu Met Phe Leu Glu Arg Pro Arg Val Arg Phe
            245                 250                 255Asp Gly Val Tyr Ile Ser Lys Thr Thr Tyr Ile Arg Gln Gly Glu Gln
        260                 265                 270Ser Leu Asp Gly Phe Tyr Arg Ala Trp His Gln Val Glu Tyr Tyr Arg
    275                 280                 285Tyr Ile Arg Phe Phe Pro Asp Gly His Val Met Met Leu Thr Thr Pro
290                 295                 300Glu Glu Pro Gln Ser Ile Val Pro Arg Leu Arg Thr Arg Glu Tyr Gln305                 310                 315                 320Asp
<210>16
<211>172
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>16Ala Cys Pro Thr His Pro Pro Pro Pro Thr Ala Pro Arg Gly His Gln1               5                  10                  15Ser Cys Arg Leu Gly Asp Ser Trp Ser Val Lys Ser Arg Trp Cys Pro
        20                  25                  30Cys Pro Gln Glu Leu Gly Trp Ala Ser Cys Ala Arg Gly Val Cys Ala
    35                  40                  45Trp Ser Phe Cys Ala Trp Ile Cys Ile Phe Ile Ala Leu Leu Val Glu
50                  55                  60Thr Pro Arg Pro Val His Pro Ala Lys Thr Pro Gln Ala Ala Cys Gly65                  70                  75                  80Ser Arg Thr Leu Pro Pro Phe Pro Arg Cys Pro Leu Arg Ala Arg Ala
            85                  90                  95Ala Thr Gln Ala Cys Trp Leu Arg Pro Pro Leu Gly Gln Ala Leu Ala
        100                 105                 110Gln Pro Ala Glu Trp Gly Val Val Gly Gln Ser Pro Arg Ser Trp Ala
    115                 120                 125Pro Ala Gln Ala His Arg Ala Arg Pro His Pro Ala Ala Pro Arg Thr
130                 135                 140Ala Thr Arg Gly Val Leu Pro Leu Cys Pro Ala Pro Gly Thr Asn Ser145                 150                 155                 160Met Phe Gly Val Cys Leu Cys Leu Phe Phe Lys Lys
            165                 170
<210>17
<211>472
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>17Met Arg Glu Arg Phe Arg Asn Leu Asp Glu Glu Val Glu Lys Tyr Arg1               5                  10                  15Ala Val Tyr Asn Lys Leu Arg Tyr Glu His Thr Phe Leu Lys Ser Glu
        20                  25                  30Phe Glu His Gln Lys Glu Glu Tyr Ala Arg Ile Leu Asp Glu Gly Lys
    35                  40                  45Ile Lys Tyr Glu Ser Glu Ile Ala Arg Leu Glu Glu Asp Lys Glu Glu
50                  55                  60Leu Arg Asn Gln Leu Leu Asn Val Asp Leu Thr Lys Asp Ser Lys Arg65                  70                  75                  80Val Glu Gln Leu Ala Arg Glu Lys Val Tyr Leu Cys Gln Lys Leu Lys
            85                  90                  95Gly Leu Glu Ala Glu Val Ala Glu Leu Lys Ala Glu Lys Glu Asn Ser
        100                 105                 110Glu Ala Gln Val Glu Asn Ala Gln Arg Ile Gln Val Arg Gln Leu Ala
    115                 120                 125Glu Met Gln Ala Thr Val Arg Ser Leu Gly Ala Glu Lys Gln Ser Ala
130                 135                 140Asn Leu Arg Ala Glu Arg Leu Glu Lys Glu Leu Gln Ser Ser Ser Glu145                 150                 155                 160Gln Asn Thr Phe Leu Ile Asn Lys Leu His Lys Ala Glu Arg Glu Ile
            165                 170                 175Asn Thr Leu Ser Ser Lys Val Lys Glu Leu Lys His Ser Asn Lys Leu
        180                 185                 190Glu Ile Thr Asp Ile Lys Leu Glu Thr Ala Arg Ala Lys Ser Glu Leu
    195                 200                 205Glu Arg Glu Arg Asn Lys Leu Gln Ser Glu Leu Asp Gly Leu Gln Ser
210                 215                 220Asp Asn Glu Ile Leu Lys Ala Ala Val Glu His His Lys Val Leu Leu225                 230                 235                 240Val Glu Lys Asp Arg Glu Leu Ile Arg Lys Val Gln Ala Ala Lys Glu
            245                 250                 255Glu Gly Tyr Gln Lys Leu Val Val Leu Gln Asp Glu Lys Leu Glu Leu
        260                 265                 270Glu Asn Arg Leu Ala Asp Leu Glu Lys Met Lys Val Glu His Asp Val
    275                 280                 285Trp Arg Gln Ser Glu Lys Asp Gln Tyr Glu Glu Lys Leu Arg Ala Ser
290                 295                 300Gln Met Ala Glu Glu Ile Thr Arg Lys Glu Leu Gln Ser Val Arg Leu305                 310                 315                 320Lys Leu Gln Gln Gln Ile Val Thr Ile Glu Asn Ala Glu Lys Glu Lys
            325                 330                 335Asn Glu Asn Ser Asp Leu Lys Gln Gln lle Ser Ser Leu Gln Ile Gln
        340                 345                 350Val Thr Ser Leu Ala Gln Ser Glu Asn Asp Leu Leu Asn Ser Asn Gln
    355                 360                 365Met Leu Lys Glu Met Val Glu Arg Leu Lys Gln Glu Cys Arg Asn Phe
370                 375                 380Arg Ser Gln Ala Glu Lys Ala Gln Leu Glu Ala Glu Lys Thr Leu Glu385                 390                 395                 400Glu Lys Gln Ile Gln Trp Leu Glu Glu Lys His Lys Leu His Asp Arg
            405                 410                 415Ile Thr Asp Arg Glu Glu Lys Tyr Asn Gln Ala Lys Glu Lys Leu Gln
        420                 425                 430Arg Ala Ala Ile Ala Gln Lys Lys Arg Lys Ser Leu His Glu Asn Lys
    435                 440                 445Leu Lys Arg Leu Gln Glu Lys Val Glu Val Leu Glu Ala Lys Lys Glu
450                 455                 460Glu Leu Glu Thr Glu Ile Arg Ser465                 470
<210>18
<211>462
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>18Lys Ala Thr Ser Leu Thr Leu Glu Gly Gly Arg Leu Lys Arg Thr Pro1               5                  10                  15Gln Leu Ile His Gly Arg Asp Tyr Glu Met Val Pro Glu Pro Val Trp
        20                  25                  30Arg Ala Leu Tyr His Trp Tyr Gly Ala Asn Leu Ala Leu Pro Arg Pro
    35                  40                  45Val Ile Lys Asn Ser Lys Thr Asp Ile Pro Glu Leu Glu Leu Phe Pro
50                  55                  60Arg Tyr Leu Leu Phe Leu Arg Gln Gln Pro Ala Thr Arg Thr Gln Gln65                  70                  75                  80Ser Asn Ile Trp Val Asn Met Gly Asn Val Pro Ser Pro Asn Ala Pro
            85                  90                  95Leu Lys Arg Val Leu Ala Tyr Thr Gly Cys Phe Ser Arg Met Gln Thr
        100                 105                 110Ile Lys Glu Ile His Glu Tyr Leu Ser Gln Arg Leu Arg Ile Lys Glu
    115                 120                 125Glu Asp Met Arg Leu Trp Leu Tyr Asn Ser Glu Asn Tyr Leu Thr Leu
130                 135                 140Leu Asp Asp Glu Asp His Lys Leu Glu Tyr Leu Lys Ile Gln Asp Glu145                 150                 155                 160Gln His Leu Val Ile Glu Val Arg Asn Lys Asp Met Ser Trp Pro Glu
            165                 170                 175Glu Met Ser Phe Ile Ala Asn Ser Ser Lys Ile Asp Arg His Lys Val
        180                 185                 190Pro Thr Glu Lys Gly Ala Thr Gly Leu Ser Asn Leu Gly Asn Thr Cys
    195                 200                 205Phe Met Asn Ser Ser Ile Gln Cys Val Ser Asn Thr Gln Pro Leu Thr
210                 215                 220Gln Tyr Phe Ile Ser Gly Arg His Leu Tyr Glu Leu Asn Arg Thr Asn225                 230                 235                 240Pro Ile Gly Met Lys Gly His Met Ala Lys Cys Tyr Gly Asp Leu Val
            245                 250                 255Gln Glu Leu Trp Ser Gly Thr Gln Lys Asn Val Ala Pro Leu Lys Leu
        260                 265                 270Arg Trp Thr Ile Ala Lys Tyr Ala Pro Arg Phe Asn Gly Phe Gln Gln
    275                 280                 285Gln Asp Ser Gln Glu Leu Leu Ala Phe Leu Leu Asp Gly Leu His Glu
290                 295                 300Asp Leu Asn Arg Val His Glu Lys Pro Tyr Val Glu Leu Lys Asp Ser305                 310                 315                 320Asp Gly Arg Pro Asp Trp Glu Val Ala Ala Glu Ala Trp Asp Asn His
            325                 330                 335Leu Arg Arg Asn Arg Ser Ile Val Val Asp Leu Phe His Gly Gln Leu
        340                 345                 350Arg Ser Gln Val Lys Cys Lys Thr Cys Gly His Ile Ser Val Arg Phe
    355                 360                 365Asp Pro Phe Asn Phe Leu Ser Leu Pro Leu Pro Met Asp Ser Tyr Met
370                 375                 380His Leu Glu Ile Thr Val Ile Lys Leu Asp Gly Thr Thr Pro Val Arg385                 390                 395                 400Tyr Gly Leu Arg Leu Asn Met Asp Glu Lys Tyr Thr Gly Leu Lys Lys
            405                 410                 415Gln Leu Ser Asp Leu Cys Gly Leu Asn Ser Glu Gln Ile Leu Leu Ala
        420                 425                 430Glu Val His Gly Ser Asn Ile Lys Asn Phe Pro Gln Asp Asn Pro Lys
    435                 440                 445Ser Thr Glu Leu Leu Ser Glu Val Gly Phe Phe Gly Val Pro
450                 455                 460
<210>19
<211>243
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>19Pro Thr Trp Leu Glu Arg Gly Gly Gly Glu Pro Ala Ala Arg Pro Gln1               5                  10                  15Thr Pro Gln Pro Thr Ala Pro Glu Ser Arg Gly Pro Ser Gly Ala Ser
        20                  25                  30Ala Leu Arg Cys Arg Gly Pro Thr Ala Arg Ser Leu Pro Ala Ala Ser
    35                  40                  45Met Leu Gly Ala Pro Asp Glu Ser Ser Val Arg Val Ala Val Arg Ile
50                  55                  60Arg Pro Gln Leu Ala Lys Glu Lys Ile Glu Gly Cys His Ile Cys Thr65                  70                  75                  80Ser Val Thr Pro Gly Glu Pro Gln Val Phe Leu Gly Lys Asp Lys Ala
            85                  90                  95Phe Thr Phe Asp Tyr Val Phe Asp Ile Asp Ser Gln Gln Glu Gln Ile
        100                 105                 110Tyr Ile Gln Cys Ile Glu Lys Leu Ile Glu Gly Cys Phe Glu Gly Tyr
    115                 120                 125Asn Ala Thr Val Phe Ala Tyr Gly Gln Thr Gly Ala Gly Lys Thr Tyr
130                 135                 140Thr Met Gly Thr Gly Phe Asp Val Asn Ile Val Glu Glu Glu Leu Gly145                 150                 155                 160Ile Ile Ser Arg Ala Val Lys His Leu Phe Lys Ser Ile Glu Glu Lys
            165                 170                 175Lys His Ile Ala Ile Lys Asn Gly Leu Pro Ala Pro Asp Phe Lys Val
        180                 185                 190Asn Ala Gln Phe Leu Glu Leu Tyr Asn Glu Glu Val Leu Asp Leu Phe
    195                 200                 205Asp Thr Thr Arg Asp Ile Asp Ala Lys Ser Lys Lys Ser Asn Ile Arg
210                 215                 220Ile His Glu Asp Ser Thr Gly Gly Asn Leu Tyr Cys Gly Arg Phe Gln225                 230                 235                 240His Val Leu
<210>20
<211>223
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>20Gly Asn Tyr Arg Pro Ser Lys Lys Arg Phe Arg Glu Gly Lys Glu Lys1               5                  10                  15Lys Arg Gly Lys Lys Val Trp Leu Val Lys Arg Ile Ile Gln Thr Leu
        20                  25                  30Thr Lys Arg Arg Lys Lys Lys Arg Val Phe Arg Lys Glu Lys Pro Asn
    35                  40                  45Glu Leu Glu Val Glu Glu Ser Gln Glu Val Ser Asp His Glu Asp Glu
50                  55                  60Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Ile Asp Gly Gly Glu Ser65                  70                  75                  80Ser Asp Glu Ser Asp Ser Glu Ser Asp Glu Lys Ala Tyr Gln Ala Asp
            85                  90                  95Leu Ala Asn Ile Thr Cys Glu Ile Ala Ile Lys Gln Lys Leu Ile Asp
        100                 105                 110Glu Leu Glu Asn Ser Gln Lys Arg Leu Gln Thr Leu Lys Lys Gln Tyr
    115                 120                 125Glu Glu Lys Met Met Leu Gln His Lys Ile Arg Asp Thr Gln Leu Glu
130                 135                 140Arg Asp Gln Val Leu Gln Asn Leu Gly Ser Val Glu Ser Tyr Ser Glu145                150                 155                 160Glu Lys Ala Lys Lys Val Arg Ser Glu Tyr Glu Lys Lys Leu Gln Ala
            165                 170                 175Met Asn Lys Glu Leu Gln Arg Leu Gln Ala Ala Gln Lys Glu His Ala
        180                 185                 190Arg Leu Leu Lys Asn Gln Ser Gln Tyr Glu Lys Leu Lys Lys Leu Gln
    195                 200                 205Gln Asp Val Met Glu Met Lys Lys Thr Lys Val Arg Leu Met Lys
210                 215                 220
<210>21
<211>206
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>21Met Asn Lys Pro Ile Thr Pro Ser Thr Tyr Val Arg Cys Leu Asn Val1               5                  10                  15Gly Leu Ile Arg Lys Leu Ser Asp Phe Ile Asp Pro Gln Glu Gly Trp
        20                  25                  30Lys Lys Leu Ala Val Ala Ile Lys Lys Pro Ser Gly Asp Asp Arg Tyr
    35                  40                  45Asn Gln Phe His Ile Arg Arg Phe Glu Ala Leu Leu Gln Thr Gly Lys
50                  55                  60Ser Pro Thr Ser Glu Leu Leu Phe Asp Trp Gly Thr Thr Asn Cys Thr65                  70                  75                  80Val Gly Asp Leu Val Asp Leu Leu Ile Gln Asn Glu Phe Phe Ala Pro
            85                  90                  95Ala Ser Leu Leu Leu Pro Asp Ala Val Pro Lys Thr Ala Asn Thr Leu
        100                 105                 110Pro Ser Lys Glu Ala Ile Thr Val Gln Gln Lys Gln Met Pro Phe Cys
    115                 120                 125Asp Lys Asp Arg Thr Leu Met Thr Pro Val Gln Asn Leu Glu Gln Ser
130                 135                 140Tyr Met Pro Pro Asp Ser Ser Ser Pro Glu Asn Lys Ser Leu Glu Val145                 150                 155                 160Ser Asp Thr Arg Phe His Ser Phe Ser Phe Tyr Glu Leu Lys Asn Val
            165                 170                 175Thr Asn Asn Phe Asp Glu Arg Pro Ile Ser Val Gly Gly Asn Lys Met
        180                 185                 190Gly Glu Gly Gly Phe Gly Val Val Tyr Lys Gly Leu Arg Lys
    195                 200                 205
<210>22
<211>1260
<212>DNA
<213>Homo sapiens
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<220>
<221>不确定
<222>592..592
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<220>
<221>不确定
<222>594..594
<223>n＝a，c，g or t
<220>
<221>不确定
<222>604..604
<223>n＝a，c，g or t
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<210>46
<211>4416
<212>DNA
<213>Homo sapiens
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Claims (116)

1.一种诊断病变的方法，病变的特点在于表达由核酸分子编码的人类癌症相关抗原前体，该方法包括：将从受试体获取的生物样品与特异地结合核酸分子，其表达产品，或与HLA分子复合的其表达产品的片段的试剂接触，其中核酸分子是NA组1核酸分子，确定试剂和核酸分子或表达产品间的相互作用来诊断病变。
2.依据权利要求1的方法，其中试剂是从下列组中选取的，包括
(a)包括NA组1核酸分子或其片段的核酸分子，
(b)包括NA组3核酸分子或其片段的核酸分子，
(c)包括NA组5核酸分子或其片段的核酸分子，
(d)结合NA组1核酸的表达产品的抗体，
(e)结合NA组3核酸的表达产品的抗体，
(f)结合NA组5核酸的表达产品的抗体，
(g)结合HLA分子与NA组1核酸的表达产品的片段的复合物的试剂，
(h)结合HLA分子与NA组3核酸的表达产品的片段的复合物的试剂，
(i)结合HLA分子与NA组5核酸的表达产品的片段的复合物的试剂。
3.依据权利要求1的方法，其中病变特点在于表达多种人类癌症相关抗原前体，其中试剂是多种试剂，其每种对不同人类癌症相关抗原前体特异，其中所说的多种试剂是至少2种，至少3种，至少4种，至少5种，至少6种，至少7种，至少8种，至少9种或至少10种这样的试剂。
4.依据权利要求1-3的方法，其中试剂对下列组中的人类癌症相关抗原前体特异，包括乳腺癌，胃癌，肺癌，前列腺癌，肾癌，结肠癌，甲状腺癌，Hodgkin症，和肝癌相关抗原前体。
5.一种确定病况的衰退，发展或发作的方法，病况特点在于表达异常量的由是NA组1核酸分子的核酸分子编码的蛋白质，该方法包括监测从怀疑患有病况的患者获取的样品的下列组中选取的参数：
(i)蛋白质，
(ii)从蛋白质衍生的肽，
(iii)选择性地结合蛋白质或肽的抗体，
(iv)对从蛋白质衍生的肽和MHC分子的复合物特异的溶细胞性T细胞，来确定所说的病况的衰退，发展或发作。
6.依据权利要求5的方法，其中样品是体液，身体渗出物或组织。
7.依据权利要求5的方法，其中监测步骤包括将样品与从下列组中选取的可检测试剂接触：
(a)选择性地结合(i)蛋白质，或(ii)肽的抗体，
(b)结合(iii)抗体的蛋白质或肽，
(c)呈递(iv)肽和MHC分子复合物的细胞。
8.依据权利要求7的方法，其中抗体，蛋白质，肽或细胞是用放射性标记或酶标记的。
9.依据权利要求5的方法，包括检测样品的肽。
10.依据权利要求5的方法，其中核酸分子是NA组3分子。
11.依据权利要求5的方法，其中核酸分子是NA组5分子。
12.依据权利要求5的方法，其中蛋白质是多种蛋白质，参数是多种参数，多种参数的每一种对多种蛋白质的不同蛋白质特异，其至少一种是由ZA组1分子编码的癌症相关蛋白质。
13.依据权利要求5的方法，其中蛋白质是多种蛋白质，其至少一种是激长素，其剩余部分是非-激长素癌症相关蛋白质，其中参数是多种参数，多种参数的每一种对多种蛋白质的不同蛋白质特异。
14.一种人类受试体的药物制备品，包括一种试剂，当给受试体服用时选择性地增加HLA分子和人类癌症相关抗原的复合物的存在量，和药物可接受的载体，其中人类癌症相关抗原是由包括NA组1分子的核酸分子编码的癌症相关抗原前体的片段。
15.依据权利要求14的药物制备品，其中试剂包括多种试剂，每一种选择性地增加受试体中HLA分子和不同人类癌症相关抗原的复合物，其中至少一种人类癌症相关抗原是由NA组1分子编码的。
16.依据权利要求15的药物制备品，其中多种是至少两种，至少三种，至少四种或至少五种这样的试剂。
17.依据权利要求14的药物制备品，其中核酸分子是NA组3核酸分子。
18.依据权利要求14的药物制备品，其中试剂包括多种试剂，其至少一种是激长素，其剩余部分是非-激长素癌症相关蛋白质，每一种选择性地增加受试体中HLA分子和不同人类癌症相关抗原的复合物。
19.依据权利要求14的药物制备品，其中试剂是从下列组中选取的，包括：
(1)含有人类癌症相关抗原或其功能变体的分离多肽，
(2)可操作地结合表达分离多肽，或其功能变体的启动子的分离核酸，
(3)表达分离多肽，或其功能变体的宿主细胞，
(4)多肽，或其功能变体与HLA分子的分离复合物。
20.依据权利要求14-19的药物制备品，进一步包括辅剂。
21.依据权利要求14的药物制备品，其中试剂是表达含有人类癌症相关抗原或其功能变体的分离多肽的细胞，其中细胞是非-扩增的。
22.依据权利要求14的药物制备品，其中试剂是表达含有人类癌症相关抗原或其功能变体的分离多肽的细胞，其中细胞表达结合多肽的HLA分子。
23.依据权利要求21或22的药物制备品，其中分离多肽包括激长素多肽。
24.依据权利要求14的药物制备品，其中试剂是至少两种，至少三种，至少四种或至少五种多肽，每种编码不同的人类癌症相关抗原或其功能变体，其中至少一种人类癌症相关抗原是由NA组1分子编码的。
25.依据权利要求24的药物制备品，其中至少一种人类癌症相关抗原是激长素或其片段。
26.依据权利要求14的药物制备品，其中试剂是PP组2多肽。
27.依据权利要求14的药物制备品，其中试剂是PP组3多肽或PP组4多肽。
28.依据权利要求22的药物制备品，其中细胞重组地表达多肽和HLA分子中的一种或两种。
29.依据权利要求22的药物制备品，其中细胞是非扩增的。
30.一种组合物，包括选择性地结合PP组1多肽的分离试剂。
31.依据权利要求30的物质组合物，其中试剂选择性地结合PP组2多肽。
32.依据权利要求30的物质组合物，其中试剂选择性地结合PP组3多肽。
33.依据权利要求30的物质组合物，其中试剂选择性地结合PP组4多肽。
34.依据权利要求30的物质组合物，其中试剂选择性地结合PP组5多肽。
35.依据权利要求30-34的组合物，其中试剂是选择性地结合至少两种，至少三种，至少四种或至少五种不同的这种多肽的多种不同试剂。
36.依据权利要求35的组合物，其中至少一种多肽是kinectin或其片段。
37.依据权利要求30-34的组合物，其中试剂是抗体。
38.依据权利要求35的组合物，其中试剂是抗体。
39.一种物质组合物，包括权利要求30-34的试剂与治疗或诊断试剂的缀合物。
40.一种物质组合物，包括权利要求35的试剂与治疗或诊断试剂的缀合物。
41.依据权利要求39的物质组合物，其中缀合物是试剂和是毒素的治疗或诊断试剂的缀合物。
42.一种药物组合物，包括从下列组中选取的分离核酸分子，包括NA组1分子和NA组2分子，和药物可接受的载体。
43.依据权利要求42的药物组合物，其中分离核酸分子包括NA组3分子或NA组4分子。
44.依据权利要求42的药物组合物，其中分离核酸分子包括至少两种编码不同多肽的分离核酸分子，每种多肽包括不同的人类癌症相关抗原。
45.依据权利要求44的药物组合物，其中至少一种多肽是激长素多肽。
46.权利要求42-45的药物组合物进一步包括带有可操作地结合分离核酸分子的启动子的表达载体。
47.权利要求42-45的药物组合物进一步包括重组地表达分离核酸分子的宿主细胞。
48.一种药物组合物，包括含有PP组1多肽或PP组2多肽的分离多肽，和药物可接受的载体。
49.依据权利要求48的药物组合物，其中分离多肽包括PP组3多肽或PP组4多肽。
50.依据权利要求48的药物组合物，其中分离多肽包括至少两种不同的多肽，每种包括不同的人类癌症相关抗原。
51.依据权利要求50的药物组合物，其中至少一种人类癌症抗原是激长素。
52.依据权利要求48的药物组合物，其中分离多肽是PP组11多肽或其HLA结合片段。
53.依据权利要求48的药物组合物，其中分离多肽是PP组12多肽或其HLA结合片段。
54.依据权利要求48-53的药物组合物，进一步包括辅剂。
55.一种分离的核酸分子，其包括NA组3分子。
56.一种分离的核酸分子，其包括NA组4分子。
57.一种从下列组中选取的分离的核酸分子，包括：
   (a)长度足以在人类基因组内表现序列单一性，并鉴别编码人类癌症相关抗原前体的核酸的，包括从下列组中选取的核苷酸序列的核酸分子片段，包括核苷酸序列SEQ IDNO.1-11和22-46，
   (b)(a)的互补体，只要片段包括与从下列序列组中选取的任何序列不一致的邻接核苷酸序列，包括：
   (1)具有表1GenBank登记号的序列，
   (2)(1)的互补体，
   (3)(1)和(2)的片段。
58.依据权利要求50的分离的核酸分子，其中邻接核苷酸序列是从下列组中选取的，包括：
   (1)至少两个邻接核苷酸与序列组不一致，
   (2)至少三个邻接核苷酸与序列组不一致，
   (3)至少四个邻接核苷酸与序列组不一致，
   (4)至少五个邻接核苷酸与序列组不一致，
   (5)至少六个邻接核苷酸与序列组不一致，
   (6)至少七个邻接核苷酸与序列组不一致。
59.依据权利要求57的分离的核酸分子，其中片段的大小是从下列组中选取的，至少包括：8个核苷酸，10个核苷酸，12个核苷酸，14个核苷酸，16个核苷酸，18个核苷酸，20个核苷酸，22个核苷酸，24个核苷酸，26个核苷酸，28个核苷酸，30个核苷酸，50个核苷酸，75个核苷酸，100个核苷酸和200个核苷酸。
60.依据权利要求57的分离核酸分子，其中分子编码结合人类HLA受体或人类抗体的多肽或其片段。
61.一种表达载体，含有可操作地结合启动子的权利要求55-60的任何分离的核酸分子。
62.一种表达载体，含有可操作地结合启动子的核酸，其中核酸是NA组2分子。
63.一种表达载体，含有NA组1或NA组2分子和编码HLA分子的核酸。
64.一种用权利要求61的表达载体转化或转染的宿主细胞。
65.一种用权利要求62或63的表达载体转化或转染的宿主细胞。
66.一种用权利要求61的表达载体转化或转染的并进一步含有编码HLA的核酸的宿主细胞。
67.一种用权利要求62的表达载体转化或转染的并进一步含有编码HLA的核酸的宿主细胞。
68.一种由权利要求55或权利要求56的分离核酸分子编码的分离多肽。
69.权利要求68的多肽的一个片段，其是免疫原性的。
70.一种分离多肽，包括激长素多肽的免疫原性的一个片段。
71.依据权利要求69或70的片段，其中片段，或部分片段结合HLA或人类抗体。
72.人类癌症相关抗原前体的片段，其或其部分结合HLA或人类抗体，其中前体是由是NA组1分子的核酸分子编码的。
73.依据权利要求72的片段，其中片段是含HLA的复合物的一部分。
74.依据权利要求73的片段，其中片段长度在8个到12个氨基酸之间。
75.一种分离多肽，包括长度足以在人类基因组内表现序列单一性并鉴别编码人类癌症相关抗原前体的核酸的 68的多肽的一个片段。
76.检测存在人类癌症相关抗原前体表达的试剂盒，包括一对分离核酸分子，其每种基本上包括从下列组中选取的分子，
(a)任何NA组1分子的核苷酸序列的12-32个核苷酸邻接区段和(b)(a)的互补体，其中邻接区段是非重叠的。
77.依据权利要求76的试剂盒，其中分离核酸分子对构建并排列以选择性地扩增是NA组3分子的分离核酸分子。
78.一种治疗患有病变的受试体的方法，病变的特点在于表达了人类癌症相关抗原前体，包括给受试体服用一定量的试剂，其可选择性地增加受试体中HLA分子和人类癌症相关抗原的复合物的存在量，有效地改善病变，其中人类癌症相关抗原是由从下列组中选取的核酸分子编码的人类癌症相关抗原前体的片段，包括
   (a)包括NA组1核酸分子的核酸分子，
   (b)包括NA组3核酸分子的核酸分子，
   (c)包括NA组5核酸分子的核酸分子。
79.依据权利要求78的方法，其中病变特点在于表达了多种人类癌症相关抗原前体，其中试剂是多种试剂，其每一种选择性地增加受试体中HLA分子和不同的人类癌症相关抗原的复合物的存在量，其中至少一种人类癌症相关抗原是由NA组1分子编码的。
80.依据权利要求79的方法，其中至少一种人类癌症相关抗原是激长素或其片段。
81.依据权利要求79的方法，其中多种是至少2种，至少3种，至少4种，或至少5种这样的试剂。
82.依据权利要求78-81的方法，其中试剂是从下列组中选取的分离多肽，包括PP组1，PP组2，PP组3，PP组4，和PP组5。
83.依据权利要求78-81的方法，其中病变是癌症。
84.依据权利要求82的方法，其中病变是癌症。
85.一种治疗患有病况的受试体的方法，病况特点在于在受试体细胞中表达了人类癌症相关抗原前体，包括：
(i)从受试体移出含有免疫反应性细胞的样品，
(ii)在适于产生抗是前体一个片段的人类癌症相关抗原的溶细胞性T细胞的条件下，将含有免疫反应性细胞的样品与宿主细胞接触，
(iii)将溶细胞性T细胞以有效量引入到受试体中，以使表达人类癌症相关抗原的细胞被溶胞，其中宿主细胞用含有可操作地结合启动子的分离核酸分子的表达载体转化或转染，分离核酸分子是从下列核酸组中选取选取的，包括NA组1，NA组2，NA组3，NA组4，和NA组5。
86.依据权利要求85的方法，其中宿主细胞重组地表达结合人类癌症相关抗原的HLA分子。
87.依据权利要求85的方法，其中宿主细胞内源性地表达结合人类癌症抗原的HLA分子。
88.一种治疗患有病况的受试体的方法，病况特点在于在受试体细胞中表达了人类癌症相关抗原前体，包括：
(i)鉴别由与所说的病况有关的细胞表达的核酸分子，其中所说的核酸分子是NA组1分子；
(ii)用从下列组中选取的核酸转染宿主细胞，包括(a)鉴别的核酸分子，(b)包括编码人类癌症相关抗原区段的鉴别的核酸的片段，(c)对(a)或(b)的缺失，置换或添加，(d)(a)，(b)或(c)的简并；
(iii)培养所说的转染宿主细胞以表达转染的核酸分子；
(iv)将一定量的所说的宿主细胞或其提取物引入到受试体中，有效地增加对与病况有关的受试体的细胞的免疫反应。
89.依据权利要求88的方法，其中核酸分子是激长素核酸分子。
90.依据权利要求88的方法，进一步包括鉴别呈递核酸分子的表达产品一部分的MHC分子，其中宿主细胞表达与鉴别的MHC分子相同的MHC分子，其中宿主细胞呈递核酸分子的表达产品的MHC结合部分。
91.依据权利要求88的方法，其中免疫反应包括B-细胞反应或T-细胞反应。
92.依据权利要求91的方法，其中反应是包括产生对呈递部分核酸分子表达产品的宿主细胞或对表达人类癌症相关抗原的受试体细胞特异的溶细胞性T细胞的T-细胞反应。
93.依据权利要求88的方法，其中核酸分子是NA组3分子。
94.依据权利要求88或90的方法，进一步包括治疗宿主细胞使它们呈非-增殖性。
95.一种治疗或诊断或监测患有病况的受试体的方法，病况特点在于表达了异常量的由是NA组1分子的核酸分子编码的蛋白质，包括：给受试体服用治疗病况有效量的，特异地结合蛋白质或从蛋白质衍生的肽的抗体，抗体与治疗上有用的试剂偶联。
96.依据权利要求95的方法，其中抗体是单克隆抗体。
97.依据权利要求96的方法，其中单克隆抗体是嵌合抗体或人源化抗原。
98.一种治疗病况的方法，病况特点在于在受试体内表达了异常量的由是NA组1核酸分子的核酸分子编码的蛋白质，包括：给受试体服用有效量的权利要求14-29和42-47的任何一个的药物组合物，在受试体中预防，延迟病况的发作，或抑制病况。
99.依据权利要求98的方法，其中病况是癌症。
100.依据权利要求98的方法，进一步包括首先鉴别受试体在组织中表达了异常量的蛋白质。
101.依据权利要求99的方法，进一步包括首先鉴别受试体在组织中表达了异常量的蛋白质。
102.一种治疗患有病况的受试体的方法，病况特点在于表达了异常量的由是NA组1核酸分子的核酸分子编码的蛋白质，包括：
 (i)鉴别从受试体获取的表达异常量的蛋白质的细胞；
 (ii)分离细胞样品；
 (iii)培养细胞；
 (iv)以刺激对细胞免疫反应的有效量将细胞引入到受试体中。
103.依据权利要求102的方法，进一步包括在将细胞引入到受试体前使细胞呈非增殖性。
104.一种治疗病理细胞状况的方法，病理细胞状况特点在于异常表达了由是NA组1核酸分子的核酸分子编码的蛋白质，包括：给需要的受试体服用有效量的抑制蛋白质表达或活性的试剂。
105.依据权利要求104的方法，其中试剂是选择性地结合蛋白质的抑制性抗体，其中抗体是单克隆抗体，嵌合抗体，人源化抗体或抗体片段。
106.依据权利要求104的方法，其中试剂是选择性地结合编码蛋白质的核酸分子的反义核酸发作。
107.依据权利要求104的方法，其中核酸分子是NA组3核酸分子。
108.依据权利要求104的方法，其中核酸分子是激长素核酸分子。
109.一种物质组合物，用来刺激对由是NA组1分子的核酸分子编码的多种蛋白质的免疫反应，包括：从蛋白质的氨基酸序列衍生的多种肽，其中肽结合一种或多种呈递在表达异常量蛋白质的细胞表面的MHC分子。
110.依据权利要求109的物质组合物，其中至少部分多种肽结合MHC分子并引起对其的溶细胞性反应。
111.依据权利要求109的物质组合物，其中至少一种蛋白质是激长素。
112.依据权利要求110的物质组合物，进一步包括辅剂。
113.依据权利要求112的物质组合物，其中所说的辅基是皂角苷，GM-CSF，或白细胞介素。
114.依据权利要求109的物质组合物，进一步包括至少一种肽，用来刺激对至少一种不是由是NA组1分子的核酸分子编码的蛋白质的免疫反应，其中至少一种肽结合一种或多种MHC分子。
115.一种分离抗体，选择性地结合下列物质的复合物：
(i)由是NA组1分子的核酸分子编码的蛋白质衍生的肽和
(ii)与结合肽形成复合物的MHC分子，其中分离抗体不与(i)或(ii)单独结合。
116.依据权利要求115的抗体，其中抗体是单克隆抗体，嵌合抗体，人源化抗体，或它们的片段。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9459255B2 (en) 2006-12-21 2016-10-04 Ajinomoto Co., Inc. Method of evaluating breast cancer, breast cancer-evaluating apparatus, breast cancer-evaluating method, breast cancer-evaluating system, breast cancer-evaluating program and recording medium
US9465031B2 (en) 2008-06-20 2016-10-11 Ajinomoto Co., Inc. Method of evaluating prostatic disease
US9599618B2 (en) 2006-12-21 2017-03-21 Ajinomoto Co., Inc. Method, apparatus, system, program, and computer-readable recording medium for evaluating colorectal cancer
US9664681B2 (en) 2006-08-04 2017-05-30 Ajinomoto Co., Inc. Lung cancer evaluating apparatus, method, system, and program and recording medium therefor
CN110291402A (zh) * 2016-06-27 2019-09-27 朱诺治疗学股份有限公司 鉴定肽表位的方法、结合此类表位的分子和相关用途
CN112805299A (zh) * 2018-10-05 2021-05-14 西雅图儿童医院以西雅图儿童研究机构名义经营 针对原发性免疫缺陷、胱氨酸病和威尔逊病的新生儿筛查
CN113846062A (zh) * 2014-07-25 2021-12-28 赛拉福柯蒂斯公司 用于嵌合抗原受体分子的调控表达的慢病毒载体

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6818419B2 (en) * 2000-01-13 2004-11-16 Tularik Inc. IRAK-4: compositions and methods of use
US6774223B2 (en) * 2000-06-28 2004-08-10 Diadexus, Inc. Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating colon cancer
ATE332309T1 (de) * 2000-08-04 2006-07-15 Ludwig Inst Cancer Res Suppressor-gen
DE10055285A1 (de) * 2000-11-08 2002-06-06 Deutsches Krebsforsch Neue Marker für die Diagnose und Therapie von Tumoren
US6965023B2 (en) 2000-11-17 2005-11-15 The Burnham Institute Death domain proteins
AU2002217962A1 (en) * 2000-11-17 2002-05-27 The Burnham Institute Death domain proteins
US20030044813A1 (en) * 2001-03-30 2003-03-06 Old Lloyd J. Cancer-testis antigens
JP2005211023A (ja) * 2004-01-30 2005-08-11 Hayashibara Biochem Lab Inc 腎細胞癌の転移若しくは再発の可能性を予測する方法
BR112012029066A2 (pt) * 2010-05-14 2020-09-01 The General Hospital Corporation composições e processos de identificação de neoantígenos específicos de tumor.
WO2015077717A1 (en) 2013-11-25 2015-05-28 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for diagnosing, evaluating and treating cancer by means of the dna methylation status
US11725237B2 (en) 2013-12-05 2023-08-15 The Broad Institute Inc. Polymorphic gene typing and somatic change detection using sequencing data
WO2015095811A2 (en) 2013-12-20 2015-06-25 The Board Institute Inc. Combination therapy with neoantigen vaccine
EP3757211A1 (en) 2014-12-19 2020-12-30 The Broad Institute, Inc. Methods for profiling the t-cell-receptor repertoire
WO2016100975A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Massachsetts Institute Ot Technology Molecular biomarkers for cancer immunotherapy
CA2986235A1 (en) 2015-05-20 2016-11-24 The Broad Institute, Inc. Shared neoantigens
WO2018140391A1 (en) 2017-01-24 2018-08-02 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for detecting a mutant variant of a polynucleotide
WO2019126186A1 (en) 2017-12-18 2019-06-27 Neon Therapeutics, Inc. Neoantigens and uses thereof

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5665874A (en) * 1989-01-17 1997-09-09 John Hopkins University Cancer related antigen
CA2211448A1 (en) * 1995-03-21 1996-09-26 Ludwig Institute For Cancer Research Rage tumor rejection antigens
IT1291111B1 (it) * 1997-04-18 1998-12-29 Istituto Europ Di Oncologia S Ubiquitina-isopeptidasi di mammifero che controllano la proliferazione cellulare
US6573094B1 (en) * 1997-10-16 2003-06-03 Baylor College Of Medicine F-box genes and proteins

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9664681B2 (en) 2006-08-04 2017-05-30 Ajinomoto Co., Inc. Lung cancer evaluating apparatus, method, system, and program and recording medium therefor
US9459255B2 (en) 2006-12-21 2016-10-04 Ajinomoto Co., Inc. Method of evaluating breast cancer, breast cancer-evaluating apparatus, breast cancer-evaluating method, breast cancer-evaluating system, breast cancer-evaluating program and recording medium
US9599618B2 (en) 2006-12-21 2017-03-21 Ajinomoto Co., Inc. Method, apparatus, system, program, and computer-readable recording medium for evaluating colorectal cancer
US9465031B2 (en) 2008-06-20 2016-10-11 Ajinomoto Co., Inc. Method of evaluating prostatic disease
CN113846062A (zh) * 2014-07-25 2021-12-28 赛拉福柯蒂斯公司 用于嵌合抗原受体分子的调控表达的慢病毒载体
CN110291402A (zh) * 2016-06-27 2019-09-27 朱诺治疗学股份有限公司 鉴定肽表位的方法、结合此类表位的分子和相关用途
CN110291402B (zh) * 2016-06-27 2023-09-01 朱诺治疗学股份有限公司 鉴定肽表位的方法、结合此类表位的分子和相关用途
CN112805299A (zh) * 2018-10-05 2021-05-14 西雅图儿童医院以西雅图儿童研究机构名义经营 针对原发性免疫缺陷、胱氨酸病和威尔逊病的新生儿筛查

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Publication number Publication date
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JP2003517274A (ja) 2003-05-27
WO2000020587A3 (en) 2000-10-12
AU6505599A (en) 2000-04-26

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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication