CN1321162A

CN1321162A - 硫代寡糖的固相合成

Info

Publication number: CN1321162A
Application number: CN99810681.XA
Authority: CN
Inventors: O·辛德斯高尔; G·休梅尔
Original assignee: Synsorb Biotech Inc
Current assignee: Synsorb Biotech Inc
Priority date: 1998-08-07
Filing date: 1999-08-06
Publication date: 2001-11-07
Also published as: US6177553B1; NO20010637D0; EP1102780A2; WO2000008038A2; CA2337752A1; WO2000008038A3; AU5272599A; JP2002522445A; NO20010637L

Abstract

描述了形成硫连接的二糖和寡糖的固相合成方法,其中,在异头碳上携带被护硫羟基的糖或寡糖在除还原糖的异头碳原子之外的任意位置被固定到固体载体上。形成的固定化硫羟或其衍生物经历亲核糖加成而提供二糖或寡糖。

Description

硫代寡糖的固相合成

本发明涉及形成硫连接的二糖和寡糖的固相合成方法。在这些方法中，携带被护的硫羟基的糖或寡糖在除被护的硫羟基之外的任意位置被固定到固体载体上。然后，除去硫羟保护基和任选转化成它的硫醇盐。使生成的硫羟/硫醇盐经历亲核糖加成而提供固相结合的二糖或寡糖。

在一个优选的实施方案中，亲核糖加成反应包括一个糖基或寡糖基，它已在需要键合的位置通过引入一个离去基而被活化了，所述离去基将被硫羟/硫醇盐替代而形成硫键。

在另一个优选的实施方案中，糖或寡糖上被护的硫羟基位于还原糖基的异头碳原子上。

参考文献

本申请中引用了下列出版物、专利和专利申请(以上标数字表示)：¹ Hindsgaul,1-硫代半乳糖衍生物，国际专利申请公开No.WO 98/

21221,1998年5月22日公布的。² Witczak等，硫糖Ⅱ，碳水化合物研究(Carbohydrate Research),

301:167～175(1997)。³ L.X.Wand,N.Sakari和H.Kuzuhara，化学会志[英],Perkin

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究，71(1979)169～191。⁸ M.G.Essig，碳水化合物研究，156(1986)225～231。⁹ T.W.Greene和G.M.Wuts，有机合成中的保护基(Protecting

Groups in Organic Synthesis)，第二版，Wiley,New York,1991。¹⁰ Gallop等，美国专利No.5,525,734，“吡咯烷酮化合物的多种

合成方法，”1996年6月11日发布的。

硫糖(或1-硫代糖苷)至今已被公开了多种用途。例如，Hindsgaul^1,6公开了，某些硫代半乳糖衍生物适用于阻碍毒素(例如热不稳定的肠毒素或霍乱毒素)与它们的受体在体内或体外结合。类似地，Witczak等^2,7公开了，硫糖(α连接的和β连接的硫代二糖)适用作酶抑制研究中的探针和用作糖抗生素的组分。

具有这样的硫键的化合物合成通常比相应的醚键更难。例如，硫羟基中的硫原子比醇中的氧原子电负性更小，所以，对质子具有更低的亲和性。为此，在烷基化之前，一般将硫羟基脱质子化成相应的硫醇盐基(例如，-S^-)。

在任何情况下，已通过数种方法实现了硫连接的二糖的溶液相合成，例如，硫醇盐阴离子与糖基卤化物之间的S_N2型反应³，离去基被1-硫代吡喃葡糖置换⁴，以及苄化1,6-二氢吡喃葡糖与被护的4-硫代吡喃葡糖苷的缩合⁵。这些常规方法通常是生产不同产率的所需产品的多步法。通过糖硫醇与左旋葡烯糖酮(levolglucosenone)的迈克尔加成生产硫代二糖的其它方法也是已知的^7,8。

然而，上述形成硫代二糖或寡糖的常规方法要求在溶液中形成硫代二糖或寡糖。这表现出除去不希望有的副产物和过剩试剂(但不影响所需的终产品或在纯化过程中不降低产率)的难度。

形成硫连接的糖化合物的固相反应应当是特别需要的，因为它将使得容易纯化终产品，以及合成过程中产生的任何中间体，但不降低总产率。然而，显然从未报道在固体载体上形成硫代二糖或寡糖的方法。

本发明涉及这一意外而新颖的发现：迄今已知的形成二糖的溶液相亲核置换反应也可用结合到固体载体上的糖或寡糖进行。二糖或寡糖在固体载体上的合成提供了下列特定的优点：反应的构象控制、生成产物的纯度的提高和总产率的改善。

因此，在它的方法方面之一中，本发明涉及一种在固体载体上形成硫连接的二糖或寡糖的方法，该方法包括：

ⅰ)将第一种糖或寡糖固定在固体载体上，其中，第一种糖或寡糖包含处于还原糖单元的异头碳上的、式-SR的被护硫羟基，其中，R是硫羟基保护剂；

ⅱ)将硫羟基去保护，任选将去保护的硫羟基转化成相应的硫醇盐；

ⅲ)任选添加一种金属络合剂；以及

ⅳ)将上述ⅱ)或ⅲ)中形成的固定化糖或寡糖基与包含亲核性可置换基的第二种糖或寡糖在使硫羟基或硫醇盐基置换所述亲核性可置换基的条件下接触，从而在第一种糖/寡糖和第二种糖/寡糖之间形成硫键。

在一个优选的实施方案中，固定在固体载体上的糖或寡糖是未保护的糖基或寡糖基，不过，可应用羟基/氨基被护的糖或寡糖，只要有至少一个官能团可用于偶联到固体载体上即可。在一个特别优选的实施方案中，糖或寡糖固定到或连接到固体载体上的点是通过应用包含官能团(它们优先与伯醇反应)的固体载体导引的。

在另一个优选的实施方案中，硫醇封阻基R选自：酰基、烷基、取代烷基、芳基、杂芳基、硫烷基、硫取代烷基、硫环烷基、硫芳基和硫杂芳基等。

在又一个优选的实施方案中，被连接到固体载体上的寡糖是通过可解离的连接臂连接的。在该实施方案一个优选的方面，上述方法进一步包括：通过可解离的连接臂将上文ⅰ)中描述的糖或寡糖固定到固体载体上，在上文的ⅳ)之后，从所述固体载体上脱除ⅳ)中形成的产物。

在又一个优选的实施方案中，在上文的ⅳ)中应用的第二种糖或寡糖在还原糖单元的异头碳上包含式-SR的被护硫羟基，其中，R是硫羟基保护剂，再根据需要重复步骤ⅱ)、ⅲ)和ⅳ)。

应用于本发明方法中的优选的糖例如包括：D-半乳糖、D-葡萄糖、D-甘露糖、D-木糖、D-葡糖酸(例如，D-glucoronic acid)、N-乙酰基-D-葡糖胺、N-乙酰基-D-半乳糖胺、唾液酸(sialyic acid)、L-岩藻糖、keto-deoxyoctulolsonic acid(KDO)等。该术语定义内包括了这些糖的脱氧衍生物、脱氧卤代衍生物、脱氧氨基衍生物、酰化衍生物、磷酸化衍生物和硫酸化衍生物。该定义中还包括环多醇(例如肌醇)。

本文应用的“糖”有时应用常规三字母名称注明。除非另有说明，所有的糖都假定呈D-型，但岩藻糖除外(它呈L-型)。而且，所有的糖都呈吡喃糖形式。

应用于本文描述的方法或通过本文描述的方法制备的、优选的寡糖包括具有两个或多个(优选2～10个)前述糖单元的那些，其中，每个糖单元相对于所述寡糖中的其它糖单元来说被独立地选择。

应用于本文的优选的固体载体选自：二氧化硅，合成硅酸盐，生物源的硅酸盐，多孔玻璃，水凝胶，含硅酸盐的矿物，合成聚合物，聚苯乙烯，聚丙烯，聚丙烯酰胺，聚乙二醇，聚丙烯酰胺，及其共聚物(包括聚苯乙烯/聚乙二醇的共聚物和聚丙烯酰胺/聚乙二醇的共聚物)。

图1阐述了形成在异头碳原子上具有被护的硫羟基的固定化糖基的反应示意图。在该图中描述的糖基中，羟基未被保护(该图中的PS表示聚苯乙烯)。

图2阐述了用于提供固相结合的二糖的亲核糖加成反应，其中，糖单元通过硫键被连接在一起(该图中的PS表示聚苯乙烯)。

图3阐述了适用于图2中描绘的亲核糖加成反应的各种糖。图3中每一种糖都包含亲核性可置换基，它在适当的反应条件下被固相结合的糖或寡糖的硫羟基/硫醇盐置换。

图4阐述了形成具有第二个糖基的固定化糖基的第二个反应示意图，所述第二个糖基在其上具有一个亲核性可置换基。在该图中描绘的结合的糖基中，羟基未被保护；而在未结合的糖中，2、3和6位上的羟基被保护了，而且该糖在其异头碳原子上进一步包含一个被护的硫羟基(该图中的PS表示聚苯乙烯)。

如上所述，本发明涉及一种在固体载体上形成硫连接的寡糖的方法。不过，在进一步详细描述本发明之前，将首先定义如下术语。定义

术语“硫羟保护基”表示熟知的官能团，当与硫羟硫结合时，它使生成的被护的硫羟基(-SR)对将在化合物的其它部分进行的反应条件呈惰性，而且，它在适当的时候可被反应而再生硫羟基。R硫羟保护基的特性不是关键性的，选择的R硫羟保护基应与下列情况相适应：硫羟糖或寡糖和将在其上进行的化学作用以及较容易合成在硫醇上形成所述保护基的化合物和后续较容易除去该保护基。优选地，R选自下列基：酰基、烷基、取代烷基、芳基、杂芳基、硫烷基、硫取代烷基、硫环烷基、硫芳基和硫杂芳基等。

术语“金属络合剂”表示熟知的络合剂，它们与形成硫醇盐阴离子的反离子的阳离子络合。优选地，所述阳离子是碱离子，例如锂离子、钠离子和钾离子或铵离子(包括四烷基铵离子)。阳离子的络合增强了硫醇盐阴离子的亲核性。合适的金属络合剂实例包括：18-冠-6、15-冠-5、cryptofix等。特定的金属络合剂的选择是相对于将要络合的阳离子进行的，这样的选择完全属于本领域的技术。

术语“亲核性可置换的基”表示常规离去基，它将被亲核体置换，于是，随着离去基的消去而在其间形成一个共价键。例如，当亲核体是硫醇盐基(-S^-)时，离去基是连接到碳原子上的溴基(-Br-C＜)，溴离去基被硫醇盐基置换导致硫-碳共价键的形成。合适的离去基的选择不是关键性的，可选择种种熟知的离去基的任一种。这样的离去基实例包括：各种磺酸酯基，例如甲苯磺酸酯基、甲磺酸酯基、对溴苯磺酸酯基、nosylate基；以及氟化磺酸酯基，例如三氟甲磺酸基、nonaflate基和tresylate基等。

“烷基”表示具有优选1～10个碳原子、更优选1～6个碳原子的一价烷基。该术语的实例例如有：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、正己基等。

“取代烷基”表示具有1～8个碳原子的支链或直链烷基，它含有1～3个选自下组的取代基：羟基、酰基、酰氨基、酰氧基、烷氧基、取代烷氧基、烯基、炔基、氨基、取代氨基、氨酰基、芳基、芳氧基、羧基、羧基烷基、氰基、环烷基、胍基、卤基、杂芳基、杂环、硝基、硫羟、硫烷基、硫(取代烷基)、硫芳基、硫杂芳基等。优选的取代基包括羟基和氨基。

“酰基”表示：烷芳基-C(O)-、烷基-C(O)-、芳基-C(O)-和杂芳基-C(O)-，其中，烷芳基、烷基、芳基和杂芳基同本文的定义。

“酰氨基”表示基-C(O)NRR，其中，每个R独立地表示氢或烷基。

“酰氧基”表示：烷基-C(O)O-、芳基-C(O)O-、杂芳基-C(O)O-和杂环-C(O)O-，其中，烷基、芳基、杂芳基和杂环同本文的定义。

“烷芳基”表示-亚烷基-芳基，其中，亚烷基和芳基同本文的定义。这样的烷芳基实例有：苄基、苯乙基等。

“烷氧基”表示基烷基-O-。这样的烷氧基例如有：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基、1,2-二甲基丁氧基等。

“取代烷氧基”表示基(取代烷基)-O-，其中，取代烷基同本文的定义。

“烯基”表示这样的烯基：优选具有2～8个碳原子，更优选具有2～6个碳原子，而且具有至少1个、优选1～2个烯基不饱和位点，这些基任选被1～3个选自下列的取代基取代：羟基、酰基、酰氨基、酰氧基、烷氧基、取代烷氧基、炔基、氨基、取代氨基、氨酰基、芳基、芳氧基、羧基、羧基烷基、氰基、环烷基、胍基、卤基、杂芳基、杂环、硝基、硫羟、硫烷基、硫(取代烷基)、硫芳基、硫杂芳基等。这样的烯基包括：乙烯基(-CH=CH₂)、正丙烯基(即烯丙基)(-CH₂CH=CH₂)、异丙烯基(-C(CH₃)=CH₂)等。

“亚烷基”或“烷基二基”表示优选具有1～8个碳原子、更优选具有1～6个碳原子的二价亚烷基。该术语的实例例如有：亚甲基(-CH₂-)、1,2-亚乙基(-CH₂CH₂-)、亚丙基异构体(例如，-CH₂CH₂CH₂-和-CH(CH₃)CH₂-)等。

“炔基”表示这样的炔基：优选具有2～8个碳原子，更优选具有2～6个碳原子，而且具有至少1个、优选1～2个炔基不饱和位点，这些基任选被1～3个选自下列的取代基取代：羟基、酰基、酰氨基、酰氧基、烷氧基、取代烷氧基、烯基、氨基、取代氨基、氨酰基、芳基、芳氧基、羧基、羧基烷基、氰基、环烷基、胍基、卤基、杂芳基、杂环、硝基、硫羟、硫烷基、硫(取代烷基)、硫芳基、硫杂芳基等。这样的炔基包括：乙炔基(-C≡CH)、炔丙基(-CH₂C≡CH)等。

“氨基”表示基-NH₂。

“取代氨基”表示基-N(R)₂，其中，每个R独立地选自下列基：氢、烷基、取代烷基、烯基、芳基、环烷基、杂芳基、杂环，以及两个R基与它们连接的氮一起构成杂环基。当两个R基都是氢时，-N(R)₂是上文定义的氨基。取代氨基的实例例如包括：单-和二-烷基氨基、单-和二-(取代烷基)氨基、单-和二-芳氨基、单-和二-杂芳氨基、单-和二-杂环氨基，以及具有不同的选自下列的取代基的不对称二取代胺：烷基、取代烷基、芳基、杂芳基和杂环等。

“氨酰基”表示基-NRC(O)R，其中，每个R独立地表示氢或烷基。

“芳基”表示6～14个碳原子的不饱和芳族碳环基，它具有一个单环(例如苯基)或多个稠环(例如萘基或蒽基)。优选的芳基包括苯基、萘基等。

除非另外受芳基取代基定义的约束，这样的芳基任选可被1～3个选自下列的取代基取代：羟基、酰基、酰氧基、烷基、取代烷基、烷氧基、烯基、炔基、氨基、氨酰基、芳基、芳氧基、羧基、羧基烷基、氰基、卤基、硝基、杂芳基、三卤甲基等。优选的取代基包括：烷基、烷氧基、卤基、羧基、氰基、硝基、三卤甲基和硫代烷氧基。

“芳氧基”表示基芳基-O-，其中，芳基同本文的定义，包括也是同本文定义的、任选取代的芳基。

“羧基”表示基-COOH。

“羧基烷基”表示基-C(O)O-烷基，其中，烷基同本文的定义。

“环烷基”表示具有一个单环或多个稠环、3～8个碳原子的环状烷基或环烷基环，它们可任选被1～3个选自下列的取代基取代：羟基、酰基、酰氧基、烷基、取代烷基、亚烷基、烷氧基、烯基、炔基、氨基、氨酰基、芳基、芳氧基、羧基、羧基烷基、氰基、卤基、硝基、杂芳基、三卤甲基等。优选的取代基包括：烷基、烷氧基、卤基、羧基、氰基、硝基、三卤甲基和硫代烷氧基。这样的环烷基例如包括：单环结构，例如环丙基、环丁基、环戊基、环辛基、1-甲基环丙基、2-甲基环戊基、2-甲基环辛基等；或者多环结构，例如金刚烷基等；以及螺环化合物。合适的环烷基环的实例包括：单环结构，例如环戊烷、环己烷、环庚烷、环辛烷等；或者多环结构，例如二环[2.2.1]庚烷、二环[3.2.1]辛烷等。优选的环烷基环包括环戊烷、环己烷、环庚烷和二环[3.2.1]辛烷。

“环烯基”表示具有一个单环和至少一个内部不饱和点的、4～8个碳原子的环状烯基或环烯基环，它们可任选被1～3个选自下列的取代基取代：羟基、酰基、酰氧基、烷基、取代烷基、亚烷基、烷氧基、烯基、炔基、氨基、氨酰基、芳基、芳氧基、羧基、羧基烷基、氰基、卤基、硝基、杂芳基、三卤甲基等。优选的取代基包括：烷基、烷氧基、卤基、羧基、氰基、硝基、三卤甲基和硫代烷氧基。合适的环烯基实例例如包括：环丁-2-烯基、环戊-3-烯基、环辛-3-烯基等。这样的环烯基环例如包括：环戊烯、环己烯等。

“卤基”或“卤素”表示氟基、氯基、溴基和碘基，优选是氯基或溴基。

“杂芳基”表示这样的一价芳族碳环基：它具有2～8个碳原子，并且环内具有1～4个选自氧、氮和硫的杂原子。

除非另外受杂芳基取代基定义的约束，这样的杂芳基任选可被1～3个选自下列的取代基取代：烷基、取代烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、卤基、硝基、杂芳基、硫代烷氧基、硫代芳氧基等。这样的杂芳基可具有一个单环(例如吡啶基或呋喃基)或者多个稠合的环(例如中氮茚基或苯并噻吩基)。优选的杂芳基包括：吡啶基、吡咯基和呋喃基。

“杂环”或“杂环的”表示具有一个单环或多个稠合的环的一价饱和基或不饱和基：它具有1～8个碳原子，并且环内具有1～4个选自氮、硫或氧的杂原子。对本申请来说，术语“杂环”或“杂环的”不包括碳水化合物环(即单糖或寡糖)。

除非另外受杂环取代基定义的约束，这样的杂环基任选可被1～3个选自下列的取代基取代：烷基、取代烷基、亚烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、卤基、硝基、杂芳基、硫代烷氧基、硫代芳氧基等。这样的杂芳基可具有一个单环(例如吡咯烷基、哌啶基、吗啉基或四氢呋喃基)或多个稠合的环(例如二氢吲哚基)。

氮杂环和杂芳基的实例包括但不限于：吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、中氮茚、异吲哚、吲哚、吲唑、嘌啉、喹嗪、异喹啉、喹啉、2,3-二氮杂萘、萘基吡啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啉、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、异噻唑、吩嗪、异噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪、二氢吲哚等。

“硫羟”表示基-SH。

“硫烷基”表示基-S-烷基，其中，所述烷基同本文中的定义。

“硫(取代烷基)”表示基-S-(取代烷基)，其中，取代烷基同本文中的定义。

“硫环烷基”表示基-S-环烷基，其中，所述环烷基同本文中的定义。

“硫芳基”表示基芳基-S-，其中，所述芳基同本文中的定义，包括也是同本文中定义的、任选取代的芳基。

“硫杂芳基”表示基杂芳基-S-，其中，所述杂芳基同本文中的定义，包括也是同本文中定义的、任选取代的杂芳基。

“硫糖”表示任何已知的糖，特别是5～6元环的糖，例如哺乳动物的糖(例如，葡萄糖、果糖、蔗糖和甘露糖)和它们的衍生物，细菌的糖(例如，KDO和双脱氧糖)及其衍生物，以及环多醇(例如肌醇)和糖醇(例如，山梨糖醇、甘露糖醇、葡萄糖醇等)及其衍生物，其中，本文定义的糖在异头碳上具有一个取代基硫基，但环多醇例外，其中，任何羟基取代基都可被转化为硫羟取代基。

“硫代糖”表示本文定义的硫糖，其中，该硫糖可包含一个以上由硫键连接的糖单元。多个糖单元可以相同或不同。

在本发明中，硫代糖衍生物以共价键被连接到固体载体上。包含这样的硫代糖衍生物的固体载体优选包含一个连接臂，它将固体载体与硫代糖衍生物连接。希望所述连接臂是可解离的。

“寡糖”表示包含2～10个糖单元的化合物，其中，每个糖相对于所述寡糖中的其它糖被独立地选择。

术语“固体载体”表示具有刚性或半刚性表面的物质，它包含或者被衍生化而包含活性官能度，它以共价键将第一个糖或寡糖与所述表面连接。这样的物质是本领域熟知的，例如包括：二氧化硅，合成硅酸盐，生物源的硅酸盐，多孔玻璃，水凝胶，含硅酸盐的矿物，合成聚合物，聚苯乙烯，聚丙烯，聚丙烯酰胺，聚乙二醇，聚丙烯酰胺及其共聚物(包括聚苯乙烯/聚乙二醇的共聚物和聚丙烯酰胺/聚乙二醇的共聚物)等。

“可解离的连接臂”表示这样的连接臂：它们是化学基或共价键，它任选以共价键将硫糖或其衍生物连接到载体上。连接臂(它将化合物连接到固体载体上)的至少一个共价键可轻易通过特定的化学反应断裂，于是提供从所述固体载体脱离的二糖和寡糖。应选择用来破坏所述连接臂的共价键的化学反应，以致它们对键分裂是特异性的，从而防止在化合物的其它部位发生非预期的反应。应相对于将在固体载体上形成的寡糖的合成选择可解离的连接基，以便防止寡糖过早从固体载体上解离以及不干扰在载体上合成过程中应用的任何操作。合适的可解离连接臂是本领域熟知的，可包括这样的基，例如，三苯甲基氯、Ellman’s四氢吡喃基连接臂、硅连接臂等。可解离的连接臂实例也由Gallop等10描述了。方法

现在将参照上文的定义和附图1～4详细描述本发明的方法。

本发明可逆地被保护的羟基/硫羟化合物可从这样的原料制备：它们或者在本领域中容易获得，或者在本文被描述了(应用下述一般方法和操作步骤)。应懂得，其中，给出了典型的或优选的操作条件(即，反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)，其它操作条件也可应用(除非另有说明)。最佳反应条件可随应用的具体反应物或溶剂而定，但这样的条件可由本领域技术人员通过常规最佳化操作确定。

此外，本领域技术人员显而易见的是，除了本文描述的保护基之外，可能还有必要应用常规保护基来防止某些官能团遭受不希望的反应。各种官能团的合适的保护基以及用于具体官能团的保护和去保护的适当反应条件是本领域熟知的。例如，各种保护基由T.W.Greene和G.M.Wuts描述于“有机合成中的保护基”，第二版，Wiley,NewYork,1991，以及其中引用的文献9。

如上所述，本发明包括一种形成硫连接的二糖或寡糖的方法，该方法包括：将第一种糖或寡糖固定到固体载体上(其中，所述糖或寡糖在还原糖单元的异头碳原子上包含一个被护的硫羟基)，通过硫键将第二种糖或寡糖连接到第一种糖或寡糖上，以及任选从载体释放硫代二糖。

被固定到固体载体上的糖或寡糖在还原糖单元的异头碳上具有一个硫羟取代基。优选地，被连接到或固定到固体载体上的糖或寡糖在其羟基上未被保护。可在所述糖或寡糖上除还原糖的异头碳上硫羟基之外的任意取代基之间发生键合。优选地，糖上的键合位点是通过应用所述固体载体上的偶联官能度定向的，所述官能度优选与糖上的伯OH基(例如，6-羟基)反应。合适的官能度包括三苯甲基氯基(例如图1中描绘的)。

不管怎样，其它可解离的接头(或者实际上不能解离的接头)都可被用于将第一种糖或寡糖单元固定到固体载体上。可解离的接头是本领域已知的，例如Ellmans′s四氢吡喃基接头、硅接头等，以及不能解离的接头。其它可解离的连接基例如包括Gallop等在美国专利No.5,525,734中阐述的那些，它还描述了通过这样的可解离连接臂将化合物固定到固体载体上的方法。

所述固体载体可以是典型的聚苯乙烯树脂、衍生化硅酸盐或玻璃、PEG树脂、聚丙烯酰胺树脂、复合树脂等。优选地，所述固体载体是三苯甲基氯衍生化固体载体，它主要通过糖的伯OH基导致固定化(如图1中所示)。

第一种糖或寡糖基包括在还原糖单元的异头碳原子上具有一个硫羟基的种种糖或寡糖基的任一种。制备这样的糖或寡糖的实例是本领域已知的，例如描述于下列的那些：Ippolito等，国际专利申请公开No.WO 93/24506；以及Ippolito等，美国专利No.5,580,858,1996年12月3日发布的，这两篇文献都以它们的全文并入本文作参考。

优选地，第一种糖或寡糖的正位异构硫羟取代基在糖与所述固体载体的连接过程中被保护。正位异构硫羟的优选的保护基是不对称二硫化物，例如，R是硫甲基、硫乙基等。

第一种糖或寡糖与所述固体载体的连接是通过大量已知的偶联方法的任一种进行的。在某些情况下，通过应用糖或寡糖上合适的离去基促进第一种糖或寡糖与所述固体载体的连接。这样的离去基实例例如包括：各种磺酸酯基，例如甲苯磺酸酯基、甲磺酸酯基、对溴苯磺酸酯基、nosylate基；以及氟化磺酸酯基，例如三氟甲磺酸酯基、nonaflate基和tresylate基等。

一个辅助的活性官能度存在于所述固体载体上或者被引到其上，这个活性官能度与离去基反应而在糖与固体载体之间形成一个共价键。如上所述，这个键可以是可解离的或不能解离的键。

当在第一种糖或寡糖上应用离去基时，这些离去基优选通过不同地保护糖或寡糖的数个羟基而引入以便选择性地暴露单个羟基，然后通过本领域熟知的化学方法将该羟基转化为离去基。

一个与合适的羟基保护基或硫羟保护基的选择相关的重要问题在于，进行这些保护基的除去所需的反应条件必须与固相化学和分子的其余部分相容。

例如，如果要象通常的情况那样，在例如披钯碳的存在下通过氢化进行除去，苄基(人们熟知的羟基保护基)不适合与含硫化物的化合物和/或不饱和化合物一起应用。这样的不相容性起源于既定的事实，即，这样的硫族将使这些催化剂中毒，而且将使硫化物基还原成硫羟基，化合物中的任何不饱和结构也将通过这些除去条件被还原(不管该还原是否需要)。这种不相容性限定了这类保护基在包含硫羟官能度和/或不饱和度的化合物方面的应用。此外，当应用固相催化剂(例如披钯碳)时，固体载体上苄基的存在需要效率低的固相来进行固相去保护操作。

因此，在本文描述的方法中，应用于羟基、氨基和硫羟官能度的保护基团优选可通过溶液相试剂除去。一类这样的保护基团是邻位取代的和/或对位取代的苄基，它们被描述于美国专利申请系列No.60/_,_，以代理人案卷号No.026579-212与本文同时提出申请的、标题为“包含用于至少一个羟基和/或硫羟基的、邻位取代的或对位取代的苄基保护基的化合物”，该文以其全文并入本文作参考。在上述申请中描述的保护基例如包括：对-乙酰氧基苄基、对-甲氧基苄基等。在固相条件下可除去的其它合适的保护基例如包括：乙酸酯、氯乙酸酯、苯甲酸酯或其它酯，氨基甲酸乙酯或碳酸酯；甲硅烷基，包括三甲代甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基等；O-烯丙基，亚苄基，丙酮化合物，其它缩醛和缩酮等。还可应用光化学上可除去的硝基苄基。备选地(但更不优选)，第一种糖或寡糖硫醇以及第二种糖或寡糖还可包含氨基(它们可通过常规方法保护)。例如，固体载体上这些保护基的除去导致生成化合物7(图2)。

应用于本发明的糖是任意含硫羟的糖或寡糖，其中，硫羟取代优选在异头碳上。对糖化学改性而引入合适的取代基的方法是本领域熟知的。例如，参见，Ratcliffe等，美国专利No.5,079,353和J.Defaye等，“硫代寡糖：它们的合成和与酶的反应，”于《天然产品化学研究》(Studies in Natural Products Chemistry),Vol.8,pp.315～357，Elsevier Sciences Publishers(1991)中。例如，1-硫代糖可这样制备：将糖与酰化剂反应而将全部羟基转化为酰基。再通过与过量的硫羟乙酸反应将1-酰基选择性地转化为1-硫代乙酰基。然后水解而提供1-硫代糖。

备选地，选择性保护糖的羟基而提供一个或多个游离羟基，该游离羟基可通过本领域熟知的常规化学方法被转化为合适的离去基(例如甲磺酰基或卤基)。这样的离去基就可被置换而提供相应的硫羟基。例如，参见国际专利申请系列No.PCT/CA92/00242。具体地说，在羟基之一上选择性地引入一个甲磺酰基，再与硫代乙酰基(例如硫代乙酸钾)反应而提供相应的硫代乙酸酯衍生物。用弱碱处理该化合物而提供相应的硫羟基。

在连接到固体载体上之后，硫代糖上的游离硫羟基可通过固定化的硫代糖(化合物2，图1)与还原剂[例如DTT(二硫苏糖醇)，不过，可应用本领域已知的许多其它的还原剂]的反应产生。然后，所述游离硫羟基(化合物3，图1)就可通过本领域普通技术人员已知的任何合适的碱脱质子化而增大它的亲核性。优选的碱是甲醇钠(它产生糖的硫醇钠)，不过，可应用任何合适的碱。硫羟的亲核性可通过添加金属络合剂被进一步加强，金属络合剂例如有：18-冠-6、15-冠-5，或者本领域已知的任何其它金属络合剂(例如cryptofix)。还可应用其它反离子，例如Li、K(有或没有其它配位物质)和铵离子或烷基铵离子。生成的固定化物质(化合物4，图1)反应活性很高。

将固定化硫醇钠(化合物4，图1和2)与具有一个离去基(该离去基在S_N2反应中有活性)的糖(例如，化合物5，图2)或寡糖衍生物反应。净结果是所述硫醇盐的烷基化(糖加成)而提供二糖或寡糖(例如，化合物6，图2)。糖或寡糖(例如，化合物5)上优选的离去基是三氟甲基磺酸酯(triflate,Tf)基。可应用的其它离去基包括但不限于：甲磺酸酯、对-甲苯磺酸酯、咪唑基磺酸酯和本领域已知的其它磺酸酯衍生物，以及卤基(例如碘基、溴基和氯基)。还可在添加的糖上就地产生离去基，例如通过Mitsonobu反应或导致生成磷鎓离去基的PPh₃/CCl₄。还有其它能使固定化糖硫醇盐烷基化的糖衍生物，包括糖环氧化物(其中，在糖环或acylclic侧链上存在环氧化物)。还可应用环状磺基二酯或磺基酯酰胺。糖或寡糖的一些适用的离去基被收集于图3中。

在优选的实施方案中，固定化糖硫醇没有羟基保护基，而携带离去基的糖被这样的基保护，即，一旦糖与固体载体上的固定化糖结合，它们就可被除去。这样的保护基包括可通过溶液相试剂(例如上文列举的那些)除去的那些。备选地(但更不优选)，所述固定化糖可具有这些相同的保护基。固定化硫代糖和添加的糖都还可含有氨基(它们可被标准保护基保护或未被保护)。固体载体上这些保护基的除去导致生成图2的化合物7。

当将硫连接的糖与固体载体结合时，不需除去保护基。然而，在该步骤除去保护基能实现高纯度的终产品而很少损失或不损失产率。

当应用可解离的接头时，可从固体载体解离而获得最终的硫连接的二糖和寡糖(例如，化合物8)。相对于可解离的接头选择解离条件，而这样的条件是本领域熟知的。例如，三苯甲基结合的二糖的解离是在标准的酸性条件(例如，TFA，图2)下实现的。解离的二糖或寡糖可被直接用于生物研究而不用纯化，或者在通过色谱法(流过C-18二氧化硅)或离子交换等简单纯化后被应用。

本发明的方法不限于单糖或寡糖加成反应，而是通过选择合适的第二种糖或寡糖可导致很多加成反应(如图4中阐述的那样)。具体地说，如果将糖加到自身含被护的硫羟的固定化糖或寡糖(例如，化合物9，图4)中，可重复反应而产生更长的寡糖例如三糖(化合物10，图4)。

此外，最终的寡糖可在从固体载体上解离之前被常用于赋予寡糖和硫代寡糖(11)效用的基标记，例如，荧光标记(丹酰、若丹明等)，生物素，放射标记的物质，用于微束形成的脂质，增强细胞摄取的结构等。当希望生成的产品被用于酶抑制研究、细胞结合研究、靶向研究等时，这特别适用。

如下实施例阐述了本发明的典型反应方案，但无论如何不能被认为限制本发明的范围。本领域技术人员将认识到合适的备选原料和条件(通过它们可实现本发明的目的)。除非另外说明，所有的温度都是摄氏度。

实施例

在如下实施例中，下列缩写具有如下含义。如果某个缩写未被定义，它具有其通常被认可的含义。

 =埃

bd =宽双峰

bs =宽单峰

d =双峰

dd =一对双峰

ddd =一对双峰的双峰

DMAP =二甲氨基吡啶

DTT =二硫苏糖醇

DVB =二乙烯基苯

g =克

h =小时

L =升

m =多重峰

M =摩尔

mg =毫克

min =分钟

mL =毫升

mmol =毫摩尔

q =四重峰

s =单峰

t =三重峰

TFA =三氟乙酸

THF =四氢呋喃

μL =微升

μmol =微摩尔硫代寡糖的固相合成

如下系列反应显示了硫连接的糖的逐步形成(包括起始反应物的形成)。关于四种独立的化合物阐述了反应。本领域技术人员应当能应用这些实施例和适合选定的试剂和所需终产品的变化的反应条件形成其它化合物。1．作为不对称二硫化物的游离硫羟的保护

下文阐述了下列化合物的形成：

乙基2,3,4,6-四-O-乙酰-1-二硫-β-D-吡喃半乳糖苷(A-1)；

乙基2,3,4,6-四-O-乙酰-1-二硫-β-D-吡喃葡萄糖苷(A-2)；

乙基2-乙酰氨基-3,4,6-三-O-乙酰-2-脱氧-1-二硫-β-D-吡喃葡

萄糖苷(A-3)；以及

甲基5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰-3,5-二脱氧-D-甘油基

-α-D-半乳糖-2-nonulopyranosylonate-二硫乙基(A-4)。

A．化合物A-1的制备：

将2,3,4,6-四-O-乙酰-1-硫S-乙酰-β-D-吡喃半乳糖苷[B.Rajanikanth等，四面体通讯(Tetrahedron Lett.),28:20,pp.2295～2296(1987)](557mg,1.37mmol)溶于甲醇(15mL)和二氯甲烷(5mL)的混合物。冷却到-40℃后，添加甲醇的甲醇钠(1.5mL,1.5mmol)。在-40℃下1h后，添加离子交换树脂[IR-120(H⁺形式)]，使反应混合物暖至室温。过滤后，真空蒸发滤液。将残余物溶于二氯甲烷(14mL)，添加二乙基-N-乙基-次磺酰基-1,2-亚肼基二羧酸酯(360mg,2.0mmol)，在室温下搅拌。10min后，浓缩溶液而提供残余物，通过柱色谱法(SiO₂，己烷/乙酸乙酯2∶1)纯化而提供化合物A-1(580mg,100％)(无色无定形物质)。Rf=0.27(己烷/乙酸乙酯2∶1)。

¹H-NMR(360-MHz,CDCl₃):δ=1.30(dd,3H,J=7.4Hz,CH₃),1.96,2.02,2.03,2.13(4s,12H,4COCH₃),2.79(ddd,2H,J=7.0Hz,J=7.4,J=1.3,SCH₂),3.94(ddd,1H,J_4,5=1.0Hz,J_5,6a=6.6,J_5,6b=7.6,5-H),4.10(ddd,2H,6a-H,6b-H),4.51(d,1H,J_1,2=10.0Hz,1-H),5.05(dd,1H,J_2,3=10.0Hz,J_3,4=3.30Hz,3-H),5.38(dd,1H,J_1,2=10.0Hz,J_2,3=10.0,2-H),5.40(dd,1H,J_3,4=3.3Hz,J_4,5=1.0,4-H)；m/z关于C₁₆H₂₄O₉S₂(M+Na)的计算值447.1，实测值447.0。

C₁₆H₂₄O₉S₂(424.49)B．化合物A-2的制备：

按制备化合物A-1中应用的方法从2,3,4,6-四-O-乙酰-1-硫-S-乙酰-β-D-吡喃葡萄糖苷[J.Defaye等，碳水化合物研究，130,317～321(1984)]制备了化合物A-2。

¹H-NMR(360-MHz,CDCl₃):δ=1.28(t,3H,J=7.36Hz,CH₃),1.98,2.00,2.01,2.04(4s,12H,4COCH₃),2.77(m,2H,SCH₂),3.70(m,1H,5-H),4.12(dd,1H,J_5,6=2.5Hz,J_6,6=12.4,6-H_a),4.19(dd,J_5,6=4.8Hz,J_6,6=12.4,6-H_b),4.49(m,1H,1-H),5.07(m,1H,2-H),5.21(m,2H,3-H,4-H).

C₁₆H₂₄O₉S₂(424.49)C．化合物A-3的制备：

按制备化合物A-1中应用的方法从2-乙酰氨基-3,4,6-三-O-乙酰-2-脱氧-1-硫-S-乙酰-β-D-吡喃葡萄糖苷[D.Zanini等，四面体通讯，36:41,pp.7383～7386(1995)]制备了化合物A-3。

¹NMR(360MHz,CDCl₃):δ1.29(t,3H,J=7.3Hz,CH₃),1.92,2.01,2.02,2.05(4s,12H,4COCH₃),2.79(q,2H,J=7.3Hz,SCH₂),3.71(m,1H),4.16(m,3H),5.06,5.26(2 dd,2H,J=10.3Hz,J=9.7),5.54(d,1H,J=5.5Hz,NH).

C₁₆H₂₅O₈NS₂(423.51)D．化合物A-4的制备：

按制备化合物A-1中应用的方法从5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰-3,5-二脱氧-2-硫-S-乙酰-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulopyranosylonate[A.Hasegawa等，碳水化合物化学杂志(J.Carbohvdr.Chem.),5:11～19(1986)]制备了化合物A-4。

¹NMR(360MHz,CDCl₃):δ=1.30(t,3H,J=7.3Hz,CH₃),1.87,2.03,2.04,2.11,2.12(5s,15H,5COCH₃),2.25(dd,1H,3-H_c),2.80(m,2H,SCH₂),3.79(s,3H,COOMe),3.89-4.19(m,3H,5-H,6-H,9a-H),4.36(m,1H,9-H_b),4.87(m,1H,4-H),5.15(d,1H,J=8.9Hz,NH),5.29(m,2H,7-H,8-H).

C₂₂H₃₃O₁₂NS₂(567.64)2．A-1、A-2、A-3、A-4的脱乙酰化：

下文阐述了下列化合物的形成：

乙基1-二硫-β-D-吡喃半乳糖苷(1a)；

乙基1-二硫-β-D-吡喃葡萄糖苷(1b)；

乙基2-乙酰氨基-2-脱氧-1-二硫-β-D-吡喃葡萄糖苷(1c)；以及

甲基-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-

nonulopyranosylonate-二硫乙基(1d)。A．化合物1a的制备：

将化合物A-1(500mg,1.18mmol)溶于无水甲醇(10mL),用甲醇的甲醇钠(1M,150μL)处理。4h后，用Amberlite IR-120(H⁺)树脂中和溶液，过滤，浓缩。获得化合物1a无色无定形物质(300mg,100％)。

Rf=0.35(二氯甲烷/甲醇5∶1)

¹NMR(360MHz,CD₃OD):δ=1.30(t,3H,J=7.34Hz,CH₃),2.83(m,2H,SCH₂),3.49(dd,1H,J_5,6=3.3Hz,J_6,6=9.3,6-H₂),3.51-3.71(m,3H,3-H,5-H,6-H_b),3.75(dd,1H,J_1,2=9.6Hz,J_2,3=9.4,2-H),3.88(m,1H,4-H),4.31(d,1H,J_1,2=9.6Hz,1-H).

C₈H₁₆O₅S₂(256.34)B．化合物1b的制备：

化合物1b是按制备化合物1a的方法制备的。

¹NMR(360MHz,CD₃OD):δ=1.31(t,3H,J=7.4Hz,CH₃),2.83(q,2H,J=7.4Hz,SCH₂),3.28-3.41(m,3H),3.47(dd,1H),3.64(m,1H),3.86(dd,1H,J=1.5Hz,J=11.5),4.32(d,1H,J_1,2=9.4Hz,1-H).

C₈H₁₆O₅S₂(256.34)C．化合物1c的制备：

化合物1c是按制备化合物1a的方法制备的。

¹H-NMR(360-MHz,CD₃OD):δ=1.28(t,3H,CH₃),1.95(s,3H,NCOCH₃),2.82(m,2H,SCH₂),3.26-3.35(m,2H,4-H,5-H),3.46(dd,1H,J_2,3=10.2Hz,J_3,4=8.5,3-H),3.66(dd,1H,J_5,6=5.3Hz,J_6,6=12.0,6-H_a),3.81(dd,J_1,2=10.4Hz,J_2,3=10.2,2-H),3.86(dd,J_5.6=2.0Hz,J_6,6=12.0,6-H_b),4.52(d,1H,J_1,2=10.4Hz,1-H).

C₁₀H₁₉NO₅S₂(297.40)D．化合物1d的制备：

化合物1d是按制备化合物1a的方法制备的。

¹NMR(360MHz,CD₃OD):δ=1.28(t,3H,J=7.4Hz,CH₃),2.76(m,1H,3-H_a),2.81(m,2H,SCH₂),3.47-3.83(m,7H,4-H,5-H,6-H,7-H,8-H,9-H),3.83(s,3H,COOCH₃).

C₁₄H₂₁NO₈S₂(395.46)3．1a、1b、1c、1d与固体载体(例如三苯甲基氯树脂)的偶联：

下文阐述了下列化合物的形成：

乙基1-二硫-6-三苯甲基-聚合物-β-D-吡喃半乳糖苷(2a)；

乙基1-二硫-6-三苯甲基-聚合物-β-D-吡喃葡萄糖苷(2b)；

乙基2-乙酰氨基-2-脱氧-1-二硫-6-三苯甲基-聚合物-β-D-吡喃

葡萄糖苷(2c)；以及

甲基5-乙酰氨基-2-二硫-3,5-二脱氧-6-三苯甲基-聚合物D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulopyranosylonate(2d)。

A．化合物2a的制备：

将化合物1a(200mg,780μmol)溶于无水吡啶(8mL)。添加三苯甲基氯树脂(1g,950mmol三苯甲基氯树脂，装载0.95mmol/g活性氯，聚合物基质：共聚苯乙烯，1％DVB,200～400目，Novabiochem)和DMAP(5mg)，在60℃下将混合物加热24h。冷却到室温后，添加甲醇(500μL),1h后，滤出树脂，依次用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷(各10mL，整个循环重复两次)洗涤，高真空干燥。通过元素分析(硫含量)测定树脂上糖的载荷，为0.43mmol/g。B～D．化合物2b、2c、2d的制备：

按制备化合物2a的方法制备了化合物2b～2d。4．在树脂上产生游离硫羟：

下文阐述了下列化合物的形成：

1-硫-6-三苯甲基-聚合物-β-D-吡喃半乳糖苷(3a)；

1-硫-6-三苯甲基-聚合物-β-D-吡喃葡萄糖苷(3b)；

2-乙酰氨基-2-脱氧-1-硫-6-三苯甲基-聚合物-β-D-吡喃葡萄糖

苷(3c)；以及

甲基5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫-6-三苯甲基-聚合物-D-甘油

基-α-D-半乳糖-2-nonulopyranosylonate(3d)。A．化合物3a的制备：

将树脂2a(50mg)在无水四氢呋喃(2mL)中溶胀。添加无水甲醇(300μL)、二硫苏糖醇(74mg)和三乙胺(180μL)。在室温下将混合物振荡10h。滤出树脂，依次用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷(各2mL，整个循环重复两次)洗涤，高真空干燥。

IR(珠状物)：SH伸缩：2565cm^-1。B～D．化合物3b、3c、3d的制备：

按制备化合物3a的方法制备了化合物3b～3d。5．在树脂上产生硫醇钠：

下文阐述了下列化合物的形成：

1-硫醇钠-6-三苯甲基-聚合物-β-D-吡喃半乳糖苷(4a)；

1-硫醇钠-6-三苯甲基-聚合物-β-D-吡喃葡萄糖苷(4b)；

1-硫醇钠-6-三苯甲基-聚合物-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡

萄糖苷(4c)；以及

甲基5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫醇钠-9-三苯甲基-聚合物-D-

甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulopyranosylonate(4d)。A．化合物4a的制备：

将树脂3a(50mg)在四氢呋喃(2mL)中溶胀达10min。添加甲醇的甲醇钠(1M,150μL)。在室温下振荡树脂。2h后，滤出树脂，依次用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷(各2mL，整个循环重复两次)洗涤，高真空干燥。B～D．化合物4b、4c、4d的制备：

按制备化合物4a的方法制备了化合物4b～4d。6．固定化碳水化合物硫醇钠与具有离去基的衍生物的反应A．1,2,3,4-二异亚丙基-6-O-三氟甲磺酰(trifluoromethanesulfono)

-α-D-吡喃半乳糖苷的实例下文阐述了下列化合物的形成：

异丙基O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→6)-2,3,4-三-O-异亚丙基

-D-D-吡喃半乳糖苷(5-B-C-1)；

异丙基O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-2,3,4-三-O-异亚丙基

-β-D-吡喃半乳糖苷(5-B-C-2)；

异丙基O-β-D-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→

6)-2,3,4-三-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖苷(5-B-C-3)；以及

异丙基O-(5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-

nonulopyranosylonate-(2→6)-2,3,4-三-O-异亚丙基-β-D-

吡喃半乳糖苷(5-B-C-4)。

a．化合物5-B-C-1的制备：

将树脂4a(50mg)在THF(1mL)中溶胀达10min。添加冠醚15-冠-5(3滴)和1,2,3,4-二异亚丙基-6-O-三氟甲磺酰-α-D-吡喃半乳糖苷(50mg)，将混合物在室温下振荡10h。滤出树脂，依次用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷(各2mL，整个循环重复两次)洗涤。用2％TFA在二氯甲烷中处理树脂达10min。过滤后，添加甲苯，浓缩滤液，与甲苯一起蒸发两次。柱色谱法处理(SiO₂，二氯甲烷/甲醇9∶1)后，获得化合物5-B-C-1。

¹NMR(360MHZ,CD₃OD):δ=1.32,1.34,1.39,1.51(4s,12H,4CH₃),2.84(dd,1H,J_5,6=7.4Hz,J_6,6=13.7,6a-H_a),2.92(dd,1H,J_5,6=6.6Hz,J_6,6=13.7,6a-H_b),3.27-3.88(m,5H,2b-H,3b-H,4b-H,5b-H,6b-H),3.96(m,1H,5a-H),4.33(dd,1H,J_1,2=5.4Hz,J_2,3=2.4,2a-H),4.35(d,1H,J_1,2=9.7Hz,1b-H),4.46(dd,1H,J_3,4=7.9Hz,J_4,5=1.8,4A-H),4.62(dd,1H,J_2,3=2.4Hz,J_3,4=7.9,3a-H),5.45(d,1H,J_1,2=5.0Hz,1a-H).

C₁₈H₃₀O₁₀S(438.49)b．化合物5-B-C-2的制备：

按制备化合物5-B-C-1的方法制备了化合物5-B-C-2。

¹H NMR(360-MHz,CD₃OD):δ=1.32,1.34,1.40,1.51(4s,12H,4CH₃),2.83(dd,1H,J_5,6=7.5Hz,J_6,6-13.7,6a-H_a),2.92(dd,1H,J_5,6=6.5Hz,J_6,6=13.7,6a-H_b),3.19(dd,1H,J_1,2=9.6Hz,J_2,3=8.6,2b-H),2.25-3.35(m,3H,3b-H,6b-H),3.65(m,1H,4b-H),3.85(m,1H,5b-H),3.96(m,1H,5a-H),4.33(dd,1H,J_1,2=5.4Hz,J_2,3=2.4,2a-H),4.40(d,1H,J_1,2=9.6Hz,1b-H),4.48(dd,1H,J_3,4=7.9Hz,J_4,5=1.8,4a-H),4.63(dd,1H,J_2,3=2.4Hz,J_3,4=7.9,3a-H),5.45(d,1H,J_1,2=5.0Hz,1a-H).

C₁₈H₃₀O₁₀S(438.49)c．化合物5-B-C-3的制备：

按制备化合物5-B-C-1的方法制备了化合物5-B-C-3。

¹H-NMR(360-MHz,CD₃OD):δ=1.32,1.33,1.39,1.51(4s,12H,4CH₃),1.97(s,3H,NCOCH₃),2.78(dd,1H,J_5,6=6.3Hz,J_6,6=13.6,6a-H_b),2.94(dd,1H,J_5,6=6.3Hz,J_6,6=13.6,6a-H_a),3.29(m,1H,4b-H),3.42(dd,1H,J_2,3=9.7Hz,J_3,4=8.4,3b-H),3.65(m,2H,5b-H,6b-H_a),3.73(dd,1H,J_1,2=10.3Hz,J_2,3=9.7,2b-H),3.86(dd,1 H,J_5,6=2.0Hz,J_6,6=12.0,6b-H_b),3.93(m,1H,5a-H),4.32(d1,1H,J_1,2=5.0Hz,J_2,3=2.4,2a-H),4.38(dd,1H,J_3,4=7.9Hz,J_4,5=1.8,4a-H),4.55(d,1H,J_1,2=10.3Hz,1b-H),4.62(dd,1H,J_2,3=2.4Hz,J_3,4=7.9,3a-H),5.45(d,1H,J_1,2=5.0Hz,1a-H).

C₂₀H₃₃O₁₀S(465.53)d．化合物5-B-C-4的制备：

按制备化合物5-B-C-1的方法制备了化合物5-B-C-4。

¹H-NMR(360-MHz,CD₃OD):δ=1.31,1.33,1.39,1.49(4s,12H,4CH₃),1.80(dd,1H,J_3a,4=11.3Hz,J_3a,3c=12.8,3b-H_a),1.98(s,3H,NCOCH₃),2.75(dd,1H,J_3c,4=4.6Hz,J_3c,3a=12.8,3b-H_c),2.92(m,2H,6a-H),3.67(s,3H,COOCH₃),3.43-3.86(n,8H,4b-H,5a-H,5b-H,6b-H,7b-H,8b-H,29b-H),4.23(dd,1H,J_3.4=7.9Hz,J_4,5=1.9,4a-H),4.31(dd,1H,J_1,2=5.0Hz,J_2,3=2.4,2a-H),4.61(dd,1H,J_2.3=2.4Hz,J_3,4=7.9,3a-H),5.42(d,1H,J_1,2=5.0Hz,1a-H).

C₂₄H₃₉O₁₃S(567.62)B．正辛基2,3,6-三-O-苯甲酰-4-O-三氟甲磺酰-β-D-吡喃葡萄糖苷

的实例下文阐述了下列化合物的形成：

辛基O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(8-C-1)；

辛基O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(8-C-2)；

辛基O-β-D-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→

4)-β-D-吡喃半乳糖苷(8-C-3)；以及

辛基O-甲基-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-

nonulopyranosylonate-(2→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(8-C-4)。a．化合物8-C-1的制备：

将树脂4a(50mg)在四氢呋喃(1mL)中溶胀达10min。添加冠醚15-冠-5(3滴)和正辛基-2,3,6-三-O-苯甲酰-4-O-三氟甲磺酰-β-D-吡喃葡萄糖苷(50mg)，将混合物在室温下振荡10h。

滤出树脂，依次用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷(各2mL，整个循环重复两次)洗涤。将树脂在四氢呋喃(2mL)中溶胀达10min，添加甲醇的甲醇钠(1M,300μL)，在室温下振荡树脂。12h后，滤出树脂，依次用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷(各2mL，整个循环重复两次)洗涤。

用2％TFA在二氯甲烷中处理树脂达10min。过滤后，添加甲苯，浓缩滤液，与甲苯/甲醇蒸发两次。

¹H-NMR(360-MHz,CD₃OD):δ=0.89(m,3H,CH₃),1.29(m,10H，辛基),1.59(m,2H,OCH,CH₂),3.43-4.02(m,14H,22-H,23-H,24-H,25-H,26-H,OCH₂CH₂),4.18(d,1H,J_1,2=7.6Hz,1b-H),4.42(d,1H,J_1,2=9.6Hz,1a-H).

C₂₀H₃₈O₉S(454.58)b．化合物8-C-2的制备：

化合物8-C-2是按制备化合物8-C-1的方法制备的。

¹H-NMR(360-MHz,CD₃OD):δ=0.89(m,3H,CH₃),1.28(m,10H，辛基),1.59(m,2H,OCH₂CH₂),3.18-4.02(m,14H,22-H,23-H,24-H,25-H,26-H,OCH₂CH₂),4.18(d,1H,J_1,2=7.6Hz,1a-H),4.48(d,1H,J_1,2=9.7Hz,1b-H).

C₂₀H₃₈O₉S(454.58)c．化合物8-C-3的制备：

化合物8-C-3是按制备化合物8-C-1的方法制备的。

¹H-NMR(360-MHz,CD₃OD):δ=O.89(m,3H,CH₃),1.29(m,10H，辛基),1.57(m,2H,OCH₂CH₂),1.99(s,3H,NCOCH₃),3.26-3.98(m,14H,22-H,23-H,24-H,25-H,26-H,OCH₂CH₂),4.16(d,1H,J_1,2=7.6Hz,1a-H),4.70(d,1H,J_1,2=10.4Hz,1b-H).

C₂₂H₄₁NO₉S(495.63)d．化合物8-C-4的制备：

化合物8-C-4是按制备化合物8-C-1的方法制备的。

¹H-NMR(360-MHz,CD₃OD):δ=0.88(m,3H,CH₃),1.28(m,10H，辛基),1.56(m,2H,OCH₂CH₂),1.99(s,3H,NCOCH₃),1.79(dd,1H,J_3a,4=11.3Hz,J_3a,3e=12.8,3b-H_a),1.97(s,3H,NCOCH₃),2.75(dd,1H,J_3e,4=4.6Hz,J_3e,3a=12.8,3b-H_e),3.67(s,3H,COOCH₃),3.20-4.00(m,15H,2a-H,3A-H,24-H,25-H,36-H,7b-H,8b-H,29b-H,OCH₂CH₂),4.20(d,1H,J_1,2=7.6Hz,1a-H).

C₂₆H₄₇NO₁₃S(613.73)7．8-甲氧基羰基辛基O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰

-6-O-苯甲酰-β-D-吡喃葡萄糖苷(6-A-C)的制备

将树脂4a(50mg)在四氢呋喃(1mL)中溶胀达10min。添加冠醚15-冠-5(3滴)和8-甲氧基羰基辛基正辛基-2,3-二-O-乙酰-6-O-苯甲酰-4-O-三氟甲磺酰-β-D-吡喃葡萄糖苷5-A(50mg)，将混合物在室温下振荡10h。

滤出树脂，依次用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷(各2mL，整个循环重复两次)洗涤。用2％TFA在二氯甲烷中处理树脂达10min。过滤后，添加甲苯，浓缩滤液，与甲苯/甲醇蒸发两次。将残余物在SiO₂上纯化[二氯甲烷/甲醇(15∶1→12∶1)]而给出标题化合物(6-A-C)。

¹H-NMR(360-MHz,CD₃OD):δ=1.17(m,8H,4CH₂),1.49(m,4H,2CH₂),1.97,2.05(2s,6H,2CH₃CO),2.26(dd,1H,J_3,4=11.1Hz,J_4,5=11.1,4a-H),3.28-3.85(m,8 H,2b-H,3b-H,4b-H,5b-H,6b-H,OCH₂),3.58(s,3H,COOCH₃),4.31(d,1H,J_1,2=9.5Hz,1b-H),4.44(d,1H,J_1,2=8.0Hz,1a-H),4.51(dd,1H,J_5,6=6.4Hz,J_6,8=12.0,6a-H_a),4.85(dd,J_1,2=8.0Hz,J_2,3=9.2,2a-H),4.91(dd,1H,J_5,6=2.1Hz,J_6,6=12.0,6a-H_b),5.08(dd,J_2,3=9.2Hz,J_3,4=11.1,3a-H),7.38,7.51,7.96(m,5H,Ph).

C₃₃H₄₈O₁₅S₂(748.85)8．乙基4,6-O-亚苄基-1-二硫-β-D-吡喃半乳糖苷9a的制备

将化合物1a(1.456g,5.68mmol)悬浮于无水乙腈(50mL)中。添加苯甲醛缩二甲醇(1.3mL,8.66mmol)和对-甲苯磺酸(10mg)。1h后，添加三乙胺(0.5mL)，真空蒸发清亮的溶液。将残余物在SiO₂上纯化[甲苯/乙酸乙酯(1∶1→1∶2)]而给出标题化合物9a无色无定形物质，将它从乙酸乙酯/己烷中结晶(1.82g,93％)。

¹H-NMR(360-MHz,CDCl₃):δ=1.31(t,3H,J=7.4Hz,CH₃),2.48(bs,

2H,OH),2.83-3.01(m,2H,SCH₂),3.52(m,1H,5-H),3.76(dd,1H,J_2,3=9.1

Hz,J_3,4=3.6,3-H),4.01(m,1H,6-H_a),4.21-4.27(m,3H,2-H,4-H,6-H_b),4.35

(d,1H,J_1,2=9.1Hz,1-H),5.52(d,1H,CHPh),7.34-7.49(m,5H,Ph).

C₁₅H₂₀O₅S₂(344.45)9．乙基2,3-二-O-苯甲酰-4,6-O-亚苄基-1-二硫β-D-吡喃半乳糖苷9b的制备

将化合物9a(1.175g,3.41mmol)溶于无水二氯甲烷(20mL)和无水吡啶(2mL)中。冷却到0℃后，添加苯甲酰氯(1.6mL,13.78mmol)。2h后，用二氯甲烷稀释反应混合物，倾入冰水中。分离有机相，用水洗涤。用硫酸镁干燥有机层，过滤，真空蒸发。将残余物在SiO₂上纯化[己烷/乙酸乙酯(4∶1→5∶2)]而给出标题化合物9b无色无定形物质，将它从乙酸乙酯/己烷中结晶(1.72g,91％)。

¹H-NMR(360-MHz,CDCl₃):δ=1.24(t,3H,J=7.4Hz,CH₃),2.85-2.97(m,2H,SCH₂),3.73(m,1H,5-H),4.07(dd,1H,J_5,6=1.6Hz,J_6,6=12.4,6-H_a),4.34(dd,1H,J_5,6=1.6Hz,J_6,6=12.4,6-H_b),4.61(m,1H,4-H),4.78(d,1H,J_1,2=9.6Hz,1-H),5.41(dd,1H,J_2,3=10.0Hz,J_3,4=3.4,3-H),5.52(d,1H,CHPh),6.27(dd,1H,J_1,2=9.6Hz,J_2,3=10.0,2-H),7.31-7.98(m,15H,3Ph).

C₂₉H₂₈O₇S₂(552.67)10．乙基2,3-二-0-苯甲酰-1-二硫-β-D-吡喃半乳糖苷9c的制备

将化合物9b(1.5g,2.71mmol)溶于无水二氯甲烷(40mL)。添加乙硫醇(1.5mL,78.2mmol)和对-甲苯磺酸(30mg)。在室温下搅拌1h后，添加三乙胺(0.5mL)，真空蒸发反应混合物。将残余物在SiO₂上纯化[甲苯/乙酸乙酯(3∶1→2∶1)]。获得化合物9c无色无定形物质，将它从乙酸乙酯/己烷中结晶(1.13g,90％)。

¹H-NMR(360-MHz,CDCl₃):δ=1.26(t,3H,J=7.3Hz,CH₃),1.95(bs,2H,OH),2.79(q,2H,J=7.3Hz,SCH₂),3.85(m,1H,5-H),3.96(m,2H,6-H),4.42(m,1H,4-H),4.75(d,1H,J_1,2=9.8Hz,1-H),5.34(dd,1H,J_2,3=9.9Hz,J_3,4=3.0,3-H),5.99(dd,1H,J_1,2=9.8Hz,J_2,3=9.9,2-H),7.33-7.97(m,10H,2Ph).

C₂₂H₂₄O₇S₂(464.56)11．乙基2,3,6-三-O-苯甲酰-1-二硫-β-D-吡喃半乳糖苷9d的制备

将化合物9c(800mg,1.72mmol)溶于无水二氯甲烷(20mL)和无水吡啶(1.8mL)中。冷却到-40℃后，添加苯甲酰氯(220μL,1.89mmol)。在-40℃下2h后，添加甲醇(200μL)，用二氯甲烷稀释反应混合物，倾入冰水中。分离有机相，用水洗涤。用硫酸镁干燥有机层，过滤，真空蒸发。将残余物在SiO₂上纯化[己烷/乙酸乙酯(4∶1→3∶1)]而给出标题化合物9d无色无定形物质，将它从乙酸乙酯/己烷中结晶(871mg,89％)。

¹H-NMR(360-MHz,CDCl₃):δ=1.24(t,3H,J=7.3Hz,CH₃),2.49(bd,1H,4-OH),2.80(q,2H,J=7.3Hz,SCH₂),4.12(m,1H,5-H),4.38(m,1H,4-H),4.58(dd,1H,J_5,6=6.2Hz,J_6,6=11.5,6-H_a),4.64(dd,1H,J_5,6=6.2Hz,J_6,6=11.5,6-H_b),4.77(d,1H,J_1,2=9.9Hz,1-H),5.40(dd,1H,J_2,3=9.9Hz,J_3,4=3.1,3-H),5.98(dd,1H,J_1,2=9.9Hz,J_2,3=9.9,2-H),7.33-8.05(m,15H,3Ph).

C₂₉H₂₈O₈S₂(568.67)12．乙基2,3,6-三-O-苯甲酰-1-二硫-4-0-三氟甲磺酰-β-D-吡喃半

乳糖苷9e的制备

将化合物9d(500mg,1.06mmol)溶于无水二氯甲烷(20mL)和无水吡啶(2.3mL)中。冷却到0℃后，添加三氟甲磺酸酐(1.6mL,9.51mmol)。在0℃下30min和在室温下1h后，用二氯甲烷(20ml)稀释反应混合物，用饱和碳酸氢钠洗涤(2次各10mL)。分离有机相，用水洗涤。用硫酸镁干燥有机层，过滤，真空蒸发。将固体残余物直接应用而未进一步纯化。13．乙基1-二硫-β-D-吡喃葡萄糖基-(1-4)-β-D-吡喃葡萄糖苷

9A-2-C的制备

将树脂4b(50mg)在四氢呋喃(2mL)中溶胀达10min。添加冠醚15-冠-5(3滴)和乙基2,3,6-三-O-苯甲酰-1-二硫-O-三氟甲磺酰-β-D-吡喃半乳糖苷(9)(50mg)，将混合物在室温下振荡10h。

滤出树脂，依次用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷(各2mL，整个循环重复两次)洗涤。将树脂在四氢呋喃(2mL)中溶胀达10min，添加甲醇的甲醇钠(1M,300μL)，将树脂在室温下振荡。12h后，滤出树脂，依次用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷(各2mL，整个循环重复两次)洗涤。

用2％TFA在二氯甲烷中(1mL)处理树脂达10min。过滤后，用甲醇和二氯甲烷(各2mL)洗涤树脂，再用2％TFA处理和如上述那样洗涤。添加甲苯(2mL)，浓缩滤液，与甲苯蒸发两次。将残余物溶于甲醇(2mL)，通过0.22μm过滤器装置(Millipore filter)。浓缩滤液，再次溶于2mL水。冻干而给出标题化合物9A-2-C无色无定形粉末。

¹H-NMR(360-MHz,CD₃OD):δ=1.30(t,3H,J=7.3Hz,CH₃),2.83(q,2H,J=7.3HzSCH₂),3.26-3.89(m,12H,22-H,23-H,24-H,25-H,26-H),4.31(d,1H,J_1,2=9.3Hz,1b-H),4.40(d,1H,J_1,2=9.5Hz,1a-H).

C₁₄H₂₆O₉S₃(434.55)14．乙基1-二硫-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1

→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷10-B的制备

将树脂9A-4(50mg)在四氢呋喃(2mL)中溶胀达10min。添加冠醚15-冠-5(3滴)和乙基2,3,6-三-O-苯甲酰-1-二硫-O-三氟甲磺酰-β-D-吡喃半乳糖苷(9)(50mg),将混合物在室温下振荡10h。

滤出树脂，依次用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷(各2mL，整个循环重复两次)洗涤。将树脂在四氢呋喃(2mL)中溶胀达10min，添加甲醇的甲醇钠(1M,300μL)，将树脂在室温下振荡。12h后，滤出树脂，依次用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷(各2mL，整个循环重复两次)洗涤。用2％TFA在二氯甲烷中(1mL)处理树脂达10min。过滤后，用甲醇和二氯甲烷(各2mL)洗涤树脂，再用2％TFA处理和如上述那样洗涤。添加甲苯(2mL)，浓缩滤液，与甲苯蒸发两次。将残余物溶于甲醇(2mL)，通过0.22μm过滤器装置(Millipore filter)。浓缩滤液，再次溶于2mL水。冻干而给出标题化合物10-B无色无定形粉末。

¹H-NMR(360-MHz,CD₃OD):δ=1.30(t,3H,J=7.3Hz,CH₃),2.83(q,2H,J=7.3HzSCH₂),3.26-3.87(m,18H,32-H,33-H,34-H,35-H,36-H),4.31(d,2H,J_1,2=9.3Hz,1b-H,1c-H),4.40(d,1H,J_1,2=9.5Hz,1a-H).

C₂₀H₃₅O₁₂S₄(595.76)

从上述描述，本领域技术人员将想到所述组成和方法中的各种修饰和变化。属于附后权利要求书范围内的所有这样的修饰都应包括于其中。

Claims

1．一种在固体载体上形成硫连接的二糖或寡糖的方法，该方法包括：

ⅰ)将第一种糖或寡糖固定在固体载体上，其中，第一种糖或寡糖包含处于还原糖单元的异头碳原子上的、式-SR的被护硫羟基，其中，R是硫羟基保护剂；

ⅲ)任选添加一种金属络合剂；以及

2．权利要求1的方法，其中，用可除去的保护基保护所述第二种糖或寡糖的每个羟基/氨基。

3．权利要求1的方法，其中，所述第二种糖或寡糖在还原糖单元的异头碳上进一步包含一个式-SR的被护硫羟基，其中，R是硫羟基保护剂。

4．权利要求1的方法，其中，固定在固体载体上的第一种糖或寡糖是在其任何羟基/氨基处都未被保护的糖或寡糖。

5．权利要求1的方法，其中，所述固体载体选自下组物质：二氧化硅，合成硅酸盐，生物源的硅酸盐，多孔玻璃，水凝胶，含硅酸盐的矿物，合成聚合物，聚苯乙烯，聚丙烯，聚乙二醇，聚丙烯酰胺；及其共聚物，包括聚苯乙烯/聚乙二醇的共聚物和聚丙烯酰胺/聚乙二醇的共聚物。

6．权利要求1的方法，其中，具有活性硫羟基的硫羟取代的寡糖包括在异头碳上具有一个活性硫羟基取代基的寡糖。

7．一种在固体载体上形成硫连接的二糖或寡糖的方法，该方法包括：

ⅰ)通过可解离的连接臂将第一种糖或寡糖固定在固体载体上，其中，第一种糖或寡糖包含处于还原糖单元的异头碳上的、式-SR的被护硫羟基，其中，R是硫羟基保护剂；

ⅲ)任选添加一种金属络合剂；以及

ⅳ)将上述ⅱ)或ⅲ)中形成的固定化糖或寡糖与包含亲核性可置换基的第二种糖或寡糖在使硫羟基或硫醇盐基置换所述亲核性可置换基的条件下接触，从而在第一种糖/寡糖和第二种糖/寡糖之间形成硫键；以及

ⅴ)通过解离所述可解离的连接臂从固体载体除去ⅳ)中产生的产物。

8．权利要求7的方法，其中，用可除去的保护基保护所述第二种糖或寡糖的每个羟基/氨基。

9．权利要求7的方法，其中，所述第二种糖或寡糖在还原糖单元的异头碳上进一步包含一个式-SR的被护硫羟基，其中，R是硫羟基保护剂。

10．权利要求9的方法，其中，在步骤ⅳ)后，第二种糖或寡糖的硫羟保护基被除去了，并且重复步骤ⅲ)和ⅳ)。

11．权利要求7的方法，其中，所述固体载体选自下组物质：二氧化硅，合成硅酸盐，生物源的硅酸盐，多孔玻璃，水凝胶，含硅酸盐的矿物，合成聚合物，聚苯乙烯，聚丙烯，聚乙二醇，聚丙烯酰胺；及其共聚物，包括聚苯乙烯/聚乙二醇的共聚物和聚丙烯酰胺/聚乙二醇的共聚物。

12．权利要求7的方法，其中，所述糖或者寡糖的糖单元选自下组物质：D-半乳糖、L-半乳糖、D-葡萄糖、D-甘露糖、D-木糖、D-葡糖酸、N-乙酰基-D-葡糖胺、N-乙酰基-D-半乳糖胺、唾液酸、艾杜糖醛酸、L-岩藻糖、肌醇，及其脱氧衍生物、脱氧卤代衍生物、脱氧氨基衍生物、酰化衍生物、磷酸化衍生物和硫酸化衍生物。