CN112805299A - 针对原发性免疫缺陷、胱氨酸病和威尔逊病的新生儿筛查 - Google Patents
针对原发性免疫缺陷、胱氨酸病和威尔逊病的新生儿筛查 Download PDFInfo
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Abstract
描述了针对原发性免疫缺陷、胱氨酸病和威尔逊病的新生儿筛查。新生儿筛查能够从出生时已经常规收集的干血斑检测这些病症。对这些病症的早期检测将大大改善患者结果，因为一旦出现症状，这些病症中的每一种都可能是致命的。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年10月5日提交的美国临时专利申请号62/742,161的优先权，所述专利申请如同在本文中完全阐述一样以引用的方式整体并入本文。
关于联邦政府资助的研究或开发的声明
本发明根据全部由美国国立卫生研究院授予的批准号1R21HD069890-01A1、批准号AI106784-01A1和批准号R01Al123135在政府支持下进行。政府拥有本发明的某些权利。
关于序列表的声明
与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并且特此以引用的方式并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称是2698490_ST25.txt。文本文件是146KB，于2019年10月1日创建，并且经由EFS-Web以电子方式提交。
技术领域
当前的公开内容提供了针对原发性免疫缺陷、胱氨酸病和威尔逊病(Wilsondisease)的新生儿筛查。新生儿筛查能够从出生时已经常规收集的干血斑检测这些病症。对这些病症的早期检测将大大改善患者结果，因为一旦出现症状，这些病症中的每一种都可能是致命的。
发明背景
存在许多具有有效治疗的疾病。然而，对于许多这些疾病，一旦出现症状，疾病就已经致命或导致不可逆转的损伤。此类疾病的实例包括原发性免疫缺陷疾病(PIDD)、胱氨酸病和威尔逊病(WD)。
PIDD是一组威胁生命的遗传性(hereditary)或遗传性(genetic)先天性疾病，其特征在于免疫系统缺失、受损或无功能性。PIDD的实例包括严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(Wiskott-Aldrich Syndrome；WAS)和X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)。
SCID是由参与抗感染免疫细胞(如T细胞和B细胞)的发育和功能的不同基因的突变引起的一组罕见病症。SCID患者通常在生命早期受到严重的细菌、病毒或真菌感染，并且经常罹患肺部瘢痕、慢性腹泻和发育停滞。除非婴儿接受免疫恢复治疗，如造血干细胞移植、基因疗法或酶疗法，否则所述疾患通常在生命的一两年之内是致命的。
WAS是主要影响男性并且特征在于由于血小板数量和尺寸的减少所致的形成血凝块的能力降低的免疫缺陷。通常在出生时就存在的这种血小板异常导致容易瘀伤以及在轻微创伤后长期出血的发作，这在一些情况下是危及生命的。患有WAS的个体还具有增加的发展感染、自身免疫性病症和某些类型的癌症的风险。在WAS患者中，可使用免疫球蛋白输注和抗生素来预防感染，并且在严重情况下，干细胞移植可提供治愈。基因疗法也正在探索作为另一种替代治疗。
XLA是也主要影响男性的遗传性免疫缺陷。在XLA中，人体不能产生抵御细菌、病毒和其他异物所需的抗体。患有XLA的儿童通常在出生后的前1或2个月是健康的，因为他们受到出生前获得的母体抗体的保护。然而，在这段时间之后，母体抗体从体内清除，并且受影响的儿童发展导致器官损伤的反复感染。一旦检测到疾病，免疫球蛋白输注提供增强免疫系统的标准疗法，并且可给予抗生素以抗击细菌感染。然而，在做出诊断时，可能已经发生器官损伤。
胱氨酸病是罕见的代谢紊乱，其中氨基酸胱氨酸进入细胞，但由于称为胱氨酸转运蛋白(cystinosin)的胱氨酸特异性转运蛋白的缺陷而不能退出。由于胱氨酸转运的缺陷，细胞在细胞内部的细胞器，即溶酶体中累积胱氨酸晶体，从而导致细胞过早死亡。胱氨酸病慢慢破坏人体的器官，包括肾脏、肝脏、眼睛、肌肉和脑。患有婴儿型胱氨酸病的儿童在出生时看起来正常，但到9-10个月大时，具有包括过度口渴和排尿以及发育停滞的症状。半胱胺是通过从细胞中除去胱氨酸来减缓胱氨酸病的进展的治疗。然而，如果在疾病进展中尚未尽早开始半胱胺治疗，通常需要进行肾移植。
WD是铜转运病症，其中铜在诸如肝脏、肾脏和脑的重要器官中累积。由于WD进展缓慢且存在广谱临床症状，因此诊断WD非常困难。因此，尽管有可用的治疗，但许多患者在诊断时仍表现出不可逆的多器官损伤。
如果可在临床症状出现之前做出诊断，则将显著增强每种上述疾病的治疗。新生儿筛查(NBS)是针对美国每年出生的400万婴儿的标准公共预防性强制性筛查测试。NBS通常涉及在出生后24至48小时进行的血液测试。筛查使用沉积在滤纸上的几滴来自新生儿脚后跟的血液。含有干血斑(DBS)的纸张可储存，直到进行测试为止。
为了进行NBS评估，从DBS取出干血冲孔，并且进行实验室测试以检测血液中是否存在特定物质(称为标志物或生物标志物)，所述物质指示出生时不明显但在以后的生活中导致严重健康问题的病症。尽管所筛查的病症因国家而异，但大多数国家筛查苯丙酮尿症、原发性先天性甲状腺功能减退症、囊性纤维化和镰状细胞病。NBS已被证明在改善患者结果和避免受影响个体的长期残疾方面非常有效，同时降低医疗费用。
SCID最近已添加至NBS组中。然而，当前的SCID分子测试不能可靠地鉴定所有患有SCID样病症的患者，包括晚期和延迟发作的腺苷脱氨酶(ADA)缺乏症、ZAP70缺乏症和MHCII类缺乏症。不幸的是，对于大多数其他危及生命但可治疗的“非SCID”免疫缺陷，目前尚无可用的广泛基础的成本有效的筛查方法。
许多将受益于筛查的病症缺乏可用测试的原因之一是实验室测试不能可靠地测量与病症相关的标志物。这种无能力的一个原因是病症与标志物的不存在或水平非常低相关。在这种情况下，由于与许多实验室技术相关的可能掩盖临床相关结果的“背景噪声”，可能难以可靠地检测标志物的不存在。
与选择性反应监测质谱结合的肽免疫亲和富集(免疫-SRM)是能够精确定量低丰度标志物的方法。免疫-SRM的使用通常涉及以下步骤：(i)选择指示存在或不存在病症的标志物；(ii)用酶处理将包含所述标志物(如果存在)的生物样品，以将所述生物样品中的所有蛋白质消化为称为肽的较小片段；(iii)富集源自选定标志物的肽，以及(iv)在质谱仪中分析和定量所富集的目标肽。
最近，Jung等人(J.Proteome Res.2017；16：862-871)描述了使用免疫-SRM来定量来自DBS的与WD相关的蛋白质标志物ATP7B。这是首次证明免疫-SRM可用于从储存的DBS可靠地检测低丰度标志物，从而为使用所述方法筛查更广泛的病症提供了可能性。
尽管Jung和同事证明了在免疫-SRM测定中使用DBS来区分受WD影响的个体与未受影响的个体的可行性，但这种测定的许多方面取决于所诊断的病症、每种病症可用的生物标志物、开发可富集目标肽的分子实体的能力以及每种目标肽在质谱仪中的行为。所有这些方面以及更多方面都需要仔细考虑和实验，以实现能够在临床症状出现之前使用DBS可靠地检测NBS组中的病症的测定。
发明内容
本公开描述了可用于筛查新生儿的严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)、X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)、胱氨酸病和威尔逊病(WD)的多重测定的开发。通过在毁灭性的和经常致命性的临床症状出现之前可靠地诊断这些病症，所述测定可显著改善受影响个体的结果。所述测定可使用已经作为现有新生儿筛查(NBS)程序的一部分常规收集的干血斑(DBS)来检测与这些病症相关的标志物的存在或不存在。
本公开描述了与所述病症中的每一种相关的肽，所述肽可使用与选择性反应监测质谱结合的肽免疫亲和富集(免疫-SRM)来可靠地检测和定量。本公开还提供了可用于富集所述肽的高亲和力抗体，以及用于标记所述肽以增加测定的通量的方法。
附图说明
图1.用于与选择性反应监测质谱结合的肽免疫亲和富集(免疫-SRM-MS)以诊断严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)、X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)、胱氨酸病和威尔逊病(WD)的蛋白质靶标和肽序列。还示出总质量、母离子质量和子离子质量。++表示双电荷母离子。子离子的离子类型在括号中。*检测带有前导K氨基酸残基的锯齿状末端序列时的总质量和母离子质量。
图2A-2E.通过多重免疫多反应监测(MRM)测定测量的肽的反应曲线。当在单次质谱(MS)运行中监测多种母离子时，这种类型的分析被称为多反应监测(MRM)。使用MRM分析，可在单次质谱运行中监测多种蛋白质和蛋白质的多个区域(特征肽)。反应曲线绘制在从干血斑(DBS)提取的消化蛋白质的背景基质中测量的随重链肽浓度变化的重链：轻链峰面积比。所述曲线允许确定测定的线性范围和灵敏度。每个数据点被绘制为灰色框，并且线性回归被绘制为线。回归拟合参数报告在每个图的角落。每个图的权重是1/x。(图2A)BTK 407；(图2B)BTK 545；(图2C)CD3ε197；(图2D)WASp 274；(图2E)WASp 289。
图3A-3E.内部标准物(左图)和内源性(右图)特征肽的MRM迹线：(图3A)CD3ε197；(图3B)BTK 407；(图3C)BTK 545；(图3D)WASp 274；(图3E)WASp 289。
图4A-4D.测量的PIDD肽浓度的实验室间相关性。(图4A)WASp274；(图4B)CD3ε197；(图4C)BTK 407；(图4D)ATP7B 1056。
图5.WASp 289的实验室间分析验证。
图6A-6E.患者(Pt)之间特征肽水平的差异。(图6A)BTK 545；(图6B)BTK 407；(图6C)CD3ε197；(图6D)WASp 274；(图6E)WASp289(SCID：n＝3，WAS：n＝11，BTK：n＝26)和正常对照(NC，n＝40)。****p＜0.0001，*p＜0.05。
图7.ATP7B 1056特征肽浓度。
图8.来自盲法群组研究的正常对照中特征肽的定量。
图9.盲法患者群组研究中特征肽的浓度。
图10A、10B.接受者操作特征(ROC)图示出免疫-SRM对PIDD的诊断性能。(图10A)BTK 407、BTK 545、CD3ε197、WASp 274和WASp 289的ROC图。对于越来越严格的截断值，绘制真阳性和假阳性率。同一线(line of identity)表示不能将患者与对照区分开的测试。(图10B)图10A中所示的肽的曲线下面积(AUC)值和p值。
图11.从华盛顿州新生儿筛查实验室获得的DBS中的特征肽水平。
图12.在盲法群组研究中，特征肽与ATP7B肽的比率和患者诊断。
图13.患者和正常对照样品中CTNS和SHPK蛋白的浓度。黑色轮廓的样品已确认突变状态，而灰色轮廓的样品被预测为对于57kb缺失而言是纯合的。样品CTNS 00001-CTNS00013是盲的，并且预测的基因型是基于免疫-SRM所证明的蛋白质水平。
图14.比较使用CTNS 115的微流ionkey检测方法和新的纳流方法获得的信噪比(S/N)。每分钟纳升流速增强由CTNS 115靶肽产生的信号。
图15.在DBS中测量CTNS 115和SHPK 363浓度，并通过免疫-SRM预测基因型。如果肽的信噪比小于10，则认为未检测到肽(N.D.)。*表示此时的未知突变。
图16A-16D.在使用多克隆抗体和单克隆抗体进行WASp 274(图16B和16D)和BTK407(图16A和16C)的肽捕获时产生的内部标准肽峰面积。在仅空白对照样品(即没有患者血液，图16C、16D)中以及在患者和空白对照样品两者的聚集集合(图16A和16B)中测量峰面积。
图17.筛查胱氨酸病中患者和正常对照(NC)样品中的特征CTNS115和SHPK363肽水平。所述研究是对图13和表8中所示研究的扩展。
图18A-18C.16名WD患者的研究(NC：正常对照；Pt：威尔逊病患者)。(图18A)NC和WD患者中的ATP7B 1056浓度。第一列中的50个NC分别运行以设定实验室中的参考范围；中间列中的3个NC与所有16名WD患者一起运行作为质量控制。(图18B)NC和WD患者中的ATP7B214浓度。(图18C)NC和WD患者中的ATP7B887浓度。
图19.支持本公开的序列(SEQ ID NO：22-76和78-141)。
具体实施方式
存在许多具有有效治疗的疾病。然而，对于许多这些疾病，一旦出现症状，疾病就已经致命或导致不可逆转的损伤。此类疾病的实例包括原发性免疫缺陷疾病(PIDD)、胱氨酸病和威尔逊病(WD)。
PIDD是多种先天性疾病的集合，其特征在于缺乏或受损的免疫反应，包括：常染色体隐性CD3ε相关的严重联合免疫缺陷(SCID，OMIM#615615)；X连锁维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS，OMIM#301000)；和X连锁无丙种球蛋白血症(XLA，OMIM#300755)。尽管在遗传和临床上是异质的，但除非早期检测和治疗，否则这些病症导致致命的感染。尽管早期检测PIDD可挽救生命，但不幸的是，大多数受影响的婴儿只有在发展毁灭性感染后才能被诊断出。
SCID是由参与抗感染免疫细胞(如T细胞和B细胞)的发育和功能的不同基因的突变引起的一组罕见病症。SCID中涉及了十几种基因。SCID通常以常染色体隐性模式遗传，其中特定基因的两个拷贝(一个是从母亲那里遗传而一个是从父亲那里遗传)都含有缺陷。常染色体隐性SCID的最著名形式是由腺苷脱氨酶(ADA)缺乏引起的，其中婴儿缺乏T细胞存活所必需的ADA酶。由X染色体上的基因的突变引起的X连锁SCID主要影响男性。患有这种类型的SCID的男孩的白细胞异常生长和发育。结果，它们的T细胞和自然杀伤细胞数量少，并且它们的B细胞不起作用。SCID患者通常在生命早期受到严重的细菌、病毒或真菌感染，并且经常罹患肺部瘢痕、慢性腹泻和发育停滞。除非婴儿接受免疫恢复治疗，如造血干细胞移植、基因疗法或酶疗法，否则所述疾患通常在生命的一两年之内是致命的。
WAS是特征在于血小板数量和大小的减小的免疫缺陷。WAS是由产生WAS蛋白(WASp)的WAS基因中的突变引起的，并且通常被认为是具有两种其他病症的疾病谱的一部分：X连锁血小板减少症和严重先天性中性粒细胞减少症。这些疾患具有重叠的体征和症状以及相同的遗传原因。
与WAS相关的血小板数量和大小的减小导致形成血凝块的能力降低。这导致容易瘀伤以及在轻微创伤后长期出血的发作，这在一些情况下是危及生命的。患有WAS的个体对感染、自身免疫性病症(例如，湿疹)和某些癌症(例如，淋巴瘤)的易感性也增加。一旦确诊，就可用针对WAS的治疗。示例性治疗包括免疫球蛋白输注、抗生素和干细胞移植。基因疗法也正在探索作为WAS的治疗选择。
XLA是阻止B细胞正常发育的遗传性免疫缺陷。XLA是由称为布鲁顿(Bruton)酪氨酸激酶(BTK)的基因中的突变引起的。XLA导致不能产生防御细菌、病毒和其他异物所需的抗体。患有XLA的儿童通常在出生后的前1或2个月是健康的，因为他们受到出生前获得的母体抗体的保护。然而，在这段时间之后，母体抗体从体内清除，并且受影响的儿童发展反复感染。反复感染可导致器官损伤。一旦被诊断，就可采用抗体输注和抗生素形式的治疗来治疗XLA。
胱氨酸病是罕见的代谢紊乱，其中氨基酸胱氨酸进入细胞，但由于称为胱氨酸转运蛋白的胱氨酸特异性转运蛋白的缺陷而不能退出。由于胱氨酸转运的缺陷，细胞在细胞内部的细胞器，即溶酶体中累积胱氨酸晶体，从而导致细胞过早死亡。胱氨酸转运蛋白(CTNS)基因或区域中的90多种突变已被报告。西方人口中约有一半的胱氨酸病变体基因是由大的染色体缺失引起的，所述缺失从CTNS基因的一部分延伸到相邻的SHPK基因以及TRPV1(辣椒素受体)基因的初始部分。胱氨酸病慢慢破坏人体的器官，包括肾脏、肝脏、眼睛、肌肉和脑。患有婴儿型胱氨酸病的儿童在出生时看起来正常，但到9-10个月大时，具有包括过度口渴和排尿以及发育停滞的症状。如果早期诊断，就可能用半胱胺治疗，半胱胺是通过从细胞中除去胱氨酸来减缓胱氨酸病的进展的胱氨酸耗减剂。如果未及早诊断，通常需要进行肾移植。
威尔逊病(WD)是缓慢且进行性铜转运病症，其中过量的铜没有得到适当消除，并在诸如肝脏、肾脏和脑的重要器官中累积。WD是由ATP7B基因中的遗传缺陷引起的。如果未早期诊断和治疗，则WD导致不可逆的神经残疾和肝硬化。不幸的是，由于WD的缓慢进展和广谱临床症状，因此诊断WD仍然是困难的。因此，许多患者在诊断时仍表现为不可逆的且有时甚至是致命的多器官损伤。当及早诊断时，可用的治疗包括D-青霉胺、曲恩汀(trientine)和锌盐。
如果可在临床症状出现之前做出诊断，则将显著增强每种上述疾病的治疗。新生儿筛查(NBS)是针对美国每年出生的400万婴儿的标准公共预防性强制性筛查测试。NBS通常涉及在出生后24至48小时进行的血液测试。筛查使用沉积在滤纸上的几滴来自新生儿脚后跟的血液。含有干血斑(DBS)的纸张可储存，直到进行测试为止。
为了进行NBS评估，从DBS取出干血冲孔，并且进行实验室测试以检测血液中是否存在特定物质(称为标志物或生物标志物)，所述物质指示出生时不明显但在以后的生活中导致严重健康问题的病症。尽管所筛查的病症因国家而异，但大多数国家筛查苯丙酮尿症、原发性先天性甲状腺功能减退症、囊性纤维化和镰状细胞病。NBS已被证明在改善患者结果和避免受影响个体的长期残疾方面非常有效，同时降低医疗费用。
最近，已经针对SCID和一些X连锁或常染色体隐性无丙种球蛋白血症引入了来自滤纸上的干血斑(DBS)的T细胞受体切除环(TREC)分析和κ缺失元件重组环(KREC)筛查。然而，不存在用于其他PIDD的NBS方法。
串联质谱(MS/MS)于二十世纪九十年代首次应用于NBS，从而为快速筛查多种代谢物以及由此从出生时收集的DBS样品中筛查多种疾病铺平道路。Chace J MassSpectrom.Wiley-Blackwell；2009；44：163-170；Millington等人J.Inherit.Metab.Dis.1990；13：321-324；Sweetman等人Pediatrics.2006；117：S308-S314；Almannai等人Curr.Opin.Pediatr.2016；28：694-699；Watson等人Genet.Med.NaturePublishing Group；2006.第1S-252S页；Chace等人Clin.Chem.1993；39：66-71。在三重四极质谱仪上进行的选择性反应监测质谱(SRM-MS)进一步实现了对特定生物标志物的精确、高通量和分析上稳健的定量；因此，它现在已成为全球临床NBS实验室的护理标准。Chace DHJ Mass Spectrom.Wiley-Blackwell；2009；44：163-170；Chace和Kalas.ClinicalBiochemistry.2005；38：296-309。Dott等人American Journal of Medical GeneticsPart A.Wiley Subscription Services，Inc.，A Wiley Company；2006；140：837-842。
MS/MS依赖于上游浓缩代谢物的测量，以检测具有特定酶缺陷的各种先天性代谢错误。这排除将其应用于疾病，如PIDD，其中不存在或当前未验证累积的代谢物。为此，基于蛋白质的测定(如流式细胞术或蛋白质印迹)已被用作针对疾病(如WAS及其较轻度表型，X连锁血小板减少症(XLT))的一线研究方法，其中大多数突变导致蛋白质产物缺失或减少。Qasim等人Br.J.Haematol.2001；113：861-865；Jin等人Blood.American Society ofHematology；2004；104：4010-4019。这些方法要求可获得来自患者的完整血液样品或细胞，从而不可能对来自资源贫乏地区的患者进行基于群体的筛查或测试。
SRM-MS利用蛋白水解生成的特征肽作为目标蛋白的化学计量替代物。反过来，这可用于估计样品中表达所述蛋白质的特定细胞类型的数量(即对CD3ε进行定量以指示血液中CD3+ T细胞的数量)。MS对每种特征肽的高特异性由三种物理化学性质赋予-它的质量、在高效液相色谱(HPLC)分离时的保留时间以及所得的靶标特异性片段化模式。Kennedy等人Nat.Methods.2014；11：149-155。尽管取得了这些进展，但典型的定量极限范围是100至1000ng蛋白质/mL，使用复杂的基质(如血液或血浆)通常排除通过基于SRM-MS的测定对低丰度靶标的精确定量。这限制对导致仅在细胞内表达的靶蛋白水平缺失或降低的许多PIDD(包括SCID、WAS和XLA)的适用性。de Saint Basile等人J.Clin.Invest.American Societyfor Clinical Investigation；2004；114：1512-1517。
结合至SRM的肽免疫亲和富集(免疫-SRM)(也称为稳定同位素标准物和被抗肽抗体捕获(SISCAPA))通过在SRM-MS分析之前利用抗肽抗体来纯化和富集来自复杂生物样品的目标肽来提高SRM-MS测定的灵敏度。Zhao等人J Vis Exp.2011；53：2812；Whiteaker等人Mol.Cell Proteomics.American Society for Biochemistry and Molecular Biology；2010；9：184-196；Whiteaker等人Mol.Cell Proteomics.American Society forBiochemistry and Molecular Biology；2012；11：M111.015347；Kuhn等人Clin.Chem.2009；55：1108-1117；Anderson等人J Proteome Res.2004；3(2)：235-244。与SRM-MS结合的这种另外的肽富集步骤将检测极限从1mL血浆降至低pg蛋白/mL范围，其适用于精确定量复杂基质(如DBS)中的极低丰度蛋白。Whiteaker等人Mol.CellProteomics.American Society for Biochemistry and Molecular Biology；2010；9：184-196；Hoofnagle等人Clin.Chem.2008；54：1796-1804；Netzel等人Clin.Chem.2016；62：297-299；Razavi等人Bioanalysis.Future Science Ltd London，UK；2016；8：1597-1609。
先前已经证明了LC-MS/MS用于检测来自蛋白水解消化的人外周血单核细胞(PMBC)裂解物中的CD3ε、WASp和BTK的特征肽的能力。在盲法研究中，在正常对照PMBC中对肽水平进行了定量，但在受影响患者中以疾病特异性方式几乎无法检测到。Kerfoot等人Proteomics ClinAppl.2012；6：394-402。应用相同的蛋白质组学方法显示患有吡哆醇依赖性癫痫的患者的DBS中α-氨基己二酸半醛遗蛋白(α-AASA)和哌啶-6-羧酸酯(P6C)的水平升高，从而揭示了将其应用于NBS的可能性。Jung等人Mol.Genet.Metab.2013；110：237-240。为了提高测定的灵敏度和可再现性，利用免疫-SRM平台可定量DBS中非常低丰度的肽，如来自威尔逊病(WD)患者的ATP7B蛋白的替代肽。结果证明了免疫-SRM用于检测低皮摩尔(pmo1)范围内的ATP7B肽以及可再现性地区分WD患者和未受影响的个体的能力。Jung等人2017，同上。
尽管已经确立了在免疫-SRM测定中使用DBS来区分受某些疾病影响的个体与未受影响的个体的可行性，但所述测定的许多方面取决于所诊断的病症、每种病症可用的生物标志物、开发可富集目标肽的分子实体的能力以及每种目标肽在质谱仪中的行为。所有这些方面以及更多方面都需要仔细考虑和实验，以实现能够在临床症状出现之前使用DBS可靠地检测NBS组中的病症的可靠测定。
本公开提供了一种多重免疫-SRM方法，以从干血斑(DBS)可靠地诊断SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和WD。本文公开的多重免疫-SRM测定可利用针对在SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和WD中减少或不存在的蛋白质的肽产生的抗肽抗体。
现在更详细地描述本公开的以下方面：(I)DBS的收集和加工；(II)SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和威尔逊病的肽标志物；(III)DBS中蛋白质的酶消化；(IV)用于富集肽标志物的抗体；(V)肽的富集策略；(VI)液相色谱(LC)；(VII)质谱(MS)；(VIII)试剂盒；(IX)使用方法；(X)示例性实施方案；以及(XI)实验性实施例。
(I)DBS的收集和加工。在特定实施方案中，在本公开的方法中使用的样品是DBS。在特定实施方案中，可通过将血液置于滤纸卡上并使血液干燥来制备来自受试者的全血。
在特定实施方案中，可将来自受试者的全血收集在ACD(柠檬酸右旋糖)管中，并且可通过将50-100μL(例如，70μL)血液/斑吸移到滤纸卡(例如，Protein SaverTM 
卡，Whatman Inc，Piscataway，NJ)上且使其在室温下干燥来制备DBS。在特定实施方案中，使血液在滤纸卡上干燥过夜。可将DBS例如在-80℃下储存在密封塑料袋中直到使用。在特定实施方案中，整个DBS可用于本公开的免疫-SRM测定中。在特定实施方案中，来自DBS的一个或多个3mm冲孔可用于本公开的免疫-SRM测定中。
(II)SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和WD的肽标志物。存在许多来自靶蛋白的理论蛋白水解肽。这些可能是单克隆抗体产生的潜在候选物。尽管如此，在通过MS/MS筛查了它们的特征之后，选择了最佳的潜在候选肽。选择具有最高灵敏度和特异性的那些特征肽以开发相应的单克隆抗体，并使用临床样品进行验证。在特定实施方案中，多种肽和抗体可包括在多重分析中以使SRM测定的灵敏度和特异性最大化。
通常，选择一种或两种特征蛋白水解肽以化学计量地表示目标蛋白质，所述特征蛋白水解肽是目标蛋白质所特有的并且在MS实验中始终观察到。Mallick等人NatBiotechnol 2007；25：125-131。可通过在先前的MS实验中进行检测，使用计算工具来预测最有可能通过MS观察到的肽或两者的组合来选择特征肽。在特定实施方案中，可选择具有中等疏水性的长度为8-22个氨基酸的胰蛋白酶肽。由于HPLC中的保留时间变化和表面的损失，非常亲水性和非常疏水性的肽可能不稳定。在特定实施方案中，甲硫氨酸残基(氧化)、N末端谷氨酰胺(环化)、天冬酰胺随后是甘氨酸或脯氨酸(易于脱酰胺)和二元末端(例如相邻的赖氨酸或精氨酸残基，如KK、KR、RR、RK具有可变消化效率的潜力)可能是不希望的。Whiteaker和Paulovich Clin Lab Med.2011；31(3)：385-396。较短的肽和含有脯氨酸残基的那些肽可能是SRM的更好靶标。Lange等人Molecular Systems Biology 2008；4：222。
在特定实施方案中，肽包括CD3ε、WASp、BTK、CTNS、SHPK和/或ATP7B的部分。在特定实施方案中，肽包括SEQ ID NO：1-21。
在特定实施方案中，本公开的肽包括：用于SCID的CD3ε197；用于WAS的WASp 274；用于WAS的WASp 289；用于XLA的BTK407；用于XLA的BTK 545；用于胱氨酸病的CTNS 115；用于胱氨酸病的CTNS 120；用于胱氨酸病的CTNS 194；用于胱氨酸病的CTNS 360；用于胱氨酸病的SHPK 44；用于胱氨酸病的SHPK 363；用于胱氨酸病的SHPK 388；用于WD的ATP7B 214；用于WD的ATP7B 325；用于WD的ATP7B 466；用于WD的ATP7B 589；用于WD的ATP7B 621；用于WD的ATP7B 887；用于WD的ATP7B 1056；以及用于WD的ATP7B 1061。在特定实施方案中，可用于本公开的方法的蛋白水解产生的特征肽包括图1中的肽：CD3ε197(DLYSGLNQR，SEQ IDNO：1)；WASp 274(AGISEAQLTDAETSK，SEQ ID NO：2)；WASp 289(LIYDFIEDQGGLEAVR，SEQ IDNO：3)；BTK 407(ELGTGQFGVVK，SEQ ID NO：4)；BTK 545(YVLDDEYTSSVGSK，SEQ ID NO：5)；CTNS 115(FLVIR，SEQ ID NO：6)；CTNS 360(RPGYDQLN(SEQ ID NO：7)和KRPGYDQLN(SEQ IDNO：8))；SHPK 363(DTHLTITPTVLGER，SEQ ID NO：9)；ATP7B 325(VSLPDGAEGSGTDHR，SEQ IDNO：10)；以及ATP7B1056(VLAVVGTAEASSEHPLGVAVTK，SEQ ID NO：11)。在特定实施方案中，可用于本公开的方法的其他肽包括表1中的以下肽。
表1.本公开的其他示例性肽
(III)DBS中蛋白质的酶消化。可对DBS中的蛋白质进行蛋白水解以产生肽，可在通过LC-SRM-MS分析之前通过免疫亲和纯化进一步选择所述肽。可使用位点特异性内切蛋白酶，如胃蛋白酶、arg-C蛋白酶、asp-N肽链内切酶、BNPS-粪臭素、半胱天冬酶1、半胱天冬酶2、半胱天冬酶3、半胱天冬酶4、半胱天冬酶5、半胱天冬酶6、半胱天冬酶7、半胱天冬酶8、半胱天冬酶9、半胱天冬酶10、胰凝乳蛋白酶、梭菌蛋白酶(梭状杆菌肽酶B)、肠激酶、因子Xa、谷氨酰肽链内切酶、颗粒酶B、lysC、脯氨酸肽链内切酶、蛋白酶K、葡萄球菌肽酶I、嗜热菌蛋白酶、凝血酶和胰蛋白酶来完成蛋白水解。也可使用特异性地裂解位点的化学物质。酶和/或化学物质的组合可用于获得所需的分析物。
在特定实施方案中，可用胰蛋白酶将DBS中的蛋白质消化为肽。胰蛋白酶仅裂解精氨酸和赖氨酸残基的C末端，并且可以是产生肽的优选选择，因为所产生的肽的质量与大多数质谱仪的检测能力(高达2000m/z)相容，并且因为有高效的算法可用于生成理论胰蛋白酶产生的肽的数据库。高裂解特异性、可用性和成本是胰蛋白酶的其他优点。通过用胰蛋白酶处理蛋白质而形成的肽被称为胰蛋白酶肽。
(IV)用于富集肽标志物的抗体。抗体包含基本上由一种或多种免疫球蛋白基因或其片段编码的多肽配体，无论是天然的还是部分或全部合成产生的。抗体特异性地(或选择性地)结合并识别表位(例如，抗原)。抗体可包括具有与免疫球蛋白结合结构域同源或基本上同源的结合结构域的任何蛋白质。抗体可以是单克隆或多克隆的。抗体可以是任何免疫球蛋白类别的成员，包括任何人类别：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE等。识别的免疫球蛋白基因包括κ和λ轻链恒定区基因，α、γ、δ、ε和μ重链恒定区基因以及无数的免疫球蛋白可变区基因。抗体的“Fc”部分是指免疫球蛋白重链的包含一个或多个重链恒定区结构域CH1、CH2和CH3、但不包括重链可变区的部分。
完整抗体可包括通过二硫键相互连接的至少两条重链(H)和两条轻链(L)。每条重链由重链可变区(本文中缩写为VH或VH)和重链恒定区组成。重链恒定区包括三个结构域CH1、CH2和CH3。每条轻链由轻链可变区(在本文中缩写为VL或VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区包括一个结构域CL。VH区和VL区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其间散布着较保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，所述CDR和FR从氨基末端至羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的不同细胞(例如，效应细胞)以及经典补体系统的第一组分(Clq)。
给定CDR或FR的精确氨基酸序列边界可使用许多众所周知的方案中的任一种容易地确定，包括以下描述的那些方案：Kabat等人(1991)″Sequences of Proteins ofImmunological Interest，″第5版Public Health Service，National Institutes ofHealth，Bethesda，Md.(Kabat编号方案)；Al-Lazikani等人(1997)J Mol Biol 273：927-948(Chothia编号方案)；Maccallum等人(1996)J Mol Biol 262：732-745(Contact编号方案)；Martin等人(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.，86：9268-9272(AbM编号方案)；Lefranc M P等人(2003)Dev Comp Immunol 27(1)：55-77(IMGT编号方案)；以及Honegger和Pluckthun(2001)J Mol Biol 309(3)：657-670(″Aho″编号方案)。给定CDR或FR的边界可根据用于鉴定的方案而变化。例如，Kabat方案是基于结构比对，而Chothia方案是基于结构信息。Kabat和Chothia方案两者的编号均是基于最常见的抗体区域序列长度，并通过插入字母(例如“30a”)调节插入，并且一些抗体中出现缺失。这两种方案将某些插入和缺失(“插入缺失(indel)”)放置在不同的位置，从而产生不同的编号。Contact方案是基于复杂晶体结构的分析，并且在许多方面与Chothia编号方案相似。在特定实施方案中，本文公开的抗体CDR序列是根据Kabat编号。
抗体片段包括抗体的小于全长的任何衍生物或部分。在特定实施方案中，抗体片段保留全长抗体作为结合配偶体的特异性结合能力的至少大部分。抗体片段的实例包括Fab、Fab′、Fab′-SH、F(ab′)2、单链可变片段(scFv)、Fv、dsFv双抗体和Fd片段和/或免疫球蛋白的与本文所述的表位特异性地结合的任何生物学有效片段。抗体或抗体片段包括多克隆抗体、单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、合成抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、微型抗体和线性抗体的全部或一部分。
单链可变片段(scFv)是用短接头肽连接的免疫球蛋白重链和轻链的可变区的融合蛋白。Fv片段包括抗体的单臂的VL和VH结构域。虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由单独基因编码，但其可使用例如重组方法通过合成接头加以接合，所述合成接头使其能够以单一蛋白链形式制得，在所述单一蛋白链中，VL区和VH区配对以形成单价分子(单链Fv(scFv))。有关Fv和scFv的另外信息，参见例如，Bird等人，Science 242(1988)423-426；Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85(1988)5879-5883；Plueckthun，ThePharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore(编)，Springer-Verlag，New York)，(1994)269-315；WO1993/16185；美国专利号5,571,894；以及美国专利号5,587,458。
Fab片段是包含VL、VH、CL和CH1结构域的单价抗体片段。F(ab′)2片段是包含通过铰链区处的二硫桥键连接的两个Fab片段的二价片段。对于具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab′)2片段的讨论，参见美国专利5,869,046。双抗体包含两个可以是二价的表位结合位点。参见例如，EP 0404097；WO1993/01161；以及Holliger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90(1993)6444-6448。也可使用双重亲和力重靶向抗体(DARTTM；基于双抗体形式，但具有C末端二硫桥键以获得额外的稳定(Moore等人，Blood 117，4542-51(2011))。抗体片段也可包括分离的CDR。对于抗体片段的综述，参见Hudson等人，Nat.Med.9(2003)129-134。
可通过任何方式产生抗体片段。例如，抗体片段可通过完整抗体的片段化酶促或化学产生，或者它可从编码部分抗体序列的基因重组产生。或者，抗体片段可全部或部分合成产生。抗体片段可包括单链抗体片段。在另一个实施方案中，片段可包含例如通过二硫键联连接在一起的多个链。片段还可包含多分子复合物。功能性抗体片段通常可包含至少50个氨基酸，并且更通常将包含至少200个氨基酸。
在特定实施方案中，可产生重组免疫球蛋白。参见，Cabilly，US 4,816,567和Queen等人，Proc Natl Acad Sci USA，86：10029-10033(1989)。
如所指出的，在特定实施方案中，工程化的抗体或抗原结合片段的结合结构域可通过接头连接。接头是氨基酸序列，其可为工程化的抗体或抗原结合片段的结合结构域之间的构象运动提供柔性和空间。可使用任何适当的接头。接头的实例可在Chen等人，AdvDrug Deliv Rev.2013年10月15日；65(10)：1357-1369中找到。接头可以是柔性的、刚性的或半刚性的，取决于对靶标的所需功能结构域呈递。常用的柔性接头包括Gly-Ser接头，如GGSGGGSGGSG(SEQ ID NO：142)、GGSGGGSGSG(SEQ ID NO：143)和GGSGGGSG(SEQ ID NO：144)。另外的实例包括：GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：145)；GGGSGGGS(SEQ ID NO：146)；和GGSGGS(SEQ ID NO：147)。也可使用包含一个或多个抗体铰链区和/或免疫球蛋白重链恒定区的接头，如单独的CH3或CH2CH3序列。
在一些情况下，柔性接头可能不能维持特定用途所需的结合结构域的距离或定位。在这些情况下，刚性或半刚性接头可能是有用的。刚性或半刚性接头的实例包括富含脯氨酸的接头。在特定实施方案中，富含脯氨酸的接头是比仅基于偶然性所预期的具有更多脯氨酸残基的肽序列。在特定实施方案中，富含脯氨酸的接头是具有至少30％、至少35％、至少36％、至少39％、至少40％、至少48％、至少50％或至少51％脯氨酸残基的接头。富含脯氨酸的接头的具体实例包括富含脯氨酸的唾液蛋白(PRP)的片段。
本领域普通技术人员还将理解，抗体可经历多种翻译后修饰。这些修饰的类型和程度通常取决于用于表达抗体的宿主细胞系以及培养条件。此类修饰可包括糖基化、甲硫氨酸氧化、二酮哌嗪形成、天冬氨酸异构化和天冬酰胺脱酰胺的变化。
单克隆抗体包括从大致上均质抗体群体获得的抗体，即除在产生单克隆抗体期间可出现的可能变体(此类变体一般以少量存在)之外，构成所述群体的个别抗体相同和/或结合相同表位。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。这种类型的抗体是由单个产生抗体的杂交瘤的子细胞产生的。单克隆抗体通常对与其结合的任何表位展现单一结合亲和力。
修饰语“单克隆”指示从均质抗体群体获得的抗体的特性并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。单克隆抗体仅识别一种类型的抗原。本文的单克隆抗体包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而所述一条或多条链的剩余部分与源自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体以及此类抗体的片段中的对应序列相同或同源。用于产生抗体的技术在本领域中是众所周知的，并且描述于例如Harlow和Lane“Antibodies，ALaboratory Manual”，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1988；Harlow和Lane“Using Antibodies：A Laboratory Manual”Cold Spring Harbor Laboratory Press，1999；Tickle等人JALA：Journal of the Association for LaboratoryAutomation.2009；14(5)：303-307；Babcook等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1996；93：7843-7848；以及US 5,627,052中。
在特定实施方案中，“亲和力”是指分子(例如，抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，否则如本文中所用，“结合亲和力”是指内在结合亲和力，其反映结合对的成员(例如，抗体与肽)之间的1∶1相互作用。分子X对其配偶体Y的亲和力可通常由解离常数(KD)或缔合常数(KA)表示。亲和力可通过本领域中已知的常用方法来测量。
在特定实施方案中，“结合”是指抗体的结合结构域与其靶肽缔合的解离常数(KD)为10-8M或更低、在特定实施方案中为10-5M至10-13M、在特定实施方案中10-5M至10-10M、在特定实施方案中10-5M至10-7M、在特定实施方案至10-8M至10-13M或在特定实施方案中10-9M至10-13M。所述术语可进一步用于指示结合结构域不结合至存在的其他生物分子(例如，它以10-4M或更高、在特定实施方案中10-4M至1M的解离常数(KD)结合至其他生物分子)。
在特定实施方案中，“结合”是指抗体的结合结构域与其靶肽缔合的亲和常数(即，缔合常数，KA)为107M-1或更高、在特定实施方案中105M-1至1013M-1、在特定实施方案中105M-1至1010M-1、在特定实施方案中105M-1至108M-1、在特定实施方案中107M-1至1013M-1或在特定实施方案中107M-1至108M-1。所述术语可进一步用于指示结合结构域不结合至存在的其他生物分子(例如，它以104M-1或更低、在特定实施方案中104M-1至1M-1的缔合常数(KA)结合至其他生物分子)。
本公开的抗体可用于在SRM测定中检测的本文所述的肽的免疫亲和富集，以用于诊断SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和WD。高亲和力抗体的特定实施方案包括抗CD3ε197、抗WASp274、抗WASp 289、抗BTK 407、抗BTK 545、抗CTNS 115、抗CTNS 120、抗CTNS 194、抗CTNS360、抗SHPK 44、抗SHPK 363、抗SHPK 388、抗ATP7B 214、抗ATP7B 325、抗ATP7B 466、抗ATP7B 589、抗ATP7B 621、抗ATP7B 887、抗ATP7B 1056和抗ATP7B 1061。
在特定实施方案中，示例性抗体包括表2中所示的CDR。
表2.本公开的示例性抗肽抗体CDR：
在特定实施方案中，示例性抗体包括表3中所示的可变重链和可变轻链结构域。
表3.本公开的示例性抗肽抗体可变重链和可变轻链结构域：
在特定实施方案中，示例性抗体的氨基酸序列包括：具有前导序列的抗CD3ε197重链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：79)；具有前导序列的抗CD3ε197轻链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：81)；具有前导序列的抗WASp 274重链氨基酸序列(SEQ ID NO：83)；具有前导序列的抗WASp 274重链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：85)；无前导序列的抗WASp 274重链氨基酸序列(SEQ ID NO：86)；具有前导序列的抗WASp 274轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：88)；具有前导序列的抗WASp 274轻链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：90)；无前导序列的抗WASp 274轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：91)；具有前导序列的抗BTK407重链氨基酸序列(SEQ ID NO：93)；具有前导序列的抗BTK 407重链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：95)；无前导序列的抗BTK 407重链氨基酸序列(SEQ ID NO：96)；具有前导序列的抗BTK 407轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：98)；具有前导序列的抗BTK 407轻链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：100)；无前导序列的抗BTK 407轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：101)；具有前导序列的抗CTNS 115重链氨基酸序列(SEQ ID NO：103)；具有前导序列的抗CTNS 115重链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：105)；无前导序列的抗CTNS 115重链氨基酸序列(SEQ ID NO：106)；具有前导序列的抗CTNS 115轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：108)；具有前导序列的抗CTNS 115轻链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：110)；无前导序列的抗CTNS 115轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：111)；具有前导序列的抗CTNS 360重链氨基酸序列(SEQ ID NO：113)；具有前导序列的抗CTNS 360重链可变结构域氨基酸序列(SEQ IDNO：115)；无前导序列的抗CTNS 360重链氨基酸序列(SEQ ID NO：116)；具有前导序列的抗CTNS 360轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：118)；具有前导序列的抗CTNS 360轻链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：120)；无前导序列的抗CTNS 360轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：121)；具有前导序列的抗SHPK 363重链氨基酸序列(SEQ ID NO：123)；具有前导序列的抗SHPK 363重链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：125)；无前导序列的抗SHPK 363重链氨基酸序列(SEQ ID NO：126)；具有前导序列的抗SHPK 363轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：128)；具有前导序列的抗SHPK 363轻链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：130)；无前导序列的抗SHPK 363轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：131)；具有前导序列的抗ATP7B 1056重链氨基酸序列(SEQ ID NO：133)；具有前导序列的抗ATP7B 1056重链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：135)；无前导序列的抗ATP7B 1056重链氨基酸序列(SEQ ID NO：136)；具有前导序列的抗ATP7B 1056轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：138)；具有前导序列的抗ATP7B 1056轻链可变结构域氨基酸序列(SEQ ID NO：140)；以及无前导序列的抗ATP7B 1056轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：141)。
在特定实施方案中，示例性抗体的编码序列包括：具有前导序列的抗CD3ε197重链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：78)；具有前导序列的抗CD3ε197轻链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：80)；具有前导序列的抗WASp 274重链编码序列(EB0603-2F8-H2)(SEQ IDNO：82)；具有前导序列的抗WASp 274重链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：84)；具有前导序列的抗WASp 274轻链编码序列(EB0603-2F8-K2)(SEQ ID NO：87)；具有前导序列的抗WASp 274轻链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：89)；具有前导序列的抗BTK 407重链编码序列(EB0602-1G5-H2)(SEQ ID NO：92)；具有前导序列的抗BTK 407重链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：94)；具有前导序列的抗BTK 407轻链编码序列(EB0602-1G5-K1)(SEQ IDNO：97)；具有前导序列的抗BTK 407轻链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：99)；具有前导序列的抗CTNS 115重链编码序列(EB0606-3H8-H5)(SEQ ID NO：102)；具有前导序列的抗CTNS115重链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：104)；具有前导序列的抗CTNS 115轻链编码序列(EB0606-3H8-K7)(SEQ ID NO：107)；具有前导序列的抗CTNS 115轻链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：109)；具有前导序列的抗CTNS 360重链编码序列(EB0604-4E3-H4)(SEQ IDNO：112)；具有前导序列的抗CTNS 360重链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：114)；具有前导序列的抗CTNS 360轻链编码序列(EB0604-4E3-K1)(SEQ ID NO：117)；具有前导序列的抗CTNS 360轻链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：119)；具有前导序列的抗SHPK 363重链编码序列(EB0605B-6G12-H1)(SEQ ID NO：122)；具有前导序列的抗SHPK 363重链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：124)；具有前导序列的抗SHPK 363轻链编码序列(EB0605B-6G12-K1)(SEQ ID NO：127)；具有前导序列的抗SHPK 363轻链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：129)；具有前导序列的抗ATP7B 1056重链编码序列(EB0601-H3-1)(SEQ ID NO：132)；具有前导序列的抗ATP7B 1056重链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：134)；具有前导序列的抗ATP7B 1056轻链编码序列(EB0601-K3-2)(SEQ ID NO：137)；以及具有前导序列的抗ATP7B1056轻链可变结构域编码序列(SEQ ID NO：139)。
(V)肽的富集策略。SRM之前所需肽靶标的富集可通过本领域已知的任何方法来完成。可使用许多富集程序，包括来自样品的丰富蛋白质种类的基于免疫吸附的耗减、沉淀、色谱、电泳、溶剂分配、免疫沉淀、免疫电泳和免疫色谱。在特定实施方案中，可使用SISCAPA方法用于来自样品的消化物的单独胰蛋白酶肽的基于特异性抗体的捕获。Anderson等人，J.Proteome Research 2004；3：235-244；US 7,632,686。
在特定实施方案中，结合肽标志物的抗体(如本文公开的抗体)可连接至固体载体。特定实施方案使用亲和柱，其中抗体与色谱介质共价偶联。在特定实施方案中，POROS(Applied Biosystems，Foster City，CA)纳米柱可用于SISCAPA富集中，并且特征是高结合能力、允许快速富集靶肽的相对较高的抗体浓度以及制备具有多种官能化基团的色谱柱的能力。或者，抗体可附着于珠粒、磁珠或其他固体颗粒上。一种附着方式是抗体与包被在珠粒上的蛋白质的缀合。例如，蛋白G包被的颗粒以优选的取向提供抗体的结合。可使用其他附着方式，如用抗体直接包被珠粒。磁性颗粒具有广泛的化学性质，从而允许与抗体偶联。附着至颗粒上的抗体的富集可允许样品的并行加工。磁性颗粒加工已在用于SISCAPA富集步骤的96孔板中自动化，在所述板中具有洗脱液用于通过质谱进行分析。其他特定实施方案使用新颖的珠粒捕集装置，所述装置被开发来执行与纳流色谱系统一致的珠粒处理步骤。Anderson等人Mol Cell Proteomics 2009；8(5)：995-1005。这样可使洗脱与分析步骤之间肽在容器中的损失最小化。也可通过将抗肽抗体固定在移液管尖端中来实现肽富集。Nelson等人Anal Chem.1995；67(7)：1153-1158。将抗体结合的肽与游离肽分离后，可洗脱结合的肽。可使用任何洗脱方法。已发现有效的一种洗脱方式是5％乙酸/3％乙腈。对于特定的肽有效的是，可使用其他洗脱方式，包括其他酸和其他浓度的乙酸。
(VI)液相色谱(LC)。在特定实施方案中，在SRM-MS之前进行一个或多个LC纯化步骤。可使富集肽的混合物(流动相)通过填充有材料(固定相)的色谱柱，以基于肽的重量和对柱的流动相和固定相的亲和力来使所述肽分离。传统的LC分析依赖于样品组分与色谱柱填充材料之间的化学相互作用，其中样品通过柱的层流是从测试样品中分离出目标分析物的基础。熟练技术人员将理解，在这种柱中的分离是扩散过程。多种柱填充材料可用于样品的色谱分离，并且适当分离方案的选择是取决于样品特性、目标分析物、存在的干扰物质及其特性等的经验过程。可根据需要(例如，所纯化的化合物的结构、极性和溶解性)使用各种填充化学物质。在特定实施方案中，所述柱是极性柱、离子交换柱(阳离子和阴离子两者)、疏水相互作用柱、苯基柱、C-2柱、C-8柱、C-18柱、多孔聚合物上的极性涂层或可商购的其他柱。在色谱过程中，材料的分离受变量如洗脱液(也称为“流动相”)的选择、梯度洗脱的选择以及梯度条件、温度等的影响。在特定实施方案中，分析物可通过在柱填充材料可逆地保留目标分析物而不保留一种或多种其他材料的条件下，将样品施加到柱上来进行纯化。在这些实施方案中，可使用第一流动相条件，在所述第一流动相条件下目标分析物被柱保留，并且一旦将未保留的材料洗涤通过，就可随后使用第二流动相条件从柱中除去所保留的材料。或者，可通过在流动相条件下将样品施加到柱上来纯化分析物，在所述流动相条件下，与一种或多种其他材料相比，目标分析物以不同的速率洗脱。如上所述，相对于样品的一种或多种其他组分，此类程序可富集一种或多种目标分析物的量。在特定实施方案中，LC是纳流LC(nanoLC)。在纳流LC(nanoLC)中，色谱分离是使用每分钟低纳升范围内的流速进行的，这导致由于这种类型的色谱提供的高浓缩效率所致的高分析灵敏度。Cutillas，CurrentNanoscience，2005；1：65-71。
(VII)质谱(MS)。质谱仪包括测量可转换为气相离子的质荷(m/z)比的参数的气相离子谱仪。质谱法是指使用质谱仪检测气相离子。质谱仪通常包括离子源和质量分析仪。质谱仪的实例是飞行时间(TOF)、磁性扇区、四极过滤器、离子阱、离子回旋共振、静电扇区分析仪以及这些的杂合体。激光解吸质谱仪包括使用激光能量作为解吸、挥发和电离分析物的手段的质谱仪。串联质谱仪包括能够执行两个连续阶段的基于m/z的离子(包括离子混合物中的离子)辨别或测量的任何质谱仪。所述短语包括具有两个质量分析仪的质谱仪，所述质量分析仪能够执行两个连续阶段的基于m/z的空间串联离子辨别或测量。所述短语还包括具有单个质量分析仪的质谱仪，所述质量分析仪能够执行两个连续阶段的基于m/z的时间串联离子辨别或测量。因此，所述短语明确地包括Qq-TOF质谱仪、离子阱质谱仪、离子阱-TOF质谱仪、TOF-TOF质谱仪、傅立叶变换离子回旋共振质谱仪、静电扇区-磁性扇区质谱仪以及它们的组合。
质谱中的电离包括将样品中的分析物电离的过程。此类分析物可能变成用于进一步分析的带电分子。例如，样品电离可通过电喷射电离(ESI)、激光喷射电离(LSI)、大气压化学电离(APCI)、光致电离、电子电离、快速原子轰击(FAB)/液相次级电离(LSIMS)、基质辅助激光解吸电离(MALDI)、场致电离、场解吸、热喷射/等离子体喷射电离以及粒子束电离来进行。熟练技术人员将理解可基于待测量的分析物、样品类型、检测器类型、正负模式的选择等确定电离方法的选择。
质量分析仪包括质谱仪的部件，所述部件吸收离子化的质量，并根据m/z比将它们分离，并且将它们输出至检测器，在检测器中对它们进行检测，然后转换为数字输出。用于确定m/z比的合适质量分析仪包括四极质量分析仪、飞行时间(TOF)质量分析仪、磁性或静电扇区质量分析仪和离子阱(例如离子回旋共振)质量分析仪。
选择性反应监测(SRM)-MS测定针对给定的目标蛋白质靶向一组预定肽。SRM是串联质谱模式，其中在串联质谱的第一阶段中选择特定质量的离子(母离子或前体离子)，然后在第二质谱检测阶段中选择前体离子的片段化反应的离子产物。与选定的前体离子和碎片离子相关的特定对的m/z值称为跃迁。对于每种特征肽，鉴定提供最佳信号强度并将目标肽与样品中存在的其他种类区分开的那些碎片离子。优化的跃迁有助于有效的SRM测定。随时间推移监测几个这样的跃迁(前体/碎片离子对)，从而生成一组色谱迹线，其中特定跃迁的保留时间和信号强度作为坐标。特征肽的SRM-MS分析通常在三重四极质谱仪(QQQ-MS)上进行，所述质谱仪是能够选择性地分离对应于特征肽的m/z的前体离子并选择性地监测肽特异性碎片离子的仪器。在SRM分析中，特异性取决于多个质量分析仪(质量过滤器)。第一个四极用于选择所需的母离子或前体离子。第三个四极用于监测(一种或多种)碎片离子。碎片离子是通过第二个四极中的碰撞诱导解离产生的。两个级别的质量选择允许高选择性，因为共洗脱背景离子非常有效地被滤出。与调查样品中的所有分析物的常规串联质谱(MS/MS)实验不同，SRM分析选择性地靶向(过滤)特定分析物，与常规的“全扫描”技术相比，其转化为灵敏度提高一个或两个数量级。此外，SRM在高达五个数量级的宽动态范围内提供线性响应。这样使得能够检测高度复杂混合物中的低丰度蛋白质。因此，SRM是具有低背景干扰的高度特异性检测/监测方法。当在单次MS运行中监测多种母离子时，这种类型的分析被称为多反应监测(MRM)。使用MRM分析，可在单次质谱运行中监测多种蛋白质和蛋白质的多个区域(特征肽)。选择性反应监测/多反应监测质谱(SRM/MRM-MS)描述于例如US 8,383,417、WO 2013/106603和US 2013/105684中。
在特定实施方案中，以下参数可用于指定在特定LC-SRM-MS系统下蛋白质的LC-SRM-MS测定：(1)富集给定蛋白质的胰蛋白酶肽；(2)肽在LC柱上的保留时间(RT)；(3)肽前体离子的m/z值；(4)用于使前体离子电离的去簇电位；(5)由肽前体离子产生的碎片离子的m/z值；以及(6)用于使针对特定肽而优化的肽前体离子碎裂的碰撞能量(CE)。RT包括分析物的注入与洗脱之间经过的时间。去簇电位(DP)包括溶解和解离离子簇的电压电位。取决于制造商，它也被称为“碎裂电压”或“离子转移毛细管偏移电压”。碰撞能量(CE)包括前体离子在它们加速进入碰撞池时所接收的能量的量。
为了通过本文公开的方法促进肽的准确定量，可将已知量的一组目标同位素标记的合成型式的肽添加到样品中，以用作内部标准物。由于同位素标记的肽具有与相应的替代肽相同的物理和化学性质，因此它们从色谱柱共洗脱，并容易在所得质谱图中鉴别。Gerber等人Proc.Natl.Asso.Sci.2003；100：6940-6945；Kirkpatrick等人Methods 2005；35：265-273。可用来标记给定肽中的氨基酸的同位素包括13C、2H、15N、17O、18O和34S。在特定实施方案中，用13C和/或15N重同位素标记肽。标记的标准物的添加可在蛋白水解消化之前或之后进行。在特定实施方案中，在LC-MRM-MS测定之前添加标记的内部标准肽。合成同位素标记的肽的方法是本领域技术人员已知的。因此，在特定实施方案中，实验样品含有内部标准肽。在特定实施方案中，内部标准肽包括参考特征肽。在特定实施方案中，可通过组合以下来确定特征肽浓度：(i)通过比较特征肽的峰面积与从LC-MRM-MS测定获得的其相应的参考特征肽的峰面积而计算的比率，和(ii)参考特征肽的已知浓度。被选择作为参考标准并适合定量的肽有时被称为quantotypic肽(Q-肽)。Q-肽不仅具有蛋白水解肽的所有特征，而且对可构成参考肽的残基施加了限制以消除人工修饰和/或不完全裂解。Holman等人Bioanalysis 2012；4(14)：1763-1786。
一种或多种给定蛋白质的绝对定量水平可通过SRM/MRM方法确定，其中将一种生物样品中来自给定蛋白质的单个肽的SRM/MRM特征峰面积与已知量的“加标”内部标准物的SRM/MRM特征峰面积进行比较。在特定实施方案中，所述内部标准物是合成型式的相同的精确肽，其含有用一种或多种重同位素标记的一个或多个氨基酸残基。合成此类同位素标记的内部标准物，由此质谱分析产生与天然肽特征峰不同且截然不同并可用作比较峰的可预测且一致的SRM/MRM特征峰。因此，当将内部标准物以已知量掺入到生物样品的蛋白质制剂中并通过质谱分析时，将天然肽的特征峰面积与内部标准肽的特征峰面积进行比较，并且这种数值比较指示存在于来自生物样品的原始蛋白质制剂中的天然肽的绝对摩尔浓度和/或绝对重量。片段肽的绝对定量数据根据每种样品中所分析的蛋白质的量来显示。绝对定量可对于许多肽进行，并且因此同时定量在单一样品中的多种蛋白质；和/或对于多种样品进行，以获得对于在单个生物样品中和/或在整组的单个样品中绝对蛋白质量的了解。
肽绝对定量的另一种策略是通过均衡肽的等摩尔性。这种方法包括化学合成呈二肽形式的目标同位素标记的Q-肽。常见的氨基酸序列位于Q-肽的N末端，并且被称为均衡肽。在溶解和蛋白水解消化后，可通过参考单个光标记的肽来准确地确定Q-肽的量。然后可将适当量的每种标准肽添加到目标样品中(预先消化或在蛋白水解之前)，以促进绝对定量。Holzmann等人Anal.Chem.2009；81：10254-10261。绝对定量也可使用定量多联体(QconCAT)蛋白质。Beynon等人Nat.Methods 2005；2：587-589；Johnson等人J.Am.Soc.MassSpectrom.2009；20：2211-2220；Ding等人J.Proteome Res.2011；10：3652-3659；Carroll等人Molecular&Cellular Proteomics 2011；9月19日：mcp-M111。在这种策略中，在稳定的同位素富集培养基中生长的大肠杆菌中异源产生了重组人工蛋白质，所述蛋白质是来自几种目标蛋白质的标准肽的亲和标记的级联。然后将QconCAT蛋白亲和纯化并与样品共消化，从而产生组成其的所有“重”Q-肽的化学计量混合物，并且随后分析来自天然蛋白和内部标准物的蛋白水解肽。QconCAT方法的一种变型，称为肽级联标准物(PCS)，在人工蛋白质序列中的Q肽之间使用反映它们的内源环境的侧翼区。Kito等人J.Proteome Res.2007；6：792-800。其他特定实施方案使用用于绝对定量的蛋白质标准物(PSAQ)。Brun等人Mol.Cell.Proteomics 2007；6：2139-2149。PSAQ使用重组蛋白，而不是来自几种蛋白质的肽的级联，待定量的整个蛋白质以稳定的同位素标记形式表达。然后可将一种或几种PSAQ添加到样品的预消化物中以有助于定量。
特定实施方案使用无标记的策略进行蛋白质定量，如基于强度的测量(America和Cordewener，Proteomics 2008；8：731-749)或光谱计数(Lundgren等人ExpertRev.Proteomics 2010；7：39-53)。
为了获得给定肽的相对定量水平，可将一种生物样品中来自给定蛋白质的单个肽或多个肽的质谱分析得出的特征峰面积(或峰高，如果峰被充分解析)与使用相同SRM/MRM方法针对一种或多种另外且不同的生物样品中来自相同蛋白质的相同的一种或多种肽确定的特征峰面积进行比较。以此方式，在相同的实验条件下，相对于两种或更多种生物样品中来自相同蛋白质的相同的一种或多种肽，确定了来自给定蛋白质的特定的一种或多种肽的量。另外，相对定量可通过比较通过SRM/MRM方法得到的一种或多种给定肽的特征峰面积与来自在来自生物样品的相同蛋白质制剂内的不同蛋白质的一种或多种另外且不同的肽的特征峰面积而对于来自在单一样品内的单一蛋白质的所述一种或多种给定肽来确定。以这种方式，相对于同一样品中的另一种蛋白质，确定了来自给定蛋白质的特定肽的量，并且因此确定了给定蛋白质的量。这些方法产生来自给定蛋白质的单个肽或多个肽的定量，以及样品之间和样品内来自相同蛋白质或来自不同蛋白质的另一种或多种肽的量，其中如由特征峰面积确定的量是相对于彼此而言，不管来自生物样品的蛋白质制剂中肽的绝对重量/体积或重量/重量的量。有关不同样品之间各个特征峰面积的相对定量数据可标准化为每种样品所分析的蛋白质的量。可在单个样品中同时跨多个肽和/或跨多个样品进行相对定量，以了解相对蛋白质的量。
特征肽水平可以浓度单位(例如，pmol/L)表示。在特定实施方案中，可将源自针对SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD进行筛查的受试者的测试样品中的特征肽的平均浓度与正常对照样品中的相应肽的平均浓度进行比较。在特定实施方案中，正常对照样品可源自一个或多个正常对照受试者或源自正常对照受试者群体。在特定实施方案中，正常对照受试者包括未患有或未知患有SCID、WAS、XLA、胱氨酸病或WD的受试者。在特定实施方案中，正常对照受试者包括不具有与SCID、WAS、XLA、胱氨酸病或WD相关的基因突变的受试者。
在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中CD3ε特征肽的平均浓度包括在70pmol/L至400pmol/L的范围内、在80pmol/L至300pmol/L的范围内和在90pmol/L至200pmol/L的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中CD3ε特征肽的平均浓度包括70pmol/L、80pmol/L、90pmol/L、100pmol/L、110pmol/L、120pmol/L、130pmol/L、140pmol/L、150pmol/L、160pmol/L、170pmol/L、180pmol/L、190pmol/L、200pmol/L、210pmol/L、220pmol/L、230pmol/L、240pmol/L、250pmol/L、260pmol/L、270pmol/L、280pmol/L、290pmol/L、300pmol/L、310pmol/L、320pmol/L、330pmol/L、340pmol/L、350pmol/L、360pmol/L、370pmol/L、380pmol/L、390pmol/L、400pmol/L或更高的浓度。
在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中WASp274特征肽的平均浓度包括在600pmol/L至5000pmol/L的范围内、在700pmol/L至3000pmol/L的范围内和在800pmol/L至2500pmol/L的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中WASp 274特征肽的平均浓度包括600pmol/L、700pmol/L、800pmol/L、900pmol/L、1000pmol/L、1100pmol/L、1200pmol/L、1300pmol/L、1400pmol/L、1500pmol/L、1600pmol/L、1700pmol/L、1800pmol/L、1900pmol/L、2000pmol/L、2100pmol/L、2200pmol/L、2300pmol/L、2400pmol/L、2500pmol/L、2600pmol/L、2700pmol/L、2800pmol/L、2900pmol/L、3000pmol/L、3100pmol/L、3200pmol/L、3300pmol/L、3400pmol/L、3500pmol/L、3600pmol/L、3700pmol/L、3800pmol/L、3900pmol/L、4000pmol/L、4100pmol/L、4200pmol/L、4300pmol/L、4400pmol/L、4500pmol/L、4600pmol/L、4700pmol/L、4800pmol/L、4900pmol/L、5000pmol/L或更高的浓度。
在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中WASp289特征肽的平均浓度包括在5500pmol/L至15000pmol/L的范围内、在6000pmol/L至14000pmol/L的范围内和在6500pmol/L至13000pmol/L的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中WASp 289特征肽的平均浓度包括5500pmol/L、5600pmol/L、5700pmol/L、5800pmol/L、5900pmol/L、6000pmol/L、6100pmol/L、6200pmol/L、6300pmol/L、6400pmol/L、6500pmol/L、6600pmol/L、6700pmol/L、6800pmol/L、6900pmol/L、7000pmol/L、7100pmol/L、7200pmol/L、7300pmol/L、7400pmol/L、7500pmol/L、7600pmol/L、7700pmol/L、7800pmol/L、7900pmol/L、8000pmol/L、8100pmol/L、8200pmol/L、8300pmol/L、8400pmol/L、8500pmol/L、8600pmol/L、8700pmol/L、8800pmol/L、8900pmol/L、9000pmol/L、9800pmol/L、9900pmol/L、10000pmol/L、10100pmol/L、10200pmol/L、10300pmol/L、10400pmol/L、10500pmol/L、10600pmol/L、10700pmol/L、10800pmol/L、10900pmol/L、11000pmol/L、11100pmol/L、11200pmol/L、11300pmol/L、11400pmol/L、11500pmol/L、11600pmol/L、11700pmol/L、11800pmol/L、11900pmol/L、12000pmol/L、12100pmol/L、12200pmol/L、12300pmol/L、12400pmol/L、12500pmol/L、12600pmol/L、12700pmol/L、12800pmol/L、12900pmol/L、13000pmol/L、13100pmol/L、13200pmol/L、113300pmol/L、13400pmol/L、13500pmol/L、13600pmol/L、13700pmol/L、13800pmol/L、13900pmol/L、14000pmol/L、14100pmol/L、14200pmol/L、14300pmol/L、14400pmol/L、14500pmol/L、14600pmol/L、14700pmol/L、14800pmol/L、14900pmol/L、15000pmol/L或更高的浓度。
在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中BTK 407特征肽的平均浓度包括在350pmol/L至2500pmol/L的范围内、在450pmol/L至2400pmol/L的范围内和在550pmol/L至2300pmol/L的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中BTK 407特征肽的平均浓度包括350pmol/L、400pmol/L、450pmol/L、500pmol/L、550pmol/L、600pmol/L、650pmol/L、700pmol/L、750pmol/L、800pmol/L、850pmol/L、900pmol/L、1000pmol/L、1100pmol/L、1200pmol/L、1300pmol/L、1400pmol/L、1500pmol/L、1600pmol/L、1700pmol/L、1800pmol/L、1900pmol/L、2000pmol/L、2100pmol/L、2200pmol/L、2300pmol/L、2400pmol/L、2500pmol/L或更高的浓度。
在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中BTK 545特征肽的平均浓度包括在550pmol/L至1600pmol/L的范围内、在650pmol/L至1500pmol/L的范围内和在750pmol/L至1400pmol/L的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中BTK 545特征肽的平均浓度包括550pmol/L、600pmol/L、650pmol/L、700pmol/L、750pmol/L、800pmol/L、850pmol/L、900pmol/L、950pmol/L、1000pmol/L、1050pmol/L、1100pmol/L、1150pmol/L、1200pmol/L、1250pmol/L、1300pmol/L、1350pmol/L、1400pmol/L、1450pmol/L、1500pmol/L、1550pmol/L、1600pmol/L或更高的浓度。
在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中CTNS 115特征肽的平均浓度包括在40pmol/L至250pmol/L的范围内、在50pmol/L至200pmol/L的范围内和在60pmol/L至150pmol/L的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中CTNS115特征肽的平均浓度包括40pmol/L、45pmol/L、50pmol/L、55pmol/L、60pmol/L、65pmol/L、70pmol/L、75pmol/L、80pmol/L、85pmol/L、90pmol/L、95pmol/L、100pmol/L、110pmol/L、120pmol/L、130pmol/L、140pmol/L、150pmol/L、160pmol/L、170pmol/L、180pmol/L、190pmol/L、200pmol/L、210pmol/L、220pmol/L、230pmol/L、240pmol/L、250pmol/L或更高的浓度。
在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中SHPK363特征肽的平均浓度包括在100pmol/L至8000pmol/L的范围内、在300pmol/L至7000pmol/L的范围内和在500pmol/L至6000pmol/L的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中SHPK 363特征肽的平均浓度包括100pmol/L、200pmol/L、300pmol/L、400pmol/L、500pmol/L、600pmol/L、700pmol/L、800pmol/L、900pmol/L、1000pmol/L、1500pmol/L、2000pmol/L、2500pmol/L、3000pmol/L、3500pmol/L、4000pmol/L、4500pmol/L、5000pmol/L、5500pmol/L、6000pmol/L、6500pmol/L、7000pmol/L、7500pmol/L、8000pmol/L或更高的浓度。
在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中ATP7B 214特征肽的平均浓度包括在30pmol/L至100pmol/L的范围内、在40pmol/L至90pmol/L的范围内和在50pmol/L至80pmol/L的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中ATP7B214特征肽的平均浓度包括30pmol/L、35pmol/L、40pmol/L、45pmol/L、50pmol/L、55pmol/L、60pmol/L、65pmol/L、70pmol/L、75pmol/L、80pmol/L、85pmol/L、90pmol/L、95pmol/L、100pmol/L或更高的浓度。
在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中ATP7B 887特征肽的平均浓度包括在200pmol/L至500pmol/L的范围内、在250pmol/L至450pmol/L的范围内和在300pmol/L至400pmol/L的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中ATP7B 887特征肽的平均浓度包括200pmol/L、210pmol/L、220pmol/L、230pmol/L、240pmol/L、250pmol/L、260pmol/L、270pmol/L、280pmol/L、290pmol/L、300pmol/L、310pmol/L、320pmol/L、330pmol/L、340pmol/L、350pmol/L、360pmol/L、370pmol/L、380pmol/L、390pmol/L、400pmol/L、410pmol/L、420pmol/L、430pmol/L、440pmol/L、450pmol/L、460pmol/L、470pmol/L、480pmol/L、490pmol/L、500pmol/L或更高的浓度。
在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中ATP7B 1056特征肽的平均浓度包括在90pmol/L至400pmol/L的范围内、在100pmol/L至300pmol/L的范围内和在150pmol/L至250pmol/L的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的DBS中ATP7B 1056特征肽的平均浓度包括90pmol/L、100pmol/L、110pmol/L、120pmol/L、130pmol/L、140pmol/L、150pmol/L、160pmol/L、170pmol/L、180pmol/L、190pmol/L、200pmol/L、210pmol/L、220pmol/L、230pmol/L、240pmol/L、250pmol/L、260pmol/L、270pmol/L、280pmol/L、290pmol/L、300pmol/L、310pmol/L、320pmol/L、330pmol/L、340pmol/L、350pmol/L、360pmol/L、370pmol/L、380pmol/L、390pmol/L、400pmol/L或更高的浓度。
可通过相关领域中已知的任何方法来合成一种或多种标准肽。此类合成肽还可包含具有一种或多种天然修饰的氨基酸。此类天然修饰可包括谷氨酰胺和天冬酰胺的脱氨基、胺化、氧化和羟基化。
(VIII)使用方法。本公开的方法包括鉴定患有SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD中的一种或多种的个体。在特定实施方案中，例如，作为NBS的一部分，或在个体的病症症状明显之前，早期诊断患有SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD的个体。
本公开的方法包括获得DBS样品。在特定实施方案中，根据上述方法获得DBS。在特定实施方案中，从储存DBS以供将来测试的DBS储库或实验室获得DBS。
本公开的方法包括用消化酶消化DBS中的蛋白质。在特定实施方案中，可在适当的缓冲液中溶解DBS的一个或多个冲孔或整个DBS，并且可添加上述适当的消化酶以将存在于DBS中的蛋白质消化成肽片段。在特定实施方案中，DBS可用50mM碳酸氢铵(pH 8)中的0.1％ProteaseMaxTM溶解并用胰蛋白酶消化。
本公开的方法包括富集用于筛查SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD的特征肽。特征肽包括用于SCID的CD3ε197；用于WAS的WASp 274；用于WASp的WASp 289；用于XLA的BTK407；用于XLA的BTK 545；用于胱氨酸病的CTNS 115；用于胱氨酸病的CTNS 120；用于胱氨酸病的CTNS 194；用于胱氨酸病的CTNS 360；用于胱氨酸病的SHPK 44；用于胱氨酸病的SHPK363；用于胱氨酸病的SHPK 388；用于WD的ATP7B 214；用于WD的ATP7B 325；用于WD的ATP7B466；用于WD的ATP7B 589；用于WD的ATP7B 621；用于WD的ATP7B 887；用于WD的ATP7B 1056；以及用于WD的ATP7B 1061。在特定实施方案中，特征肽包括图1中公开的肽：用于SCID的CD3ε197；用于WAS的WASp 274；用于WAS的WASp 289；用于XLA的BTK 407；用于XLA的BTK 545；用于胱氨酸病的CTNS 115；用于胱氨酸病的CTNS 360；用于胱氨酸病的SHPK 363；用于WD的ATP7B 325；以及用于WD的ATP7B 1056。在特定实施方案中，特征肽包括表1的肽：用于胱氨酸病的CTNS 120；用于胱氨酸病的CTNS 194；用于胱氨酸病的SHPK 44；用于胱氨酸病的SHPK 388；用于WD的ATP7B 214；用于WD的ATP7B 466；用于WD的ATP7B 589；用于WD的ATP7B621；用于WD的ATP7B 887；以及用于WD的ATP7B 1061。在特定实施方案中，富集特征肽包括使来自消化的DBS的肽片段的混合物与识别所述特征肽的一种或多种结合实体接触。在特定实施方案中，结合实体是抗体或其抗原结合片段。在特定实施方案中，所述抗体包括以上表2和3中公开的那些。在特定实施方案中，本公开的抗体的氨基酸序列包括SEQ ID NO：79、81、83、85、86、88、90、91、93、95、96、98、100、101、103、105、106、108、110、111、113、115、116、118、120、121、123、125、126、128、130、131、133、135、136、138、140和141。在特定实施方案中，本公开的抗体的编码序列包括SEQ ID NO：78、80、82、84、87、89、92、94、97、99、102、104、107、109、112、114、117、119、122、124、127、129、132、134、137和139。在特定实施方案中，抗体包括结合CD3ε197、WASp 274、WASp 289、BTK 407、RTK 545、CTNS 115、CTNS 120、CTNS194、SHPK 44、SHPK 363、SHPK 388、ATP7B 214、ATP7B 325、ATP7B 466、ATP7B 589、ATP7B621、ATP7B 887、ATP7B 1056和ATP7B 1061的抗体。
在特定实施方案中，包含SEQ ID NO：22-27、63和64的抗体用于富集包含SEQ IDNO：1的CD3ε肽。
在特定实施方案中，包含SEQ ID NO：28-33、65和66的抗体用于富集包含SEQ IDNO：2的WASp肽。在特定实施方案中，抗体用于富集包含SEQ ID NO：3的WASp肽。
在特定实施方案中，包含SEQ ID NO：34-38、67和68的抗体用于富集包含SEQ IDNO：4的BTK肽。在特定实施方案中，抗体用于富集包含SEQ ID NO：5的BTK肽。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查SCID、WAS和XLA：结合至包含SEQ IDNO：1的CD3ε肽的包含SEQ ID NO：22-27、63和64的抗体；结合至包含SEQ ID NO：2的WASp肽的包含SEQ ID NO：28-33、65和66的抗体；结合至包含SEQ ID NO：3的WASp肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：4的BTK肽的包含SEQ ID NO：34-38、67和68的抗体；以及结合至包含SEQ IDNO：5的BTK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查SCID、WAS和XLA：结合至包含SEQ IDNO：1的CD3ε肽的包含SEQ ID NO：22-27、63和64的抗体；结合至包含SEQ ID NO：2的WASp肽的包含SEQ ID NO：28-33、65和66的抗体；结合至包含SEQ ID NO：3的WASp肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：4的BTK肽的包含SEQ ID NO：34-38、67和68的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查SCID、WAS和XLA：结合至包含SEQ IDNO：1的CD3ε肽的包含SEQ ID NO：22-27、63和64的抗体；结合至包含SEQ ID NO：2的WASp肽的包含SEQ ID NO：28-33、65和66的抗体；结合至包含SEQ ID NO：4的BTK肽的包含SEQ IDNO：34-38、67和68的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：5的BTK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查SCID、WAS和XLA：结合至包含SEQ IDNO：1的CD3ε肽的包含SEQ ID NO：22-27、63和64的抗体；结合至包含SEQ ID NO：2的WASp肽的包含SEQ ID NO：28-33、65和66的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：4的BTK肽的包含SEQID NO：34-38、67和68的抗体。
在特定实施方案中，包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体用于富集包含SEQ IDNO：6的CTNS肽。在特定实施方案中，包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体用于富集包含SEQID NO：7和8的CTNS肽。在特定实施方案中，抗体用于富集SEQ ID NO：12的CTNS肽。在特定实施方案中，抗体用于富集SEQ ID NO：13的CTNS肽。
在特定实施方案中，包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体用于富集包含SEQ IDNO：9的SHPK肽。在特定实施方案中，抗体用于富集SEQ ID NO：14的SHPK肽。在特定实施方案中，抗体用于富集SEQ ID NO：15的SHPK肽。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ IDNO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；结合至包含SEQ IDNO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；结合至包含SEQ IDNO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ IDNO：51-56、73和74的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；以及结合至包含SEQID NO：14的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；以及结合至包含SEQID NO：14的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ IDNO：51-56、73和74的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；以及结合至包含SEQID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；以及结合至包含SEQID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQID NO：51-56、73和74的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；和结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体。
本领域普通技术人员可认识到，可使用选自以下的抗体的其他组合来筛查胱氨酸病：结合至包含SEQ ID NO：6的CTNS肽的包含SEQ ID NO：39-44、69和70的抗体；结合至包含SEQ ID NO：7和8的CTNS肽的包含SEQ ID NO：45-50、71和72的抗体；结合至包含SEQ ID NO：12的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：13的CTNS肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：9的SHPK肽的包含SEQ ID NO：51-56、73和74的抗体；结合至包含SEQ ID NO：14的SHPK肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：15的SHPK肽的抗体。
在特定实施方案中，抗体用于富集包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽。在特定实施方案中，包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体用于富集包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽。在特定实施方案中，抗体用于富集SEQ ID NO：16的ATP7B肽。在特定实施方案中，抗体用于富集SEQ ID NO：17的ATP7B肽。在特定实施方案中，抗体用于富集SEQ ID NO：18的ATP7B肽。在特定实施方案中，抗体用于富集SEQ ID NO：19的ATP7B肽。在特定实施方案中，抗体用于富集SEQ ID NO：20的ATP7B肽。在特定实施方案中，抗体用于富集SEQ ID NO：21的ATP7B肽。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID N0：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
在特定实施方案中，以下抗体组合可用于筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体。
本领域普通技术人员可认识到，可使用选自以下的抗体的其他组合来筛查WD：结合至包含SEQ ID NO：10的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的包含SEQ ID NO：57-62、75和76的抗体；结合至包含SEQ ID NO：16的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：17的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：18的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：19的ATP7B肽的抗体；结合至包含SEQ ID NO：20的ATP7B肽的抗体；以及结合至包含SEQ ID NO：21的ATP7B肽的抗体。
本公开的方法包括在MS分析之前任选地对免疫亲和富集的肽进行液相色谱以使肽分离。液相色谱可基于肽的重量和对柱的流动相和固定相的亲和力来使肽分离。
本公开的方法包括对免疫亲和富集的肽进行SRM-MS或MRM-MS以定量给定特征肽的量。在特定实施方案中，如上所述执行SRM-MS或MRM-MS。在特定实施方案中，特征肽的定量包括使用以已知量引入测定中的参考肽。在特定实施方案中，参考肽在各个方面可与特征肽相同，不同之处在于所述参考肽已经例如用一种或多种重同位素进行了差异标记，以将参考肽与特征肽区分开。
在特定实施方案中，SRM-MS或MRM-MS检测CD3ε肽的减少或不存在。在特定实施方案中，CD3ε肽包含SEQ ID NO：1。
在特定实施方案中，SRM-MS或MRM-MS检测WASp肽的减少或不存在。在特定实施方案中，WASp肽包含SEQ ID NO：2。在特定实施方案中，WASp肽包含SEQ ID NO：3。
在特定实施方案中，SRM-MS或MRM-MS检测BTK肽的减少或不存在。在特定实施方案中，BTK肽包含SEQ ID NO：4。在特定实施方案中，BTK肽包含SEQ ID NO：5。
在特定实施方案中，SRM-MS或MRM-MS检测CTNS肽的减少或不存在。在特定实施方案中，CTNS肽包含SEQ ID NO：6。在特定实施方案中，CTNS肽包含SEQ ID NO：7和8。在特定实施方案中，CTNS肽包含SEQ ID NO：12。在特定实施方案中，CTNS肽包含SEQ ID NO：13。
在特定实施方案中，SRM-MS或MRM-MS检测SHPK肽的减少或不存在。在特定实施方案中，SHPK肽包含SEQ ID NO：9。在特定实施方案中，SHPK肽包含SEQ ID NO：14。在特定实施方案中，SHPK肽包含SEQ ID NO：15。
在特定实施方案中，SRM-MS或MRM-MS检测ATP7B肽的减少或不存在。在特定实施方案中，ATP7B肽包含SEQ ID NO：10。在特定实施方案中，ATP7B肽包含SEQ ID NO：11或21。在特定实施方案中，ATP7B肽包含SEQ ID NO：16。在特定实施方案中，ATP7B肽包含SEQ ID NO：17。在特定实施方案中，ATP7B肽包含SEQ ID NO：18。在特定实施方案中，ATP7B肽包含SEQID NO：19。在特定实施方案中，ATP7B肽包含SEQ ID NO：20。在特定实施方案中，ATP7B肽包含SEQ ID NO：21。
在特定实施方案中，预定的截断值用作给定特征肽的阈值。给定特征肽的浓度高于阈值表明所测定的DBS来自未罹患SCID、WAS、XLA、胱氨酸病或WD的个体。给定特征肽的浓度低于阈值或不存在表明所测定的DBS来自罹患SCID、WAS、XLA、胱氨酸病或WD的个体。在特定实施方案中，可通过分析正常对照群体和计算此群体中给定特征肽的浓度的标准偏差(SD)来确定阈值。可根据给定特征肽的平均浓度将阈值设置为某个SD。在特定实施方案中，阈值是从给定特征肽的平均浓度-1SD、-1.1SD、-1.2SD、-1.3SD、-1.4SD、-1.5SD、-1.6SD、-1.7SD、-1.8SD、-1.9SD、-2.0SD、-2.1SD、-2.2SD、-2.3SD、-2.4SD、-2.5SD、-2.6SD、-2.7SD、-2.8SD、-2.9SD、-3.0SD或更高SD。在特定实施方案中，为了诊断或筛查SCID、WAS、XLA或胱氨酸病，可通过分析正常对照群体并计算此群体中给定特征肽的浓度与内源性ATP7B浓度之比的标准偏差(SD)来确定阈值。可将每种PIDD的肽浓度截断值设置为源自每种特征肽的平均浓度或给定特征肽的浓度与内源性ATP7B浓度之比的某个SD。
在特定实施方案中，CD3ε197肽的阈值浓度包括从正常对照群体中CD3ε197的平均浓度-1.0SD、-1.25SD、-1.3SD、-1.35SD、-1.4SD、-1.45SD、-1.5SD、-1.55SD、-1.6SD、-1.65SD、-1.7SD、-1.75SD、-1.8SD、-1.85SD、-1.9SD、-1.95SD、-2.0SD、-2.25SD、-2.3SD、-2.35SD、-2.4SD、-2.45SD、-2.5SD、-2.55SD、-2.6SD、-2.65SD、-2.7SD、-2.75SD、-2.8SD、-2.85SD、-2.9SD、-2.95SD、-3.0SD或更多。在特定实施方案中，CD3ε197肽的阈值浓度包括60pmol/L或更低、55pmol/L或更低、50pmol/L或更低、45pmol/L或更低、40pmol/L或更低、39pmol/L或更低、38pmol/L或更低、37pmol/L或更低、36pmol/L或更低、35pmol/L或更低、34pmol/L或更低、33pmol/L或更低、32pmol/L或更低、31pmol/L或更低、30pmol/L或更低。
在特定实施方案中，WASp 274肽的阈值浓度包括从正常对照群体中WASp 274的平均浓度-1.0SD、-1.25SD、-1.3SD、-1.35SD、-1.4SD、-1.45SD、-1.5SD、-1.55SD、-1.6SD、-1.65SD、-1.7SD、-1.75SD、-1.8SD、-1.85SD、-1.9SD、-1.95SD、-2.0SD、-2.25SD、-2.3SD、-2.35SD、-2.4SD、-2.45SD、-2.5SD、-2.55SD、-2.6SD、-2.65SD、-2.7SD、-2.75SD、-2.8SD、-2.85SD、-2.9SD、-2.95SD、-3.0SD或更多。在特定实施方案中，WASp 274肽的阈值浓度包括220pmol/L或更低、215pmol/L或更低、210pmol/L或更低、205pmol/L或更低、200pmol/L或更低、195pmol/L或更低、190pmol/L或更低、185pmol/L或更低、180pmol/L或更低、175pmol/L或更低、170pmol/L或更低、165pmol/L或更低、160pmol/L或更低、155pmol/L或更低、150pmol/L或更低。
在特定实施方案中，WASp 289肽的阈值浓度包括从正常对照群体中WASp 289的平均浓度-1.0SD、-1.25SD、-1.3SD、-1.35SD、-1.4SD、-1.45SD、-1.5SD、-1.55SD、-1.6SD、-1.65SD、-1.7SD、-1.75SD、-1.8SD、-1.85SD、-1.9SD、-1.95SD、-2.0SD、-2.25SD、-2.3SD、-2.35SD、-2.4SD、-2.45SD、-2.5SD、-2.55SD、-2.6SD、-2.65SD、-2.7SD、-2.75SD、-2.8SD、-2.85SD、-2.9SD、-2.95SD、-3.0SD或更多。在特定实施方案中，WASp 289肽的阈值浓度包括2500pmol/L或更低、2490pmol/L或更低、2480pmol/L或更低、2470pmol/L或更低、2460pmol/L或更低、2450pmol/L或更低、2440pmol/L或更低、2430pmol/L或更低、2420pmol/L或更低、2410pmol/L或更低、2400pmol/L或更低。
在特定实施方案中，BTK 407肽的阈值浓度包括从正常对照群体中BTK 407的平均浓度-1.0SD、-1.25SD、-1.3SD、-1.35SD、-1.4SD、-1.45SD、-1.5SD、-1.55SD、-1.6SD、-1.65SD、-1.7SD、-1.75SD、-1.8SD、-1.85SD、-1.9SD、-1.95SD、-2.0SD、-2.25SD、-2.3SD、-2.35SD、-2.4SD、-2.45SD、-2.5SD、-2.55SD、-2.6SD、-2.65SD、-2.7SD、-2.75SD、-2.8SD、-2.85SD、-2.9SD、-2.95SD、-3.0SD或更多。在特定实施方案中，BTK 407肽的阈值浓度包括80pmol/L或更低、75pmol/L或更低、70pmol/L或更低、65pmol/L或更低、60pmol/L或更低、55pmol/L或更低、50pmol/L或更低、49pmol/L或更低、48pmol/L或更低、47pmol/L或更低、46pmol/L或更低、45pmol/L或更低、44pmol/L或更低、43pmol/L或更低、42pmol/L或更低、41pmol/L或更低、40pmol/L或更低、35pmol/L或更低、30pmol/L或更低。
在特定实施方案中，BTK 545肽的阈值浓度包括从正常对照群体中BTK 545的平均浓度-1.0SD、-1.25SD、-1.3SD、-1.35SD、-1.4SD、-1.45SD、-1.5SD、-1.55SD、-1.6SD、-1.65SD、-1.7SD、-1.75SD、-1.8SD、-1.85SD、-1.9SD、-1.95SD、-2.0SD、-2.25SD、-2.3SD、-2.35SD、-2.4SD、-2.45SD、-2.5SD、-2.55SD、-2.6SD、-2.65SD、-2.7SD、-2.75SD、-2.8SD、-2.85SD、-2.9SD、-2.95SD、-3.0SD或更多。在特定实施方案中，BTK 545肽的阈值浓度包括110pmol/L或更低、109pmol/L或更低、108pmol/L或更低、107pmol/L或更低、106pmol/L或更低、105pmol/L或更低、104pmol/L或更低、103pmol/L或更低、102pmol/L或更低、101pmol/L或更低、100pmol/L或更低。
在特定实施方案中，CTNS 115肽的阈值浓度包括从正常对照群体中CTNS 115的平均浓度-1.0SD、-1.25SD、-1.3SD、-1.35SD、-1.4SD、-1.45SD、-1.5SD、-1.55SD、-1.6SD、-1.65SD、-1.7SD、-1.75SD、-1.8SD、-1.85SD、-1.9SD、-1.95SD、-2.0SD、-2.25SD、-2.3SD、-2.35SD、-2.4SD、-2.45SD、-2.5SD、-2.55SD、-2.6SD、-2.65SD、-2.7SD、-2.75SD、-2.8SD、-2.85SD、-2.9SD、-2.95SD、-3.0SD或更多。在特定实施方案中，CTNS 115肽的阈值浓度包括60pmol/L或更低、59pmol/L或更低、58pmol/L或更低、57pmol/L或更低、56pmol/L或更低、55pmol/L或更低、54pmol/L或更低、53pmol/L或更低、52pmol/L或更低、51pmol/L或更低、50pmol/L或更低。
在特定实施方案中，SHPK 363肽的阈值浓度包括从正常对照群体中SHPK 363的平均浓度-1.0SD、-1.25SD、-1.3SD、-1.35SD、-1.4SD、-1.45SD、-1.5SD、-1.55SD、-1.6SD、-1.65SD、-1.7SD、-1.75SD、-1.8SD、-1.85SD、-1.9SD、-1.95SD、-2.0SD、-2.25SD、-2.3SD、-2.35SD、-2.4SD、-2.45SD、-2.5SD、-2.55SD、-2.6SD、-2.65SD、-2.7SD、-2.75SD、-2.8SD、-2.85SD、-2.9SD、-2.95SD、-3.0SD或更多。在特定实施方案中，SHPK 363肽的阈值浓度包括2000pmol/L或更低、1950pmol/L或更低、1900pmol/L或更低、1850pmol/L或更低、1800pmol/L或更低、1750pmol/L或更低、1700pmol/L或更低、1650pmol/L或更低、1600pmol/L或更低、1550pmol/L或更低、1500pmol/L或更低。
在特定实施方案中，ATP7B 1056肽的阈值浓度包括从正常对照群体中ATP7B 1056的平均浓度-1.0SD、-1.25SD、-1.3SD、-1.35SD、-1.4SD、-1.45SD、-1.5SD、-1.55SD、-1.6SD、-1.65SD、-1.7SD、-1.75SD、-1.8SD、-1.85SD、-1.9SD、-1.95SD、-2.0SD、-2.25SD、-2.3SD、-2.35SD、-2.4SD、-2.45SD、-2.5SD、-2.55SD、-2.6SD、-2.65SD、-2.7SD、-2.75SD、-2.8SD、-2.85SD、-2.9SD、-2.95SD、-3.0SD或更多。在特定实施方案中，ATP7B 1056肽的阈值浓度包括90pmol/L或更低、85pmol/L或更低、80pmol/L或更低、75pmol/L或更低、70pmol/L或更低、65pmol/L或更低、60pmol/L或更低、55pmol/L或更低、50pmol/L或更低、45pmol/L或更低、40pmol/L或更低、35pmol/L或更低、30pmol/L或更低。
在特定实施方案中，ATP7B 214肽的阈值浓度包括从正常对照群体中ATP7B 214的平均浓度-1.0SD、-1.25SD、-1.3SD、-1.35SD、-1.4SD、-1.45SD、-1.5SD、-1.55SD、-1.6SD、-1.65SD、-1.7SD、-1.75SD、-1.8SD、-1.85SD、-1.9SD、-1.95SD、-2.0SD、-2.25SD、-2.3SD、-2.35SD、-2.4SD、-2.45SD、-2.5SD、-2.55SD、-2.6SD、-2.65SD、-2.7SD、-2.75SD、-2.8SD、-2.85SD、-2.9SD、-2.95SD、-3.0SD或更多。在特定实施方案中，ATP7B 214肽的阈值浓度包括30pmol/L或更低、29pmol/L或更低、28pmol/L或更低、27pmol/L或更低、26pmol/L或更低、25pmol/L或更低、24pmol/L或更低、23pmol/L或更低、22pmol/L或更低、21pmol/L或更低、20pmol/L或更低。
在特定实施方案中，ATP7B 887肽的阈值浓度包括从正常对照群体中ATP7B 887的平均浓度-1.0SD、-1.25SD、-1.3SD、-1.35SD、-1.4SD、-1.45SD、-1.5SD、-1.55SD、-1.6SD、-1.65SD、-1.7SD、-1.75SD、-1.8SD、-1.85SD、-1.9SD、-1.95SD、-2.0SD、-2.25SD、-2.3SD、-2.35SD、-2.4SD、-2.45SD、-2.5SD、-2.55SD、-2.6SD、-2.65SD、-2.7SD、-2.75SD、-2.8SD、-2.85SD、-2.9SD、-2.95SD、-3.0SD或更多。在特定实施方案中，ATP7B 887肽的阈值浓度包括190pmol/L或更低、185pmol/L或更低、180pmol/L或更低、175pmol/L或更低、170pmol/L或更低、165pmol/L或更低、160pmol/L或更低、155pmol/L或更低、150pmol/L或更低、145pmol/L或更低、140pmol/L或更低。
在特定实施方案中，特征肽可被认为是用于诊断或筛查给定疾病的主要生物标志物。主要特征肽可包括首先用于诊断或筛查给定疾病的肽。在特定实施方案中，主要标志物可从相应蛋白质的消化中可再现地获得，具有用于免疫亲和富集的高亲和力抗体，和/或可在独立的液相色谱柱和/或质谱仪器上再现。在特定实施方案中，特征肽可被认为是用于诊断或筛查给定疾病的次要标志物。次要特征肽可包括第二用于确认具有主要标志物的给定疾病的诊断或筛查的肽。在特定实施方案中，BTK545可以是诊断XLA的BTK 407的次要标志物。在特定实施方案中，WASp 289可以是诊断WAS的WASp 274的次要标志物。
在特定实施方案中，本公开的抗体也可用于补充临床测试中，以诊断生化结果不明确的那些患者以及携带来自遗传测试的意义未知的变体的患者的原发性免疫缺陷、胱氨酸病和WD。
本文公开的方法包括基于用本文公开的组合物和方法筛查SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD的结果来治疗受试者(例如人)。治疗受试者包括递送治疗有效量。治疗有效量包括提供有效量、防治性治疗和/或治疗性治疗的那些。
“有效量”是引起受试者的所需生理变化所必需的组合物的量。例如，对于SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD，有效量可提供症状减轻、症状消除或治愈。通常施用有效量用于研究目的。本文公开的有效量可在动物模型或体外测定中引起与评估疾病的发生、进展和/或消退有关的统计学显著效果。
特定实施方案可包括作为“防治性治疗”施用组合物。防治性治疗包括施用至不展示SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD的体征或症状或仅展示SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD的早期体征或症状的受试者，以使得施用治疗是为了减轻所述病症或降低发展所述病症的风险。因此，防治性治疗用作针对SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD的预防性治疗。
在特定实施方案中，防治性治疗可预防SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD，延迟或减少SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD的发作。在特定实施方案中，可在其他预防性措施(如使用针对WAS和XLA的抗生素)之前、同时或之后给予防治性治疗。在特定实施方案中，防治性治疗可预防SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD，或降低与SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD相关的症状或并发症的严重程度。SCID的症状和并发症可包括：生长不良；看起来像湿疹的皮疹；慢性腹泻；口腔中复发性鹅口疮；以及肺孢子虫性肺炎。WAS的症状和并发症可包括：出血；湿疹；血性腹泻和复发性感染。XLA的症状和并发症可包括：感染；腹泻；不生长；关节疾病；肾脏炎症；红细胞分解；以及皮肤和肌肉炎症。胱氨酸病的症状和并发症可包括：多尿；烦渴；脱水；呕吐；代谢性酸中毒；低血磷性佝偻病；便秘；发育停滞；反复发烧；怕热；和食欲不振/丧失。WD的症状和并发症可包括：疲劳；食欲不振或腹痛；黄疸；金褐色眼睛变色(凯塞-弗莱谢尔环(Kayser-Fleischerrings))；腿部或腹部积液；言语、吞咽或身体协调问题；以及不受控制的运动或肌肉僵硬。
“治疗性治疗”包括施用至展示SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD的症状或体征的受试者的治疗，并且出于减轻或消除SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD的那些体征或症状的目的而施用至所述受试者。在特定实施方案中，治疗性治疗可为被诊断患有SCID、WAS和/或XLA的受试者提供免疫功能。在特定实施方案中，治疗性治疗可减少罹患胱氨酸病的受试者的细胞中的胱氨酸累积。在特定实施方案中，治疗性治疗可减少罹患WD的受试者的器官中的铜累积。在特定实施方案中，治疗性治疗可减轻、控制或消除SCID、WAS、XLA、胱氨酸病和/或WD的症状和并发症，如上述那些。
防治性治疗和治疗性治疗不必相互排斥，并且在特定实施方案中，所施用的剂量可达成多于一种治疗类型。
在特定实施方案中，治疗有效量为被诊断患有SCID、WAS和/或XLA的受试者提供免疫系统功能。因此，在特定实施方案中，本文公开的治疗方法包括用于诸如SCID、WAS和XLA的病症的干细胞移植、免疫球蛋白输注、抗生素输注和/或基因疗法。在特定实施方案中，治疗方法包括用于SCID的酶疗法。提供免疫功能包括：减少细菌、病毒或寄生虫感染的频率或数量，增加预期寿命，和/或增加生长。
在特定实施方案中，治疗有效量防止被诊断患有胱氨酸病的受试者的细胞中的胱氨酸累积。在特定实施方案中，治疗方法包括提供用于胱氨酸病的半胱胺。在特定实施方案中，提供半胱胺可减轻或消除如上所述的胱氨酸病的症状。
在特定实施方案中，治疗有效量防止被诊断患有WD的受试者的器官中的铜累积。在特定实施方案中，治疗方法包括用于WD的D-青霉胺、曲恩汀、锌盐和/或肝移植。在特定实施方案中，防止器官中的铜累积减轻或消除如上所述的WD的症状。
在特定实施方案中，治疗性组合物的施用可伴随单独佐剂的施用。佐剂的实例包括明矾、膨润土、胶乳和丙烯酸颗粒；不完全弗氏佐剂、完全弗氏佐剂；基于铝的盐，如氢氧化铝；基于钙的盐；二氧化硅或任何TLR生物配体；Sigma佐剂系统(SAS)；Ribi佐剂。
对于施用，可基于体外测定和/或动物模型研究的结果初始估计治疗有效量(本文中也称为剂量)。此类信息可用于更准确地确定目标受试者的可用剂量。施用至特定受试者的实际剂量的量可由医师、兽医或研究人员在考虑诸如包括受试者的目标、体重、疾患的严重程度、先前或同时的治疗干预、特发性疾病在内的身体和生理因素以及施用途径的参数的情况下确定。
细胞的治疗有效量可在104个细胞/kg至109个细胞/kg的范围内。在特定实施方案中，细胞的治疗有效量可包括104个细胞/kg、105个细胞/kg、106个细胞/kg、107个细胞/kg、108个细胞/kg、109个细胞/kg或更高。
有用的剂量可在0.1至5μg/kg或0.5至1μg/kg的范围内。在特定实施方案中，剂量可包括1μg/kg、15μg/kg、30μg/kg、50μg/kg、55μg/kg、70μg/kg、90μg/kg、150μg/kg、350μg/kg、500μg/kg、750μg/kg、1000μg/kg、0.1至5mg/kg或0.5至1mg/kg。在特定实施方案中，剂量可包括1mg/kg、10mg/kg、30mg/kg、50mg/kg、70mg/kg、100mg/kg、300mg/kg、500mg/kg、700mg/kg、1000mg/kg或更高。
治疗有效量可通过在治疗方案的过程期间(例如每天、每隔一天、每3天、每4天、每5天、每6天、每周、每2周、每3周、每月、每2个月、每3个月、每4个月、每5个月、每6个月、每7个月、每8个月、每9个月、每10个月、每11个月或每年)施用单个或多个剂量来实现。
(IX)试剂盒。还提供了用于测试先天性病症的试剂盒。试剂盒可包括用于取血的刺血针、用于收集血滴的过滤卡、用于溶解DBS的溶液以及用于消化DBS中的标志物蛋白的适当缓冲液和酶。试剂盒还可包括一个或多个容器，所述一个或多个容器包括抗肽结合剂(例如，抗体)和/或试剂或用品，以评估CD3ε、WASp、BTK、CTNS、SHPK和/或ATP7B的缺乏或减少。在特定实施方案中，试剂盒包括一个或多个容器，所述一个或多个容器包括以下抗肽抗体：抗CD3ε197、抗WASp 274、抗WASp 289、抗BTK 407、抗BTK545、抗CTNS 115、抗CTNS 120、抗CTNS 194、抗CTNS 360、抗SHPK 44、抗SHPK 363、抗SHPK 388、抗ATP7B 214、抗ATP7B325、抗ATP7B 466、抗ATP7B 589、抗ATP7B 621、抗ATP7B 887、抗ATP7B 1056和/或抗ATP7B1061。可将抗体固定在固相载体如柱或珠粒上。试剂盒还可包括用于从抗体释放肽的洗脱缓冲液。在特定实施方案中，试剂盒可包括一种或多种标记的参考肽以对特征肽进行绝对定量。在特定实施方案中，试剂盒还可包括有效使用试剂盒所需的一些或全部必要的实验室和/或医疗用品，如纱布、无菌粘合带、手套、管等。可改变本文所述的任何试剂盒的内容物。
试剂盒的部件可准备好储存和以后使用。与此类一个或多个容器相伴的可为由管制试剂盒的制造、使用或销售的政府机构开具的呈表格形式的报告书，所述报告书反映由制造、使用或销售的机构核准(在需要时)。
任选地，试剂盒还包括在方法中使用试剂盒的说明。在各种实施方案中，说明书可包括适当的说明以解释与使用试剂盒相关的结果；相关废物的适当处置；等等。说明书可采用试剂盒内提供的印刷说明书的形式，或者可将说明书印刷在试剂盒本身的一部分上。说明书可呈页、小册子、手册、CD-ROM或计算机可读装置的形式，或者可在诸如网站的远程位置提供说明书的指导。
还包括本文公开和引用的序列的变体。确定在不消除生物活性的情况下哪些氨基酸残基可被取代、插入或缺失的指导可使用本领域熟知的计算机程序如DNASTARTM(Madison，Wisconsin)软件发现。优选地，本文公开的蛋白质变体中的氨基酸变化是保守性氨基酸变化，即，类似地带电或不带电氨基酸的取代。保守性氨基酸变化涉及在其侧链中相关的氨基酸家族之一的取代。
在肽或蛋白质中，氨基酸的合适的保守性取代是本领域技术人员已知的，并且通常可在不改变所得分子的生物活性的情况下进行。本领域技术人员认识到，一般来说，多肽的非必需区域中的单个氨基酸取代基本上不会改变生物活性(参见例如，Watson等人Molecular Biology of the Gene，第4版，1987，The Benjamin/Cummings Pub.Co.，第224页)。天然存在的氨基酸通常分为以下保守性取代家族：第1组：丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)和苏氨酸(Thr)；第2组：(酸性)：天冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Glu)；第3组：(酸性；也分类为极性带负电的残基及其酰胺)：天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、Asp和Glu；第4组：Gln和Asn；第5组：(碱性；也分类为极性带正电的残基)：精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)和组氨酸(His)；第6组(大的脂族非极性残基)：异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、甲硫氨酸(Met)、缬氨酸(Val)和半胱氨酸(Cys)；第7组(不带电的极性)：酪氨酸(Tyr)、Gly、Asn、Gln、Cys、Ser和Thr、第8组(大的芳族残基)：苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)和Tyr；第9组(非极性)：脯氨酸(Pro)、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Met和Trp；第11组(脂族)：Gly、Ala、Val、Leu和Ile；第10组(小的脂族非极性或弱极性残基)：Ala、Ser、Thr、Pro和Gly；以及第12组(含硫)：Met和Cys。另外的信息可见于Creighton(1984)Proteins，W.H.Freeman and Company。
在进行此类变化时，可考虑氨基酸的亲水性指数。本领域中通常了解亲水性氨基酸指数在对蛋白质赋予相互作用性生物功能方面的重要性(Kyte和Doolittle，1982，J.Mol.Biol.157(1)，105-32)。已基于各氨基酸的疏水性和电荷特征对其指定亲水性指数(Kyte和Doolittle，1982)。这些值是：Ile(+4.5)；Val(+4.2)；Leu(+3.8)；Phe(+2.8)；Cys(+2.5)；Met(+1.9)；Ala(+1.8)；Gly(-0.4)；Thr(-0.7)；Ser(-0.8)；Trp(-0.9)；Tyr(-1.3)；Pro(-1.6)；His(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；Gln(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；Asn(-3.5)；Lys(-3.9)；和Arg(-4.5)。
本领域中已知某些氨基酸可被具有类似亲水性指数或分数的其他氨基酸取代且仍然产生具有类似生物活性的蛋白质，即仍然获得生物功能上等效的蛋白质。在进行此类变化中，其亲水性指数在±2内的氨基酸的取代是优选的，在±1内的那些是特别优选的，并且在±0.5内的那些是甚至更特别优选的。在本领域中还应了解，可基于亲水性有效地进行相似氨基酸的取代。
如美国专利号4,554,101中所详述，以下亲水性值已指定给氨基酸残基：Arg(+3.0)；Lys(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；Ser(+0.3)；Asn(+0.2)；Gln(+0.2)；Gly(0)；Thr(-0.4)；Pro(-0.5±1)；Ala(-0.5)；His(-0.5)；Cys(-1.0)；Met(-1.3)；Val(-1.5)；Leu(-1.8)；Ile(-1.8)；Tyr(-2.3)；Phe(-2.5)；Trp(-3.4)。应理解，氨基酸可被取代成具有相似亲水性值的另一种氨基酸，并且仍然获得生物学上等效的且特别是免疫学上等效的蛋白质。在此类变化中，其亲水性值在±2内的氨基酸的取代是优选的，在±1内的那些是特别优选的，并且在±0.5内的那些是甚至更特别优选的。
如上所述，氨基酸取代可基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如，它们的疏水性、亲水性、电荷、大小等。
如在别处指出的，基因序列的变体可包括密码子优化的变体、序列多态性、剪接变体和/或在统计学上不显著影响所编码产物的功能的突变。
本文公开的蛋白质、核酸和基因序列的变体还包括与本文公开的蛋白质、核酸或基因序列具有至少70％序列同一性、80％序列同一性、85％序列同一性、90％序列同一性、95％序列同一性、96％序列同一性、97％序列同一性、98％序列同一性或99％序列同一性的序列。
“序列同一性％”是指如通过比较序列所确定的两种或更多种序列之间的关系。在本领域中，“同一性”还意指如通过此类序列串之间的匹配所确定的蛋白质、核酸或基因序列之间的序列相关性程度。“同一性”(经常称为“相似性”)可通过已知方法来容易地计算，所述方法包括(但不限于)在以下中描述的那些：Computational Molecular Biology(Lesk，A.M.，编辑)Oxford University Press，NY(1988)；Biocomputing：Informatics andGenome Projects(Smith，D.W.，编辑)Academic Press，NY(1994)；Computer Analysis ofSequence Data，Part I(Griffin，A.M.，和Griffin，H.G.，编辑)Humana Press，NJ(1994)；Sequence Analysis in Molecular Biology(Von Heijne，G.，编辑)Academic Press(1987)；以及Sequence Analysis Primer(Gribskov，M.和Devereux，J.，编辑)OxfordUniversity Press，NY(1992)。设计确定同一性的优选方法以得到所测试序列之间的最佳匹配。可公开获得的计算机程序中编纂了确定同一性和相似性的方法。序列比对和同一性百分比计算可使用LASERGENE生物信息学计算套件(DNASTAR，Inc.，Madison，Wisconsin)的Megalign程序来执行。序列的多重比对还可使用Clustal比对方法(Higgins和SharpCABIOS，5，151-153(1989))以默认参数(空位罚分＝10，空位长度罚分＝10)来执行。相关程序还包括GCG程序套件(威斯康星软件包9.0版，Genetics Computer Group(GCG)，Madison，Wisconsin)；BLASTP、BLASTN、BLASTX(Altschul等人，J.Mol.Biol.215：403-410(1990))；DNASTAR(DNASTAR，Inc.，Madison，Wisconsin)；以及并入Smith-Waterman算法的FASTA程序(Pearson，Comput.Methods Genome Res.，[Proc.Int.Symp.](1994)，会议日期1992，111-20.编辑：Suhai，Sandor.出版商：Plenum，New York，N.Y.。在本公开的上下文内，将了解在将序列分析软件用于分析的情况下，分析的结果是基于所引用的程序的“默认值”。如本文所用，“默认值”将意指在首次初始化时用软件最初加载的值或参数的任何集合。
变体还包括在严格杂交条件下与本文公开的序列杂交并提供与参考序列相同功能的核酸分子。示例性严格杂交条件包括在42℃下在包含50％甲酰胺、5XSSC(750mMNaCl、75mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH 7.6)、5X登哈特氏溶液(Denhardt′s solution)、10％硫酸葡聚糖和20μg/ml变性、剪切的鲑鱼精子DNA的溶液中过夜孵育，然后在50℃下于0.1XSSC中洗涤过滤器。杂交和信号检测严格性的改变主要通过控制甲酰胺浓度(较低甲酰胺百分比导致严格性降低)；盐条件或温度来实现。例如，中等严格条件包括在37℃下在包含6XSSPE(20XSSPE＝3M NaCl；0.2M NaH2PO4；0.02M EDTA，pH 7.4)、0.5％SDS、30％甲酰胺、100μg/ml鲑鱼精子阻断DNA的溶液中过夜孵育；然后在50℃下用1XSSPE、0.1％SDS洗涤。另外，为了获得甚至更低的严格性，可在更高的盐浓度(例如5XSSC)下进行严格杂交后进行的洗涤。上述条件的变化可通过包含和/或取代用于抑制杂交实验中的背景的替代阻断试剂来实现。典型的阻断试剂包括登哈特氏试剂、BLOTTO、肝素、变性鲑鱼精子DNA和可商购的专有制剂。由于相容性问题，包含特定阻断试剂可能需要改变上述杂交条件。
(X)示例性实施方案。
1.一种筛查受试者的严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)和/或X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)的方法，所述方法包括：
获得源自所述受试者的干血斑(DBS)样品；
用酶消化来自所述DBS的血液的蛋白质以产生一种或多种肽；
用：
结合至SCID的CD3ε特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述CD3ε特征肽；
结合至WAS的第一WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一WASp特征肽；
结合至WAS的第二WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二WASp特征肽；
结合至XLA的第一BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一BTK特征肽；和/或
结合至第二BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二BTK特征肽；
对所述富集的肽进行液相色谱-多反应监测质谱(LC-MRM-MS)以确定所述肽的浓度；以及当：
所述CD3ε特征肽的浓度低于预定阈值浓度时或者当所述CD3ε特征肽不存在时，诊断所述受试者患有SCID；
所述第一WASp特征肽和/或所述第二WASp特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或者当所述第一WASp特征肽和/或所述第二WASp特征肽不存在时，诊断所述受试者患有WAS；和/或
所述第一BTK特征肽和/或所述第二BTK特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或者当所述第一BTK特征肽和/或所述第二BTK特征肽不存在时，诊断所述受试者患有XLA。
2.如实施方案1所述的方法，其中
SCID的所述CD3ε特征肽由SEQ ID NO：1中列出的氨基酸序列编码；
WAS的所述第一WASp特征肽由SEQ ID NO：2中列出的氨基酸序列编码；
WAS的所述第二WASp特征肽由SEQ ID NO：3中列出的氨基酸序列编码；
XLA的所述第一BTK特征肽由SEQ ID NO：4中列出的氨基酸序列编码；和/或
XLA的所述第二BTK特征肽由SEQ ID NO：5中列出的氨基酸序列编码。
3.如实施方案1或2所述的方法，其中
结合至所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：25的CDR1、SEQID NO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3；
结合至所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQ ID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：31的CDR1、SEQID NO：32的CDR2和SEQ ID NO：33的CDR3；和/或
结合至所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQ ID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ IDNO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3。
4.如实施方案1-3中任一项所述的方法，其中所述方法作为新生儿筛查(NBS)的一部分进行，所述新生儿筛查另外筛查所述受试者的苯丙酮尿症、原发性先天性甲状腺功能减退症、囊性纤维化和镰状细胞病中的一种或多种。
5.如实施方案1-4中任一项所述的方法，其中所述方法在所述受试者中不存在SCID、WAS和/或XLA的临床症状的情况下进行。
6.如实施方案1-5中任一项所述的方法，其中所述酶是胰蛋白酶。
7.如实施方案1-6中任一项所述的方法，其中从来自正常对照受试者群体的DBS中的每种特征肽的平均浓度的标准偏差来计算每种特征肽的相应的预定阈值浓度。
8.如实施方案1-7中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度是从来自正常对照受试者群体的DBS中的每种特征肽的平均浓度-1个标准偏差(SD)、-1.1SD、-1.2SD、-1.3SD、-1.4SD、-1.5SD、-1.6SD、-1.7SD、-1.8SD、-1.9SD、-2.0SD、-2.1SD、-2.2SD、-2.3SD、-2.4SD、-2.5SD、-2.6SD、-2.7SD、-2.8SD、-2.9SD、-3.0SD或更高SD。
9.如实施方案1-8中任一项所述的方法，其中用于富集SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：63的VH结构域。
10.如实施方案1-9中任一项所述的方法，其中用于富集SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：64的VL结构域。
11.如实施方案1-10中任一项所述的方法，其中用于富集WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：65的VH结构域。
12.如实施方案1-11中任一项所述的方法，其中用于富集WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：66的VL结构域。
13.如实施方案1-12中任一项所述的方法，其中用于富集WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：86的重链。
14.如实施方案1-13中任一项所述的方法，其中用于富集WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：91的轻链。
15.如实施方案1-14中任一项所述的方法，其中用于富集XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67的VH结构域。
16.如实施方案1-15中任一项所述的方法，其中用于富集XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：68的VL结构域。
17.如实施方案1-16中任一项所述的方法，其中用于富集XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：96的重链。
18.如实施方案1-17中任一项所述的方法，其中用于富集XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：101的轻链。
19.如实施方案1-18中任一项所述的方法，其中所述方法还包括通过以下方式来筛查胱氨酸病：
用结合至胱氨酸病的第一CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一CTNS特征肽；
用结合至胱氨酸病的第二CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二CTNS特征肽；
用结合至胱氨酸病的第三CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第三CTNS特征肽；
用结合至胱氨酸病的第四CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第四CTNS特征肽；
用结合至胱氨酸病的第一SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一SHPK特征肽；
用结合至胱氨酸病的第二SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二SHPK特征肽；和/或
用结合至胱氨酸病的第三SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第三SHPK特征肽；
并且
当所述第一CTNS、所述第二CTNS、所述第三CTNS、所述第四CTNS、所述第一SHPK、所述第二SHPK和/或所述第三SHPK特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或者当所述第一CTNS、所述第二CTNS、所述第三CTNS、所述第四CTNS、所述第一SHPK、所述第二SHPK和/或所述第三SHPK特征肽不存在时，诊断所述受试者患有胱氨酸病。
20.如实施方案19所述的方法，其中
胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽由SEQ ID NO：6中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽由SEQ ID NO：7或8中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第三CTNS特征肽由SEQ ID NO：12中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第四CTNS特征肽由SEQ ID NO：13中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽由SEQ ID NO：9中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第二SHPK特征肽由SEQ ID NO：14中列出的氨基酸序列编码；和/或
胱氨酸病的所述第三SHPK特征肽由SEQ ID NO：15中列出的氨基酸序列编码。
21.如实施方案19或20所述的方法，其中
结合至胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQ ID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3；
结合至所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：48的CDR1、SEQID NO：49的CDR2和SEQ ID NO：50的CDR3；和/或
结合至所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：54的CDR1、SEQID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3。
22.如实施方案19-21中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的VH结构域。
23.如实施方案19-22中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：70的VL结构域。
24.如实施方案19-23中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：106的重链。
25.如实施方案19-24中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：111的轻链。
26.如实施方案19-25中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：71的VH结构域。
27.如实施方案19-26中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：72的VL结构域。
28.如实施方案19-27中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：116的重链。
29.如实施方案19-28中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：121的轻链。
30.如实施方案19-29中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：73的VH结构域。
31.如实施方案19-30中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：74的VL结构域。
32.如实施方案19-31中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：126的重链。
33.如实施方案19-32中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：131的轻链。
34.如实施方案1-33中任一项所述的方法，其中所述方法还包括通过以下方式来筛查威尔逊病(WD)：
用结合至第一ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一ATP7B特征肽；
用结合至第二ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二ATP7B特征肽；
用结合至第三ATP7B特征肽的抗体或抗原结合片段富集所述第三ATP7B特征肽；
用结合至第四ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第四ATP7B特征肽；
用结合至第五ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第五ATP7B特征肽；
用结合至第六ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第六ATP7B特征肽；和/或
用抗体或其抗原结合片段富集第七ATP7B特征肽；并且
当所述第一ATP7B、所述第二ATP7B、所述第三ATP7B、所述第四ATP7B、所述第五ATP7B、所述第六ATP7B和/或所述第七ATP7B特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或者当所述第一ATP7B、所述第二ATP7B、所述第三ATP7B、所述第四ATP7B、所述第五ATP7B、所述第六ATP7B和/或所述第七ATP7B特征肽不存在时，诊断所述受试者患有WD。
35.如实施方案34所述的方法，其中
WD的所述第一ATP7B特征肽由SEQ ID NO：10中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第二ATP7B特征肽由SEQ ID NO：11或21中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第三ATP7B特征肽由SEQ ID NO：16中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第四ATP7B特征肽由SEQ ID NO：17中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第五ATP7B特征肽由SEQ ID NO：18中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第六ATP7B特征肽由SEQ ID NO：19中列出的氨基酸序列编码；和/或
WD的所述第七ATP7B特征肽由SEQ ID NO：20中列出的氨基酸序列编码。
36.如实施方案34或35所述的方法，其中结合至所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ ID NO：58的CDR2和SEQ ID NO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDR1、SEQ ID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3。
37.如实施方案34-36中任一项所述的方法，其中用于富集WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：75的VH结构域。
38.如实施方案34-37中任一项所述的方法，其中用于富集WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：76的VL结构域。
39.如实施方案34-38中任一项所述的方法，其中用于富集WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：136的重链。
40.如实施方案34-39中任一项所述的方法，其中用于富集WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：141的轻链。
41.如实施方案1-40中任一项所述的方法，其中所述肽的浓度由在LC-MRM-MS之前添加的参考特征肽的相应已知浓度确定。
42.如实施方案7-41中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述CD3ε特征肽的平均浓度包括在70pmol/L至400pmol/L范围内的浓度。
43.如实施方案7-42中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第一WASp特征肽的平均浓度包括在600pmol/L至5000pmol/L范围内的浓度。
44.如实施方案7-43中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第二WASp特征肽的平均浓度包括在5500pmol/L至15000pmol/L范围内的浓度。
45.如实施方案7-44中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第一BTK特征肽的平均浓度包括在350pmol/L至2500pmol/L范围内的浓度。
46.如实施方案7-45中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第二BTK特征肽的平均浓度包括在550pmol/L至1600pmol/L范围内的浓度。
47.如实施方案7-46中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第一CTNS特征肽的平均浓度包括在40pmol/L至250pmol/L范围内的浓度。
48.如实施方案7-47中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第一SHPK特征肽的平均浓度包括在100pmol/L至8000pmol/L范围内的浓度。
49.如实施方案7-48中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第二ATP7B特征肽的平均浓度包括在90pmol/L至400pmol/L范围内的浓度。
50.如实施方案7-49中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第三ATP7B特征肽的平均浓度包括在30pmol/L至100pmol/L范围内的浓度。
51.如实施方案7-50中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第七ATP7B特征肽的平均浓度包括在200pmol/L至500pmol/L范围内的浓度。
52.一种筛查受试者的严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)和/或X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)的方法，所述方法包括：
获得源自所述受试者的干血斑(DBS)样品；
用酶消化来自所述DBS的血液的蛋白质以产生一种或多种肽；
用：
结合至SCID的CD3ε特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述CD3ε特征肽；
结合至WAS的第一WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一WASp特征肽；
结合至WAS的第二WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二WASp特征肽；
结合至XLA的第一BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一BTK特征肽；和/或
结合至第二BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二BTK特征肽；
用结合至内源性ATP7B肽的抗体或其抗原片段富集所述内源性ATP7B肽；
对所述富集的肽进行液相色谱-多反应监测质谱(LC-MRM-MS)以确定所述肽的浓度；
对于每种特征肽，计算特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率；以及当：
CD3ε特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率低于相应的预定阈值比率时或者当所述CD3ε特征肽不存在时，诊断所述受试者患有SCID；
当所述第一和/或第二WASp特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率低于相应的预定阈值比率时或者当所述第一和/或第二WASp特征肽不存在时，诊断所述受试者患有WAS；和/或
当所述第一和/或第二BTK特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率低于相应的预定阈值比率时或者当所述第一和/或第二BTK特征肽不存在时，诊断所述受试者患有XLA。
53.如实施方案52所述的方法，其中
SCID的所述CD3ε特征肽由SEQ ID NO：1中列出的氨基酸序列编码；
WAS的所述第一WASp特征肽由SEQ ID NO：2中列出的氨基酸序列编码；
WAS的所述第二WASp特征肽由SEQ ID NO：3中列出的氨基酸序列编码；
XLA的所述第一BTK特征肽由SEQ ID NO：4中列出的氨基酸序列编码；和/或
XLA的所述第二BTK特征肽由SEQ ID NO：5中列出的氨基酸序列编码。
54.如实施方案52或53所述的方法，其中
结合至所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：25的CDR1、SEQID NO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3；
结合至所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQ ID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：31的CDR1、SEQID NO：32的CDR2和SEQ ID NO：33的CDR3；和/或
结合至所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQ ID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ IDNO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3。
55.如实施方案42-44中任一项所述的方法，其中所述内源性ATP7B肽由SEQ IDNO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ IDNO：20或SEQ ID NO：21中列出的氨基酸序列编码。
56.如实施方案42-45中任一项所述的方法，其中结合至所述内源性ATP7B肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ IDNO：57的CDR1、SEQ ID NO：58的CDR2和SEQ ID NO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDRl、SEQ ID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3。
57.如实施方案52-56中任一项所述的方法，其中从样品群体中每种肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的平均比率的标准偏差来计算每个预定阈值比率。
58.如实施方案52-57中任一项所述的方法，其中所述方法作为新生儿筛查(NBS)的一部分进行，所述新生儿筛查另外筛查所述受试者的苯丙酮尿症、原发性先天性甲状腺功能减退症、囊性纤维化和镰状细胞病中的一种或多种。
59.如实施方案52-58中任一项所述的方法，其中所述方法在所述受试者中不存在SCID、WAS和/或XLA的临床症状的情况下进行。
60.如实施方案52-59中任一项所述的方法，其中所述酶是胰蛋白酶。
61.如实施方案52-60中任一项所述的方法，其中用于富集SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：63的VH结构域。
62.如实施方案52-61中任一项所述的方法，其中用于富集SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：64的VL结构域。
63.如实施方案52-62中任一项所述的方法，其中用于富集WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：65的VH结构域。
64.如实施方案52-63中任一项所述的方法，其中用于富集WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：66的VL结构域。
65.如实施方案52-64中任一项所述的方法，其中用于富集WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：86的重链。
66.如实施方案52-65中任一项所述的方法，其中用于富集WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：91的轻链。
67.如实施方案52-66中任一项所述的方法，其中用于富集XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67的VH结构域。
68.如实施方案52-67中任一项所述的方法，其中用于富集XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：68的VL结构域。
69.如实施方案52-68中任一项所述的方法，其中用于富集XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：96的重链。
70.如实施方案52-69中任一项所述的方法，其中用于富集XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：101的轻链。
71.如实施方案52-70中任一项所述的方法，所述方法还包括通过以下方式来筛查胱氨酸病：
用结合至胱氨酸病的第一CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一CTNS特征肽；
用结合至胱氨酸病的第二CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二CTNS特征肽；
用结合至胱氨酸病的第三CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第三CTNS特征肽；
用结合至胱氨酸病的第四CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第四CTNS特征肽；
用结合至胱氨酸病的第一SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一SHPK特征肽；
用结合至胱氨酸病的第二SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二SHPK特征肽；和/或
用结合至胱氨酸病的第三SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第三SHPK特征肽；
对于每种特征肽，计算特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率；以及
当所述第一CTNS肽浓度：内源性ATP7B肽浓度、所述第二CTNS肽浓度：内源性ATP7B肽浓度、所述第三CTNS肽浓度：内源性ATP7B肽浓度、所述第四CTNS肽浓度：内源性ATP7B肽浓度、所述第一SHPK肽浓度：内源性ATP7B肽浓度、所述第二SHPK肽浓度：内源性ATP7B肽浓度和/或所述第三SHPK特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率低于相应的预定阈值比率时或者当所述第一CTNS、所述第二CTNS、所述第三CTNS、所述第四CTNS、所述第一SHPK、所述第二SHPK和/或所述第三SHPK特征肽不存在时，诊断所述受试者患有胱氨酸病。
72.如实施方案71所述的方法，其中
胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽由SEQ ID NO：6中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽由SEQ ID NO：7或8中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第三CTNS特征肽由SEQ ID NO：12中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第四CTNS特征肽由SEQ ID NO：13中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽由SEQ ID NO：9中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第二SHPK特征肽由SEQ ID NO：14中列出的氨基酸序列编码；和/或
胱氨酸病的所述第三SHPK特征肽由SEQ ID NO：15中列出的氨基酸序列编码。
73.如实施方案71或72所述的方法，其中
结合至胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQ ID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3；
结合至所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：48的CDR1、SEQID NO：49的CDR2和SEQ ID NO：50的CDR3；和/或
结合至所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：54的CDR1、SEQID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3。
74.如实施方案71-73中任一项所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的VH结构域。
75.如实施方案71-74中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：70的VL结构域。
76.如实施方案71-75中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：106的重链。
77.如实施方案71-76中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：111的轻链。
78.如实施方案71-77中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：71的VH结构域。
79.如实施方案71-78中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：72的VL结构域。
80.如实施方案71-79中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：116的重链。
81.如实施方案71-80中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：121的轻链。
82.如实施方案71-81中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：73的VH结构域。
83.如实施方案71-82中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：74的VL结构域。
84.如实施方案71-83中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：126的重链。
85.如实施方案71-84中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：131的轻链。
86.如实施方案52-85中任一项所述的方法，其中用于富集所述内源性ATP7B肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：75的VH结构域。
87.如实施方案52-86中任一项所述的方法，其中用于富集所述内源性ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：76的VL结构域。
88.如实施方案52-87中任一项所述的方法，其中用于富集所述内源性ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：136的重链。
89.如实施方案52-88中任一项所述的方法，其中用于富集所述内源性ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：141的轻链。
90.如实施方案52-89中任一项所述的方法，其中所述肽的浓度由在LC-MRM-MS之前添加的参考特征肽的相应已知浓度确定。
91.一种检测一种或多种干血斑(DBS)样品中的严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)和/或X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)的一种或多种特征肽的方法，所述方法包括：
获得所述一种或多种干血斑(DBS)样品；
用酶消化来自每种DBS的血液的蛋白质以产生一种或多种肽；
用：
结合至SCID的CD3ε特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述CD3ε特征肽；
结合至WAS的第一WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一WASp特征肽；
结合至WAS的第二WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二WASp特征肽；
结合至XLA的第一BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一BTK特征肽；和/或
结合至第二BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二BTK特征肽；
对所述富集的肽进行液相色谱-多反应监测质谱(LC-MRM-MS)以确定所述肽的浓度；以及
对所述富集的肽进行液相色谱-多反应监测质谱(LC-MRM-MS)，从而检测一种或多种DBS样品中SCID、WAS和XLA的一种或多种特征肽。
92.如实施方案91所述的方法，其中
SCID的所述CD3ε特征肽由SEQ ID NO：1中列出的氨基酸序列编码；
WAS的所述第一WASp特征肽由SEQ ID NO：2中列出的氨基酸序列编码；
WAS的所述第二WASp特征肽由SEQ ID NO：3中列出的氨基酸序列编码；
XLA的所述第一BTK特征肽由SEQ ID NO：4中列出的氨基酸序列编码；和/或
XLA的所述第二BTK特征肽由SEQ ID NO：5中列出的氨基酸序列编码。
93.如实施方案91或92所述的方法，其中
结合至所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：25的CDR1、SEQID NO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3；
结合至所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQ ID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：31的CDR1、SEQID NO：32的CDR2和SEQ ID NO：33的CDR3；和/或
结合至所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQ ID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ IDNO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3。
94.如实施方案91-93中任一项所述的方法，其中所述酶是胰蛋白酶。
95.如实施方案91-94中任一项所述的方法，其中用于富集SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：63的VH结构域。
96.如实施方案91-95中任一项所述的方法，其中用于富集SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：64的VL结构域。
97.如实施方案91-96中任一项所述的方法，其中用于富集WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：65的VH结构域。
98.如实施方案91-97中任一项所述的方法，其中用于富集WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：66的VL结构域。
99.如实施方案91-98中任一项所述的方法，其中用于富集WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：86的重链。
100.如实施方案91-99中任一项所述的方法，其中用于富集WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：91的轻链。
101.如实施方案91-100中任一项所述的方法，其中用于富集XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67的VH结构域。
102.如实施方案91-101中任一项所述的方法，其中用于富集XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：68的VL结构域。
103.如实施方案91-102中任一项所述的方法，其中用于富集XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：96的重链。
104.如实施方案91-103中任一项所述的方法，其中用于富集XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：101的轻链。
105.如实施方案91-104中任一项所述的方法，所述方法还包括通过以下方式来检测胱氨酸病的一种或多种特征肽：
用结合至胱氨酸病的第一CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一CTNS特征肽；
用结合至胱氨酸病的第二CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二CTNS特征肽；
用结合至胱氨酸病的第三CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第三CTNS特征肽；
用结合至胱氨酸病的第四CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第四CTNS特征肽；
用结合至胱氨酸病的第一SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一SHPK特征肽；
用结合至胱氨酸病的第二SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二SHPK特征肽；和/或
用结合至胱氨酸病的第三SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第三SHPK特征肽；
以及
对所述富集的肽进行液相色谱-多反应监测质谱(LC-MRM-MS)，从而检测一种或多种DBS样品中胱氨酸病的一种或多种特征肽。
106.如实施方案105所述的方法，其中
胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽由SEQ ID NO：6中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽由SEQ ID NO：7或8中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第三CTNS特征肽由SEQ ID NO：12中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第四CTNS特征肽由SEQ ID NO：13中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽由SEQ ID NO：9中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第二SHPK特征肽由SEQ ID NO：14中列出的氨基酸序列编码；和/或
胱氨酸病的所述第三SHPK特征肽由SEQ ID NO：15中列出的氨基酸序列编码。
107.如实施方案105或106所述的方法，其中
结合至胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQ ID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3；
结合至所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：48的CDR1、SEQID NO：49的的CDR2和SEQ ID NO：50的CDR3；和/或
结合至所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：54的CDR1、SEQID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3。
108.如实施方案105-107中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的VH结构域。
109.如实施方案105-108中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：70的VL结构域。
110.如实施方案105-109中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：106的重链。
111.如实施方案105-110中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：111的轻链。
112.如实施方案105-111中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：71的VH结构域。
113.如实施方案105-112中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：72的VL结构域。
114.如实施方案105-113中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：116的重链。
115.如实施方案105-114中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：121的轻链。
116.如实施方案105-115中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：73的VH结构域。
117.如实施方案105-116中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：74的VL结构域。
118.如实施方案105-117中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：126的重链。
119.如实施方案105-118中任一项所述的方法，其中用于富集胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：131的轻链。
120.如实施方案91-119中任一项所述的方法，所述方法还包括：
用结合至内源性ATP7B肽的抗体或其抗原片段富集所述内源性ATP7B肽；以及
对于每种特征肽，计算特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率。
121.如实施方案120所述的方法，其中所述内源性ATP7B肽由SEQ ID NO：10、SEQID NO：11、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中列出的氨基酸序列编码。
122.如实施方案120或121所述的方法，其中结合至所述内源性ATP7B肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ ID NO：58的CDR2和SEQ ID NO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDR1、SEQ ID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3。
123.如实施方案91-122中任一项所述的方法，所述方法还包括通过以下方式来检测威尔逊病(WD)的一种或多种特征肽：
用结合至第一ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一ATP7B特征肽；
用结合至第二ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二ATP7B特征肽；
用结合至第三ATP7B特征肽的抗体或抗原结合片段富集所述第三ATP7B特征肽；
用结合至第四ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第四ATP7B特征肽；
用结合至第五ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第五ATP7B特征肽；
用结合至第六ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第六ATP7B特征肽；和/或
用抗体或其抗原结合片段富集第七ATP7B特征肽；
对所述富集的肽进行液相色谱-多反应监测质谱(LC-MRM-MS)，从而检测一种或多种DBS样品中WD的一种或多种特征肽。
124.如实施方案123所述的方法，其中
WD的所述第一ATP7B特征肽由SEQ ID NO：10中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第二ATP7B特征肽由SEQ ID NO：11或21中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第三ATP7B特征肽由SEQ ID NO：16中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第四ATP7B特征肽由SEQ ID NO：17中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第五ATP7B特征肽由SEQ ID NO：18中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第六ATP7B特征肽由SEQ ID NO：19中列出的氨基酸序列编码；和/或
WD的所述第七ATP7B特征肽由SEQ ID NO：20中列出的氨基酸序列编码。
125.如实施方案123或124所述的方法，其中结合至所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ ID NO：58的CDR2和SEQ ID NO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDR1、SEQ ID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3。
126.如实施方案123-125中任一项所述的方法，其中用于富集WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：75的VH结构域。
127.如实施方案123-126中任一项所述的方法，其中用于富集WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：76的VL结构域。
128.如实施方案123-127中任一项所述的方法，其中用于富集WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：136的重链。
129.如实施方案123-128中任一项所述的方法，其中用于富集WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：141的轻链。
130.如实施方案91-129中任一项所述的方法，所述方法还包括将每种特征肽的浓度与相应的预定阈值浓度进行比较。
131.如实施方案130所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度是从正常对照受试者群体中的每种特征肽的平均浓度-1个标准偏差(SD)、-1.1SD、-1.2SD、-1.3SD、-1.4SD、-1.5SD、-1.6SD、-1.7SD、-1.8SD、-1.9SD、-2.0SD、-2.1SD、-2.2SD、-2.3SD、-2.4SD、-2.5SD、-2.6SD、-2.7SD、-2.8SD、-2.9SD、-3.0SD或更高SD。
132.如实施方案130或131所述的方法，其中从来自正常对照受试者群体中的每种特征肽的平均浓度的标准偏差来计算每种特征肽的相应的预定阈值浓度。
133.如实施方案132所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述CD3ε特征肽的平均浓度包括在70pmol/L至400pmol/L范围内的浓度。
134.如实施方案132或133所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第一WASp特征肽的平均浓度包括在600pmol/L至5000pmol/L范围内的浓度。
135.如实施方案132-134中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第二WASp特征肽的平均浓度包括在5500pmol/L至15000pmol/L范围内的浓度。
136.如实施方案132-135中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第一BTK特征肽的平均浓度包括在350pmol/L至2500pmol/L范围内的浓度。
137.如实施方案132-136中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第二BTK特征肽的平均浓度包括在550pmol/L至1600pmol/L范围内的浓度。
138.如实施方案132-137中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第一CTNS特征肽的平均浓度包括在40pmol/L至250pmol/L范围内的浓度。
139.如实施方案132-138中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第一SHPK特征肽的平均浓度包括在100pmol/L至8000pmol/L范围内的浓度。
140.如实施方案132-139中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第二ATP7B特征肽的平均浓度包括在90pmol/L至400pmol/L范围内的浓度。
141.如实施方案132-140中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第三ATP7B特征肽的平均浓度包括在30pmol/L至100pmol/L范围内的浓度。
142.如实施方案132-141中任一项所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中的所述第七ATP7B特征肽的平均浓度包括在200pmol/L至500pmol/L范围内的浓度。
143.如实施方案91-142中任一项所述的方法，其中所述肽的浓度由在LC-MRM-MS之前添加的参考特征肽的相应已知浓度确定。
144.一种用于筛查受试者的严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)、X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)、胱氨酸病或威尔逊病(WD)的测定，所述测定包括：
(I)(i)结合至SCID的CD3ε特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(ii)结合至WAS的第一WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(iii)结合至WAS的第二WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(iv)结合至XLA的第一BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(v)结合至XLA的第二BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(vi)结合至胱氨酸病的第一CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(vii)结合至胱氨酸病的第二CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(viii)结合至胱氨酸病的第三CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(ix)结合至胱氨酸病的第四CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(x)结合至胱氨酸病的第一SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xi)结合至胱氨酸病的第二SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xii)结合至胱氨酸病的第三SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xiii)结合至WD的第一ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xiv)结合至WD的第二ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xv)结合至WD的第三ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xvi)结合至WD的第四ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xvii)结合至WD的第五ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xviii)结合至WD的第六ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；和/或
(xix)结合至WD的第七ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
和/或
(II)相应的参考特征肽。
145.如实施方案144所述的测定，其中
(i)所述CD3ε特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：1中列出的氨基酸序列编码；
(ii)所述第一WASp特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：2中列出的氨基酸序列编码；
(iii)所述第二WASp特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：3中列出的氨基酸序列编码；
(iv)所述第一BTK特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：4中列出的氨基酸序列编码；和/或
(v)所述第二BTK特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：5中列出的氨基酸序列编码；
(vi)所述第一CTNS特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：6中列出的氨基酸序列编码；
(vii)所述第二CTNS特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：7或8中列出的氨基酸序列编码；
(viii)所述第三CTNS特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：12中列出的氨基酸序列编码；
(ix)所述第四CTNS特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：13中列出的氨基酸序列编码；
(x)所述第一SHPK特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：9中列出的氨基酸序列编码；
(xi)所述第二SHPK特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：14中列出的氨基酸序列编码；
(xii)所述第三SHPK特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：15中列出的氨基酸序列编码；
(xiii)所述第一ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：10中列出的氨基酸序列编码；
(xiv)所述第二ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：11或21中列出的氨基酸序列编码；
(xv)所述第三ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：16中列出的氨基酸序列编码；
(xvi)所述第四ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：17中列出的氨基酸序列编码；
(xvii)所述第五ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：18中列出的氨基酸序列编码；
(xviii)所述第六ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：19中列出的氨基酸序列编码；和/或
(xix)所述第七ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：20中列出的氨基酸序列编码。
146.如实施方案144或145所述的测定，其中
结合至所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：25的CDR1、SEQID NO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3；
结合至所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQ ID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：31的CDR1、SEQID NO：32的CDR2和SEQ ID NO：33的CDR3；
结合至所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQ ID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ IDNO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3；
结合至胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQ ID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3；
结合至所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：48的CDR1、SEQID NO：49的CDR2和SEQ ID NO：50的CDR3；
结合至所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：54的CDR1、SEQID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3；和/或
结合至所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ ID NO：58的CDR2和SEQ IDNO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDR1、SEQ ID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3。
147.如实施方案144-146中任一项所述的测定，其中结合至SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：63的VH结构域。
148.如实施方案144-147中任一项所述的测定，其中结合至SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：64的VL结构域。
149.如实施方案144-148中任一项所述的测定，其中结合至WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：65的VH结构域。
150.如实施方案144-149中任一项所述的测定，其中结合至WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：66的VL结构域。
151.如实施方案144-150中任一项所述的测定，其中结合至WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：86的重链。
152.如实施方案144-1551中任一项所述的测定，其中结合至WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：91的轻链。
153.如实施方案144-152中任一项所述的测定，其中结合至XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67的VH结构域。
154.如实施方案144-153中任一项所述的测定，其中结合至XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：68的VL结构域。
155.如实施方案144-154中任一项所述的测定，其中结合至XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：96的重链。
156.如实施方案144-155中任一项所述的测定，其中结合至XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：101的轻链。
157.如实施方案144-156中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的VH结构域。
158.如实施方案144-157中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：70的VL结构域。
159.如实施方案144-158中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：106的重链。
160.如实施方案144-159中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：111的轻链。
161.如实施方案144-160中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：71的VH结构域。
162.如实施方案144-161中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：72的VL结构域。
163.如实施方案144-162中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：116的重链。
164.如实施方案144-163中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：121的轻链。
165.如实施方案144-164中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：73的VH结构域。
166.如实施方案144-165中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：74的VL结构域。
167.如实施方案144-166中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：126的重链。
168.如实施方案144-167中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：131的轻链。
169.如实施方案144-168中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：75的VH结构域。
170.如实施方案144-169中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：76的VL结构域。
171.如实施方案144-170中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：136的重链。
172.如实施方案144-171中任一项所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：141的轻链。
173.如实施方案144-172中任一项所述的测定，其中所述参考特征肽是同位素标记的。
174.如实施方案144-173中任一项所述的测定，其中所述抗体或其抗原结合片段附着于磁珠。
175.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ IDNO：25的CDR1、SEQ ID NO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3。
176.如实施方案175所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQ ID NO：63。
177.如实施方案175或176所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQ ID NO：64。
178.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQ ID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ IDNO：31的CDR1、SEQ ID NO：32的CDR2和SEQ ID NO：33的CDR3。
179.如实施方案178所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQ ID NO：65。
180.如实施方案178或179所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQ ID NO：66。
181.如实施方案178-180中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含SEQ ID NO：86。
182.如实施方案178-181中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含SEQ ID NO：91。
183.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQ ID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ ID NO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3。
184.如实施方案183所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQ ID NO：67。
185.如实施方案183或184所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQ ID NO：68。
186.如实施方案183-185中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含SEQ ID NO：96。
187.如实施方案183-186中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含SEQ ID NO：101。
188.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQ ID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ IDNO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3。
189.如实施方案188所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQ ID NO：69。
190.如实施方案188或189所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQ ID NO：70。
191.如实施方案188-190中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含SEQ ID NO：106。
192.如实施方案188-191中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含SEQ ID NO：111。
193.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ IDNO：48的CDR1、SEQ ID NO：49的CDR2和SEQ ID NO：50的CDR3。
194.如实施方案193所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQ ID NO：71。
195.如实施方案193或194所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQ ID NO：72。
196.如实施方案193-195中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含SEQ ID NO：116。
197.如实施方案193-196中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含SEQ ID NO：121。
198.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ IDNO：54的CDR1、SEQ ID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3。
199.如实施方案198所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQ ID NO：73。
200.如实施方案198或199所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQ ID NO：74。
201.如实施方案198-200中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含SEQ ID NO：126。
202.如实施方案198-201中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含SEQ ID NO：131。
203.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ ID NO：58的CDR2和SEQ ID NO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ IDNO：60的CDR1、SEQ ID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3。
204.如实施方案203所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQ ID NO：75。
205.如实施方案203或204所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQ ID NO：76。
206.如实施方案203-205中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含SEQ ID NO：136。
207.如实施方案203-206中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含SEQ ID NO：141。
208.一种试剂盒，所述试剂盒包括：
(I)(i)结合至SCID的CD3ε特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(ii)结合至WAS的第一WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(iii)结合至WAS的第二WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(iv)结合至XLA的第一BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(v)结合至XLA的第二BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(vi)结合至胱氨酸病的第一CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(vii)结合至胱氨酸病的第二CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(viii)结合至胱氨酸病的第三CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(ix)结合至胱氨酸病的第四CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(x)结合至胱氨酸病的第一SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xi)结合至胱氨酸病的第二SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xii)结合至胱氨酸病的第三SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xiii)结合至WD的第一ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xiv)结合至WD的第二ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xv)结合至WD的第三ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xvi)结合至WD的第四ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xvii)结合至WD的第五ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
(xviii)结合至WD的第六ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；和/或
(xix)结合至WD的第七ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
和/或
(II)相应的参考特征肽；以及
(III)关于使用所述试剂盒中的内容物的使用说明书。
209.如实施方案208所述的试剂盒，其中
(i)所述CD3ε特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：1中列出的氨基酸序列编码；
(ii)所述第一WASp特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：2中列出的氨基酸序列编码；
(iii)所述第二WASp特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：3中列出的氨基酸序列编码；
(iv)所述第一BTK特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：4中列出的氨基酸序列编码；和/或
(v)所述第二BTK特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：5中列出的氨基酸序列编码；
(vi)所述第一CTNS特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：6中列出的氨基酸序列编码；
(vii)所述第二CTNS特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：7或8中列出的氨基酸序列编码；
(viii)所述第三CTNS特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：12中列出的氨基酸序列编码；
(ix)所述第四CTNS特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：13中列出的氨基酸序列编码；
(x)所述第一SHPK特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：9中列出的氨基酸序列编码；
(xi)所述第二SHPK特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：14中列出的氨基酸序列编码；
(xii)所述第三SHPK特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：15中列出的氨基酸序列编码；
(xiii)所述第一ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：10中列出的氨基酸序列编码；
(xiv)所述第二ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：11或21中列出的氨基酸序列编码；
(xv)所述第三ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：16中列出的氨基酸序列编码；
(xvi)所述第四ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：17中列出的氨基酸序列编码；
(xvii)所述第五ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：18中列出的氨基酸序列编码；
(xviii)所述第六ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：19中列出的氨基酸序列编码；和/或
(xix)所述第七ATP7B特征肽和/或其参考特征肽由SEQ ID NO：20中列出的氨基酸序列编码。
210.如实施方案208或209所述的试剂盒，其中
结合至所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：25的CDR1、SEQID NO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3；
结合至所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQ ID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：31的CDR1、SEQID NO：32的CDR2和SEQ ID NO：33的CDR3；
结合至所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQ ID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ IDNO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3；
结合至胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQ ID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3；
结合至所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：48的CDR1、SEQID NO：49的CDR2和SEQ ID NO：50的的CDR3；
结合至所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：54的CDR1、SEQID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3；和/或
结合至所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ ID NO：58的CDR2和SEQ IDNO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDR1、SEQ ID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3。
211.如实施方案208-210中任一项所述的试剂盒，其中结合至SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：63的VH结构域。
212.如实施方案208-211中任一项所述的试剂盒，其中结合至SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：64的VL结构域。
213.如实施方案208-212中任一项所述的试剂盒，其中结合至WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：65的VH结构域。
214.如实施方案208-213中任一项所述的试剂盒，其中结合至WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：66的VL结构域。
215.如实施方案208-214中任一项所述的试剂盒，其中结合至WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：86的重链。
216.如实施方案208-215中任一项所述的试剂盒，其中结合至WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：91的轻链。
217.如实施方案208-216中任一项所述的试剂盒，其中结合至XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67的VH结构域。
218.如实施方案208-217中任一项所述的试剂盒，其中结合至XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：68的VL结构域。
219.如实施方案208-218中任一项所述的试剂盒，其中结合至XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：96的重链。
220.如实施方案208-219中任一项所述的试剂盒，其中结合至XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：101的轻链。
221.如实施方案208-220中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的VH结构域。
222.如实施方案208-221中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：70的VL结构域。
223.如实施方案208-222中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：106的重链。
224.如实施方案208-223中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：111的轻链。
225.如实施方案208-224中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：71的VH结构域。
226.如实施方案208-225中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：72的VL结构域。
227.如实施方案208-226中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：116的重链。
228.如实施方案208-227中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：121的轻链。
229.如实施方案208-228中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：73的VH结构域。
230.如实施方案208-229中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：74的VL结构域。
231.如实施方案208-230中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：126的重链。
232.如实施方案208-231中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：131的轻链。
233.如实施方案208-232中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：75的VH结构域。
234.如实施方案208-233中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：76的VL结构域。
235.如实施方案208-234中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：136的重链。
236.如实施方案208-235中任一项所述的试剂盒，其中结合至SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：141的轻链。
237.如实施方案208-236中任一项所述的试剂盒，所述试剂盒还包括滤纸卡、冲孔工具、消化酶、消化缓冲液、所述抗体或其抗原结合片段的固体载体以及洗脱缓冲液中的一种或多种。
238.如实施方案208-237中任一项所述的试剂盒，其中所述参考特征肽是同位素标记的。
239.如实施方案208-238中任一项所述的试剂盒，其中所述抗体或其抗原结合片段附着于磁珠。
(XI)实验性实施例。
实施例1.概述。进行了研究以评估基于与选择性反应监测质谱结合的肽免疫亲和富集(免疫-SRM)的多重测定是否能够可靠地且准确地将患有CD3ε相关严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)和X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)的受影响的患者与彼此以及与未受影响的正常对照干血斑(DBS)样品区分开来。对来自42例原发性免疫缺陷病症(PIDD)患者、40例正常成人对照和62例正常新生儿的DBS样品中的CD3ε、WASp和BTK(分别用于SCID、WAS和XLA)的蛋白水解产生的肽进行了盲法多重分析。免疫-SRM测定可靠地定量DBS中的靶肽，包括测定内和测定间精确度(11％-22％和11％-43％)、线性(1.39-2000fmol肽)和稳定性(72小时内≤0.09％差异)。对特征肽的分析发现与对照组相比，受影响患者中的肽水平的统计上显著的降低(或不存在)(SCID：p＝0.05，WAS和BTK：p＝0.0001)。来自DBS中的CD3ε、WASp和BTK的蛋白水解肽的基于免疫-SRM的定量可将相关PIDD病例与对照区分开。所述方法可用于进行选择性PIDD的大规模多重新生儿筛查。
材料和方法。患者样品。PIDD和正常对照血液样品从Seattle Children′sImmunology Diagnostic Laboratory获得。在机构审查委员会批准后，从华盛顿州新生儿筛查实验室(Shoreline，WA)取得新生儿DBS。XLADBS是从20名疑似越南患者收集的，并按常规邮件运输至西雅图儿童医院。通过桑格测序(Sanger sequencing)获得的这些患者的基因型先前报道在Segundo等人Front Immunol.Frontiers；2018；9：289中。总共获得了来自42名PIDD患者和40名正常对照的DBS样品。通过以下方式制备正常对照和PIDD患者DBS：将70μL血液/12mm斑点吸移到滤纸卡(Protein Saver 903Card，Whatman，Piscataway，NJ)上，使其在室温下干燥过夜，并在-80℃下储存在密封的塑料袋中直到使用。将受影响的患者样品从收集地点运输并储存在-80℃直到使用。
替代肽的选择和抗体产生。通过计算机胰蛋白酶消化和NCBI BLAST工具选择CD3ε、WASp和BTK的替代肽。根据公认的免疫-SRM开发的主要标准(包括肽长度、转录后修饰的缺乏以及通过BLAST搜索在人基因组中的独特性)进行最终的肽选择，如前所述。Kerfoot等人Proteomics Clin Appl.2012；6：394-402；Abbatiello等人Mol.CellProteomics.American Society for Biochemistry and Molecular Biology；2015；14：2357-2374；Hoofnagle等人Clin.Chem.2016；62：48-69。先前已报道了ATP7B特征肽的肽选择和单克隆抗体产生。Jung等人2017，同上。然后凭经验筛查粗肽，以确定通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测和定量的适合性。
亲和纯化的兔多克隆抗体(pAb)或单克隆抗体(mAb)是由Pacific Immunology(Ramona，CA)或Fred Hutchinson Cancer Research Center Immunology实验室(Seattle，WA)针对五种肽成功产生的。简言之，合成具有C末端延伸(GSGC，SEQ ID NO：77)或N末端半胱氨酸延伸的特征肽，并将其缀合至匙孔血蓝蛋白(KHL)以进行免疫。每种肽注射两只新西兰白兔或五只小鼠。所有选定肽的pAb或mAb成功地从25mL抗血清中进行亲和纯化。
免疫-SRM测定试剂。ProteaseMAXTM表面活性剂(编号V2072)和蛋白质组学级胰蛋白酶(编号V5113)购自Promega(Madison，WI)。牛血清白蛋白标准物(200mg/mL)和(3-[3-胆酰胺丙基)＝二甲基铵基]-1-丙磺酸酯)(PierceTM CHAPS，编号PI28300)洗涤剂购自ThermoFisher Scientific(Waltham，MA)。碳酸氢铵(40867-50G-F)购自FlukaAnalytical(Munich，Germany)。乙腈(编号A955)、水(编号W6，LCMS最佳等级)、甲酸(编号PI28905)和磷酸盐缓冲盐水(PBS，编号10010-023)购自Thermo Fisher Scientific(Waltham，MA)。
重的稳定同位素标记的肽获自Anaspec(Fremont，CA)。稳定的同位素标记的肽通过HPLC纯化至＞95％，并且将C末端精氨酸或赖氨酸用13C和15N原子标记，分别导致质量偏移+8或+10Da。将等分试样在-20℃下储存在5％乙腈/0.1％甲酸中直到使用。
将抗体以1μg抗体与2.5μL珠粒的比率固定在2.8μm Dynabeads蛋白G磁珠(编号10004D，Invitrogen，Carlsbad，CA)上。简言之，将250μL的磁珠添加至1.5mL Eppendorf管(022363204 Eppendorf)中，并用250μL的1×PBS洗涤两次，然后添加100μg的抗体和1×PBS+0.03％CHAPS(编号28300，Thermo Scientific，Waltham，MA)，以产生总计250μL体积。使抗体在4℃滚动下与珠粒偶联过夜。第二天，通过化学交联将抗体固定在珠粒上。简言之，使用磁下拉法(magnetic pulldown)收集抗体珠粒，丢弃过量的PBS，并添加200mM三乙醇胺(pH8.5)(编号T58300，Sigma Aldrich，St.Louis，MO)中的300μL新鲜制备的20mM DMP(庚二亚氨酸二甲酯二盐酸盐，编号D8388，Sigma Aldrich，St.Louis，MO)。将样品在室温下滚动30分钟，并丢弃三乙醇胺中的DMP。添加250μL的150mM单乙醇胺(编号411000，Sigma Aldrich，St.Louis，MO)，并将珠粒在室温下滚动30分钟。将抗体珠粒使用250μL的5％乙酸+0.03％CHAPS洗涤两次(每次在室温下滚动5分钟)，并且使用250μL的1×PBS+0.03％CHAPS再洗涤一次。然后洗涤CD3ε、WASp和BTK抗体连接的珠粒，并在5％乙酸+3％乙腈(ACN)中孵育，用250μL的1xPBS+0.03％CHAPS洗涤，并且后两个步骤重复一次。用250μL的1×PBS+0.03％CHAPS洗涤所有抗体连接的珠粒，直到达到中性pH(7.0)。然后将洗涤的抗体连接的珠粒重新悬浮在250μL的1×PBS+0.03％CHAPS和2.5μL的NaN3(52002-5G SigmaAldrich)中以获得抗真菌性质，并储存在4℃下直到使用。
DBS蛋白提取和胰蛋白酶消化。对于每个样品(盲法正常对照或患者)，使用标准皮革冲孔工具将含有70μL血液的整个DBS斑点(13mm)打孔成直径3mm的17个冲孔。最终样品表示是SCID：n＝3，WAS：n＝11，XLA：n＝26，以及正常对照(n＝40)。将冲孔置于1.5mLeppendorf管中，并向每个管中添加490μL的50mM碳酸氢铵(pH 8)中的0.1％ProteaseMaxTM。将管在Eppendorf MixMate(Eppendorf，Hamburg，Germany)上涡旋振荡1小时，然后将10μL的每个样品等分并稀释200倍，以进行Bradford测定来确定蛋白质浓度。在5mM下用2M DTT进行二硫键还原，并向每个管中添加另外490μL的50mM碳酸氢铵(pH 8)中的0.1％ProteaseMaxTM，然后在37℃水浴中孵育30分钟。然后以1∶50的酶与蛋白质比率(w/w)添加胰蛋白酶，并添加乙腈至15％的最终浓度。将混合物在37℃水浴中孵育过夜进行消化，然后以13,000RPM离心10分钟，然后将每种上清液转移至新管中并在SavantTM SpeedVacTM高容量浓缩器(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)中干燥。所有胰蛋白酶消化的DBS消化物均储存在-80℃直到使用。
对于从华盛顿州NBS实验室分析的样品，使用5或6个3mm冲孔进行蛋白质提取和消化(n＝62)。程序与针对之前样品的那些相同，不同之处在于体积减少如下：每次添加150μL的0.1％ProteaseMaxTM和0.78μL的DTT。
肽免疫亲和富集。将DBS消化物重新悬浮在1×PBS+0.03％CHAPS中，以产生1μg/μL标称蛋白质消化物浓度。对于每个靶标，将交联的抗体包被的珠粒添加至2μg pAb的总质量中。然后添加20μL的1M Tris pH 8.0(15568-025 UltraPure，Invitrogen，Carlsbad，CA)。添加同位素标记的肽作为内部标准物(IS)。将此悬浮液在4℃下滚动孵育过夜以实现肽捕获。第二天，将抗体珠粒：肽复合物用100μL PBS+0.01％CHAPS洗涤两次，并在100μL 0.01％PBS+0.01％CHAPS中洗涤一次。最后，通过在30μL的5％乙酸/3％ACN中孵育来洗脱肽。将释放的肽储存在-80℃下直到分析。对于从WA State NBS实验室分析的样品，程序与针对之前样品的那些相同，不同之处在于体积减少如下：58.1μL的1x PBS+0.03％CHAPS，对于每种肽0.59μg pAb，3.13μL内部标准物(IS)和12.5μL TRIS。
液相色谱-串联质谱。利用两个独立的LC-MS/MS系统和仪器配置(如下所述)，在两个实验室地点对富集的样品进行了分析，以检查实验室间数据采集的变异性。然后将测量的肽浓度进行比较以进行方法验证。先前已经报道了肽母离子谱和子离子谱。Kerfoot等人Proteomics Clin Appl.2012；6：394-402。
实验室地点1：仪器包括具有与Waters M级梯度泵和负载泵(Waters，Milford，MA)连接的ionkey源技术的Waters Xevo TQ-XS MS。色谱溶剂是A：H2O+0.1％甲酸(FA)和B：ACN+0.1％FA。最初，使用98∶2 A∶B的恒定流以20μL/min在3分钟内将肽混合物负载到M级阱对称性300μm x 50mm C18柱(
5μm)上。随后，使流反向，并使用梯度流跨150μm x 100mmBEH C18 ikey(
1.7μm)分离肽。梯度方法编程显示在表4中。在此地点监测的肽是CD3ε197、WASp 274、WASp 289、BTK 407和ATP7B 1056。
表4.在实验室地点1和实验室地点2进行特征肽分离的LC方法设置。A＝H2O+0.1％甲酸，B＝B：ACN+0.1％甲酸
跃迁和碰撞能量(CE)的参数取自Skyline中先前优化值的线性回归，以及使用Waters intellistart技术生成的那些参数，以鉴定电离时最强烈的碎片。在Q1和Q3四极杆中以单位/单位分辨率获得SRM跃迁，停留时间为5ms并且质量范围之间有3ms停顿，因此循环时间为1.5s。所有样品均以盲法方式运行。
实验室地点2：在与Eksigent 425LC和Nanoflex Chip系统连接的SCIEX 5500QTRAP质谱仪上进行LC-MS。色谱溶剂是A：H2O+0.1％FA和B：90％ACN+0.1％FA。将肽在2％B下使用4μL/min的流速负载到0.2x0.5mm捕集柱(Reprosil-PurAQ C18，3μm，120A)上，持续4分钟。将肽以300nL/min在0.075x150mm柱(Reprosil-Pur AQ C18，3μm，120A)上洗脱。梯度程序在表4中示出。碰撞能量设置取自Skyline。MacLean等人Bioinformatics.2010；26：966-968。以10ms停留时间和质量范围之间的5ms停顿，以单位/单位分辨率获取跃迁，因此循环时间为0.75秒。所有数据都是以盲法方式获取的。
方法性能评估。进行反应曲线以确定DBS的背景基质中的测定线性和灵敏度。使用提取缓冲液(ProteaseMaxTM，碳酸氢铵)一式三份提取来自正常对照DBS的冲孔(每个样品4个冲孔)。对提取的蛋白质进行胰蛋白酶消化，并合并消化物以创建共同的背景基质。将重的稳定同位素标准物掺入消化物中，并连续稀释以创建具有不同肽含量(2000、200、12.5、4.17、1.39、0.69fmol)的样品。将两微克与磁性蛋白G珠粒共价偶联的每种抗体添加到背景基质中，并且孵育过夜。用PBS洗涤抗体珠粒，并通过SRM分析洗脱液。
通过在单独的5天内进行内源性(轻)肽信号的测量来表征可重复性以及测定内和测定间精确度。每天对每个样品进行5次完整过程重复分析(包括冲孔、提取、消化、富集和质谱分析)。
最后，通过将在室温下储存1天和3天的DBS中检测到的内源性(轻)肽与在密闭容器中在-80℃下的DBS中检测到的肽进行比较来评估稳定性。每个样品按上述过程一式三份进行加工。在每个时间点计算差异百分比。
分析测定的实验室间验证。患者样品的DBS提取、胰蛋白酶消化和肽捕获均在实验室地点1进行。将从抗体珠粒洗脱的肽溶液分为两个15μl等分试样，以用于在实验室地点1和实验室地点2进行分析，以进行测定的分析性能的实验室间验证。
数据分析。使用Skyline(MacCoss Lab Software，开源，Seattle，WA)对所有SRM数据进行了分析和绘图。MacLean等人Bioinformatics.2010；26：966-968。通过比较特征肽的峰面积与其以已知浓度(100fmol)添加的IS的比率来定量内源性靶肽浓度。使用GraphpadPrism(San Diego，CA)生成统计数据。使用Graphpad Prism和95％置信区间构建接受者操作特征(ROC)曲线。
结果。肽选择和抗体开发。所选择的肽序列、分子量、母离子和子离子列于图1中。先前已经报道了目标肽的片段化模式。Kerfoot等人Proteomics Clin Appl.2012；6：394-402。针对所有五种肽产生了亲和纯化的多克隆抗体(Pacific Immunology，Ramona，CA)，由于其能够成功捕获其靶序列并且不存在由共纯化的肽污染物引起的背景信号，因此被寻求用于人样品。Kuhn等人Clin.Chem.2009；55：1108-1117；Hoofnagle等人Clin.Chem.2008；54：1796-1804；Whiteaker等人Mol.Cell Proteomics.American Society forBiochemistry and Molecular Biology；2011；10：M110.005645。
方法性能评估。表5中报告了分析最优值。总之，线性反应跨度在1.39至2000fmol肽的范围内(图2A-2E)。反应曲线上所有点的中值变异系数(CV)是11％。定量下限(LLOQ)由最低点定义，以产生CV＜20％。LLOQ在0.69至12.5fmol的范围内。在DBS样品中，在LLOQ以上检测到五种肽。在所有肽中，平均测定内(即日内)变异性在11％至22％的范围内，而测定间(即日间)变异性在11％至43％的范围内。值得注意的是，单个肽(BTK 545-558)显示大于20％CV的变异性。
表5.特征肽的分析性能
最后，通过将在室温下储存1天和3天的DBS中检测到的内源性(轻)肽与在密闭容器中在-80℃下保藏的DBS中检测到的肽进行比较来评估稳定性。结果报告在表5中。所有五种肽均具有高于LLOQ的内源性信号，并且随时间推移的变化很小。每种肽的代表性多反应监测(MRM)色谱图显示在图3A-3E中。
总之，通过两次单独的仪器分析确定的浓度之间存在高度的一致性。比较两个测量值的相关图，图4A-4D示出在主要肽CD3ε197(图4B)、WASp 274(图4A)、BTK 407(图4C)和ATP7B 1056(图4D)的情况下，R2值≥0.97下的测量浓度的线性。发现WASp 289的测量值与R2＝0.85相关，并且因此可用作WASp 274的次要标志物(图5)。
肽浓度。在分析后，对正常对照不设盲以定义受影响患者比较的正常范围。来自正常对照的平均肽浓度如下(平均值±SD)：CD3ε＝228.68±150.98pmol/L，WASp 274＝1176.96±456.68pmol/L，WASp289＝10326.98±4513.13pmol/L，BTK 407＝635.09±260.40pmol/L，并且BTK 545＝1038.44±465.77pmol/L。在每种情况下，特征肽的分析发现患者肽水平相对于对照组在统计学上显著(p＜0.05-0.0001)的降低(图6A-6E)。大多数受影响患者中的肽水平显著降低或不存在。对于每个患者，还使用先前开发的免疫-SRM方法确定了ATP7B 1056的浓度。Jung等人2017，同上。这些蛋白质浓度用作质量控制(QC)测量值，并且它们在样品之间的一致性用于评估消化和过程可再现性(图3A-3E)。
每个PIDD诊断的肽浓度截断值任意设置为-1.25SD(CD3ε)、-2.15SD(WASp 274)、-1.75SD(WASp 289)、-2SD(BTK 545)和-2.25SD(BTK 407)。使用这些范围在正常对照中导致2个假阳性指示。NC4和NC20分别指示为WAS和SCID患者。NC特征肽值显示在图8中。PIDD的阳性鉴定的截断值显示在表6中。
表6.根据浓度的特征肽的截断值
使用这些截断值，可预测每位患者的特定PIDD诊断。预测的诊断显示出与临床或遗传诊断的良好一致性，如图9所示。每个分子确诊的WAS和BTK病例也通过免疫-SRM分析进行了诊断。临床诊断为无丙种球蛋白血症的两名患者，患者10和13通过免疫-SRM具有正常BTK蛋白水平。在分子上，这些患者中未鉴定出BTK的突变。Segundo等人FrontImmunol.Frontiers；2018；9：289。令人感兴趣的是，患有无丙种球蛋白血症的患者12具有低BTK蛋白水平，但在BTK的编码区中未发现突变。另外，1例X连锁亚效等位基因SCID，患者41通过免疫-SRM鉴定为正常。对于所使用的每种特征肽，ROC图的曲线下面积(AUC)分析揭示0.925至0.999的面积，p值范围为0.015-0.0001(图10A、10B)。总体97.6％的病例在临床诊断与免疫-SRM测定结果之间保持一致。令人感兴趣的异常和不一致病例将在下文进一步讨论。
NBS实验室样品的特征肽浓度在图11中示出。每种DBS样品具有高于先前设置的PIDD诊断截断值的有效的测量肽浓度，从而表明不受影响的状态。
已证明免疫-SRM是用于自DBS多重检测患有三种威胁生命的PIDD(即，SCID、WAS和XLA)的患者的灵敏且特异性的蛋白质组学筛查方法。结果清楚地将PIDD患者与正常对照区分开来，其中低水平的跨膜蛋白CD3ε和细胞内蛋白WASp和BTK的内源性肽与目标疾病(分别SCID、WAS和XLA)相关。这些诊断可单次运行，每种疾病靶标的总运行时间为20分钟或6.67分钟。所公开的结果还证明了在DBS中的肽稳定性，在室温下储存72小时后浓度的变化极小(表5)。
免疫-SRM平台以这种高度多重方式可靠地检测了来自正常对照DBS的内源性肽。正常对照DBS(N＝40)不设盲，并用于定义正常范围和潜在筛查阳性截断值(图8)。在临床实验室中，诊断测试的参考范围由普通群体中的正态分布确定。筛查测试的初始截断值通常是保守的，目的是检测所有真阳性，而不产生相对于疾病发生率的过高筛查阳性率(表6)。然而，这些截断值会根据基于群体的研究不断地验证和调整。给定这些参数，筛查阳性结果的定义在此实施例中的肽的平均值以下1.25-2.25个标准偏差(SD)的范围内。选定的截断值产生了2个假阳性正常对照，一个WAS(NC4)和一个SCID(NC20)(图8)。在NC4的情况下，重新筛查显示WASp水平在正常范围内。这些初步的截断值不是静态的，并且随着筛查更多的正常对照和患者样本将变得更好。
使用这些截断值，阳性地鉴定出涵盖广泛范围的突变的每位分子验证的WAS和BTK患者(图9)。如所假设的，在大多数BTK和WAS病例中，肽浓度降低，而与基因型无关。Qasim等人Br.J.Haematol.2001；113：861-865；Jin等人Blood.American Society of Hematology；2004；104：4010-4019；Futatani等人British Journal of Haematology.2001；114(1)：141-9。因此，这些肽为诊断和筛查提供了生物标志物。在3例可用于测试的SCID患者中，有2例通过CD3ε分析被阳性鉴定。第三名患者虽然相对于大多数正常对照而言具有较低的CD3ε水平，但仍在定义的截断值之内，并且在IL2RG中具有已知产生部分功能性蛋白的“亚效等位基因”突变。这通过患者总CD3+ T细胞计数略低(800个细胞/μL)、但并非与经典形式的SCID那样不存在得以反映。由于CD3ε仅由外周血中的CD3+ T细胞表达，因此存在的CD3ε蛋白的量反映总CD3+ T细胞计数。因此，免疫-SRM方法可能遗漏患有亚效等位基因形式的SCID的患者，患有“有漏洞(1eaky)”形式的SCID的寡克隆T细胞群体扩增的患者，或者具有扩增的母体来源的T细胞的患者。
构建ROC曲线以评估免疫-SRM分析的诊断能力。这些图将真阳性率与假阳性率联系起来，截断值越来越严格。随着诊断截断值降低，测试将具有更大的能力来记录真阳性，但是这一过程也更有可能导致假阳性。因此，维持高真阳性率和低假阳性率的筛查测试将导致图靠近y轴和较大的AUC(图10A、10B)。这些值表明对PIDD的特征肽进行免疫-SRM分析的高诊断准确性。
消化和过程性能的QC监测以ATP7B特征肽测量值的形式包括在当前的免疫-SRM多重检测中。由于并非所有检测到的代谢物都是有用的NBS靶标，因此使用代谢物比率的计算和次要代谢物分析来提高NBS对某些疾病的灵敏度和特异性，如甲基丙二酸尿症中的C3∶C2比率和2-甲基柠檬酸分析。Lindner等人J.Inherit.Metab.Dis.第2版2008；31：379-385。此外，靶标比率法可说明由多种因素带来的样品之间的差异，所述因素包括样品收集质量、储存、提取和消化效率以及血液特性。Razavi等人Bioanalysis.Future Science LtdLondon，UK；2016；8：1597-1609。在此，发现在所筛查的样品中ATP7B浓度在很大程度上是一致的(图7)。缺乏ATP7B可用于标记加工不当或处理不当的样本。作为初始实验，按比率将每种PIDD肽与同一样品中ATP7B的内源性浓度进行比较。基于肽浓度的所得预测结果与临床诊断完全一致，从而证明免疫-SRM和ATP7B比率法是PIDD诊断的有效和补充工具(图12和表7)。这些类型的比率可用于临床免疫-SRM筛查，前提是所选择的肽被证明是一大批样品中普遍存在且显著不变的信号。
表7.通过针对ATP7B肽的比率得出的特征肽的截断值
一个病例证明了对于目标蛋白质具有主要和次要特征肽的重要性。在对BTK 545而不是主要标志物BTK 407进行分析后，发现患者18具有阳性BTK诊断。相对于平均值，BTK407的水平显著降低，分别为167.86对比642.16pmol/L，但不足以低至触发阳性筛查。相比之下，由于患者携带p.Y551N突变，所述突变位于特征肽本身所涵盖的氨基酸序列545-558中，所以BTK 545水平几乎不存在(图9)。在这种情况下，多重肽允许确认最初是临界的阳性诊断。
值得注意的是，在通过桑格测序缺乏BTK突变的两名临床定义的无丙种球蛋白血症患者(样品#10和#13)中发现了正常水平的BTK(图9)。因此，尽管未进行更广泛的遗传测试，但这些患者可能未患XLA，而是可能患有其他常染色体形式的无丙种球蛋白血症。另一名患者(样品#12)具有降低的BTK蛋白水平，但没有可鉴定的BTK突变。这表明所述突变可在编码区和内含子-外显子接点的测序过程中遗漏，或者患者可能携带影响调控元件、聚腺苷酸化信号或内含子区域的BTK突变。这些病例突出了免疫-SRM的临床实用性。
另外，从同一WAS患者的骨髓移植(BMT)前后获得两个样品(分别图9中的样品#29和30)。BMT前，免疫-SRM分析鉴定所述患者患有WAS。BMT后，所述患者被鉴定为正常。此病例突出了免疫-SRM遵循BMT的治疗过程并确认免疫系统成功重构的能力。类似的原理可应用于接受基因疗法的单一遗传病症的患者。
总体而言，所述分析证明，所公开的测定具有宽的线性范围和可接受的精确度，以确定DBS中靶肽的浓度(表5)。相关图显示在两个单独的实验室设施中通过不同MS仪器进行的样品分析的显著一致性(图4A-4D和图5)。通过分析，五种肽中的四种，CD3ε197、WASp274、BTK 407和ATP7B 1056几乎相同，R2值＞0.97。WASp 289在R2＝0.85的重叠时表现出稍多的可变性能，并且因此在进行临床分析时可能是WASp 274的次要标志物。此外，BTK 545显示大于20％CV的变异性，这使其适合作为BTK 407的次要标志物。这些结果表明，免疫-SRM分析具有临床应用和可转移性。在临床环境中，参考标准和/或校准物的使用将有助于对发现结果的实验室间验证。
由华盛顿州的NBS实验室提供的随机选择的样品被用于测试在NBS的背景下利用免疫-SRM分析的可行性。由于有限的样品可用性并且为了从较小的样品测试特征肽分析的效用，所使用的DBS量从1个完整斑减少至5个或6个3mm冲孔。目标肽易于富集和分析，而对样品加工的变化较小。特征肽的浓度均大于从已知正常对照的分析获得的预定截断值(图11)。因此，这些患者将被指定为正常。以大大减少的样品输入来稳健地执行这种分析的能力使免疫-SRM分析更适合转化成NBS。这种高通量多重方法可有效减少每种疾病的运行时间，从而使其适用于NBS，其中当前的自动化方法的典型运行时间少于三分钟。Rashed等人Clin.Chem.1997；43：1129-1141；Khalid等人J Med Screen.SAGE Publications，Sage UK：London，England；2008；15：112-117。使用在环境温度下经由传统邮局自越南运输的DBS成功预测BTK患者也突出了用于在DBS收集和运输为经济的资源贫乏地区的诊断测试的潜在效用。
NBS是近代最成功的公共卫生举措之一，但是依赖于由于下游酶缺乏所致的累积代谢物的检测。然而，许多遗传病症(包括PIDD)的特征在于蛋白质不存在或减少，从而限制了当前NBS方法的范围。Qasim等人Br.J.Haematol.2001；113：861-865；Jin等人Blood.American Society of Hematology；2004；104：4010-4019。通过能够检测来自DBS的PIDD相关肽，免疫-SRM填补了当前覆盖范围的这一空白，从而使NBS扩展到目前没有代谢物生物标志物的可治疗疾病。免疫-SRM将快速提供蛋白质缺乏的定量证据，并且可与来自DBS的初步筛查和分子分析同时进行，而无需进一步的侵入性程序。这些特征肽的定量奠定了免疫-SRM作为多种先天性疾病的高度多重筛查和诊断工具的基础。
实施例2.使用DBS开发用于胱氨酸病的NBS的定量测定。如实施例1中所述进行免疫-SRM测定，但是使用胱氨酸病的特征肽。开发了识别CTNS 115肽的抗体，并将其用于筛查患者样品。这种肽生物标志物提供DBS中低至16.9pmol/L的CTNS的稳健且特异性的检测(表8)。CTNS的测量浓度在5.5-79.8pmol/L的范围内。SHPK的水平在922.3-5787.6pmol/L的范围内。样品CTNS 00001-CTNS 00013是盲的，并且预测的突变状态是基于免疫-SRM所证明的蛋白质水平。胱氨酸病的最常见形式是由57kb的缺失突变引起的，所述突变导致CTNS蛋白以及邻近蛋白SHPK的丢失。粗体的样品被确认或预测为含有纯合57-kb缺失突变。ND：未检测到(表8)。
表8.患者和正常对照样品中CTNS和SHPK蛋白的浓度。
实施例3.CTNS和SHPK肽的多重免疫-SRM测定用于诊断胱氨酸病。来自受影响的和正常对照DBS的针对CTNS和SHPK的肽生物标志物的多重定量已在单个实验中实现，并且结果与潜在患者的基因型一致。CTNS 115肽与景天庚酮糖激酶(SHPK)的特征肽生物标志物SHPK 363接合，用于胱氨酸病患者样品的多重分析。这些测定涉及在免疫-SRM工作流程中针对CTNS 115和SHPK 363两者的抗体的联合使用。此分析中使用了四微克的CTNS 115mAb和0.25微克的SHPK 363mAb。对4名正常对照、6名确诊的胱氨酸病患者和13例盲样品进行了多重分析(表8)。已知患者样品中完全没有CTNS 115。另外，确认为对于57kb缺失纯合的患者样品缺乏SHPK363，而杂合患者样品中存在不同水平的SHPK蛋白。令人感兴趣地，相对于不存在缺失的样品CTNS 211-213，样品CTNS 209(57kb del和c.838A＞G复合杂合；p.K280R)具有降低的SHPK水平(图13)，从而表明基因型与肽水平之间的相关性。在13例盲样品中，仅两例具有可检测的CTNS浓度。这些样品被预测为正常对照。所述测定还准确地预测样品00005和00009-00010来自具有纯合缺失的患者，因为它们缺乏CTNS和SHPK肽两者(表8)。
基于对CTNS 115和SHPK 363的初始多重定量，可确定增强的灵敏度对于增加CTNS115信号是必要的。这促使从使用Waters Ionkey系统进行LC-MS/MS检测期间的每分钟微升流速过渡到更灵敏的LC-MS/MS测定的每分钟纳升流速。这一变化大大增强了测量的分析灵敏度。当在两个系统上进行分析时，对CTNS 115的直接比较发现，纳流分析使肽信噪比(S/N)在123amol下增强44倍，在3amol下增强16倍并且在0.3amol下增强5倍(图14)。这显著降低DBS中CTNS 115的定量限。此外，使用通常注入用于LC-MS/MS分析的1/2样品获得增加的信号。这样允许减少将来筛查所需的DBS样品的量。
通过这种改进的测定，筛查了9例盲样品和4例正常对照(图15)。发现九例样品中有七例完全缺乏CTNS 115。这七例中的六例还缺少SHPK363，并且据预测携带57kb纯合缺失突变，所述突变将削弱两种蛋白质的产生。剩余三名患者被预测为杂合子。发现所预测的杂合子中的两者的CTNS 115水平相对于对照为中度至显著降低。这些预测在包括三种复合杂合子的六例病例中进行了确认。剩余三名患者的测序仍在进行中，但通过免疫-SRM预测为57kb缺失纯合子。发现正常对照具有明显的CTNS 115和SHPK 363水平。
将来自其他蛋白质的经验证的肽生物标志物并入将允许为过程监测和下游分析质量控制开发稳健的临床参考范围。并入了针对WD(ATP7B蛋白)和原发性免疫缺陷病症(BTK和WAS蛋白)的抗体。这些范围将告知在群体筛查环境中运行的任何样品的临床有效性，同时充当其自身相关疾病状态的诊断筛查。
实施例4.正在开发另外的CTNS和SHPK肽生物标志物。肽CTNS 120、CTNS 194、SHPK44和SHPK 388显示稳健的免疫应答和高多克隆抗体滴度生成。因此，抗CTNS 120、抗CTNS194、抗SHPK 44和/或抗SHPK 388抗体可用于所公开的方法中以筛查胱氨酸病。SHPK 388的多克隆抗体先前已被用于证明这种肽存在于正常对照DBS中，并且其在患者的DBS中不存在。将产生针对CTNS 120、CTNS 194、SHPK 44和SHPK388肽生物标志物的单克隆抗体。这些标志物将被并入现有多重测定中。
实施例5.使用多克隆抗体或单克隆抗体来富集WASp 274或BTK 407肽。在进行WASp 274(图16B和16D)和BTK 407(图16A和16C)的肽捕获时产生内部标准肽峰面积。在仅空白对照样品(即没有患者血液，图16C、16D)中以及在患者和空白对照样品两者的聚集集合(图16A和16B)中测量峰面积。无论样品基质如何，单克隆抗体均显示相当或优异的捕获和富集靶肽的能力。
实施例6.胱氨酸病筛查的扩展。如实施例2和3(图13和表8)所述，使用特征肽生物标志物CTNS 115和SHPK 363对胱氨酸病的筛查扩展至总共包括90名患者。在分析后，对胱氨酸病患者未设盲以发现CTNS水平相对于对照明显降低。绝大多数(87/90，96.7％)具有低于正常平均值以下1.5个标准偏差的诊断截断值的CTNS 115水平，而与突变无关(图17)。此外，可基于SHPK浓度对胱氨酸病患者的突变进行分层。在具有已知纯合57kb缺失遗传背景的患者中，26/27(96.3％)具有不可检测的SHPK 363水平。这些患者跌至设置为低于正常平均值1.8个标准偏差的诊断截断值以下。此外，发现具有单个57kb缺失突变的复合杂合患者具有比没有这种缺失突变的拷贝的那些患者显著更低的SHPK363水平。如所预期，这些患者成功地产生了与其基因型成比例的SHPK(图17)。
实施例7.关于WD患者的研究。如实施例1中所述进行免疫-SRM测定，但是使用来自正常对照和16名WD患者的DBS样品以及结合至WD的以下特征肽的单克隆抗体：ATP7B 1056、ATP7B 214和ATP7B 887(图18A-18C)。在此研究中，所有16名WD患者显示出ATP7B 1056水平降低或不存在(小于正常对照的平均值以下2.6SD；图18A)。与正常对照相比，ATP7B 214和ATP7B 887肽水平也降低(图18B、18C)。在每种情况下，每位WD患者均被鉴定为ATP7B肽生物标志物的水平低于正常对照的水平。每个均具有作为NBS筛查工具的潜在用途，并且它们一起提供WD状态的稳健补充确诊。
如本领域普通技术人员将理解的，本文所公开的每个实施方案可包括以下项、基本上由或由以下项组成：其特别陈述的要素、步骤、成分或组分。因此，术语“包括(include)”或“包括(including)”应理解为叙述：“包含/包括(comprise)、由…组成(consist of)或基本上由...组成(consist essentially of)”。过渡术语“包含/包括(comprise)”或“包含/包括(comprises)”意指包括但不限于，并且允许包括未指定的要素、步骤、成分或组分，即使在较大的量时也是如此。过渡短语“由......组成”排除未指定的任何要素、步骤、成分或组分。过渡短语“基本上由......组成”将实施方案的范围限制为指定的要素、步骤、成分或组分以及并不实质地影响所述实施方案的那些。实质性影响将导致利用从新生儿获得的DBS、本文公开的抗体和免疫-SRM来可靠地诊断SCID、WAS、XLA、胱氨酸病或威尔逊病的能力的统计学上显著的降低。
除非另外指示，否则说明书和权利要求书中所用的表示成分的量、性质如分子量、反应条件等的所有数字应当理解为在所有情况下都由术语“约”修饰。因此，除非有相反的指示，否则说明书和所附权利要求书中所陈述的数值参数都是近似值，所述值可根据本发明要寻求获得的所需性质而变化。在最低限度，并且不试图将等效物原则的应用限制于权利要求的范围，每个数值参数均应当至少根据报告的有效数字的数值和通过应用普通四舍五入技术来解读。当要求进一步清楚时，术语“约”当与陈述的数值或范围结合使用时具有本领域技术人员合理地归于它的含义，即将稍微大于或稍微小于陈述值或范围表示为在以下范围内：陈述值的±20％；陈述值±19％；陈述值±18％；陈述值±17％；陈述值±16％；陈述值±15％；陈述值±14％；陈述值±13％；陈述值±12％；陈述值±11％；陈述值±10％；陈述值±9％；陈述值±8％；陈述值±7％；陈述值±6％；陈述值±5％；陈述值±4％；陈述值±3％；陈述值±2％；或陈述值±1％。
尽管陈述本发明的宽泛范围的数值范围和参数是近似值，但在具体实施例中所陈述的数值尽可能准确地报告。然而，任何数值固有地包含必然由在其各自的测试测量中发现的标准偏差引起的某些误差。
除非本文另外指示或者与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中(尤其在所附权利要求书的上下文中)使用的术语“一个/种”、“所述”以及类似的指代语应解读为涵盖单数和复数指代语。本文中列举数值的范围仅意在作为一种单个地提及落在所述范围内的每个单独数值的速记方法。除非本文另外指示，否则每个单个数值都并入到本说明书中，如同其在本文中被单个地列举一样。除非本文另外指示或者与上下文明显矛盾，否则可按任何适合的顺序来执行本文所述的全部方法。本文提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅意在更好地说明本发明，而不会对原本要求保护的本发明的范围构成限制。说明书中的任何语言都不应解读为指示任何未要求保护的要素是实施本发明所必需的。
本文所公开的本发明的替代要素或实施方案的分组不应解读为是限制性的。每个组的成员可单个地提及和要求保护，或以与所述组的其它成员或本文中出现的其它要素的任何组合形式提及和要求保护。可预见，出于简便和/或可专利性的原因，一个组的一个或多个成员可包括于所述组内，或从所述组中删除。当出现任何这种包括或删除时，本说明书被认为含有所修改的组，因此满足所附权利要求中使用的所有马库什组(Markush group)的书面描述。
本文描述了本发明的某些实施方案，包括为本发明人所知用于实施本发明的最佳模式。当然，本领域技术人员在阅读前面的描述后将会明了这些所描述实施方案的变化形式。本发明人预期本领域的熟练技术人员会适时采用此类变化形式，而且本发明人意图本发明能以除了本文具体描述的方式之外的其它方式来实施。因此，本发明包括在适用法律允许的所附的权利要求中列举的主题的所有修改形式和等效形式。此外，除非本文另外指示或者与上下文明显矛盾，否则呈所有可能变化形式的上述要素的任何组合都涵盖在本发明内。
此外，在整个说明书中，已经大量参考了专利、印刷的出版物、期刊文章和其他书面文本(本文的参考材料)。每一参考材料关于它们的参考教义单个地以引用的方式整体并入本文。
最后，应当理解，本文所公开的本发明的实施方案是对本发明原理的说明。可采用的其他修改形式也在本发明的范围内。因此，例如但不限于，可根据本文的教义利用本发明的替代性配置。因而，本发明不限于明确示出和描述的实施方案。
本文示出的细节是作为实例并且仅出于说明性讨论本发明的优选实施方案的目的，并且之所以呈现所述细节，是为了提供认为是本发明的各个实施方案的原理和概念方面的最有用和易理解的描述的内容。就此而言，除对于本发明的基本理解所必需的之外，没有企图更详细地示出本发明的结构细节，借助于附图和/或实施例所作的描述使得本领域技术人员明了如何可以在实践中体现本发明的若干形式。
除非在以下实施例中明确并毫无疑问地修改或是当含义的应用使得任何构建无意义或基本上无意义，否则在本公开中使用的定义和解释意指并且旨在控制任何未来构建。在术语的构建将使它无意义或基本上无意义的情况下，定义应该从韦氏字典(Webster′s Dictionary)第3版或本领域普通技术人员已知的字典诸如生物化学和分子生物学牛津字典(Attwood T等人编辑，Oxford University Press，Oxford，2006)中取得。
序列表
<110> 西雅图儿童医院以西雅图儿童研究机构名义经营(Seattle Children'sHospital d/b/a Seattle Children's Research Institute)
弗莱德哈钦森癌症研究中心(Fred Hutchinson Cancer Research Center)
<120> 针对原发性免疫缺陷、胱氨酸病和威尔逊病的新生儿筛查
<130> S281-0007PCT/SCRI.193/17-059-US-PCT
<150> US 62/742,161
<151> 2018-10-05
<160> 147
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg
1 5
<210> 2
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
Ala Gly Ile Ser Glu Ala Gln Leu Thr Asp Ala Glu Thr Ser Lys
1 5 10 15
<210> 3
<211> 16
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
Leu Ile Tyr Asp Phe Ile Glu Asp Gln Gly Gly Leu Glu Ala Val Arg
1 5 10 15
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4
Glu Leu Gly Thr Gly Gln Phe Gly Val Val Lys
1 5 10
<210> 5
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
Phe Leu Val Ile Arg
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 7
Arg Pro Gly Tyr Asp Gln Leu Asn
1 5
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 8
Lys Arg Pro Gly Tyr Asp Gln Leu Asn
1 5
<210> 9
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 9
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
Val Ser Leu Pro Asp Gly Ala Glu Gly Ser Gly Thr Asp His Arg
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<211> 22
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 11
Val Leu Ala Val Val Gly Thr Ala Glu Ala Ser Ser Glu His Pro Leu
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Gly Val Ala Val Thr Lys
20
<210> 12
<211> 32
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 12
Ser Ser Ala Ile Ser Ile Ile Asn Gln Val Ile Gly Trp Ile Tyr Phe
1 5 10 15
Val Ala Trp Ser Ile Ser Phe Tyr Pro Gln Val Ile Met Asn Trp Arg
20 25 30
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(31)
<223> 残基30和残基31处的Cys残基各自S-羧甲基化
<400> 13
Tyr Pro Asn Gly Val Asn Pro Val Asn Ser Asn Asp Val Phe Phe Ser
1 5 10 15
Leu His Ala Val Val Leu Thr Leu Ile Ile Ile Val Gln Cys Cys Leu
20 25 30
Tyr Glu Arg
35
<210> 14
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 14
Ala Glu Ala Ala Val Glu Ser Ala Val Ala Gly Pro Gln Gly Arg
1 5 10 15
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<211> 13
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 15
Ile Ser Ser Ser Asp Leu Ser Leu Gly His Val Thr Arg
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<211> 13
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 16
Val Ala Pro Leu Ser Leu Gly Pro Ile Asp Ile Glu Arg
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 17
Leu Pro Ala Asn His Ala Pro Asp Ile Leu Ala Lys
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 18
Thr Asn Gly Ile Thr Tyr Ala Ser Val Ala Leu Ala Thr Ser Lys
1 5 10 15
<210> 19
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 19
Ile Ile Glu Glu Ile Gly Phe His Ala Ser Leu Ala Gln Arg
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 20
Ala Thr His Val Gly Asn Asp Thr Thr Leu Ala Gln Ile Val Lys
1 5 10 15
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 21
Gly Thr Ala Glu Ala Ser Ser Glu His Pro Leu Gly Val Ala Val Thr
1 5 10 15
Lys
<210> 22
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CD3e 197 VH CDR1
<400> 22
Glu Tyr Val Ile His
1 5
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CD3e 197 VH CDR2
<400> 23
Gly Phe Asn Pro Asn Ile Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Arg Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 24
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CD3e 197 VH CDR3
<400> 24
Gly Gly Pro Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 25
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CD3e 197 VL CDR1
<400> 25
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CD3e 197 VL CDR2
<400> 26
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 27
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CD3e 197 VL CDR3
<400> 27
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 28
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗WASp 274 VH CDR1
<400> 28
Thr Tyr Ala Met Thr
1 5
<210> 29
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗WASp 274 VH CDR2
<400> 29
Ser Phe Tyr Ile Glu Gly Ser Ala Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Asn Gly
1 5 10 15
Arg
<210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗WASp 274 VH CDR3
<400> 30
Gly Asn Pro Gly Gly Ser Ser Ala Val
1 5
<210> 31
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗WASp 274 VL CDR1
<400> 31
Gln Ser Ser Glu Thr Val Tyr Lys Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 32
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗WASp 274 VL CDR2
<400> 32
Trp Ala Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 33
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗WASp 274 VL CDR3
<400> 33
Ala Gly Tyr Gln Ser Asn Ile Val Asp Gly Thr Ala
1 5 10
<210> 34
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗BTK 407 VH CDR1
<400> 34
Arg Asn Glu Ile Ser
1 5
<210> 35
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗BTK 407 VH CDR2
<400> 35
Gly Ile Gly Ser Pro Gly Arg Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Ser
1 5 10 15
Arg
<210> 36
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗BTK 407 VL CDR1
<400> 36
Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn Arg Leu Ala
1 5 10
<210> 37
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗BTK 407 VL CDR2
<400> 37
Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 38
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗BTK 407 VL CDR3
<400> 38
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Thr Ala Asp Cys Asn Ala
1 5 10
<210> 39
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 115 VH CDR1
<400> 39
Thr Arg Asp Gly Val Cys
1 5
<210> 40
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 115 VH CDR2
<400> 40
Cys Ile Tyr Arg Gly Ile Ser Ala Thr Thr Ser Tyr Ala Ser Trp Ala
1 5 10 15
Lys Gly Arg
<210> 41
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 115 VH CDR3
<400> 41
Ala Trp Asp Leu
1
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 115 VL CDR1
<400> 42
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Asp Leu Ser
1 5 10
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 115 VL CDR2
<400> 43
Lys Ala Ser Lys Val Glu Thr
1 5
<210> 44
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 115 VL CDR3
<400> 44
Gln Ser Ile Asp Phe Ser Lys Ser Tyr Ile Gly Gly Ala
1 5 10
<210> 45
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 360 VH CDR1
<400> 45
Asn Asn Asp Gly Ile Cys
1 5
<210> 46
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 360 VH CDR2
<400> 46
Cys Ile Gly Ser Thr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
1 5 10 15
Gly Arg
<210> 47
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 360 VH CDR3
<400> 47
Glu Pro Tyr Gly Ser Gly Ser Met Ala Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 48
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 360 VL CDR1
<400> 48
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Trp Asn Asn Asn Phe Leu Ser
1 5 10
<210> 49
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 360 VL CDR2
<400> 49
Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 50
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 360 VL CDR3
<400> 50
Gln Gly Glu Phe Ser Cys Ser Ile Ala Asp Cys Val Ala
1 5 10
<210> 51
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗SHPK 363 VH CDR1
<400> 51
Ser Asn Tyr Phe Met Cys
1 5
<210> 52
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗SHPK 363 VH CDR2
<400> 52
Cys Ile Leu Val Gly Ser Gly Arg Thr Thr Phe Ala Ser Trp Ala Lys
1 5 10 15
Gly Arg
<210> 53
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗SHPK 363 VH CDR3
<400> 53
Ala Trp Ala Leu
1
<210> 54
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗SHPK 363 VL CDR1
<400> 54
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn Asp Leu Ala
1 5 10
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗SHPK 363 VL CDR2
<400> 55
Gly Ala Ser Thr Leu Val Ser
1 5
<210> 56
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗SHPK 363 VL CDR3
<400> 56
Gln Gly Gly Tyr Asp Pro Arg Asn Tyr Pro
1 5 10
<210> 57
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗ATP7B 1056 VH CDR1
<400> 57
Ser Tyr Trp Ile Ile
1 5
<210> 58
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗ATP7B 1056 VH CDR2
<400> 58
Ser Ser Gly Pro Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Thr Ser Trp Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 59
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗ATP7B 1056 VH CDR3
<400> 59
Ala Gly Gly Ser Asp Tyr Asp Trp Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 60
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗ATP7B 1056 VL CDR1
<400> 60
Gln Ser Ser Pro Ser Val Ala Asn Asn Asn Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 61
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗ATP7B 1056 VL CDR2
<400> 61
Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗ATP7B 1056 VL CDR3
<400> 62
Ala Gly Gly His Lys Thr Ala Glu Lys Asn Pro
1 5 10
<210> 63
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CD3ε 197可变重链结构域
<400> 63
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Glu Tyr
20 25 30
Val Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Phe Asn Pro Asn Ile Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Pro Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 64
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CD3ε 197可变轻链结构域
<400> 64
Asp Val Leu Met Thr Gln Asn Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Val Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 65
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗WASp 274可变重链结构域
<400> 65
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala
20 25 30
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Ile Gly
35 40 45
Ser Phe Tyr Ile Glu Gly Ser Ala Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Asn Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Val Asn Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Val Ala Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asn
85 90 95
Pro Gly Gly Ser Ser Ala Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 66
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗WASp 274可变轻链结构域
<400> 66
Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Glu Thr Val Tyr Lys Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Trp Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Val
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Gln Ser Asn Ile
85 90 95
Val Asp Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Asn
100 105 110
<210> 67
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗BTK 407可变重链结构域
<400> 67
Gln Ser Val Lys Glu Ser Glu Gly Gly Leu Phe Lys Pro Thr Asp Thr
1 5 10 15
Leu Thr Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Arg Asn Glu
20 25 30
Ile Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Gly Ile Gly Ser Pro Gly Arg Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Ser
50 55 60
Arg Ser Thr Ile Thr Arg Asn Thr Asn Leu Asn Thr Val Thr Leu Lys
65 70 75 80
Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
85 90 95
Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Val Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 68
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗BTK 407可变轻链结构域
<400> 68
Gln Val Leu Thr Gln Thr Val Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gly Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Thr Ala Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 69
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 115可变重链结构域
<400> 69
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Thr Arg
20 25 30
Asp Gly Val Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Tyr Arg Gly Ile Ser Ala Thr Thr Ser Tyr Ala Ser
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val
65 70 75 80
Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
85 90 95
Cys Ala Arg Ala Trp Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 70
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 115可变轻链结构域
<400> 70
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Asp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Lys Val Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ser Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Ile Asp Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Tyr Ile Gly Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 71
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 360可变重链结构域
<400> 71
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Phe Gln Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Asn Asp
20 25 30
Gly Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Cys Ile Gly Ser Thr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Ile Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Ser Glu Pro Tyr Gly Ser Gly Ser Met Ala Phe Asp Leu Trp Gly Pro
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 72
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗CTNS 360可变轻链结构域
<400> 72
Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Val Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Trp Asn Asn Asn
20 25 30
Phe Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys Ser
85 90 95
Ile Ala Asp Cys Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Arg
100 105 110
<210> 73
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗SHPK 363可变重链结构域
<400> 73
Gln Glu Gln Ile Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Lys Val Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Phe Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Leu Val Gly Ser Gly Arg Thr Thr Phe Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Trp Ala Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 74
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗SHPK 363可变轻链结构域
<400> 74
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Val Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Ala Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Asp Pro Arg
85 90 95
Asn Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105
<210> 75
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗ATP7B 1056可变重链结构域
<400> 75
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Trp
20 25 30
Ile Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ser Ser Gly Pro Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Thr Ser Trp Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Gly Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ala Gly
85 90 95
Gly Ser Asp Tyr Asp Trp Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 76
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗ATP7B 1056可变轻链结构域
<400> 76
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Pro Ser Val Ala Asn Asn Asn
20 25 30
Trp Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly His Lys Thr Ala
85 90 95
Glu Lys Asn Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 77
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 特征肽的C末端延伸
<400> 77
Gly Ser Gly Cys
1
<210> 78
<211> 414
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CD3ε 197可变重链结构域编码序列
<400> 78
atgggatgga gctggatctt tctctttctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60
gtccagctgc agcagtctgg acctgacctg gtgaagcctg gggcctcagt gaagatttcc 120
tgcaagactt ctggatacat attcattgaa tacgtcatac actgggtgaa gcagagccat 180
ggaaagagcc ttgagtggat tggaggtttt aatcctaaca ttggtggtac taactacaac 240
cagaggttca agggcaaggc cacattgact gtagacaagt cctccagcac agcctacatg 300
gagctccgca gcctgacatc tgaggattct gcagtctatt actgtgtaag ggggggaccc 360
tattactatg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca 414
<210> 79
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CD3ε 197可变重链结构域氨基酸序列
<400> 79
Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly
1 5 10 15
Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ile Phe
35 40 45
Ile Glu Tyr Val Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Gly Phe Asn Pro Asn Ile Gly Gly Thr Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Arg Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Val Arg Gly Gly Pro Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
130 135
<210> 80
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CD3ε 197可变轻链结构域编码序列
<400> 80
atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgtttt cagcagtgat 60
gttttgatga cccaaaatcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120
tcttgcagat ctagtcagag cattgtacat agtagtggaa acacctattt agaatggtac 180
ctgcagaaac caggccagtc tccaaaggtc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct 240
ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc 300
agagtggagg ctgaggatct gggagtttat tactgctttc aaggttcaca tgttccgtgg 360
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 393
<210> 81
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CD3ε 197可变轻链结构域氨基酸序列
<400> 81
Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Val
1 5 10 15
Phe Ser Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Asn Pro Leu Ser Leu Pro Val
20 25 30
Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile
35 40 45
Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Ser Pro Lys Val Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys
100 105 110
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
115 120 125
Glu Ile Lys
130
<210> 82
<211> 1371
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗WASp 274重链编码序列(EB0603-2F8-H2)
<400> 82
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
tcggtggagg agtccggggg tcgcctggtc acgcctggga cacccctgac actcacctgc 120
acagtctctg gattctccct cagtacctat gcaatgacct gggtccgcca ggctccaggg 180
aaggggctac aatggatcgg atccttttat attgagggta gcgcatccta cgcgaactgg 240
gcgaatggtc gattcaccat ctccaaaacc tcgagtacgg tgaatctgaa aatgaccagt 300
ccgacagtcg cggacacggc cagttatttc tgtgccagag gcaatcctgg tggtagtagt 360
gctgtgtggg gccaaggcac cctggtcacc gtctcctcag ggcaacctaa ggctccatca 420
gtcttcccac tggccccctg ctgcggggac acacccagct ccacggtgac cctgggctgc 480
ctggtcaaag gctacctccc ggagccagtg accgtgacct ggaactcggg caccctcacc 540
aatggggtac gcaccttccc gtccgtccgg cagtcctcag gcctctactc gctgagcagc 600
gtggtgagcg tgacctcaag cagccagccc gtcacctgca acgtggccca cccagccacc 660
aacaccaaag tggacaagac cgttgcgccc tcgacatgca gcaagcccat gtgcccaccc 720
cctgaactcc tggggggacc gtctgtcttc atcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 780
atgatctcac gcacccccga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca ggatgacccc 840
gaggtgcagt tcacatggta cataaacaac gagcaggtgc gcaccgcccg gccgccgcta 900
cgggagcagc agttcaacag cacgatccgc gtggtcagca ccctccccat cgcgcaccag 960
gactggctga ggggcaagga gttcaagtgc aaagtccaca acaaggcact cccggccccc 1020
atcgagaaaa ccatctccaa agccagaggg cagcccctgg agccgaaggt ctacaccatg 1080
ggccctcccc gggaggagct gagcagcagg tcggtcagcc tgacctgcat gatcaacggc 1140
ttctaccctt ccgacatctc ggtggagtgg gagaagaacg ggaaggcaga ggacaactac 1200
aagaccacgc cggccgtgct ggacagcgac ggctcctact tcctctacag caagctctca 1260
gtgcccacga gtgagtggca gcggggcgac gtcttcacct gctccgtgat gcacgaggcc 1320
ttgcacaacc actacacgca gaagtccatc tcccgctctc cgggtaaatg a 1371
<210> 83
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗WASp 274重链氨基酸序列
<400> 83
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro
20 25 30
Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
35 40 45
Thr Tyr Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln
50 55 60
Trp Ile Gly Ser Phe Tyr Ile Glu Gly Ser Ala Ser Tyr Ala Asn Trp
65 70 75 80
Ala Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Val Asn Leu
85 90 95
Lys Met Thr Ser Pro Thr Val Ala Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys Ala
100 105 110
Arg Gly Asn Pro Gly Gly Ser Ser Ala Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu
130 135 140
Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys
145 150 155 160
Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser
165 170 175
Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser
180 185 190
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser
195 200 205
Gln Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val
210 215 220
Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Met Cys Pro Pro
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile
275 280 285
Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln
290 295 300
Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro
340 345 350
Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser
355 360 365
Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe
420 425 430
Thr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 84
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗WASp 274可变重链结构域编码序列
<400> 84
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
tcggtggagg agtccggggg tcgcctggtc acgcctggga cacccctgac actcacctgc 120
acagtctctg gattctccct cagtacctat gcaatgacct gggtccgcca ggctccaggg 180
aaggggctac aatggatcgg atccttttat attgagggta gcgcatccta cgcgaactgg 240
gcgaatggtc gattcaccat ctccaaaacc tcgagtacgg tgaatctgaa aatgaccagt 300
ccgacagtcg cggacacggc cagttatttc tgtgccagag gcaatcctgg tggtagtagt 360
gctgtgtggg gccaaggcac cctggtcacc gtctcctca 399
<210> 85
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗WASp 274可变重链结构域氨基酸序列
<400> 85
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro
20 25 30
Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
35 40 45
Thr Tyr Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln
50 55 60
Trp Ile Gly Ser Phe Tyr Ile Glu Gly Ser Ala Ser Tyr Ala Asn Trp
65 70 75 80
Ala Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Val Asn Leu
85 90 95
Lys Met Thr Ser Pro Thr Val Ala Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys Ala
100 105 110
Arg Gly Asn Pro Gly Gly Ser Ser Ala Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ser
130
<210> 86
<211> 437
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无前导序列的抗WASp 274重链氨基酸序列
<400> 86
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala
20 25 30
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Ile Gly
35 40 45
Ser Phe Tyr Ile Glu Gly Ser Ala Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Asn Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Val Asn Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Val Ala Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asn
85 90 95
Pro Gly Gly Ser Ser Ala Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys
115 120 125
Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu
145 150 155 160
Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val
180 185 190
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr
195 200 205
Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Met Cys Pro Pro Pro Glu Leu
210 215 220
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
225 230 235 240
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
245 250 255
Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu
260 265 270
Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser
275 280 285
Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln Asp Trp Leu
290 295 300
Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala
305 310 315 320
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro
325 330 335
Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser
340 345 350
Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser
355 360 365
Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr
370 375 380
Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
385 390 395 400
Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser
405 410 415
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser
420 425 430
Arg Ser Pro Gly Lys
435
<210> 87
<211> 717
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗WASp 274轻链编码序列(EB0603-2F8-K2)
<400> 87
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
acatttgcca tcgtgctgac ccagactcca gcctccgtgt ctgcagctgt gggaggcaca 120
gtcaccatca gttgccagtc cagtgagact gtttataaga ataactactt agcctggtat 180
cagcagaaac tagggcagcc tcccaagctc ctgatctact gggcatccaa actggcatct 240
ggggtcccat cgcggttcaa aggcagtgga tctgggacac agttcactct caccatcagc 300
gatgtggtgt gtgccgatgc tggcacttac tactgtgcag gatatcaaag taatattgtt 360
gatggtacgg ctttcggcgg agggaccgag gtggtggtca acggtgatcc agttgcacct 420
actgtcctca tcttcccacc agctgctgat caggtggcaa ctggaacagt caccatcgtg 480
tgtgtggcga ataaatactt tcccgatgtc accgtcacct gggaggtgga tggcaccacc 540
caaacaactg gcatcgagaa cagtaaaaca ccgcagaatt ctgcagattg tacctacaac 600
ctcagcagca ctctgacact gaccagcaca cagtacaaca gccacaaaga gtacacctgc 660
aaggtgaccc agggcacgac ctcagtcgtc cagagcttca ataggggtga ctgttag 717
<210> 88
<211> 238
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗WASp 274轻链氨基酸序列
<400> 88
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser
20 25 30
Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser
35 40 45
Glu Thr Val Tyr Lys Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu
50 55 60
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Lys Leu Ala Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Asp Val Val Cys Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Ala Gly Tyr Gln Ser Asn Ile Val Asp Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly
115 120 125
Thr Glu Val Val Val Asn Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile
130 135 140
Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val
145 150 155 160
Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val
165 170 175
Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln
180 185 190
Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr
195 200 205
Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln
210 215 220
Gly Thr Thr Ser Val Val Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys
225 230 235
<210> 89
<211> 402
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗WASp 274可变轻链结构域编码序列
<400> 89
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
acatttgcca tcgtgctgac ccagactcca gcctccgtgt ctgcagctgt gggaggcaca 120
gtcaccatca gttgccagtc cagtgagact gtttataaga ataactactt agcctggtat 180
cagcagaaac tagggcagcc tcccaagctc ctgatctact gggcatccaa actggcatct 240
ggggtcccat cgcggttcaa aggcagtgga tctgggacac agttcactct caccatcagc 300
gatgtggtgt gtgccgatgc tggcacttac tactgtgcag gatatcaaag taatattgtt 360
gatggtacgg ctttcggcgg agggaccgag gtggtggtca ac 402
<210> 90
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗WASp 274可变轻链结构域氨基酸序列
<400> 90
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser
20 25 30
Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser
35 40 45
Glu Thr Val Tyr Lys Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu
50 55 60
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Lys Leu Ala Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Asp Val Val Cys Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Ala Gly Tyr Gln Ser Asn Ile Val Asp Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly
115 120 125
Thr Glu Val Val Val Asn
130
<210> 91
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无前导序列的抗WASp 274轻链氨基酸序列
<400> 91
Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Glu Thr Val Tyr Lys Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Trp Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Val
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Gln Ser Asn Ile
85 90 95
Val Asp Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Asn Gly
100 105 110
Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln
115 120 125
Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe
130 135 140
Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr
145 150 155 160
Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr
165 170 175
Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His
180 185 190
Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys
210 215
<210> 92
<211> 1359
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗BTK 407重链编码序列(EB0602-1G5-H2)
<400> 92
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
tcggtgaagg agtccgaggg aggtctcttc aagccaacgg ataccctgac agtcacctgc 120
acagtctctg gattctccct cagtaggaat gaaataagct ggttccgcca ggctccaggg 180
aacgggctgg aatggatcgg gggcattggt agtcctggac gcgcatacta cgcgacctgg 240
gcgaaaagcc gatccaccat caccagaaac accaacctga atacggtgac tctgaaaatg 300
accagtctga cagccgcgga cacggccacc tatttctgtg cgagagggga catctggggc 360
ccaggcaccg tggtcaccgt ctcctcaggg caacctaagg ctccatcagt cttcccactg 420
gccccctgct gcggggacac acccagctcc acggtgaccc tgggctgcct ggtcaaaggc 480
tacctcccgg agccagtgac cgtgacctgg aactcgggca ccctcaccaa tggggtacgc 540
accttcccgt ccgtccggca gtcctcaggc ctctactcgc tgagcagcgt ggtgagcgtg 600
acctcaagca gccagcccgt cacctgcaac gtggcccacc cagccaccaa caccaaagtg 660
gacaagaccg ttgcgccctc gacatgcagc aagcccatgt gcccaccccc tgaactcctg 720
gggggaccgt ctgtcttcat cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcacgc 780
acccccgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccagg atgaccccga ggtgcagttc 840
acatggtaca taaacaacga gcaggtgcgc accgcccggc cgccgctacg ggagcagcag 900
ttcaacagca cgatccgcgt ggtcagcacc ctccccatcg cgcaccagga ctggctgagg 960
ggcaaggagt tcaagtgcaa agtccacaac aaggcactcc cggcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccagagggca gcccctggag ccgaaggtct acaccatggg ccctccccgg 1080
gaggagctga gcagcaggtc ggtcagcctg acctgcatga tcaacggctt ctacccttcc 1140
gacatctcgg tggagtggga gaagaacggg aaggcagagg acaactacaa gaccacgccg 1200
gccgtgctgg acagcgacgg ctcctacttc ctctacagca agctctcagt gcccacgagt 1260
gagtggcagc ggggcgacgt cttcacctgc tccgtgatgc acgaggcctt gcacaaccac 1320
tacacgcaga agtccatctc ccgctctccg ggtaaatga 1359
<210> 93
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗BTK 407重链氨基酸序列
<400> 93
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Ser Val Lys Glu Ser Glu Gly Gly Leu Phe Lys Pro
20 25 30
Thr Asp Thr Leu Thr Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
35 40 45
Arg Asn Glu Ile Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu
50 55 60
Trp Ile Gly Gly Ile Gly Ser Pro Gly Arg Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp
65 70 75 80
Ala Lys Ser Arg Ser Thr Ile Thr Arg Asn Thr Asn Leu Asn Thr Val
85 90 95
Thr Leu Lys Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
100 105 110
Cys Ala Arg Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Val Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys
130 135 140
Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly
145 150 155 160
Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr
165 170 175
Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr
195 200 205
Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val
210 215 220
Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Met Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln
275 280 285
Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln Asp Trp Leu Arg
305 310 315 320
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys
340 345 350
Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val
370 375 380
Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser
405 410 415
Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 94
<211> 387
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗BTK 407可变重链结构域编码序列
<400> 94
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
tcggtgaagg agtccgaggg aggtctcttc aagccaacgg ataccctgac agtcacctgc 120
acagtctctg gattctccct cagtaggaat gaaataagct ggttccgcca ggctccaggg 180
aacgggctgg aatggatcgg gggcattggt agtcctggac gcgcatacta cgcgacctgg 240
gcgaaaagcc gatccaccat caccagaaac accaacctga atacggtgac tctgaaaatg 300
accagtctga cagccgcgga cacggccacc tatttctgtg cgagagggga catctggggc 360
ccaggcaccg tggtcaccgt ctcctca 387
<210> 95
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗BTK 407可变重链结构域氨基酸序列
<400> 95
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Ser Val Lys Glu Ser Glu Gly Gly Leu Phe Lys Pro
20 25 30
Thr Asp Thr Leu Thr Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
35 40 45
Arg Asn Glu Ile Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu
50 55 60
Trp Ile Gly Gly Ile Gly Ser Pro Gly Arg Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp
65 70 75 80
Ala Lys Ser Arg Ser Thr Ile Thr Arg Asn Thr Asn Leu Asn Thr Val
85 90 95
Thr Leu Lys Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
100 105 110
Cys Ala Arg Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Val Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 96
<211> 433
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无前导序列的抗BTK 407重链氨基酸序列
<400> 96
Gln Ser Val Lys Glu Ser Glu Gly Gly Leu Phe Lys Pro Thr Asp Thr
1 5 10 15
Leu Thr Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Arg Asn Glu
20 25 30
Ile Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Gly Ile Gly Ser Pro Gly Arg Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Ser
50 55 60
Arg Ser Thr Ile Thr Arg Asn Thr Asn Leu Asn Thr Val Thr Leu Lys
65 70 75 80
Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
85 90 95
Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Val Val Thr Val Ser Ser Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr
115 120 125
Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro
130 135 140
Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val
145 150 155 160
Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys Asn Val
180 185 190
Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser
195 200 205
Thr Cys Ser Lys Pro Met Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
210 215 220
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
225 230 235 240
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Asp Asp
245 250 255
Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr
260 265 270
Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val
275 280 285
Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu
290 295 300
Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
305 310 315 320
Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr
325 330 335
Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr
340 345 350
Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu
355 360 365
Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu
370 375 380
Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr
385 390 395 400
Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val Met His Glu
405 410 415
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly
420 425 430
Lys
<210> 97
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗BTK 407轻链编码序列(EB0602-1G5-K1)
<400> 97
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
acatttgccc aagtgctgac ccagactgta tcgcccgtgt ctgcagctgt gggaagcaca 120
gtcaccatca attgccagtc cagtcagagt gtttataata acaaccgctt agcctggtat 180
cagcagaaac cagggcagcc tcccaaaggc ctgatctatt ctgcatccac tctggcatct 240
ggggtctcat cgcggttcaa aggcagtgga tctgggacac agttcactct caccatcagc 300
gacgtgcagt gtgacgatgc tgccacttac tactgtctag gcagttatga ttgtagtact 360
gctgattgta atgctttcgg cggagggacc gaggtggtgg tcaaaggtga tccagttgca 420
cctactgtcc tcatcttccc accagctgct gatcaggtgg caactggaac agtcaccatc 480
gtgtgtgtgg cgaataaata ctttcccgat gtcaccgtca cctgggaggt ggatggcacc 540
acccaaacaa ctggcatcga gaacagtaaa acaccgcaga attctgcaga ttgtacctac 600
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tgcaaggtga cccagggcac gacctcagtc gtccagagct tcaatagggg tgactgttag 720
<210> 98
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗BTK 407轻链氨基酸序列
<400> 98
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Val Ser Pro
20 25 30
Val Ser Ala Ala Val Gly Ser Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser
35 40 45
Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Pro Pro Lys Gly Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser
65 70 75 80
Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Thr Ala Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Glu Val Val Val Lys Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu
130 135 140
Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile
145 150 155 160
Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu
165 170 175
Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro
180 185 190
Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu
195 200 205
Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr
210 215 220
Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys
225 230 235
<210> 99
<211> 405
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗BTK 407可变轻链结构域编码序列
<400> 99
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
acatttgccc aagtgctgac ccagactgta tcgcccgtgt ctgcagctgt gggaagcaca 120
gtcaccatca attgccagtc cagtcagagt gtttataata acaaccgctt agcctggtat 180
cagcagaaac cagggcagcc tcccaaaggc ctgatctatt ctgcatccac tctggcatct 240
ggggtctcat cgcggttcaa aggcagtgga tctgggacac agttcactct caccatcagc 300
gacgtgcagt gtgacgatgc tgccacttac tactgtctag gcagttatga ttgtagtact 360
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<210> 100
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗BTK 407可变轻链结构域氨基酸序列
<400> 100
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
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Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Val Ser Pro
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Val Ser Ala Ala Val Gly Ser Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser
35 40 45
Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
50 55 60
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65 70 75 80
Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
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Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
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115 120 125
Gly Thr Glu Val Val Val Lys
130 135
<210> 101
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无前导序列的抗BTK 407轻链氨基酸序列
<400> 101
Gln Val Leu Thr Gln Thr Val Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gly Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Thr Ala Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp
115 120 125
Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr
130 135 140
Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr
145 150 155 160
Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr
165 170 175
Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser
180 185 190
His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val
195 200 205
Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys
210 215
<210> 102
<211> 1371
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 115重链编码序列(EB0606-3H8-H5)
<400> 102
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
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ctgcaaatga ccagtctgac agccgcggac acggccacct atttctgtgc gagagcctgg 360
gacttatggg gcccaggcac cctggtcacc gtctcctcag ggcaacctaa ggctccatca 420
gtcttcccac tggccccctg ctgcggggac acacccagct ccacggtgac cctgggctgc 480
ctggtcaaag gctacctccc ggagccagtg accgtgacct ggaactcggg caccctcacc 540
aatggggtac gcaccttccc gtccgtccgg cagtcctcag gcctctactc gctgagcagc 600
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atgatctcac gcacccccga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca ggatgacccc 840
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cgggagcagc agttcaacag cacgatccgc gtggtcagca ccctccccat cgcgcaccag 960
gactggctga ggggcaagga gttcaagtgc aaagtccaca acaaggcact cccggccccc 1020
atcgagaaaa ccatctccaa agccagaggg cagcccctgg agccgaaggt ctacaccatg 1080
ggccctcccc gggaggagct gagcagcagg tcggtcagcc tgacctgcat gatcaacggc 1140
ttctaccctt ccgacatctc ggtggagtgg gagaagaacg ggaaggcaga ggacaactac 1200
aagaccacgc cggccgtgct ggacagcgac ggctcctact tcctctacag caagctctca 1260
gtgcccacga gtgagtggca gcggggcgac gtcttcacct gctccgtgat gcacgaggcc 1320
ttgcacaacc actacacgca gaagtccatc tcccgctctc cgggtaaatg a 1371
<210> 103
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 115重链氨基酸序列
<400> 103
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Glu Gly Ser Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe
35 40 45
Ser Thr Arg Asp Gly Val Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Ala Cys Ile Tyr Arg Gly Ile Ser Ala Thr Thr Ser
65 70 75 80
Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser
85 90 95
Thr Thr Val Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala
100 105 110
Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ala Trp Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu
130 135 140
Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys
145 150 155 160
Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser
165 170 175
Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser
180 185 190
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser
195 200 205
Gln Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val
210 215 220
Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Met Cys Pro Pro
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile
275 280 285
Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln
290 295 300
Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro
340 345 350
Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser
355 360 365
Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe
420 425 430
Thr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 104
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 115可变重链结构域编码序列
<400> 104
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
gagcagctgg tggagtccgg gggaggcctg gtccagcctg agggatccct gacactcacc 120
tgcaaagcct ctggattctc cttcagtacc agagatggcg tatgctgggt ccgccaggct 180
ccagggaagg ggctggagtg gatcgcatgc atttatcgtg gtattagtgc taccacttcc 240
tacgcgagct gggcgaaagg ccgattcacc atctccaaaa cctcgtcgac cacggtgact 300
ctgcaaatga ccagtctgac agccgcggac acggccacct atttctgtgc gagagcctgg 360
gacttatggg gcccaggcac cctggtcacc gtctcctca 399
<210> 105
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 115可变重链结构域氨基酸序列
<400> 105
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Glu Gly Ser Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe
35 40 45
Ser Thr Arg Asp Gly Val Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Ala Cys Ile Tyr Arg Gly Ile Ser Ala Thr Thr Ser
65 70 75 80
Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser
85 90 95
Thr Thr Val Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala
100 105 110
Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ala Trp Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ser
130
<210> 106
<211> 437
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无前导序列的抗CTNS 115重链氨基酸序列
<400> 106
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Thr Arg
20 25 30
Asp Gly Val Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Tyr Arg Gly Ile Ser Ala Thr Thr Ser Tyr Ala Ser
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val
65 70 75 80
Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
85 90 95
Cys Ala Arg Ala Trp Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys
115 120 125
Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu
145 150 155 160
Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val
180 185 190
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr
195 200 205
Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Met Cys Pro Pro Pro Glu Leu
210 215 220
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
225 230 235 240
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
245 250 255
Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu
260 265 270
Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser
275 280 285
Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln Asp Trp Leu
290 295 300
Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala
305 310 315 320
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro
325 330 335
Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser
340 345 350
Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser
355 360 365
Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr
370 375 380
Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
385 390 395 400
Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser
405 410 415
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser
420 425 430
Arg Ser Pro Gly Lys
435
<210> 107
<211> 714
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 115轻链编码序列(EB0606-3H8-K7)
<400> 107
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
agatgtgatg ttgtgatgac ccagactcca gcctccgtgt ctgaacctgt gggaggcaca 120
gtcaccatca agtgccaggc cagtcagagc attggtagcg acttatcctg gtatcagcag 180
aaaccagggc agcctcccaa gcgcctgatc tacaaggcat ccaaagtgga aactggggtc 240
ccatcgcggt tcagcggcag tggatctggg acagagttca ctctcaccat cagcgacctg 300
gagtgtgccg atgctagcac ttactactgt caatctattg attttagtaa aagttatata 360
gggggtgctt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaag gtgatccagt tgcacctact 420
gtcctcatct tcccaccagc tgctgatcag gtggcaactg gaacagtcac catcgtgtgt 480
gtggcgaata aatactttcc cgatgtcacc gtcacctggg aggtggatgg caccacccaa 540
acaactggca tcgagaacag taaaacaccg cagaattctg cagattgtac ctacaacctc 600
agcagcactc tgacactgac cagcacacag tacaacagcc acaaagagta cacctgcaag 660
gtgacccagg gcacgacctc agtcgtccag agcttcaata ggggtgactg ttag 714
<210> 108
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 115轻链氨基酸序列
<400> 108
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Arg Cys Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser
20 25 30
Val Ser Glu Pro Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser
35 40 45
Gln Ser Ile Gly Ser Asp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
50 55 60
Pro Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Lys Val Glu Thr Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ser Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser
100 105 110
Ile Asp Phe Ser Lys Ser Tyr Ile Gly Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr
115 120 125
Glu Val Val Val Lys Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe
130 135 140
Pro Pro Ala Ala Asp Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys
145 150 155 160
Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp
165 170 175
Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn
180 185 190
Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser
195 200 205
Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly
210 215 220
Thr Thr Ser Val Val Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys
225 230 235
<210> 109
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 115可变轻链结构域编码序列
<400> 109
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
agatgtgatg ttgtgatgac ccagactcca gcctccgtgt ctgaacctgt gggaggcaca 120
gtcaccatca agtgccaggc cagtcagagc attggtagcg acttatcctg gtatcagcag 180
aaaccagggc agcctcccaa gcgcctgatc tacaaggcat ccaaagtgga aactggggtc 240
ccatcgcggt tcagcggcag tggatctggg acagagttca ctctcaccat cagcgacctg 300
gagtgtgccg atgctagcac ttactactgt caatctattg attttagtaa aagttatata 360
gggggtgctt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaa 399
<210> 110
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 115可变轻链结构域氨基酸序列
<400> 110
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Arg Cys Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser
20 25 30
Val Ser Glu Pro Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser
35 40 45
Gln Ser Ile Gly Ser Asp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
50 55 60
Pro Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Lys Val Glu Thr Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ser Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser
100 105 110
Ile Asp Phe Ser Lys Ser Tyr Ile Gly Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr
115 120 125
Glu Val Val Val Lys
130
<210> 111
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无前导序列的抗CTNS 115轻链氨基酸序列
<400> 111
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Asp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Lys Val Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ser Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Ile Asp Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Tyr Ile Gly Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Gly
100 105 110
Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln
115 120 125
Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe
130 135 140
Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr
145 150 155 160
Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr
165 170 175
Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His
180 185 190
Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys
210 215
<210> 112
<211> 1389
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 360重链编码序列(EB0604-4E3-H4)
<400> 112
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
tcgttggagg agtccggggg aggcctgttc cagcctgggg catccctgac actcacctgc 120
acagcctctg gattctcctt cagtaacaat gacgggatat gctgggtccg ccaggctcca 180
gggaaggggc tggagtggat cggatgtatt ggtagtacta gtggtaggat ttattacgcg 240
agctgggcga aaggccgact caccatctcc aaaacctcgt cgaccacggt gattctgcaa 300
atgaccagtc tgacagccgc ggacacggcc acttatttct gtgcgagcga accctatggt 360
agtggtagta tggcttttga cttgtggggc ccaggcactc tggtcaccgt ctcctcaggg 420
caacctaagg ctccatcagt cttcccactg gccccctgct gcggggacac acccagctcc 480
acggtgaccc tgggctgcct ggtcaaaggc tacctcccgg agccagtgac cgtgacctgg 540
aactcgggca ccctcaccaa tggggtacgc accttcccgt ccgtccggca gtcctcaggc 600
ctctactcgc tgagcagcgt ggtgagcgtg acctcaagca gccagcccgt cacctgcaac 660
gtggcccacc cagccaccaa caccaaagtg gacaagaccg ttgcgccctc gacatgcagc 720
aagcccatgt gcccaccccc tgaactcctg gggggaccgt ctgtcttcat cttcccccca 780
aaacccaagg acaccctcat gatctcacgc acccccgagg tcacatgcgt ggtggtggac 840
gtgagccagg atgaccccga ggtgcagttc acatggtaca taaacaacga gcaggtgcgc 900
accgcccggc cgccgctacg ggagcagcag ttcaacagca cgatccgcgt ggtcagcacc 960
ctccccatcg cgcaccagga ctggctgagg ggcaaggagt tcaagtgcaa agtccacaac 1020
aaggcactcc cggcccccat cgagaaaacc atctccaaag ccagagggca gcccctggag 1080
ccgaaggtct acaccatggg ccctccccgg gaggagctga gcagcaggtc ggtcagcctg 1140
acctgcatga tcaacggctt ctacccttcc gacatctcgg tggagtggga gaagaacggg 1200
aaggcagagg acaactacaa gaccacgccg gccgtgctgg acagcgacgg ctcctacttc 1260
ctctacagca agctctcagt gcccacgagt gagtggcagc ggggcgacgt cttcacctgc 1320
tccgtgatgc acgaggcctt gcacaaccac tacacgcaga agtccatctc ccgctctccg 1380
ggtaaatga 1389
<210> 113
<211> 462
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 360重链氨基酸序列
<400> 113
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Phe Gln Pro
20 25 30
Gly Ala Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
35 40 45
Asn Asn Asp Gly Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Cys Ile Gly Ser Thr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala
65 70 75 80
Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr
85 90 95
Val Ile Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr
100 105 110
Phe Cys Ala Ser Glu Pro Tyr Gly Ser Gly Ser Met Ala Phe Asp Leu
115 120 125
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala
130 135 140
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser
145 150 155 160
Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val
165 170 175
Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe
180 185 190
Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
195 200 205
Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro
210 215 220
Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser
225 230 235 240
Lys Pro Met Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
245 250 255
Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
260 265 270
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val
275 280 285
Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro
290 295 300
Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr
305 310 315 320
Leu Pro Ile Ala His Gln Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys
325 330 335
Lys Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
340 345 350
Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro
355 360 365
Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile
370 375 380
Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly
385 390 395 400
Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp
405 410 415
Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp
420 425 430
Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
435 440 445
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 114
<211> 417
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 360可变重链结构域编码序列
<400> 114
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
tcgttggagg agtccggggg aggcctgttc cagcctgggg catccctgac actcacctgc 120
acagcctctg gattctcctt cagtaacaat gacgggatat gctgggtccg ccaggctcca 180
gggaaggggc tggagtggat cggatgtatt ggtagtacta gtggtaggat ttattacgcg 240
agctgggcga aaggccgact caccatctcc aaaacctcgt cgaccacggt gattctgcaa 300
atgaccagtc tgacagccgc ggacacggcc acttatttct gtgcgagcga accctatggt 360
agtggtagta tggcttttga cttgtggggc ccaggcactc tggtcaccgt ctcctca 417
<210> 115
<211> 139
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 360可变重链结构域氨基酸序列
<400> 115
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Phe Gln Pro
20 25 30
Gly Ala Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
35 40 45
Asn Asn Asp Gly Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Cys Ile Gly Ser Thr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala
65 70 75 80
Ser Trp Ala Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr
85 90 95
Val Ile Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr
100 105 110
Phe Cys Ala Ser Glu Pro Tyr Gly Ser Gly Ser Met Ala Phe Asp Leu
115 120 125
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135
<210> 116
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无前导序列的抗CTNS 360重链氨基酸序列
<400> 116
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Phe Gln Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Asn Asp
20 25 30
Gly Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Cys Ile Gly Ser Thr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Ile Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Ser Glu Pro Tyr Gly Ser Gly Ser Met Ala Phe Asp Leu Trp Gly Pro
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val
165 170 175
Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr
180 185 190
Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Met
210 215 220
Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr
260 265 270
Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg
275 280 285
Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile
290 295 300
Ala His Gln Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg
325 330 335
Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu
340 345 350
Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu
370 375 380
Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly
405 410 415
Asp Val Phe Thr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 117
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 360轻链编码序列(EB0604-4E3-K1)
<400> 117
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
acatttgccc aagtgctgac ccagactgca tcgtccgtgt ctgcagctgt gggaggcaca 120
gtcaccgtca attgccaggc cagtcagagt atttggaata acaacttctt atcctggtat 180
cagcagaaac cagggcagcc tcccaagctc ctgatctacg aagcatccaa actggcatct 240
ggggtcccat cgcggtttag cggcagtgga tctgggacac agttcactct caccatcagc 300
ggcgtgcagt gtgacgatgc tgccacttac tactgtcagg gcgaatttag ttgtagtatt 360
gctgattgtg ttgctttcgg cggagggacc gaggtggtgg tcagaggtga tccagttgca 420
cctactgtcc tcatcttccc accagctgct gatcaggtgg caactggaac agtcaccatc 480
gtgtgtgtgg cgaataaata ctttcccgat gtcaccgtca cctgggaggt ggatggcacc 540
acccaaacaa ctggcatcga gaacagtaaa acaccgcaga attctgcaga ttgtacctac 600
aacctcagca gcactctgac actgaccagc acacagtaca acagccacaa agagtacacc 660
tgcaaggtga cccagggcac gacctcagtc gtccagagct tcaatagggg tgactgttag 720
<210> 118
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 360轻链氨基酸序列
<400> 118
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Ser
20 25 30
Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Val Asn Cys Gln Ala Ser
35 40 45
Gln Ser Ile Trp Asn Asn Asn Phe Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gly Glu Phe Ser Cys Ser Ile Ala Asp Cys Val Ala Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Glu Val Val Val Arg Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu
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Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile
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Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu
165 170 175
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195 200 205
Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr
210 215 220
Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys
225 230 235
<210> 119
<211> 405
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 360可变轻链结构域编码序列
<400> 119
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
acatttgccc aagtgctgac ccagactgca tcgtccgtgt ctgcagctgt gggaggcaca 120
gtcaccgtca attgccaggc cagtcagagt atttggaata acaacttctt atcctggtat 180
cagcagaaac cagggcagcc tcccaagctc ctgatctacg aagcatccaa actggcatct 240
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ggcgtgcagt gtgacgatgc tgccacttac tactgtcagg gcgaatttag ttgtagtatt 360
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<210> 120
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗CTNS 360可变轻链结构域氨基酸序列
<400> 120
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
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35 40 45
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50 55 60
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gly Glu Phe Ser Cys Ser Ile Ala Asp Cys Val Ala Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Glu Val Val Val Arg
130 135
<210> 121
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无前导序列的抗CTNS 360轻链氨基酸序列
<400> 121
Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Val Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Trp Asn Asn Asn
20 25 30
Phe Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys Ser
85 90 95
Ile Ala Asp Cys Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Arg
100 105 110
Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp
115 120 125
Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr
130 135 140
Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr
145 150 155 160
Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr
165 170 175
Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser
180 185 190
His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val
195 200 205
Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys
210 215
<210> 122
<211> 1368
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗SHPK 363重链编码序列(EB0605B-6G12-H1)
<400> 122
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
gagcagatag aggagtccgg gggaggcctg gtcaagcctg agggatccct gacactcacc 120
tgcaaagtct ctggattcga cttcagtagt aactatttca tgtgctgggt ccgccaggct 180
ccagggaagg ggctggagtg gatcggatgt attcttgttg gtagtggtag gactactttc 240
gcgagctggg cgaaaggccg attcaccatc tccaaaacct cgtcgaccac ggtgactctg 300
caaatgacca gtctgacagc cgcggacacg gccacctatt tctgtgcgag ggcctgggcc 360
ttgtggggcc ccggcaccct ggtcaccgtc tcctcagggc aacctaaggc tccatcagtc 420
ttcccactgg ccccctgctg cggggacaca cccagctcca cggtgaccct gggctgcctg 480
gtcaaaggct acctcccgga gccagtgacc gtgacctgga actcgggcac cctcaccaat 540
ggggtacgca ccttcccgtc cgtccggcag tcctcaggcc tctactcgct gagcagcgtg 600
gtgagcgtga cctcaagcag ccagcccgtc acctgcaacg tggcccaccc agccaccaac 660
accaaagtgg acaagaccgt tgcgccctcg acatgcagca agcccatgtg cccaccccct 720
gaactcctgg ggggaccgtc tgtcttcatc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780
atctcacgca cccccgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccagga tgaccccgag 840
gtgcagttca catggtacat aaacaacgag caggtgcgca ccgcccggcc gccgctacgg 900
gagcagcagt tcaacagcac gatccgcgtg gtcagcaccc tccccatcgc gcaccaggac 960
tggctgaggg gcaaggagtt caagtgcaaa gtccacaaca aggcactccc ggcccccatc 1020
gagaaaacca tctccaaagc cagagggcag cccctggagc cgaaggtcta caccatgggc 1080
cctccccggg aggagctgag cagcaggtcg gtcagcctga cctgcatgat caacggcttc 1140
tacccttccg acatctcggt ggagtgggag aagaacggga aggcagagga caactacaag 1200
accacgccgg ccgtgctgga cagcgacggc tcctacttcc tctacagcaa gctctcagtg 1260
cccacgagtg agtggcagcg gggcgacgtc ttcacctgct ccgtgatgca cgaggccttg 1320
cacaaccact acacgcagaa gtccatctcc cgctctccgg gtaaatga 1368
<210> 123
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗SHPK 363重链氨基酸序列
<400> 123
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Glu Gln Ile Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Glu Gly Ser Leu Thr Leu Thr Cys Lys Val Ser Gly Phe Asp Phe
35 40 45
Ser Ser Asn Tyr Phe Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Cys Ile Leu Val Gly Ser Gly Arg Thr Thr Phe
65 70 75 80
Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr
85 90 95
Thr Val Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Arg Ala Trp Ala Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val
115 120 125
Thr Val Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
130 135 140
Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu
145 150 155 160
Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly
165 170 175
Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser
180 185 190
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln
195 200 205
Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp
210 215 220
Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Met Cys Pro Pro Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn
275 280 285
Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe
290 295 300
Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu
340 345 350
Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser
355 360 365
Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 124
<211> 396
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗SHPK 363可变重链结构域编码序列
<400> 124
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
gagcagatag aggagtccgg gggaggcctg gtcaagcctg agggatccct gacactcacc 120
tgcaaagtct ctggattcga cttcagtagt aactatttca tgtgctgggt ccgccaggct 180
ccagggaagg ggctggagtg gatcggatgt attcttgttg gtagtggtag gactactttc 240
gcgagctggg cgaaaggccg attcaccatc tccaaaacct cgtcgaccac ggtgactctg 300
caaatgacca gtctgacagc cgcggacacg gccacctatt tctgtgcgag ggcctgggcc 360
ttgtggggcc ccggcaccct ggtcaccgtc tcctca 396
<210> 125
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗SHPK 363可变重链结构域氨基酸序列
<400> 125
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Glu Gln Ile Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Glu Gly Ser Leu Thr Leu Thr Cys Lys Val Ser Gly Phe Asp Phe
35 40 45
Ser Ser Asn Tyr Phe Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Cys Ile Leu Val Gly Ser Gly Arg Thr Thr Phe
65 70 75 80
Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr
85 90 95
Thr Val Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Arg Ala Trp Ala Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val
115 120 125
Thr Val Ser Ser
130
<210> 126
<211> 436
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无前导序列的抗SHPK 363重链氨基酸序列
<400> 126
Gln Glu Gln Ile Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Lys Val Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Phe Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Cys Ile Leu Val Gly Ser Gly Arg Thr Thr Phe Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Trp Ala Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys
115 120 125
Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly
130 135 140
Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr
145 150 155 160
Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr
180 185 190
Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Met Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu
210 215 220
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
225 230 235 240
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
245 250 255
Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln
260 265 270
Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr
275 280 285
Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln Asp Trp Leu Arg
290 295 300
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
305 310 315 320
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys
325 330 335
Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val
340 345 350
Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val
355 360 365
Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
370 375 380
Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser
385 390 395 400
Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val
405 410 415
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg
420 425 430
Ser Pro Gly Lys
435
<210> 127
<211> 711
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗SHPK 363轻链编码序列(EB0605B-6G12-K1)
<400> 127
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
acatttgcgc aagtgctgac ccagactcca tcccctgtgt ctgcagctgt gggaggcaca 120
gtcaccatca gttgccaggc cagtcagagt gtttataata acaacgactt agcctggtat 180
cagcagaaac cagggcagcc tcccaagctc ctgatctatg gtgcatccac tctggtatct 240
ggggtcccgt cgcggttcag cggcagtgga tctggggcac agttcactct caccatcagc 300
gacctggagt gtgacgatgc tgccacttac tactgtcaag gcggatatga tcctcgtaat 360
tatcctttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaaggtg atccagttgc acctactgtc 420
ctcatcttcc caccagctgc tgatcaggtg gcaactggaa cagtcaccat cgtgtgtgtg 480
gcgaataaat actttcccga tgtcaccgtc acctgggagg tggatggcac cacccaaaca 540
actggcatcg agaacagtaa aacaccgcag aattctgcag attgtaccta caacctcagc 600
agcactctga cactgaccag cacacagtac aacagccaca aagagtacac ctgcaaggtg 660
acccagggca cgacctcagt cgtccagagc ttcaataggg gtgactgtta g 711
<210> 128
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗SHPK 363轻链氨基酸序列
<400> 128
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro
20 25 30
Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ala Ser
35 40 45
Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Val Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Gln Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gly Gly Tyr Asp Pro Arg Asn Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu
115 120 125
Val Val Val Lys Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro
130 135 140
Pro Ala Ala Asp Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val
145 150 155 160
Ala Asn Lys Tyr Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly
165 170 175
Thr Thr Gln Thr Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser
180 185 190
Ala Asp Cys Thr Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr
195 200 205
Gln Tyr Asn Ser His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr
210 215 220
Thr Ser Val Val Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys
225 230 235
<210> 129
<211> 396
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗SHPK 363可变轻链结构域编码序列
<400> 129
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
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tatcctttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaa 396
<210> 130
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗SHPK 363可变轻链结构域氨基酸序列
<400> 130
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro
20 25 30
Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ala Ser
35 40 45
Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Val Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Gln Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gly Gly Tyr Asp Pro Arg Asn Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu
115 120 125
Val Val Val Lys
130
<210> 131
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无前导序列的抗SHPK 363轻链氨基酸序列
<400> 131
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Val Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Ala Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Asp Pro Arg
85 90 95
Asn Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Gly Asp Pro
100 105 110
Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln Val Ala
115 120 125
Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro Asp
130 135 140
Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly Ile
145 150 155 160
Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys Glu
180 185 190
Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Asp Cys
210
<210> 132
<211> 1377
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗ATP7B 1056重链编码序列(EB0601-H3-1)
<400> 132
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
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gtgaaaggcc gattcaccat ctccaagacc tcgactacgg tggatctgaa aatgaccggt 300
ctgacaaccg aggacacggc cacctatttc tgtgccagag ctggtggtag tgactacgac 360
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ccaccccctg aactcctggg gggaccgtct gtcttcatct tccccccaaa acccaaggac 780
accctcatga tctcacgcac ccccgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccaggat 840
gaccccgagg tgcagttcac atggtacata aacaacgagc aggtgcgcac cgcccggccg 900
ccgctacggg agcagcagtt caacagcacg atccgcgtgg tcagcaccct ccccatcgcg 960
caccaggact ggctgagggg caaggagttc aagtgcaaag tccacaacaa ggcactcccg 1020
gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc agagggcagc ccctggagcc gaaggtctac 1080
accatgggcc ctccccggga ggagctgagc agcaggtcgg tcagcctgac ctgcatgatc 1140
aacggcttct acccttccga catctcggtg gagtgggaga agaacgggaa ggcagaggac 1200
aactacaaga ccacgccggc cgtgctggac agcgacggct cctacttcct ctacagcaag 1260
ctctcagtgc ccacgagtga gtggcagcgg ggcgacgtct tcacctgctc cgtgatgcac 1320
gaggccttgc acaaccacta cacgcagaag tccatctccc gctctccggg taaatga 1377
<210> 133
<211> 458
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗ATP7B 1056重链氨基酸序列
<400> 133
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro
20 25 30
Gly Gly Ser Leu Thr Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
35 40 45
Ser Tyr Trp Ile Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu
50 55 60
Trp Ile Gly Ser Ser Gly Pro Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Thr Ser Trp
65 70 75 80
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu
85 90 95
Lys Met Thr Gly Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
100 105 110
Arg Ala Gly Gly Ser Asp Tyr Asp Trp Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly
115 120 125
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe
130 135 140
Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu
145 150 155 160
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp
165 170 175
Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg
180 185 190
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser
195 200 205
Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr
210 215 220
Lys Val Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp
275 280 285
Tyr Ile Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu
290 295 300
Gln Gln Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
340 345 350
Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu
355 360 365
Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp
420 425 430
Val Phe Thr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 134
<211> 405
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗ATP7B 1056可变重链结构域编码序列
<400> 134
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
tcgctggagg agtccggggg tcgcctggtc acgcctggag gatccctgac agtcacctgt 120
acagtctctg gattctccct cagtagctat tggataatct gggtccgcca ggctccaggg 180
gaggggctgg aatggatcgg aagcagtggt cctagtggta gcgcatacta cacgagctgg 240
gtgaaaggcc gattcaccat ctccaagacc tcgactacgg tggatctgaa aatgaccggt 300
ctgacaaccg aggacacggc cacctatttc tgtgccagag ctggtggtag tgactacgac 360
tggtttgatc tctggggcca gggcaccctg gtcaccgtct cttca 405
<210> 135
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗ATP7B 1056可变重链结构域氨基酸序列
<400> 135
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro
20 25 30
Gly Gly Ser Leu Thr Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
35 40 45
Ser Tyr Trp Ile Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu
50 55 60
Trp Ile Gly Ser Ser Gly Pro Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Thr Ser Trp
65 70 75 80
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu
85 90 95
Lys Met Thr Gly Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
100 105 110
Arg Ala Gly Gly Ser Asp Tyr Asp Trp Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly
115 120 125
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135
<210> 136
<211> 439
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无前导序列的抗ATP7B 1056重链氨基酸序列
<400> 136
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Trp
20 25 30
Ile Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ser Ser Gly Pro Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Thr Ser Trp Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Gly Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ala Gly
85 90 95
Gly Ser Asp Tyr Asp Trp Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln
180 185 190
Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Thr Cys Pro Pro Pro
210 215 220
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys
225 230 235 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
245 250 255
Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn
260 265 270
Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe
275 280 285
Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln Asp
290 295 300
Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala Leu
305 310 315 320
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu
325 330 335
Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser
340 345 350
Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
355 360 365
Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys
370 375 380
Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser
385 390 395 400
Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr
405 410 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
420 425 430
Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
435
<210> 137
<211> 714
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗ATP7B 1056轻链编码序列(EB0601-K3-2)
<400> 137
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
acatttgccc aagtgctgac ccagactcca tctcccgtgt ctgcggctgt gggaggcaca 120
gtcaccatca actgccagtc cagtccgagt gttgctaata acaactggtt atcctggttt 180
cagcagaaac cagggcagcg tcccaagctc ctgatctatg gtgcatccac tctggcatct 240
ggggtcccat cgcggttcaa aggcagtgga tctgggacac agttcactct caccatcagc 300
gacgtgcagt gtgacgatgc tgccacttac tactgtgcag gcggtcataa aactgctgaa 360
aaaaatcctt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaag gtgatccagt tgcacctact 420
gtcctcatct tcccaccagc tgctgatcag gtggcaactg gaacagtcac catcgtgtgt 480
gtggcgaata aatactttcc cgatgtcacc gtcacctggg aggtggatgg caccacccaa 540
acaactggca tcgagaacag taaaacaccg cagaattctg cagattgtac ctacaacctc 600
agcagcactc tgacactgac cagcacacag tacaacagcc acaaagagta cacctgcaag 660
gtgacccagg gcacgacctc agtcgtccag agcttcaata ggggtgactg ttag 714
<210> 138
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗ATP7B 1056轻链氨基酸序列
<400> 138
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro
20 25 30
Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser
35 40 45
Pro Ser Val Ala Asn Asn Asn Trp Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Ala Gly Gly His Lys Thr Ala Glu Lys Asn Pro Phe Gly Gly Gly Thr
115 120 125
Glu Val Val Val Lys Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe
130 135 140
Pro Pro Ala Ala Asp Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys
145 150 155 160
Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp
165 170 175
Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn
180 185 190
Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser
195 200 205
Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly
210 215 220
Thr Thr Ser Val Val Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys
225 230 235
<210> 139
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗ATP7B 1056可变轻链结构域编码序列
<400> 139
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
acatttgccc aagtgctgac ccagactcca tctcccgtgt ctgcggctgt gggaggcaca 120
gtcaccatca actgccagtc cagtccgagt gttgctaata acaactggtt atcctggttt 180
cagcagaaac cagggcagcg tcccaagctc ctgatctatg gtgcatccac tctggcatct 240
ggggtcccat cgcggttcaa aggcagtgga tctgggacac agttcactct caccatcagc 300
gacgtgcagt gtgacgatgc tgccacttac tactgtgcag gcggtcataa aactgctgaa 360
aaaaatcctt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaa 399
<210> 140
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有前导序列的抗ATP7B 1056可变轻链结构域氨基酸序列
<400> 140
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro
20 25 30
Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser
35 40 45
Pro Ser Val Ala Asn Asn Asn Trp Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Ala Gly Gly His Lys Thr Ala Glu Lys Asn Pro Phe Gly Gly Gly Thr
115 120 125
Glu Val Val Val Lys
130
<210> 141
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无前导序列的抗ATP7B 1056轻链氨基酸序列
<400> 141
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Pro Ser Val Ala Asn Asn Asn
20 25 30
Trp Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly His Lys Thr Ala
85 90 95
Glu Lys Asn Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Gly Asp
100 105 110
Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln Val
115 120 125
Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro
130 135 140
Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly
145 150 155 160
Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys
180 185 190
Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Asp Cys
210
<210> 142
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<400> 142
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
1 5 10
<210> 143
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<400> 143
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10
<210> 144
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<400> 144
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly
1 5
<210> 145
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<400> 145
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 146
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<400> 146
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 147
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<400> 147
Gly Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
Claims (177)
1.一种筛查受试者的严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)和/或X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)的方法，所述方法包括：
获得源自所述受试者的干血斑(DBS)样品；
用酶消化来自所述DBS的血液的蛋白质以产生一种或多种肽；
用：
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：1的SCID的CD3ε特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述CD3ε特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：25的CDR1、SEQ ID NO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：2的WAS的第一WASp特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一WASp特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQ ID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：31的CDR1、SEQ ID NO：32的CDR2和SEQID NO：33的CDR3；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：3的WAS的第二WASp特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二WASp特征肽；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：4的XLA的第一BTK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一BTK特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQ ID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ ID NO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3；和/或
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：5的XLA的第二BTK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二BTK特征肽；
对所述富集的肽进行液相色谱-多反应监测质谱(LC-MRM-MS)以确定所述肽的浓度；以及
当：
所述CD3ε特征肽的浓度低于预定阈值浓度时或者当所述CD3ε特征肽不存在时，诊断所述受试者患有SCID；
所述第一WASp特征肽和/或所述第二WASp特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或者当所述第一WASp特征肽和/或所述第二WASp特征肽不存在时，诊断所述受试者患有WAS；并且
所述第一BTK特征肽和/或所述第二BTK特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或者当所述第一BTK特征肽和/或所述第二BTK特征肽不存在时，诊断所述受试者患有XLA。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述方法作为新生儿筛查(NBS)的一部分进行，所述新生儿筛查另外筛查所述受试者的苯丙酮尿症、原发性先天性甲状腺功能减退症、囊性纤维化和镰状细胞病中的一种或多种。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述方法在所述受试者中不存在SCID、WAS和/或XLA的临床症状的情况下进行。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述酶是胰蛋白酶。
5.如权利要求1所述的方法，其中从来自正常对照受试者群体的DBS中的每种特征肽的平均浓度的标准偏差来计算每种特征肽的相应的预定阈值浓度。
6.如权利要求5所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中SEQ ID NO：1的SCID的所述CD3ε特征肽的平均浓度包括在70pmol/L至400pmol/L范围内的浓度。
7.如权利要求5所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的平均浓度包括在600pmol/L至5000pmol/L范围内的浓度。
8.如权利要求5所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中SEQ ID NO：3的WAS的所述第二WASp特征肽的平均浓度包括在5500pmol/L至15000pmol/L范围内的浓度。
9.如权利要求5所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的平均浓度包括在350pmol/L至2500pmol/L范围内的浓度。
10.如权利要求5所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中SEQ ID NO：5的XLA的所述第二BTK特征肽的平均浓度包括在550pmol/L至1600pmol/L范围内的浓度。
11.如权利要求1所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：1的SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：63的VH结构域。
12.如权利要求1所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：1的SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：64的VL结构域。
13.如权利要求1所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：65的VH结构域。
14.如权利要求1所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：66的VL结构域。
15.如权利要求1所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：86的重链。
16.如权利要求1所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：91的轻链。
17.如权利要求1所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67的VH结构域。
18.如权利要求1所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：68的VL结构域。
19.如权利要求1所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：96的重链。
20.如权利要求1所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：101的轻链。
21.如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括通过以下方式来筛查胱氨酸病：
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的第一CTNS特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一CTNS特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQ ID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的第二CTNS特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二CTNS特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：48的CDR1、SEQ ID NO：49的CDR2和SEQ ID NO：50的CDR3；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：12的胱氨酸病的第三CTNS特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三CTNS特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：13的胱氨酸病的第四CTNS特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第四CTNS特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的第一SHPK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一SHPK特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：54的CDR1、SEQ ID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：14的胱氨酸病的第二SHPK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二SHPK特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：15的胱氨酸病的第三SHPK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三SHPK特征肽；
并且
当所述第一CTNS、所述第二CTNS、所述第三CTNS、所述第四CTNS、所述第一SHPK、所述第二SHPK和/或所述第三SHPK特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或者当所述第一CTNS、所述第二CTNS、所述第三CTNS、所述第四CTNS、所述第一SHPK、所述第二SHPK和/或所述第三SHPK特征肽不存在时，诊断所述受试者患有胱氨酸病。
22.如权利要求21所述的方法，其中从来自正常对照受试者群体的DBS中的每种特征肽的平均浓度的标准偏差来计算每种特征肽的相应的预定阈值浓度。
23.如权利要求22所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的平均浓度包括在40pmol/L至250pmol/L范围内的浓度。
24.如权利要求22所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的平均浓度包括在100pmol/L至8000pmol/L范围内的浓度。
25.如权利要求21所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的VH结构域。
26.如权利要求21所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：70的VL结构域。
27.如权利要求21所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：106的重链。
28.如权利要求21所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：111的轻链。
29.如权利要求21所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：71的VH结构域。
30.如权利要求21所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：72的VL结构域。
31.如权利要求21所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：116的重链。
32.如权利要求21所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：121的轻链。
33.如权利要求21所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：73的VH结构域。
34.如权利要求21所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：74的VL结构域。
35.如权利要求21所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：126的重链。
36.如权利要求21所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：131的轻链。
37.如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括通过以下方式来筛查威尔逊病(WD)：
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：10的WD的第一ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一ATP7B特征肽；和/或
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：11或21的WD的第二ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二ATP7B特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ ID NO：58的CDR2和SEQ ID NO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDR1、SEQ ID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：16的WD的第三ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三ATP7B特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：17的WD的第四ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第四ATP7B特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：18的WD的第五ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第五ATP7B特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：19的WD的第六ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第六ATP7B特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：20的WD的第七ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第七ATP7B特征肽；并且
当所述第一ATP7B、所述第二ATP7B、所述第三ATP7B、所述第四ATP7B、所述第五ATP7B、所述第六ATP7B和/或所述第七ATP7B特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或者当所述第一ATP7B、所述第二ATP7B、所述第三ATP7B、所述第四ATP7B、所述第五ATP7B、所述第六ATP7B和/或所述第七ATP7B特征肽不存在时，诊断所述受试者患有WD。
38.如权利要求37所述的方法，其中从来自正常对照受试者群体的DBS中的每种特征肽的平均浓度的标准偏差来计算每种特征肽的相应的预定阈值浓度。
39.如权利要求38所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的平均浓度包括在90pmol/L至400pmol/L范围内的浓度。
40.如权利要求38所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中SEQ ID NO：16的WD的所述第三ATP7B特征肽的平均浓度包括在30pmol/L至100pmol/L范围内的浓度。
41.如权利要求38所述的方法，其中来自正常对照受试者群体的DBS中SEQ ID NO：20的WD的所述第七ATP7B特征肽的平均浓度包括在200pmol/L至500pmol/L范围内的浓度。
42.如权利要求37所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：75的VH结构域。
43.如权利要求37所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：76的VL结构域。
44.如权利要求37所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：136的重链。
45.如权利要求37所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：141的轻链。
46.一种筛查受试者的严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)和/或X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)的方法，所述方法包括：
获得源自所述受试者的干血斑(DBS)样品；
用酶消化来自所述DBS的血液的蛋白质以产生一种或多种肽；
用：
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：1的SCID的CD3ε特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述CD3ε特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：25的CDR1、SEQ ID NO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：2的WAS的第一WASp特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一WASp特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQ ID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：31的CDR1、SEQ ID NO：32的CDR2和SEQID NO：33的CDR3；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：3的WAS的第二WASp特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二WASp特征肽；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：4的XLA的第一BTK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一BTK特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQ ID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ ID NO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3；和/或
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：5的XLA的第二BTK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二BTK特征肽；
用：
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：10的内源性ATP7B肽，所述抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO：10的所述内源性ATP7B肽；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：11或21的内源性ATP7B肽，所述抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO：11或21的所述内源性ATP7B肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ ID NO：58的CDR2和SEQ ID NO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDR1、SEQ IDNO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：16的内源性ATP7B肽，所述抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO：16的所述内源性ATP7B肽；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：17的内源性ATP7B肽，所述抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO：17的所述内源性ATP7B肽；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：18的内源性ATP7B肽，所述抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO：18的所述内源性ATP7B肽；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：19的内源性ATP7B肽，所述抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO：19的所述内源性ATP7B肽；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：20的内源性ATP7B肽，所述抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO：20的所述内源性ATP7B肽；或
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：21的内源性ATP7B肽，所述抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO：21的所述内源性ATP7B肽；
对所述富集的肽进行液相色谱-多反应监测质谱(LC-MRM-MS)以确定所述肽的浓度；
对于每种特征肽，计算特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率；以及
当：
CD3a特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率低于相应的预定阈值比率时或者当所述CD3a特征肽不存在时，诊断所述受试者患有SCID；
当所述第一和/或第二WASp特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率低于相应的预定阈值比率时或者当所述第一和/或第二WASp特征肽不存在时，诊断所述受试者患有WAS；并且
当所述第一和/或第二BTK特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率低于相应的预定阈值比率时或者当所述第一和/或第二BTK特征肽不存在时，诊断所述受试者患有XLA。
47.如权利要求46所述的方法，其中从样品群体中每种肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的平均比率的标准偏差来计算每个预定阈值比率。
48.如权利要求46所述的方法，其中所述方法作为新生儿筛查(NBS)的一部分进行，所述新生儿筛查另外筛查所述受试者的苯丙酮尿症、原发性先天性甲状腺功能减退症、囊性纤维化和镰状细胞病中的一种或多种。
49.如权利要求46所述的方法，其中所述方法在所述受试者中不存在SCID、WAS和/或XLA的临床症状的情况下进行。
50.如权利要求46所述的方法，其中所述酶是胰蛋白酶。
51.如权利要求46所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：1的SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：63的VH结构域。
52.如权利要求46所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：1的SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：64的VL结构域。
53.如权利要求46所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：65的VH结构域。
54.如权利要求46所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：66的VL结构域。
55.如权利要求46所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：86的重链。
56.如权利要求46所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：91的轻链。
57.如权利要求46所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67的VH结构域。
58.如权利要求46所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：68的VL结构域。
59.如权利要求46所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：96的重链。
60.如权利要求46所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：101的轻链。
61.如权利要求46所述的方法，所述方法还包括通过以下方式来筛查胱氨酸病：
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的第一CTNS特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一CTNS特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQ ID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的第二CTNS特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二CTNS特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：48的CDR1、SEQ ID NO：49的CDR2和SEQ ID NO：50的CDR3；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：12的胱氨酸病的第三CTNS特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三CTNS特征肽：
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：13的胱氨酸病的第四CTNS特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第四CTNS特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的第一SHPK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一SHPK特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：54的CDR1、SEQ ID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：14的胱氨酸病的第二SHPK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二SHPK特征肽；和/或
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：15的胱氨酸病的第三SHPK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三SHPK特征肽；
对于每种特征肽，计算特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率；以及
当所述第一CTNS肽浓度：内源性ATP7B肽浓度、所述第二CTNS肽浓度：内源性ATP7B肽浓度、所述第三CTNS肽浓度：内源性ATP7B肽浓度、所述第四CTNS肽浓度：内源性ATP7B肽浓度、所述第一SHPK肽浓度：内源性ATP7B肽浓度、所述第二SHPK肽浓度：内源性ATP7B肽浓度和/或所述第三SHPK特征肽浓度：内源性ATP7B肽浓度的比率低于相应的预定阈值比率时或者当所述第一CTNS、所述第二CTNS、所述第三CTNS、所述第四CTNS、所述第一SHPK、所述第二SHPK和/或所述第三SHPK特征肽不存在时，诊断所述受试者患有胱氨酸病。
62.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的VH结构域。
63.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：70的VL结构域。
64.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：106的重链。
65.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：111的轻链。
66.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：71的VH结构域。
67.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：72的VL结构域。
68.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：116的重链。
69.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：121的轻链。
70.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：73的VH结构域。
71.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：74的VL结构域。
72.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：126的重链。
73.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：131的轻链。
74.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：11或21的所述内源性ATP7B肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：75的VH结构域。
75.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：11或21的所述内源性ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：76的VL结构域。
76.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：11或21的所述内源性ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：136的重链。
77.如权利要求61所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：11或21的所述内源性ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：141的轻链。
78.一种检测一种或多种干血斑(DBS)样品中的严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)和/或X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)的一种或多种特征肽的方法，所述方法包括：
获得所述一种或多种干血斑(DBS)样品；
用酶消化来自每种DBS的血液的蛋白质以产生一种或多种肽；
用：
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：1的SCID的CD3ε特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述CD3ε特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：25的CDR1、SEQ ID NO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：2的WAS的第一WASp特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一WASp特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQ ID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：31的CDR1、SEQ ID NO：32的CDR2和SEQID NO：33的CDR3；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：3的WAS的第二WASp特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二WASp特征肽；
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：4的XLA的第一BTK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一BTK特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQ ID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ ID NO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3；和/或
抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：5的XLA的第二BTK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二BTK特征肽；
对所述富集的肽进行液相色谱-多反应监测质谱(LC-MRM-MS)，从而检测一种或多种DBS样品中SCID、WAS和XLA的一种或多种特征肽。
79.如权利要求78所述的方法，其中所述酶是胰蛋白酶。
80.如权利要求78所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：1的SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：63的VH结构域。
81.如权利要求78所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：1的SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：64的VL结构域。
82.如权利要求78所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：65的VH结构域。
83.如权利要求78所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：66的VL结构域。
84.如权利要求78所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：86的重链。
85.如权利要求78所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：2的WAS的所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：91的轻链。
86.如权利要求78所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67的VH结构域。
87.如权利要求78所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：68的VL结构域。
88.如权利要求78所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：96的重链。
89.如权利要求78所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：4的XLA的所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：101的轻链。
90.如权利要求78所述的方法，所述方法还包括通过以下方式来检测胱氨酸病的一种或多种特征肽：
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的第一CTNS特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一CTNS特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQ ID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的第二CTNS特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二CTNS特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：48的CDR1、SEQ ID NO：49的CDR2和SEQ ID NO：50的CDR3；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：12的胱氨酸病的第三CTNS特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三CTNS特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：13的胱氨酸病的第四CTNS特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第四CTNS特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的第一SHPK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一SHPK特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：54的CDR1、SEQ ID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：14的胱氨酸病的第二SHPK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二SHPK特征肽；和/或
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：15的胱氨酸病的第三SHPK特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三SHPK特征肽：
对所述富集的肽进行液相色谱-多反应监测质谱(LC-MRM-MS)，从而检测一种或多种DBS样品中胱氨酸病的一种或多种特征肽。
91.如权利要求90所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的VH结构域。
92.如权利要求90所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：70的VL结构域。
93.如权利要求90所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：106的重链。
94.如权利要求90所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：111的轻链。
95.如权利要求90所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：71的VH结构域。
96.如权利要求90所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：72的VL结构域。
97.如权利要求90所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：116的重链。
98.如权利要求90所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：121的轻链。
99.如权利要求90所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：73的VH结构域。
100.如权利要求90所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：74的VL结构域。
101.如权利要求90所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：126的重链。
102.如权利要求90所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：131的轻链。
103.如权利要求78所述的方法，所述方法还包括通过以下方式来检测威尔逊病(WD)的一种或多种特征肽：
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：10的WD的第一ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一ATP7B特征肽；和/或
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：11或21的WD的第二ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二ATP7B特征肽并且包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ ID NO：58的CDR2和SEQ ID NO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDR1、SEQ ID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：16的WD的第三ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三ATP7B特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：17的WD的第四ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第四ATP7B特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：18的WD的第五ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第五ATP7B特征肽；
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：19的WD的第六ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第六ATP7B特征肽；和/或
用抗体或其抗原结合片段富集SEQ ID NO：20的WD的第七ATP7B特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第七ATP7B特征肽；
对所述富集的肽进行液相色谱-多反应监测质谱(LC-MRM-MS)，从而检测一种或多种DBS样品中WD的一种或多种特征肽。
104.如权利要求103所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：75的VH结构域。
105.如权利要求103所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：76的VL结构域。
106.如权利要求103所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：136的重链。
107.如权利要求103所述的方法，其中用于富集SEQ ID NO：11或21的WD的所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：141的轻链。
108.一种用于筛查受试者的严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)、X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)和/或威尔逊病(WD)的测定，所述测定包括：
(i)结合至SEQ ID NO：1的SCID的CD3ε特征肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：25的CDR1、SEQ ID NO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3；
结合至SEQ ID NO：2的WAS的WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：31的CDR1、SEQ ID NO：32的CDR2和SEQ ID NO：33的CDR3；
结合至SEQ ID NO：4的XLA的BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ ID NO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3；和/或
结合至SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ IDNO：58的CDR2和SEQ ID NO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDR1、SEQ ID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3；
和/或
(ii)结合SEQ ID NO：3的WAS的WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：5的XLA的BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：10的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：16的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：17的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：18的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：19的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：20的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；和/或
结合SEQ ID NO：21的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
和/或
(iii)参考特征肽，所述参考特征肽包含：
SEQ ID NO：1的SCID的CD3ε肽；
SEQ ID NO：2的WAS的WASp肽；
SEQ ID NO：3的WAS的WASp肽；
SEQ ID NO：4的XLA的BTK肽；
SEQ ID NO：5的XLA的BTK肽；
SEQ ID NO：10的WD的ATP7B肽；
SEQ ID NO：11的WD的ATP7B肽；
SEQ ID NO：16的WD的ATP7B肽；
SEQ ID NO：17的WD的ATP7B肽；
SEQ ID NO：18的WD的ATP7B肽；
SEQ ID NO：19的WD的ATP7B肽；
SEQ ID NO：20的WD的ATP7B肽；和/或
SEQ ID NO：21的WD的ATP7B肽。
109.如权利要求108所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：1的SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：63的VH结构域。
110.如权利要求108所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：1的SCID的所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：64的VL结构域。
111.如权利要求108所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：2的WAS的所述WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：65的VH结构域。
112.如权利要求108所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：2的WAS的所述WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：66的VL结构域。
113.如权利要求108所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：2的WAS的所述WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：86的重链。
114.如权利要求108所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：2的WAS的所述WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：91的轻链。
115.如权利要求108所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：4的XLA的所述BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67的VH结构域。
116.如权利要求108所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：4的XLA的所述BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：68的VL结构域。
117.如权利要求108所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：4的XLA的所述BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：96的重链。
118.如权利要求108所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：4的XLA的所述BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：101的轻链。
119.如权利要求108所述的测定，所述测定用于进一步筛查胱氨酸病，所述测定包括：
(iii)结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQ ID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3；
结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：48的CDR1、SEQ ID NO：49的CDR2和SEQ ID NO：50的CDR3；
结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：54的CDR1、SEQ ID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3；
和/或
(iv)结合SEQ ID NO：12的CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：13的CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：14的SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段；和/或
结合SEQ ID NO：15的SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
和/或
(v)参考特征肽，所述参考特征肽包含：
SEQ ID NO：6的胱氨酸病的CTNS肽；
SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的CTNS肽；
SEQ ID NO：12的胱氨酸病的CTNS肽；
SEQ ID NO：13的胱氨酸病的CTNS肽；
SEQ ID NO：9的胱氨酸病的SHPK肽；
SEQ ID NO：14的胱氨酸病的SHPK肽；和/或
SEQ ID NO：15的胱氨酸病的SHPK肽。
120.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的VH结构域。
121.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：70的VL结构域。
122.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：106的重链。
123.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的所述CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：111的轻链。
124.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：71的VH结构域。
125.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：72的VL结构域。
126.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：116的重链。
127.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的所述CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：121的轻链。
128.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：73的VH结构域。
129.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：74的VL结构域。
130.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：126的重链。
131.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的所述SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：131的轻链。
132.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：11或21的WD的所述ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：75的VH结构域。
133.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：11或21的WD的所述ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：76的VL结构域。
134.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：11或21的WD的所述ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：136的重链。
135.如权利要求119所述的测定，其中结合至SEQ ID NO：11或21的WD的所述ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：141的轻链。
136.如权利要求119所述的测定，其中所述参考特征肽是同位素标记的。
137.如权利要求119所述的测定，其中所述抗体或其抗原结合片段附着于磁珠。
138.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：25的CDR1、SEQ ID NO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3。
139.如权利要求138所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQID NO：63。
140.如权利要求138所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQID NO：64。
141.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQ ID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：31的CDR1、SEQ ID NO：32的CDR2和SEQ ID NO：33的CDR3。
142.如权利要求141所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQID NO：65。
143.如权利要求141所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQID NO：66。
144.如权利要求141所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含SEQ IDNO：86。
145.如权利要求141所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含SEQ IDNO：91。
146.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQ ID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ ID NO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3。
147.如权利要求146所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQID NO：67。
148.如权利要求146所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQID NO：68。
149.如权利要求146所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含SEQ IDNO：96。
150.如权利要求146所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含SEQ IDNO：101。
151.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQ ID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3。
152.如权利要求151所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQID NO：69。
153.如权利要求151所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQID NO：70。
154.如权利要求151所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含SEQ IDNO：106。
155.如权利要求151所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含SEQ IDNO：111。
156.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：48的CDR1、SEQ ID NO：49的CDR2和SEQ ID NO：50的CDR3。
157.如权利要求156所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQID NO：71。
158.如权利要求156所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQID NO：72。
159.如权利要求156所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含SEQ IDNO：116。
160.如权利要求156所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含SEQ IDNO：121。
161.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：54的CDR1、SEQ ID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3。
162.如权利要求161所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQID NO：73。
163.如权利要求161所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQID NO：74。
164.如权利要求161所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含SEQ IDNO：126。
165.如权利要求161所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含SEQ IDNO：131。
166.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ ID NO：58的CDR2和SEQ ID NO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDR1、SEQ ID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3。
167.如权利要求166所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQID NO：75。
168.如权利要求166所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQID NO：76。
169.如权利要求166所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含SEQ IDNO：136。
170.如权利要求166所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含SEQ IDNO：141。
171.一种试剂盒，所述试剂盒包括：
(i)结合至SEQ ID NO：1的SCID的CD3ε特征肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：25的CDR1、SEQ ID NO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3；
结合至SEQ ID NO：2的WAS的WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：31的CDR1、SEQ ID NO：32的CDR2和SEQ ID NO：33的CDR3；
结合至SEQ ID NO：4的XLA的BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ ID NO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3；
结合至SEQ ID NO：6的胱氨酸病的CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQ ID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3；
结合至SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：48的CDR1、SEQ ID NO：49的CDR2和SEQ ID NO：50的CDR3；
结合至SEQ ID NO：9的胱氨酸病的SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：54的CDR1、SEQ ID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3；和/或
结合至SEQ ID NO：11或21的ATP7B肽的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ IDNO：58的CDR2和SEQ ID NO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDR1、SEQ ID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3；
和/或
(ii)结合SEQ ID NO：3的WAS的WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：5的XLA的BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：12的CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：13的CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：14的SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：15的SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：10的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：16的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：17的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：18的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：19的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
结合SEQ ID NO：20的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；和/或
结合SEQ ID NO：21的ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段；
和/或
(iii)参考特征肽，所述参考特征肽包含：
SEQ ID NO：1的SCID的CD3ε肽；
SEQ ID NO：2的WAS的WASp肽；
SEQ ID NO：3的WAS的WASp肽；
SEQ ID NO：4的XLA的BTK肽；
SEQ ID NO：5的XLA的BTK肽；
SEQ ID NO：6的胱氨酸病的CTNS肽；
SEQ ID NO：7或8的胱氨酸病的CTNS肽；
SEQ ID NO：12的胱氨酸病的CTNS肽；
SEQ ID NO：13的胱氨酸病的CTNS肽；
SEQ ID NO：9的胱氨酸病的SHPK肽；
SEQ ID NO：14的胱氨酸病的SHPK肽；
SEQ ID NO：15的胱氨酸病的SHPK肽；
SEQ ID NO：10的WD的ATP7B肽；
SEQ ID NO：11的WD的ATP7B肽；
SEQ ID NO：16的WD的ATP7B肽；
SEQ ID NO：17的WD的ATP7B肽；
SEQ ID NO：18的WD的ATP7B肽；
SEQ ID NO：19的WD的ATP7B肽；
SEQ ID NO：20的WD的ATP7B肽；和/或
SEQ ID NO：21的WD的ATP7B肽。
172.如权利要求171所述的试剂盒，所述试剂盒还包括滤纸卡、冲孔工具、消化酶、消化缓冲液、所述抗体或其抗原结合片段的固体载体以及洗脱缓冲液中的一种或多种。
173.如权利要求171所述的试剂盒，其中所述参考特征肽是同位素标记的。
174.如权利要求171所述的试剂盒，其中所述抗体或其抗原结合片段附着于磁珠。
175.一种筛查受试者的严重联合免疫缺陷(SCID)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)、X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)、胱氨酸病和/或威尔逊病(WD)的方法，所述方法包括：
获得源自所述受试者的干血斑(DBS)样品；
用酶消化来自所述DBS的血液的蛋白质以产生一种或多种肽；
用：
结合至SCID的CD3ε特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述CD3ε特征肽；
结合至WAS的第一WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一WASp特征肽；
结合至WAS的第二WASp特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二WASp特征肽；
结合至XLA的第一BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一BTK特征肽；
结合至第二BTK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二BTK特征肽；
结合至胱氨酸病的第一CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一CTNS特征肽；
结合至胱氨酸病的第二CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二CTNS特征肽；
结合至胱氨酸病的第三CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第三CTNS特征肽；
结合至胱氨酸病的第四CTNS特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第四CTNS特征肽；
结合至胱氨酸病的第一SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一SHPK特征肽；
结合至胱氨酸病的第二SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二SHPK特征肽；和/或
结合至胱氨酸病的第三SHPK特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第三SHPK特征肽；
结合至第一ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第一ATP7B特征肽；
结合至第二ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第二ATP7B特征肽；
结合至第三ATP7B特征肽的抗体或抗原结合片段富集所述第三ATP7B特征肽；
结合至第四ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第四ATP7B特征肽；
结合至第五ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第五ATP7B特征肽；
结合至第六ATP7B特征肽的抗体或其抗原结合片段富集所述第六ATP7B特征肽；和/或
抗体或其抗原结合片段富集第七ATP7B特征肽；
对所述富集的肽进行液相色谱-多反应监测质谱(LC-MRM-MS)以确定所述肽的浓度；以及
当：
所述CD3ε特征肽的浓度低于预定阈值浓度时或者当所述CD3ε特征肽不存在时，诊断所述受试者患有SCID；
所述第一WASp特征肽和/或所述第二WASp特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或者当所述第一WASp特征肽和/或所述第二WASp特征肽不存在时，诊断所述受试者患有WAS；
所述第一BTK特征肽和/或所述第二BTK特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或者当所述第一BTK特征肽和/或所述第二BTK特征肽不存在时，诊断所述受试者患有XLA；
当所述第一CTNS、所述第二CTNS、所述第三CTNS、所述第四CTNS、所述第一SHPK、所述第二SHPK和/或所述第三SHPK特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或者当所述第一CTNS、所述第二CTNS、所述第三CTNS、所述第四CTNS、所述第一SHPK、所述第二SHPK和/或所述第三SHPK特征肽不存在时，诊断所述受试者患有胱氨酸病；和/或
当所述第一ATP7B、所述第二ATP7B、所述第三ATP7B、所述第四ATP7B、所述第五ATP7B、所述第六ATP7B和/或所述第七ATP7B特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或者当所述第一ATP7B、所述第二ATP7B、所述第三ATP7B、所述第四ATP7B、所述第五ATP7B、所述第六ATP7B和/或所述第七ATP7B特征肽不存在时，诊断所述受试者患有WD。
176.如权利要求175所述的方法，其中
SCID的所述CD3ε特征肽由SEQ ID NO：1中列出的氨基酸序列编码；
WAS的所述第一WASp特征肽由SEQ ID NO：2中列出的氨基酸序列编码；
WAS的所述第二WASp特征肽由SEQ ID NO：3中列出的氨基酸序列编码；
XLA的所述第一BTK特征肽由SEQ ID NO：4中列出的氨基酸序列编码；和/或
XLA的所述第二BTK特征肽由SEQ ID NO：5中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽由SEQ ID NO：6中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第二CTNS特征肽由SEQ ID NO：7或8中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第三CTNS特征肽由SEQ ID NO：12中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第四CTNS特征肽由SEQ ID NO：13中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第一SHPK特征肽由SEQ ID NO：9中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第二SHPK特征肽由SEQ ID NO：14中列出的氨基酸序列编码；
胱氨酸病的所述第三SHPK特征肽由SEQ ID NO：15中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第一ATP7B特征肽由SEQ ID NO：10中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第二ATP7B特征肽由SEQ ID NO：11或21中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第三ATP7B特征肽由SEQ ID NO：16中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第四ATP7B特征肽由SEQ ID NO：17中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第五ATP7B特征肽由SEQ ID NO：18中列出的氨基酸序列编码；
WD的所述第六ATP7B特征肽由SEQ ID NO：19中列出的氨基酸序列编码；和/或
WD的所述第七ATP7B特征肽由SEQ ID NO：20中列出的氨基酸序列编码。
177.如权利要求175所述的方法，其中
结合至所述CD3ε特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：22的CDR1、SEQ ID NO：23的CDR2和SEQ ID NO：24的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：25的CDR1、SEQ IDNO：26的CDR2和SEQ ID NO：27的CDR3；
结合至所述第一WASp特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：28的CDR1、SEQ ID NO：29的CDR2和SEQ ID NO：30的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：31的CDR1、SEQID NO：32的CDR2和SEQ ID NO：33的CDR3；和/或
结合至所述第一BTK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：34的CDR1、SEQ ID NO：35的CDR2和序列GDI的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：36的CDR1、SEQ ID NO：37的CDR2和SEQ ID NO：38的CDR3；
结合至胱氨酸病的所述第一CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：39的CDR1、SEQ ID NO：40的CDR2和SEQID NO：41的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：42的CDR1、SEQ ID NO：43的CDR2和SEQ ID NO：44的CDR3；
结合至所述第二CTNS特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：45的CDR1、SEQ ID NO：46的CDR2和SEQ ID NO：47的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：48的CDR1、SEQID NO：49的CDR2和SEQ ID NO：50的CDR3；
结合至所述第一SHPK特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：51的CDR1、SEQ ID NO：52的CDR2和SEQ ID NO：53的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：54的CDR1、SEQID NO：55的CDR2和SEQ ID NO：56的CDR3；和/或
结合至所述第二ATP7B特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：57的CDR1、SEQ ID NO：58的CDR2和SEQ ID NO：59的CDR3；以及轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：60的CDR1、SEQID NO：61的CDR2和SEQ ID NO：62的CDR3。
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