CN1291761C - 封闭型细胞培养系统 - Google Patents

Abstract

本发明的目的在于提供组织细胞培养系统，在in vivo有效地进行细胞组织的早期增殖，同时避免在处置中因损伤部位的细菌引起感染症。详细讲，封闭型细胞培养系统(1)的特征在于，通过从外部密封体表面或体内的组织缺损部位(2)，形成预防细菌等侵入的封闭环境，通过在该封闭的组织缺损部位循环适于细胞培养的溶液而进行缺损组织的再生；药剂的给药方法，利用该封闭型细胞培养系统，将治疗药剂溶解到灌流液中，促进缺损部位的治疗。

Description

封闭型细胞培养系统

技术领域

本发明涉及一种使损伤部位的细胞组织在生体内(in-vivo)增殖而诱导损伤部位的组织再生的系统。

背景技术

以往，在治疗身体损伤部位时，除去损伤部位的异物等不必要的物质之后，用消毒剂等进行消毒，用适于治疗的创伤覆盖剂等擦到损伤部位，通过细胞增殖实现皮肤的自我再生。但是，存在皮肤的自我再生中治疗需要时间，在创伤部位发生感染症等种种无法克服的困难的问题。

为解决这些问题，近年作为再生医工学，采用了通过培养的自体组织移植方法，即，采集损伤部位附近的细胞并在生体外(in vitro)增殖，在体外再构筑作为目标的组织和内脏器官，将其移植到缺损部位的方法。例如，有涉及包含细胞增殖用培地的容器和创伤覆盖材料系统的细胞培养系统的方法(例如，特表2001-507218号公报)、涉及包含对创伤治疗有效的工业物质和人造纤维芽细胞的培养皮肤代替物的方法(例如，特开2002-200161号公报)等。这些方法作为对平面组织的方法是都有效的，但还遗留着多层细胞(例如，表皮细胞和真皮细胞的多层细胞)的培养困难、且细胞的增殖速度缓慢等不得不解决的问题。

另外，对于厚的组织存在如下状况：因组织结构与生体内细胞不同，缺少血管，所以难以供给氧或营养，由此细胞的生存率不会太高。而且，具有复杂的三维立体结构的组织很难在损伤部位采集，且处置中无法避免发生感染症，尚未解决成为现有问题的现状。

因此，本发明鉴于上述现状，目的在于提供组织细胞培养系统，在再生医工学中，损伤部位即在体内有效地进行细胞组织的早期增殖，同时避免在处置中因损伤部位的细菌引起感染症。

为了解决这些问题，本发明者经过认真研究的结果发现，在缺损损伤部位的伤口中，除去坏死组织等不必要的物质之后，将成为细胞增殖基础的生体吸收材料埋植到缺损空间，从外部封闭缺损部位，同时使适于细胞培养的溶液在该封闭部分循环的话，在该部位可以有效地进行缺损部位组织的再生，从而完成了本发明。

发明内容

本发明的基本方式的发明为一种封闭型细胞培养系统，其特征在于，通过从外部密封体表面或体内的组织缺损部位而形成预防细菌等侵入的封闭环境，通过在该封闭的组织缺损部位循环适于细胞培养的溶液而进行缺损组织的再生。

即，本发明的特征在于，通过从外部密封缺损部位而形成封闭性的溶液灌流部，预防细菌引起的感染，对该部分循环适于细胞培养的溶液，且通过适当改变灌流液成分，连续进行杀菌、细胞培养。

此外，一般细胞通过接合到某表面而分裂并增殖，因此细胞增殖需要接和细胞的基础。在本发明中，作为这种基础，在缺损部位埋进生体吸收材料，从而促进细胞增殖。因此，本发明的封闭型细胞培养系统的另一实施方式，在上述的发明中，在封闭环境内埋植生体吸收材料，从而促进缺损部位组织细胞的再生。

作为这种成为细胞增殖基础的生体吸收材料，例如，可列举出：聚乙醇酸纤维、乳酸乙醇酸共聚物纤维或海绵、乙醇酸己内酯共聚物纤维、聚乳酸纤维或海绵、乳酸己内酯共聚物、聚己内酯纤维、聚二恶烷纤维、胶原纤维或海绵、明胶海绵、丝束蛋白纤维海绵、多糖类纤维或海绵、磷酸三钙多孔质颗粒、碳酸钙多孔质颗粒、羟基磷灰石等。

在本发明的封闭型细胞培养系统中，对封闭环境内的细胞培养过程中灌流着适于细胞增殖的溶液，以使有效进行这种细胞增殖。因此，本发明的封闭型细胞培养系统的又一个实施方式，前述两个实施方式中，适于细胞培养的溶液为从自身血液中分离的血清、血小板浓缩血清、血液制剂、血浆分离制剂、血液蛋白分离成分溶液、血浆增容剂、浸透压等张输液、细胞培养培地。

另外，本发明的封闭型细胞培养系统的另一个实施方式，通过在治疗阶段改变循环的溶液成分，构筑适于缺损部位的镇痛、消毒、各种再生目标组织的细胞增殖环境，从而进行程序化。即，为了对缺损部位有效进行细胞培养，需要将用于细胞增殖的封闭环境设定为最有效。因此，本发明的该实施方式，其特征在于，可与这种要求对应，容易构筑适于缺损部位的镇痛、消毒、各种再生目标组织的细胞增殖环境。

此外，细胞的培养环境根据细胞的培养而其pH值、二氧化碳气体分压、氧气分压等发生各种变化。因此，即使循环适于细胞培养的溶液的组成，封闭环境通常也必须设定为最适于细胞培养的环境。因此，优选通过传感器对封闭环境的培养液内的物理要素、即pH值、二氧化碳气体分压、氧气分压进行监控，根据该信号控制设于培养环境的入口侧的气体交换器，实时地根据培养液的变化而调整封闭环境的气体分压，使细胞培养环境最佳化。因此，本发明的封闭型细胞培养系统的另一个实施方式，在封闭环境的入口侧方组装具备测量封闭环境的pH值、二氧化碳气体分压、氧气分压的监控装置的气体交换装置，并基于来自监控装置的信号，自动调整气体浓度而使细胞培养环境最佳化。

此外，本发明的封闭型细胞培养系统的另一个实施方式，持续或间歇性地控制封闭环境内的压力。即，通过例如压力维持装置使封闭环境内的压力产生各种变化，在正压状态下可确保神经组织等的成长所需的空间，且在负压状态下促进体液渗出，可进一步促进损伤部位表面的细胞增殖。另外，通过间歇性地控制为负压，根据暂时缩小封闭环境内的体积，可均衡且有效地进行封闭环境内的环流液置换。

此外，对于大范围的重度烧伤，会在损伤部位产生严重的体液水分损失。因此，当采用本发明的封闭型细胞培养系统进行损伤部位的细胞培养时，需要将使灌流液的浸透压力调整为适当保证烧伤的损伤部位表面的浸透压力的溶液作为灌流液而进行循环。因此，本发明的封闭型细胞培养系统的另一个实施方式，在外部设有用于使浸透压力调整后的灌流液循环的电路。

另外，在采用本发明的封闭型细胞培养系统而进行损伤部位的细胞培养的情况下，当损伤部位为神经细胞断裂等较深部位的损伤，这种神经细胞培养或血管细胞培养时，优选低侵入的连接。这种连接优选采用穿刺针的方式。因此，本发明的封闭型细胞培养系统的另一个实施方式，通过穿刺装置和气球导管的组合，在体内深部位或内脏器官内做成细胞培养空间的方式。

即，神经组织细胞和血管组织细胞的增殖需要确保用于其增殖的空隙。在做成用于此的空间时，穿刺针和通过其内腔的带有气球的导管的组合到达体内的目标部位，通过扩张气球而做成适于目标细胞增殖的空隙。且，特征在于，由此在损伤部位有效地留置生体吸收材料。

此外，肝脏、胰腺、肾脏等实质内脏器官中，也以同样的方法设置培养空间而使目标细胞在各内脏器官内培养，在功能降低或不全状态的内脏器官内，可根据体外细胞培养技术增殖具有很好的细胞培养的功能结构的细胞。

此外，本发明提供在损伤部位进行细胞培养时，有效地给药有效药剂的方法。即，在本发明所提供的封闭型细胞培养系统中，将变换为最适于各细胞的增殖的培地成分、用于进一步促进治疗的细胞增殖因子、血管增殖因子添加到灌流液而灌流缺损部位。因此，本发明为利用上述第一个基本实施方式所述的封闭细胞培养系统的另一个实施方式，将治疗药剂溶解到灌流液中，促进缺损部位的治疗的药剂的给药方法。为了避免在变更治疗药剂时混合了药剂而发生不适当的药剂配合问题，在这种情况下，通过对封闭环境间歇性地施加负压周期，可积极换入在封闭环境下的细胞培养空间内循环的灌流液，从而均衡且有效地进行药剂溶液的交换。

这种情况下作为可以给药的药剂，可列举出：消毒剂、局部麻醉剂、消炎镇痛剂、抗生物质药剂、末梢血管扩张剂、各种细胞增殖因子制剂、神经增殖因子制剂、血管增殖因子制剂(摘出癌细胞时为各种细胞增殖抑制因子制剂)、免疫抑制剂等。

此外，除了这些药剂之外，在灌流液中还可含有各种细胞接合性分子，例如，纤连蛋白、水解纤连蛋白等。且还可导入遗传因子，作为这种遗传因子，可列举出：裸DNA、腺病毒载体遗传因子、逆转录酶病毒载体遗传因子、脂质体增殖遗传因子、水凝胶增殖遗传因子等。

另外，作为本发明的另外方式的发明为，预先采取自身的细胞，在体外培养增殖该细胞之后悬浮于灌流液，通过灌流系统返回到封闭型培养系统，由损伤部位细胞培养进行治疗，同时与在体外培养的组织复合地进行培养增殖、生存，促进损伤部位的治愈的细胞的移送和增殖方法。

附图说明

图1为用于说明本发明的封闭型细胞培养系统的示意性概略分解图。

图2为在体表面连接了本发明的封闭型细胞培养系统的概略剖视图。

图3为说明体内深部位的损伤部位的神经细胞断裂中用于细胞增殖的本发明的系统的细胞增殖的概念的图。

图4为说明体内深部位的损伤部位的神经细胞断裂中用于细胞增殖的本发明的系统的细胞增殖的概念的图。

图5为体内深部位的损伤部位的神经细胞断裂中用于细胞增殖的本发明的系统的细胞增殖的概念的说明图。

图6为体内深部位的损伤部位的神经细胞断裂中用于细胞增殖的本发明的系统的细胞增殖的概念的说明图。

图7为根据本发明的封闭型细胞培养系统使多种灌流液循环时的示意性说明图。

图8为利用定压持续吸引器和输液箱以及输液管电路对本发明的封闭型细胞培养系统灌流液灌流时的示意性说明图。

标号说明

1     封闭型细胞培养系统

2     体组织缺损部位

3     外科用薄膜

7     埋没生体吸收材料

20    封闭型细胞培养系统

23    覆盖薄膜

24    2层圆盘

25    基础生体材料

26    细胞增殖部

30    穿刺针

32    气球部

33    生体吸收材料

34    2重管腔导管

40    灌流液箱

41    3方活栓

42    流量调节

43    封闭型细胞培养器

44    泵

45    废弃

46    患者

47    pH气体监控器

48    气体交换器

51    定压持续吸引器

具体实施方式

以下，参照附图对本发明所提供的封闭型细胞培养系统进行详细说明。

图1为用于说明本发明的封闭型细胞培养系统的概略分解示意图。即，本发明提供的封闭型细胞培养系统1，其特征在于，基本上形成通过从外部将体表面或体内的组织缺损部位2密封而预防细菌等侵入的封闭环境，通过使适于细胞培养的溶液在该封闭的组织缺损部位循环，进行缺损部位组织的再生。

更具体讲，本发明提供的封闭型细胞培养系统1(在图中为以解除了封闭状态的、示意性的展开图表示)，通过从外部密封体表面或体内的组织缺损部位2的装置3(在图中为外科用薄膜等粘接片)做成预防细菌等侵入的封闭环境，即，通过外科用薄膜3覆盖密封体表面的组织缺损部位2而做成封闭环境，通过灌流液导入管10(图中，箭头A方向)向该封闭的组织缺损部位2导入适于细胞培养的溶液，灌流到灌流液排出管11(图中，箭头B方向)。

通过灌流液导入管10灌流到系统1内的灌流液，通过第2圆盘(圆盘2)5例如浸透到表皮用生体吸收材料6，被浸透的灌流液再浸透在其下方埋进体组织缺损部位2的埋没生体吸收材料7，在这种情况下对体组织缺损部位2的细胞形成适于细胞增殖的环境，从而有效进行细胞增殖。

另一方面，浸透埋没生体吸收材料7，进而充满于体组织缺损部位2的灌流液，通过第1圆盘(圆盘1)4和第2圆盘5之间的空域，由设在第1圆盘4的灌流液排出管11排出，结束灌流。

再者，设在系统内的第1圆盘4和第2圆盘5的2层圆盘，具有分别保持灌流液导入管10和灌流液排出管11的机构，且其材料也可由非透水性塑料等与管一体形成。

如上所述，通过本发明的系统1的体组织缺损部位的封闭环境内的灌流液循环，在体组织缺损部位根据成为细胞接合基础的生体吸收材料有效促进细胞增殖，在完成细胞增殖的阶段，成为基础的生体吸收材料被分解吸收，在灭菌状态下进行体缺损部位的组织的再生。

图2中示出了从体表面连接了本发明的封闭型组织培养系统20的概略剖面。即，当受到外伤、烧伤、褥疮等伤害时，包括表皮21和真皮22体组织缺损，其受伤部位露在体表面上。在这种情况下，将附带覆盖薄膜23的本发明的封闭型组织培养系统20的2层圆盘创伤面接合器24接触受伤面，灌流灌流液。而且，即使在这种情况下，也优选在细胞增殖所需的组织上将生体吸收材料作为促进细胞增殖的适当的基础生体材料25进行埋植，从而做成细胞增殖部26。

在这种情况下，灌流液通过设在封闭型组织培养系统20中央部的灌流液入口28灌流而流到损伤部位，移送到生体吸收材料的基础生体材料25，扩散到周边部位。然后，从周边部位单端27通过2层圆盘24的间隙，由灌流液出口29作为排液排出。

因此，由于受伤面处在密闭状态而可防止因细菌等的感染，通过灌流液和基础生体材料，有效地进行损伤部位的细胞增殖。

连接到该体表面的本发明的封闭型组织培养系统，可根据各受伤部位大小而设计成所期望的型号。因此，在大范围烧伤等的情况下，通过组合多个具有2层圆盘的本发明的封闭型组织培养系统，使得与烧伤的面积和形状对应，同时使灌流液灌流到各系统中，可获得与单独使用时相同的效果。

另一方面，当进行神经细胞断裂或血管组织的断裂等体内较深部位的损伤部位的细胞增殖时，根据优选低侵入的连接，使用穿刺针方式的封闭型细胞培养系统。具体讲，由穿刺针及通过其内腔的带气球的导管的组合做成用于神经组织细胞和血管组织细胞增殖的空隙，在该气球扩张的部位留置基础生体材料，可由灌流用导管使灌流液循环。而且，此时使用的穿刺针可柔软地弯曲，可进行添加到以细胞增殖为目标的损伤部位的导管的留置。

这种体内的较深部位的损伤部位，由图3～图6示出例如用于神经细胞断裂或血管组织的断裂等的细胞增殖的本发明的系统的细胞增殖的概念。也就是使用如图3所示的穿刺针30，从皮肤表面刺入穿刺针，将前端导入到构筑用于细胞增殖的空隙的目标部位，由穿刺针的前端孔使气球导管，在倒退穿刺针前端的同时露出导管气球部31，使气球部32膨胀。

接着，由气球的膨胀而做成用于细胞增殖的空隙部(组织内空间)之后，如图4所示，缩小气球而仅拔去气球导管。然后，从穿刺针30内腔插入成为细胞增殖的基础的生体吸收材料33。而且，生体吸收材料，可通过穿刺针留置预先含在管腔内的导管。

将成为细胞增殖的基础的生体吸收材料留置在损伤部位，拔去生体吸收材料埋入用导管之后，如图5所示，插入用于灌流适于细胞增殖的灌流液的灌流用2重管腔导管34，接着，只留下灌流用导管34，将穿刺针从体内拔出，将灌流液的入口35和出口36连接到灌流系统上，开始灌流。在图6中示意性地示出了这种状态。

如上所述，通过使用本发明的封闭型细胞培养系统，从外部密封体表面或体内的组织缺损部位，可形成预防细菌等侵入的封闭环境，通过使适于细胞培养的溶液在该封闭的组织缺损部位循环，可进行缺损部位的细胞增殖，进行组织的再生。

此外，本发明提供的封闭型细胞培养系统，通过在每个阶段改变循环的溶液成分，可对缺损部位的镇痛、消毒、各再生目标组织构筑合适的细胞增殖环境。例如，在图7中作为示意性概念图而示出这种装置，从注入了细胞培养灌流液的多个容器40(在图中为2个)通过可转换该灌流液种类的3方活栓41，由流量调节器42控制流量之后，灌流到设在患者46的封闭型细胞培养系统(封闭型培养器)43内后，可通过泵44废弃45灌流到排液容器后的培养液。

在这种情况下，例如利用压力传感器等可控制泵的排出量，由此，可稳定地保持进行细胞增殖的目标损伤部位的压力。

在使用该多个灌流液的情况下，不仅仅简单地灌流适于细胞增殖的多种成分，而在初始阶段灌流对受到污染的创伤部位进行消毒的杀菌剂、或用于抑制细菌类的增殖的抗生物质，进而，可灌流为进一步促进治疗为目标而含有各种细胞增殖因子、神经增殖因子、血管增殖因子(在摘出癌细胞时为各种细胞增殖抑制因子)等的灌流液。

此外，为了更有效地进行治疗，可灌流含有局部麻醉剂、消炎镇痛剂、抗生物质制剂、末梢血管扩张剂、免疫抑制剂等的灌流液。

此外，细胞的培养环境，随着细胞的培养而该培养环境内部的pH值、二氧化碳气体分压、氧气分压等发生变化。因此，培养环境的封闭环境通常优选设定为最适于细胞培养的环境。因此，设置监控器47，通过传感器对封闭环境的培养液内的物理要素，即pH值、二氧化碳气体分压、氧气分压进行测量和监控，根据该监控器的信号控制设于培养环境的入口侧的气体交换器48，实时地根据培养液的变化而调整封闭环境的气体分压，使细胞培养环境最佳化。

本发明提供的封闭型细胞培养系统，还可利用在医院等常用的定压持续吸引器和输液箱以及输液管电路灌流适于细胞培养的灌流液。在图8中示出了其示意性概念。而且，在图8中，图中的标号与图7具有相同的意义。

在图8中，其基本概念与图7所示的系统相同，仅是将图7中通过设置的泵废弃灌流到排液容器后的培养液的部分，连接到在医院等常用的定压持续吸引器51的部分不同。

如上所述，本发明在缺损损伤部位的伤口，除去坏死组织等不必要的物质之后，将成为细胞增殖基础的生体吸收材料埋植到缺损空间内，从外部封闭缺损部位，同时通过在该封闭部分循环适于细胞培养的溶液，在这种情况下可有效地增殖缺损部位细胞，进行组织的再生。

实施例

以下，根据实施例说明本发明的细胞增殖的具体例。

实施例1：移植皮肤采取手术后的损伤部位的治疗

利用血纤维喷雾迅速对从采皮手术后的创伤面出的血进行止血，消毒周边部位。接着，在凹陷的部分充填胶原颗粒后，在中心部位将孔部打开的连续气泡胶原片做成相对创伤面大的形状而覆盖创伤面。2层接合器也做成与胶原片相同的形状后重叠到上方，覆盖仅在接合器的出入口开孔的外科用薄膜，做成胶原颗粒和薄片的封闭空间。当在采皮位置有疼痛时，使作为局部麻醉剂的利多卡因、进而含有3种混合的抗生物质的血浆制剂循环在封闭空间，3小时后停止局部麻醉剂和抗生物质溶液，转换为碱性纤维芽细胞增殖因子(bFGF)而进行灌流。

另外采取真皮层的组织，将在体外由牛胎血清细致浮游培养的纤维芽细胞与患者的血清交换而进行灌流。通过将该细胞混浊溶液由灌流液箱下方的3方活栓注入到封闭型培养器，进行细胞移植。接着，在真皮细胞的细胞增殖结束的时刻，将bFGF交换为上皮增殖因子(EGF)，培养上皮细胞，直到与周围的皮肤表面达到平衡。

实施例2：下肢大腿部断裂神经的神经再构筑

从体表面的皮肤使可柔软弯曲的穿刺针穿刺到神经的断裂位置两端的神经。选择气球长度可达到神经两个断裂端的长度，将气球导管通过穿刺针插入而使气球膨胀，在神经的断裂端之间做成空隙。

在该空隙通过存放在管腔内的导管插入成为神经成长基础的平行胶原纤维束内。进而，将该导管与灌流用细径导管交换，拔出穿刺针，仅留置灌流用导管。

在由患者的血液得出的血清添加10-8摩尔的神经增殖因子，开始灌流，在内部的空气排尽的时刻转换循环电路。

在灌流时维持很弱的正压，使神经断裂端之间的空间不缩小。在细胞充分成长的时刻，拔去灌流用导管，结束。

实施例3：重度烧伤的治疗

对腹部的重度烧伤，除去皮肤和死灭组织等之后，以胶原纤维片覆盖烧伤创伤面，进而在其上安装2层灌流接合器。最初由含有聚乙烯吡咯酮碘液的等张血浆增量制剂对创伤面进行消毒。

为了抑制从患者的创伤面损失体液，灌流浸透压与烧伤创伤面相等的人工血浆制剂。且，为了预防感染，除了注射抗生物质以外，若患者还抱怨有疼痛感，则将作为局部麻醉剂的利多卡因注入到灌流液而进行镇痛。

患者的状态稳定后，停止利多卡因、抗生物质的给药，而在灌流液中加入纤维芽细胞增殖因子(bFGF)、血小板由来细胞增殖因子(pDGF)、表皮增殖因子等的细胞增殖因子。在创伤面的表皮充分增殖的时刻，拆除该封闭型细胞培养器，使创伤面与外部空气接触，等待余下的自然治愈。

实施例4：

观察超声波断层图像的同时将带有穿刺针的导管导入器穿刺到兔子肝脏中。留下导入器鞘而拔去穿刺针，代替插入福格替(fogarty)血栓除去用气球导管，使气球膨胀至直径达到2cm左右，确保了在肝脏内的细胞培养空间。缩小气球之后，拔出该福格替导管，将含有棉状胶原纤维颗粒的特氟纶管插入培养空间，填充胶原纤维颗粒。拔去胶原插入用的特氟纶管，将灌流用的2重管腔的灌流口留置为位于培养空间，拔去导管导入器鞘而仅留下2重管腔导管，通过缝合固定到皮肤上，同时通过导管创外固定用的薄膜固定。

将由该兔子的血液调制的血清灌流到细胞培养空间，在兔子肝脏内进行了30天的肝细胞培养。

经过30天的处理后，宰杀兔子，处理肝脏的剖检结果，确认了胶原纤维内有肝脏细胞的增殖。

产业上利用的可能性

如上所述，具有如下优点：通过本发明的封闭型细胞培养系统，通过从外部封闭缺损部位，预防由细菌引起的感染，通过在该封闭部分循环适于细胞培养的溶液，在该处可以有效地增殖缺损部位细胞，进行组织再生。

此外，还有如下优点：通过改变种种灌流液，可将细胞增殖因子、或治疗用药剂有效地给药至目标部位，确保更有效的组织再生。

Claims (12)

1.一种封闭型细胞培养系统，其特征在于，通过从外部密封体表面或体内的组织缺损部位而形成预防微生物进入的封闭环境，通过在该封闭的组织缺损部位循环或灌流适于细胞培养的溶液而进行缺损部位组织的再生。

2.如权利要求1所述的封闭型细胞培养系统，其中，通过粘接片密封所述体表面的组织缺损部位而形成所述封闭环境。

3.如权利要求1或2所述的封闭型细胞培养系统，其中，在封闭环境内埋植生体吸收材料，促进缺损部位组织细胞的再生。

4.如权利要求1所述的封闭型细胞培养系统，其中，适于细胞培养的溶液为从自身血液中分离的血清、血液制剂、血小板浓缩血清、血浆分离制剂、血液蛋白分离成分溶液、血浆增容剂、浸透压等张输液、细胞培养培地。

5.如权利要求1所述的封闭型细胞培养系统，其中，通过在治疗阶段改变循环的溶液成分，构筑适于缺损部位的镇痛、消毒、各种再生目标组织的细胞增殖环境，从而达到程序化。

6.如权利要求1所述的封闭型细胞培养系统，其中，在连接了封闭环境的电路中组装连接了测量封闭环境的pH值、二氧化碳气体分压、氧气分压的监控装置的气体交换装置，基于来自监控装置的信号，自动调整气体浓度而改善细胞培养环境。

7.如权利要求1所述的封闭型细胞培养系统，其中，持续或间歇性地控制封闭环境内的压力。

8.如权利要求1所述的封闭型细胞培养系统，其中，在外部设有用于使浸透压力调整后的灌流液灌流的电路。

9.如权利要求1所述的封闭型细胞培养系统，其中，是通过穿刺装置和气球导管的组合，在体内深部位或内脏器官内做成细胞培养空间的方式。

10.一种组合，组合了权利要求1至9中的任一项所述的系统中使用的灌流液导入管、灌流液排出管、以及圆盘，其特征在于，所述灌流液导入管将所述细胞培养溶液导入到所述体表面的组织缺损部位，所述灌流液排出管将导入的溶液排出，所述圆盘包括圆盘1和圆盘2，在圆盘2上设有所述灌流液导入管，来自所述灌流液导入管的灌流液通过所述圆盘2导入到所述组织缺损部位，所述灌流液排出管设在所述圆盘1上，充满于所述组织缺损部位的灌流液通过所述圆盘1和圆盘2之间的空域，通过所述灌流液排出管排出，完成细胞培养液灌流到所述组织缺损部位。

11.如权利要求10所述的组合，其中，还包括表皮用生体吸收材料，所述灌流液通过所述圆盘2浸透该材料而导入到所述缺损部位。

12.如权利要求11所述的组合，其中，还包括应埋进所述缺损部位的埋没用生体吸收材料，浸透到所述表皮用生体吸收材料的灌流液再浸透该埋没用生体吸收材料后，通过所述空域。

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