CN1274833C - 一种编码肽基脯氨酰顺反异构酶的基因 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种与黄单胞菌致病相关的新基因XC2964，其特征在于具有SEQ ID NO：1的核苷酸序列或其同源序列，其中所述同源序列与SED IDNO：1的核苷酸序列具有80%以上同源性。该基因编码肽基脯氨酰顺反异构酶(SEQ ID NO：2)，其由232个氨基酸组成。本发明主要涉及XC2964基因在植物病害防治中的应用。

Description

一种编码肽基脯氨酰顺反异构酶的基因

技术领域

本发明涉及植物病原细菌的新的致病相关基因，该基因编码的蛋白质为肽基脯氨酰顺反异构酶，该酶催化外泌蛋白的空间折叠，可用于防治植物病害的药物靶标。

背景技术

植物病害一直是农作物减产、品质降低的主要因子之一。随着病原菌对药物抗性的增强，农药用量在不断增加，这不仅加剧了环境污染、药物残留，也大大提高了农业成本，因此，亟待研发新的防病治病策略和新型的无公害药物。弄清植物病原菌侵染寄主的遗传机制是开发新型药物和防病策略的关键。

目前，已发现的与植物病原细菌致病相关的基因主要包括以下几个类型：过敏性与致病性基因(hrp)(He SY.1998.Type III protein secretionsystems in plant and animal pathogenic bacteria.Annu.Rev.Phytopathol.36：363-392)；无毒基因(avr)(Bonas U et al.1999.Gene-for-gene interactions：bacterial avirulence proteins specifyplant disease resistance.Curr.Opinion in Microbiology 2：94-98)；致病性因子调节基因(rpf)(Barber CE et al.1997.A novel regulatorysystem required for pathogenicity of Xanthomonas campestris ismediated by a small diffusible signal molecule.Mol.Microbiol24：555-566)；胞外酶类基因；胞外多糖合成基因(Tang JL et al.1991.Genetic and molecular analysis of a cluster of rpf genes involvedin positive regulation of synthesis of extracellular enzymes andpolysaccharide in Xanthomonas campestris pathovar campestris.MolGen Genet 226：409-417.；Dow M et al.2000a.Xylella genomics andbacterial pathogenicity to plants.Yeast 17：263-271.)，脂多糖合成基因(Dow M et al.2000b.The induction and modulation of plantdefense resistanses by bacterial lipopolysaccharides.Annu RevPhytopathol 38：241-261.)等。

获得基因组上单基因位点突变的突变体是研究基因生物学功能的关键。在基因组范围内收集基因失活突变体能够为在基因组水平上研究生物学过程、生命现象提供关键的资源。野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomons campestris pv.campestris，简称Xcc)是一种革兰氏阴性细菌，能在全球范围内引起十字花科植物黑腐病，导致农产品的产量和品质严重下降(Hayward AC.1993.The hosts of Xanthomonas.In：SwingsG，Civerolo EL，editors.Xanthomonas.London：Chapman and Hall，pp.1-119.)。本发明的目的是通过建立野油菜黄单胞菌的突变体库和大规模筛库，鉴定与致病相关的新基因，提供可能的防治植物病害的药物靶标。

发明内容

本发明的目的是提供一种与黄单胞菌致病相关的新基因XC2964(SEQID NO：1)或其同源类似物，其中所述同源类似物具有与SED ID NO：1的核苷酸序列80％以上同源性的DNA序列。该基因编码肽基脯氨酰顺反异构酶(SEQ ID NO：2)，其由232个氨基酸组成，属于FKBP-型肽基脯氨酰顺反异构酶(FKBP-type peptidyl-prolyl cis-trans isomerases)。携带该基因的质粒pXC2964已在中国普通微生物菌种保藏管理中心保存(北京市中关村北一条13号2714信箱)，保存编号为CGMCC No.1055(JM109/pXC2964)，保存日期为2003年11月26日，保藏的微生物为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)JM109/pXC2964。

SEQ ID NO：3的DNA是野油菜黄单胞菌8004菌株的DNA，由1099个碱基组成。含完整的肽基脯氨酰顺反异构酶基因，自5’端的第201-896位核苷酸为该基因的开放阅读框(Open Reading Frame，ORF)，自5’端的第201-203位核苷酸为该基因的起始密码子ATG，自5’端的第897-899位核苷酸为终止密码子TAA。自5’端的第150-180位核苷酸为启动子区；自5’端的第186-191位核苷酸为SD序列。

本发明主要涉及XC2964基因所编码的肽基脯氨酰顺反异构酶在防治植物病害中的应用。

附图说明

图1为XC2964基因的克隆酶切电泳图谱。

1：λ/Hind III标准DNA(片段大小从大到小依次为：23.1kb，9.4kb，6.6kb，2.4kb，2.0kb)；2：载体pGEM3Zf(+)；3：XC2964基因片段；4、5：基因克隆2964/EcoRI；6：100bp标准DNA(片段大小从大到小依次为：3kb，2kb，1.5kb，1.2kb，1kb，0.9kb，0.8kb，0.7kb等)。

图2为XC2964基因缺失突变体的PCR验证凝胶图。

1：100bp标准DNA(片段大小从大到小依次为：3kb，2kb，1.5kb，1.2kb，1kb，0.9kb，0.8kb，0.7kb等)；2：XC2964基因克隆JM109/pXC2964；3、4：XC2964基因缺失突变体；5、6：XC2964基因克隆8004/pXC2964；7：野生型8004。

图3为XC2964基因缺失突变体的胞外蛋白酶表型检测。

A和B：野生型8004菌株；C和D：XC2964基因缺失突变体

图4为XC2964基因缺失突变体的致病性试验结果。

A为黄单胞菌野生型菌株；B为XC2964基因的转座子插入突变体；C为XC2964基因的缺失突变体，D为水(空白对照)。

具体实施方式

在本发明的实施例中所用到的材料包括：

大肠杆菌(Escherichia coli)株系JM109购自Promega公司；载体pGEM-3Zf(+)购自Promega公司；限制性内切酶、修饰酶等试剂购自Promega、Stratagene、QIAGEN公司。

寄主植物为萝卜(种名为Raphanus sativus L.var.radiculusPers.)从四川省种子公司购买。

野油菜黄单胞菌野生型菌株Xcc 8004(Tang JL et al.1990.Cloningof genes involved in negative regulation of production ofextracellular enzymes and polysaccharide of Xanthomonas campestrispathovar campestris.Mol Gen Genet.222：157-160.)；柯斯质粒pLAFR1和pLAFR3(Liu YN et al.1990.A multipurpose broad host range cloningvector and its use to characterise an extracellular protease geneof Xanthomonas campestris pathovar campestris.Mol GenGenet.220：433-440.)；柯斯质粒pPH1JI(Hirsch PR et al.1984.Aphysical map of pPH1JI and pJB4JI.Plasmid.12：139-141.)；转座子Tn5gusA5(Zha D et al.1998.Cloning of DNA sequences involved inexopolysaccharide synthesis of Xanthomonas campestris pv.campestris.Wei Sheng Wu Xue Bao.38：251-255.)。

NYGB培养基：每升中含蛋白胨5克、酵母粉5克、甘油20克，pH7.0。

Xcc8004菌株全基因组序列

XC2964基因扩增引物：由上海生物工程公司根据下面序列合成。

上游引物：XC2964-F：

GAATTCGGCGTGGTCTGCGATCAG(SEQ ID NO：4)

下游引物：XC2964-R： GGATCC ATTTCATCCAGGCTCCGC(SEQ ID NO：5)

斜体为附加酶切位点序列(EcoRI、BamHI)、框线为保护碱基。

实施例1.野油菜黄单胞菌突变体库的构建和XC2964基因的鉴定

以大肠杆菌和Xcc之间的穿梭质粒pLAFR1为载体将Tn5gusA5引入Xcc野生型菌株8004，然后通过引入不相容质粒pPH1JI驱赶pLAFR1，通过抗生素(卡那霉素)抗性标记筛选Xcc：：Tn5gusA5插入突变体，结合Xcc 8004全基因组序列和TAIL-PCR(Thermal Asymetric Interlaced-PCR)技术(Liu YG et al.1995 Efficient isolation and mapping of Arabidopsisthaiiana T-DNA insert junctions by thermal asymmetric interlacedPCR.Plant J.8：457-63.)，确定Tn5gusA5在基因组上的插入位置(具体方法：首先，通过TAIL-PCR扩增Tn5gusA5插入处下游的DNA序列，然后对该序列进行测序，再将测序序列与Xcc8004全基因组序列比对，得到插入位置信息)。通过考察突变体的致病性、胞外酶活性、胞外多糖合成等表型的变化，筛选出致病性降低的突变体420个，涉及51个基因，其中5个属于新的致病相关基因，本发明涉及其中一个基因--XC2964基因。

将XC2964基因的序列，在Genbank中进行BLASTP(生物信息学的一种序列比对工具，由美国国家生物信息中心开发，在互联网上免费使用：http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)，结果显示XC2964基因产物肽基脯氨酰顺反异构酶，属于FKBP-型肽基脯氨酰顺反异构酶(FKBP-typepeptidyl-prolyl cis-trans isomerases)，该类酶参与外泌蛋白的空间折叠，与蛋白质活性密切相关。

实施例2.XC2964基因(肽基脯氨酰顺反异构酶基因)的克隆及序列测定

根据XC2964的基因序列，设计引物(见XC2964-F和XC2964-R)，以野油菜黄单胞菌总DNA为模板，用PCR法扩增该基因全长序列(扩增条件：95℃(1min)；35循环94℃(30s)，55℃(30s)，72℃(1min)])，并将其克隆至克隆载体pGEM3Zf(+)的EcoRI与BamHI位点之间，获得了含该基因的重组质粒pXC2964。该质粒用EcoRI+BamHI酶切，除了一个3.1kb的载体条带外，还有一个1.1kb的插入片段(见图1)。用双脱氧核苷酸法在ABI 377 DNA自动测序仪(购于美国PE公司)上测定DNA核苷酸序列。

实施例3.XC2964基因缺失突变体的构建和验证

以pGEM-3Zf(+)为载体，用PCR方法扩增得到的卡那霉素抗性基因(Kan基因，该基因为分子生物学方法中常用的基因)克隆到载体上。设计PCR引物(见说明)，对XC2964的旁侧序列进行扩增[扩增条件：95℃(1min)；30循环94℃(5s)，53℃(1min)，72℃(2min)]，得左、右旁侧序列分别命名为2964L和2964R。分别将2964L和2964R克隆到载体上Kan基因的两侧(酶切位点见说明1)，构建带有Kan基因和XC2964旁侧序列的重组质粒pGK2964。将pGK2964中的插入片段克隆到具有广泛寄主范围的柯斯质粒pLAFR3上，构建质粒pLGK2964，通过三亲本接合将pLGK2964导入野生型8004菌株进行同源双交换，再通过两亲本接合和抗生素筛选接合子。所得接合子用PCR方法进行鉴定，因XC2964缺失突变体与野生型黄单胞菌8004菌株具有不同的扩增带型而得以验证(见图2)。

说明1：

根据XC2964基因左右两侧的DNA序列，设计两对引物，对XC2964左右两侧DNA进行扩增。设计的引物序列为：

(1)XC2964基因左侧引物：

2964LF：5’- ACAGTT  GAATTC GTCGATCACCGCTACCACCG-3’(SEQ ID NO：6)

            保护碱基 EcoR.I位点

2964LR：5’- ACAGTT  GGTACC GTGGCTGATGCAGTTCGAGAT-3’(SEQ ID NO：7)

            保护碱基 Kpn I位点

(2)XC2964基因左侧引物：

2964RF：5’- ACAGTT  TCTAGA GCCAGCGCATTGCCCGTCAG-3’(SEQ ID NO：8)

             保护碱基 XbaI位点

2964RR：5’- ACAGTT  GTCGAC  GATTGACCAGGCCCAGTTGC-3’(SEQ IDNO：9)

             保护碱基SalI位点

在引物设计时，2964LF，2964LR，2964RF，2964RR分别引入了EcoRI，KpnI，XbaI，SalI酶切位点，并在每个引物的5’端都加上了6个保护碱基ACAGTT。

说明2：实施例2.中说述的基因缺失突变方法，也称基因敲除，是分子生物学常用方法，基因敲除方法和验证方法均在 网页http：//www- sequence.stanford.edu/group/yeast deletion project/PCR strategy.html有详细说明。(Baudin A et al.1993.Asimple and efficient method for direct gene deletion inSaccharomyces cerevisiae.Nucleic Acids Research.21：3329-3330.Winzeler E et al.1999.Functional Characterization of theSaccharomyces cerevisiae Genome by Gene Deletion and ParallelAnalysis.Science.285：901-906.)。

实施例4.XC2964基因突变体的胞外蛋白酶活性检测

在NYGA培养基(每升中含蛋白胨5克、酵母粉5克、甘油20克，琼脂15克，pH7.0)平板上加入终浓度为1％的脱脂牛乳，然后用牙签点接野生型黄单胞菌、突变菌株于平板表面，28培养48小时，能产生胞外蛋白酶的菌株在周围形成一水解脱脂牛乳的透明圈。结果表明，XC2964基因突变体水解蛋白质底物的能力下降，胞外蛋白酶活性明显降低(见图3)。证明XC2964基因与外泌蛋白酶的活性有关。

实施例5.XC2964基因突变体的致病性检测

实验所用寄主植物为萝卜苗(种名为Raphanus sativus L.var.radiculus Pers.)，所用的接种方法为剪叶法。XC2964基因缺失突变体和野生型菌株在28下进行液体培养，15-18个小时。用稀释到OD600＝0.2，用灭过菌的剪刀在菌液浸泡5秒钟后，在健康叶片距叶尖1-2cm垂直叶脉的方向剪到中轴处，停留5秒钟，被接种的植物在25-30培养一周后观察结果，正对照选用野油菜黄单胞菌野生型8004菌株，负对照用清水。致病试验表明，XC2964基因的Tn5gusA5插入突变体和缺失突变体的致病性显著降低(见图4)。证实XC2964基因与野油菜黄单胞菌的致病性有关。

参考文献：

1.Barber CE et al.1997.A novel regulatory system required forpathogenicity of Xanthomonas campestris is mediated by a smalldiffusible signal molecule.Mol.Microbiol 24：555-566

2.Bonas U et al.1999.Gene-for-gene interactions：bacterialavirulence proteins specify plant disease resistance.Curr.Opinion in Microbiology 2：94~98

3.Dow M et al.2000a.Xylella genomics and bacterial pathogenicityto plants.Yeast 17：263~271.

4.Dow M et al.2000b.The induction and modulation of plant defenseresistanses by bacterial lipopolysaccharides.Annu RevPhytopathol 38：241-261.

5.Hayward AC.1993.The hosts of Xanthomonas.In：Swings G，CiveroloEL，editors.Xanthomonas.London：Chapman and Hall，pp.1-119.

6.He SY.1998.Type III protein secretion systems in plant andanimal pathogenic bacteria.Annu.Rev.Phytopathol.36：363~392

7.Hirsch PR et al.1984.A physical map of pPH1JI and pJB4JI.Plasmid.12：139-141.

8.Liu YG et al.1995 Efficient isolation and mapping of Arabidopsisthaliana T-DNA insert junctions by thermal asymmetric interlacedPCR.Plant J.8：457-63.

9.Liu YN et al.1990.A multipurpose broad host range cloning vectorand its use to characterise an extracellular protease gene ofXanthomonas campestris pathovar campestris.Mol GenGenet.220：433-440.

10.Tang JL et al.1991.Genetic and molecular analysis of a clusterof rpf genes involved in positive regulation of synthesis ofextracellular enzymes and polysaccharide in Xanthomonascampestris pathovar campestris.Mol Gen Genet 226：409-417.

11.Zha D et al.1998.Cloning of DNA sequences involved inexopolysaccharide synthesis of Xanthomonas campestris pv.campestris.Wei Sheng Wu Xue Bao.38：251-255.

                              SEQUENCE LISTING

<110>广西大学

<120>一种编码肽基脯氨酰顺反异构酶的基因

<130>I030750

<160>9

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>699

<212>DNA

<213>野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomons campestris pv.campestris)

<400>1

atgaagttgc gttcgatcgc ggtcgctgtg gcggccctgg ccctgacggg caatgcgctg     60

gcccaggaca caacgtccga gaagggcaag ctgagctact actttggtta tgactacggc    120

aacaaccttg ccgagctcac cggacgtggt gaacagctgg atatcaactc ggtggtgaag    180

ggtctgcagg acgcctatgc caagaagcag ccggccatca ctgccgacca gctgaagccg    240

gccgtggaag cgttccagaa gcgtgagcag ggccgtgccc agcaggctaa ggccgagtac    300

gacaaggccg ctgccgccaa caagaccaag agcgatgcgt tcctggccaa gaacaagagc    360

accgctggcg tgcagacgct gccgagcggc gtgcagtacc gcgtgatcga agccggcaag    420

ggcgccaagc cgacccaggc cagcaccgtg caacttgaag tcgccggtcc gttccccttc    480

ggcgaccgcg agaaggcacg tcctgcgcag cagatcccgg ccatcaaggt cagcgaagtc    540

gagatgcagg ccatgcgcga tacgctgctg cagatgccgg ccggctccaa gtgggaagtg    600

accctgccgc cggaaaaggc ctatggtgcc gacccgcgta ccccgttccc gccgaacgtg    660

gctgtgcagt tcgagatcaa gctggtcagc gtcaagtaa                           699

<210>2

<211>232

<212>PRT

<213>野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomons campestris pv.campestris)

<400>2

Met Lys Leu Arg Ser Ile Ala Val Ala Val Ala Ala Leu Ala Leu Thr

1               5                   10                  15

Gly Asn Ala Leu Ala Gln Asp Thr Thr Ser Glu Lys Gly Lys Leu Ser

            20                  25                  30

Tyr Tyr Phe Gly Tyr Asp Tyr Gly Asn Asn Leu Ala Glu Leu Thr Gly

        35                  40                  45

Arg Gly Glu Gln Leu Asp Ile Asn Ser Val Val Lys Gly Leu Gln Asp

    50                  55                  60

Ala Tyr Ala Lys Lys Gln Pro Ala Ile Thr Ala Asp Gln Leu Lys Pro

65                  70                  75                  80

Ala Val Glu Ala Phe Gln Lys Arg Glu Gln Gly Arg Ala Gln Gln Ala

                85                  90                  95

Lys Ala Glu Tyr Asp Lys Ala Ala Ala Ala Asn Lys Thr Lys Ser Asp

            100                 105                 110

Ala Phe Leu Ala Lys Asn Lys Ser Thr Ala Gly Val Gln Thr Leu Pro

        115                 120                 125

Ser Gly Val Gln Tyr Arg Val Ile Glu Ala Gly Lys Gly Ala Lys Pro

    130                 135                 140

Thr Gln Ala Ser Thr Val Gln Leu Glu Val Ala Gly Pro Phe Pro Phe

145                 150                  155                160

Gly Asp Arg Glu Lys Ala Arg Pro Ala Gln Gln Ile Pro Ala Ile Lys

                165                 170                 175

Val Ser Glu Val Glu Met Gln Ala Met Arg Asp Thr Leu Leu Gln Met

            180                 185                 190

Pro Ala Gly Ser Lys Trp Glu Val Thr Leu Pro Pro Glu Lys Ala Tyr

        195                 200                 205

Gly Ala Asp Pro Arg Thr Pro Phe Pro Pro Asn Val Ala Val Gln Phe

    210                 215                 220

Glu Ile Lys Leu Val Ser Val Lys

225                 230

<210>3

<211>1099

<212>DNA

<213>野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomons campestris pv.campestris)

<220>

<221>CDS

<222>(201)..(899)

<223>

<220>

<221>promoter

<222>(150)..(180)

<223>

<400>3

ggcgtggtct gcgatcagaa tgacgtgatt ggacatcgaa cttcctggct aacgtaaaaa     60

aaaagtaaat gcggaacttc tgaaaccctt gctggtcata ggtttcgtga taagtagcgg    120

ttcgctatcg cggccgctat cctagcgcgt catctcaggc ggcagacccg tcctgtgcca    180

ccaccctgga gaattgtttg atg aag ttg cgt tcg atc gcg gtc gct gtg gcg    233

                      Met Lys Leu Arg Ser Ile Ala Val Ala Val Ala

                      1               5                   10

gcc ctg gcc ctg acg ggc aat gcg ctg gcc cag gac aca acg tcc gag      281

Ala Leu Ala Leu Thr Gly Asn Ala Leu Ala Gln Asp Thr Thr Ser Glu

            15                  20                  25

aag ggc aag ctg agc tac tac ttt ggt tat gac tac ggc aac aac ctt      329

Lys Gly Lys Leu Ser Tyr Tyr Phe Gly Tyr Asp Tyr Gly Asn Asn Leu

        30                  35                  40

gcc gag ctc acc gga cgt ggt gaa cag ctg gat atc aac tcg gtg gtg      377

Ala Glu Leu Thr Gly Arg Gly Glu Gln Leu Asp Ile Asn Ser Val Val

    45                  50                  55

aag ggt ctg cag gac gcc tat gcc aag aag cag ccg gcc atc act gcc      425

Lys Gly Leu Gln Asp Ala Tyr Ala Lys Lys Gln Pro Ala Ile Thr Ala

60                  65                  70                  75

gac cag ctg aag ccg gcc gtg gaa gcg ttc cag aag cgt gag cag ggc      473

Asp Gln Leu Lys Pro Ala Val Glu Ala Phe Gln Lys Arg Glu Gln Gly

                80                  85                  90

cgt gcc cag cag gct aag gcc gag tac gac aag gcc gct gcc gcc aac      521

Arg Ala Gln Gln Ala Lys Ala Glu Tyr Asp Lys Ala Ala Ala Ala Asn

            95                  100                 105

aag acc aag agc gat gcg ttc ctg gcc aag aac aag agc acc gct ggc      569

Lys Thr Lys Ser Asp Ala Phe Leu Ala Lys Asn Lys Ser Thr Ala Gly

        110                 115                 120

gtg cag acg ctg ccg agc ggc gtg cag tac cgc gtg atc gaa gcc ggc      617

Val Gln Thr Leu Pro Ser Gly Val Gln Tyr Arg Val Ile Glu Ala Gly

    125                 130                 135

aag ggc gcc aag ccg acc cag gcc agc acc gtg caa ctt gaa gtc gcc      665

Lys Gly Ala Lys Pro Thr Gln Ala Ser Thr Val Gln Leu Glu Val Ala

140                 145                 150                 155

ggt ccg ttc ccc ttc ggc gac cgc gag aag gca cgt cct gcg cag cag      713

Gly Pro Phe Pro Phe Gly Asp Arg Glu Lys Ala Arg Pro Ala Gln Gln

                160                 165                 170

atc ccg gcc atc aag gtc agc gaa gtc gag atg cag gcc atg cgc gat      761

Ile Pro Ala Ile Lys Val Ser Glu Val Glu Met Gln Ala Met Arg Asp

            175                 180                 185

acg ctg ctg cag atg ccg gcc ggc tcc aag tgg gaa gtg acc ctg ccg      809

Thr Leu Leu Gln Met Pro Ala Gly Ser Lys Trp Glu Val Thr Leu Pro

        190                 195                 200

ccg gaa aag gcc tat ggt gcc gac ccg cgt acc ccg ttc ccg ccg aac      857

Pro Glu Lys Ala Tyr Gly Ala Asp Pro Arg Thr Pro Phe Pro Pro Asn

    205                 210                 215

gtg gct gtg cag ttc gag atc aag ctg gtc agc gtc aag taa              899

Val Ala Val Gln Phe Glu Ile Lys Leu Val Ser Val Lys

220                 225                 230

ttgcgtttgc tgttgctgtg acaacgccgg ccaccaggcc ggcgttgtcg tttcaggtat    959

cggaaggaca tcaggcgcgg aggccgcacg atgcagggcg aggattcgaa cagcggtggc    1019

ctggccagcc cgtgtatcgg tgtatgttcg ctggacgcgc aggggagctg tgtcggttgc    1079

ctgcggagcc tggatgaaat                                                1099

<210>4

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<400>4

gggaattcgg cgtggtctgc gatcag                                         26

<210>5

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<400>5

ggggatccat ttcatccagg ctccgc                                         26

<210>6

<211>32

<212>DNA

<213>人工序列

<400>6

acagttgaat tcgtcgatca ccgctaccac cg                                  32

<210>7

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<400>7

acagttggta ccgtggctga tgcagttcga gat                                 33

<210>8

<211>32

<212>DNA

<213>人工序列

<400>8

acagtttcta gagccagcgc attgcccgtc ag                                   32

<210>9

<211>32

<212>DNA

<213>人工序列

<400>9

acagttgtcg acgattgacc aggcccagtt gc                                   32

Claims (1)

1、编码肽基脯氨酰顺反异构酶的基因在野油菜黄单胞菌防治中的应用，所述基因特征在于具有SEQ ID NO：1的核苷酸序列。

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