CN1273532A - 具有抗癌和抗炎活性的牛排泻物提取物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本文公开了一种具有抗癌和抗炎活性的牛排泻物提取物,该提取物是由包括用选自低级醇、乙腈、水、低级酮和其混合物的极性溶剂提取牛排泻物这一步骤的方法制备的;一种制备所述提取物的方法和用所述的提取物作为抗癌药剂或佐剂或抗炎药剂的用途。

Description

具有抗癌和抗炎活性的牛排泻物提取物及其制备方法
技术背景
本发明涉及牛排泻物提取物及其制备方法。更具体地讲，本发明涉及不仅具有抗癌活性而且还具有抗炎活性的牛排泻物提取物及其制备方法，该提取物是通过强烈地抑制细胞增殖和通过抗氧化作用而发挥抗癌活性的，通过强烈地抑制血小板凝集而发挥抗炎活性的，这些提取物可用作抗癌药剂或佐剂或抗炎药剂。
背景技术
术语“癌症”是恶性肿瘤的总称。它是指其中有部分细胞开始异常增殖并持续增殖以侵害相邻正常组织和破坏细胞功能的状态。如果细胞发生了遗传突变，它们脱离了正常调控机制的控制，从而发生异常增殖。
到目前为止，已开发出的用于治疗各类癌症的抗癌药剂大体上可分为化学抗癌药剂和免疫抗癌药剂(生物反应的改性物质)。因为癌细胞的增殖能力不同于正常细胞的增殖能力，从而使化学药剂展示其效果。免疫药剂通过使器官的免疫活性复苏而清除癌细胞。
化学抗癌药剂通常对细胞是有毒性的，并基于癌细胞具有比正常细胞更强的增殖能力这一原理而发挥其作用。也就是说，如果将能抑制细胞增殖的化学抗癌药剂给药于活体，具有较强增殖能力的癌细胞将比正常细胞所受到的影响严重得多。
到目前为止，可将已开发出的化学抗癌药剂分成五种类型：烷化剂、代谢拮抗剂、抗生素抗癌药剂、植物抗癌药剂等。烷化剂是通过使核酸或蛋白质中的氢原子烷化而发挥其抗癌作用的药物。代谢拮抗剂是嘌呤或嘧啶碱基拮抗剂并通过抑制DNA复制而起作用。抗生素或植物抗癌药剂分别得自微生物和植物。抗癌药剂的其他例子是L-天冬酰胺酶或氯氨铂(铂化合物)。
如上所述，通过抑制细胞增殖并且衍生自微生物或植物的化学抗癌药剂已有人报道过。然而，在本领域中尚未有有关得自于动物的抗癌药剂的报道。
自远古以来，在民间就有用动物排泄物治疗各种疾病的疗法。也就是说，人的排泄物已被传统地用于治疗切伤或擦伤，而牛的排泄物被用于解毒或治疗烧伤。另外，已经知道的是受伤的动物经常摄取牛的排泄物。如上所述，虽然在传统上已将动物排泄物用作药物，但是到目前为止还没有对它进行过科学研究。而且，也没曾预料到动物排泄物能被用作抗癌药剂或佐剂或抗炎药剂。
本发明的公开
本发明的发明人进行了反复的科学研究，从而发现了牛排泻物的生理活性。结果，他们发现按照本发明方法制备的牛排泻物提取物具有强烈地抑制细胞增殖和抗氧化作用的抗癌活性以及强烈地抑制血小板凝集的抗炎活性，从而完成了本发明。
本发明的目的是提供一种新的具有抑制细胞增殖和抗氧化作用的抗癌活性以及抑制血小板凝集的抗炎活性的牛排泻物提取物，这些提取物可用作抗癌药剂或佐剂或抗炎药剂。
本发明的另一目的是提供一种制备上述牛排泻物提取物的方法。
本发明提供一种具有抗癌和抗炎活性的牛排泻物提取物，该提取物是由包括用极性有机溶剂提取牛排泻物这一步骤的方法制备的，所述极性有机溶剂选自具有1-4个碳原子的低级醇、乙腈、水、通式为R1COR2的低级酮和其混合物，其中R1和R2相互独立地为具有1-3个碳原子的烷基。在一优选的实施方案中，本发明的牛排泻物提取物是用选自水饱和的丁醇、乙酸乙酯和乙醚的非极性有机溶剂再提取所述提取物而制备的。并且上述牛排泻物优选是黄牛(cattle)或水牛的粪便。
本发明还提供了包括上述的牛排泻物提取物作为活性成分的抗癌药剂。在一优选的实施方案中，该抗癌药剂以100-500毫克的单位剂量口服给药，每天给药约3次。
本发明还提供了包括上述的牛排泻物提取物作为活性成分的抗炎药剂。在一优选的实施方案中，该抗癌药剂以100-500毫克的单位剂量口服给药，每天给药约3次。
本发明提供了一种具有抗癌和抗炎活性的牛排泻物提取物的制备方法，该方法包括用极性溶剂提取牛排泻物的这一步骤，所述极性溶剂选自具有1-4个碳原子的低级醇、通式为R1COR2的低级酮、乙腈、水和其混合物，其中R1和R2相互独立地为具有1-3个碳原子的烷基。在优选的实施方案中，该方法还包括用选自水饱和的丁醇、乙酸乙酯和乙醚的非极性有机溶剂再提取上述提取物的步骤。
附图的简要说明
图1a显示实施例1制备的牛排泻物提取物的硅胶薄层色谱的结果。
图1b显示实施例2制备的牛排泻物提取物的硅胶薄层色谱的结果。
图2a是显示实施例1制备的牛排泻物提取物的抗癌活性筛选结果的图。
图2b是显示实施例2制备的牛排泻物提取物的抗癌活性筛选结果的图。
实施本发明的最佳方式
下文将对本发明做更详细的阐述。在本发明中，术语“牛排泻物”是指“牛科动物的排泄物”。牛科动物包括根据动物分类学而属于牛科的所有动物。黄牛或水牛是本发明中特别优选的。
通过将新鲜的牛排泻物收集起来并用极性溶剂如低级醇、低级酮乙腈、水或其混合物对所得的排泄物进行提取来制备根据本发明的牛排泻物提取物。所述低级醇是具有1-4个碳原子的低级醇，具体而言，是甲醇或乙醇。所述的低级酮是通式为R1COR2的低级酮，其中R1和R2相互独立地为具有1-3个碳原子的烷基，具体而言，是丙酮或甲乙酮。
本发明的牛排泻物提取物可如上所述制备，也可更优选地再将所得的提取物悬浮在水中然后再用非极性有机溶剂对提取物悬浮液进行再次提取而制备，所述非极性有机溶剂如水饱和的丁醇、乙酸乙酯或乙醚。
牛排泻物提取物中可能含有来自牛所摄入的饲料中的各种成分。这些是饲料所含的成分或这些成分的衍生物。所述衍生物是原始成分由于消化液、消化酶或消化道中的肠细菌的作用而代谢产生的。本发明的提取物可能还含有牛消化道所分泌的各种消化液。
本发明的牛排泻物提取物具有抑制细胞增殖和抗氧化作用的抗癌活性以及抑制血小板凝集的抗炎活性，因此，这些提取物可用作抗癌药剂或抗癌佐剂或抗炎药剂。也就是说，抗癌药剂或佐剂或抗炎药剂可含有本发明的牛排泻物提取物作为活性成分。在本发明中所述药剂优选以口服给药。因此，可将本发明的提取物与可药用的载体一起制备成可口服给药的制剂形式如常规的片剂、硬或软的胶囊、溶液或混悬液。所述的可药用的载体是粘合剂、润滑剂、崩解剂、赋形剂、助溶剂、稳定剂、悬浮剂、着色剂或矫味剂。本发明的抗癌或抗炎药剂可优选以100-500毫克的单位剂量给药，每天给药3次。在上述情况下，可预期实现有效的抗癌或抗炎活性。
实施例
以下实施例将有助于对本发明获得进一步理解。然而，本领域的普通技术人员显然可以理解的是，此处所描述的具体的实施例仅是说明性的，并不意味着对本发明的限制；本发明被较为充分地描述在权利要求书中。实施例1牛排泻物提取物的制备
将10升甲醇加入10千克新鲜的牛排泻物中，使所得的混合物在加热至60℃下回流1小时。将如此制备的提取物过滤并减压除去滤液中的有机溶剂。随后，用水饱和的丁醇对所得提取物再次进行提取，得到2.5克非极性级分。对该级分进行过滤，然后进行干燥，得到粉末状的提取物。用硅胶薄层色谱对如此获得的提取物进行分析，其中用氯仿和甲醇按50∶1的混合物作移动相。结果被示于图1a。在图1a中，点①表示豆甾烷醇(C29H52O)，点②表示β-细胞固醇(C29H50O)。实施例2牛排泻物提取物的制备
将10升无水乙醇加入10千克新鲜的牛排泻物中，将所得的混合物充分搅拌2小时，然后进行静置。对如此制备的提取物过滤以除去残渣和沉淀物。将如此制备的滤液减压浓缩，并进行干燥，得到3.0克粉末状的低分子量的级分。用硅胶薄层色谱对如此获得的提取物进行分析，其中用氯仿和甲醇按50∶1的混合物作移动相。结果被示于图1b。在图1b中，点①表示豆甾烷醇(C29H52O)，点②表示β-细胞固醇(C29H50O)。试验例1  细胞毒性试验
通过测量红细胞的溶血度来测试本发明牛排泻物提取物的细胞毒性。将实施例1制备的提取物加入从大鼠分离得到的红细胞，然后在37℃下将所得混合物分别培养30、60和120分钟。离心后，取400微升培养液，向其中加入检测溶血作用的试剂。然后，读取在540nm处的吸光度，以测定溶血度。如下计算溶血度(％)：
Figure A9980102900091
为了与实施例1制备的牛排泻物提取物进行比较，测量用甲萘酮处理的红细胞(阳性对照)的溶血度。甲萘酮是已知的能诱导红细胞发生溶血作用的化合物。通过溶血度表示的细胞毒性测定结果被示于下表1中。
                  表1
       实施例1制备的提取物对红细胞的细胞毒性作用
  时间(分钟)     0     30     60     120
用实施例1的提取物处理的组     0.0     2.3±0.2     2.1±0.5     2.6±1.9
    对照组     0.0     0.3     1.7     1.5
用甲萘酮处理的组     0.0     1.6±1.3     2.3±0.4     65.3±4.8
如上表1所示，对于用甲萘酮处理的组，按红细胞的溶血作用所测定的细胞毒性显著升高。然而，在用实施例1制备的提取物处理的情况下，即使是在高浓度，即用50微克/毫升浓度的提取物处理的情况下，也不发生红细胞的溶血作用，并且与对照组相比也没有任何显著的差异。因此，这些数据表明本发明的牛排泻物提取物对细胞是没有毒性的。试验例2通过测量胸苷吸收量来测量抗癌活性
按如下所述，通过测量胸苷吸收量来测试实施例1和实施例2制备的提取物的抗癌活性。将13.8克DMEM(Dulbecco′s改良Eagle氏培养基，Gibco)溶解于1升去离子水中，所得溶液用碳酸钠和盐酸溶液调节pH至7.4。然后，向其中加入10％胎牛血清、1×10-7M的胰岛素和50毫克/升的庆大霉素。采用微孔过滤器将所得的溶液灭菌以制备培养基。用该培养基培养从韩国国立汉城大学的癌症研究中心(Cancer Research Center of Seoul National University)得到的人肝癌细胞sk-Hep-1，其中每25cm2的T型烧瓶中有1×106个细胞，然后在37℃下于5％CO2气中培养细胞48小时。
将培养物转移至24孔培养容器中，再继续培养1天，然后向其中分别加入实施例1和2制备的牛排泻物提取物，达到1～200微克/毫升的浓度。加入提取物12小时后，加入3H-标记的胸苷，使其浓度达到1μCi/ml。在加入该胸苷12小时后，从各孔中除去培养基，将细胞用甲醇固定，用PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤，然后再用10％三氯乙酸洗涤两次，以除去残余的具放射活性的胸苷。将细胞溶解在1M的氢氧化钠中，然后用1M的盐酸中和该溶液。用闪烁计数器(Pharmacia1024)测量掺入到DNA中放射活性。
结果被分别示于图2a和2b中。图2a和2b分别显示实施例1和2制备的牛排泻物提取物的结果。在这些图中，横轴表示的样品的浓度，纵轴表示的是胸苷吸收量。
如上述图所示，实施例1和2制备的牛排泻物提取物在1微克/毫升以上的浓度下明显降低胸苷吸收量，这一点说明它们抑制癌细胞sk-Hep-1的增殖。因此，本发明的牛排泻物提取物明显抑制癌细胞的增殖，所以可以预计，本发明的提取物可用作抗癌药剂或佐剂。试验例3通过对血小板凝集抑制的测量来测试抗炎活性
按如下所述，通过测量对血小板凝集的抑制来测试实施例1制备的提取物的抗炎活性。从大鼠血液中获得富含血小板的血浆(PRP)，并将血小板数调节到3×108/ml。将各489微升的PRP置于每一玻璃容器中用于测量血小板的凝集，并在37℃下预温1分钟。将溶解在甲醇中的实施例1制备的提取物的溶液2.5微升加入其中，并在该加入之后3分钟时，加入8微升的凝血酶溶液。然后，用血小板凝集测量仪来测定对血小板凝集的抑制效果。结果被示于表2中。
                      表2
           通过对血小板凝集的抑制的抗炎活性
实施例1的提取物(微克/毫升)     1.25   2.5     5.0
血小板凝集的抑制(％)     42.6   57.4     54.3
如表2所示，实施例1的提取物显著地抑制血小板的凝集。因此，可预计本发明的提取物用作抗炎药剂是极其有用的。
因此，预计本发明的牛排泻物提取物通过抑制细胞增殖和通过抗氧化作用而用作抗癌药剂或佐剂或通过抑制血小板凝集而作为抗炎药剂。

Claims (9)

1.一种具有抗癌和抗炎活性的牛排泻物提取物，该提取物是由包括用极性溶剂提取牛排泻物这一步骤的方法制备的，所述极性溶剂选自具有1-4个碳原子的低级醇、通式为R1COR2的低级酮、乙腈、水和其混合物，其中R1和R2相互独立地为具有1-3个碳原子的烷基。
2.根据权利要求1的牛排泻物提取物，该提取物的制备方法还包括用选自水饱和的丁醇、乙酸乙酯和乙醚的非极性有机溶剂再提取所述提取物的步骤。
3.根据权利要求1的牛排泻物提取物，其中所述的牛排泻物是黄牛或水牛的粪便。
4.包括根据权利要求1-3中任一项所述的牛排泻物提取物作为活性成分的抗癌药剂。
5.根据权利要求4所述的抗癌药剂，它是以100-500毫克的单位剂量口服给药的药剂，每天给药3次。
6.包括根据权利要求1-3中任一项所述的牛排泻物提取物作为活性成分的抗炎药剂。
7.根据权利要求6所述的抗炎药剂，它是以100-500毫克的单位剂量口服给药的药剂，每天给药3次。
8.具有抗癌和抗炎活性的牛排泻物提取物的制备方法，该方法包括用极性溶剂提取牛排泻物的这一步骤，所述极性溶剂选自具有1-4个碳原子的低级醇、通式为R1COR2的低级酮、乙腈、水和其混合物，其中R1和R2相互独立地为具有1-3个碳原子的烷基。
9.根据权利要求8所述的方法，该方法还包括用选自水饱和的丁醇、乙酸乙酯和乙醚的非极性有机溶剂再提取所述提取物的步骤。
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