CN1274238C - 一种提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂，其为由包括大豆分离蛋白、豆粕、豆饼、大豆在内的大豆蛋白、包括玉米蛋白、玉米蛋白粉和小麦蛋白在内的谷蛋白中的一种或几种的混合物经芽孢杆菌、曲霉菌、青霉、放线菌中的一种或几种发酵、水解得到的蛋白水解液；或是将蛋白水解液进一步滤菌、浓缩、加载体吸附干燥或直接喷雾干燥得到的混合物。该肽类饲料添加剂不仅能大幅度提高蛋黄色度，增加蛋黄中诸如类胡萝卜素之类的有益成分，而且能提高蛋壳质量和产蛋率，且成本较低、不会在蛋黄中沉积有害物质。

Description

一种提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂及其制备方法和用途
发明领域
本发明涉及一种肽类饲料添加剂，具体地说是涉及一种可富集饲料中天然的类胡萝卜素、增加蛋黄色度，以提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂及其制备方法和用途。
背景技术
现代集约化禽蛋生产中，由于广泛使用配合饲料，使得家禽的生产水平大幅度提高，但增产的同时带来了禽蛋(鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鹌鹑蛋)品质都有所下降的问题。禽蛋品质下降主要表现为蛋壳的光洁度下降、蛋壳的厚度和硬度减小，容易破损，特别是蛋黄的色度(黄色)变浅，味道变差，从而使得饲料喂养得到的禽蛋失去了传统禽蛋养殖中土鸡蛋(鸭蛋、鹅蛋、鹌鹑蛋)的美味。
为了解决上述问题，一些禽蛋生产者通常使用饲料添加剂来改善禽蛋的品质。但是，目前市场上常见的饲料添加剂多为色素类，如罗氏公司生产的加丽红素和加丽黄素。这类饲料添加剂仅可以增加蛋黄色度，不能从根本上改变禽蛋的品质，不能提高蛋黄中的诸如类胡萝卜素之类的有益成分，也不能提高蛋壳质量和产蛋率，而且成本较高。更为突出的问题是这类饲料添加剂是化学合成的，会沉积在蛋黄中，一是对人体不利，这与消费者的身体健康和安全息息相关；二是虽然生蛋黄色度提高了，但在加热熟化(如煮熟或炒熟等)过程中，色度又变浅(褪色)了，不能像土禽蛋那样即使加热也基本不褪色；三是这类化学合成的增色剂，不符合目前禽蛋生产发展的需要，目前和今后的禽蛋生产正在向无公害化、天然化、绿色化和有机禽蛋方向发展，不能添加化学合成的色素。
随着我国畜牧业的迅速发展，人们的温饱问题已解决，生活水平不断提高，消费者对于食品的安全意识也在不断增强，对禽蛋的风味、特色、功能日益关注，已成为全球公众关注的热点，人们渴望能吃到真正的天然食品。同时，由于化学合成添加剂的弊端日益暴露，导致了“餐桌污染”，甚至“恐食症”。因而迫切需要一种天然、绿色、无毒副作用的饲料添加剂，能生产出满足现代消费者要求的、具有传统土鸡蛋(土鸭蛋、土鹅蛋等)美味和蛋黄色度的绿色禽蛋，具有重要的科学、经济和社会意义。
发明内容
本发明的目的在于克服已有技术的饲料添加剂使用化学合成色素增加蛋黄色度时，不能从根本上改变禽蛋品质的缺陷，从而提供一种不仅能大幅度提高蛋黄色度，增加蛋黄中诸如类胡萝卜素之类的有益成分，而且能提高蛋壳质量和产蛋率，且成本较低、不会在蛋黄中沉积有害物质的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂。
本发明的另一目的在于提供所述提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂的制备方法。
本发明的再一目的在于提供所述提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂的用途。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
本发明提供的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂，其为由如下制备方法将发酵底物经发酵、水解且水解度(DH％)控制在8～20％，并且经超高温瞬时灭菌得到的蛋白水解液，所述的制备方法包括如下步骤：
1)制备种子液：
将芽孢杆菌、曲霉菌、青霉、放线菌中的一种或几种，接入灭菌后的液体培养基中，于25～35℃培养24～48小时，得到种子液；
所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液：蛋白胨1.3～2.5g，葡萄糖3～5g，糖蜜3～5g，马铃薯浸液50～100ml，可溶性淀粉10～20g，蔗糖10～30g，牛肉膏2～3g，酵母浸粉3.5～5g，豆粕1.5～2g，生长因子1～2ml，水1000ml；其中的生长因子为含有MgSO4.7H2O 20.00～30.00mg/ml，CaCl2.2H2O 2.20～3.50mg/ml，ZnSO4.7H2O0.81～1.10mg/ml，FeSO4.7H2O 0.44～0.60mg/ml，MnSO4.H2O 0.13～0.20mg/ml和CuSO4.5H2O 0.02～0.04mg/ml的混合物；
所述的芽孢杆菌为腊样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌或短小芽孢杆菌；
所述的曲霉菌为黑曲霉菌、栖土曲霉菌、米曲霉菌、肉桂色曲霉菌或宇佐美曲霉菌；
所述的放线菌为绿色糖单孢菌、灰绿链霉菌或费式链霉菌；
所述的青霉菌为紫微青霉、产黄青霉、苹果青霉、淡黄青霉、台湾青霉、杜邦青霉或蓝棕青霉；
2)发酵降解：
将发酵底物粉碎到40～120目后放入发酵罐中，依次加入水和碳源，所加入水的重量与发酵底物所含蛋白质的重量份配比为100∶3～20，所加入碳源的含碳量与发酵底物的含氮量的重量份配比为1∶2～30，将发酵液在0.1～0.13MPa，115～125℃灭菌10～30分钟，冷却到37℃，加入步骤1)得到的种子液，种子液和发酵液的体积比为0.3～1∶10，混合均匀后在25～37℃，以0.5～2.5vvm的速度通入无菌空气，以150～300rpm速度搅拌发酵24～120小时，得到蛋白水解液，于140～145℃灭菌2～8秒，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；
所述的发酵底物为选自大豆蛋白、谷蛋白中的一种或几种的混合物；
所述的大豆蛋白包括大豆分离蛋白、豆粕、豆饼、大豆；
所述的谷蛋白包括玉米蛋白、玉米蛋白粉和小麦蛋白；
所述的碳源包括玉米面、红糖、食用白糖、玉米糖浆、淀粉、甘蔗糖蜜、甜菜糖蜜。
用于制备本发明的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂的方法还包括步骤3)和步骤4)：
所述步骤3)为蛋白水解液的离心除渣、超滤、浓缩：
将步骤2)得到的经灭菌的蛋白水解液再经4000～6000rpm离心除去渣质，分出的上清液通过膜孔径为5nm的超滤膜过滤；将此滤液经负压真空浓缩到原体积的40～60％，得到浓缩液；
所述步骤4)为加载体吸附干燥或喷雾干燥：
加载体吸附干燥是将步骤3)得到的浓缩液，加到预先混合好的载体中，浓缩液与载体的重量比为0.5～0.8∶1，然后在45～80℃干燥，得到固态的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；所述的载体由2～5重量份有机载体和3～5重量份无机载体组成；所述有机载体包括糠麸类和饼粕类有机载体；所述糠麸类有机载体为麦麸、玉米芯粉、脱脂稻壳粉和脱脂米糠中的一种或几种的混合物；所述饼粕类有机载体为豆粕粉、豆饼粉和玉米蛋白粉中的一种或几种的混合物；所述无机载体为轻质碳酸钙、石粉、麦饭石和沸石粉中的一种或几种的混合物；
喷雾干燥是将步骤3)得到的浓缩液，喷雾干燥，得到固态的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂。
本发明提供的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
1)制备种子液：
将芽孢杆菌、曲霉菌、青霉、放线菌中的一种或几种，接入灭菌后的液体培养基中，于25～35℃培养24～48小时，得到种子液；
所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液：蛋白胨1.3～2.5g，葡萄糖3～5g，糖蜜3～5g，马铃薯浸液50～100ml，可溶性淀粉10～20g，蔗糖10～30g，牛肉膏2～3g，酵母浸粉3.5～5g，豆粕1.5～2g，生长因子1～2ml，水1000ml；其中的生长因子为含有MgSO4.7H2O 20.00～30.00mg/ml，CaCl2.2H2O 2.20～3.50mg/ml，ZnSO4.7H2O0.81～1.10mg/ml，FeSO4.7H2O 0.44～0.60mg/ml，MnSO4.H2O 0.13～0.20mg/ml和CuSO4.5H2O 0.02～0.04mg/ml的混合物；
所述的芽孢杆菌为腊样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌或短小芽孢杆菌；
所述的曲霉菌为黑曲霉菌、栖土曲霉菌、米曲霉菌、肉桂色曲霉菌或宇佐美曲霉菌；
所述的放线菌为绿色糖单孢菌、灰绿链霉菌或费式链霉菌；
所述的青霉菌为紫微青霉、产黄青霉、苹果青霉、淡黄青霉、台湾青霉、杜邦青霉或蓝棕青霉；
2)发酵降解：
将发酵底物粉碎到40～120目后放入发酵罐中，依次加入水和碳源，所加入水的重量与发酵底物所含蛋白质的重量份配比为100∶3～20，所加入碳源的含碳量与发酵底物的含氮量的重量份配比为1∶2～30，将发酵液在0.1～0.13MPa，115～125℃灭菌10～30分钟，冷却到37℃，加入步骤1)得到的种子液，种子液和发酵液的体积比为0.3～1∶10，混合均匀后在25～37℃，以0.5～2.5vvm的速度通入无菌空气，以150～300rpm速度搅拌发酵24～120小时，得到蛋白水解液，于140～145℃灭菌2～8秒，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂(液剂)；
所述的发酵底物为选自大豆蛋白、谷蛋白中的一种或几种的混合物；
所述的大豆蛋白包括大豆分离蛋白、豆粕、豆饼、大豆；
所述的谷蛋白包括玉米蛋白、玉米蛋白粉和小麦蛋白；
所述的碳源包括玉米面、红糖、食用白糖、玉米糖浆、淀粉、甘蔗糖蜜、甜菜糖蜜。
其制备方法还包括步骤3)和步骤4)：
所述步骤3)为蛋白水解液的离心除渣、超滤、浓缩：
将步骤2)得到的经灭菌的蛋白水解液再经4000～6000rpm离心除去渣质，分出的上清液通过膜孔径为5nm的超滤膜过滤；将此滤液经负压真空浓缩到原体积的40～60％，得到浓缩液；
所述步骤4)为加载体吸附干燥或喷雾干燥：
加载体吸附干燥是将步骤3)得到的浓缩液，加到预先混合好的载体中，浓缩液与载体的重量比为0.5～0.8∶1，然后在45～80℃干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；所述的载体由2～5重量份有机载体和3～5重量份无机载体组成；所述有机载体包括糠麸类和饼粕类有机载体；所述糠麸类有机载体为麦麸、玉米芯粉、脱脂稻壳粉和脱脂米糠中的一种或几种的混合物；所述饼粕类有机载体为豆粕粉、豆饼粉和玉米蛋白粉中的一种或几种的混合物；所述无机载体为轻质碳酸钙、石粉、麦饭石和沸石粉中的一种或几种的混合物；
喷雾干燥是将步骤3)得到的浓缩液，喷雾干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂。
本发明提供的上述肽类饲料添加剂具有多种用途：
1)该肽类饲料添加剂可用于提高禽蛋品质，大幅度提高蛋黄色度，增加蛋黄中有益成分，提高蛋壳质量和卵蛋白含量。
2)提高蛋禽的产蛋率、饲料转化效率等生产性能。
3)降低蛋禽死淘率，提高蛋禽抗病力。
4)该肽类饲料添加剂能提高蛋禽对矿物质元素利用率，促进饲料中蛋白质的消化、吸收和在蛋清中的沉积。
5)该肽类饲料添加剂有降低禽蛋黄中胆固醇含量，提高蛋黄中类胡萝卜素的功能。
该肽类饲料添加剂的使用方法为在每吨蛋禽饲料中的添加量为80～150mg(有效肽)/kg饲料，可以直接食用，也可混入饲料或饮水中。
与已有技术相比，本发明提供的肽类饲料添加剂具有以下优越性：
1)由于本发明所用的原料是天然蛋白，发酵过程只是利用天然的有益微生物的酶将天然蛋白质大分子降解“切割”成分子肽，而这类肽仍保持了天然性，是安全无害的，即使在蛋黄中沉积也不会对人体产生危害。
2)本发明提供的肽类饲料添加剂可以使蛋黄中的类胡萝卜素提高近2～3倍，一方面可以使得蛋黄色度提高，蛋黄呈金黄红色，从而满足人们选择禽蛋时的需求；另一方面，因为类胡萝卜素具有抗癌、抗氧化、抗心血管疾病以及维护视力的作用，所以类胡萝卜素的大幅度提高可以使得本品在生产抗癌、抗衰老、抗心血管疾病的功能性禽蛋工业中有应用前景。
3)本发明提供的肽类饲料添加剂类还具有提高产蛋率(3～5％)的功效，同时还可提高禽蛋品质，例如可以增加蛋壳光洁度、提高蛋壳质量和卵蛋白含量等，是一种具有多种用途的饲料添加剂。
4)使用本发明提供的肽类饲料添加剂，可以降低料蛋比，节约成本，提高经济效益。
5)本发明提供的肽类饲料添加剂还可以提高种蛋孵化率和出壳仔鸡(鸭、鹅、鹌鹑)的成活率。
附图说明
图1是使用本发明实施例29的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂后鸡蛋蛋黄色度的照片，其中左侧为使用实施例29的饲料添加剂的鸡蛋，右侧为仅饲喂蛋鸡基础日粮的鸡蛋。
具体实施方式
实施例1
将枯草芽孢杆菌接入灭菌后的液体培养基中，25℃培养48小时，得到种子液。
所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液：蛋白胨1.3g，葡萄糖3g，糖蜜3g，马铃薯浸液50ml，可溶性淀粉10g，蔗糖10g，牛肉膏2g，酵母浸粉3.5g，豆粕1.5g，生长因子1ml，水1000ml；其中的生长因子为含有MgSO4.7H2O 20.00mg/ml，CaCl2.2H2O2.20mg/ml，ZnSO4.7H2O 0.81mg/ml，FeSO4.7H2O 0.44mg/ml，MnSO4.H2O 0.13mg/ml，CuSO4.5H2O 0.02mg/ml的混合物。
将发酵底物——大豆分离蛋白粉粉碎到40目后放入发酵罐中，依次加入水和碳源——玉米面和糖蜜(重量比为1∶1)，所加入水的重量与发酵底物所含蛋白质的重量比为100∶3，所加入碳源的含碳量与发酵底物的含氮量的重量比为1∶2，将混合物在0.1MPa，121℃灭菌30分钟，冷却到37℃，加入如前所述得到的种子液，种子液和发酵液的体积比为0.3∶10，混合均匀后在25℃，以0.5vvm的速度通入无菌空气，以150rpm速度搅拌发酵120小时，得到水解度(DH％)为20％的蛋白水解液，然后经超高温瞬时灭菌机于140℃灭菌8秒，即提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂L-1(液剂)。
水解度(Degree of Hydrolysis，DH)的测定方法如下：
①标准曲线的绘制：首先配制标准甘氨酸溶液，其浓度为20ug/ml；然后依表1所列加样量顺序加样。
                      表1  甘氨酸、茚三酮和乙醇的加样量
  试管编号   0   1   2   3   4   5   6   7
  标准甘氨酸溶液加样量(ml)蒸馏水加样量(ml)终体积2ml时甘氨酸终浓度(ug/ml)   02.00   0.21.82   0.41.64   0.61.46   0.81.28   1.01.010   1.50.515   2.0020
  茚三酮加样量(ml)40％乙醇加样量(ml)   15   15   15   15   15   15   15   15
按表1所列加样量，于具塞试管中依次加入标准甘氨酸溶液、蒸馏水和茚三酮显色剂，在沸水中加热15min，然后于冷水中冷却5min；再加入40％的乙醇溶液终止反应，放置15min；以空白管调零于570nm处测定A(吸光度)值。
②水解蛋白液中-NH2含量的测定
取一定量的蛋白水解液于4000rpm下离心15min，取上清液100μl于25ml容量瓶，定容，亦即稀释250倍。吸取2ml稀释液于具塞试管中并加入1ml茚三酮显色剂，混匀后于沸水中加热15min；然后于冷水中冷却5min；再加5ml 40％的乙醇溶液终止反应，放置15min后，待测。最后，利用标准曲线计算蛋白水解液中-NH2的含量(umol/ml)。
③水解度(DH％)计算
在上式中：
蛋白水解液的相对甘氨酸浓度：是指按上述方法测出的蛋白水解液的吸光度后，由标准曲线换算出的甘氨酸浓度。
发酵底物的蛋白浓度：是指发酵底物(如大豆蛋白等)的蛋白质浓度。
75.07：是甘氨酸的分子量。
7.8mmol/g：是大豆蛋白完全水解后的肽键数(常数)。
0.33mmol/g：是发酵底物(原料)中的肽键数(常数)。
实施例2、
将黑曲霉菌接入灭菌后的液体培养基中，35℃培养24小时，得到种子液。
所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液：蛋白胨2.5g，葡萄糖5g，糖蜜5g，马铃薯浸液100ml，可溶性淀粉20g，蔗糖30g，牛肉膏3g，酵母浸粉5g，豆粕2g，生长因子2ml，水1000ml；其中的生长因子为含有MgSO4.7H2O 30.00mg/ml，CaCl2.2H2O3.50mg/ml，ZnSO4.7H2O 1.10mg/ml，FeSO4.7H2O 0.60mg/ml，MnSO4.H2O 0.20mg/ml，CuSO4.5H2O 0.04mg/ml的混合物。
将发酵底物——豆饼粉碎到120目后放入发酵罐中，依次加入水和碳源——玉米糖蜜和白砂糖(重量比＝3∶2)，所加入水的重量与发酵底物所含蛋白质的重量比为100∶20，所加入碳源的含碳量与发酵底物的含氮量的重量比为1∶30，将混合物在0.13MPa，125℃灭菌10分钟，冷却到37℃，加入如前所述得到的种子液，种子液和发酵液的体积比为1∶10，混合均匀后在37℃，以2.5vvm的速度通入无菌空气，以300rpm速度搅拌发酵24小时，得到水解度(DH％)为8％的蛋白水解液，然后经超高温瞬时灭菌机于145℃灭菌2秒，即提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂L-2(液剂)。
实施例3、
将绿色糖单孢菌接入灭菌后的液体培养基中，27℃培养36小时，得到种子液。
所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液：蛋白胨1.8g，葡萄糖4g，糖蜜4g，马铃薯浸液70ml，可溶性淀粉15g，蔗糖20g，牛肉膏2.5g，酵母浸粉4g，豆粕1.8g，生长因子1.5ml，水1000ml；其中的生长因子为含有MgSO4.7H2O 25.00mg/ml，CaCl2.2H2O 3.00mg/ml，ZnSO4.7H2O 1.00mg/ml，FeSO4.7H2O 0.50mg/ml，MnSO4.H2O0.17mg/ml，CuSO4.5H2O 0.03mg/ml的混合液。
将发酵底物——豆粕粉碎到80目后放入发酵罐中，依次加入水和碳源——淀粉，所加入水的重量与发酵底物所含蛋白质的重量比为100∶10，所加入碳源的含碳量与发酵底物的含氮量的重量比为1∶10，将混合物在0.11MPa，115℃灭菌20分钟，冷却到37℃，加入如前所述得到的种子液，种子液和发酵液的体积比为0.5∶10，混合均匀后在28℃，以1.5vvm的速度通入无菌空气，以180rpm速度搅拌发酵80小时，得到水解度(DH％)为12％的蛋白水解液，然后经超高温瞬时灭菌机于142℃灭菌6秒，即提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂L-3(液剂)。
实施例4～27、
如表2所列，制备提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂L-4到L-27(液剂)。
                                 表2、
  肽类饲料添加剂   制备方法   制备种子液所用菌种   发酵底物   碳源   蛋白水解液水解度
  L-4   同实施例1   腊样芽孢杆菌   大豆   玉米面   19
  L-5   同实施例2   地衣芽孢杆菌   大豆分离蛋白、豆粕   红糖   8
  L-6   同实施例3   纳豆芽孢杆菌   豆粕、豆饼   食用白糖   13
  L-7   同实施例1   巨大芽孢杆菌   豆粕、豆饼、大豆   玉米糖浆   20
  L-8   同实施例2   短小芽孢杆菌   玉米蛋白   甘蔗糖蜜   9
  L-9   同实施例3   栖土曲霉菌   玉米蛋白粉   甜菜糖蜜   12
  L-10   同实施例1   米曲霉菌   小麦蛋白   玉米面、红糖   18
  L-11   同实施例2   肉桂色曲霉菌   玉米蛋白、玉米蛋白粉   红糖、食用白糖   12
  L-12   同实施例3   宇佐美曲霉菌   玉米蛋白、小麦蛋白   食用白糖、玉米糖浆   14
  L-13   同实施例1   灰绿链霉菌   小麦蛋白、玉米蛋白粉   玉米糖浆、淀粉   20
  L-14   同实施例2   费式链霉菌   玉米蛋白、小麦蛋白、玉米蛋白粉   淀粉、甘蔗糖蜜   9
  L-15   同实施例3   紫微青霉   豆粕、玉米蛋白   淀粉、甜菜糖蜜   16
  L-16   同实施例1   产黄青霉   豆饼、小麦蛋白   淀粉、甘蔗糖蜜、甜菜糖蜜   19
  L-17   同实施例2   苹果青霉   豆粕、豆饼、大豆   玉米面   8
  L-18   同实施例3   淡黄青霉   豆饼、玉米蛋白粉   红糖   15
  L-19   同实施例1   台湾青霉   小麦蛋白、玉米蛋白粉   食用白糖   20
  L-20  同实施例2   杜邦青霉   大豆分离蛋白、豆粕   玉米糖浆   10
  L-21  同实施例3   蓝棕青霉   豆粕、玉米蛋白   淀粉   14
  L-22  同实施例1   腊样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌   豆饼   甘蔗糖蜜   17
  L-23  同实施例2   米曲霉菌、栖土曲霉菌   小麦蛋白   甜菜糖蜜   11
  L-24  同实施例3   杜邦青霉、台湾青霉   玉米蛋白   淀粉   13
  L-25  同实施例1   灰绿链霉菌、费式链霉菌   小麦蛋白   玉米面   20
  L-26  同实施例2   米曲霉菌、灰绿链霉菌   大豆   甘蔗糖蜜   15
  L-27  同实施例3   蓝棕青霉、巨大芽孢杆菌   大豆分离蛋白、豆粕   淀粉、甜菜糖蜜   8
实施例28、
将实施例1得到的水解度(DH％)为20％的蛋白水解液经4000rpm离心除去渣质，分出的上清液通过膜孔径为5nm的超滤膜过滤；将此滤液经负压真空浓缩到原体积的40％，得到浓缩液。
将此浓缩液加到预先混合好的载体中，所述载体为5重量份有机载体(2重量份麦麸，2重量份豆粕粉，1重量份玉米蛋白粉)和5重量份无机载体(轻质碳酸钙)，组成，浓缩液与载体的重量比为0.5∶1，然后在45℃干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂C-1。
实施例29、
将实施例2得到的水解度(DH％)为8％的蛋白水解液经6000rpm离心除去渣质，分出的上清液通过膜孔径为5nm的超滤膜过滤；将此滤液经负压真空浓缩到原体积的60％，得到浓缩液。
将此浓缩液加到预先混合好的载体中，所述载体为2重量份有机载体(玉米芯粉)和3重量份无机载体(石粉)，组成，浓缩液与载体的重量比为0.8∶1，然后在80℃干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂C-2。
实施例30、
将实施例3得到的水解度(DH％)为12％的蛋白水解液经5000rpm离心除去渣质，分出的上清液通过膜孔径为5nm的超滤膜过滤；将此滤液经负压真空浓缩到原体积的50％，得到浓缩液。
将此浓缩液加到预先混合好的载体中，所述载体为3重量份有机载体(脱脂稻壳粉)和4重量份无机载体(麦饭石)，组成，浓缩液与载体的重量比为0.7∶1，然后在60℃干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂C-3。
实施例31～54、
将实施例4～27得到的蛋白水解液分别按实施例28～30的方法，如表3所列，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂C-4到C-27。
                                    表3、
  肽类饲料添加剂   蛋白水解液   制备方法  有机载体  无机载体
  C-4   实施例4   同实施例28  麦麸2重量份  轻质碳酸钙3重量份
  C-5   实施例5   同实施例29  玉米芯粉3重量份  石粉4重量份
  C-6   实施例6   同实施例30  脱脂稻壳粉4重量份  麦饭石5重量份
  C-7   实施例7   同实施例28  脱脂米糠5重量份  沸石粉5重量份
  C-8   实施例8   同实施例29  豆粕粉2重量份  轻质碳酸钙2重量份石粉2重量份
  C-9   实施例9   同实施例30  豆饼粉3重量份  石粉1重量份麦饭石1重量份沸石粉1重量份
  C-10   实施例10   同实施例28  玉米蛋白粉4重量份  麦饭石2重量份沸石粉1重量份
  C-11   实施例11   同实施例29  麦麸2重量份玉米芯粉3重量份  石粉2重量份麦饭石2重量份
  C-12   实施例12   同实施例30  麦麸1重量份脱脂稻壳粉1重量份  轻质碳酸钙2重量份石粉1重量份麦饭石2重量份
  C-13   实施例13   同实施例28  麦麸2重量份脱脂米糠1重量份  轻质碳酸钙2重量份石粉2重量份
  C-14   实施例14   同实施例29  麦麸1重量份豆粕粉3重量份   石粉2重量份麦饭石1重量份
  C-15   实施例15   同实施例30  麦麸2重量份豆饼粉3重量份   轻质碳酸钙3重量份
  C-16   实施例16   同实施例28  玉米芯粉1重量份脱脂稻壳粉1重量份   石粉4重量份
  C-17   实施例17   同实施例29  玉米芯粉1重量份豆粕粉2重量份   麦饭石5重量份
  C-18   实施例18   同实施例30  脱脂稻壳粉1重量份豆粕粉2重量份玉米蛋白粉1重量份   沸石粉5重量份
  C-19   实施例19   同实施例28  脱脂米糠1重量份豆粕粉2重量份豆饼粉2重量份   轻质碳酸钙4重量份
  C-20   实施例20   同实施例29  玉米芯粉1重量份豆粕粉1重量份   石粉3重量份
  C-21   实施例21   同实施例30  麦麸3重量份   麦饭石3重量份
  C-22   实施例22   同实施例28  玉米芯粉4重量份   沸石粉4重量份
  C-23   实施例23   同实施例29  脱脂稻壳粉5重量份   轻质碳酸钙5重量份
  C-24   实施例24   同实施例30  脱脂米糠2重量份   石粉5重量份
  C-25   实施例25   同实施例28  豆粕粉3重量份   麦饭石4重量份
  C-26   实施例26   同实施例29  豆饼粉4重量份   沸石粉3重量份
  C-27   实施例27   同实施例30  玉米蛋白粉5重量份   轻质碳酸钙3重量份
实施例55、
将实施例1得到的水解度(DH％)为20％的蛋白水解液经4000rpm离心除去渣质，分出的上清液通过膜孔径为5nm的超滤膜过滤；将此滤液经负压真空浓缩到原体积的40％，得到浓缩液。
将此浓缩液按常规方法喷雾干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂S-1。
实施例56、
将实施例2得到的水解度(DH％)为8％的蛋白水解液经6000rpm离心除去渣质，分出的上清液通过膜孔径为5nm的超滤膜过滤；将此滤液经负压真空浓缩到原体积的60％，得到浓缩液。
将此浓缩液按常规方法喷雾干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂S-2。
实施例57、
将实施例3得到的水解度(DH％)为12％的蛋白水解液经5000rpm离心除去渣质，分出的上清液通过膜孔径为5nm的超滤膜过滤；将此滤液经负压真空浓缩到原体积的50％，得到浓缩液。
将此浓缩液按常规方法喷雾干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂S-3。
实施例58～81
将实施例4～27得到的蛋白水解液分别经5000rpm离心除去渣质，分出的上清液通过膜孔径为5nm的超滤膜过滤；将此滤液经负压真空浓缩到原体积的50％，得到浓缩液；将此浓缩液按常规方法喷雾干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂S-4到S-27。
根据长期的喂养试验可知，本发明提供的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂无论是以液剂(L-1～L-27)，还是以吸附在载体上的形式(C-1～C-27)或是直接喷雾干燥得到的固体粉末(S-1～S-27)形式饲喂禽类，其效果仅与所含的蛋白水解液的水解度和饲喂量有关，与饲料的固、液形式无关。
实施例82、蛋鸡试验
将60周龄的海南灰试验蛋鸡随机分成5个组，每个组100只鸡，分别为
A组，空白对照组，仅饲喂蛋鸡基础日粮；
B组，添加肽类饲料添加剂组，除饲喂蛋鸡基础日粮外，每吨饲料添加2kg实施例1的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；
C组，添加肽类饲料添加剂组，除饲喂蛋鸡基础日粮外，每吨饲料添加1.92kg实施例28的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；
D组，添加肽类饲料添加剂组，除饲喂蛋鸡基础日粮外，每吨饲料添加3.8kg实施例29的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；
E组，添加肽类饲料添加剂组，除饲喂蛋鸡基础日粮外，每吨饲料添加2.6kg实施例30的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；
试验期4周，并按上述分组重复试验5次，记录各组的产蛋率、蛋重、蛋黄色度、蛋壳厚度、浓蛋白高度等性质的5次平均值，列于表4。
使用的蛋鸡基础日粮配方(重量百分比)为：玉米58.72，豆粕26.0，麦麸2.0，石粉8.44，氢钙1.5，食盐0.34，植物油2.0，1％预混料1.0。
                             表4、各组的蛋品质的比较
  性能   A组   B组   C组   D组   E组
  平均蛋重(g)浓蛋白高度(mm)蛋黄色度*蛋壳强度(kg/mm2)蛋壳厚度(um)产蛋率(％)料蛋比**   63.575.616.693.11364.3682.82.51   64.855.7611.603.89381.0286.72.27   64.795.7411.583.88381.1386.82.23   64.895.8211.683.97383.2287.22.19   64.845.7711.653.92382.7886.92.20
*蛋黄色度为罗氏比色扇比色值。
**料蛋比为每产1kg蛋所耗饲料量(kg)。
从表4可以看出，饲喂本发明提供的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂，鸡蛋的各项指标均明显好于普通配合饲料，说明这种活性肽添加剂在提高蛋鸡的生产性能和蛋品质中起了良好的促进作用。
特别是蛋黄色度，可以提高近5个色度，如图1所示，图1是D组(左侧)和A组(右侧)的鸡蛋蛋黄色度的照片，由此可见，饲喂肽类饲料添加剂的蛋黄颜色更黄，且蛋黄粘稠，其比色值可以达到11～13，平均值也在11之上，而饲喂一般饲料的蛋黄颜色比色值只有5～6，说明该肽类饲料添加剂有非常好的促进蛋黄增色(增加类胡萝卜素)功能。
除了被认为是衡量蛋品质的一个重要指标外，蛋黄颜色在食物感觉中也起着重要的作用，消费者常将金黄色的蛋黄和健康联系在一起，因而饲喂本发明提供的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂的禽蛋更具有市场前景。
由农业部食品检测中心测定了饲料和鸡蛋中的类胡萝卜素含量，列于表5。由此可见，在空白对照组(A组)的蛋黄中，类胡萝卜素的含量为13.3mg/Kg，而使用实施例29的肽类饲料添加剂的D组的蛋黄中，类胡萝卜素的含量为35.8mg/Kg，提高了近3倍。而且蛋黄中的类胡萝卜素并不是由于从肽类饲料添加剂中沉积而得，因为肽类饲料添加剂中的胡萝卜素含量极低，例如实施例29的肽类饲料添加剂中胡萝卜素的含量仅为0.03mg/Kg，其添加量为每吨饲料添加3.8kg肽类饲料添加剂，因而与基础日粮的类胡萝卜素(55.6mg/kg)相比，仅可以提供微量的类胡萝卜素0.1mg/kg。由此，可以说明本发明提供的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂有助于外界(如饲料中)的天然类胡萝卜素沉积到蛋黄中。
                             表5、类胡萝卜素的含量比较
  实施例29的肽类饲料添加剂   基础日粮   D组蛋黄   A组蛋黄
  类胡萝卜素含量(mg/Kg)   0.03   55.6   35.8   13.3
实施例83、蛋鸭试验
将55周龄的蛋鸭随机分成5个组，每个组100只鸭，分别为
A组，空白对照组，仅饲喂蛋鸭基础日粮；
B组，添加肽类饲料添加剂组，除饲喂蛋鸭基础日粮外，每吨饲料添加2kg实施例1的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；
C组，添加肽类饲料添加剂组，除饲喂蛋鸭基础日粮外，每吨饲料添加1.92kg实施例55的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；
D组，添加肽类饲料添加剂组，除饲喂蛋鸭基础日粮外，每吨饲料添加3.8kg实施例56的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；
E组，添加肽类饲料添加剂组，除饲喂蛋鸭基础日粮外，每吨饲料添加2.6kg实施例57的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；
试验期30天，并按上述分组重复试验4次，记录各组的产蛋率、蛋重、蛋黄色度、蛋壳厚度、浓蛋白高度等性质的4次平均值，列于表6。
蛋鸭基础日粮，配方(重量百分比)为玉米59.0，豆粕20.0，菜粕6.0，麦麸2.72，石粉8.46，氢钙1.5，食盐0.32，植物油1.0，1％蛋鸭预混料1.0。
                            表6、各组鸭蛋品质的比较
  性能   A组   B组   C组   D组   E组
  平均蛋重(g)   64.32   67.28   67.78   68.34   68.11
  浓蛋白高度(mm)   5.41   5.72   5.70   5.78   5.76
  蛋黄色度*   6.55   10.97   11.28   11.48   11.45
  蛋壳强度(kg/mm2)   3.02   3.58   3.43   3.75   3.64
  蛋壳厚度(um)   360.22   380.31   380.56   381.45   381.23
  产蛋率(％)   80.5   85.3   85.6   86.9   85.7
  料蛋比**   2.57   2.30   2.24   2.11   2.13
*蛋黄色度为罗氏比色扇比色值。
**料蛋比为每产1kg蛋所耗饲料量(kg)。
从表6可以看出，饲喂本发明提供的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂，鸭蛋的各项指标均明显好于普通配合饲料(A组)，这说明该种肽类添加剂在提高蛋鸭的生产性能和蛋品质中起了明显的促进作用。特别是提高蛋黄色度方面，可以提高5个色度左右，说明该肽类饲料添加剂有非常好的增色功能。蛋黄颜色是禽蛋品质的一个重要指标，在食物感觉中也有着重要的作用，消费者经常将金黄色的蛋黄和健康联系在一起，因而饲喂本发明提供的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂使鸭蛋更具有市场前景和价值。
由农业部食品检测中心测定了饲料和鸭蛋中的类胡萝卜素含量，列于表7。从表中可以看出，空白对照组鸭蛋的蛋黄中，类胡萝卜素含量仅为12.9mg/Kg，而使用实施例56的肽类饲料添加剂的D组的蛋黄中，类胡萝卜素的含量为38.7mg/Kg，提高了近3倍。而且蛋黄中的类胡萝卜素并不是由于从肽类饲料添加剂中沉积而得，因为肽类饲料添加剂中的胡萝卜素含量极低，例如实施例56的肽类饲料添加剂中胡萝卜素的含量仅为0.03mg/Kg，其添加量为每吨饲料添加3.8kg肽类饲料添加剂，因而与基础日粮的类胡萝卜素相比，仅可以提供微量的类胡萝卜素0.1mg/kg。由此，可以说明本发明提供的提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂有助于外界(如饲料中)的天然类胡萝卜素沉积到蛋黄中的效果。
医学研究已证明，类胡萝卜素对人体具有抗癌、抗氧化、抗心血管理疾病、维护视力和繁殖等功能，因而这类鸭蛋对消费者更具有吸引力。
                            表7、类胡萝卜素的含量比较
  实施例56的肽类饲料添加剂   基础日粮   D组蛋黄   A组蛋黄
  类胡萝卜素含量(mg/Kg)   0.03   55.6   38.7   12.9

Claims (9)

1、一种提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂，其为由如下制备方法将发酵底物经发酵、水解且水解度控制在8～20％，并且经超高温瞬时灭菌得到的蛋白水解液，所述的制备方法包括如下步骤：
1)制备种子液：
将芽孢杆菌、曲霉菌、青霉、放线菌中的一种或两种，接入灭菌后的液体培养基中，于25～35℃培养24～48小时，得到种子液；
所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液：蛋白胨1.3～2.5g，葡萄糖3～5g，糖蜜3～5g，马铃薯浸液50～100ml，可溶性淀粉10～20g，蔗糖10～30g，牛肉膏2～3g，酵母浸粉3.5～5g，豆粕1.5～2g，生长因子1～2ml，水1000ml；其中的生长因子为含有MgSO4.7H2O 20.00～30.00mg/ml，CaCl2.2H2O 2.20～3.50mg/ml，ZnSO4.7H2O0.81～1.10mg/ml，FeSO4.7H2O 0.44～0.60mg/ml，MnSO4.H2O 0.13～0.20mg/ml，CuSO4.5H2O 0.02～0.04mg/ml的混合物；
所述的曲霉菌为黑曲霉菌、栖土曲霉菌、米曲霉菌、肉桂色曲霉菌或宇佐美曲霉菌；所述的放线菌为绿色糖单孢菌、灰绿链霉菌或费式链霉菌；所述的青霉菌为紫微青霉、产黄青霉、苹果青霉、淡黄青霉、台湾青霉、杜邦青霉或蓝棕青霉；
2)发酵降解：
将发酵底物粉碎到40～120目后放入发酵罐中，依次加入水和碳源，所加入水的重量与发酵底物所含蛋白质的重量比为100∶3～20，所加入碳源的含碳量与发酵底物的含氮量的重量比为1∶2～30，将发酵液在0.1～0.13MPa，115～125℃灭菌10～30分钟，冷却到37℃，加入步骤1)得到的种子液，种子液和发酵液的体积比为0.3～1∶10，混合均匀后在25～37℃，以0.5～2.5vvm的速度通入无菌空气，以150～300rpm速度搅拌发酵24～120小时，得到水解度8～20％的蛋白水解液，于140～145℃灭菌2～8秒，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；
所述的发酵底物为选自大豆蛋白、谷蛋白中的一种或几种的混合物；
所述的碳源选自玉米面、红糖、食用白糖、玉米糖浆、淀粉、甘蔗糖蜜、甜菜糖蜜中的一种或几种。
2、如权利要求1所述的肽类饲料添加剂，其特征在于，所述的芽孢杆菌为腊样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌或短小芽孢杆菌。
3、如权利要求1所述的肽类饲料添加剂，其特征在于，所述的大豆蛋白选自大豆分离蛋白、豆粕、豆饼、大豆中的一种或几种；所述的谷蛋白为玉米蛋白或/和小麦蛋白。
4、如权利要求1所述的肽类饲料添加剂，其特征在于，其制备方法还包括步骤3)和步骤4)：
所述步骤3)为蛋白水解液的离心除渣、超滤、浓缩：
将步骤2)得到的经灭菌的蛋白水解液再经4000～6000rpm离心除去渣质，分出的上清液通过膜孔径为5nm的超滤膜过滤；将此滤液经负压真空浓缩到原体积的40～60％，得到浓缩液；
所述步骤4)为加载体吸附干燥或喷雾干燥：
加载体吸附干燥是将步骤3)得到的浓缩液，加到预先混合好的载体中，浓缩液与载体的重量比为0.5～0.8∶1，然后在45～80℃干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；所述的载体由2～5重量份有机载体和3～5重量份无机载体组成；所述有机载体由糠麸类或饼粕类有机载体组成；所述糠麸类有机载体为麦麸、玉米芯粉、脱脂稻壳粉和脱脂米糠中的一种或几种的混合物；所述饼粕类有机载体为豆粕粉、豆饼粉和玉米蛋白粉中的一种或几种的混合物；所述无机载体为轻质碳酸钙、石粉、麦饭石和沸石粉中的一种或几种的混合物；
喷雾干燥是将步骤3)得到的浓缩液，喷雾干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂。
5、一种权利要求1所述的肽类饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
1)制备种子液：
将芽孢杆菌、曲霉菌、青霉、放线菌中的一种或两种，接入灭菌后的液体培养基中，于25～35℃培养24～48小时，得到种子液；
所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液：蛋白胨1.3～2.5g，葡萄糖3～5g，糖蜜3～5g，马铃薯浸液50～100ml，可溶性淀粉10～20g，蔗糖10～30g，牛肉膏2～3g，酵母浸粉3.5～5g，豆粕1.5～2g，生长因子1～2ml，水1000ml；其中的生长因子为含有MgSO4.7H2O 20.00～30.00mg/ml，CaCl2.2H2O 2.20～3.50mg/ml，ZnSO4.7H2O0.81～1.10mg/ml，FeSO4.7H2O 0.44～0.60mg/ml，MnSO4.H2O 0.13～0.20mg/ml，CuSO4.5H2O 0.02～0.04mg/ml的混合物；
所述的曲霉菌为黑曲霉菌、栖土曲霉菌、米曲霉菌、肉桂色曲霉菌或宇佐美曲霉菌；所述的放线菌为绿色糖单孢菌、灰绿链霉菌或费式链霉菌；所述的青霉菌为紫微青霉、产黄青霉、苹果青霉、淡黄青霉、台湾青霉、杜邦青霉或蓝棕青霉；
2)发酵降解：
将发酵底物粉碎到40～120目后放入发酵罐中，依次加入水和碳源，所加入水的重量与发酵底物所含蛋白质的重量比为100∶3～20，所加入碳源的含碳量与发酵底物的含氮量的重量比为1∶2～30，将发酵液在0.1～0.13MPa，115～125℃灭菌10～30分钟，冷却到37℃，加入步骤1)得到的种子液，种子液和发酵液的体积比为0.3～1∶10，混合均匀后在25～37℃，以0.5～2.5vvm的速度通入无菌空气，以150～300rpm速度搅拌发酵24～120小时，得到蛋白水解液，于140～145℃灭菌2～8秒，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；
所述的发酵底物为选自大豆蛋白、谷蛋白中的一种或几种的混合物；
所述的碳源选自玉米面、红糖、食用白糖、玉米糖浆、淀粉、甘蔗糖蜜、甜菜糖蜜中的一种或几种。
6、如权利要求5所述的肽类饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述的芽孢杆菌为腊样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌或短小芽孢杆菌。
7、如权利要求5所述的肽类饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述的大豆蛋白选自大豆分离蛋白、豆粕、豆饼、大豆中的一种或几种；所述的谷蛋白为玉米蛋白或/和小麦蛋白。
8、如权利要求5所述的肽类饲料添加剂的制备方法，其特征在于，还包括步骤3)和步骤4)：
所述步骤3)为蛋白水解液的离心除渣、超滤、浓缩：
将步骤2)得到的经灭菌的蛋白水解液再经4000～6000rpm离心除去渣质，分出的上清液通过膜孔径为5nm的超滤膜过滤；将此滤液经负压真空浓缩到原体积的40～60％，得到浓缩液；
所述步骤4)为加载体吸附干燥或喷雾干燥：
加载体吸附干燥是将步骤3)得到的浓缩液，加到预先混合好的载体中，浓缩液与载体的重量比为0.5～0.8∶1，然后在45～80℃干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂；所述的载体由2～5重量份有机载体和3～5重量份无机载体组成；所述有机载体由糠麸类或饼粕类有机载体组成；所述糠麸类有机载体为麦麸、玉米芯粉、脱脂稻壳粉和脱脂米糠中的一种或几种的混合物；所述饼粕类有机载体为豆粕粉、豆饼粉和玉米蛋白粉中的一种或几种的混合物；所述无机载体为轻质碳酸钙、石粉、麦饭石和沸石粉中的一种或几种的混合物；
喷雾干燥是将步骤3)得到的浓缩液，喷雾干燥，得到提高禽蛋品质的肽类饲料添加剂。
9、一种权利要求1所述的肽类饲料添加剂在提高禽蛋品质中的用途，其在每吨蛋禽饲料中的添加量为80～150mg有效肽/kg饲料，或直接食用，或混入饲料或饮水中。
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