CN1305895C - 混合酸酐法合成胸腺五肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种混合酸酐法液相合成胸腺五肽的方法，它解决了目前胸腺五肽生产中存在的不能大规模合成胸腺五肽的技术问题。其合成过程有二肽合成-三肽合成-四肽合成-五肽合成-粗品生成；它是以N-甲基吗啉为催化剂，采用氯甲酸乙酯为活化剂，活化被保护的氨基酸形成高反应活性的混合酸酐，与氨基端裸露的氨基酸或肽反应来合成胸腺五肽；各肽合成过程包括混合酸酐的生成-过滤-减压浓缩-酸碱洗涤-干燥除水-各肽生成-脱保护基的过程，合成五肽后，脱掉保护基团，生成粗品胸腺五肽，再纯化；本发明的合成过程，避免使用任何昂贵的接肽缩合试剂；最终产物纯度高，兼具液相与固相合成法的中间产物最小程度纯化和易形成规模化生产的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种合成活性多肽原料药的方法，尤其是涉及一种混合酸酐法液相合成胸腺五肽的方法。
背景技术
胸腺五肽简称TP5，其英文名为Thymopentin，多肽化学组成为N-精氨酰-赖氨酰-天门冬氨酰-酪氨酸，是非常重要的免疫促进类活性多肽药物，能够显著提高人的免疫力，帮助人类有效的抵抗多种疾病，同时对多种疾病都有显著而确切的疗效，市场前景广阔，具有很好的经济和社会效益。但由于在合成技术上的限制，其生产成本很高，产品数量有限，导致市售药物价格居高不下，难以真正发挥其效益。传统的胸腺五肽合成均由固相合成法完成，成本高，难于规模化生产，产物纯化难度很大，有时甚至用高压液相色谱法也难于达到所希望的纯度。
(1)胸腺五肽(TP-5)的化学合成，国内外绝大多数采用固相法。有少数研究单位和制药企业采用液相法，但都是以DCC(二环己基碳二亚胺)为缩合剂，而该法的缺点是产物纯化较困难，规模化生产难度大，而且由于DCC容易导致生产人员过敏，也不是一个好的绿色的合成方法。
(2)固相法合成胸腺五肽技术存在的主要问题是：合成成本非常高、规模小、粗产品纯化困难，大量使用对人体有害的DCC作为接肽缩合试剂等。
(3)与本发明相近的技术是：CN1442428A《一锅法液相合成胸腺五肽的工艺》。一锅法液相合成胸腺五肽。该方法以Boc或Fmoc保护的氨基酸衍生物为原料，经过二肽——三肽——四肽——五肽合成——粗肽纯化，合成过程中间产物不需要过多的纯化。所说的粗产品纯化是用弱酸性和强酸性阳离子交换树脂纯化TP-5粗肽；所说的肽合成是用的缩合剂BOP和HOBt；所说的合成方法未明确指明能够用于规模化生产TP-5；所说的纯化纯度为95％。
发明内容
本发明的目的在于提供一种混合酸酐法合成胸腺五肽的方法，解决目前胸腺五肽生产中存在的不能大规模合成胸腺五肽的技术问题。
本发明混合酸酐法合成胸腺五肽的方法，过程有二肽合成-三肽合成-四肽合成-五肽合成-粗品生成；它是以N-甲基吗啉为催化剂，采用氯甲酸烷基酯为活化剂，活化被保护的氨基酸形成高反应活性的混合酸酐，与氨基端裸露的氨基酸或肽反应来合成胸腺五肽；各肽合成中均采用N-甲基吗啉为催化剂，氯甲酸乙酯为活化剂。各肽合成过程包括混合酸酐的生成-过滤-减压浓缩-酸碱洗涤-干燥除水-各肽生成-脱保护基的过程，合成五肽后，脱掉保护基团，生成粗品胸腺五肽，再纯化；所述被保护的氨基酸按各肽合成顺序是酪氨酸酯与缬氨酸的混合酸酐反应得到二肽、天门冬氨酸的混合酸酐与二肽反应得到三肽、赖氨酸的混合酸酐与三肽反应得到四肽、精氨酸的混合酸酐与四肽反应得到五肽粗品，所用氨基酸的2-氨基都采用叔丁氧甲酰基(Boc)保护，精氨酸的2-氨基由叔丁氧甲酰基(Boc)或苄氧甲酰基(Cbz)保护，天门冬氨酸的侧链羧基采用苄酯保护，赖氨酸的侧链氨基用2-氯苄氧甲酰基保护，精氨酸的侧链胍基用硝基保护，酪氨酸的酚羟基用苄基保护，羧基用酯基保护；酪氨酸酯为苄醚酪氨酸甲酯、苄酯。混合酸酐的生成过程中的反应温度为-10～-15℃；减压浓缩-酸碱洗涤-干燥除水过程为减压浓缩后加入乙酸乙酯，分别用稀盐酸、碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥；各肽合成过程中的反应温度为-15～0℃。脱保护基过程为，加入三氟乙酸脱除叔丁氧甲酰基(Boc)保护基团，减压浓缩后加入有机溶剂溶解，有机溶剂可以是二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯，用冷的氢氧化钠洗涤有机溶剂，再用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后浓缩，再用四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺溶剂溶解并冷藏备用，其中溶剂优选四氢呋喃；所述粗品生成是指合成五肽后，用氟化氢切割-皂化或用催化氢化-三氟乙酸化-皂化脱掉所有保护基团。
粗品生成过程中所用氟化氢切割-皂化法脱掉所有保护基团的过程为，对于合成的五肽化合物N-叔丁氧甲酰基-(N-硝基)-精氨酰-(2-氯苄氧甲酰基)-赖氨酰-(苄酯)天门冬氨酰-缬氨酰-(苄醚)酪氨酸酯或N-苄氧甲酰基-(N-硝基)-精氨酰-(2-氯苄氧甲酰基)-赖氨酰-(苄酯)-天门冬氨酰-缬氨酰-(苄醚)酪氨酸酯{R3-Arg(NO2)-Lys(2-Cl-Cbz)-Asp(OBn)-Val-Tyr(OBn)OR2，R2＝甲基(Me)、乙基(Et)、苄基(Bn)，R3叔丁氧甲酰基(Boc)、苄氧甲酰基(Cbz)}，当R2＝Bn基时，经氟化氢切割直接得到胸腺五肽的粗品；当R2＝Me、Et时，经氟化氢切割后，脱掉除甲酯与乙酯以外的所有保护基团；再用氢氧化钠的甲醇水溶液皂化1-2小时，脱掉酪氨酸残基上的甲基或乙基保护基，得到粗的胸腺五肽化合物。
粗品生成过程中所用催化氢化-三氟乙酸化-皂化脱掉所有保护基团的过程为，对于合成的五肽化合物N-叔丁氧甲酰基-(N-硝基)-精氨酰-(2-氯苄氧甲酰基)-赖氨酰-(苄酯)天门冬氨酰-缬氨酰-(苄醚)酪氨酸酯或N-苄氧甲酰基-(N-硝基)-精氨酰-(2-氯苄氧甲酰基)-赖氨酰-(苄酯)-天门冬氨酰-缬氨酰-(苄醚)酪氨酸酯{R3-Arg(NO2)-Lys(2-Cl-Cbz)-Asp(OBn)-Val-Tyr(OBn)OR2，R2＝Me、Et、Bn，R3＝Boc、Cbz}，当R3＝Cbz，R2＝Bn时，采用催化氢化脱掉苄基(Bn)、硝基、苄氧甲酰基(Cbz)、2-氯苄氧甲酰基(2-Cl-z)保护基团，可以直接得到粗肽产品；当R3＝叔丁氧甲酰基(Boc)时，催化氢化后再用三氟乙酸脱掉叔丁氧甲酰基(Boc)；在R2＝Me、Et时，经过氢化或三氟乙酸化脱掉其他的保护基团之后，最后用甲醇-氢氧化钠皂化1-2小时，脱掉酪氨酸残基的甲基或乙基保护基，得到五肽的粗肽化合物。催化氢化过程中，催化剂用量为粗肽的10％的钯/碳(Pd/C)，所用的钯/碳中金属钯的重量百分含量为10％，氢气压力为40个大气压力。
在粗品生成后的纯化过程为，用制备性高压液相色谱纯化，得到纯度大于98％的胸腺五肽水溶液，然后用冷冻干燥机冷冻干燥得到白色冻干粉状物固体，纯度可以达到98％以上。
所用的各种保护氨基酸均能很容易从商家购得。
混合酸酐法合成胸腺五肽的的具体步骤为：
A、使Boc-缬氨酸与氯甲酸乙酯在N-甲基吗啉催化的条件下，以四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，在-10～-15℃反应生成Boc-缬氨酸与氯甲酸乙酯的混合酸酐，使该混合酸酐与酪氨酸酯在-15～0℃反应，用高压液相色谱检测反应结果(酪氨酸酯峰消失)，滤出N-甲基吗啉盐酸盐，有机溶剂用酸、碱洗涤后，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩除去有机溶剂，可以得到粗产率大于100％的二肽化合物，其纯度大于92％(最高可达98％)。该二肽化合物不必进一步纯化，直接用于下面的反应。
B、将二肽化合物直接与三氟乙酸反应，脱掉Boc保护基，减压浓缩抽干三氟乙酸后，加入二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯有机溶剂溶解，洗涤、干燥、浓缩，用四氢呋喃等溶剂溶解后冷却备用。
天门冬氨酸同样地用N-甲基吗啉催化，与氯甲酸乙酯反应就可以得到混合酸酐，该混合酸酐与上述脱除保护基的预冷的二肽化合物反应可以得到三肽化阿合物3，不经过纯化就可以直接用于合成下面的四肽化合物。
C、四肽化合物4和五肽化合物5的合成可以用合成三肽化合物3的同样方法获得。即用同样的办法可以依次地接上氨基酸赖氨酸和精氨酸。
本发明用混合酸酐法液相合成胸腺五肽，高压液相纯化五肽粗品，简单快捷，同时，该方法由于避免了使用传统的DCC法缩合合成胸腺五肽，反应速度相应的比DCC法快且产率高，该法合成过程中几乎所有溶剂都能回收再使用，大大降低对环境的污染，从而实现生产过程的绿色环保化(DCC对人的皮肤有强烈的致敏性和副产物难于纯化等缺点)，是一个高效的、绿色的胸腺五肽的可大规模化合成的方法。提高合成产率和产品纯度，从而降低生产成本和产品价格，中间产物纯度高，不需复杂的纯化过程可直接用于下一步的合成，原材料廉价易得，能大大简化纯化过程，兼具液相与固相合成法的中间产物最小程度纯化和易形成规模化生产的优点。
本发明与已有的发明和生产技术线比较，本发明合成过程不需要复杂的纯化，肽合成用混合酸酐法，而避免使用任何昂贵的接肽缩合试剂；纯化是用高压液相色谱法，最终产物的纯度高，终产物的粗肽经过制备性高压液相色谱纯化、冷冻干燥机冷冻干燥后，纯度可以达到98％以上，符合药检要求的白色冻干粉状胸腺五肽产品。
附图说明
图1是本发明的工艺流程图。
具体实施方式
下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
说明书中用到的缩略词：
Asp 天门冬氨酸
Arg 精氨酸
Bn 苄基
Boc 叔丁氧甲酰基
n-Bu 正丁基
iBu 异丁基
C 碳
Cbz 苄氧甲酰基
2-Cl-z 2-氯苄氧甲酰基
ClCOOR1 氯甲酸酯
DMF N，N-二甲基甲酰氨
Et 乙基
HF 氟化氢
H+ 3O 酸水
HPLC 高压液相色谱
Lys 赖氨酸
Me 甲基
NaOH 氢氧化钠
NMM N-甲基吗啉
NO2 硝基
Pd 钯
Pr 丙基
iPr 异丙基
TFA 三氟乙酸
TLC 薄板层析
TP5 胸腺五肽
Tyr 酪氨酸
Val 缬氨酸
附图中的附图标记为：
1Boc-缬氨酸，2二肽化合物，3三肽化合物，4四肽化合物，5五肽化合物。
实施例1二肽化合物2{Boc-Val-Tyr(OBn)OR2，R2＝Me}的合成
把1.69克的Boc-Val溶解于20毫升的四氢呋喃中，加入1.0毫升的N-甲基吗啉，在-10～-15℃条件下向其中加入0.75毫升的氯甲酸乙酯，加样完毕后，使反应在同样温度下反应5～6分钟之后，将1.93克酪氨酸苄醚甲酯盐酸盐的DMF溶液5毫升在-15～0℃加入反应瓶内，再向其中加入1.0毫升的N-甲基吗啉，加样完毕后，反应自然恢复至室温，并继续反应6小时，至反应完全。抽滤，滤出N-甲基吗啉盐酸盐，将滤液减压浓缩后，乙酸乙酯溶解，依次用5％稀盐酸、5％的碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干。粗产率大于100％，HPLC分析纯度大于90％。该二肽化合物2不必纯化可直接用于三肽的合成。
实施例2二肽化合物2{Boc-Val-Tyr(OBn)OR2，R2＝Bn}的合成
把1.69克的Boc-Val溶解于15毫升的四氢呋喃中，加入1.0毫升的N-甲基吗啉，在-10～-15℃条件下向其中加入0.75毫升的氯甲酸乙酯，加样完毕后，使反应在同样温度下反应5～6分钟之后，将3.28克酪氨酸苄醚苄酯对甲基苯磺酸盐的DMF溶液5毫升在-10～0℃反应条件下加入反应瓶内，再向其中加入1.0毫升的N-甲基吗啉，加样完毕后，反应自然恢复至室温，并继续反应6小时，至反应完全。抽滤，将滤液减压浓缩后，乙酸乙酯溶解，依次用5％盐酸、5％碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干。粗产率大于100％，HPLC分析纯度大于90％。该二肽化合物2不必纯化可直接用于三肽的合成。
实施例3三肽化合物3{Boc-Asp(OBn)-Val-Tyr(OBn)OR2，R2＝Me}的合成。
将实施例1中合成的二肽化合物1.45克溶解于15毫升纯三氟乙酸内，室温反应15分钟后，减压浓缩至干，用二氯甲烷溶解，用冷的10％氢氧化钠稀释至PH为9.0，饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，用四氢呋喃溶解后，放置冰箱备用。
将1.16克Boc-Asp溶解于四氢呋喃中，向其中加入0.4毫升N-甲基吗啉，反应瓶用冰盐浴冷却后，加入0.34毫升的氯甲酸乙酯，反应10分钟左右，再向反应瓶内加入上述预冷的脱Boc-保护后的二肽的四氢呋喃溶液，将反应自然恢复至室温，并继续搅拌6小时左右，用TLC和HPLC检测反应至完全结束后萃灭反应。布氏漏斗抽滤、减压浓缩并回收四氢呋喃，用乙酸乙酯溶解，依次用5％盐酸、冷的5％氢氧化钠和饱和食盐水洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干(粗产率大于100％)，HPLC分析纯度大于90％。不经过纯化就可以直接用于合成四肽化合物。
实施例4四肽化合物4{Boc-Lys(2-Cl-Cbz)-Asp(OBn)-Val-Tyr(OBn)OR2，R2＝Me}的全合成。
将1.4克三肽化合物与15毫升三氟乙酸反应脱去Boc保护基，用10％冷的氢氧化钠洗涤有机溶剂至PH值为9.0，再用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后浓缩，再用四氢呋喃溶解并冷藏备用；
使0.92克Boc-(2-氯苄氧甲酰基)-赖氨酸在N-甲基吗啉0.24毫升催化下与0.21毫升氯甲酸乙酯-10～-15℃反应合成混合酸酐，该混合酸酐与上述脱去Boc保护基的三肽化合物于-15～0℃反应，经过常规化的后处理即得四肽化合物N-Boc-(2-氯苄氧甲酰基)-赖氨酰-(苄酯)天门冬氨酰-缬氨酰-(苄醚)酪氨酸酯；粗产率大于100％。该化合物无需进一步纯化即可直接用于合成后面的五肽化合物。
实施例5五肽化合物5{R3-Arg(NO2)-Lys(2-Cl-Cbz)-Asp(OBn)-Val-Tyr-(OBn)OR2，R2＝Me，R3＝Boc}的合成。
将1.98克四肽化合物与15毫升三氟乙酸反应脱去Boc保护基，用10％冷的氢氧化钠洗涤有机溶剂至PH值为9，再用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后浓缩，再用四氢呋喃溶解并冷藏备用；
使0.7克Boc-(N-硝基)-精氨酸在0.26毫升N-甲基吗啉催化下与0.21毫升氯甲酸乙酯反应合成混合酸酐，该混合酸酐与前述脱去Boc保护基的四肽化合物反应，经过常规化的后处理即得五肽化合物N-Boc-(N-硝基)-精氨酰-(2-氯苄氧甲酰基)-赖氨酰-(苄酯)-天门冬氨酰-缬氨酰-(苄醚)酪氨酸酯，粗产率大于100％。
实施例6胸腺五肽TP5粗肽的合成与纯化。
把1.2克五肽化合物5{R3-Arg(NO2)-Lys(2-Cl-Cbz)-Asp(OBn)-Val-Tyr(OBn)OR2，R2＝Me，R3＝Boc}溶解于20毫升甲醇中，通入预冷的HF气体(于HF气体切割装置中进行)约2小时，用氮气流吹走并减压抽除剩余的HF气体将反应物装入100毫升的圆底烧瓶中，向其中于0℃条件下加入2M的氢氧化钠2ml，恢复至室温反应1小时，HPLC检测皂化反应完全后，用5％稀盐酸调PH值为6.0左右，用乙醚50毫升萃取两次，除去脂溶性杂质后，碱压浓缩除去部分甲醇，制备性高压液相色谱纯化(C18柱，乙腈/水梯度洗脱)。冷冻干燥机冷冻干燥得TP5为白色冻干粉状固体588毫克。1H NMR(300MHz，DCCl3)δ(ppm)：0.635～0.657(m，6H，C(CH3)2)，1.241(m，2H，CH2)，1.446～1.583(m，6H，3CH2)，1.727～1.782(m，4H，2CH2)，2.608～2.652(m，2H，NCH2)，2.763～2.815(m，2H，NCH2)，2.969～3.037(m，3H，NCH，PhCH2)，3.863(t，2H，NCH，J＝9Hz)，4.161(t，1H，NCH，J＝6.6Hz)，4.402～4.585(m，3H，CH2，NCH)，4.689～4.726(m，1H，NCH)，6.642(d，2H，PhH，J＝8.4Hz)，6.955(d，2H，PhH，J＝8.4Hz)。FAB-MS：(M+1)＝680，ESI-MS：679。
实施例7胸腺五肽TP5粗肽的合成与纯化。
把1.2克五肽化合物5{R3-Arg(NO2)-Lys(2-Cl-Cbz)-Asp(OBn)-Val-Tyr-(OBn)OR2，R2＝Bn，R3＝Boc}溶解于20毫升甲醇中，通入预冷的HF气体(于HF气体切割装置中进行)约2小时，用氮气流吹走并减压抽除剩余的HF气体将反应物装入100毫升的圆底烧瓶中，用20毫升水溶解，用乙醚15毫升萃取两次，除去脂溶性杂质后，制备性高压液相色谱纯化(C18柱，乙腈/水梯度洗脱)。冷冻干燥机冷冻干燥得TP5为白色冻干粉状固体592毫克。1H NMR(300MHz，DCCl3)δ(ppm)：0.635～0.657(m，6H，C(CH3)2)，1.241(m，2H，CH2)，1.446～1.583(m，6H，3CH2)，1.727～1.782(m，4H，2CH2)，2.608～2.652(m，2H，NCH2)，2.763～2.815(m，2H，NCH2)，2.969～3.037(m，3H，NCH，PhCH2)，3.863(t，2H，NCH，J＝9Hz)，4.161(t，1H，NCH，J＝6.6Hz)，4.402～4.585(m，3H，CH2，NCH)，4.689～4.726(m，1H，NCH)，6.642(d，2H，PhH，J＝8.4Hz)，6.955(d，2H，PhH，J＝8.4Hz)。FAB-MS：(M+1)＝680，ESI-MS：679。
实施例8胸腺五肽TP5粗肽的合成与纯化。
在高压反应釜中，把1.22克五肽化合物5{R3-Arg(NO2)-Lys(2-Cl-Cbz)-Asp(OBn)-Val-Tyr(OBn)OR2，R2＝Me，R3＝Cbz}溶解于20毫升甲醇中，加入10％的Pd/C 120毫克，通入氢气使压力为40个大气压，在室温下反应10个小时后滤掉Pd/C，减压浓缩干甲醇，溶解于水中，将反应物装入100毫升的圆底烧瓶中，向其中于0℃条件下加入2M的氢氧化钠2ml，恢复至室温反应1小时，HPLC检测皂化反应完全后，用5％稀盐酸调PH值为6.0左右，用乙醚50毫升萃取两次，除去脂溶性杂质后，碱压浓缩除去部分甲醇，制备性高压液相色谱纯化(C18柱，乙腈/水梯度洗脱)。冷冻干燥机冷冻干燥得TP5为白色冻干粉状固体610毫克。1H NMR(300MHz，DCCl3)δ(ppm)：0.635～0.657(m，6H，C(CH3)2)，1.241(m，2H，CH2)，1.446～1.583(m，6H，3CH2)，1.727～1.782(m，4H，2CH2)，2.608～2.652(m，2H，NCH2)，2.763～2.815(m，2H，NCH2)，2.969～3.037(m，3H，NCH，PhCH2)，3.863(t，2H，NCH，J＝9Hz)，4.161(t，1H，NCH，J＝6.6Hz)，4.402～4.585(m，3H，CH2，NCH)，4.689～4.726(m，1H，NCH)，6.642(d，2H，PhH，J＝8.4Hz)，6.955(d，2H，PhH，J＝8.4Hz)。FAB-MS：(M+1)＝680，ESI-MS：679。
实施例9胸腺五肽TP5粗肽的合成与纯化。
在高压反应釜中，把1.22克五肽化合物5{R3-Arg(NO2)-Lys(2-Cl-Cbz)-Asp(OBn)-Val-Tyr(OBn)OR2，R2＝Bn，R3＝Cbz}溶解于20毫升甲醇中，加入10％的Pd/C 120毫克，通入氢气使压力为40个大气压，在室温下反应10个小时后滤掉Pd/C，减压浓缩干甲醇，溶解于20毫升水中，用乙醚15毫升萃取两次，除去脂溶性杂质后，制备性高压液相色谱纯化(C18柱，乙腈/水梯度洗脱)。冷冻干燥机冷冻干燥得TP5为白色冻干粉状固体604毫克。1HNMR(300MHz，DCCl3)δ(ppm)：0.635～0.657(m，6H，C(CH3)2)，1.241(m，2H，CH2)，1.446～1.583(m，6H，3CH2)，1.727～1.782(m，4H，2CH2)，2.608～2.652(m，2H，NCH2)，2.763～2.815(m，2H，NCH2)，2.969～3.037(m，3H，NCH，PhCH2)，3.863(t，2H，NCH，J＝9Hz)，4.161(t，1H，NCH，J＝6.6Hz)，4.402～4.585(m，3H，CH2，NCH)，4.689～4.726(m，1H，NCH)，6.642(d，2H，PhH，J＝8.4Hz)，6.955(d，2H，PhH，J＝8.4Hz)。FAB-MS：(M+1)＝680，ESI-MS：679。
Claims (5)
1、一种混合酸酐法合成胸腺五肽的方法，过程有二肽合成—三肽合成—四肽合成—五肽合成—粗品生成；其特征在于：以N-甲基吗啉为催化剂，采用氯甲酸乙酯为活化剂，活化被保护的氨基酸形成高反应活性的混合酸酐，与氨基端裸露的氨基酸或肽反应来合成胸腺五肽；各肽合成中均采用N-甲基吗啉为催化剂，氯甲酸乙酯为活化剂，各肽合成过程包括混合酸酐的生成—过滤—减压浓缩—酸碱洗涤—干燥除水—各肽生成—脱保护基的过程，合成五肽后，脱掉保护基团，生成粗品胸腺五肽，再纯化；所述被保护的氨基酸按各肽合成顺序是酪氨酸酯与缬氨酸的混合酸酐反应得到二肽、天门冬氨酸的混合酸酐与二肽反应得到三肽、赖氨酸的混合酸酐与三肽反应得到四肽、精氨酸的混合酸酐与四肽反应得到五肽粗品，所用氨基酸的2-氨基都采用叔丁氧甲酰基(Boc)保护，精氨酸的2-氨基由叔丁氧甲酰基(Boc)或苄氧甲酰基(Cbz)保护，天门冬氨酸的侧链羧基采用苄酯保护，赖氨酸的侧链氨基用2-氯苄氧甲酰基保护，精氨酸的侧链胍基用硝基保护，酪氨酸的酚羟基用苄基保护，羧基用酯基保护；减压浓缩—酸碱洗涤—干燥除水过程为：减压浓缩干后加入乙酸乙酯，分别用稀盐酸、碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥；脱保护基过程为，加入三氟乙酸脱除叔丁氧甲酰基(Boc)保护基团，减压浓缩后加入有机溶剂溶解，有机溶剂可以是二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯，用冷的氢氧化钠洗涤有机溶剂，再用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后浓缩，再用四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺溶剂溶解并冷藏备用；所述粗品生成是指合成五肽后，用氟化氢切割—皂化或用催化氢化—三氟乙酸化—皂化脱掉所有保护基团；在粗品生成后的纯化过程为，用制备性高压液相色谱纯化，得到胸腺五肽水溶液，然后冷冻干燥；混合酸酐的生成过程中的反应温度为-10～-15℃；各肽合成过程中的反应温度为-15～0℃。
2、按照权利要求1所述的混合酸酐法合成胸腺五肽的方法，其特征在于：所述酪氨酸酯为苄醚酪氨酸甲酯、苄酯。
3、按照权利要求1或2所述的混合酸酐法合成胸腺五肽的方法，其特征在于：所述粗品生成过程中所用氟化氢切割—皂化法脱掉所有保护基团的过程为，对于合成的五肽化合物N-叔丁氧甲酰基-(N-硝基)-精氨酰-(2-氯苄氧甲酰基)-赖氨酰-(苄酯)天门冬氨酰-缬氨酰-(苄醚)酪氨酸酯或N-苄氧甲酰基-(N-硝基)-精氨酰-(2-氯苄氧甲酰基)-赖氨酰-(苄酯)-天门冬氨酰-缬氨酰-(苄醚)酪氨酸酯{R3-Arg(NO2)-Lys(2-Cl-Cbz)-Asp(OBn)-Val-Tyr(OBn)OR2，R2＝甲基(Me)、乙基(Et)、苄基(Bn)，R3＝叔丁氧甲酰基(Boc)、苄氧甲酰基(Cbz)}，当R2＝Bn基时，经氟化氢切割直接得到胸腺五肽的粗品；当R2＝Me、Et时，经氟化氢切割后，脱掉除甲酯或乙酯以外的所有保护基团，再用氢氧化钠的甲醇水溶液皂化1-2小时，脱掉酪氨酸残基上的甲基或乙基保护基，得到粗的胸腺五肽化合物。
4、按照权利要求3所述的混合酸酐法合成胸腺五肽的方法，其特征在于：所述粗品生成过程中所用催化氢化—三氟乙酸化—皂化脱掉所有保护基团的过程为，对于合成的五肽化合物N-叔丁氧甲酰基-(N-硝基)-精氨酰-(2-氯苄氧甲酰基)-赖氨酰—(苄酯)天门冬氨酰-缬氨酰-(苄醚)酪氨酸酯或N-苄氧甲酰基-(N-硝基)-精氨酰-(2-氯苄氧甲酰基)-赖氨酰-(苄酯)-天门冬氨酰-缬氨酰-(苄醚)酪氨酸酯{R3-Arg(NO2)-Lys(2-Cl-Cbz)-Asp(OBn)-Val-Tyr(OBn)OR2，R2＝Me、Et、Bn，R3＝Boc、Cbz}，当R3＝Cbz，R2＝Bn时，采用催化氢化脱掉苄基(Bn)、硝基、苄氧甲酰基(Cbz)、2—氯苄氧甲酰基(2-Cl-z)保护基团，可以直接得到粗肽产品；当R3＝叔丁氧甲酰基(Boc)时，催化氢化后再用三氟乙酸脱掉叔丁氧甲酰基(Boc)；在R2＝Me、Et时，经过氢化或三氟乙酸化脱掉其他的保护基团之后，最后可用甲醇—氢氧化钠皂化1-2小时，脱掉酪氨酸残基的甲基或乙基保护基，得到五肽的粗肽化合物。
5、按照权利要求4所述的混合酸酐法合成胸腺五肽的方法，其特征在于：所述催化氢化过程中，催化剂用量为粗品重量的10％的钯/碳(Pd/C)，所用的钯/碳中金属钯的重量百分含量为10％；所用氢气压力为40个大气压力。
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