CN1317231A - 蝴蝶兰快速繁殖的新方法 - Google Patents

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Abstract

蝴蝶兰快速繁殖的新方法，先用蝴蝶兰种子萌发得到无菌实生苗；再用无菌实生苗培养得到试管苗和PLB；最后以PLB为外植体培养出组培苗。每一步骤均必须使用专用培养基。本方法具有稳定性好、操作简便、繁殖速率快的优点。

Description

蝴蝶兰快速繁殖的新方法
本发明涉及一种新的蝴蝶兰(Phalaenopsis hybrid)快速繁殖方法。
目前，采用组织培养快速繁殖蝴蝶兰已在生产上得到广泛应用。主要通过两个途径实现：一是将近成熟或成熟的果实消毒后在培养基上无菌播种，组培形成实生苗(见张秀清等，莱阳农学院报，1995年第12卷第1期：第44-46页)；二是采用各种营养器官为外植体，通过诱导类原球茎(protocormlike body,PLB)或丛生芽的方法来繁殖获得组培苗(见王怀宇，园艺学报，1989年第16卷：第73-77页；刘荣维等，热带作物学报，1993年第14卷：第105-107页)。第一种方法是目前采用最为普遍的方法，但需要获得优良品种的果实。而通过杂交获得优良品种果实具有一定的难度。通过丛生芽的方法繁殖组培苗存在着繁殖速度不够快的缺陷，而在诱导类原球茎(protocorm like body,PLB)时，现有的方法是用蝴蝶兰的茎尖或幼叶作为外植体，存在着不同品种的难易程度不同，一些好品种的诱导难度太大的问题。
本发明的目的在于针对上述问题，提供一种获得无菌苗的快速方法，该方法具有稳定性好、操作简便、繁殖速率更快的优点。
本发明的方法是先用蝴蝶兰种子萌发得到无菌实生苗；再用无菌实生苗培养得到试管苗和PLB；最后以PLB为外植体培养出组培苗。
本发明方法的较佳方案如下：
1、用蝴蝶兰种子萌发得到无菌实生苗：蝴蝶兰果实经75-80％乙醇浸泡8-10分钟，在酒精灯火焰上灼烧消毒后，切开果实，将种子萌发在1/2 MS+6-BA 2+NAA 0.2+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上，以培养获得高0.5-1cm的无菌实生苗，培养条件为光照8-12小时/天，光强1500-2000Lx，温度为25-27℃，培养时间2-3个月；
2、用无菌实生苗培养得到试管苗和PLB：将由步骤1得到的无菌实生苗转接到1/2 MS+6-BA 2-5+NAA 0.1-0.5+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上，生长2-3个月获得试管苗，在此过程中部分试管苗的茎基部(或根、茎结合部)可产生一种片状结构或茎状结构，属于类原球茎(protocorm like body,PLB)；
3、以PLB为外植体培养出组培苗：将PLB切割成长为0.25-1.0cm的外植体，培养在1/2MS+6-BA0.5-2+NAA 0-0.5+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上或改良的Kyoto培养基(花宝1号3.5g/L+水解酪蛋白0.1％+NAA2+肌醇100mg/L+活性碳0.05％的固体培养基)上，7-21天就可长出芽点，芽点在原有培养基上生长之后可长成组培苗。
在本方法中，MS培养基是最常用的培养基，一般从有关植物组织培养的书都可找到其配方。6-BA2-5是指在培养基中加入6-BA2-5mg/L，其它类推，6-BA是6-苄基腺嘌呤，NAA是萘乙酸，它们都是常用的植物生长调节剂，在化学或生化试剂商店可购买到。花宝1号是美国生产的化肥，在市面上也可以买到。
统计结果表明，在本方法中，10％-15％试管苗的茎基部(或根、茎结合部)可产生PLB。每株试管苗的PLB数目不同，一至十几个不等。平均长0.5cm的PLB，平均出芽数为16个/每外植体，最多可达42个/每外植体；而平均长0.25cm的PLB，平均出芽数为8.4个/每外植体，最多可达28个/每外植体。
本发明具有如下的优点和效果：
1、在组织培养实生苗或丛生芽生长过程中，将幼苗基部的PLB切下，进行增殖和扩大培养，既不影响无菌苗的生长，又可从此途径获得大量的无菌苗，使增殖率增加上万倍。这个增殖途径具有简便、快速的优点。以每株植株的茎基部产生3个1cm长的PLB计算，每4个月平均一株无菌苗可增殖为96株无菌苗，准备出瓶移栽。以4个月为一个周期，每株无菌苗产生PLB的概率为10％计算，每年每株实生苗的增殖理论数为8847株。这对于进行杂交育种中，获得极少数果实的优质品种蝴蝶兰的快速繁殖有很大的应用价值。
2、本方法稳定可靠，在3个品种(红花、红花白心、白花)的实生苗培养过程中，都获得了PLB结构，并能增殖产生大量的芽和植株。且可随时从组培中获得PLB，不受季节限制。从此途径获得的无菌苗都能正常生长、出瓶。
下面结合实施例描述本发明的最佳实施方案，但不限于此：
实施例1
1、红花蝴蝶兰果实经80％乙醇浸泡10分钟，在酒精灯火焰上灼烧消毒后，切开果实，将种子萌发在1/2 MS+6-BA 2+NAA 0.2+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上，获得高0.5cm的无菌实生苗，培养条件为光照12小时/天，光强1500Lx，温度为25℃，培养时间为2个月；
2、将得到的无菌实生苗转接到1/2 MS+6-BA 5+NAA 0.5+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上，生长2个月获得试管苗，在此过程中10％的试管苗的茎基部(或根、茎结合部)可产生PLB；
3、将PLB切割成长为0.25cm的外植体，培养在1/2MS+6-BA 0.5+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上21天，将长出的芽点在原有的培养基上进行培养，成功获得所需的组培苗。接种外植体个数为54个，获得的芽数454个，平均每外植体长芽8.4个。
实施例2
操作同实施例1，在步骤1中使用的蝴蝶兰为白花品种，乙醇浓度为75％浸泡8分钟，培养条件为光照8小时/天，光强2000 Lx，温度为27℃，培养时间为2个月，得到的无菌实生苗高1.0cm。在步骤2中，固体培养基采用1/2 MS+6-BA 3+NAA 0.3+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％，无菌实生苗在固体培养基上生长的时间为3个月，有15％的试管苗的茎基部(或根、茎结合部)可产生PLB。在步骤3中，切成的外植体长度为0.5cm，培养基采用改良的Kyoto培养基，培养时间为7天，结果成功获得所需的组培苗。接种外植体个数91个，获得的芽为1456个，平均每外植体长芽16个。
实施例3
操作同实施例1，在步骤1中使用的蝴蝶兰品种为白花红心，乙醇浓度为77％浸泡9分钟，培养条件为光照10小时/天，光强1700Lx，温度为27℃，培养时间为2个月，得到的无菌实生苗高0.5cm。在步骤2中，固体培养基采用1/2 MS+6-BA 2+NAA 0.1+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％，无菌实生苗在固体培养基上生长的时间为2个半月，有10％的试管苗的茎基部(或根、茎结合部)可产生PLB。在步骤3中，切成的外植体长度为0.5cm，培养基采用1/2MS+6-BA 0.5+NAA 0.1+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基，培养时间为15天，结果成功获得所需的组培苗。接种外植体个数30个，获得的芽为477个，平均每外植体长芽15.9个。
实施例4
操作同实施例1，步骤1、步骤2与实施例1相同。在步骤3中，切成的外植体长度为0.5cm，培养基采用1/2MS+6-BA 1+NAA 0.1+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基，培养时间为15天，结果成功获得所需的组培苗。
实施例5
操作同实施例1，步骤1、步骤2与实施例1相同。在步骤3中，切成的外植体长度为0.5cm，培养基采用1/2MS+6-BA 2+NAA 0.2+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基，培养时间为15天，结果成功获得所需的组培苗。
实施例6
操作同实施例1，步骤1、步骤2与实施例1相同。在步骤3中，切成的外植体长度为0.5cm，培养基采用改良的Kyoto培养基，培养时间为15天，结果成功获得所需的组培苗。

Claims (3)

1、一种蝴蝶兰快速繁殖的方法，其特征在于：先用蝴蝶兰种子萌发得到无菌实生苗；再用无菌实生苗培养得到试管苗和PLB；最后以PLB为外植体培养出组培苗。
2、如权利要求1所述的方法，其特征在于：-在用蝴蝶兰种子萌发得到无菌实生苗的步骤中，蝴蝶兰果实先经75-80％乙醇浸泡8-10分钟，在酒精灯火焰上灼烧消毒后，切开果实，再将种子萌发在1/2MS+6-BA2+NAA0.2+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上获得高0.5-1cm的无菌实生苗，培养条件为光照8-12小时/天，光强1500-2000Lx，温度为25-27℃，培养时间为2-3个月；-在用无菌实生苗培养得到试管苗和PLB的步骤中，将无菌实生苗转接到1/2MS+6-BA2-5+NAA0.1-0.5+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上，生长2-3个月获得试管苗，在此过程中部分试管苗的茎基部或根、茎结合部可产生PLB；-在以PLB为外植体培养出组培苗的步骤中，将PLB切割成长为0.25-1.0cm的外植体，培养在1/2MS+6-BA0.5-2+NAA0-0.5+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上或改良的Kyoto培养基上，7-21天后长出芽点，芽点在原培养基上培养长成组培苗。
3、如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：在以PLB为外植体培养出组培苗的步骤中，所用的培养基为1/2MS+6-BA 0.5-2+NAA0.1-0.2+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基。
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Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102893851A (zh) * 2012-06-19 2013-01-30 漳州钜宝生物科技有限公司 一种蝴蝶兰的育种方法
CN102986533A (zh) * 2012-12-14 2013-03-27 苏州和美生物科技有限公司 蝴蝶兰防褐变专用培养基
CN103202233A (zh) * 2013-04-28 2013-07-17 安徽农业大学 一种蝴蝶兰防褐化组培方法及防褐化培养基
CN103704126A (zh) * 2013-12-11 2014-04-09 华南农业大学 一种创建兰花高效发生2n雄配子资源的方法
CN104255494A (zh) * 2014-09-19 2015-01-07 郎溪庆林生态特色农业观光园有限公司 一种蝴蝶兰组培培养基
CN104686324A (zh) * 2013-04-28 2015-06-10 安徽农业大学 一种以柠檬提取液为防褐化培养基的蝴蝶兰防褐化组培方法
CN104770294A (zh) * 2015-04-02 2015-07-15 河南省农业科学院 一种基于蝴蝶兰种子萌发的原球茎为受体的育种方法
CN108684525A (zh) * 2018-05-16 2018-10-23 芜湖市三山区绿色食品产业协会 蝴蝶兰的组织培养方法
CN108719063A (zh) * 2018-05-16 2018-11-02 芜湖市三山区绿色食品产业协会 用于蝴蝶兰组织培养的组织培养基及其制备方法和应用
CN111543322A (zh) * 2020-05-27 2020-08-18 山东省农业科学院蔬菜花卉研究所 一种脱毒蝴蝶兰新品种培育及组培扩繁方法

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102893851A (zh) * 2012-06-19 2013-01-30 漳州钜宝生物科技有限公司 一种蝴蝶兰的育种方法
CN102986533A (zh) * 2012-12-14 2013-03-27 苏州和美生物科技有限公司 蝴蝶兰防褐变专用培养基
CN103202233A (zh) * 2013-04-28 2013-07-17 安徽农业大学 一种蝴蝶兰防褐化组培方法及防褐化培养基
CN104686324A (zh) * 2013-04-28 2015-06-10 安徽农业大学 一种以柠檬提取液为防褐化培养基的蝴蝶兰防褐化组培方法
CN103704126A (zh) * 2013-12-11 2014-04-09 华南农业大学 一种创建兰花高效发生2n雄配子资源的方法
CN103704126B (zh) * 2013-12-11 2016-06-29 华南农业大学 一种创建兰花发生2n雄配子资源的方法
CN104255494A (zh) * 2014-09-19 2015-01-07 郎溪庆林生态特色农业观光园有限公司 一种蝴蝶兰组培培养基
CN104770294A (zh) * 2015-04-02 2015-07-15 河南省农业科学院 一种基于蝴蝶兰种子萌发的原球茎为受体的育种方法
CN108684525A (zh) * 2018-05-16 2018-10-23 芜湖市三山区绿色食品产业协会 蝴蝶兰的组织培养方法
CN108719063A (zh) * 2018-05-16 2018-11-02 芜湖市三山区绿色食品产业协会 用于蝴蝶兰组织培养的组织培养基及其制备方法和应用
CN111543322A (zh) * 2020-05-27 2020-08-18 山东省农业科学院蔬菜花卉研究所 一种脱毒蝴蝶兰新品种培育及组培扩繁方法
CN111543322B (zh) * 2020-05-27 2021-07-06 山东省农业科学院蔬菜花卉研究所 一种脱毒蝴蝶兰新品种培育及组培扩繁方法

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