CN1285337C - 茅莓总皂苷在制备治疗脑缺血等疾病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及茅莓总皂苷在制备治疗脑缺血、脑血栓、脑梗塞等脑血管系统疾病的药物中的应用。根据动物实验结果表明，茅莓总皂苷具有能非常显著的延长小鼠断头后呼吸时间和呼吸次数、降低脑含水量、增加脑缺血动物的生存率和延长生存时间、减少脑梗塞面积、改变凝血纤溶系统、保护脑神经元、抑制体内血栓的形成等作用，故对脑缺血、脑血栓、脑梗塞等脑血管系统疾病有很好的治疗作用，对脑缺血、脑血栓、脑梗塞等脑血管系统疾病后的神经元有很好的保护作用，并且毒性低，副作用小，使用安全，质量可控。

Description

茅莓总皂苷在制备治疗脑缺血等疾病药物中的应用

                   技术领域

本发明涉及茅莓总皂苷的用途，特别是茅莓总皂苷在制药领域中的用途。

                   技术背景

脑缺血是指脑循环血流量减少为特征的中枢神经系统疾病，临床上较为常见，因其发病率、致残率和死亡率均较高，严重地影响了人类的生存质量。我国现有脑卒中残存者700万人，并且以年发生156～234万人的速度在增长。脑卒中每年夺去78～178万人的生命，是我国死亡的首因，人们一直在寻找对脑缺血有良好疗效的药物。目前，脑缺血的现代治疗手段包括：重新开放闭塞的血管、使缺血脑组织再灌注、限制血栓栓塞性闭塞、增强脑细胞对缺血的耐受、防止再灌注损伤、预防和治疗并发症，防止脑血管意外再发。用于脑缺血治疗的药物包括：抗栓药(溶栓药、抗凝药、血小板抑制剂)、神经保护剂、自由基清除剂和白细胞黏附抑制剂等，但是这些药物的治疗靶点单一，而且毒副较大。脑缺血的发生发展机制复杂，涉及到多系统多环节的异常。中药复方含多位药，单位药有含多种成分，因此中药可以通过多层次、多靶点、多环节发挥作用，而且毒副作用小，从这种意义上讲，中药抗脑缺血有其独到之处，如银杏叶的提取物、丹参提取物为主药的制剂在抗脑缺血方面的成功应用。随着研究的深入，越来越多的中药有效部位已经阐明，如人参皂苷、绞古蓝总皂苷、现在已经在治疗脑缺血方面发挥重要的作用。

茅莓(别名天青地白草、红梅消、三月泡)为蔷薇科植物茅莓Rubus parviflolius L的茎叶((英)Japanese Raspberry Herb)，性平，味甘、酸，化学成分：叶含鞣质；预试茎含酚类、鞣质，功能主治：散瘀、止痛、解毒、杀虫，用于治疗吐血、跌打刀伤、产后瘀滞腹痛、痢疾、痔疮、疥疮等，民间还用其根治疗女性月经过多之症。经对茅莓进行系统的研究发现，茅莓总皂苷为茅莓的有效部位(茅莓总皂苷为茅莓全株所含皂苷的总和)，但至今未见茅莓总皂苷在制备用于治疗脑缺血、脑缺血/再灌注、脑血栓、脑梗塞等脑血管系统疾病药物中应用的相关报道。

                   发明内容

本发明的目的是提供茅莓总皂苷在制药中的新用途，具体说是提供茅莓总皂苷在制备治疗脑缺血、脑血栓、脑梗塞等脑血管系统疾病药物中的应用，以制备能有效治疗脑缺血、脑血栓、脑梗塞等脑血管系统疾病的药物。

本发明所述的茅莓总皂苷通过以下方法提取：

将茅莓浸泡在水中，加热提取2-4次，每次1小时，收集滤液，将水提物浓缩至1-3g/ml，上大孔树脂，用10-50％的乙醇洗脱，洗脱物减压或常压浓缩、干燥，所得物即茅莓总皂苷，其纯度大于50％。

本发明所述的茅莓总皂苷亦可通过以下方法提取：

以浓度为60-80％的乙醇为溶剂对茅莓进行提取，将提取物浓缩至1-3g/ml，上大孔树脂，用10-50％的乙醇洗脱，减压或常压浓缩、干燥，所得物即茅莓总皂苷，其纯度大于50％。

用无热源去离子水的蒸馏水为溶剂，以注射用氯化钠或注射用葡萄糖为渗透压调节剂，将茅莓总皂苷溶解，配制成20mg/ml/支或40mg/2ml/支的注射剂；或按本领域技术人员公知的技术方法制备茅莓总皂苷的胶囊剂，以淀粉为添充剂，以5％的淀粉浆作为粘合剂。制粒，分装成20mg/胶囊；或按本领域技术人员公知的技术方法制备茅莓总皂苷的口服液：取茅莓茅莓总皂苷加入蒸溜水溶解，再加入总体积10％的糖浆作为调味剂和3％苯甲酸钠作为防腐剂，分装成20mg/10ml/支。

经研究发现，茅莓总皂苷可用于治疗脑缺血、脑血栓、脑梗塞等脑血管系统疾病，用其制备的药物对治疗脑缺血、脑血栓、脑梗塞等脑血管系统疾病具有很好疗效。为了更好地理解本发明的实质，以下用茅莓总皂苷的动物实验结果来说明其在制备治疗脑缺血、脑血栓、脑梗塞等脑血管系统疾病药物中的应用。

一、茅莓总皂苷对小鼠断头后呼吸时间和呼吸次数的影响

1、实验方法：选体重20±2g的雄性小鼠30只，随机均分为3组(n＝10)。对药物组灌服茅莓总皂苷，剂量为40mg/kg，阳性对照组灌服尼莫地平22.5mg/kg，对照组、模型组灌服等体积的蒸馏水，每天给药1次，连续给药3天。于末次给药1h后断头(耳后2mm处)观察小鼠自断头开始到喘息停止的时间和张嘴次数。

2、实验结果：如表1所示。

            表1茅莓总皂苷对小鼠断头后呼吸时间和呼吸次数的影响(x±s)

组别	剂量(mg/kg)	动物数(只)	呼吸时间(s)	呼吸次数(s)
					空白对照组阳性对照组茅莓总皂苷	-22.540	101010	20.72±2.5223.43±2.45*25.01±2.0**	13±2.8314.6±2.8415.8±2.57**

注：与模型组比较，*p＜0.5，**p＜0.01，

3、结论：由表1结果可见，茅莓总皂苷能非常显著的延长对小鼠断头后呼吸时间和呼吸次数(P＜0.001)，结果证明茅莓总皂苷对脑缺血动物有保护作用。

二、茅莓总皂苷对小鼠断头后脑含水量和脑指数的影响

1、实验方法：选体重20±2g的雄性小鼠40只，随机均分为4组(n＝10)。药物组灌服茅莓总皂苷，剂量均为40mg/kg，阳性对照组灌服尼莫地平22.5mg/kg，假手术组、脑缺血对照组灌服等体积的蒸馏水，每天给药1次，连续给药3天，于末次给药1h后断头(耳后2mm处)称重后取脑，称重，干燥至衡重再次称重，两者的差值即为脑含水量。以t值检验各组与空白对照之间差异的显著性。

2、实验结果：如表2所示。

                        表2茅莓总皂苷对小鼠断头后脑含水量影响(x±s)

组别	剂量(mg/kg)	动物数(只)	脑含水量(％)	脑指数
					假手术组脑缺血对照组茅莓总皂苷尼莫地平组	--4022.5	10101010	78.26±0.1680.63±0.96*78.65±0.86**79.11±1.46**	0.65±0.030.79±0.09*0.73±0.12**0.74±0.12**

注：*与假手术对照组比较，p＜0.5，**与脑缺血模型对照组比较p＜0.01，

3、结论：脑缺血模型组脑含水量及脑指数与假手术比较有显著性差异，脑含水量增加，而茅莓总皂苷治疗组脑含水量明显减少，与对照组有显著性差异，证明茅莓总皂苷能减轻脑缺血动物的脑水肿。

三、茅莓总皂苷对脑缺血小鼠存活率的影响

1、实验方法：

昆明种雄性小鼠40只，体重20±2g，随机分为生理盐水对照组，假手术组，茅莓总皂苷组，尼莫地平组(阳性药物对照组)，药物组灌服茅莓总皂苷，剂量均为40mg/kg，阳性对照组灌服尼莫地平22.5mg/kg，对照组、假手术组灌服等体积的蒸馏水，每天给药1次，连续给药3天，于末次给药1h后3.5％水合氯醛麻醉后，颈部正中切口，分离并在两侧颈总动脉下置线两根，打松结备用，等动物清醒后，结扎两侧颈总动脉，两线之间剪断。观察结扎6h内动物反应及死亡情况。

2、实验结果：如表3所示。

                        表3茅莓总皂苷对脑缺血小鼠存活率的影响(x±s)

组别	剂量(mg/kg)	动物数(只)	存活数(只)	存活率(％)
					假手术组脑缺血对照组茅莓总皂苷尼莫地平组	--4022.5	10101010	10074	100070**40**

注：**与脑缺血对照组比较，p＜0.01

3、结论：茅莓总皂苷能增加脑缺血动物的生存率和延长生存时间。

四、茅莓总皂苷对局灶性脑缺血的作用

1、实验方法：健康成年雄性wistar大鼠20只，体重250±20g，动物随机分为两组，每组10只。缺血对照组：用生理盐水灌胃；茅莓总皂苷组除用药不同外，其它措施相同。

动物模型的建立：采用两血管闭塞合并放血法，造成急性脑缺血。实验动物先用麻药麻醉后固定在手术台上。经颈正中切口，钝性分离两侧颈总动脉，丝线接扎悬挂30min，同时断尾放血0.8ml，然后送开丝线接扎线10min，再接扎双侧颈总动脉30min后松开。术后给予进食进水。

观测指标：

(1)、凝血系统凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、纤维蛋白原测定(FBG).

(2)、脑梗死面积的测定术后一定时间采血后处死，取一定数量大鼠大脑，去掉小脑和脑干，冠状切为0.3cm的脑片，观察有无出血灶。将脑片浸如TTC中，恒温后甲醛固定，利用图象病理分析系统测定梗死面积。

病理学检测：脑片经染色后，在光镜下观察脑组织的病理变化。

2、结果：

(1)、凝血纤溶系统的检测结果：如表4所示。

                                   表4凝血纤溶系统的检测结果(x±s)

组别	前				后
									PT	TT	APTT	FBG	PT	TT	APTT	FBG
	茅莓总皂苷缺血对照组	14.20±0.1713.68±0.11	23.62±0.4720.70±0.37	22.40±0.8321.40±1.19	290.83±30.18229.83±40.18	14.40±0.36*12.40±0.23*	49.20±1.6421.83±1.36	23.98±1.5718.88±0.51									170.00±13.04470.00±17.04

结论：治疗组灌胃后可以看到TT、APTT、FBG含量较对照组高，当双侧颈总动脉接扎造成前脑缺血性损伤后，可使TT、APTT延长，且FBG的降低与对照组相比均有显著性差异。

(2)、大鼠局灶性脑缺血一定时间后脑梗死面积及药物的影响结果：如表5所示。

          表5脑梗死范围(x±s)

组别	例数	梗死面积/％
			茅莓总皂苷治疗组对照组	1010	5.82±1.01*10.51±2.37

注：治疗组与对照组比较*P＜0.05

结论：茅莓总皂苷治疗组的脑梗死面积明显低于缺血对照组，证明茅莓总皂苷能减少脑缺血动物的脑梗死面积。

(3)、病理学改变：对照组光镜下观察发现组织间隙增宽，水肿，有空泡形成，神经元细胞核缩小，甚至溶解消失。而茅莓总皂苷治疗组可以看到组织间水肿较对照组轻，细胞间隙改变不明显，神经元细胞核大小基本正常，核较深染，病灶中心区有少许空泡形成。

五、对体内血小板血栓形成的影响

1、实验方法

健康成年wistar大鼠，体重250±20g，动物随机分为两组，每组10只，给予茅莓总皂苷(40mg/kg)。最后1次给药1小时后麻醉，固定，分离气管插入气管导管，分离右颈总动脉和左颈外静脉。在聚乙烯管中放入一根已经称重的丝线。用含肝素的生理盐水充满聚乙烯管。将管的一端插入右颈总动脉，另一端插入左颈外静脉.打开血流15min后中断，取出丝线称重，计算血栓重量。

2、实验结果：

结果对照组血栓重36.2±9.87mg，茅莓总皂苷治疗组血栓重21.9±9.65mg(p＜0.05)。

3、结论：茅莓总皂苷可抑制体内血栓的形成。

六、急性毒性实验

1、实验方法：

(1)、口服给药的急性毒性试验：取体重20±2g小鼠40只，雌雄各半，用茅莓总皂苷按2.4g/kg(相当生药120g/kg)，每天给药3次，然后连续观察7天。

(2)、腹腔注射给药的急性毒性试验：取体重20±2g小鼠40只，雌雄各半，用茅莓总皂苷按2.4g/kg(相当生药120g/kg)，每天给药3次，然后连续观察7天。

2、实验结果：相当于人体用药的130倍的用量的情况下，没有小鼠死亡，未测得LD₅₀.

3、结论：茅莓总皂苷的毒性低。

综上所述，可得出如下结论：

茅莓总皂苷具有能非常显著的延长小鼠断头后呼吸时间和呼吸次数、降低脑含水量、增加脑缺血动物的生存率和延长生存时间、减少脑梗塞面积、改变凝血纤溶系统、保护脑神经元、抑制体内血栓的形成等作用，故对脑缺血、脑血栓、脑梗塞等脑血管系统疾病有很好的治疗作用，对脑缺血、脑血栓、脑梗塞等脑血管系统疾病后的神经元有很好的保护作用，并且毒性低，副作用小，使用安全，质量可控。

                   具体实施方式

实施方式一：按本领域技术人员公知的技术方法制备茅莓总皂苷口服液

取茅莓总皂苷2g，加1000ml蒸馏水溶解，再加入总体积10％的糖浆作为调味剂和3％苯甲酸钠作为防腐剂，分装成200mg/10ml/支，高压灭菌即得。

实施方式二：按本领域技术人员公知的技术方法制备茅莓总皂苷的胶囊剂

取茅莓总皂苷2kg，以淀粉为添充剂，以5％的淀粉浆作为粘合剂制粒，分装成200mg/囊，包装即得。

实施方式三：按本领域技术人员公知的技术方法制备茅莓总皂苷的注射剂

以无热源去离子水的蒸馏水为溶剂，以注射用氯化钠或注射用葡萄糖为渗透压调节剂将茅莓总皂苷溶解，配制成200mg/ml/支或400mg/2ml/支的注射剂。

Claims (1)

1、茅莓总皂苷在制备治疗脑缺血、脑血栓、脑梗塞疾病的药物中的应用。