CN1310935C - 杀虫性多杀菌素衍生物 - Google Patents

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Abstract

通过培养新颖的糖多孢菌(Saccharopolyspora sp.)菌株突变体所产生的大环内酯化合物具有杀昆虫和杀螨活性，是可用于制备多杀菌素类似物的中间体。

Description

杀虫性多杀菌素衍生物
发明领域
本发明涉及新一类天然农药产物类似物和产生这些化合物的新颖糖多孢菌(Saccharopolyspora)种突变体。
发明背景
天然产生的多杀菌素(spinosyn)化合物由与12或14元大环内酯稠合的5，6，5-三环系统组成。多杀菌素通常在C-9被中性糖(鼠李糖)取代，在C-17被另一种糖取代，优选氨基取代的(例如forosamine)(Kirstet al.，1991；Leweretal.，2000)，但是也是中性的(Leweret al.，2000)。如果不存在另一种，这些化合物被称为假糖苷配基(pseudoaglycone)，或者如果中性糖(鼠李糖)不存在，这些化合物被称为逆假糖苷配基(reverse pseudoaglycone)。已知有两类不同的多杀菌素：多杀菌素和丁烯基多杀菌素。这两类多杀菌素的区别在于与大环连接的碳末端C-21上的取代。美国专利No.5,362,634所公开的天然多杀菌素在C-21上被甲基或乙基取代，而美国专利申请No.60/153,513所公开的天然丁烯基多杀菌素在C-21上被不同氧化水平的3-4碳链取代。
多杀菌素(A83543)是由刺糖多孢菌(Saccharopolysporaspinosa)NRRL18395的衍生物产生的，这些衍生物包括菌株NRRL18537、18538、18539、18719、18720、18743和18823及其衍生物。关于多杀菌素更优选的命名是把假糖苷配基称为多杀菌素A 17-Psa、多杀菌素D 17-Psa等，把逆假糖苷配基称为多杀菌素A 9-Psa、多杀菌素D 9-Psa等(Kirst et al.，1991)。该家族的已知成员被称为要素或组分，各自被赋予一个识别字母标识。这些化合物下面被称为多杀菌素A、B等。多杀菌素化合物可用于控制蛛形纲、线虫纲和昆虫纲动物，确切为鳞翅目和双翅目，它们是相当环保的，具有令人感兴趣的毒理学性质。
美国专利No.5,362,634和对应的欧洲专利申请No.375316 A1公开了多杀菌素A、B、C、D、E、F、G、H和J。WO 93/09126公开了多杀菌素L、M、N、Q、R、S和T。WO 94/20518和US 5,6704,486公开了多杀菌素K、O、P、U、V、W和Y及其衍生物。对多杀菌素化合物的大量合成修饰已经公开在美国专利No.6,001,981和WO97/00265中。
最近，已经从糖多孢菌属之种(Saccharopolyspora sp.)LW107129(NRRL 30141)分离了新的有关大环内酯家族。迄今已被鉴别的由菌株NRRL 30141产生的具体化合物列在表I中。
Figure C0280843700071
                                                   表I
  化合物编号   名称   通式   R3*   R4   R5   R8   R9**
  1   for-rham-I   (1)   (3a)   H   H   1-丁烯基   (9a)
  2   N-oxy-for-rham-I   (1)   (3a)   H   H   1-丁烯基   (9b)
  3   N-desmethyl for-rham-I   (1)   (3a)   H   H   1-丁烯基   (9c)
  4   2”-hydroxy-for-rham-I   (1)   (3a)   H   H   1-丁烯基   (9d)
  5   for-(2’-O-desmethylrham)-I   (1)   (3b)   H   H   1-丁烯基   (9a)
  6   for-(3’-O-desmethylrham)-I   (1)   (3c)   H   H   1-丁烯基   (9a)
  7   for-rham-II   (1)   (3a)   H   CH3   1-丁烯基   (9a)
  8   for-rham-III   (1)   (3a)   OH   H   1-丁烯基   (9a)
  9   24-hydroxy-for-rham-I   (1)   (3a)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9a)
  10   24-hydroxy-N-desmethylfor-rham-I   (1)   (3a)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9c)
  11   24，25-dehydro-for-rham-I   (1)   (3a)   H   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  12   ami-rham-I   (1)   (3a)   H   H   1-丁烯基   (9e)
  13   3”-O-methyl-glu-rham-I   (1)   (3a)   H   H   1-丁烯基   (9f)
  14   ami-rham-III   (1)   (3a)   OH   H   1-丁烯基   (9e)
  15   mole-rham-III   (1)   (3a)   OH   H   1-丁烯基   (9g)
  16   24-demethyl-for-rham-I   (1)   (3a)   H   H   1-丙烯基   (9a)
  17   rham-I   (1)   (3a)   H   H   1-丁烯基   H
  18   rham-II   (1)   (3a)   H   CH3   1-丁烯基   H
  19   rham-III   (1)   (3a)   OH   H   1-丁烯基   H
  20   24-hydroxy-rham-I   (1)   (3a)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   H
  21   24-hydroxy-rham-III   (1)   (3a)   OH   H   3-羟基-1-丁烯基   H
  22   24，25-dehydro-rham-I   (1)   (3a)   H   H   1，3-丁二烯基   H
  23   22，23-dihydro-rham-I   (1)   (3a)   H   H   正丁基   H
  24   (4’-N-desmethyl-1”，4”-diepi-for)-rham-I   (1)   (3a)   H   H   1-丁烯基   (9h)
  25   5”-epifor-rham-I   (1)   (3a)   H   H   1-丁烯基   (9i)
  26   24，25-dehydro-for-rham-III   (1)   (3a)   OH   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  27   8-OH-for-rham II   (1)   (3a)   OH   CH3   1-丁烯基   (9a)
  28   24-desmethyl-for-rham-III   (1)   (3a)   OH   H   1-丙烯基   (9a)
  29   2’-O-desmethyl rham-I   (1)   (3b)   H   H   1-丁烯基   H
  30   3’-O-desmethyl rham-I   (1)   (3c)   H   H   1-丁烯基   H
  31   for-rham-IV   (2)   (3a)   H   H   乙基   (9a)
*R3是具有下式(3a)至(3c)之一的基团
Figure C0280843700091
**R9是具有下式(9a)至(9i)之一的基团
Figure C0280843700092
丁烯基多杀菌素列举在表I中，下面由结构缩略语“for-rham-I”、“for-rham-II”、“for-rham-III”及其衍生物表示。这些情况中，I、II和III表示适当取代的大环内酯结构(I：R4＝R5＝H；II：R5＝CH3，R4＝H或OH；III：R5＝H，R4＝OH)，“for”代表C-17上的糖(for＝forosamine)，“rham”代表C-9上的糖(rham＝三-O-甲基鼠李糖)。由菌株NRRL 30141产生的第二种类型大环内酯结构、即具有14元大环内酯环的通式(2)下面被称为IV，完全糖基化的化合物被称为“for-rham-IV”。式(1)与(2)丁烯基多杀菌素化合物可用于控制蛛形纲、线虫纲和昆虫纲动物，确切为鳞翅目和双翅目，它们是相当环保的，具有令人感兴趣的毒理学性质。
丁烯基多杀菌素与多杀菌素系列相比有较大变化，包括C-21位的广泛修饰、C-8位的羟基化和C-17 forosamine被其他糖取代，包括中性糖。另外，化合物(31)具有与14元大环稠合的5，6，5-三环系，其中forosamine和鼠李糖连接在C-17和C-9。
发明概述
本发明提供新颖的糖多孢菌属之种的分离菌株，它们被指定为30141.2、30141.3、30141.4、30141.5、30141.8和30141.13。
本发明还提供一系列新的丁烯基多杀菌素化合物，它们能够通过在适合的培养基中培养这些菌株而产生，并且具有下列通式(1A)：
其中：
R3是选自如下的基团：
Figure C0280843700111
R4是氢原子或羟基，
R5是氢原子或甲基，
R8是1-丁烯基、1，3-丁二烯基，正丁基、3-羟基-1-丁烯基、丁-3-酮、1，2-环氧-丁基或1-丙烯基，
R9是氢原子或选自如下的基团：
Figure C0280843700112
其条件是：
a)如果R3是式(3b)或(3c)基团，R4和R5是H，R8是1-丁烯基，那么R9既不是H也不是式(9a)基团；并且
b)如果R3是式(3a)基团，那么R4和R5是H，R8是1-丙烯基，R9是H。
条件a)排除已知化合物6和30。条件b)排除其中R3是式(3a)基团的已知化合物。
本发明还提供新颖的下列通式(2A)化合物，它们也能够通过培养新颖的本发明分离菌株而产生：
其中R3、R4、R5、R8和R9是如式(1A)所定义的。
通过培养上面鉴别的糖多孢菌属之种突变菌株而制备和分离的具体新颖的式(1A)与(2A)化合物列在表II中。
Figure C0280843700122
                             表II
  化合物编号   名称   通式   R3*   R4   R5   R8   R9**
  5   for-(2’-O-desmethyl rham)-I   (1A)   (3b)   H   H   1-丁烯基   (9a)
  6   for-(3’-O-desmethyl rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   1-丁烯基   (9a)
  32   for-(4’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3d)   H   H   1-丁烯基   (9a)
  化合物编号   名称   通式   R3*   R4   R5   R8   R9**
  33   for-(2’，3’，4’-tri-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3f)   H   H   1-丁烯基   (9a)
  34   for-(4’-O-desmethyl-rham)-III   (1A)   (3d)   OH   H   1-丁烯基   (9a)
  35   (4”-N-desmethyl-for)-(4’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3d)   H   H   1-丁烯基   (9c)
  36   fof-(4’-O-desmethyl-rham)-II   (1A)   (3d)   H   CH3   1-丁烯基   (9a)
  37   for-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3e)   H   H   1-丁烯基   (9a)
  38   24-desmethyl-rham-I   (1A)   (3a)   H   H   1-丙烯基   H
  39   (4’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3d)   H   H   1-丁烯基   H
  40   for-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-III   (1A)   (3e)   OH   H   1-丁烯基   (9a)
  41   for-(3’-O-desmethyl-rham)-III   (1A)   (3c)   OH   H   1-丁烯基   (9a)
  42   (N-oxy-for)-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3e)   H   H   1-丁烯基   (9b)
  43   24-desmethyl-for-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3e)   H   H   1-丙烯基   (9a)
  44   for-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-II   (1A)   (3e)   H   CH3   1-丁烯基   (9a)
  137   (4”-N-desmethyl-for)-(3’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   1-丁烯基   (9c)
  76   for-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-II   (1A)   (3e)   H   CH3   1-丁烯基   (9a)
  141   24-hydroxy-for-(3’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9a)
  143   24，25-dehydro-for-(3’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  148   24-desmethyl-for-(3’-O-desrmethyl-rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   1-丙烯基   (9a)
  161   for-(3’-O-desmethyl-rham)-IV   (2A)   (3c)   H   H   乙基   (9a)
  163   for-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-IV   (2A)   (3e)   H   H   乙基   (9a)
  165   24-keto-22，23-dihydro-for-(3’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   丁-3-酮   (9a)
  166   22，23-epoxy-for-(3’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   1，2-环氧-丁基   (9a)
*式(3a)-(3f)是如上所定义的。
**式(9a)-(9i)是如上所定义的。
还分离了另外两种化合物，它们的大环桥连方式有所不同。这两种化合物具有下列结构(10)和(11)：
除了化合物5和6以外，所有列在表II中的组分在结构上都不同于已知的多杀菌素或丁烯基多杀菌素。进而，尽管表I中的化合物5和6也是由菌株NRRL 30141产生的，不过该菌株产生它们的量是如此之少，以致分离是困难的，这些化合物的使用迄今仍是受限制的。本申请所公开的新菌株产生这些化合物的量能够通过本文所公开的方法容易地分离。
菌株30141.2产生化合物5和33作为主要产物。菌株30141.3产生化合物6、37、42、43和44作为主要产物。菌株30141.4产生化合物17、32、34、35、36和39作为主要产物。菌株30141.5产生化合物6、8、40和41作为主要产物。菌株30141.8产生化合物6、37、44、76、137、141、143、148、161、163、165和166作为主要产物。菌株30141.13产生化合物17和38作为主要产物。
其中，菌株30104.2、30141.3和30141.4产生丁烯基多杀菌素(1)衍生物作为主要产物，它们在2’-位或3’-位或4’-位、或者3’+4’-位或2’+3’+4’-位的三-O-甲基鼠李糖部分上是O-脱甲基化的。它们的范例分别是化合物5、6、32、37和33。由这些新颖菌株产生的次要产物包括相似脱甲基化与存在于亲本菌株30141的代谢产物中的其他结构修饰相组合的衍生物，例如化合物34(4’-O-脱甲基，8-羟基)、35(4’-O-脱甲基，4”-N-脱甲基)、36(4’-O-脱甲基，6-甲基)、43(3’，4’-二-O-脱甲基，24-脱甲基)等。因而，本领域技术人员将预期这些菌株可产生存在于亲本菌株NRRL 30141中的所有代谢产物，它们被本文所公开的每种新的鼠李糖脱甲基化方式以所有组合所修饰。通过进行大批肉汤提取物的分离，可以得到这类代谢产物。因此，下列另外的化合物可从本发明的突变菌株获得：
                                         表III
  化合物编号   通式   R3*   R4   R5   R8   R9**
  45   (1A)   (3d)   H   H   1-丁烯基   (9c)
  46   (1A)   (3d)   H   H   1-丁烯基   (9d)
  47   (1A)   (3d)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9a)
  48   (1A)   (3d)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9c)
  49   (1A)   (3d)   H   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  50   (1A)   (3d)   H   H   1-丁烯基   (9e)
  51   (1A)   (3d)   H   H   1-丁烯基   (9f)
  52   (1A)   (3d)   OH   H   1-丁烯基   (9e)
  53   (1A)   (3d)   OH   H   1-丁烯基   (9g)
  54   (1A)   (3d)   H   H   1-丙烯基   (9a)
  55   (1A)   (3d)   H   CH3   1-丁烯基   H
  56   (1A)   (3d)   OH   H   1-丁烯基   H
  57   (1A)   (3d)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   H
  58   (1A)   (3d)   OH   H   3-羟基-1-丁烯基   H
  59   (1A)   (3d)   H   H   1，3-丁二烯基   H
  60   (1A)   (3d)   H   H   正丁基   H
  61   (1A)   (3d)   H   H   1-丁烯基   (9h)
  62   (1A)   (3d)   H   H   1-丁烯基   (9i)
  63   (1A)   (3d)   OH   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  64   (1A)   (3d)   OH   CH3   1-丁烯基   (9a)
  65   (1A)   (3d)   OH   H   1-丙烯基   (9a)
  66   (1A)   (3e)   H   H   1-丁烯基   (9c)
  67   (1A)   (3e)   H   H   1-丁烯基   (9d)
  68   (1A)   (3e)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9a)
  69   (1A)   (3e)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9c)
  70   (1A)   (3e)   H   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  71   (1A)   (3e)   H   H   1-丁烯基   (9e)
  72   (1A)   (3e)   H   H   1-丁烯基   (9f)
  73   (1A)   (3e)   OH   H   1-丁烯基   (9e)
  74   (1A)   (3e)   OH   H   1-丁烯基   (9g)
  75   (1A)   (3e)   H   H   1-丁烯基   H
  76   (1A)   (3e)   H   CH3   1-丁烯基   H
  77   (1A)   (3e)   OH   H   1-丁烯基   H
  78   (1A)   (3e)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   H
  79   (1A)   (3e)   OH   H   3-羟基-1-丁烯基   H
  80   (1A)   (3e)   H   H   1，3-丁二烯基   H
  81   (1A)   (3e)   H   H   正丁基   H
  82   (1A)   (3e)   H   H   1-丁烯基   (9h)
  83   (1A)   (3e)   H   H   1-丁烯基   (9i)
  84   (1A)   (3e)   OH   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  85   (1A)   (3e)   OH   CH3   1-丁烯基   (9a)
  86   (1A)   (3e)   OH   H   1-丙烯基   (9a)
  化合物编号   通式   R3*   R4   R5   R8   R9**
  87   (1A)   (3f)   H   H   1-丁烯基   (9b)
  88   (1A)   (3f)   H   H   1-丁烯基   (9c)
  89   (1A)   (3f)   H   H   1-丁烯基   (9d)
  90   (1A)   (3f)   H   CH3   1-丁烯基   (9a)
  91   (1A)   (3f)   OH   H   1-丁烯基   (9a)
  92   (1A)   (3f)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9a)
  93   (1A)   (3f)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9c)
  94   (1A)   (3f)   H   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  95   (1A)   (3f)   H   H   1-丁烯基   (9e)
  96   (1A)   (3f)   H   H   1-丁烯基   (9f)
  97   (1A)   (3f)   OH   H   1-丁烯基   (9e)
  98   (1A)   (3f)   OH   H   1-丁烯基   (9g)
  99   (1A)   (3f)   H   H   1-丙烯基   (9a)
  100   (1A)   (3f)   H   H   1-丁烯基   H
  101   (1A)   (3f)   H   CH3   1-丁烯基   H
  102   (1A)   (3f)   OH   H   1-丁烯基   H
  103   (1A)   (3f)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   H
  104   (1A)   (3f)   OH   H   3-羟基-1-丁烯基   H
  105   (1A)   (3f)   H   H   1，3-丁二烯基   H
  106   (1A)   (3f)   H   H   正丁基   H
  107   (1A)   (3f)   H   H   1-丁烯基   (9h)
  108   (1A)   (3f)   H   H   1-丁烯基   (9i)
  109   (1A)   (3f)   OH   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  110   (1A)   (3f)   OH   CH3   1-丁烯基   (9a)
  111   (1A)   (3f)   OH   H   1-丙烯基   (9a)
  112   (1A)   (3b)   H   H   1-丁烯基   (9b)
  113   (1A)   (3b)   H   H   1-丁烯基   (9c)
  114   (1A)   (3b)   H   H   1-丁烯基   (9d)
  115   (1A)   (3b)   H   CH3   1-丁烯基   (9a)
  116   (1A)   (3b)   OH   H   1-丁烯基   (9a)
  117   (1A)   (3b)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9a)
  118   (1A)   (3b)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9c)
  119   (1A)   (3b)   H   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  120   (1A)   (3b)   H   H   1-丁烯基   (9e)
  121   (1A)   (3b)   H   H   1-丁烯基   (9f)
  122   (1A)   (3b)   OH   H   1-丁烯基   (9e)
  123   (1A)   (3b)   OH   H   1-丁烯基   (9g)
  124   (1A)   (3b)   H   H   1-丙烯基   (9a)
  125   (1A)   (3b)   H   CH3   1-丁烯基   H
  126   (1A)   (3b)   OH   H   1-丁烯基   H
  127   (1A)   (3b)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   H
  128   (1A)   (3b)   OH   H   3-羟基-1-丁烯基   H
  129   (1A)   (3b)   H   H   1，3-丁二烯基   H
  130   (1A)   (3b)   H   H   正丁基   H
  131   (1A)   (3b)   H   H   1-丁烯基   (9h)
  132   (1A)   (3b)   H   H   1-丁烯基   (9i)
  133   (1A)   (3b)   OH   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  134   (1A)   (3b)   OH   CH3   1-丁烯基   (9a)
  135   (1A)   (3b)   OH   H   1-丙烯基   (9a)
  136   (1A)   (3c)   H   H   1-丁烯基   (9b)
  137   (1A)   (3c)   H   H   1-丁烯基   (9c)
  138   (1A)   (3c)   H   H   1-丁烯基   (9d)
  化合物编号   通式   R3*   R4   R5   R8   R9**
  139   (1A)   (3c)   H   CH3   1-丁烯基   (9a)
  140   (1A)   (3c)   OH   H   1-丁烯基   (9a)
  141   (1A)   (3c)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9a)
  142   (1A)   (3c)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9c)
  143   (1A)   (3c)   H   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  144   (1A)   (3c)   H   H   1-丁烯基   (9e)
  145   (1A)   (3c)   H   H   1-丁烯基   (9f)
  146   (1A)   (3c)   OH   H   1-丁烯基   (9e)
  147   (1A)   (3c)   OH   H   1-丁烯基   (9g)
  148   (1A)   (3c)   H   H   1-丙烯基   (9a)
  149   (1A)   (3c)   H   CH3   1-丁烯基   H
  150   (1A)   (3c)   OH   H   1-丁烯基   H
  151   (1A)   (3c)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   H
  152   (1A)   (3c)   OH   H   3-羟基-1-丁烯基   H
  153   (1A)   (3c)   H   H   1，3-丁二烯基   H
  154   (1A)   (3c)   H   H   正丁基   H
  155   (1A)   (3c)   H   H   1-丁烯基   (9h)
  156   (1A)   (3c)   H   H   1-丁烯基   (9i)
  157   (1A)   (3c)   OH   H   1，3-丁二烯基   (9a)
  158   (1A)   (3c)   OH   CH3   1-丁烯基   (9a)
  159   (1A)   (3c)   OH   H   1-丙烯基   (9a)
  160   (2A)   (3b)   H   H   乙基   (9a)
  161   (2A)   (3c)   H   H   乙基   (9a)
  162   (2A)   (3d)   H   H   乙基   (9a)
  163   (2A)   (3e)   H   H   乙基   (9a)
  164   (2A)   (3f)   H   H   乙基   (9a)
  167   (1A)   (3d)   H   H   丁-3-酮   (9a)
  168   (1A)   (3d)   H   H   1，2-环氧-丁基   (9a)
  169   (1A)   (3e)   H   H   丁-3-酮   (9a)
  170   (1A)   (3e)   H   H   1，2-环氧-丁基   (9a)
  171   (1A)   (3e)   H   H   丁-3-酮   (9a)
  172   (1A)   (3e)   H   H   1，2-环氧-丁基   (9a)
  173   (1A)   (3b)   H   H   丁-3-酮   (9a)
  174   (1A)   (3b)   H   H   1，2-环氧-丁基   (9a)
*式(3a)-(3f)是如上所定义的。
**式(9a)-(9i)是如上所定义的。
菌株30141.8的按比例扩大可以分离若干新的丁烯基多杀菌素(1)衍生物，它们在C-21上具有新颖的取代，例如化合物165(24-酮基-22，23-二氢-for-(3’-O-脱甲基-rham)-I)和166(22，23-环氧-for-(3’-O-脱甲基-rham)-I)。因而，本领域技术人员将预期亲本菌株可产生存在于亲本菌株NRRL 30141中的所有代谢产物，它们被本文所公开的每种新的C-21修饰方式以所有组合所修饰(表IIIb)。通过进行大批肉汤提取物的分离可以获得这类代谢产物。
                          表IIIb
  化合物编号   通式_   R3*   R4   R5   R8   R9**
  175   (1A)   (3a)   H   H   丁-3-酮   (9a)
  176   (1A)   (3a)   H   H   1，2-环氧丁基   (9a)
  177   (1A)   (3a)   OH   H   丁-3-酮   (9a)
  178   (1A)   (3a)   OH   H   1，2-环氧丁基   (9a)
  179   (1A)   (3a)   H   CH3   丁-3-酮   (9a)
  180   (1A)   (3a)   H   CH3   1，2-环氧丁基   (9a)
  181   (1A)   (3a)   OH   CH3   丁-3-酮   (9a)
  182   (1A)   (3a)   OH   CH3   1，2-环氧丁基   (9a)
  183   (1A)   (3a)   H   H   丁-3-酮   (9b)
  184   (1A)   (3a)   H   H   丁-3-酮   (9c)
  185   (1A)   (3a)   H   H   丁-3-酮   (9d)
  186   (1A)   (3a)   H   H   丁-3-酮   (9e)
  187   (1A)   (3a)   H   H   丁-3-酮   (9f)
  188   (1A)   (3a)   OH   H   丁-3-酮   (9e)
  189   (1A)   (3a)   OH   H   丁-3-酮   (9g)
  190   (1A)   (3a)   H   CH3   丁-3-酮   H
  191   (1A)   (3a)   OH   H   丁-3-酮   H
  192   (1A)   (3a)   H   H   丁-3-酮   (9h)
  193   (1A)   (3a)   H   H   丁-3-酮   (9i)
  194   (1A)   (3a)   H   H   1，2-环氧丁基   (9b)
  195   (1A)   (3a)   H   H   1，2-环氧丁基   (9c)
  196   (1A)   (3a)   H   H   1，2-环氧丁基   (9d)
  197   (1A)   (3a)   H   H   1，2-环氧丁基   (9e)
  199   (1A)   (3a)   H   H   1，2-环氧丁基   (9f)
  200   (1A)   (3a)   OH   H   1，2-环氧丁基   (9e)
  201   (1A)   (3a)   OH   H   1，2-环氧丁基   (9g)
  202   (1A)   (3a)   H   CH3   1，2-环氧丁基   H
  203   (1A)   (3a)   OH   H   1，2-环氧丁基   H
  204   (1A)   (3a)   H   H   1，2-环氧丁基   (9h)
  205   (1A)   (3a)   H   H   1，2-环氧丁基   (9i)
  206   (1A)   H   H   H   丁-3-酮   (9a)
  207   (1A)   H   H   H   1，2-环氧丁基   (9a)
_式(1A)是如上所定义的。
*式(3a)-(3f)是如上所定义的。
**式(9a)-(9i)是如上所定义的。
本发明的另一方面是生产式(1A)化合物的方法，包含在适合的培养基中培养糖多孢菌属之种菌株(选自菌株30141.2、30141.3、30141.4、30141.5、30141.8和30141.13)，以产生所需的化合物。将式(1A)化合物用极性有机溶剂从发酵肉汤和菌丝体中提取。这些化合物可以进一步经过本领域熟知的技术纯化，例如柱色谱。
因为菌株30141.2、30141.3、30141.4、30141.5、30141.8和30141.13是新发现的菌株，本发明进一步提供这些微生物的生物学纯化培养物。这些新颖的菌株根据布达佩斯条约的条款保藏在MidwestArea Regiona1 Research Center，Agricu1tufal ResearchService，United States Department of Agriculture，815 NorthUniversity Street，Peoria，IL 61604，日期如下表所示：
  菌株   保藏号   保藏日期
  30141.2   NRRL 30424   2001年3月8日
  30141.3   NRRL 30423   2001年3月8日
  30141.4   NRRL 30422   2001年3月8日
  30141.5   NRRL 30438   2001年3月15日
  30141.8   NRRL 30421   2001年3月8日
  30141.13   NRRL 30437   2001年3月15日
其中R9不是H的式(1A)化合物下面被称为式1B化合物，可用于控制螨和昆虫，确切为鳞翅目、鞘翅目、同翅目和双翅目。因此，使用这些化合物减少昆虫与螨群体的杀昆虫与杀螨组合物和方法也是本发明的一部分。
式(1A)化合物在杀昆虫与杀螨化合物的制备中也是有用的中间体。例如，这些化合物可以在任何游离的鼠李糖羟基上被烷基化或酰化。烷基化或酰化作用可以通过化学合成或微生物生物转化进行，例如采用WO 97/00265所述工艺。
发明的详细说明
培养说明
使新分离的源于糖多孢菌属之种LW 107129(NRRL30141)的菌株生长在七个琼脂平板培养基上，比较生长、反色、气生菌丝的产生、孢子群颜色和色素的产生。另外，测试突变体使14种糖发酵的能力。在形态学和生理学测试中，观察到在美国专利申请No.60/153,513所公开的NRRL 30141与本文所公开的任意培养物(30141.2、30141.3、30141.4、30141.5、30141.8或30141.13)之间没有显著差异。
本发明的一个方面是通过培养3’-ODM-rham产生性菌株，例如30141.3、30141.5、30141.8或其3’-ODM-rham产生性突变体，来制备式(1A)化合物。“3’-ODM-rham产生性突变体”是源于丁烯基多杀菌素产生性NRRL 30141菌株或ODM-rham产生性NRRL 30141菌株的任意一种的菌株，它能够产生可回收量的3’-O-脱甲基-rham化合物。
本发明的另一方面是通过培养2’-ODM-rham-产生性菌株，例如30141.2或其2’-ODM-rham-产生性突变体，来制备式(1A)化合物。“2’-ODM-rham-产生性突变体”是源于丁烯基多杀菌素-产生性NRRL30141菌株或ODM-rham-产生性NRRL 30141菌株的任意一种的菌株，它能够产生可回收量的2’-O-脱甲基-rham化合物。
本发明的进一方面是通过培养4’-ODM-rham-产生性菌株，例如30141.4或其4’-ODM-rham-产生性突变体，来制备式(1A)化合物。“4’-ODM-rham-产生性突变体”是源于丁烯基多杀菌素-产生性NRRL30141菌株或4’-ODM-rham-产生性NRRL 30141菌株的任意一种的菌株，它能够产生可回收量的4’-O-脱甲基-rham化合物。
利用本领域熟知的各种分离和纯化工艺，可以从产生式(1A)化合物的培养基中分离它们。出于生产成本、最佳产量和产物易于分离的考虑，某些培养基是优选的。例如，大规模发酵中优选的碳源是葡萄糖，不过也可以使用核糖、果糖、甘油、甘露糖、甘露糖醇、核糖、可溶性淀粉、马铃薯糊精、油类(例如豆油)等。优选的氮源是棉籽粉、大豆粉、胨化酪蛋白和玉米浆，不过也可以使用豆胨、酵母提取物、酶水解的酪蛋白、牛肉提取物等。可以掺入在培养基中的营养性无机盐有能够生成锌、钠、钾、镁、钙、铵、氯、碳酸根、硫酸根、硝酸根、磷酸根等离子的惯用可溶性盐。通常存在必需的痕量元素，作为其他培养基代用品中的杂质，含量足以满足生物体的生长需要，不过也可以加入能够生成钼、钴、铜、锰、硼、铁等的盐。
通常，如果发泡是个问题，可以向大规模发酵培养基加入少量防泡剂，例如聚丙二醇或本领域技术人员普遍使用的其他防泡剂。另外，如果发泡形成，可以加入油。
关于大量式(1A)化合物的生产，浸没需氧发酵是优选的，不过，少量式(1A)化合物可以通过摇瓶培养获得。优选的是使用营养性接种物进行大型生物反应器的接种。营养性接种物是这样制备的，即接种少量体积的来自保存在液氮或超低温冰箱内的储备培养物的培养基，得到新鲜的积极生长中的该生物体培养物。然后将营养性培养物转移到更大的生物反应器中。营养性接种培养基可以与发酵所用的相同，但是其他培养基也是适合的。
ODM-rham-产生性菌株生长在约24℃与约33℃之间的温度下时产生式(1A)化合物。最佳生产温度似乎是约28℃至约31℃。浸没需氧培养过程所惯用的是，向容器底部吹入无菌空气，同时用涡轮叶轮搅拌培养基。一般而言，通气速率应当足以维持生物体所需的溶解氧的水平。
在发酵期间，式(1A)化合物的产生之后可以测试肉汤提取物。产生之后优选的方法是利用高效液相色谱(HPLC)分析肉汤提取物。更优选的方法是利用HPLC-质谱(LC-MS)分析肉汤提取物。适合的分析系统如
实施例1和2所述。
在摇瓶或搅拌反应器中产生之后，可以通过本领域技术人员已知的方法从发酵培养基中回收式(1A)化合物。在丁烯基多杀菌素-产生性菌株的发酵期间所生成的化合物存在于菌丝体和肉汤中。在发酵中没有油存在的情况下，首先过滤全部肉汤，使菌丝体与肉汤相分离，可更有效地回收式(1A)化合物。式(1A)化合物是亲脂性的；因此，当在发酵中使用油时，大量式(1A)化合物可能在肉汤中。
从肉汤中分离式(1A)化合物的优选技术涉及向全部肉汤加入等体积乙醇，摇动1-2小时，以完成萃取，再离心分离所萃取的细胞物。然后将水醇性肉汤提取物用真空干燥的二氯甲烷分配，萃取式(1A)化合物。利用制备型HPLC从干燥后的二氯甲烷相中纯化式(1A)化合物，如实施例4详述。
从肉汤中分离式(1A)化合物(其中R9是碱性含氮部分)更优选的技术涉及向肉汤加入甲基异丁基酮(MIBK)。摇动1-2小时后，将肉汤离心，分离MIBK萃取液。使用pH3的酸性缓冲水溶液分配MIBK萃取液，将含水相用氢氧化铵调至pH 10，然后用二乙醚(DEE)萃取。在真空下干燥DEE相，分离式(1A)化合物，经过制备型HPLC纯化，如实施例5详述。
作为替代选择，培养物固体、包括培养基成分和菌丝体无需萃取或分离即可用作式(1A)化合物来源，但是优选地在除去水之后使用。例如，式(1A)化合物的产生之后，可以将全部发酵肉汤冷冻干燥、鼓式干燥或者共沸蒸馏并干燥。干燥后的肉汤然后可以直接使用，例如直接将其混合在进料预混合物或喷雾剂与粉剂中。
实施例1
用于分析发酵肉汤中含有O-脱甲基-鼠李糖的丁烯基多杀菌素代谢产物的LC-UV法
下列HPLC法可用于监测发酵物中式(1A)化合物和其他组分的产量：
加入与发酵肉汤等体积的变性乙醇。摇动混合物达1小时，然后离心除去大多数细胞碎屑。微量离心1ml试样，然后利用下列HPLC系统之一分析澄清的萃取液：
HPLC系统1：柱固定相：250×4.6mm柱，碱灭活硅胶，5μm C8(Hypersil-C8-BDS)。移动相：10mM乙酸铵-甲醇-乙腈线性梯度，总结如下：
表IVa
  时间(分钟)   溶剂A百分比   溶剂B百分比
  020253035   10000100100   010010000
其中溶剂A是10mM乙酸铵，溶剂B是甲醇-乙腈(1∶1)。
流速：1ml/min
检测：UV，244nm
保留时间总结在表Va中：
表Va
  化合物   保留时间(min)
  (5)(6)(32)(33)(34)(35)(36)(37)(38)(39)(40)(41)(42)(43)(44)   23.523.623.522.421.122.623.823.121.621.420.421.322.422.423.6
HPLC系统2：柱固定相：250×4.6mm柱，碱灭活硅胶，5μm C8(Hypersil-C8-BDS)。移动相：10mM乙酸铵-乙腈线性梯度，总结如下：
表IVb
  时间(分钟)   溶剂A百分比   溶剂B百分比
  020253035   10000100100   010010000
其中溶剂A是10mM乙酸铵，溶剂B是乙腈。
流速：1ml/min
检测：UV，244nm
保留时间总结在表Vb中：
表Vb
  化合物   保留时间(min)
  (165)(166)(10)(11)   17.318.518.718.9
HPLC系统3：柱固定相：250×4.6mm柱，碱灭活硅胶，5μm C8(Hypersil-C18-BDS)。移动相：10mM乙酸铵-乙腈线性梯度，总结如下：
表IVc
  时间(分钟)   溶剂A百分比   溶剂B百分比
  020253035   10000100100   010010000
其中溶剂A是10mM乙酸铵，溶剂B是乙腈。
流速：1ml/min
检测：UV，244nm
保留时间总结在表Vc中：
表Vc
  化合物   保留时间(min)
  (76)(163)   22.723.4
实施例2
用于分析发酵肉汤中含有O-脱甲基-鼠李糖的丁烯基多杀菌素代谢产物的LC-MS法
LC法如实施例1所述，只是连接了电子喷雾(ESI)质谱计以分析HPLC洗脱液，可用于监测发酵物中式(1A)化合物和其他组分的产生。这样一种系统也用于测定纯化要素的分子量，即从电子喷雾加合物离子推导而来。这些数据总结在表VI中。
加入与发酵肉汤等体积的变性乙醇。摇动混合物达1小时，然后离心除去大多数细胞碎屑。微量离心1ml试样，然后利用下列LC-MS系统分析澄清的萃取液：
HPLC系统：柱固定相：250×4.6mm柱，碱灭活硅胶，5μm C8(Hypersil-C8-BDS)。移动相：10mM乙酸铵-甲醇-乙腈线性梯度，总结如下：
表VI
  时间(分钟)   溶剂A百分比   溶剂B百分比
  020253035   10000100100   010010000
其中溶剂A是10mM乙酸铵，溶剂B是甲醇-乙腈(1∶1)。
流速：1ml/min；UV检测器后分离，使MS：废液比为大约5∶95。
检测：在低与高锥电压模式下获得的阳性ESI。
特征性质谱离子总结在表VII中。
表VII
  化合物   [M+H+]的m/za   次级离子的m/zb
  5632333435363738394041424344137141143148161163165166式(10)的化合物式(11)的化合物   744.3744.6744.5716.4760.3730.5758.6730.2603.4603.4746.4760.4746.2716.3744.4730.5760.5742.5730.4744.4729.9760.5760.5571.5571.5   142.0142.1142.1142.1142.0128.1142.1142.0[M+乙酸盐]+＝661.5[M+乙酸盐]+＝661.4142.1142.1142.1142.0142.1128.0142.0142.0142.0142.0NOcNOcNOcNOcNOc
a在+ESI模式低锥电压下观察到的亲本离子的m/z，
b在+ESI模式高锥电压下观察到的最丰富片段或加合物离子的m/z，
cNO＝在所用实验条件下没有观察到。
实施例3
通过发酵作用制备含有O-脱甲基-鼠李糖的丁烯基多杀菌素代谢产物
含有O-脱甲基-鼠李糖的式(1A)化合物代谢产物是这样制备的，在下述发酵培养基中培养所需的糖多孢菌菌株，其选自下列菌株30141.2、30141.3、30141.4、30141.5或30141.8之一。其将1.8ml冷冻的营养性培养物融化，接种在500ml埃伦迈厄烧瓶内的100ml营养性培养基中，在30℃下生长48-72小时，在150rpm下摇动。
表VIII
  营养性培养基(每升水)
  成分   量(g)
  葡萄糖胰胨豆胨肉汤酵母提取物硫酸镁·7H2O   9.030.03.02.0
摇瓶发酵
使用50ml成熟的第一阶段菌种，接种在2升TunAirTM发酵瓶内的800ml发酵培养基中。在摇瓶发酵中可以利用实施例1和2所公开的HPLC法监测式(1A)化合物的产生。
表IX
  发酵培养基(每升水)
  成分   量(g)
  葡萄糖棉籽粉大豆粉玉米浆粉碳酸钙酵母提取物   80.032.08.08.05.02.0
在30℃、200rpm(50mm冲程)下保持发酵7-12天。
搅拌式反应器发酵
使用60ml成熟的第一阶段营养性培养物，接种在2升培养瓶内的1升营养性培养基中作为次级营养性培养物。将该培养物在30℃下培育48小时，在195rpm下摇动。使用成熟的第二阶段菌种，在搅拌式发酵罐内接种70升发酵培养基。在30℃、400rpm下保持发酵7-14天。在搅拌式罐发酵中可以利用实施例1和2所公开的HPLC法监测式(1A)化合物的产生。
可以用适合的溶剂萃取成熟的发酵液，通过成盐和/或色谱分离回收代谢产物，如实施例4和5所述。
实施例4
利用中性法从培养肉汤中分离杀虫活性代谢产物
下例显示在纯化式(1A)化合物(其中R9＝H和/或碱性含氮糖)的混合物时如何分离代谢产物。该例给出用于分离化合物39和17的具体工艺，但是在由本领域技术人员实施时，也将适用于任何这类混合物。
800ml接种培养基在发酵完全后，菌株30141.4的总培养物、即细胞加肉汤的总体积为大约600ml。将样本用等体积变性乙醇萃取如下：剧烈摇动，然后在室温下放置2小时。离心除去细胞碎屑，使用二氯甲烷(DCM；2×600ml)分配1.2升50％含水乙醇萃取液。在真空下浓缩DCM萃取液，得到470mg残余物。将残余物溶于甲醇，在下列条件下反复注射在制备型HPLC上进行色谱分离：
HPLC系统：柱固定相：250×10mm柱，碱灭活硅胶，5μm C18(Hypersil-C18-BDS)。移动相：10mM乙酸铵-甲醇-乙腈(25∶37.5∶37.5)。流动条件：按5ml/min等度洗脱。检测：UV，244nm。
利用这种方法制备性地分离一半干燥后的DCM萃取液，收集在大约9分钟和13.5分钟洗脱的区域。将它们干燥，分别得到纯化合物39(1.7mg)和化合物17(0.8mg)。
实施例5
利用酸反萃取法从培养肉汤分离杀虫活性代谢产物
下例显示在有关化合物是式(1A)化合物(其中碱性含氮糖)的混合物时如何分离代谢产物。该例给出用于分离化合物6、37、42、43和44的具体工艺，但是在由本领域技术人员实施时，也将适用于任何这类混合物。
6升接种培养基在发酵完全后，菌株30141.3的总培养物、即细胞加肉汤的总体积为大约5升。将样本用甲基异丁基酮(MIBK；2×2.5升)萃取如下：连续摇动1小时。离心除去细胞碎屑。使用乙酸铵/甲酸缓冲水溶液(10mM；pH 3；2×1升)分配MI BK萃取液。含水萃取液的pH用30％氢氧化铵溶液调至10，溶液用二乙醚萃取(DEE；2×1升)。使DEE通过滤纸，然后在真空下干燥，得到127mg残余物，称为DEE-1。将该残余物溶于甲醇(500μl)，在下列条件下反复注射在制备型HPLC上进行色谱分离：
HPLC系统：柱固定相：250×10mm柱，碱灭活硅胶，5μm C18(Hypersil-C18-BDS)。移动相：10mM乙酸铵-甲醇-乙腈(20∶40∶40)。流动条件：按5ml/min等度洗脱。检测：UV，244nm。
利用这种方法制备性地分离DEE-1萃取液，收集在大约10.2分钟、10.8分钟、13.5分钟和17.5分钟洗脱的区域。将它们干燥，分别得到纯化合物42(0.2mg)、化合物43(1.9mg)、化合物37(23.4mg)和化合物6与44的混合物(3.1mg)。
将上述初步酸性缓冲液萃取后剩余的MIBK相在真空下浓缩至干。将残余物溶于DEE(200ml)，用水分配(2×100ml；用1N HCl调至pH 3)。含水相用30％氢氧化铵溶液调至pH 10，溶液用DEE萃取(2×100ml)。使DEE通过滤纸，然后在真空下干燥，得到106mg残余物，称为DEE-2。将该残余物溶于甲醇(500μl)，在下列条件下反复注射在制备型HPLC上进行色谱分离：
HPLC系统：柱固定相：250×10mm柱，碱灭活硅胶，5μm C18(Hypersil-C18-BDS)。移动相：10mM乙酸铵-甲醇-乙腈(20∶40∶40)。
流动条件：按5ml/min等度洗脱。检测：UV，244nm。
利用这种方法制备性地分离DEE-2萃取液，收集在大约13.5分钟和17.5分钟洗脱的区域。将它们干燥，分别得到纯化合物37(22.6mg)和化合物6与44的混合物(10.6mg)。
汇集DEE-1和DEE-2的第一步色谱分离所得的化合物混合物，干燥。将干燥后的样本溶于甲醇(500μl)，在下列条件下反复注射在制备型HPLC上进行色谱分离：
HPLC系统：柱固定相：250×10mm柱，碱灭活硅胶，5μm C18(Hypersil-C18-BDS)。移动相：10mM乙酸铵-乙腈(30∶70)。流动条件：按5ml/min等度洗脱。检测：UV，244nm。
利用这种方法制备性地分离化合物混合物，收集在大约12分钟和16分钟洗脱的区域。将它们干燥，分别得到纯化合物44(4.0mg)和纯化合物6(8.4mg)。
光谱特征
利用光谱学方法测定新组分的化学结构，包括核磁共振光谱(NMR)、质谱(MS，总结在表VII中)、紫外光谱(UV)，并比较for-rham-I(1)与有关类似物。利用普通NMR技术获得所有化合物的NMR光谱，与源于其他有关结构的光谱比较。利用标准的逆2D NMR实验，例如COSY、HSQC和HMBC，研究化合物之间的任何差异和(例如)化合物1的NMR光谱。出于鉴别C-9糖取代基衍生物的目的，所用编号系统如下。
Figure C0280843700311
用于鉴别式(1A)化合物的区别性NMR光谱特征如下：与化合物1的1H光谱进行比较，可很容易鉴别化合物。通过比较可很容易确定脱甲基化的位置，并可适当地利用2D NMR技术加以确认。与前面要求保护的分子(7和8)进行比较，也容易鉴别任何其他特征(例如化合物36和40)。通过比较化合物5、6、32、33、37与化合物1之间的C-9糖质子化学漂移，例证了NMR光谱的有关变化。在甲基不存在的所有情况下注意到都有低磁场漂移(downfield shift)。
表X
  质子化学漂移(ppm)
  要素   2’   3’   4’   5’
  (1)For-rham-I   3.50   3.46   3.11   3.55
  (5)For-(2’-0-脱甲基-rham)-I   3.96   3.45   3.08   3.62
  (6)For-(3’-O-脱甲基-rham)-I   3.42   3.83   2.98   3.56
  (32)For-(4’-O-脱甲基-rham)-I   3.58   3.42   3.59   3.50
  (37)For-(3’，4’-二-O-脱甲基-rham)-I   3.42   3.72   3.38   3.53
  (33)For-(2’，3’，4’-三-O-脱甲基-rham)-I   3.89   3.78   3.46   3.58
杀昆虫与杀螨活性
式(1B)化合物(也就是其中R9是糖部分的式(1A)化合物)可用于控制昆虫和螨。因此，本发明的进一方面涉及抑制昆虫或螨的方法，包含向昆虫或螨所在地施用昆虫-或螨-抑制量的式(1B)化合物。
昆虫或螨的“所在地”表示昆虫或螨生活的环境或者它的卵存在的环境，包括包围它的空气、它进食的食物或它接触的物体。例如，可以这样控制摄食植物的昆虫或螨，即将活性化合物施用于昆虫或螨进食或栖息的植物部分，特别是叶子。
术语“抑制昆虫或螨”意味着活的昆虫或螨的数量有所减少或者卵的数量有所减少。由化合物所实现的减少的程度当然取决于化合物的施用比率、所使用的特定化合物和目标昆虫或螨的种类。至少，应当使用昆虫灭活量或螨灭活量。“灭活量”意味着使用一定量的化合物，导致被处理的昆虫或螨群体发生可测量的减少。通常使用约1至约1,000ppm(或0.01至1kg/英亩)的化合物。
这些化合物对大量昆虫和螨显示活性。更具体地，这些化合物对下列昆虫显示活性：鳞翅目，例如甜菜夜蛾、烟芽夜蛾、苹果皮小卷蛾和cabbage looper。该目的其他典型成员包括southern armyworm，黄地老虎，透窝蛾科(clothes moths)，印度谷斑螟，卷蛾，棉铃夜蛾(corn earworm)，棉铃夜蛾(cotton bollworm)，欧洲玉米螟，imported cabbage worm，红铃麦蛾，距袋蛾，革天幕毛虫，sodwebworm和fall armyworm。
这些化合物还对鞘翅目成员(甲虫和象鼻虫，例如马铃薯叶甲，spotted and striped cucumber beetles，日本弧丽金龟和bollweevil)和双翅目成员(the true flies，例如家蝇，蚊子，实蝇，stable and horn flies和潜蝇)显示活性。
这些化合物还对半翅目成员(true bugs，例如盲蝽、龟蝽和长蝽)、同翅目成员(例如蚜虫、角顶叶蝉、飞虱、whiteflies、scales和mealybugs)、缨翅目成员(thrips)、直翅目成员(例如蜚蠊科、grasshoppers和crickets)、蚤目成员(蚤)、等翅目成员(白蚁)和膜翅目蚁科成员(蚁)显示活性。
这些化合物还对椴两点叶螨显示活性，它是蛛形纲螨目成员。该目的其他典型成员包括植物寄生虫，例如柑橘全爪螨、苹果全爪螨和citrus flatmite，和动物寄生虫，例如猫痂螨、马瘙螨、绵羊瘙螨、鸡皮刺螨、禽疙螨、鸡疙螨和犬蠕形螨。
可以被本发明化合物控制的具体代表性节肢动物害虫包括如下：美洲花蜱(Amblyomma americanum)，有斑花蜱(Amblyomma maculatum)波斯锐缘蜱(Argaspersicus)，微小牛蜱(Boophilus microplus)，痒螨属(Chorioptes spp.)，牛螨形螨(Demodex bovis)，犬蠕形螨(Demodex canis)，安氏革蜱(Dermacentor anderson)，变形革蜱(Dermacentor variabilis)，鸡皮刺螨(Dermanyssus gallinae)，蓖子硬蜱(Ixodes ricinus)，鸡疙螨(Knemidokoptes gallinae)，禽疙螨(Knemidokoptes mutans)，Otobius megnini(ear tick)，马瘙螨(Psoroptes equi)，绵羊瘙螨(Psoroptes ovis)，血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)，人疥螨(Sarcoptes scabiei)，伊蚊属(Aedes)，按蚊属(Anopheles)，库蚊属(Culex)，脉毛蚊属(Culiseta)，Bovicola bovis(cattle biting louse)，Callitroga homnivorax(blowfly)，斑虻属(Chrysops spp).(deer fly)，温带臭虫(Cimex lectularius)，锥蝇属(Cochliomyiaspp)，犬栉首蚤(Ctenocephalides canis)，猫蚤(Ctenocephalides felis)，库蠓属(Culicoides spp).(midges，sandflies，punkies，or no-see-ums)，绵羊畜虱(Damaliniaovis)，肤蝇属(Dermatobia spp)，赤尾胃蝇(Gasterophilushaemorrhoidalis)，肠胃蝇(Gasterophilus intestinalis)，鼻胃蝇(Gasterophilus nasalis)，舌蝇属(Glossina spp.)，西方角蝇(Haematobia irritans)，驴血虱(Haematopinus asini)，牛血虱(Haematopinus eurysternus)，Haematopinus ovillus(bodylouse)，猪血虱(Haematopinus suis)，Hydrotaeairritans(head fly)，牛皮蝇(Hypoderma bovis)，纹皮蝇(Hypoderma lineatum)，Linognathus ovillus (body louse)，Linognathus pedalis(foot louse)，牛颚虱(Linognathusvituli)，绿蝇属(Luciliaspp.)，羊蜱蝇(Melophagus ovinus)，家蝇(Musca spp.)，羊狂蝇(Oestrus ovis)，虱(Pediculus spp.)，白蛉(Phlebotomu spp.)，伏蝇(Phormia regina)，Psorophora spp.(mosquito)，Pthirus spp.(lice)，猪蝽(Reduvius spp.)，蚋(Simulium spp.)，牛管虱(Solenopotes capillatus)，厩螯蝇(Stomoxys calcitrans)，虻(Tabanus spp.)，粉甲属(Tenebriospp.)，椎猎蝽(Triatoma spp.)。
在一种优选的实施方式中，本发明涉及抑制鳞翅目易感昆虫的方法，包含向植物施用昆虫灭活有效量的根据本发明的式(1B)化合物。本发明的另一种优选实施方式涉及抑制动物中双翅目biting flies的方法，包含将害虫抑制有效量的式(1B)化合物对动物口服、肠胃外或局部给药。本发明的另一种优选实施方式涉及抑制螨目(Acarina)螨的方法，包含向螨所在地施用螨灭活量的式(1B)化合物。
可能的话，本文所公开化合物的酸加成盐也可用于生产农业产品。这些盐例如可用于分离和纯化式(1A)化合物。另外，这些盐有些提高了水溶性。酸加成盐可以从所公开的式(1A)化合物制备，其中R4是碱性含氮糖分子，例如forosamine。化合物的盐是利用本领域技术人员熟知的标准盐制备技术制备的。特别有用的酸加成盐包括但不限于通过与有机酸和无机酸的标准反应所生成的盐，酸例如硫酸、盐酸、磷酸、乙酸、琥珀酸、柠檬酸、乳酸、马来酸、富马酸、胆酸、扑酸(pamoicacid)、粘酸、谷氨酸、樟脑酸、戊二酸、乙醇酸、苯二甲酸、酒石酸、甲酸、月桂酸、硬脂酸、水杨酸、甲磺酸、苯磺酸、山梨酸、苦味酸、苯甲酸、肉桂酸等。
昆虫筛选
烟草蛾(Heliothis virescens)和贪夜蛾(Spodopteralittoralis)饲喂生物测定法
为了比较供试化合物对卵与幼虫阶段的Heliothis virescens或Spodoptera littoralis的杀虫活性，向每种样本加入50μl 1∶1丙酮∶水溶液，然后利用轨道摇动器溶解一小时。然后将每种所得样本溶液(50，120，或250ppm)点在96孔微量滴定板的小孔内，每孔含有基于人工琼脂的鳞翅目饲料(改性Shorey饲料，Southland Products，Lake Village，AR)。每种样本一式三份。使平板干燥达约4小时，遮盖，以备第二天侵染。将处理过的平板的每个小孔用3-5枚H.virescens或S.littoralis的卵(0-2日龄)侵染。然后用棉絮盖上平板，用微量平板盖密封。将处理过的平板倒置于恒温箱(80+％rh)内达六至七天。培育期之后，利用双目显微镜根据死亡率将平板分级。每种样本的数据以三份平板的平均死亡率表示。所选择的化合物的结果报告在表XI中。
表XI
 甜菜夜蛾  烟草蛾
 饲料(6天)  饲料(6天)
  化合物  比率(ppm)   死亡率(％)  比率(ppm)   死亡率(％)
  1   50   100   50   100
  5   50   100   50   100
  6   50   100   50   100
  32   50   100   50   100
  33   50   100   50   100
  34   50   100   50   100
  37   50   100   50   100
  40   50   93   50   100
  41   50   100   50   100
  43   50   80   50   33
  44   50   100   50   100
  137   120   100   120   100
  141   120   67   120   100
  163   120   100   120   100
杀虫组合物
式(1B)化合物以组合物的方式施用，这也是本发明的一部分。这些组合物在植物学上可接受的惰性载体中包含昆虫-或螨-灭活量的式(1B)化合物。活性组分、即式(1B)化合物可以作为单一的式(1B)化合物、两种或多种式(1B)化合物的混合物或任意式(1B)化合物与产生它的发酵培养基的干燥部分的混合物而存在。
组合物是按照农业或害虫控制领域常规的工艺和配方制备的，但由于一种或多种本发明化合物的存在，这些工艺和配方也是新颖的和重要的。组合物可以是浓缩的制剂，使用时分散在水中，或者是粉剂、诱饵或颗粒剂的形式，使用时无需进一步处理。
施用化合物或粗的干燥物的分散系通常是从化合物或粗产物的浓缩制剂制备的水悬液或乳液。水溶性或者水可悬浮性或可乳化性制剂是固体、可湿性粉剂或液体，已知为可乳化的浓缩物或水悬液。可湿性粉剂可以被聚集或压缩形成水可分散性颗粒。这些颗粒包含化合物或粗的干燥物、惰性载体和表面活性剂的混合物。化合物或粗的干燥物的浓度通常在约0.1至约90重量％之间。惰性载体通常是硅镁粘土、蒙脱土和硅藻土或纯化硅酸盐。
表面活性剂通常占可湿性粉剂的约0.5％至约10％，其中的表面活性剂通常是磺酸化木质素、缩合萘磺酸盐、萘磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基磺酸盐或非离子表面活性剂，例如烷基酚的环氧乙烷加成物或其混合物。
所要求保护的化合物的可乳化浓缩物通常为约50至约500克化合物每升液体，等于约10％至约50％，溶解在惰性载体中，后者是水不可混溶性溶剂与乳化剂的混合物。有机溶剂包括有机物，例如二甲苯，和石油级分，例如石油的高沸点萘属与烯属部分，包括重石脑油和芳族石脑油。还可以使用其他有机物，例如萜烯溶剂-松香衍生物、脂族酮，例如环己酮，和复合醇。用于可乳化浓缩物的乳化剂通常是混合的离子和/或非离子表面活性剂，例如本文提到的那些或它们的等价物。
水悬液可以制成含有本发明的水不溶性化合物，其中这些化合物分散在水性赋形剂中的浓度通常在约5至约50重量％的范围内。悬液是这样制备的，即微细研磨化合物，剧烈混合在水、表面活性剂与分散剂的赋形剂中，如本文所述。根据需要，还可以采用惰性成分，例如无机盐和合成或天然树胶，以增加水性赋形剂的密度和/或粘度。
沉淀性流体可以这样制备，将活性分子溶于水可混溶性溶剂和表面活性剂或表面活性聚合物中。在将这些制剂与水混合时，活性化合物沉淀出来，而表面活性剂控制所得微晶沉淀的大小。晶体的大小可以通过选择特定的聚合物与表面活性剂混合物加以控制。
这些化合物还可以作为颗粒状组合物施用于土壤。颗粒状组合物通常含有约0.5至约10重量％式(1B)化合物。化合物是分散在惰性载体中的，后者通常是粘土或等价物。一般而言，颗粒状组合物是这样制备的，将化合物溶于适合的溶剂，涂在颗粒状载体上，后者已被加工成所需的粒径。粒径通常在约0.5mm至3mm之间。颗粒状组合物还可以这样制备，使载体与化合物形成面团或糊，干燥混合物，再将面团或糊粉碎成所需的粒径。
这些化合物还可以与适当的有机溶剂混合。有机溶剂通常是广泛用在农业中的温和石油。这些组合通常被用作喷雾剂。更普遍地，将化合物作为在液体载体中的分散系而施用，其中该液体载体是水。化合物还可以以气雾剂组合物的方式施用。化合物是溶解在惰性载体中的，该载体是产生压力的推进剂混合物。气雾剂组合物是包装在容器内的，其中通过雾化阀分配混合物。推进剂混合物含有低沸点卤代烃(它们可以与有机溶剂相混合)或用惰性气体或气态烃施加压力的水悬液。
向昆虫和螨所在地施用化合物的量不是关键，本领域技术人员容易确定之。一般而言，浓度从约10ppm至约5,000ppm的式(1B)化合物可提供所需的控制效果。对作物而言，例如大豆和棉花，施用比率为约0.01至约1kg/ha，其中在5至50gal/A喷雾制剂中施用化合物。化合物可以被施用于任何为昆虫或螨所栖息的场所。这类场所通常是棉花、大豆与蔬菜作物、水果树、坚果树、葡萄藤、房屋和观赏植物。
通过加入其他活性成分可以扩大根据本发明的组合物的作用，例如杀昆虫的、杀螨的和/或杀线虫的成分。例如，可以将一种或多种下列化合物与本发明化合物适当地组合：有机磷化合物，例如高灭磷、谷硫磷、硫线磷、壤虫氯磷、毒死蜱、蝇毒磷、dematon、内吸磷、二嗪农、敌敌畏、乐果、EPN、erthoate、灭克磷、氧嘧啶磷、克线磷、杀螟松、丰索磷、倍硫磷、地虫磷、安果、噻唑酮磷、蚜螨磷(庚虫磷)、马来硫磷、甲胺磷、甲基对硫磷(甲基一六0五)、速灭磷、久效磷、对硫磷(一六0五)、甲拌磷、伏杀磷、亚胺硫磷、磷胺、乙丙磷威、肟硫磷(腈肟磷)、丙溴磷、丙虫磷、烯虫磷、丙硫磷、甲基虫螨磷、乙基虫螨磷、喹硫磷(喹_磷)、硫灭克磷(乙丙硫磷)、嘧丙磷、双硫磷、特丁磷、杀虫畏、thiafenox、二甲硫吸磷(甲基乙拌磷)、三唑磷和敌百虫；氨基甲酸酯类，例如涕灭威、_虫威、丙硫克百威、杀虫磺、BPMC、氧丁叉威(butoxycarbocim)、甲萘威(西维因)、呋喃丹(虫螨威)、丁硫克百威、除线威、苯虫威、丁苯威、呋线威、灭虫威、异丙威、灭多虫、甲氨叉威、抗蚜威、猛杀威、残杀威、硫双灭多威和thiofurox；合成除虫菊酯类，例如氟酯菊酯、丙烯菊酯、β-氟氯氰菊酯、氟氯菊酯、右旋反灭虫菊酯、氟氯氰菊酯、格林奈、λ-格林奈、γ-格林奈、氯氰菊酯、α-氯氰菊酯、ζ-氯氰菊酯、溴氰菊酯、高氰戊菊酯、杀灭菊酯、五氟苯菊酯、甲氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟氯苯菊酯、氯氟胺氰戊菊酯、τ-氯氟胺氰戊菊酯、卤醚菊酯、氯菊酯、protrifenbute、灭虫菊、灭虫硅醚、七氟菊酯、胺菊酯、四溴菊酯、对鱼类安全的类除虫菊酯，例如醚菊酯、天然除虫菊酯类、胺菊酯、S-反丙烯除虫菊、五氟苯菊酯和炔酮菊酯；酰基脲、其他类型的昆虫生长调节剂和昆虫激素类似物，例如噻嗪酮、chromfenozide、定虫隆、伏虫脲(氟脲杀)、双氧威、氟虫脲、特丁苯酰肼、氟铃脲、蒙五一二、氟丙氧脲、蒙五一五、甲氧苯酰肼、双苯氟脲、蚊蝇醚、伏虫隆和双苯酰肼、N-[3，5-二氯-2-氟-4-(1，1，2，3，3，3-六氟丙氧基)苯基]-N’-(2，6-二氟苯甲酰基)脲；类新烟碱和其他烟碱类，例如吡虫清、AKD-1022、巴丹、TI-435、clothiamidin、MTI-446、dinotefuran、吡虫啉、烟碱、硝胺烯啶、thiamethoxam、thiacloprid；大环内酯，例如阿凡曼菌素、米尔倍霉素、或多杀菌素，例如阿巴美丁、伊维菌素、米尔倍霉素、emamectin benzoate和spinosad；和其他杀昆虫、杀螨、杀软体动物与杀线虫的化合物或活性成分，例如阿耳德林、虫螨脒、艾扎丁、唑环锡、联苯肼酯、溴螨酯、氯苯甲脒、氯唑虫清、chlofentezine、乙酯杀螨醇、氯丹、三环锡、灭蝇胺、DDT、三氯杀螨醇、狄氏剂、DNOC、硫丹、ethoxazole、喹螨醚、杀螨锡、唑螨酯、β-唑螨酯、锐劲特、氟苯亚胺噻唑、噻螨酮、IKI-220、_二唑虫、林丹、灭虫威、蜗牛敌、甲氧滴滴涕、neem、石油与植物油、哒螨酮、拒嗪酮、嘧胺苯醚、鱼藤酮、S-1812、S-9539、spirodiclofen、硫磺、吡螨胺、三氯杀螨砜、唑蚜威、昆虫活性的植物提取物、含有昆虫活性线虫的制备物、可从枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、核多角体病毒或其他经过遗传修饰或天然生物得到的制备物，以及增效剂，例如胡椒基丁醚、sesamax、safroxan和十二烷基咪唑，和吞噬刺激剂，例如葫芦素、糖和Coax。
关于“协同性杀虫剂混合物”的WO 00/56156公开了某些已知多杀菌素化合物与烟碱型乙酰胆碱受体激动剂或拮抗剂的组合控制动物害虫的用途。这类化合物特别优选的实例是吡虫啉、吡虫清、thiamethoxam、硝胺烯啶、clothiamidin、dinotefuran、thiaclopyrid和化合物
Figure C0280843700401
上述烟碱型乙酰胆碱受体激动剂与拮抗剂与丁烯基多杀菌素化合物的混合物类似地可用于控制动物害虫。
关于“活性成分的组合”的WO 00/35282公开了spinosad与下列成分的组合控制昆虫和真菌的用途：A)杀真菌活性化合物，选自由苯菌灵、托布津、噻二唑素、氟酰胺、呋吡唑灵、fumoxadone、mealaxyl、mefluoxam、腈嘧菌酯、叉氨苯酰胺、capropamide、dicyclocymet、三环唑和噻菌灵组成的系列，和B)杀虫活性化合物，选自由下式化合物组成的系列：
其中用丁烯基多杀菌素化合物代替spinosad的相似混合物类似地可用于控制昆虫和真菌。
关于“活性成分的组合”的WO 00/35286公开了spinosad与下列成分的组合控制动物害虫和真菌的用途：A)选自由下式化合物组成的组的化合物：
Figure C0280843700411
和B)1-[(6-氯-3-吡啶基)-甲基]-N-硝基-2-咪唑烷亚胺。其中用丁烯基多杀菌素化合物代替spinosad的相似混合物类似地可用于控制动物害虫和真菌。
关于“多杀菌素作为土壤杀虫剂的用途”的WO 99/60856公开了某些已知的多杀菌素用于处理种子和用于经由土壤施用于植物或者通过灌溉控制昆虫的用途。丁烯基多杀菌素化合物能够类似地用于处理种子和用于经由土壤施用于植物或者通过灌溉控制昆虫。
关于“大环内酯在害虫控制中的用途”公开了多杀菌素控制转基因作物害虫的用途、多杀菌素保护植物繁殖材料和后来形成的植物器官不被害虫攻击的用途、和多杀菌素控制树木害虫和软体动物的用途。本发明的丁烯基多杀菌素化合物也能够用于这些目的。
动物保健应用
本发明的化合物也可用于动物的处理，以控制节肢动物，即昆虫和蛛形纲动物，它们是动物上的害虫。这些节肢动物害虫通常攻击宿主的外(“体外”)表面；控制这类害虫的药物被称为“杀体外寄生虫剂”。所有动物都受这类害虫的攻击，不过在脊椎动物宿主中问题最严重。人类是很多寄生虫潜在的宿主，在热带地区和环境卫生差的地区，寄生虫感染是医药实践中的常见问题。大量家畜也容易受到寄生虫的攻击，例如牛、绵羊、猪、山羊、水牛(buffalo)、水牛(water buffalo)、鹿、兔、鸡、火鸡、鸭、鹅、鸵鸟等。马和其他娱乐动物也受到寄生虫的攻击，还有貂和其他毛皮动物，以及大鼠、小鼠和其他用于实验室和研究的动物。宠物也容易受到寄生虫的攻击，例如狗和猫，由于它们与人的密切关系，这类寄生虫感染问题也见于陪伴它们的人。鱼、甲壳纲和其他水生物种也会受到寄生虫的攻击。简而言之，寄生虫感染的宿主基本上牵涉全部动物。
由体外寄生虫侵染所带来的经济代价是巨大的。在家畜领域，动物的饲养效率和生长速度都降低了。奶和羊毛产量也受影响，并殃及羊毛、兽皮和毛皮。并使动物易于受到继发微生物感染和进一步寄生虫攻击。即使对健康和生产不是非常有害，体外寄生虫也导致明显的不适。
尽管有大量杀寄生虫剂已投入使用，它们面临多种问题，包括活性范围有限、环境毒性、反复处理的需要和在很多情况下被体外寄生虫耐受。因此，仍然需要新的杀体外寄生虫剂。
式(1B)化合物为控制体外寄生虫而在医疗设备中提供一种新的工具。在这种实施方式中，本发明涉及抑制或杀死宿主动物上的节肢动物害虫的方法，包含使害虫与有效量的本发明化合物接触。
式(1B)化合物可以用于控制广泛的节肢动物，包括各种蝇类与蝇幼虫、跳蚤、虱、螨和蜱。在化合物与害虫接触时，实现了化合物的杀体外寄生虫活性。接触可以是在卵、幼虫、成虫或其他生命阶段。“接触”包括化合物被害虫摄取。
用于投递杀体外寄生虫剂的技术是本领域技术人员熟知的。一般而言，将本发明化合物施用于动物的外表面，由此它在化合物的有效期内接触已经存在于宿主上的害虫以及到达宿主体上的害虫。通常，化合物被配制成液体制剂，喷洒在动物表面上或者倾倒在动物表面上。另一种常规的处理方式是“浸渍”，由此使牛基本上浸入杀体外寄生虫剂的稀溶液进行处理。对有些宿主和害虫而言，制剂可以是粉剂，将其撒在宿主上，或者是香波或霜剂，将其用在动物的洗浴期间。猫和狗上的颈圈也被用作向动物表面直接投递杀体外寄生虫剂的途径。
在另一种实施方式中，本发明的化合物可以利用耳部标签释放给动物，这是由US 4,265,876所公开的投递方法。
在另一种技术中，将杀体外寄生虫剂施用于动物频繁出现的位置，以便由此使害虫与化合物接触，如同直接施用于宿主。向宠物寝具施用是熟知的，也可向地毯施用。对牛而言，撒布袋是熟知的。它们位于牛必然与药袋摩擦之处，使害虫与本发明化合物接触。
在另外一种实施方式中，本发明化合物可以用于控制牛和其他动物粪便中的昆虫和蛛形纲动物。在这种实施方式中，化合物被口服给药，穿过肠道，出现在粪便中。控制粪便中的害虫可间接保护动物不被害虫侵染。
按照本领域技术人员已知的方式，将化合物配制成杀体外寄生虫剂。一般而言，制剂将包括本发明的化合物和一种或多种生理学上可接受的助剂。制剂包括浓缩形式，其中本发明活性成分的浓度为0.001至98.0％，其余成分是生理学上可接受的载体。这类制剂、尤其是本发明化合物少于50％的那些有时可以直接使用，但是这些制剂也可以用其他生理学上可接受的载体稀释，形成更稀的处理制剂。后一制剂可以包括更少浓度的活性成分，从0.001至0.1％。
人类药物应用
本发明的化合物也可用作人用药物，以控制寄生虫，例如虱。化合物例如可以用在WO 00/01347所公开的制剂中，用于控制虱子。
虱目或吸血虱是见于几乎所有哺乳动物的寄生虫。在虱目得到确认的15个科中，有两个科即虱科和Pthiridae见于人类。Pediculushumanus是虱科中感染人类的唯一一种。它包括头虱Pediculushumanus capitis；和体虱或衣虱Pediculus humanus humanus，有时称Pediculus corporis。阴虱Pthirus pubis是不同的一种虱，是Pthiridae中感染人类的唯一一种。本文所用的术语“人虱”包括Pediculus humanus或Pthirus pubis的成员。
因此，本发明在一方面提供灭虱/杀卵(抗虱)制剂，用于控制人类中虱侵染，其中包含多杀菌素或其生理学上可接受的衍生物或盐作为活性成分和生理学上可接受的载体。尤其有用的本发明制剂是头发护理制剂。尤其有用的头发护理制剂是香波。本发明还提供使用这些制剂控制人虱种类的方法。这些制剂和方法控制虱子的方式比已知抗虱制剂和方法更安全、更有效。
本发明的抗虱制剂可以按多种方式配制。特别有用的制剂是由WO00/01347所公开的香波、调理剂和洗剂类型。
当用在香波制剂、头发护理制剂或洗剂中时，多杀菌素组分的存在水平为约0.1％至约30％，优选约1％至约10％。
所函盖的具体实施方式包括：
A.控制人类中虱侵染的制剂，包含式1或2化合物或其生理学上可接受的衍生物或盐作为活性成分(其中R5是具有式4a至4i之一的基团)，和生理学上可接受的载体。
B.实施方式A的制剂，它是头发护理制剂。
C.灭虱香波，包含：
(a)约0.1％至约30％式1或2化合物或其生理学上可接受的衍生物或盐(其中R5是具有式4a至4i之一的基团)；
(b)约5％至约30％合成表面活性剂；
(c)约1％至约7％酰胺；和
(d)水。
D.实施方式C的香波，其中该合成表面活性剂是阴离子型、两性型、阳离子型、两性离子型或非离子型的，或其混合物。
E.实施方式D的香波，其中该酰胺是椰油单乙醇酰胺、椰油二乙醇酰胺或其混合物。
F.实施方式D的香波，其中另外包含约1％至约10％不挥发性硅酮材料。
G.实施方式F的香波，其中该不挥发性硅酮是聚烷基硅氧烷、聚烷基芳基硅氧烷、聚醚硅氧烷共聚物或其混合物，它在25℃下的粘度为约100厘泊至约150,000,000厘泊。
H.实施方式G的香波，另外包含约0.5％至约5％悬浮剂，选自由具有针样或小板样结构的结晶性两亲材料、聚合材料、粘土、发烟金属氧化物(fumed metal oxides)及其混合物组成的组。
I.实施方式H的香波，其中该悬浮剂是结晶性两亲材料，选自由脂肪酸的长链C16-C22烷醇酰胺、长链C16-C22酰基衍生物及其混合物组成的组。
J.实施方式I的香波，其中该悬浮剂是乙二醇二酯。
K.实施方式D的香波，其中多杀菌素或其衍生物或盐的含量水平为约0.25％至约1.5％。
L.控制人类中虱侵染的方法，包含向人局部给以实施方式A的制剂。
M.实施方式L的方法，其中该虱侵染是Pediculus humanuscapitis。
N.实施方式L的方法，其中该虱侵染是Pediculus humanushumans。
O.实施方式L的方法，其中该虱侵染是Pthirus pubis。
P.处理人头发以杀死并协助除去虱及其卵的方法，包含下列步骤：
(a)向湿润的头发施用约10g至约30g制剂，该制剂包含式1或2化合物或其生理学上可接受的衍生物或盐(其中R5是具有式4a至4i之一的基团)，和生理学上可接受的载体；
(b)使制剂作用于头发和头皮；
(c)将制剂留在头发和头皮上达约6-10分钟；
(d)用水冲洗，从头发上除去制剂。
Q.式1或2化合物或其生理学上可接受的衍生物或盐或含有二者之一的制剂的用途(其中R5是具有式4a至4i之一的基团)，用于制备控制人虱的药物。

Claims (15)

1、式(1A)或(2A)化合物：
其中：
R3是选自如下的基团：
R4是氢原子或羟基，
R5是氢原子或甲基，
R8是1-丁烯基、1，3-丁二烯基，正丁基、3-羟基-1-丁烯基、丁-3-酮、1，2-环氧-丁基或1-丙烯基，
R9是氢原子或选自如下的基团：
Figure C028084370002C3
2.权利要求1的化合物，其选自下述表中所列的化合物：   化合物编号  名称   通式   R3   R4   R5   R8   R9   32  for-(4’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3d)   H   H   1-丁烯基   (9a)   33  for-(2’，3’，4’-tri-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3f)   H   H   1-丁烯基   (9a)   34  for-(4’-O-desmethyl-rham)-III   (1A)   (3d)   OH   H   1-丁烯基   (9a)   35  (4”-N-desmethyl-for)-(4’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3d)   H   H   1-丁烯基   (9c)   36  for-(4’-O-desmethyl-rham)-II   (1A)   (3d)   H   CH3   1-丁烯基   (9a)   37  for-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3e)   H   H   1-丁烯基   (9a)   38  24-desmethyl-rham-I   (1A)   (3a)   H   H   1-丙烯基   H   39  (4’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3d)   H   H   1-丁烯基   H   40  for-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-III   (1A)   (3e)   OH   H   1-丁烯基   (9a)   41  for-(3’-O-desmethyl-rham)-III   (1A)   (3c)   OH   H   1-丁烯基   (9a)   42  (N-oxy-for)-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3e)   H   H   1-丁烯基   (9b)   43  24-desmethyl-for-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3e)   H   H   1-丙烯基   (9a)   44  for-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-II   (1A)   (3e)   H   CH3   1-丁烯基   (9a)   137  (4”-N-desmethyl-for)-(3’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   1-丁烯基   (9c)
  化合物编号   名称   通式   R3   R4   R5   R8   R9   76   for-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-II   (1A)   (3e)   H   CH3   1-丁烯基   (9a)   141   24-hydroxy-for-(3’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   3-羟基-1-丁烯基   (9a)   143   24，25-dehydro-for-(3’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   1，3-丁二烯基   (9a)   148   24-desmethyl-for-(3’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   1-丙烯基   (9a)   161   for-(3’-O-desmetyl-rham)-IV   (2A)   (3c)   H   H   乙基   (9a)   163   for-(3’，4’-di-O-desmethyl-rham)-IV   (2A)   (3e)   H   H   乙基   (9a)   165   24-keto-22，23-dihydro-for-(3’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   丁-3-酮   (9a)   166   22，23-epoxy-for-(3’-O-desmethyl-rham)-I   (1A)   (3c)   H   H   1，2-环氧-丁基   (9a)
3、杀昆虫剂或杀螨剂组合物，其中包含昆虫-、螨-或蜱-灭活量的权利要求1或2所述化合物与植物学或生理学上可接受的载体的组合。
4、杀昆虫或杀螨方法，包含向场所施用昆虫-、螨-或蜱-灭活量的权利要求1或2所述化合物。
5、保护场所不被昆虫、螨或蜱侵染的方法，包含向场所施用昆虫-、螨-或蜱-灭活量的权利要求1或2所述化合物。
6、控制感染宿主动物的寄生虫群体的方法，包含向宿主动物体外给以杀寄生虫量的权利要求1或2所述化合物。
7、控制人类中虱侵染的制剂，包含权利要求1或2所述的化合物或其生理学上可接受的衍生物或盐作为活性成分、和生理学上可接受的载体。
8、控制人类中虱侵染的方法，包含向人局部给以权利要求1或2所述的化合物。
9、制备权利要求1或2所述化合物的方法，包含在浸没需氧发酵条件下、在适合的培养基中培养选自NRRL 30424、NRRL 30423、NRRL 30422、NRRL 30438、NRRL 30421和NRRL 30437的菌株或源于此的可产生权利要求1化合物的菌株，直至产生了可回收量的权利要求1化合物，以及从培养基中回收权利要求1所述化合物。
10、生物学纯的NRRL 30424培养物或源于此的可产生权利要求1或2所述化合物的菌株。
11、生物学纯的NRRL 30423培养物或源于此的可产生权利要求1或2所述化合物的菌株。
12、生物学纯的NRRL 30422培养物或源于此的可产生权利要求1或2所述化合物的菌株。
13、生物学纯的NRRL 30438培养物或源于此的可产生权利要求1或2所述化合物的菌株。
14、生物学纯的NRRL 30421培养物或源于此的可产生权利要求1或2所述化合物的菌株。
15、生物学纯的NRRL 30437培养物或源于此的可产生权利要求1或2所述化合物的菌株。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110776536A (zh) * 2019-09-20 2020-02-11 国家粮食和物资储备局科学研究院 一种从须糖多孢菌发酵液中提取丁烯基多杀菌素的工艺

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI275592B (en) * 2001-03-21 2007-03-11 Dow Agrosciences Llc Synthetic derivatives of 21-butenyl and related spinosyns
DE10320505A1 (de) 2003-05-08 2004-11-25 Bayer Healthcare Ag Mittel zum Bekämpfen von Parasiten an Tieren
TW201031327A (en) 2008-11-14 2010-09-01 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations having insecticidal and acaricidal properties
CN101629203B (zh) * 2008-12-09 2010-08-11 湖南师范大学 一种多杀菌素制备工艺
CN101720766B (zh) * 2009-12-29 2012-08-22 华南农业大学 茶皂素与多杀菌素的杀虫组合物
US9913824B2 (en) * 2010-01-25 2018-03-13 Elanco Us Inc. Methods for internally controlling or treating equine bot larvae
ES2514341T3 (es) * 2010-02-19 2014-10-28 Sumitomo Chemical Company, Limited Composición de control de plagas
CN102190694B (zh) * 2010-03-12 2015-09-09 中南大学 多杀菌素衍生物、制备方法及其作为杀虫剂的用途
CN102286579B (zh) * 2011-08-05 2013-05-22 牡丹江佰佳信生物科技有限公司 制备多杀霉素的方法及其所使用的培养基
TW201416077A (zh) * 2012-07-26 2014-05-01 Lilly Co Eli 單一劑量口服調配物及使用殺外寄生蟲劑賜諾殺（ｓｐｉｎｏｓａｄ）以治療貓之方法
CN105283465A (zh) * 2013-06-06 2016-01-27 伊莱利利公司 杀寄生虫的化合物、方法和制剂
WO2014194503A1 (en) * 2013-06-06 2014-12-11 Eli Lilly And Company Parasiticidal compounds, methods, and formulations
KR101716795B1 (ko) * 2014-07-31 2017-03-16 우석대학교 산학협력단 스피노사드 생산 효율이 우수한 신규 사카로폴리스포라 스피노사(Saccharopolyspora spinosa) wsp8209 및 이를 이용한 스피노사드 생산방법
EP4079744A1 (en) 2021-04-23 2022-10-26 Acies Bio d.o.o. Novel spinosyn prodrugs
WO2022223779A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 Acies Bio D.O.O. Novel spinosyn prodrugs
EP4101858A1 (en) 2021-06-08 2022-12-14 Acies Bio d.o.o. Novel spinosyn compounds

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0850733A (ja) * 1995-08-11 1996-02-20 Alps Electric Co Ltd 光学装置
CN1191541A (zh) * 1995-06-14 1998-08-26 道农业科学公司 对刺糖多孢菌素化合物的合成修饰

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PE5591A1 (es) * 1988-12-19 1991-02-15 Lilly Co Eli Un nuevo grupo de compuestos de macrolida
US5362634A (en) 1989-10-30 1994-11-08 Dowelanco Process for producing A83543 compounds
CN1073483A (zh) * 1991-11-08 1993-06-23 道伊兰科公司 一种发酵杀虫剂化合物及其制备方法
BR9406587A (pt) 1993-03-12 1996-01-02 Dowelanco Novos compostos a83543 e processo para a produção dos mesmos
US6001981A (en) 1996-06-13 1999-12-14 Dow Agrosciences Llc Synthetic modification of Spinosyn compounds
MXPA01010524A (es) * 1999-04-16 2002-03-14 Kosan Biosciences Inc Agentes macrolidos anti-infecciosos.
AU783734B2 (en) * 1999-09-13 2005-12-01 Dow Agrosciences Llc Pesticidal macrolides
TWI275592B (en) * 2001-03-21 2007-03-11 Dow Agrosciences Llc Synthetic derivatives of 21-butenyl and related spinosyns

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1191541A (zh) * 1995-06-14 1998-08-26 道农业科学公司 对刺糖多孢菌素化合物的合成修饰
JPH0850733A (ja) * 1995-08-11 1996-02-20 Alps Electric Co Ltd 光学装置

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110776536A (zh) * 2019-09-20 2020-02-11 国家粮食和物资储备局科学研究院 一种从须糖多孢菌发酵液中提取丁烯基多杀菌素的工艺

Also Published As

Publication number Publication date
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