CN1293069C - 制备新的刺糖多孢菌素衍生物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及制备在C-21位被1-羟基-乙基基团取代的新的刺糖多孢菌素衍生物的方法，涉及该类型新的刺糖多孢菌素衍生物本身，及其在制备新的刺糖多孢菌素类化合物中的应用。

Description

制备新的刺糖多孢菌素衍生物的方法
本发明涉及制备在C-21位被1-羟基-乙基基团取代的新的刺糖多孢菌素(spinosyn)衍生物的方法，涉及该类型新的刺糖多孢菌素衍生物本身，及其用于制备新的刺糖多孢菌素类化合物的应用。
刺糖多孢菌素类化合物是已知化合物。刺糖多孢菌素类化合物是由放线菌刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)的培养物产生的发酵产物。天然刺糖多孢菌素类化合物由具有12-元大环内酯环和5，6，5-顺式-反式-反式-三环的四环聚酮骨架(苷元)与D-forosamine和2，3，4-三-O-甲基-L-鼠李糖部分组成(Kirst等人，1991，Tetrahedron Letters，32：4839)。有20种以上不同的天然刺糖多孢菌素，现有技术已经描述了“A83543络合物”(参见WO 97/00265、WO 94/20518和WO93/09126)。例如，EP-A 375316描述了刺糖多孢菌素A、B、C、D、E、F、G、H和J。WO 93/09126公开了刺糖多孢菌素L、M、N、Q、R、S和T。WO 94/20518描述了刺糖多孢菌素K、O、P、U、V、W和Y及其衍生物。这些化合物的不同之处在于：在四环骨架、D-forosamine糖部分或2，3，4-三-O-甲基-L-鼠李糖糖部分上的一个或多个甲基的取代。类似地，从刺糖多孢菌肉汤培养基中也分离出了与D-forosamine糖部分反应的17-假苷元。
由刺糖多孢菌产生的A83543络合物的主要成分是刺糖多孢菌素A和刺糖多孢菌素D，它们是产物Spinosad的基本成分(参见PesticideManual，British Crop Protection Council，11thEd.，1997，p.1272和Dow Elanco Trade Magazine Down to Earth，Vol.52，NO.1，1997以及其中所引用的文献)。
如果C-17位的氨基糖部分不存在，则化合物称为刺糖多孢菌素A、D等17-假苷元；如果C-9位的中性糖不存在，则化合物称为刺糖多孢菌素A、D等9-假苷元。在C-9和C-17位没有这两个糖残基的刺糖多孢菌素称为刺糖多孢菌素苷元。
刺糖多孢菌素适于防治蜘蛛纲动物、线虫纲动物、外寄生物(参见WO 01/11962、WO 01/11963、WO 01/11964)和昆虫，特别是鳞翅目和双翅目昆虫。此外，刺糖多孢菌素的技术应用还有环境健康，这类物质也具有有吸引力的毒理学性质。
然而，预计目前用刺糖多孢菌素防治的动物害虫，特别是外寄生物，或植物害虫有可能发展出对这些市售活性物质的耐药性。因此，生产可替代目前用于防治害虫的刺糖多孢菌素的新的生物活性刺糖多孢菌素衍生物非常重要。
最近，已经使用多孢菌(LW107129)来产生在大环骨架的C-8位有羟基，并且已知是杀虫化合物的刺糖多孢菌素的特定天然苷元衍生物(参见WO 01/19840)。虽然已经对刺糖多孢菌素进行了很多修饰(参见WO 97/00265)，但是在大环骨架的C-21位的甲基和乙基上进行衍生化没有引起多少的注意力。尽管在C-21位的烷基官能化是有利的，特别是对于衍生化反应是有利的，但是已知其取代基在C-21位具有羟基的刺糖多孢菌素衍生物很少。例如，只是在最近才有人描述了在C-21位被3-羟基-1-丁烯基取代的刺糖多孢菌素衍生物，如果适当的话，这些衍生物还在上述C-8位携带羟基，并具有杀虫作用(参见WO01/19840)。
虽然已有人描述了用于制备刺糖多孢菌素衍生物的化学合成方法(参见Martynow，J.G.和Kirst，H.A.，1994，J.Org.Chem.，59：1548)，但是迄今为止没有任何关于上述在C-21位具有1-羟基-乙基的刺糖多孢菌素衍生物的化学合成的知识。
本发明的目的是提供可用于选择性和/或立体有择性地制备在C-21位具有1-羟基-乙基的新刺糖多孢菌素衍生物的适当方法。
通过提供制备通式(I)化合物的方法，本发明的目的得以实现，
其中
A-B是任一下列基团：-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-、-H2C-CH2-或-H2C-CH(CH3)-，
D是基团
Figure C0281851500231
R1是氢或氨基糖，且
R2是氢或糖，
所述方法包括将通式(II)化合物
Figure C0281851500232
其中A-B、D和R1如上所定义，
与微生物在含水营养培养基中于需氧条件下接触，或者与由微生物制得的酶提取物或与一种或多种从微生物中分离的酶接触。
通过使用微生物或其酶的生物转化，所述原料化合物被选择性和/或立体有择性地转化成在C-21位被1-羟基-乙基取代的刺糖多孢菌素衍生物。
本文所用术语“刺糖多孢菌素衍生物”还包括刺糖多孢菌素苷元化合物，即具有刺糖多孢菌素的大环内酯骨架，但是没有糖基团的化合物。
优选使用定义如下的通式(II)化合物作为原料化合物，
其中，在情形(1)中，
A-B是任一下列基团：-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-、-H2C-CH2-或-H2C-CH(CH3)-，且
D是基团
Figure C0281851500241
R1是式1a所示氨基糖
Figure C0281851500242
且R2是式2a所示糖
Figure C0281851500243
或者其中，在情形(2)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-H2C-CH2-，且
D如上所定义，
R1是上述式1a所示氨基糖，且
R2是氢或式2b、2c、2d、2e或2f所示糖
或者其中，在情形(3)中，
A-B是是任一下列基团：-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-或-H2C-CH2-，且
D如上所定义，
R1是氢或式1b所示氨基糖，
Figure C0281851500252
且R2是氢或上述式2a所示糖，
或者其中，在情形(4)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D如上所定义，
R1是上述式1a所示氨基糖，且
R2是式2g、2h、2i、2j或2k所示糖，
或者其中，在情形(5)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-H2C-CH2-，且
D如上所定义，
R1是上述式1a所示氨基糖，且
R2是式2l或2m所示糖，
Figure C0281851500271
或者其中，在情形(6)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D如上所定义，
R1是氢或上述式1b所示氨基糖或式1c所示氨基糖，
Figure C0281851500272
且R2是上述式2b、2c、2g或2h所示糖或式2n所示糖，
Figure C0281851500273
或者其中，在情形(7)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是上述式1a所示氨基糖，且
R2是式2o所示糖，
或者其中，在情形(8)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是上述式1b所示氨基糖，且
R2是上述式2d、2i或2j所示糖或式2p所示糖，
或者其中，在情形(9)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是氢或上述式1c所示氨基糖，且
R2是上述式2i或2p所示糖，
或者其中，在情形(10)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是式1d、1e或1f所示氨基糖，
且R2是上述2a所示糖，
或者其中，在情形(11)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D是基团
Figure C0281851500292
R1是氢或上述式1a所示氨基糖。
特别优选使用定义如下的通式(II)化合物作为原料化合物，其中，在情形(12)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D是基团
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是式2a、2g或2h所示糖，
或者其中，在情形(13)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是氢或式2d、2e、2l、2m或2o所示糖，
或者其中，在情形(14)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D如上所定义，
R1是氢或式1b所示氨基糖，且
R2是氢或式2a所示糖，
或者，其中A-B、D和R1如情形(11)中所定义。
非常特别优选使用定义如下的通式(II)化合物作为原料化合物，其中，在情形(15)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D是基团
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是式2a所示糖，
或者其中，在情形(16)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是氢或式2d、2l或2m所示糖，
或者，其中A-B、D和R1如情形(11)中所定义。
最优选使用定义如下的通式(II)化合物作为原料化合物，
其中，在情形(17)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D是基团
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是式2a所示糖，
或者其中，在情形(18)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是氢，且
R2是氢。
本发明还涉及通式(I)化合物，其中A-B、D和R1如上所定义。
本文所用所写“Me”代表甲基；缩写“Et”代表乙基。
本发明方法可用于形成旋光性、立体异构体形式以及非对映体形式的通式(I)化合物。
本发明式(I)化合物可以呈立体异构体形式，它们可以相互是像和镜像(对映体)，或者相互不是像和镜像(非对映体)。本发明涉及对映体和非对映体及其各自的混合物。可通过已知方法将外消旋形式以及非对映体拆分成立体异构一致的组分。如果适当的话，可使用自身已知的方法来相互转化所述异构体。
其中R1是式1a-1e所示氨基糖的本发明化合物可形成盐。可依据标准成盐方法来形成盐。例如，用合适的酸将本发明化合物中和来形成酸加成盐。可使用的代表性酸加成盐是例如通过与下列酸反应而形成的盐：其他无机酸例如硫酸、盐酸、氢溴酸、磷酸，或有机羧酸例如乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、琥珀酸、乳酸、甲酸、马来酸、樟脑酸、邻苯二甲酸、乙醇酸、戊二酸、硬脂酸、水杨酸、山梨酸、肉桂酸、苦味酸、苯甲酸，或有机磺酸例如甲磺酸和对甲苯磺酸，或碱性氨基酸例如天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸等。
可用作本发明方法的原料化合物的通式(II)化合物已描述过(参见Creemer L.C.等人，1998，J.Antibiotics 51(8)：795-800；Sparks T.C.等人，1998，J.Econ.Entomol.91(6)：1277-1283；Sparks T.C.等人，2000，Pestic.Biochem.Physiol.67(3)：187-197；Paquette L.A.等人，1998，J.Am.Chem.Soc.120(11)：2553-2563；Evans D.A.等人，1993，J.Am.Chem.Soc.115(11)：4497-4513；Crouse G.D.等人，2001，Pest.Manag.Sci.57(2)：177-185；Creemer L.C.等人，2000，J.Antibiotics 53(2)：171-178；Sparks T.C.等人，2000，Proc.-Beltwide Cotton Conf.Vol.2：1225-1229)，或者可依据WO 01/16303中描述的方法制得。类似地，可用于本发明方法的原料化合物可由适当的天然刺糖多孢菌素类化合物获得。
当使用例如式(IIa)所示刺糖多孢菌素A苷元时，本发明方法可用下列反应方案1表示：
反应方案1
文献中已描述过通过使用微生物或其酶的生物转化来将天然产物和合成化合物选择性和/或立体有择地羟基化。特别是用革兰氏阳性菌例如链霉菌属(Streptomycete)或革兰氏阴性菌例如假单胞菌属(Pseudomonas)或真菌例如镰孢属(Fusarium)的细胞和/或酶。下表中列出了含有适当酶类别，例如P-450单加氧酶类的微生物的实例：
  生物/酶   化合物类别   参考文献
  郝氏链霉菌(Streptomyceshalstedii)   galbonolides A和B的羟基化   US 5972994
  链霉菌属MA 7065   紫杉醇和cephalomannines的羟基化   US 5756536
  玫瑰产色链霉菌(Streptomycesroseochromogenes)(Waksman保藏号3689)，链霉菌属(ATCC 11009)，和玫瑰产色链霉菌(ATCC 3347)   将11-氧代-或11β-羟基-6α-甲基孕酮羟基化为16α-羟基衍生物，其然后进行乙酰化   US 2864837
  藤黄类诺卡氏菌(Nocardioidesluteus)   6-羟基-7-去氧紫杉烷类   US 6162622
  串珠镰孢(Fusarium moniliforme)   由去氢表雄甾酮和孕烯醇酮制备7α-羟基衍生物   FR-A 2771105
  蚕白僵菌(Beauveria bassiana)   2-苯氧基丙酸   WO 95/29249
  短刺小克银汉霉(Cunninghamellablakesleena)(ATCC 8688a)   阿弗菌素的羟基化   US 4666937EP-A 194125
  睾丸酮假单胞菌(Pseudomonastestosteroni)ATCC 31492   将间羟基苯甲酸盐转化成2，3-二羟基苯甲酸盐   US 4217416
  Mortierella maculata   由compactin制备普伐他汀   WO 00/46175
  植物的NADPH细胞色素-P450还原酶   将各种不同底物羟基化   WO 93/21326
  杆菌NRRL-B-18737   由双酚烷制备双酚烷基醇   US 5132228
  门多萨假单胞菌(Pseudomonasmendocina)kr-1单加氧酶基因   将苯基化合物生物转化成苯酚化合物   WO 89/09828
  微生物或酶   制备旋光性3-羟基吡咯烷   WO 00/29606
  表达异源细胞色素-P450系统的重组Yarrowia lipolytica   孕酮生物转化成17α-羟基孕酮   WO 00/03008
  由Croton sublyratus纯化的香叶基香叶醇-18-羟化酶   将香叶基香叶醇生物转化成普劳诺托   US 5879916
依据本发明和上述反应方案1，可将其中A-B、D和R1如上所定义的通式(II)化合物与合适的微生物在含水营养培养基中于需氧条件下接触，然后分离出所需的通式(I)化合物。
也可以使用可通过常规方法由所述微生物获得的酶提取物和纯化的酶，如果适当的话在加入所需辅因子之后或用辅因子再生之后使用它们代替所述微生物。
特别是，还可以克隆决定这样的酶的生物合成的基因，并将它们在外来宿主例如大肠杆菌(Escherichia coli)中表达。这类重组细菌可立即用于生物转化。此外，还可以使用用于生物转化的、这样的重组细胞的酶提取物或纯化的蛋白，如果适当的话在加入所需辅因子或用辅因子再生之后使用它们。
对于本发明方法，优选使用放线菌，特别是链霉菌属微生物。
对于本发明方法，特别优选使用雅加达链霉菌(Streptomycesdjakartensis)、灰褐链霉菌(Streptomyces griseofuscus)、天青链霉菌(Streptomyces caelestis)、抗生链霉菌(Streptomyces antibioticus)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)或金霉素链霉菌(Streptomycesaureofaciens)的菌株。
对于本发明方法，非常特别优选使用具有下列菌株的特征的菌株：
  名称   保藏号
  雅加达链霉菌   NRRL B-12103
  灰褐链霉菌   DSM 40191
  天青链霉菌   DSM 40084
  抗生链霉菌   ATCC 11891
  灰色链霉菌   DSM 40937
  金霉素链霉菌   DSM 46447
上表中列出的菌株已再次被Deutschen Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)，MascheroderWeg 1b，D-38124Brunswick，Germany依据布达佩斯条约的要求保藏：
  名称   保藏号
  雅加达链霉菌  DSM 14327
  灰褐链霉菌  DSM 14330
  天青链霉菌  DSM 14328
  抗生链霉菌  DSM 14329
  灰色链霉菌  DSM 14331
  金霉素链霉菌  DSM 14332
实施例16中更详细地描述了这些菌株。不仅可以使用保藏的菌株自身，而且也可以使用其突变体，只要这些突变体具有所保藏的菌株的特征即可，也就是说，突变体必须还能够进行本发明的生物转化。
含水营养培养基优选含有可同化的碳源和可同化的氮源。
式(I)化合物可例如这样制得，在式(II)化合物存在下，将雅加达链霉菌、灰褐链霉菌、天青链霉菌、抗生链霉菌、灰色链霉菌或金霉素链霉菌的菌株在含水营养培养基中于需氧条件下发酵。一般将微生物在含有碳源和如果适当的话蛋白质材料的营养培养基中发酵。优选的碳源包括葡萄糖、红糖、蔗糖、甘油、淀粉、玉米淀粉、乳糖、糊精、糖蜜等。优选的氮源包括棉籽粉、酵母、自溶面包酵母、固体乳成分、大豆粉、玉米粉、胰腺或木瓜蛋白酶酪蛋白水解产物、固体蒸馏组分、动物胨的肉汤、肉和骨片段等。优选联合使用这些碳源和氮源。只要使用自来水和未纯化的成分作为培养基的组分，就无需向培养基中加入微量元素例如锌、镁、锰、钴、铁等。
通式(I)化合物的制备可在能保证微生物充分生长的任何温度下诱导。温度优选为21℃-32℃，特别优选为约28℃。式(I)化合物的最佳生成通常是在将式(II)化合物加到培养物中之后的2-4天内达到的。本发明化合物可在摇瓶和搅拌的发酵器中制备。
实施例2-9描述了用于在摇瓶中生长的优选生长条件和培养基。
可通过常规方法将作为生物转化产物的本发明化合物从培养基中分离出来。
可使用多种不同方法将本发明化合物从发酵肉汤中分离出来和纯化，例如制备凝胶色谱法、制备反相色谱法或制备吸附色谱法。可通过例如UV吸收或质谱进行检测。
本发明化合物可用于制备具有生物活性，特别是具有杀虫和杀螨活性的刺糖多孢菌素。最近有人描述了在大环内酯骨架的C-8位具有羟基的刺糖多孢菌素的特定天然苷元衍生物的生物效力(参见WO01/19840)。可提及的其它实例是在C-21位具有3-羟基-1-丁烯基的刺糖多孢菌素衍生物，它们同样在最近被描述过。如果适当的话，这些刺糖多孢菌素衍生物还可以在任何上述C-8位携带羟基，并同样具有杀虫活性(参见WO 01/19840)。
当由其中R1是氢，D是基团C＝O或C-O-R2，且R2是氢的本发明通式(I)化合物制备另外的刺糖多孢菌素衍生物时，使用合适的保护基(PG)是有利的。用于羟基的保护基(PG)的已知实例是取代的甲基醚和醚、取代的乙基醚、取代的苄基醚、甲硅烷基醚、酯、碳酸酯或磺酸酯(参见Greene T.W.，Wuts P.G.W.in Protective Groups inOrganic Synthesis；John Wiley&Sohns，Inc.1999，羟基的保护，包括1，2-和1，3-二醇)。
可提及的取代的甲基醚型保护基(PG)的实例是：甲氧基甲基(MOM)醚、甲硫基甲基(MTM)醚、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基(SMOM-OR)醚、苄氧基甲基(BOM-OR)醚、对甲氧基苄氧基甲基(PMBM-OR)醚、对硝基苄氧基甲基醚、邻硝基苄氧基甲基(NBOM-OR)醚、(4-甲氧基苯氧基)-甲基(p-AOM-OR)醚、愈创木酚甲基(GUM-OR)醚、叔丁氧基甲基醚、4-戊烯氧基甲基(POM-OR)醚、甲硅烷氧基甲基醚、2-甲氧基乙氧基-甲基(MEM-OR)醚、2，2，2-三氯乙氧基甲基醚、二(2-氯乙氧基)-甲基醚、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM-OR)醚、甲氧基甲基(MM-OR)醚。
可提及的取代的乙基醚型保护基(PG)的实例是：1-乙氧基乙基(EE-OR)醚、1-(2-氯乙氧基)乙基(Cee-OR)醚、1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]乙基(SEE-OR)醚、1-甲基-1-甲氧基乙基(MIP-OR)醚、1-甲基-1-苄氧基乙基(MBE-OR)醚、1-甲基-1-苄氧基-2-氟乙基醚、1-甲基-1-苯氧基-乙基醚、2，2，2-三氯乙基醚、1，1-二茴香基-2，2，2-三氯乙基(DATE-OR)醚、1，1，1，3，3，3-六氟-2-苯基异丙基(HIP-OR)醚、2-三甲基甲硅烷基乙基醚、2-(苄硫基)乙基醚、2-(苯基-硒基)乙基醚。可提及的醚型保护基(PG)其它实例是：四氢吡喃基(THP-OR)醚、3-溴-四氢吡喃基(3-BrTHP-OR)醚、四氢噻喃基醚、1-甲氧基-环己基醚、2-和4-吡啶甲基醚、3-甲基-2-吡啶甲基-N-氧化-醚、2-喹啉基甲基(Qm-OR)醚、1-芘基甲基醚、二苯基甲基(DPM-OR)醚、对，对′-二硝基二苯甲基(RO-DNB)醚、5-二苯并环庚基醚、三苯基甲基(Tr-OR)醚、α-萘基二苯基甲基醚、对甲氧基-苯基二苯基甲基(MMTr-OR)醚、二(对甲氧基-苯基)苯基甲基(DMTr-OR)醚、三(对甲氧基苯基)甲基(TMTr-OR)醚、4-(4′-溴-苯甲酰甲氧基)苯基二苯基甲基醚、4，4′，4″-三(4，5-二氯邻苯二甲酰亚氨基-苯基)甲基(CPTr-OR)醚、4，4′，4″-三(乙酰丙酰氧基-苯基)甲基(TLTr-OR)醚、4，4′，4″-三(苯甲酰氧基苯基)甲基(TBTr-OR)醚、4，4′-二甲氧基-3″-[N-(咪唑基甲基)]-三苯甲基(IDTr-OR)醚、4，4′-二甲氧基-3″-[N-(咪唑基-乙基)氨基甲酰基]三苯甲基(IETr-OR)醚、1，1-二(4-甲氧基-苯基)-1′-芘基甲基(Bmpm-OR)醚、9-蒽基醚、9-(9-苯基)夹氧蒽基(pixyl-OR)醚、9-(9-苯基-10-氧代)蒽基(Tritylon-醚)、4-甲氧基-四氢吡喃基(MTHP-OR)醚、4-甲氧基-四氢噻喃基醚、4-甲氧基-四氢噻喃基醚-S，S-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基(CTMP-OR)醚、1-(2-氟苯基)-4-甲氧基哌啶-4-基(Fpmp-OR)醚、1，4-二氧杂环己烷-2-基醚、四氢呋喃基醚、四氢噻吩基醚、2，3，3a，4，5，6，7，7a-八氢-7，8，8-三甲基-4，7-甲烷苯并呋喃-2-基(RO-MBF)醚、叔丁基醚、烯丙基醚、炔丙基醚、对氯苯基醚、对甲氧基苯基醚、对硝基苯基醚、2，4-二硝基-苯基(RO-DNP)醚、2，3，5，6-四氟-4-(三氟甲基)苯基醚、苄基(Bn-OR)醚。可提及的取代的苄基醚型保护基的实例是：对甲氧基苄基(MPM-OR)醚、3，4-二甲氧基-苄基(DMPM-OR)醚、邻硝基苄基醚、对硝基苄基醚、对卤代苄基醚、2，6-二氯-苄基醚、对氰基苄基醚、对苯基-苄基醚、2，6-二氟苄基醚、对氨基酰基苄基(PAB-OR)醚、对叠氮基苄基(Azb-OR)醚、4-叠氮基-3-氯苄基醚、2-三氟甲基苄基醚、对(甲基亚磺酰基)苄基(Msib-OR)醚。可提及的甲硅烷基醚型保护基(PG)的实例是：三甲基甲硅烷基(TMS-OR)醚、三乙基甲硅烷基(TES-OR)醚、三异丙基甲硅烷基(TIPS-OR)醚、二甲基异丙基甲硅烷基(IPDMS-OR)醚、二乙基异丙基甲硅烷基(DEIPS-OR)醚、二甲基己基甲硅烷基(TDS-OR)醚、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS-OR)醚、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS-OR)醚、三苄基甲硅烷基醚、三-对二甲苯基甲硅烷基醚、三苯基甲硅烷基(TPS-OR)醚、二苯基甲基甲硅烷基(DPMS-OR)醚、二-叔丁基甲基甲硅烷基(DTBMS-OR)醚、三(三甲基甲硅烷基)甲硅烷基醚(Sisyl醚)、(2-羟基苯乙烯基)-二甲基甲硅烷基(HSDMS-OR)醚、(2-羟基苯乙烯基)二异丙基甲硅烷基(HSDIS-OR)醚、叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基(TBMPS-OR)醚、叔丁氧基二苯基甲硅烷基(DPTBOS-OR)醚。可提及的酯型保护基(PG)的实例是：甲酸酯、苯甲酰基甲酸酯、乙酸酯(RO-Ac)、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯(RO-TFA)、甲氧基-乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、对氯苯氧基-乙酸酯、苯基乙酸酯、二苯基乙酸酯(DPA-OR)、烟酸酯、3-苯基丙酸酯、4-戊烯酸酯、4-氧代戊酸酯(乙酰丙酸酯)(Lev-OR)、4，4-(亚乙二硫基)-戊酸酯(RO-LevS)、5-[3-二(4-甲氧基苯基)羟基-甲基苯氧基]-乙酰丙酸酯、新戊酸酯(Pv-OR)、1-金刚烷羧酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯(Bz-OR)、对苯基-苯甲酸酯、2，4，6-三甲基苯甲酸酯(2，4，6-三甲基苯甲酸酯)、4-(甲硫基甲氧基)-丁酸酯(MTMB-OR)、2-(甲硫基甲氧基甲基)苯甲酸酯(MTMT-OR)。可提及的碳酸酯型保护基(PG)的实例是：碳酸甲基酯、甲氧基甲基碳酸酯、9-芴基甲基碳酸酯(Fmoc-OR)、乙基碳酸酯、2，2，2-三氯乙基碳酸酯(Troc-OR)、1，1-二甲基-2，2，2-三氯-乙基碳酸酯(TCBOC-OR)、2-(三甲基甲硅烷基)乙基碳酸酯(TMSEC-OR)、2-(苯基磺酰基)-乙基碳酸酯(Psec-OR)、2-(三苯基磷基)-乙基碳酸酯(Peoc-OR)、叔丁基碳酸酯(Boc-OR)、异丁基碳酸酯、乙烯基碳酸酯、烯丙基碳酸酯(Alloc-OR)、对硝基苯基碳酸酯、苄基碳酸酯(Z-OR)、对甲氧基苄基碳酸酯、3，4-二甲氧基苄基碳酸酯、邻硝基苄基碳酸酯、对硝基苄基碳酸酯、2-丹磺酰基乙基碳酸酯(Dnseoc-OR)、2-(4-硝基苯基)-乙基碳酸酯(Npeoc-OR)、2-(2，4-二硝基苯基)乙基碳酸酯(Dnpeoc-OR)。可提及的磺酸酯型保护基(PG)的实例是：烯丙基磺酸酯(Als-OR)、甲磺酸酯(Ms-OR)、苄基磺酸酯、甲苯磺酸酯(Ts-OR)、2-[(4-硝基苯基)乙基]磺酸酯(Npes-OR)。
当由上述通式(I)化合物制备另外的刺糖多孢菌素衍生物时，首先用合适的保护基，例如一种上述保护基(PG)将在C-21位的1-羟基乙基保护，以及如果适当的话，将在C-9位的羟基(其中R2＝H)保护是特别有利的。本发明推荐使用两种不同的保护基(分别是PG1和PG2)，并且这些保护基应当是适当相容的，即彼此可选择性且独立地除去。然后，通过化学合成或通过微生物的生物转化(参见US 5539089；引入基团R或R′)在C-17位的羟基上可以进行衍生化例如苷化，以生成刺糖多孢菌素衍生物(Ia-2或Ib-2)(见反应方案2和3)。
反应方案2-保护基策略(D：C-OH)
Figure C0281851500401
(i)引入-保护基(PG1、PG2)
(ii)衍生化-例如苷化(分别引入R和R′)
(iii)脱保护-保护基(PG)/或选择性地脱保护-保护基(例如PG1)
反应方案3-保护基策略(D：C＝O)
(i)引入-保护基(PG)
(ii)衍生化-例如苷化(R)
(iii)脱保护-保护基(PG)
在C-9位和分别C-17(见Ia-4)或C-17(见Ib-2)位成功地衍生化之后，可除去剩余保护基(PG)，以获得通式(I)刺糖多孢菌素衍生物。
实施例
实施例1
所用菌株
表：能够将化合物(IIa)生物转化以生成在C-21位具有1-羟基-乙基的相应衍生物(化合物(Ia))的菌株
  名称   内参考号   保藏号
  雅加达链霉菌   NRRL B-12103   DSM 14327
  灰褐链霉菌   DSM 40191   DSM 14330
  天青链霉菌   DSM 40084   DSM 14328
  抗生链霉菌   ATCC 11891   DSM 14329
  灰色链霉菌   DSM 40937   DSM 14331
  金霉素链霉菌   DSM 46447   DSM 14332
ATCC＝American Type Culture Collection，Manassas，VA，U.S.A.
DSM＝Deutschen Sammlung für Mikroorganismen und Zellkulturen，Brunswick，Germany
NRRL＝Agricultural Research Service Culture Collection，Peoria，IL，U.S.A.
实施例2
使用雅加达链霉菌NRRL B-12103的生物转化
用于由化合物(IIa)制备化合物(Ia)的生物转化方案的实例
如下所述制备生产培养物：在100mL锥形瓶内，给20ml R5A培养基各自接种50μl雅加达链霉菌NRRL B-12103孢子悬浮液(每升R5A培养基含有：103g蔗糖；0.25g K2SO4；10.12g MgCl2；10g葡萄糖；5g酵母提取物；0.1g酪蛋白氨基酸，21g MOPS缓冲液pH 6.8(KOH)，2ml微量元素溶液；微量元素溶液：(每升)40mg ZnCl2，200mg FeCl3×6H2O，10mg CuCl2×2H2O，10mg MnCl2×4H2O，10mgNa2B4O7×10H2O，10mg(NH4)6Mo7O24×4H2O；(Fernandez等人，1998，J.Bacteriol.180：4929；Hopwood等人，1985，Geneticmanipulation of Streptomyces.A laboratory manual.The John InnesFoundation，Norwich，England))。在接种之前，将培养基在121℃和1.1的过压下灭菌20分钟。将培养物在28℃和200rpm下培养。培养24小时和72小时后，分别加入1mg化合物(IIa)(100μl 10mg/ml在甲醇中的贮备液)。120小时后，停止该生物转化。通过离心(4000rpm，10分钟)除去培养基，将上清液与相同体积的甲醇混和。
实施例3
使用灰褐链霉菌的生物转化
用于由化合物(IIa)制备化合物(Ia)的生物转化方案的实例
通过实施例2的方法，使用50μl菌株灰褐链霉菌的孢子悬浮液代替菌株雅加达链霉菌NRRL B-12103来制备生产培养物。
实施例4
使用天青链霉菌的生物转化
用于由化合物(IIa)制备化合物(Ia)的生物转化方案的实例
通过实施例2的方法，使用50μl菌株天青链霉菌的孢子悬浮液代替菌株雅加达链霉菌NRRL B-12103来制备生产培养物。
实施例5
使用抗生链霉菌的生物转化
用于由化合物(IIa)制备化合物(Ia)的生物转化方案的实例
通过实施例2的方法，使用50μl菌株抗生链霉菌的孢子悬浮液代替菌株雅加达链霉菌NRRL B-12103来制备生产培养物。
实施例6
使用灰色链霉菌的生物转化
用于由化合物(IIa)制备化合物(Ia)的生物转化方案的实例
通过实施例2的方法，使用50μl菌株灰色链霉菌的孢子悬浮液代替菌株雅加达链霉菌NRRL B-12103来制备生产培养物。
实施例7
使用金霉素链霉菌的生物转化
用于由化合物(IIa)制备化合物(Ia)的生物转化方案的实例
通过实施例2的方法，使用50μl菌株金霉素链霉菌的孢子悬浮液代替菌株雅加达链霉菌NRRL B-12103来制备生产培养物。
实施例8
使用雅加达链霉菌的生物转化
用于制备在C-21位具有1-羟基-乙基的刺糖多孢菌素A[定义如下的通式(I)化合物：其中R1是式1a所示氨基糖，A-B是基团-HC＝CH-，且D是基团-CO-R2，其中R2是式2a所示糖]的生物转化方案的实例。
在100mL锥形瓶内，通过给20ml R5A培养基(R5A培养基：见实施例2)各自接种50μl雅加达链霉菌NRRL B-12103孢子悬浮液来制备生产培养物。在接种之前，将培养基在121℃和1.1巴的过压下灭菌20分钟。将培养物在28℃和200rpm下培养。培养48小时后，加入2mg刺糖多孢菌素A(100μl 10mg/ml在甲醇中的贮备液)。96小时后，停止该生物转化。通过离心(4000rpm，10分钟)除去培养基，将上清液与相同体积的甲醇混和。
实施例9
使用雅加达链霉菌的生物转化
用于制备在C-21位具有1-羟基-乙基的17-假-刺糖多孢菌素苷元A[定义如下的通式(I)化合物：其中R1是氢，A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且D是基团-CO-R2，其中R2是式2a所示糖]的生物转化方案的实例
在100mL锥形瓶内，通过给20ml R5A培养基(R5A培养基：见实施例2)各自接种50μl雅加达链霉菌NRRL B-12103孢子悬浮液来制备生产培养物。在接种之前，将培养基在121℃和1.1巴的过压下灭菌20分钟。将培养物在28℃和200rpm下培养。培养48小时后，加入2mg 17-假-刺糖多孢菌素苷元A或D(100μl10mg/ml在甲醇中的贮备液)。96小时后，停止该生物转化。通过离心(4000rpm，10分钟)除去培养基，将上清液与相同体积的甲醇混和。
实施例10
分离通过用雅加达链霉菌NRRL B-12103进行生物转化而制得的化合物(Ia)
用于后处理培养物上清液和浓缩化合物(Ia)的方案的实例
将35ml已加入甲醇的实施例2的培养物上清液减少至约20ml，与10ml水混和。然后用每次为10ml的乙酸乙酯萃取2次，将合并的有机相浓缩至干，把残余物重悬在400μl甲醇中。经由HPLC/MS(实施例11)分析等份试样的该溶液。
实施例11
分析HPLC/UV/MS
用于通过HPLC/UV/MS分析后处理的培养物上清液的方案的实例
将等份试样的、后处理的用雅加达链霉菌生物转化的培养物上清液(实施例2)在反相HPLC柱(2.1×250mm)上进行色谱处理，用已加入乙酸铵(25mmol/l)的水与已加入乙酸铵(25mmol/l)的甲醇以250μl/分钟的流速进行梯度洗脱。使用UV(245nm)和在四极质谱仪上进行的电子喷雾(正)质谱进行检测。
化合物(Ia)的分子量为418道尔顿，并且是在这些条件下作为m/z＝436的[M+NH4]+离子检测的。约32.5分钟的保留时间短于约为37.5分钟的化合物(IIa)的保留时间。
实施例12
从用雅加达链霉菌NRRL B-12103生物转化的摇动器培养物中提取和制备性地制备纯形式的化合物(Ia)
依据实施例2中描述的方法，让15份20ml菌株(雅加达链霉菌)培养物在100ml锥形瓶中生长，将培养物上清液合并以提取化合物(Ia)。如实施例11所述将合并的培养物上清液后处理。把残余物重悬在约3ml甲醇中。在分析反相HPLC柱(4.6×250mm)上色谱分离化合物(Ia)，用25mmol/l乙酸铵水溶液与25mmol/l乙酸铵的甲醇溶液进行梯度洗脱。每次洗脱注射100μl等份试样。在245nm进行UV-检测。手工收集级份，合并，蒸发至干。产量约为1mg。
实施例13
验证化合物(Ia)的结构
将制备分离的化合物(Ia)重悬在CD3OD中，通过核磁共振(NMR)来研究。记录1H-NMR、COSY、TOCSY、HSQC和HMBC光谱。下表中总结了这些结果。
在CD3OD中的化合物(Ia)的NMR数据(500MHz)
  位置   δC[ppm]   δXH[ppm]   Mult.   J[Hz]   Int.
  12345678910111213141516   17435494312913142417340475115014620650   -2.483.122.933.495.845.912.231.461.834.341.242.340.942.857.00--3.22 dddddddmddddbr.mmddmmmmmsbr.m   -14/314/510/5/210/3/31013/7   -1H1H1H1H1H1H1H1H1H1H1H1H1H1H1H--1H
  位置   δC[ppm]   δH[ppm]   Mult.   J[Hz]   Int.
  1718192021222324   7336232779701816   3.491.431.481.281.711.481.634.703.651.041.15   mmmmmmmdddmdd 10/5/277   1H1H1H1H1H1H1H1H1H3H3H
Figure C0281851500461
实施例14
分析检测所生成的羟基化刺糖多孢菌素A
用0.01N NaOH溶液将20ml已加入甲醇的实施例8的生物转化培养物上清液调节至pH5，浓缩至约5ml含水残余物，然后用每次为5ml的乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相在氮气流气氛下浓缩至干，重悬在200μl甲醇中。通过在具有电子喷雾正离子化的串接质谱仪上进行的LC/MS和LC/MS/MS来研究该等份试样的提取物。
在提取物的LC/MS色谱图中，在低浓度下，峰在40.0分钟出现，具有[M+H]+m/z＝748.5。该离子的子离子的光谱具有m/z＝142的片段，其是Forosamine单元被除去的特征反映。
实施例15
分析检测所生成的羟基化17-假-刺糖多孢菌素苷元
用0.01N NaOH溶液将20ml已加入甲醇的实施例9的生物转化培养物上清液调节至pH 5，浓缩至约5ml含水残余物，然后用每次为5ml的乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相在氮气流气氛下浓缩至干，重悬在200μl甲醇中。通过在具有电子喷雾正离子化的串接质谱仪上进行的LC/MS和LC/MS/MS来研究该等份试样的提取物。
在提取物的LC/MS色谱图中，在低浓度下，峰在38.8分钟出现，具有[M+NH4]+m/z＝624.4。这相应于17-假-刺糖多孢菌素苷元的羟基化的产物。该离子的子离子的光谱具有m/z＝189的片段，其是三甲基鼠李糖单元被除去的特征反映。
实施例16
所有菌株的特征描述
a)雅加达链霉菌NRRL B-12103：
该菌株是作为尼达霉素的生产者，以登记号NRRL B-12103得自Agricultural Research Service Culture Collection(1815N.UniversityStreet，Illinois 61604，U.S.A.)。US 3646194中描述了该菌株。其培养物再次被Deutschen Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH(DSMZ)，Mascheroder Weg 1b，D-38124Brunswick，Germany依据布达佩斯条约(2001年6月6日)的要求以保藏号DSM 14327保藏。
b)灰褐链霉菌DSM 40191
该菌株是作为束菌素A、B，祛霉菌素A和喷他霉素的生产者，以登记号40191得自Deutschen Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen(Mascheroder Weg 1b，D-38124Brunswick，Germany)。其培养物再次被Deutschen Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH(DSMZ)，Mascheroder Weg 1b，D-38124Brunswick，Germany依据布达佩斯条约(2001年6月6日)的要求以保藏号DSM 14330保藏。
c)天青链霉菌DSM 40084
该菌株是作为天青菌素的生产者，以登记号40084得自DeutschenSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen(Mascheroder Weg1b，D-38124Brunswick，Germany)。其培养物再次被DeutschenSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)，Mascheroder Weg 1b，D-38124 Brunswick，Germany依据布达佩斯条约(2001年6月6日)的要求以保藏号DSM 14328保藏。
d)抗生链霉菌ATCC 11891
该菌株是作为天青菌素的生产者，以登记号ATCC 11891得自American Type Culture Collection(10801 University Boulevard，Manassas，VA 20110-2209，USA)。其培养物再次被DeutschenSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)，Mascheroder Weg 1b，D-38124Brunswick，Germany依据布达佩斯条约(2001年6月6日)的要求以保藏号DSM 14329保藏。
e)灰色链霉菌DSM 40937
该菌株以登记号40937得自Deutschen Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen(Mascheroder Weg 1b，D-38124Brunswick，Germany)。其培养物再次被Deutschen Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ)，MascheroderWeg 1b，D-38124 Brunswick，Germany依据布达佩斯条约(2001年6月6日)的要求以保藏号DSM 14331保藏。
f)金霉素链霉菌DSM 46447
该菌株是作为四环素的生产者，以登记号40084得自DeutschenSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen(Mascheroder Weg1b，D-38124 Brunswick，Germany)。其培养物再次被DeutschenSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)，Mascheroder Weg 1b，D-38124Brunswick，Germany依据布达佩斯条约(2001年6月6日)的要求以保藏号DSM 14332保藏。
实施例17
制备原料化合物
刺糖多孢菌素A苷元(IIa)
按照WO 01/16303中描述的方法由Tracer制备刺糖多孢菌素A苷元(IIa)[其中R1是氢，A-B是基团-HC＝CH-，且D是基团C-OH的通式(II)化合物]。
9-酮基-刺糖多孢菌素A苷元(IIb)
通过用吡啶重铬酸盐氧化来由化合物(IIa)制备9-酮基-刺糖多孢菌素A苷元(IIb)[其中R1是氢，A-B是基团-HC＝CH-，且D是基团C＝O的通式(II)化合物]：
在惰性气氛下，将46.55g(115.6mmol)刺糖多孢菌素A苷元(IIa)溶解在1100ml无水二氯甲烷中，与43.51g(115.6mmol)吡啶重铬酸盐混和。在25℃搅拌4小时后，加入900ml乙醚，过滤出所形成的铬盐沉淀，将滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化(洗脱剂：环己烷/乙酸乙酯1∶1，然后是100％乙酸乙酯)，获得了3.68g 9，17-二酮基刺糖多孢菌素苷元，23.40g刺糖多孢菌素A苷元(IIa)与17-酮基-刺糖多孢菌素苷元(IIb)的约9∶1混合物，以及11.74g回收的刺糖多孢菌素A苷元(IIa)。将所述混合物从环己烷/乙酸乙酯中重结晶，将9-酮基-刺糖多孢菌素A苷元(IIb)浓缩至＞98％。获得了20.78g 9-酮基-刺糖多孢菌素A苷元(IIb)，为无色晶体形式。
TLC：Rf(SiO2，乙酸乙酯＝0.44-1H-NMR：CDCl3，δ＝6.77(s，13-H)；5.97(d，6-H)；5.88(m，5-H)；4.72(m，21-H)；3.69(m，17-H)特别是-LC/ESI-MS：m/z＝401(25％)[M]+，289(100％).
二酮基刺糖多孢菌素苷元：
TLC：Rf(SiO2，乙酸乙酯)＝0.64-1H-NMR：CDCl3，δ＝6.92(s，13-H)；5.97(d，6-H)；5.87(m，5-H)；4.85(m，21-H)；4.25(q，16-H)特别是-LC/ESI-MS：m/z＝399(100％)[M+H]+.
刺糖多孢菌素A
首先按照WO 01/16303中描述的方法制备刺糖多孢菌素A。在制备反相柱(250×8mm)上通过色谱法分级所获得的刺糖多孢菌素A/D混合物。所用的洗脱剂是含有25mmol/l乙酸铵的水(A)和含有25mmol/l乙酸铵的甲醇(B)。在35分钟内用60％B至100％B的梯度进行洗脱。流速为3ml/分钟。通过UV检测器在242nm检测所分离出的物质，并将它们自动分级。刺糖多孢菌素A在约31分钟被洗脱下来，刺糖多孢菌素D在约33分钟被洗脱下来。在旋转蒸发仪中将合并的得自几次注射的刺糖多孢菌素A级份减压蒸发，获得了含水残余物。将所述含水残余物冷冻干燥，获得了刺糖多孢菌素A，为白色固体。
17-假-刺糖多孢菌素A/D苷元
按照WO 01/16303中描述的方法制备17-假-刺糖多孢菌素A/D苷元。

Claims (11)

1.制备通式(I)化合物的方法，
Figure C028185150002C1
其中
在式中，在情形(1)中，
A-B是任一下列基团：-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-、-H2C-CH2-或-H2C-CH(CH3)-，且
D是基团
Figure C028185150002C2
R1是式1a所示氨基糖，
Figure C028185150002C3
且R2是式2a所示糖
或者其中，在情形(2)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-H2C-CH2-，且
D如上所定义，
R1是上述式1a所示氨基糖，且
R2是氢或式2b、2c、2d、2e或2f所示糖
Figure C028185150003C2
或者其中，在情形(3)中，
A-B是是任一下列基团：-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-或-H2C-CH2-，且
D如上所定义，
R1是氢或式1b所示氨基糖，
且R2是氢或上述式2a所示糖，
或者其中，在情形(4)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D如上所定义，
R1是上述式1a所示氨基糖，且
R2是式2g、2h、2i、2j或2k所示糖，
Figure C028185150005C1
或者其中，在情形(5)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-H2C-CH2-，且
D如上所定义，
R1是上述式1a所示氨基糖，且
R2是式2l或2m所示糖，
Figure C028185150006C1
或者其中，在情形(6)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D如上所定义，
R1是氢或上述式1b所示氨基糖或式1c所示氨基糖，
Figure C028185150006C2
且R2是上述式2b、2c、2g或2h所示糖或式2n所示糖，
Figure C028185150006C3
或者其中，在情形(7)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是上述式1a所示氨基糖，且
R2是式2o所示糖，
或者其中，在情形(8)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是上述式1b所示氨基糖，且
R2是上述式2d、2i或2j所示糖或式2p所示糖，
或者其中，在情形(9)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是氢或上述式1c所示氨基糖，且
R2是上述式2i或2p所示糖，
或者其中，在情形(10)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是式1d、1e或1f所示氨基糖，
且R2是上述2a所示糖，
或者其中，在情形(11)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D是基团
Figure C028185150008C2
R1是氢或上述式1a所示氨基糖，
其特征在于，将通式(II)化合物
Figure C028185150009C1
其中A-B、D和R1如上所定义，
与链霉菌属微生物在含水营养培养基中于需氧条件下接触。
2.权利要求1的方法，其特征在于，使用定义如下的通式(II)化合物，
在式中，在情形(12)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D是基团
Figure C028185150009C2
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是式2a、2g或2h所示糖，
或者其中，在情形(13)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是氢或式2d、2e、2l、2m或2o所示糖，
或者其中，在情形(14)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D如上所定义，
R1是氢或式1b所示氨基糖，且
R2是氢或式2a所示糖，
或者，其中A-B、D和R1如情形(11)中所定义。
3.权利要求1的方法，其特征在于，使用定义如下的通式(II)化合物，
其中，在情形(15)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D是基团
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是式2a所示糖，
或者其中，在情形(16)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是氢或式2d、2l或2m所示糖，
或者，其中A-B、D和R1如情形(11)中所定义。
4.权利要求1的方法，其特征在于，使用定义如下的通式(II)化合物，
在式中，在情形(17)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D是基团
Figure C028185150010C2
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是式2a所示糖，
或者其中，在情形(18)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是氢，且
R2是氢。
5.权利要求1至4中任一项的方法，其特征在于，所用的链霉菌属微生物是雅加达链霉菌、灰褐链霉菌、天青链霉菌、抗生链霉菌、灰色链霉菌或金霉素链霉菌的菌株。
6.权利要求5的方法，其特征在于，所用菌株具有下列菌株的特征：雅加达链霉菌DSM 14327、灰褐链霉菌DSM 14330、天青链霉菌DSM 14328、抗生链霉菌DSM 14329、灰色链霉菌DSM 14331或金霉素链霉菌DSM 14332。
7.通式(I)化合物，
Figure C028185150011C1
其中
在情形(1)中，
A-B是任一下列基团：-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-、-H2C-CH2-或-H2C-CH(CH3)-，且
D是基团
Figure C028185150011C2
R1是式1a所示氨基糖
且R2是式2a所示糖
或者，在情形(2)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-H2C-CH2-，且
D如上所定义，
R1是上述式1a所示氨基糖，且
R2是氢或式2b、2c、2d、2e或2f所示糖
Figure C028185150012C2
或者，在情形(3)中，
A-B是下列基团之一：-HC＝CH-、-HC＝C(CH3)-或-H2C-CH2-，且
D如上所定义，
R1是氢或式1b所示氨基糖，
且R2是氢或上述式2a所示糖，
或者，在情形(4)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D如上所定义，
R1是上述式1a所示氨基糖，且
R2是式2g、2h、2i、2j或2k所示糖，
Figure C028185150014C1
或者，在情形(5)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-H2C-CH2-，且
D如上所定义，
R1是上述式1a所示氨基糖，且
R2是式2l或2m所示糖，
Figure C028185150015C1
或者，在情形(6)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D如上所定义，
R1是氢或上述式1b所示氨基糖或式1c所示氨基糖，
Figure C028185150015C2
且R2是上述式2b、2c、2g或2h所示糖或式2n所示糖，
或者，在情形(7)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是上述式1a所示氨基糖，且
R2是式2o所示糖，
Figure C028185150016C1
或者，在情形(8)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是上述式1b所示氨基糖，且
R2是上述式2d、2i或2j所示糖或式2p所示糖，
Figure C028185150016C2
或者，在情形(9)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是氢或上述式1c所示氨基糖，且
R2是上述式2i或2p所示糖，
或者，在情形(10)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是上述式1d、1e所示氨基糖或式1f所示氨基糖，
Figure C028185150017C1
且R2是上述式2a所示糖，
或者，在情形(11)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D是基团
Figure C028185150017C2
R1是氢或上述式1a所示氨基糖。
8.权利要求7的化合物，其特征在于，
在情形(12)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D是基团
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是式2a、2g或2h所示糖，
或者，在情形(13)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是氢或式2d、2e、2l、2m或2o所示糖，
或者，在情形(14)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D如上所定义，
R1是氢或式1b所示氨基糖，且
R2是氢或式2a所示糖，
或者，A-B、D和R1如情形(11)中所定义。
9.权利要求7的化合物，其特征在于，
在情形(15)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D是基团
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是式2a所示糖，
或者，在情形(16)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是氢或式2d、2l或2m所示糖，
或者，A-B、D和R1如情形(11)中所定义。
10.权利要求7的化合物，其特征在于，
在情形(17)中，
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，且
D是基团
Figure C028185150019C1
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是式2a所示糖，
或者，在情形(18)中，
A-B是基团-HC＝CH-，且
D如上所定义，
R1是氢，且
R2是氢。
11.权利要求7的化合物，其特征在于，
A-B是基团-HC＝CH-，
D是基团
Figure C028185150019C2
R1是式1a所示氨基糖，且
R2是式2a所示糖，
或者其中
A-B是基团-HC＝CH-或-HC＝C(CH3)-，
D如上所定义，
R1是氢，且
R2是式2a所示糖，
或者其中
A-B是基团-HC＝CH-，
D如上所定义，
R1是氢，且
R2是氢。
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